Versin traducida de (131863670) LOS EFECTOS DEL ALCOHOLISMO EN LA basolateral humano (1).

Doc
Neurociencia 167 (2010) 361-371

LA EFECTOS DE ALCOHOLISMO EN LA HUMANO Amgdala basolateral R. Kryger * Y PA Wilce Facultad de Qumica y Biociencias Moleculares de la Universidad de Queensland, Brisbane, QLD 4072, Australia Resumen-El alcohol afecta la expresin de genes en varias regiones del cerebro. La amgdala es una estructura clave en el sistema emocional del cerebro y en los ltimos aos la importancia crucial de la amgdala en la bsqueda de drogas y la recada ha sido cada vez ms reconocido. En este estudio la expresin de genes se utiliz para identificar los genes que participan en el alcoholismo en la amgdala basolateral humana de pacientes de sexo masculino. Los resultados muestran que el alcoholismo afecta a una amplia gama de genes y muchos sistemas, incluyendo genes implicados en la transmisin sinptica, neurotransmisor transporte, estructural plasticidad, me el metabolismo, energa produccin, transcripcin y RNA procesamiento y el ciclo circadiano. En particular, los genes que participan en el sistema del glutamato se vieron afectados en los pacientes alcohlicos. En la amgdala, el sistema del glutamato est implicado en la adquisicin, consolidacin, expresin y extincin de aprendizaje como asociativo, que es una parte vital de la adiccin, y en los que abusan del alcohol se asocia con la ansiedad retirada y la neurodegeneracin. Regulacin a la baja de los aminocidos excitatorios transportadores GLAST, GLT-1 y el receptor de glutamato AMPA 2 (GluR2) revelado por el microarray se confirm por Western blot. La disminucin de la expresin de GLAST, GLT-1 y GluR2 en los pacientes alcohlicos pueden au-mento tono de glutamato y la actividad en la amgdala basolateral y este puede contribuir a neurodegeneracin como bien como la expresin de memorias asociativas y la ansiedad que subyacen seguido bsqueda de drogas y crnico recada. 2010 IBRO. Publicado por Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados. Palabras clave: cerebro, la expresin gnica, el glutamato, la adiccin. La amgdala es un mayor emocional centro en la cerebro y est implicada en el aprendizaje, la memoria, la vigilancia, la atencin y la motivacin. Se puede actuar para interconectar la informacin sensorial externa e interna con el sistema

de la dopamina mesocorticolmbico, que est implicado crticamente en la adiccin. Las similitudes entre los procesos de adiccin a las drogas y la plasticidad neuronal asociada con el aprendizaje y la memoria se han descrito y los mecanismos que subyacen memorias asociativas a largo plazo en la amgdala * Correspondin g autor. Tel: 61-7-33741690; fax: . 61-7-33742443 E-mail: rosemarie.kryger @ uqconnect.edu.au (R. Kryger) Abreviaturas.: AMPARs, AMPA receptores; BLA, basolateral amgdala; CB1, receptor cannabinoide 1; CEA, ncleo central de la amgdala; EAAT1, transportador de aminocidos excitatorios 1 (nombre de la protena); EAAT2, transportador de aminocidos excitatorios 2 (nombre de la protena); GLAST, glial alto afinidad glutamato transportador (Protenas nombre); GLT-1, glial de alto afinidad glutamato transportador, miembro 2 (Protenas nombre); HDAC5 , histona deacetilasa 5; SLC1A2, soluto portador familia 1 miembro 2 (gen nombre); SLC1A3, soluto portador family1 o miembro 3 (Nombre de genes); UPS, ubiquitina-proteasoma sistema; VDCCs, canales de calcio voltaje-dependiente.

se cree que son los principales contribuyentes al uso persistente de drogas compulsivo (Hyman y Malenka, 2001;. Nestler et al, 2001; Kelley, 2004). Plasticidad neuronal asociada a en-codificacin del componente emocional de los recuerdos que se forman durante el condicionamiento del miedo pavloviano (un modelo para el aprendizaje asociativo que se produce en la adiccin a las drogas) se encuentra dentro de la amgdala basolateral (BLA) (Fanselow y Gale, 2003). Para evitar la expresin de la actividad espontnea y sensoriales impulsado por las asociaciones emocionales o de res-puestas acondicionado en momentos inadecuados, la amgdala se mantiene un-der un estricto control por parte de poderosos circuitos inhibitorios de la corteza prefrontal medial (Grace y Rosenkranz, 2002). Actividad de la corteza prefrontal medial est inversamente relacionado con los niveles de actividad en la amgdala (Garca et al, 1999;. Gracia y Rosenkranz, 2002; Kim et al., 2003; Capricho et al., 2003; Espinilla et al., 2005). Amgdala hiperactividad, estimulada por estmulos de miedo o ansiedad que induce, claves relacionados con las drogas y / o el estrs, junto con la inhibicin insuficiente de la corteza prefrontal medial puede dar lugar a la sobreexpresin de acondicionado respuestas que puede producir bsqueda de drogas ser la conducta, trastornos de ansiedad (LeDoux, 1996;

Quirk y Geh-lert, 2003) y el deseo en la adiccin (Childress et al, 1999;. Schneider et al., 2001; Bonson et al., 2002), creciente la probabilidad de recada. Control cortical prefrontal sobre la amgdala se reduce por altos niveles de dopamina (Gracia y Rosenkranz, 2002). La dopamina juega un papel crtico en acondicionada estmulo-mediada bsqueda de drogas (Ver et al., 2001), al potenciar los estmulos sensoriales a la BLA BLA y comportamientos que favorezcan mediadas, incluyendo exagerada cesin de relevancia a los estmulos pareadas con drogas (Rosenkranz y Gracia, 1999; Rosenkranz y Gracia, 200 2). Estmulo de la BLA indujo un aumento significativo en el flujo de salida de la dopamina en el ncleo accumbens (Howland et al., 2002), mientras que relacionados con las drogas seales son asociado con dopamina liberar tanto en el ncleo accumbens y la amgdala (Weiss et al., 2000). De particular inters fue el efecto del alcoholismo en la transmisin de glutamatergic. Los media amgdala refuerzo positivo y negativo del alcohol y ambos implican glutamato. La dopamina flujo de salida en el ncleo accumbens se regula directamente por la BLA va un glutamatrgico proyeccin desde la BLA a la ncleo accumbens (Kelley et al., 1982; Howland et al, 2002).. Adems, la informacin de la BLA se retransmite a travs de proyecciones glutamatrgicas a los principales salida estructura de la amgdala, la central ncleo de la amgdala (CEA), (Smith y Pare, 1994; Pare et al., 1995), que controla directamente las respuestas conductuales y autonmicas a travs de sus proyecciones hasta el tronco cerebral y sitios hipotalmicos (LeDoux et al, 1988) 0306-4522/10 $ -.. See front matter 2010 IBRO. Publicado por Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados. doi: 10.1016/j.neuroscience.2010.01.061 361

