LABORATORIO DE INMUNOLOGIA

Existen diferentes tcnica de laboratorio que permiten a los medico obtener los resultados de los exmenes para poder dar un diagnostico y Tto. De la enfermedad inmunolgica, reumatolgica o las musculopatias en Gral. Estas se pueden dividir en grandes grupos! 1. tcnicas de autoinmunidad por inmunofluorescencia En Gral. la mayor"a de las enfermedades reumatolgicas son autoinmunes y el organismo produce anticuerpos contra el mismo cuerpo. #a ms conocida es la inmunofluorescencia, mediante esta tcnica se reali$an los exmenes como! a. determinacin de anticuerpos antinucleares %&'&( b. determinacin de anti D'& %D'&n( c. determinacin de anticuerpos antimitocondriales %&)&( d. determinacin de anticuerpo antim*sculo liso 2. tcnicas nefelomtrica a. equipamiento que mide la lu$ dispersas por las prote"nas o ant"geno anticuerpo, como por e+emplo b. cuantificacin de inmunoglobulinas c. medicin del complemento ,- y ,. d. factor reumatoide fr e. medicin de antiestreptolisina

3. tcnica de autoinmunidad por enzima inmuno an lisis! EIA o ELI"A a. determinacin anticuerpo antipptido citrulinado presente en la artritis reumatoide
b. determinacin de anticuerpos o esclerodermia scl/0 o s+oegre! 1,&ro o #E1! 1m o Enfermedad mixta del te+ido conectivo! 2'T o 3oliomielitis 4o5

4. tcnica de electroforesis de prote#nas sricas

$% tcnicas de estudio del li&uido articular 1e reali$a una puncin en la articulacin y se toma una muestra del liquido articular, para reali$ar un estudio f"sico qu"mico, anlisis de algunas prote"nas, glucosa, citolgico para ver la calidad de las clulas presentes y otros estudios con lu$ polari$ada para ver los cristales.

'% TE(IN(A" DE AUTOINMUNIDAD

6 INMUNO)LUORE(EN(IA INDIRE(TA 3ermite detectar anticuerpos circulantes en las persona en una muestra sangu"nea. )arcada con isocianato de fluoresce"na. 1e toma una muestra sangu"nea y se anali$a el suero ponindolo en contacto con un ant"geno espec"fico expuesto en una lmina de portaob+eto para verlo en el microscopio. El anticuerpo se pega a la lmina y se pone la globulina 7umana que esta marcada con isocianato de fluorescencia que al mirarla al microscopio se ve de color verde man$ana. 1i no se ti8e es negativo y si se ti8e es positivo. 1e utili$a un microscopio de fluorescencia. Todos los exmenes que resultan positivos deben ser titulados, es decir esa muestra positiva debe ser diluida a la mitad y se anali$a si vuelve a florecer se vuelve a diluir 7asta que ya no flurese mas que se conoce como la ultima dilucin. El microscopio emite una lu$ especial que 7ace fluorecer cuando existe una reaccin ant"geno anticuerpo y la fuente es una lmpara de mercurio.

o Determinaci*n de anticuerpos antinucleares +ANA,

Este examen sirve para prcticamente todas las enfermedades inmunolgicas, principalmente! #upus %#E,(

Enfermedad mixta del te+ido conectivo #upus eritematoso inducido por drogas 9epatitis crnica activa autoinmune Esclerosis sistmica progresiva 1"ndrome de ,rest &rtritis reumatoide Dermatomiositis.

3ero, indica solo que algo inmunolgico se encuentra alterado pero no indica que enfermedad espec"fica es, por lo que deben reali$arse otros exmenes ms para determinar cual es la enfermedad. El sustrato de ad7esin de esto son las clulas 9ep :, ant"geno a utili$ar para que ocurra la reaccin ant"geno anticuerpo y va pegado en la lmina porta ob+etos. 1on clulas de cultivo que provienen de carcinoma de cart"lago de laringe 7umana.

Anticuerpos antinucleares +ANA,

-ATTERN .OMOGENEO -ATTERN -ERI)ERI(O -ATTERN MOTEADO -ATTERN NU(LEOLAR -ATTERN ANTI(ENTROMERO

#;3;1 <pattern 7omogneo y pattern perifrico= E'>E2)ED&D )?@T& DE# TE4?DA ,A'E,T?BA <pattern moteado= E1,#E2A1?1 1?1TE)?,&1 32AG2E1?B&1 <pattern nucleolar= 1?'D2A)E1 DE ,2E1T <pattern anticentromero=

Anticuerpos anti DNA nati/o +DNAn,

1e reali$a en un D'& de doble 7ebra, es indicativo de #upus Eritematoso &ctivo, se utili$a como criterio para ver si el paciente responde al tratamiento, para ver la cantidad de anticuerpos presentes en el paciente. El sustrato que se utili$a es critidia lucilae, es un proto$oo que se encuentra en las glndulas salivales de las moscas, que presenta un &uinetoplasto rico en D'& activo de doble 7ebra. Tambin debe titularse.

