SAPONINAS ESTEROIDES

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Definicin
O O

RO R=H, Sapogenina esteroide R=Carbohidratos (Deoxi), Saponina esteroide

Las saponinas esteroides son glicsidos esteroides con un ncleo espirostano que tienen la propiedad de hemolizar los glbulos rojos y forman espuma abundante y estable al agitar sus soluciones acuosas
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Biognesis

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Estructuras de saponinas esteroides naturales

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Ensayos de reconocimiento
a. ENSAYO DE LA ESPUMA Solucin acuosa de una muestra + Agitacin fuerte: Espuma abundante y estable. Falsos positivos: Otras sustancias p. ej. algunas protenas. b. ENSAYO DE HEMOLISIS Suspensin de glbulos rojos en solucin salina + Solucin acuosa de la muestra. Si los glbulos rojos se rompen (lisan o hemolizan), se asume que la prueba es positiva. Puede realizarse en tubo de ensayo, en cajas de Petri con agar-sangre o en cajas de Petri con gelatina-sangre. Interferencias: Taninos (Se eliminan con MgO). c. ENSAYO DE LIEBERMANN-BURCHARD Si la porcin esteroide posee grupos dienos conjugados reales o potenciales. d. ENSAYOS PARA CARBOHIDRATOS Ensayos de Molisch, de la Antrona, etc.

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EXTRACCION Y AISLAMIENTO
En solv. apolares: Saponinas insol., Sapogeninas sol. Material vegetal seco y molido: Desengrase. El marco se extrae con etanol, metanol o mezclas estos alcoholes y agua. Material Fresco: Extracto metanlico. Liofilizacin. Columna de intercambio inico. Cromatografa con Sephadex LH-20 para separar saponinas de otras molculas como pptidos y macromolculas. HPLC. Detn. carbohidratos ligados mediante la hidrlisis cida. CP frente a estndares C. gases de derivados TMS. La tcnica C. de gases-E. masas (CG-EM) permite reconocimiento de los carbohidratos ligados en forma de derivados trimetilsililteres de alditoles-MBA: Mtodo de Hakomori.

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Caractersticas espectrales
a. INFRARROJO Varias bandas tensiones C-O anillos pirano y furano: alrededor de 850, 900, 920 y 987 cm-1. Intensidad relativa de bandas a 900 y 920 cm-1 permite determinar la estereoqumica del carbono 25. Si banda 900 ms intensa que 920 cm-1, 25R ESPECTROMETRA DE MASAS FAB
O m/z 577 O

xil glu

gal

O m/z 739 m/z 871

gal [M-H] - = 1033 m/z 901

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Espectrometra de masas IE de Sapogeninas y Saponinas

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Resonancia Magntica Nuclear

0.96d (25R) 1.08d (25S) 0.7-0.8s O 0.9-1.2s 4.5m

3.3-4.0m 0.78d (25R) 0.98d (25S)

3.5m RO

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O 110

65 (25S) 67 (25R) 27 (25S) 30 (25R) 16 (25S) 17 (25R)

O 80

RO

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Mtodos para determinar carbohidratos enlazados y tipo de enlace glic.

1. Mtodo de Hakomori: Sirve para determinar nmero, clase y enlaces entre las unidades de carbohidratos, y con la porcin esteroide. Derivados alditoles y CG-EM. 2. Hidrlisis cida y C. Papel con carbohidratos estndares. 3. Regla de Klyne: Determina si el enlace glicosdico es alfa .