No hay cuentas anteriores de los efectos de alcoholismo en el transcriptoma del BLA humano. En este estudio, el perfil de expresin de la BLA de seis alcohlicos crnicos y seis sujetos sin antecedentes de ex-cesiva potable era en comparacin. La resultados revelar cambios adaptativos inducidos por el alcohol numero-sos en una amplia variedad de sistemas en la BLA de humanos que abusan del alcohol. Todos los pacientes en este estudio eran varones. En vista de los efectos de las alteraciones inducidas por el alcohol en el glutamato sistema nosotros examinado la ARNm y la expresin de protenas de dos glutamato transportistas, SLC1A3 (Nombre de la protena o GLAST EEAT1) y SLC1A2 (nombre de la protena GLT-1 o EAAT2), y el receptor de glutamato AMPA subunidad 2, Gria 2, (nombre de la protena GluR2). PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES Tejidos humanos para transferencias Western microarrays y Post-mortem de muestras BLA humanos de los alcohlicos y los controles se obtuvieron del Centro de Recursos de Tejido NSW en la Universidad de Sydney. Todas las muestras procedan de pacientes de sexo masculino y la alcohlicos (A: 100 g de etanol / da) y controles (C: bajo consumo de alcohol 20 g de etanol / da) fue muy similar, para edad y autopsia ndice. Aprobacin para la utilizar de humano muestras postmortem se obtuvo de la Comisin de tica de la Universidad de Sydney (Ref. No. 95/2/7), el Sydney Servicio de Salud Zona Centro, (Protocolo NX03-0117), y el Comit de Revisin de Eth-ics Medicina de la Universidad de Queensland. Ninguno de los pacientes alcohlicos utilizados en este estudio mostr ningn trastornos neurolgicos de confusin. Un resumen de la informacin del caso para alcohlicos y controles se presentan en la Tabla 1. Esquema del experimento ARN total fue extrado a partir de tejido humano BLA. Todas las muestras BLA, de los alcohlicos y los sujetos control, (marcado con Cy3) se compararon con una referencia comn ARN (marcado con Cy5). Cada muestra individual se hibrid junto con la referencia comn a una diapositiva de microarrays. Extraccin de ARN, ARN preparacin de referencia y la sntesis de ARNa El ARN total se extrajo a partir de 30 -100 Mg de tejido congelado con 1 ml de Trizol (Invitrogen, Melbourne, Victoria, Australia), siguiendo las instrucciones del fabricante. Las muestras se suspendieron en agua ARNasa / ADNasa libre y se congelaron a 80 C. Para la preparacin de referen-cia ARN, 1 l de total

RNA era tomado de cada de diez muestras de humano motor corteza, pallidus / putamen, caudado y cerebelo (Alcohlicos como bien como controlar RNA era utilizado). Esto fue bien mixto y la concentracin era determinada por espectrofotometra.
Tabla 1. Tejido amgdala basolateral Humanos para transferencias Western microarrays y

Caso No. Edad Sexo PMI Causa de la muerte Historial mdico C1 68 M 22 El suicidio por ahorcamiento. Asfixia Asma, rara vez bebe alcohol nil otra C2 37 M 11 Embolia Pulmonar No hay historial mdico pasado, gran fumador y el colesterol alto. No hay antecedentes de alcohol C3 56 M ateroma arterial coronaria cardiaca 24 Fumador empedernido
C4 59 M 20 La trombosis coronaria Colesterolemia Hyper, fumador empedernido, alcohol cero

C5 51 M 20 El taponamiento cardaco debido a la ruptura del miocardio debido a la miocarditis otra condicin importante: ganglioneuroma No hay condiciones mdicas o la historia de alcohol conocida C6 58 M 12 isqumica del corazn fumo enfermedad C7 38 M 8.5 aterosclertica cardiovascular congestin Centrolobar enfermedad pesados 1 paquete de cigarrillos al da C8 69 M 16 aterosclertica cardiovascular fumador empedernido enfermedad ms de la vida adulta C9 78 M 6.5 Deshidratacin, adenocarcinoma mltiples metstasis Informacin no disponible C10 56 M Ventricular izquierda cicatrizacin, hipertensin, cardiomegalia Inflamacin Lypogranulometous de algunos espacios porta. 15 cigs al da A1 70 M 19 bronconeumona e infarto de miocardio enfermedad alcohlica del hgado 10 aos, microvesicular esteatosis, fumador A2 37 M 17 de la intoxicacin alcohlica aguda Lesin en la cabeza, la epilepsia, la diabetes cirrosis, hgado graso a. A3 56 M 26 Hemorragia por vrices esofgicas Hepatopata alcohlica macrovesicular esteatosis un

A4 59 M 18 Miocardiopata bebedor espritus pesados, obesos, ventolin macrovesicular esteatosis a esteatohepatitis alcohlica A5 52 M 35 Intoxicacin por alcohol la hepatitis alcohlica, esteatosis cirrosis, historia de 20 aos de EtOH abuso de bebidas espirituosas 1 botella / da a A6 56 M 15 La cardiopata isqumica y el enfisema Crnica indigente alcohlico y largo plazo, una esteatosis A7 66 M 11.5 Neumona normal fuma 1pkt/day de 50y A8 34 M 8.5 Colgante La esteatosis y congestin fuma 1 pkt / da A9 53 M 37 Crnica limitacin del flujo areo - en espera de fumador empedernido congestin A10 81 M 36 Sepsis Cirrosis ex fumador C, controles, A, alcohlicos, PMI, intervalo post mortem. Alquilo C1-C6 y A1-A6 se utilizaron para la micromatriz y alquilo C1-C10 y A1-A10 se utilizaron para transferencias Western.
una

historia desconocida fumar.

