ANLISIS DE SUSTANCIAS COLOREADAS POR ESPECTROFOTOMETRA (PRCTICA No.

3)
Profesora: Catalina Vasco, PhD. Ayudante: Sr. Carlos Navas C.

Barba, M., Inguillay, S. y Tamayo, P. (mikhal24@hotmail.es) Grupo 3 (Martes)

Fecha de realizacin: 03/09/2013 Fecha de entrega: 10/09/2013

TEM Coloquio Participacin Presentacin y formato Resumen ejecutivo Tablas de datos y diagramas Clculos Resultados y discusin Conclusiones y recomendaciones Subtotal PENALIZACIN Atraso en la entrega del informe TOTAL

PUNTAJE /3.0 /2.0 /0.5 /1.0 /1.0 /0.5 /1.5 /0.5 /10.0 /1.0 /10.0

RESUMEN EJECUTIVO:

El planteamiento de la prctica posee dos objetivos en la aplicacin de cromatografa de capa fina, primero, la separacin de distintos pigmentos vegetales presentes en hojas de espinaca; para lo que se procedi a la extraccin de la muestra por trituracin, con mortero, y su disolucin con acetona:ter (1:1); de la que se coloc una alcuota en la placa, previamente preparada, que luego se introdujo en la cmara de saturacin con cloroformo:ter (3:7), durante media hora. Al cabo de lo que se extrajo la placa y se midieron las distancias recorridas por el eluyente y los pigmentos, y se calcul sus factores de retencin ( ), de 0.750 para el pigmento verde (clorofilas), y 0.983 para el amarillo (carotenoides). El segundo objetivo era la identificacin de sustancias no coloreadas, para lo que se sigui un proceso similar al anterior, pero sin disolucin de las muestras, y empleando hexano como eluyente, adems para medir las distancias en la placa se emple una cmara UV, con lo que se concluy valores de 0.283, 0.783, 0.842, 0.858 para los componentes

del diesel, y 0.150 para el naftaleno, mientras para benceno y tolueno, no hubo coloracin, y no pudo calcularse. Con lo que se concluy, con las limitaciones de la tcnica, que los pigmentos vegetales as como el disel se componen de variadas sustancias, en el primer caso, de clorofilas y carotenos, y en el segundo, de alcanos y aromticos principalmente.

ESCUELA POLITCNICA NACIONAL CARRERA DE INGENIERA QUMICA Informe de Laboratorio de Anlisis Instrumental I TABLAS DE DATOS Tabla 1. Valores de Absorbancia (A) y longitud de onda ( ) para el Rojo de metilo (2 x Rojo de Metilo (2 x A [a.u.]* [nm.] 400 0.660 405 0.680 410 0.700 415 0.714 420 0727 425 0730 430 0.733 435 0.733 440 0.727 445 0.719 450 0.702 500 0.216 550 0.041 600 -0.002 650 -0.004 700 -0.003 *La absorbancia no tiene unidades realmente, pero en mucha bibliografa, generalmente se designa a.u. (absorbance unit), a los valores de absorbancia. Tabla 2. Valores de Absorbancia (A) y concentracin (c), a la longitud de onda ( ) de mxima absorbancia (435 nm.). Perodo 2013B Tabla 3. Caractersticas de la cubeta de anlisis Material de su estructura Vidrio Longitud de corte transversal [cm.]* 2.5

*La longitud de corte transversal corresponde a la distancia (d.) que recorre el haz de luz al atravesar la muestra (en la ecuacin de LambertBeer). Tabla 4. Volumen de requerido (Vi) de solucin de Rojo de Metilo (1x ), para la formacin de las soluciones empleadas en la medicin de absorbancia (A). x M* Solucin c [mol/L.]** Vi [ml.] 1 10 1x 2 20 2x 3 30 3x 4 40 4x *La concentracin corresponde a la de la solucin inicial de Rojo de Metilo. **La concentracin c se halla en molaridad (moles de soluto/litro de solucin). DIAGRAMAS

C [mol/L.]* A [a.u.]** 0.357 1x 0.733 2x 1.071 3x 1.411 4x *La concentracin c se halla en molaridad (moles de soluto/litro de solucin). **La absorbancia no tiene unidades pero, designa en a.u. (absorbance unit).

Diagrama 1. Esquema de bloques de un espectrofotmetro convencional

ESCUELA POLITCNICA NACIONAL CARRERA DE INGENIERA QUMICA Informe de Laboratorio de Anlisis Instrumental I CLCULOS Clculo del volumen requerido de Rojo de Metilo (1x soluciones. ), para formar las Clculo del Clculo del coeficiente de extincin ( , a partir de la ecuacin de la curva de calibracin calculada. Ley de Lambert-Beer: A= * L * C (A: absorbancia, : coeficiente de Perodo 2013B

(Ejemplo:

volumen requerido para formar 100 mL de una solucin acuosa 2x ).

extincin molar, L: distancia recorrida por el haz de luz, y C: concentracin del soluto)
(

La curva de calibracin es: y = 35000x + 0,018

de Rojo de Metilo (1x

A= ( * L) C + 0.018 Si se considera despreciable el valor 0.018

Clculo de la Transmitancia por ciento (%T), en las soluciones a diferente concentracin. (Ejemplo: Clculo de la transmitancia a concentracin de la solucin 1 x M.). , y

RESULTADOS

Mediante el uso de Excel se pudo determinar a travs de una grfica, el valor aproximado para la longitud de onda de mxima absorcin.
%T1 = 43,95%

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Absorbancia (A) vs. Longitud de Onda ()

0.8 0.7 0.6 y = 5E-13x6 - 2E-09x5 + 2E-06x4 - 0.0013x3 + 0.5035x2 - 100.85x + 8351 R = 0.9995

Absorbancia [u.a.]