Rot. mol. = Rot. espec. * Peso mol. / 100 C = Rot. mol. saponina - Rot. mol. sapogenina

Si C es aprox. + 305, el enlace es alfa Si C es aprox. - 60, el enlace es

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METODO DE HAKOMORI
1. Metilacin exhaustiva (permetilacin):
O MeO MeO O O OMe MeO MeO O OMe R (R = aglicona esteroide)

2. Hidrlisis cida:
HO OH O MeO MeO OMe OH + MeO MeO OH O OH OMe + R-OH

3. Reduccin con NaBH4 y acetilacin:

AcO OAc MeO MeO OMe OAc + MeO MeO OAc OAc OMe + R-OAc

II

Derivados alditoles fciles de analizar por CG-EM

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DISTRIBUCION NATURAL
Monocotiledneas: Liliaceae, Dioscoreaceae ( p.ej. ames) y Amaryllidaceae (Agavaceae), p. ej. Fique

Dicotiledneas: Solanceas y escrofulariceas

Animales: Estrellas de mar (No espirostnicas)

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Conversin industrial en medicamentos

OAc

O
O

O O

OAc

A cO

AcO

A cO

O OH

O OH B r

A cO

B r Br

A cO

F
OH HO O OH HO OH O OH O OH O OH

F
O

Hidrocortisona

Prednisolona

Prednisona

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O O
Br O

O O Br
AcO O

OH

O O Br

AcO

AcO

O HO F O R O O

O OH R

O
O

9 etapas
AcO

O AcO

9-fluorocorticoides

Acetato de 11-cetopregnenolona

Acetato de 11-cetotigogenina

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Dehidrotestololactona

OH O OH Cylindrocarpon radicicola O O OH Rhizopus sp. OH O OH Aspergillus sp. O O

Testololactona

Aspergillus sp. O

Compuesto S
Streptomyces fradiae HO Curvularia lunata OH O OH

Hidrocortisona Androstenodiona
HO OH O OH O OH

14-hidroxicortisona

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Problema 5
PHYTOCHEMISTRY 1983, 22: 2259 Del extracto metanlico de las races de Asparagus sprengeri, Liliaceae; se aisl la sustancia A. Esta sustancia se someti a reflujo durante 3 horas con HCl al 7%. Luego de una particin con cloroformo, de la fase orgnica se obtuvo una sustancia B. La fase acuosa se neutraliz con Carbonato de plata, se concentr y se analiz por cromatografa en papel eluyendo con la mezcla BAW 4:1:5; al comparar con sustancias de referencia se detect la presencia de D-xilosa (Rf 0.28) y D-glucosa (Rf 0.18). La sustancia B es un slido de P.F. 200-2C y [alfa]20D= -128 (cloroformo, c 1), con las siguientes caractersticas espectrales: IR (KBr): 3400, 3020, 2845, 980, 918, 898, 860, 835, 802 (898 >918) cm-1. EMIE: 414 (5.7), 396 (2.3), 345 (6.7), 300 (25), 282 (42.3), 271 (23), 253 (21.1), 139 (100), 115 (16.6). %C = 78.15 %H = 10.20 Se acetila para dar un derivado de P.F. 189-90C, [alfa]20D=-115, IR (KBr): 1730 cm-1.

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O O

RO R = Glu-Xil- R = Xil-GluAlejandro Martnez M. 23

Problema 6
STEROIDS 24, 205 (1974) Determine las estructuras ms probables para la brisbagenina y la brisbenona, las cuales presentan las siguientes caractersticas: a) Brisbagenina P.F. 203-4C EMIE: 432, 318, 300, 290, 287, 279, 139 (100). RMN-1H: 0.77 (s, 3H), 0.85 (s, 3H), 0.77 (d, J=6 Hz, 3H), 0.95 (d, 3H, J=7 Hz). IR : 3420, 1050, 980, 920, 900, 867 cm-1. b) Brisbenona P.F. 204.5-6C EMIE: 412 (M+.), 139 (100), etc. RMN-1H: 5.81 (d, J=10.5 Hz, 1H), 7.10 (d, 1H, J=10.5 Hz), etc. IR: 1680, 980, 920, 898, 864 cm-1. UV (mx): 231 nm.

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O O

O
Brisbenona

HO
Brisbagenina

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