ARN antisentido (ARNa) se sintetiz mediante amplificacin-cin lineal de los ARN total extrado a partir de todas las muestras BLA, as como desde la referencia muestras: 2-3 g de total RNA y 1 g de T7-oligo dT 21 imprimacin (5 =-TCT AGT CGA CGG CCA GTG AAT TGT AAT ACG ACT CAC TAT AGG GCG T 21 -3 =) (GeneWorks, The-barton, Australia) en 10 l se incub a 70 C durante 5 min y despus se coloca en hielo. Para el primer captulo de sntesis 2 l 100 mM ditiotreitol (DTT), 4 l Sobrescrito lll Primero Hebra Buffer (Invitrogen, Mul-tumba, Victoria, Australia), 1 l (40U) RNasa inhibidor, (Invitrogen), 1 l 10 mM dNTPs (Sigma-Aldrich, Sydney, Australia), y 1.5 l Sobrescrito III eran aadido, la mezcla era incubadas en 50 C para 60 min despus a 70 C durante 15 min. Por segundo captulo de sntesis: adems de 1 l (5U) ribonunclease H (Nueva Inglaterra Biolabs (NEB), Brisbane, Australia), 1 l (10U) E. coli DNA ligasa (NEB), 3 l 10 mM dNTPs, 15 l Segunda Strand Buffer (200 mM Tris 46 mM MgCl 2, 900 mM KCl, 100 mM (NH 4) 2 SO 4, 1,5 mM de NAD, 37,5 mM DTT) y 106 l RNasa libre agua era seguido b y un 2 h incubacin a 16 C, adicin de 3,3 l (10U) ADN polimerasa de T4 (NEB) y otra incubacin de 30 min a 16 C seguido de la inactivacin por calor en 70 C. La ds cDNA era extrado con 150 l de fenol / cloroformo (1:1) y se lav tres veces con 200 l RNasa libre agua en un Microcon YM-30 filtrar (Millipore, North Ryde, NSW, Australia) y se concentr a un volumen final de 16 l. A esto se aade: 4 l de cada uno de ATP, UTP, GTP, CTP, 10 Buffer Transcripcin y T7 Enzyme Mix, (todos de la MEGA-cript T7 Kit, Ambion, Thebarton, Australia) eran adicional y la solucin incubadas en 37 C para 18 h para en vitro la transcripcin. El Arna era extrado con Trizol conforme a la las instrucciones del fabricante. calidad Arna se verific con transferencias Northern us-ing GAPDH (gliceraldehdo 3-fosfato deshidrogenasa) como sonda. DUTP amino-alilo y la incorporacin de colorante fluorescente Amino-alilo dUTP era incorporado a minimizar teir sesgo. Arna (6 g) y 6 g azar hexamer cartilla (Roche Diagnostics, Castle Hill, NSW, Australia) ms 0,5 l de inhibidor de RNasa (Invitrogen, Mel-bourne, Australia) en un volumen de 8,5 l se calentaron durante 10 minutos a 70 C, enfriado en hielo y hilado para 20 s. Entonces 5 l RT 5 amortiguar y

2.5 l de 100 mM de DTT (ditio-treitol) (ambos de Invitrogen, Mel-bourne, Australia), 2.0 l de 5 mM dATP (Desoxiadenosina trifosfato), dCTP (trifosfato de desoxicitosina) y dGTP (trifosfato de desoxi-guanosina) y 1.5 mM TTP (timidina trifosfato), 3,12 l aadUTP (trifosfato de desoxiuridina amino-alilo) (Sigma, Sydney, Australia) y 1,0 l de inhibidor de RNasa y 1.5 se aadieron y l SuperscriptIII (Invitrogen, Melbourne, Australia)

La hibridacin de microarrays de diapositivas y lavados Un 19Kv4 sola manchado microarrays de diapositivas humana (OCI, Ontario, Canad) se coloc en una cmara de hibridacin y precalentado. La preparado solucin era puesto en la centro de la deslizar que fue cubierta con cuidado con un lavado (en HCl 1% v / v en etanol) y el cubreobjetos se sec. A continuacin, 40 l de 50% de formamida desionizada se aadi a un lado de la cmara de hibridacin resistente a la luz a un secado antes de la ventilacin y la hibridacin procedi durante aproximadamente 18 horas a 42 C. Diapositivas entonces sufri un serie de lava en un agitador en la oscuro: 2 SSC, 0,1% (w / v) de SDS, 0,5 SSC, 0,1% SDS, 0,2 SSC, 0,1% de SDS, y se secaron por centrifugacin a 500 rpm durante 5 min. Los portaobjetos se colocan en un recipiente a prueba de luz y escanean inmediatamente en un escner de GSM 487 para minimizar la prdida de seal desde el canal de Cy5.

Visualizacin de los datos Software ImaGene 5 (Biodescubrimiento, El Segundo, CA, EE.UU.) se utiliz para cuantificar los niveles de intensidad de fluorescencia relativa de los puntos en la microarray imagen y calcular fondo la intensidad de cada punto. Software GeneSpring 6.1 (Silicon Gentica, Red-wood, California, EE.UU.) se utiliz para normalizar fluorescente intensidad de las diapositivas con un per-spot per-chip intensidad dependiente de Lowess ajuste normalizacin. El modelo de error a travs del gen dio un valor para la constante de error promedio de los spots y los genes con un valor de datos en bruto de menos de esto se han filtrado. Se utilizaron tres filtros: filtro en el nivel de expresin, se filtra en las banderas (presente) y el filtro en de error. La resultante gene lista era sometido a un ANOVA (P 0,05). La lista ANOVA se present al programa de anotacin NIH "DAVID" (Base de datos para anotacin, visualizacin e inte-grada descubrimiento, http://david.abcc.ncifcrf.gov/) y los genes fueron clasificados en grupos funcionales con el programa " GO "(Gene Ontologa) con adicional informacin de OMIM, Locuslink y PubMed. Por ltimo, funcional gene clustering uso DAVID se llev a cabo. Este programa asigna puntuaciones de enriquecimiento para permitir la agrupacin objetiva de los genes. La datos discutido en este publicacin tener sido depositado en Gene Expression Omnibus de NCBI y son accesibles a travs de GEO serie nmero de acceso GSE18212 (http://www.ncbi.nlm.nih. nih.gov / geo / query / acc.cgi? acc GSE18212). Western blots Tejido era homogeneizado en 10 volmenes hielo fro HES bfer: 20 mM de HEPES (1-Piperazineethane cido sulfnico, 4 - (2-hidroxi-etil)-sal monosdica), 1 mM EDTA, 250 mM de sacarosa, pH 7,4, la mezcla se incub a 50 C durante
60 min, colocada brevemente sobre

2 mM Na VO , 10 mM NaF, 1 mM Na P O ms proteinasa hielo, seguido por otra incubacin a 95 C durante 5 min a 3 4