0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 -0.1 -0.2 400 500 600 700 Poly. (Absorbancia vs. Longitud de Onda) Absorbancia vs. Longitud de Onda

Longitud de Onda [nm.]

Figura 1. Absorbancia de la solucin de Rojo de Metilo (1x onda absorbida

) de acuerdo a la longitud de

Tabla 5. Valor aproximado de la longitud de onda de mxima absorcin [nm.]

Tabla

6.

Transmitancias

porcentuales

diferentes concentraciones de Rojo de Metilo en solucin acuosa

As tambin con los valores de absorbancia y concentracin de las diferentes soluciones, se realiz el clculo de sus transmitancias porcentuales, as como se emple estos datos en la construccin de una curva de calibracin.

C [mol/L.]* 1x 2x 3x 4x

A [a.u.]** 0.357 0.733 1.071 1.411

%T 43.954 18.493 8.492 3.882

*La concentracin c se halla en molaridad (moles de soluto/litro de solucin). **La absorbancia no tiene unidades pero, designa en a.u. (absorbance unit).

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Absorbancia (A) vs Concentracin (C)

1.6 1.4 1.2 y = 35000x + 0.018 R = 0.9993

Absorbancia [u.a.]

1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0.00001 0.00002 0.00003 0.00004 0.00005 A vs C Linear (A vs C)

Concentracin de Rojo de Metilo (mol /L.) Figura 2. Curva de Calibracin (Absorbancia vs Concentracin) a un

Tabla 7. Valor aproximado del coeficiente de extincin molar, a partir de la ley de LambertBeer

siendo atribuible especialmente a variaciones originadas en las caractersticas mismas de la solucin y del soluto, y no tanto as a un error humano en la medicin.

435 [nm.] En bibliografa se pudo encontrar valores para la absorbancia del rojo de metilo (methyl red), dependiendo del pH del medio en que se halle, DISCUSIN DE RESULTADOS recalcndose el hecho de su uso como indicador De los datos obtenidos especialmente, del coeficiente de extincin molar ( , se pudo considerar que se hallaba dentro de los valores esperados, de hecho la curva de calibracin no mostr un error de magnitud considerable, de acidez o basicidad. En

mediciones realizadas empleando una cubeta de 1 cm. de longitud de corte transversal y pH 7 (soluciones en agua), se encontr que el valor de puede hallarse entre valores de

19600 (pH>7) hasta 23000 (pH =1), y con longitudes de onda de mxima absorcin entre

ESCUELA POLITCNICA NACIONAL CARRERA DE INGENIERA QUMICA Informe de Laboratorio de Anlisis Instrumental I 431 nm. y 515 nm. respectivamente. (Thomas y Burgess, 2007, pp. 57,58). Ahora haciendo una relacin muy sencilla se pudo estimar que para una cubeta de 2.5 cm. el valor del coeficiente poda hallarse entre 7840 y 9200, Perodo 2013B manera indirecta, que sin importar el uso de aparatos bastantes tecnolgicos, lo errores siempre se presentan en el anlisis, ya sea por la naturaleza misma de los analitos o del desarrollo de la experiencia.

sin embargo no se pudo considerar una aproximacin tan simple, sin suponer factores que determinan cambios por ejemplo, el hecho de que el soluto no fuese totalmente puro, o variaciones en la forma de preparacin de las soluciones, variables, sensibilidad que determinan tambin Por resultados la lo alta las Se recomienda para una mejor RECOMENDACIONES

obtencin de resultados, el empleo de soluciones patrn adecuadas, formadas con solutos puros o al menos de alta pureza, que eviten el aparecimiento de fenmenos pticos (p. ej. dispersin por presencia que de partculas alteren los

considerando del

equipo.

conclusiones que se pudieron obtener se restringen nicamente a los datos y clculos realizados, mediante la aplicacin de la ecuacin de Lambert-Beer, justificndose en el empleo de soluciones diludas menores a 0.1 M.

suspendidas) resultados.

Si se va a trabajar con sustancias coloreadas, especialmente si estas alteran sus propiedades cromticas

CONCLUSIONES

(indicadores qumicos) por variaciones en el pH, procurar mantener un grado o coeficiente de

Se concluy que el valor de

de acidez controlado, para evitar grandes variaciones en los resultados. (Thomas y Burgess, 2007, pp. 57,58).

extincin molar para el rojo de metilo en solucin acuosa (neutra) es igual a 14000 [L/mol*cm], as tambin que los valores tomados a diferentes concentraciones, tal como la curva de calibracin obtenida, no presentan una diferencia marcada respecto a la ecuacin de Lambert-Beer, apenas de

BIBLIOGRAFA: Thomas, O. y Burgess, C. (2007). UVVisible Spectrophotometry of Water and Wastewater. (1ra. Ed.). Oxford, U.K.: Elsevier B.V.

centsimas (0.018), con lo que se observ su cumplimiento, y tambin, aunque de una

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Quesada,

S.

(2007).

Manual

de

Experimentos de Laboratorio para Bioqumica. (1ra. Ed.) San Jos, Costa Rica: Editorial Universidad Estatal a Distancia. Sierra, I., Prez, D. et al. (2010). Anlisis Instrumental. (1ra. Ed.)

Espaa: Netbiblo, S.L.