4 2 7 inactivar la enzima RT y desnaturalizar el hbrido ARN-ADN. RNA era hidrolizado por aadir 12.5 l de 0.1 M NaOH y una incubacin a 70 C durante 10 min. La mezcla se neutraliz mediante la adicin de 12,5 l de HCl 0,1 M y aadUTP etiquetados ADNc separados utilizando una columna Microcon. Los colorantes fluorescentes (Al-exafluor de Molecular Probes, Eugene, Oregon, EE.UU.) se adjunta a la aadUTP por primera adicin de 3 l recin preparada de

hidrgeno carbonato de sodio al 5 l aacDNA, y luego la adicin de stos a la Alexafluor 555 (Cy3) y Alexafluor 647 (Cy5) viales de tinte. Alcohlicas y muestras de control se marcaron con el fluorescente Cy3 teir y todo la referencia muestras eran marcado con la Cy5 fluorescente teir. Despus 60 min incubacin en la las dos reacciones de oscuridad a temperatura ambiente se mezclaron, 10 se aadi L-1 humana cuna ADN (Invitrogen), la mezcla se purific (Microcon YM-30 de filtro) y 8 l 20 SSC, 20 l formamida desionizada y 1 l 20% (w / v) se aadieron SDS y las muestras se incubaron a 95 C durante 5 min, luego a 45 C durante 45 min, se puso en hielo. inhibidor Cctel (Roche Molecular Bioqumicos, Indianpolis, IN, EE.UU.). Para GluR2, este homogeneizado era utilizado directamente. La fraccin de membrana incluyendo la membrana nuclear se prepar por centrifugacin la homogeneizado para 30 min en 22000 g para GLT-1. Para el anlisis de GLAST, el homogeneizado se centrifug a 2000 g durante 10 min y el sobrenadante durante 10 min a 10.000 g para generar un S10, 000 fraccin. Este fraccin se centrifug durante 30 min a 22.000 g para dar un P22, 000 pellets. Los sedimentos se resuspendieron en HES tampn. Protena concentraciones de todo la fracciones se midieron mediante el ensayo de cido bicinconnico (BCA) usando el Nanodrop 1000 Espectrofotmetro (NanoDrop Technologies, Pejerrey Road, Wilmington Delaware, EE.UU.). Las fracciones subcelulares fueron sometidos a electroforesis en gel de poliacrilamida SDS (PAGE) y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa (Millipore, North Ryde, Australia). Despus de bloquear la membrana con 1,5% (w / v) de gelatina de pescado (Sigma, Sydney, Aus-tralia) (con 0,02% w / v de azida de sodio, diluido 1:01 con PBS) durante 1 h a temperatura ambiente, la membrana fue se incubaron con la primaria anticuerpo. Primario anticuerpo diluciones, subcelular fracciones,

Tabla 2. Diluciones de anticuerpos primarios, fracciones subcelulares, las concentraciones de protena y tiempos de incubacin utilizado para la hibridacin

El anticuerpo primario Dilucin de anticuerpo Protena fraccin subcelular El tiempo de incubacin y la temperatura del gel GLAST un 1:20.000 membrana 10 g 10% durante la noche, a 4 C GLT-1 (Ab417) 1:5000 membrana, incluidas las armas nucleares 20 g 10% durante la noche, 4 C GluR2 (Ab40878) 1:500 homogeneizado 50 g 7,5% 2 d, 4 C
a (Ab amablemente donada por David Pow) (Pow y Barnett, 1999).

protena concentraciones y incubacin veces utilizado para hibridacin se muestran en la Tabla 2. Despus lavado (4 para 5 min) con 0,1% (W / v) Tween 20 en PBS se aadi el anticuerpo secundario (Alexa Fluor 680 cabra anti conejo de anticuerpos Molecular Probes, Invitrogen, Mulgrave, Victoria, Australia) a una dilucin de 1:10.000 durante 50 min y la membrana fue lavado de nuevo como antes. Actina (Monoclonal ratn anticuerpo humano anti, Sigma, Sydney, Australia) se utiliz como control de carga (1:8000, durante 1 h a temperatura ambiente) y el anticuerpo secundario para este era la Alexa Flor 800 cabra contra ratn anticuerpos (1:10000, durante 1 h a temperatura ambiente). Seal de deteccin y cuantificacin Los geles fueron analizados utilizando el sistema de imgenes por infrarrojos Odyssey (LICOR Biotecnologa John Morris Cientfico, Willoughby, Australia) que mide la densidad ptica de la seal. Divisin del valor de la densidad ptica de la muestra por el de la actina determina el nivel de expresin relativa de protenas en cada muestra. RESULTADOS Resultados de microarrays El ANOVA identific 772 genes expresados diferencialmente en el BLA de las cuales 212 fueron upregulated y 560 fueron downregulated en los que abusan del alcohol. Alrededor de la mitad de los genes codificados no caracterizados o protenas "hipotticos" (es posible que algunos de estos pueden ser los ARN no codificantes). Se encontr una amplia gama de genes a ser afectados por el alcoholismo. Esta lista de genes se clasifican en grupos funcionales usando el programa DAVID "GO" (Gene On-loga). Estos se muestran en la figura. 1.

Mayora de los grupos funcionales contenidos en ambos arriba y abajo de los genes regulados, aunque la proporcin vara. El grupo larg-est de genes con el alcohol o la retirada sensible era que participan en el metabolismo. Los genes con el aumento de expresin incluido protena quinasa C delta (PRKCD) y la enzima del citocromo P450 CYP2D6, mientras que aquellos con la expresin dearrugada incluido glutamato deshidrogenasa (GLUD1) y componentes de la piruvato deshidrogenasa (sistema antibloqueo de frenos, PDK4, PDHB). Alrededor de un tercio de los genes metablicos estuvieron involucrados en el metabolismo de protenas y casi 80% de estos eran downregulated en la alcohlicos. A esto le sigui, en orden descendente, los genes relacionados con el crecimiento / mantenimiento de las clulas, con casi el doble de downregulated (por ejemplo DEAD cuadro polipptido 5, DDX5 y presenilina 1, PSEN1) como upregulated (por ejemplo, ciclina-quinasa dependiente 5, p39 , CDK5R2) genes en los alcohlicos. Genes de transduccin de seal tambin estuvieron bien representados en la lista de genes con el alcohol o la retirada sensible con inaument expresin en menos de mitad de ellos (Por ejemplo, factor de crecimiento de fibroblastos 1, FGF1; spinophilin, PPP1R9B y somatostatin receptor1, SSTR1) mientras que ejemplos de genes downregu-lada incluyen protena fosfatasa 2 subunidad cataltica isoforma beta (PPP2CB) y subunidades reguladoras (PPP2R5C y PPP2R5E), cannabinoide receptor 1 (CB1), AMPA de glutamato receptor2 (GluR2) y adenilato ci-Clase 7 (ADCY7). Genes relacionados con el transporte tambin fueron predominantemente downregulated en los alcohlicos (por ejemplo, cloruro de canal 3 (CLCN3) y la afinidad de glutamato trans-portadores altos gliales 2 y 3 (SLC1A2 y SLC1A3)). Estos fueron seguidos por genes para transcripcin con cinco veces como muchos genes regulados negativamente, (incluyendo protena de unin EGR1 1, NAB1, y la global regulador de gene expresin CCR4-NO transcripcin complejo, subunidad 8, CNOT8) como upregu-lada (por ejemplo, la histona deacetilasa 5, HDAC5) en el alcohol-ics. No hay genes implicados en la traduccin se upregulated pero siete fueron regulados a la baja en los abusadores de alcohol, inclu-yendo los factores de iniciacin de la traduccin eucariotas 4 y 4A (EIF4G2 y EIF3S6). Tambin predominantemente disminuido expresin en los alcohlicos se observ en la adhesin celular / grupo citoesqueleto (por ejemplo, vimentina, VIM; adducin 3, ADD3; neurexin-1, NRXN1) con aumentado expresin en microtu-bule asociada a la protena tau (MAPT) y protocadherin gamma C3 (PCDHGC3). . Figura 1. Un grfico representacin de la funcional clasificacin de los genes expresados diferencialmente en el BLA de sujetos alcohlicos, que ilustra la proporcin variable de arriba y hacia abajo-regulado genes en los diferentes

grupos funcionales. Genes expresados diferencialmente se clasifican en grupos funcionales por el programa "GO", en la base de datos para anotacin, y Visualizacin Integrada Discovery (DAVID) (http:// david.abcc.ncifcrf.gov /).

Tabla 3. Clustering Funcional anotacin Categora funcional N GO plazo anotacin n P Transporte 55 Transporte Protein 45 2.0E-2 La actividad del canal inico 8 Canal dependiente de voltaje 6 actividades La transmisin sinptica 5 Vesculas mediada por 25 transporte Receptores de 28 receptores 28 2.7E-2 Intracelular 287 Transcripcin 61 3.0E-3 Metabolismo 169 Citoesqueleto 37 Fosforilacin 29 Mitocondria 25 Ciclo de ubiquitina 22 Metabolismo de protenas 69
Procesamiento del ARN 18

y 2 (SOD 1 y 2), NADH-coenzima Q reductasa (NDUFS1), NADH deshidrogenasa, la ubiquinona (NDUFA1) y los componentes del complejo de la piruvato deshidrogenasa (sistema antibloqueo de frenos, PDK4, PDHB)) seguido por el sistema inmune genes relacionados (78% downregulated en la alcohlicos). Casi 86% de los genes relacionados con la neurognesis se downregulated (inclu-yendo la endotelina receptor de tipo B, EDNRB, doublecortin, DCAMKL1, tropomodulina 2 (neuronal), TMOD2 y che-mokine receptor CXC motif 4, CXCR4) y en la categora de dependiente de ubiquitina catabolismo proteico hubo 92% de genes regulados negativamente en los alcohlicos (incluidos dos pro-teasome 26S subunidades, PSMA1 y PSMD1; dos enzimas ubiquitinconjugacin, UBE2V2 y UBE2A y hect do-principal que contiene 1, HECTD1). El transporte vesicular mediada se dividi entre 50:50 upregulated (por ejemplo, receptor de insulina-como factor de crecimiento 2, IGF2R y la protena activada por mitgenos quinasa 8 interactuando protena 1, MAPK8IP1) y la respiracin aerbica / celular

Acetil coenzima A metabolismo 5 2.1E-2 5 2.6e-2 genes downregulated (vescula protena p115 acoplamiento, VDP, y iii copine, CPNE3). La categora de canal inico activi-dad fue el nico en el que los genes upregulated (seis, incluyendo los componentes de dos canales de potasio, KCNK3 genes expresados diferencialmente se presentaron a la opcin "agrupacin funcional de anotacin" en el software de DAVID. Anotaciones-ciones similares son agrupados. El algoritmo de agrupacin se basa en la hiptesis de que las anotaciones similares deben tener gen similar miembros. Este programa asigna puntuaciones de enriquecimiento que son la media geomtrica (escala log) de P-valores de los miembros de una anotacin correspondiente clster, a clasificar su biolgico importancia. La superior grupos de anotacin clasificados tienen valores de p inferior para los miembros de su anotacin. Anotacin condiciones alcanzando significativo enriquecimiento resultados (P 0,05) se reportan. N, nmero de genes en la categora funcional, n, nmero de genes de subgrupos de una categora funcional. Genes involucrado en estrs y apoptosis incluido muerte protena asociada a 3 (DAP 3) (upregulated), factor de transcripcin BCL-2-asociada 1 (BTF) y presenilina 1 (PSEN1) (regulados a la baja). Entre los grupos funcionales ms notables fueron los oxyreductases, de los cuales 96% fueron regulados a la baja en los alcohlicos (incluyendo citocromo c oxidasa subunidad VIIb (COX7B), superxido superxido 1 y KCNQ2, y dos de tensin dependiente de calcio canales, CACNA2D2 y CACNA 1I) superaban en nmero a las reguladas genes (Cuatro, incluso cloruro canal 3, ClCN y AMPA de glutamato del receptor 2, GluR2) en los que abusan del alcohol. Clustering anotacin funcional utilizando "DAVID" En un anlisis alternativo se utiliz funcional Clustering Anotacin de DAVID que agrupa anotaciones similares jun-tos. La agrupamiento algoritmo es basado en la hiptesis de que las anotaciones similares deben tener genes similares miembros. Este programa asigna puntuaciones de enriquecimiento que son los geomtrico significar (En -Log escala) de miembro de P-valores en un grupo correspondiente anotacin, para clasificar su importancia biolgica. La superior

clasificado anotacin grupos tener bajos valores de p para los miembros de su anotacin. . Figura . 2 Deteccin de GLAST en la BLA humana: (A) de sondeo fracciones de membrana de alcohlicos (n 10) y los controles (n 5) con el anticuerpo humano en el GLAST amgdala revelado un banda de aproximadamente 60 kDa. En general, GLAST expresin en la alcohlicos era disminucin comparado con controles, pero el alcohlicos talar en dos grupos, uno de que mostr distintivamente bajar expresin. (B) La diagrama de dispersin ilustra este punto. (C) La bar grfica, la alcohlicos estn representados por la barra de luz, los controles estn representados por la barra oscura, P 0.0329.

. Figura 3. (A) Deteccin de GLT-1 en la humano BLA: sondeo membrana fracciones incluso la nuclear membrana, de alcohlicos (N 7) y controles (N 7) con un policlonal GLT-1 anticuerpo (Ab417) en la humano amgdala revelado un banda de aproximadamente 75 kDa. La previsto molecular peso para GLT1 es 62 kDa, lo que sugiere que ha sido objeto de modificacin postraduccional tales como glicosilacin. (B) Un grfico de barras que muestra la disminucin de la expresin de GLT-1 en la alcohlicos, representado por la luz bar, comparado con la controles, representado por la oscuro bar. La sin pareja dos colas estudiante t-test fue utilizado para determinar la significacin de los medios. GLT-1 es significativamente downregulated en los alcohlicos, P 0.01. Clustering de enriquecido anotacin condiciones de genes identificados como muestra la expresin alterada de la amgdala se muestra en la Tabla 3. La expresin de protenas Expresin GLAST en el BLA de sujetos alcohlicos y el control humanos. Una banda inmunorreactiva de aproxi-madamente 60 kDa fue revelado. Una expresin reducida distinta en algunos alcohlicos se observ cuando se compararon los seis alcohlicos y seis muestras de control (datos no mostrados). Para profundizar en esto, fracciones de membrana de los diez alcohlicos disponibles se compararon con cinco controles. Los resultados son muestra en . Figura 2 y confirmar la primero observacin de que, aunque total all es un diferencia en significar expresin, la alcohlicos apartado en dos distinto grupos, con una expresin marcadamente inferior. GLT-1 de expresin en el BLA de bebidas alcohlicas y el control humano temas. Uno banda de aproximadamente 75 kDa se detect. Esto es ms alto que el peso molecular predicho (62 kDa) para GLT-1, lo que sugiere que tiene bajo-ido modificacin postraduccional tales como glicosilacin, que es la estado de GLT1 en astrocitos, donde ms de la GLT1 en el tejido cerebral se expresa (Reye et al., 2002). Disminucin de la expresin de GLT-1was visto en la muestra alcohlica (fig. 3). GluR2 expresin en BLA del alcohol humano y control Para temas. GluR2, 50 g de homogeneizado era utilizado para la transferencia de Western, se transfirieron a membranas de nitrocelulosa y sondeado con policlonal anticuerpo contra GluR2 (ab40878) utilizando una dilucin de 1:500. La membrana se incub durante 2 das a 4 C. El sistema de Odyssey fue . Figura 4 Deteccin de GluR2 en el BLA humana. (A) sondear el homogeneizado de los alcohlicos (n 7) y los controles (n 7) con un anticuerpo

policlonal de GluR2 revelado la esperado banda de aproximadamente 110 kDa. (B) La bar grfico demostracin disminucin expresin de GluR2 en la alcohlicos, representado por la barra de la luz, en comparacin con los controles, representado por la barra oscura. La prueba t no apareado de Student de dos colas se utiliz para determinar la significacin de los medios. GluR2 es significativamente downregulated en los alcohlicos, P 0.0152.

ms utilizado para detectar inmunorreactividad. Se obtuvo una banda clara de aproximadamente 110 kDa, que muestra disminucin de la expresin de GluR2 en los alcohlicos (fig. 4). DISCUSIN La adiccin al alcohol altera cerebro estructura y funcin en numerosas formas y fundamental. El predominio de la expresin de genes regulados a la baja en los que abusan del alcohol es de acuerdo con la observacin de que la metilacin del ADN genmico se incrementa en pacientes con alcoholismo (BonSCH et al., 2006). Estos resultados mostrar que alcohol afecta un amplio alcance de genes y cuentas para la desregulacin de numerosos sistemas del BLA de alcohlicos crnicos. La regulacin a la baja pronunciada en los pacientes alcohlicos, de oxyreductases incluyendo muchos genes asociados con la generacin de energa sugieren energa defectuoso metabolismo lder a reducido neuronal energa tiendas y oxidativo daos. Esto es particularmente importante en las clulas del sistema nervioso central, debido al alto consumo de oxgeno del tejido cerebral. La nica oxyreductase upregulated en este estudio fue CYP2D6, el componente cataltico principio del sistema oxidante etanol microsomal. Los niveles elevados de esta enzima, observados en los cerebros de los alcohlicos humanos Miksys y colegas (Miksys et al., 2002), conducir a ms rpido metabolismo del alcohol que pueden alterar la sensibilidad a sus efectos neurotxicos y de comportamiento (Miksys et al., 2002) y la velocidad de los numerosos procesos de adaptacin y perjudiciales asociados con el abuso de alcohol. Un predominio de downregulated neurognesis-re-lada genes era revelado en este estudio. Lo es ahora conocido que las clulas madre neurales se dividen a lo largo de la vida y generan nuevas neuronas que son asociado con complicado cerebro fun-ciones tales como el aprendizaje, el humor, y la asociacin de la informacin sensorial (Cameron y McKay, 2001; Crews y Nixon, 2003) en respuesta a estmulos (Duman et al, 2001.). El alcohol interfiere con la neurognesis en varias formas, por ejemplo, la interrupcin de la migracin, la diferenciacin y la supervivencia de las clulas recin formadas (Nixon y Crews, 2002), y la retirada convulsiones estimular neural tallo clula pero la proliferacin de las clulas aparecen en lugares anormales y formar conexiones aberrante (Parent et al., 1997). En la neurognesis amgdala mejora la plasticidad estructural y funcional y su capacidad para responder a condiciones nuevas y estresante (Bernier et al., 2002). Neurognesis reducida puede afectar estas funciones amgdala.

El alcoholismo puede provocar ciertos tipos de plstico-dad sinptica en circuitos especficos, mientras que al mismo tiempo perjudicar plasticidad en otros circuitos. Los aumentos de la fuerza sinptica, posiblemente, puede reflejar el aprendizaje adaptativo y la memoria asociados con la adiccin en curso. Contribuyendo a esto puede ser el aumento de la expresin de algo menos de la mitad de la diferencialmente expresado clula adhesin y citoesqueleto los genes. Adems, el 90% del sistema de ubiquitina-proteasoma expresado diferencialmente (UPS) los genes del sistema eran downregu-lada. La protelisis, la endocitosis y la transcripcin mediada por la UPS jugar un vital papel en sinptica plasticidad. La Funciones del SAI para regular la concentracin local de las protenas pre-y postsinpticos y acta como una restriccin inhibidora en sinptica fuerza en maduro neuronas (Zhao et al., 2003). La inhibicin del proteasoma en un aumento de la fuerza sinptica. (Zhao et al., 2003) y puede indicar posibles aumentos de la fuerza sinptica en la BLA. Adems, haba una regulacin positiva de genes que codifican protenas que regulan actina citoesqueleto dinmica, mejorar calcio sealiza-cin y la exocitosis, incluyendo la quinasa dependiente de ciclina 5, subunidad reguladora 2, p39, sensor de calcio neuronal-1 (NCS-1), PKC delta y la tensin de los canales de calcio de tipo L dependientes CACNA2D2. La ingesta crnica de etanol hasta regula la PKC delta (Messing et al., 1991), que a su vez media la regulacin por incremento de tipo L-canales de calcio dependientes de voltaje (VDCCs). VDCCs entrada de calcio mediar en neuronas y regular neurotransmisin (Walter et al., 2000). VDCCs de tipo L desempean un papel importante en la memoria a largo plazo formacin (Power y Sah, 2004) y en con claves el condicionamiento del miedo (un modelo de comportamiento de aprendizaje asociativo y la ansiedad cue-relacionada) en la amgdala (Shinnick-Gallagher et al., 2003) por un mecanismo distinto de la mediada por la potenciacin sinptica dependiente de NMDAR (Bauer et al., 2002). VDCCs puede contribuir significativamente a LTP en BLA (Chapman et al., 2003). Regulacin a la baja de ms de la mitad de la adhesin celular y los genes del citoesqueleto, incluyendo aducina (ADD3), neurexin 1 (NRXN1) y vimentina (VIM), puede contribuir a un de-pliegue en la fuerza sinptica. Neurodegeneracin y reproducido neurognesis, como se mencion anteriormente, tambin puede contribuir a la disminucin de la fuerza sinptica. El aumento de desacetilasa 5 (HDAC5) expresin histona era visto en la alcohlico sujetos, sugerencia alcoholismo inducida por remodelacin de la

cromatina en la amgdala. El aumento de la actividad de HDAC en la amgdala se asoci con el desarrollo de la ansiedad durante la retirada despus de la exposicin crnica etanol ( Pandey et al., 2008 ). Desde HDAC5 responde a crnica, pero no agudo, estmulos, fue sugerido que HDAC5, como FosB, puede actuar como un interruptor molecular en la transicin del fisiolgicos res-puestas a corto plazo a los efectos patolgicos a largo plazo de las drogas o el estrs ( Nestler et al, 2001;. McClung et al, 2004;. Renthal et al, 2007. ). Regulacin a la baja del perodo homlogo 3 (PER3) en los sujetos alcohlicos en este estudio es consistente con la observacin de que la ingesta crnica de alcohol altera el reloj biolgico ( Spanagel et al., 2005a ), un efecto que puede persistir por largos perodos de abstinencia y puede promover la recada ( Spanagel et al., 2005b ). Trastorno de ritmicidad circadiana normal se asocia con una variedad de perturbaciones, incluyendo neuroqumicos, neuroendocrino y la funcin inmune y tambin se asocia con trastornos del sueo y depresin ( McClung, 2007a, b ; Spanagel et al., 2005b ). El glutamato desempea un papel crucial en la formacin de recuerdos como asociativo, y en el BLA est implicado en la adquisicin ( Lee y Kim, 1998; Goosens y Maren, 2003 ), la expresin ( Lee y Kim, 1998 ), la consolidacin ( Li-Ang et al, 1994;. McGaugh, 2004 ) y la extincin ( Lee y Kim, 1998 ) de los comportamientos acondicionado. En particular, la actividad en la NMDAR en la BLA es necesario para reconsolidacin relacionada con un frmaco ( Milton et al., 2008 ). Mediante la regulacin de la ex-

sin del aprendizaje asociativo BLA tiene un papel vital en el cue-inducida recada ( Lee y Kim, 1998; Ver et al., 2003 ), pero tambin tiene un papel en la regulacin de la ansiedad y el desarrollo de los trastornos de ansiedad ( Rainnie et al., 2004 ). Este puede ser asociado con corticotropina liberando inducida por factor de plasticidad sinptica en la BLA en respuesta al estrs, lder a BLA hiperexcitabilidad y crnico la ansiedad a travs de NMDA afluencia mediada por el receptor de iones de calcio y activacin de quinasa 2-calmodulina dependiente de calcio ( Lluvia-NIE et al., 2004 ). La disminucin en la expresin de ARNm de los dos transportadores de glutamato SLC1A3 (nombre de la protena GLAST) y SLC1A2 (nombre de la protena GLT1), AMPA subunidad del receptor de glutamato 2, Gria 2, (nombre de la protena GluR2), as como las enzimas metablicas de la glutamina sintasa (GLUL), glutamato deshidrogenasa (GLUD1) y los componentes de la piruvato deshidrogenasa complejo (Sistema antibloqueo de frenos, PDK4, PDHB) eran observado en los pacientes alcohlicos. En vista de la importancia crucial del sistema del glutamato en el alcoholismo, GLAST, GLT-1 y GluR2 eran preferido a adems explorar estos cambios en el nivel de expresin de la protena. La eliminacin de glutamato de las sinapsis del glutamato transportistas astro-cytic GLAST y GLT-1 es esencial para el mantenimiento de las concentraciones extracelulares de glutamato bajas no txicas, transmisin de glutamato modulacin y la disponibilidad glutamato intracelular de las vas metablicas tales como energa produccin y sntesis de la antioxidante de GSH ( Danbolt, 2001 ). Deterioro de GLAST y GLT-1 Resultados de transporte de glutamato en la acumulacin de glutamato extracelular y la degeneracin neuronal y la muerte de glu-Tamate neurotoxicidad. Expresin de protenas de GLAST ( . Fig. 3 ) fue downregu-lada en la alcohlico pacientes particularmente en uno grupo con sorprendentemente disminucin de la expresin. Este marcadamente menor expresin no era debido a la variacin en la edad, post mortem retraso o hgado enfermedad. Sin embargo, la posibilidad de influencia del tabaquismo co morbilidad y la deficiencia de tiamina, lo que se conoce a regular a la baja GLAST ( Hazell et al., 2003 ), no poda ser excluidos como este informacin era no disponible para todos los casos. Otra posible razn para el GLAST downregulated en algunos pacientes alcohlicos podra ser debido a los radicales libres producidos como resultado del aumento de la neurotransmisin excitatoria en la retirada de etanol ( Tsai et al., 1998 ). GLAST ratones knock out muestran mayor convulsin susceptibilidad siguiente amgdalakindling ( Watanabe et al., 1999 ) y la protena GLAST se haba reducido

regulado en la regin de la corteza amgdala / piriforme de la amgdala-encendidas ratas ( Miller et al., 1997 ). Dos condiciones, ambos resultados bien documentados del consumo crnico de etanol, pueden contribuir a la baja regulacin de GLT-1 en los pacientes alcohlicos: el estrs oxidativo, a que GLT-1 es vulnerable ( Pedersen et al., 1998 ) y la neurodegeneracin, que est vinculado a la prdida de la protena GLT-1 ( Maragakis y Rothstein, 2006 ). Prdida de astrocitos tambin puede contribuir a la disminucin de expresin de los transportadores de glutamato en sujetos alcohlicos o puede ser posible que una menor expresin de estos transportadores pre-exista el alcoholismo y contribuy a la misma. Otro factor puede ser aumenta inducidas por etanol en la endocancannabinoide anandamida ( Basavarajappa y Hungund, 1999 ) que ha demostrado inhibir tanto GLAST y GLT-1 ( Shivachar, 2007 ), as como regular a la baja del receptor cannabinoide 1 (CB1) ( Basavarajappa y Hungund, 2002; Ortiz et al, 2004. ). Los receptores CB1 se downregu-cionados en los pacientes alcohlicos en este estudio de microarrays. En la BLA, endocannabinoides y CB1 son de crucial en involucrados en la extincin de los recuerdos aversivo ( marsos-Cano et al., 2002 ), que tambin implica el sistema del glutamato ( Davis y Myers, 2002 ), y ratones deficientes en CB1 mostr fuertemente daado a corto plazo y extincin a largo plazo de miedo cue acondicionado, un modelo de aprendizaje asocia-cin que se produce en la adiccin ( Marsicano et al., 2002 ). Ratas tratadas con etanol que fueron sometidos a la retirada repetida muestran extincin ms lento ( Ripley y col., 2003 ). Es posible que la regulacin a la baja de los receptores CB1 puede perjudicar la extincin de la conducta adictiva (por ejemplo, el refuerzo negativo del alcohol) en los pacientes alcohlicos y aumentar su vulnerabilidad a la recada. La subunidad GluR2 del receptor de AMPA es crtica para la funcin normal del cerebro y su presencia, en su forma editada Q / R, hace que el receptor impermeable a Ca 2 iones ( Brusa et al, 1995;. Gerlai et al, 1998;.. Feldmeyer et al, 1999; Hartmann et al, 2004. ). Regulacin a la baja de la expresin de genes GluR2, que puede ser activado por neuronal en-sultados ( los novios et al., 2000; Tanaka et al., 2000 ), puede servir como un "interruptor molecular", que conduce

a la formacin de Ca 2 - receptores AMPA permeables, el aumento de Ca 2 influjo, exci-totoxicity y la muerte neuronal ( . Pellegrini-Giampietro et al, 1992; Kwak y Kawahara, 2005; Kwak y Weiss, 2006 ). Esto est asociado con la isquemia, las convulsiones, la excitotoxicidad, lesin de la mdula espinal, la esclerosis lateral amiotrfica (ALS) y la enfermedad de Alzheimer ( Ikonomovic et al, 1997;.. Palma et al, 1998; Opitz et al., 2000; Calderone et al., 2003; Kawahara et al, 2004;. Kwak y Kawahara, 2005; Kwak y Weiss, 2006 ). Cada aguda de GluR2 por oligonucletidos antisentido causas muerte de piramidal neuronas ( Oguro et al., 1999 ) que expresan mayormente GluR2-que contiene Ca 2 -impermeable AMPA receptores ( Wenthold et al., 1996 ). En contraste, las interneuronas, con las dendritas aspiny, expresa principalmente GluR2-carente, Ca 2 -permeable AMPA re-ceptores ( l et al., 1999; Sah y Lopez De Armentia, 2003 ). Dado que la sobreexpresin de GluR2 aumenta la densidad de la columna vertebral en las neuronas piramidales e induce conjunto columna vertebral en interneuronas aspiny ( Passafaro et al., 2003 ) y baja regulacin de GluR2 ocurre con la retirada de la columna vertebral ", GluR2 mayo ser un molecular enlace entre la estructura de dendritas y sus estrategias de sealizacin sinapsisespecficas "( Goldberg et al., 2003 ). En la BLA, bajos niveles de AMPA GluR2 activan de slo sinapsis y un NMDAR independiente forma de LTP. Esto mejora la sincronizacin de la actividad entre las neuronas en respuesta al condicionamiento del miedo ( Mahanty y Sah, 1998). La observado disminucin GluR2 expresin en la BLA de pacientes alcohlicos pueden por lo tanto estar asociado con la composicin de subunidad alterada de los receptores de AMPA, alterado Ca 2 sealizacin y remodelacin columna vertebral, as como neurodegeneracin y una mayor excitabilidad en la amgdala. Niveles ms bajos de GluR2 en la BLA podra mejorar an ms las respuestas a la de asociacin aprendizaje que ocurre con

buscando drogas continuado. Otro posible efecto de la regulacin a la baja de GluR2 en la BLA de pacientes alcohlicos puede ser que el aumento de la actividad o el tono glutamatrgica resultante puede contribuir a la ansiedad retirada. Crnica ETH-Anol inducida por el aumento en la transmisin glutamatrgica la BLA implica no slo NMDA receptores ( Floyd et al., 2003 ), sino tambin los receptores AMPA porque la ansiedad puede ser retirada atenuada por la inyeccin de AMPA receptor DNQX antagonista en la BLA ( falta et al., 2007 ). Gene s implican DIN neurodegenerativ e enfermedad s (GLAST, GLT-1, GluR2 en el ARN y el nivel de protena y prese-Nilin 1, tau y la quinasa dependiente de ciclina 5 a nivel del ARN) eran significativamente alterado en alcohlicos, significando un enlace entre el alcoholismo y otras condiciones neurodegenerativas. Curiosamente, los genes relacionados con la mielina no cuentan en este anlisis, en contraste a la regulacin a la baja de numeroso mielina relacionados genes en la frontal corteza de alcohlicos ( Lewohl et al., 2001 ), lo que sugiere que la neuro-degeneracin puede no ser tan extensa en la BLA como en la corteza frontal. Por ejemplo, la respuesta al estrs repetido se muestra a variar entre las regiones del cerebro: las neuronas en el hipocampo y la corteza prefrontal responder al mostrar atrofia, mientras que las neuronas en la amgdala muestran una respuesta de crecimiento ( McEwen, 2004; McEwen y Chattarji, 2004 ). El estrs crnico puede por lo tanto contribuir a la prdida gradual del control inhibitoria cortical y del hipocampo y la funcin cognitiva y un au-mento en el control simultneo de excitacin ejercida por la amgdala. Dado que la amgdala influye directamente en el comportamiento emocional puede agravar la conducta inapropiada, como continua bsqueda de drogas y la recada, que lo trastorna la vida de los alcohlicos. Los numerosos cambios adaptativos inducidos por el alcohol reveladas por este perfil de expresin son indicativos de disfuncin en una amplia variedad de sistemas en la BLA de los consumidores de alcohol masculinos humanos, lo que puede perjudicar el rendimiento de las numerosas conductual tareas que depender en la integridad de la amgdala. Datos de microarrays. Th e dat una discusse din thi s publicacin hav e bee n deposit din NCBI 's Gen e Expressio n Omnibus una d ar e accessibl e throug h GE O Serie s accessio n nmero GSE1821 2 ( http://www. ncbi.nlm.nih.gov / geo / query / acc.cgi? acc GSE18212 ). Se recibieron Reconocimientos-Los tejidos del donante Centro Australiano cerebro Programas NSW Tissue recursos que se apoya por La Universidad de Sydney, Nacional Salud y Consejo Med-cos de Investigacin de Australia, el Instituto de Neurociencias de la Esquizofrenia y Trastornos Afines, el Instituto Nacional de

Abuso de Alcohol y Alcoholismo y el Departamento de Salud de Nueva Gales del Sur.