Anticuerpos antimitocondriales +AMA,

1e utili$an en enfermedades del 7"gado, se utili$a en la ,irrosis Ciliar 3rimaria <se utili$an t"tulos altos para la determinacin=, en 7epatitis crnica activa <se utili$an t"tulos ba+os para la determinacin=. El sustrato que se utili$a es ri0*n de rata, se utili$a la fluorescencia en el citoplasma de los t*bulos renales de rata. D tambin se pueden utili$ar clulas 9ep:.

Anticuerpo antim1sculo liso

Tambin ayuda a detectar las enfermedades del 7"gado, se utili$a para confirmar +unto con los dems examenes el diagnostico y es sustrato que se utili$a es estoma2o de rata%

Anticuerpo anticitoplasma de los neutr*filos

Existen dos tipos! - anca3 son perifricos, anticuerpos contra la mieloperoxidasa ( anca3 de patrn citoplasmtico, anticuerpo contra la proteina$a - de los neutrfilos &sociados principalmente a Basculitis

4% TE(NI(A" NE)ELOMETRI(A"
Equipo especial automati$ado que permite cuantificar prote"nas del suero y otros E. )ide peque8as cantidades es muy sensible y precisos. #os

equipos se llaman 'efelometros y lo que 7acen es medir la lu$ dispersa. ,ruce de un 7as de lu$ por un tubo que contiene prote"nas y cuando se produce la reaccin ant"geno anticuerpo produce un desv"o de lu$ que es medido, seg*n cuanta lu$. 1i se transmite muc7o quiere decir que 7ay muc7as prote"nas desviando el rayo de lu$. 1irve para medir todas las inmunoglobulinas menos la I2E! por que la E circula en muy ba+a cantidad por lo que se utili$an otras tcnicas especiales para medirlas. #as inmunoglobulinas se utili$an para ver como esta respondiendo el sistema inmune 7umoral pudiendo estar aumentado o diminuido dependiendo de la patolog"a que se trate. Tambin sirve para medir el complemento ,- y ,.. El complemento esta disminuido en el #upus Eritematoso 1istmico y en las glomerulonefritis. D se encuentra aumentado en las patolog"as inflamatorias como en la &rtritis 2eumatoidea. )ientras mas unido mas concentrado se encuentra el complemento. El factor reumatoideo son antianticuerpos &ue est n diri2idos contra la inmuno2lo5ulina G. se pueden detectar distinto factores reumatoideos I2! I2m o I2a. 3ero el mas frecuente es ?g ) y de muy util en el diagnostico de artritis reumatodidea y se informa por cantidades, el 7ec7o que vaya ba+ando implica que 7ay una buena respuesta al tto. Tambin se puede medir la antiestreptolisina A, que se utili$a como diagnostico de la &migdalitis por estreptococos grupo &, este estreptococo produce exotoxinas y una de esta es la estreptolisina A que es medida en el laboratorio. 2ecordemos que la amigdalitis purulenta por estreptococo & podia producir fiebre reumtica y una reaccin cru$ada donde produce un reumatismo en las vlvulas del cora$n o una glomerulonefritis aguda. Es muy importante su medicin en el laboratorio como diagnostico de estas enfermedades.

6% TE(NI(A DE AUTOINMUNIDAD -OR EN7IMA DE INMUNO ANALI"I" 8EIA9 o ELI"A

1e utili$a para medir. &nticuerpo antipeptido citrulinado, en la &rtritis 2eumatoide. ,sl/0 para la esclerodermia 1,&ro para 1+oegre 1m para #upus 2nt para la enfermedad mixta del te+ido conectivo 4o5 para la poliomiositis ,onsiste en una reaccion antigeno anticuerpo que ocurre en unos microposillos que presentan unas placas que tienen pegados un anticuerpo, uno pone un antigeno se forma una reaccion antigeno anticuerpo que viene unido a una en$ima que cambia de color y se mide el cambio de color. ,ambio de color positivo. 1in cambio es negativo.

:% TE(NI(A DE ELE(TRO)ORE"I" DE -ROTEINA" -LA"MATI(A"

,onsiste en poner el plasma del paciente en un campo elctrico donde las prote"nas migran desde el polo negativo %ctodo( 7asta el polo positivo %nodo(, todas las prote"nas tienen carga y algunas son mas positivas que otras y van quedando en el camino seg*n su carga y el peso molecular. Es muy importante en el diagnostico del mieloma m*ltiple para ver las 7ipogamaglobunilemias o s"ndrome necrtico. 1e utili$a un gel de &garosa se marcan las muestras y se de+a pasar un par de 7oras y las prote"nas comien$an a migrar 7acia el polo positivo. D se utili$an tensiones para ver como migraron las prote"nas y se ven distinas intensidades de color.

F .ipo2amma2lo5ulinemia Trastornos donde se pierden inmunoglobulinas en forma excesiva! s"ndrome nefrtico, enteropat"a perdedora de prote"nas, quemaduras, paracentesis frecuentes. 1"ntesis defectuosa de inmunoglobulinas! agammaglobulinemia y 7ipogammaglobulinemia congnita. Enfermedades linfoproliferativas! leucemia linfoide crnica, enfermedades de cadenas pesadas y mieloma de Cence6 4ones. .iper2amma2lo5ulinemia 3oliclonal! 7epatopat"as crnicas, enfermedades autoinmunes %lupus eritematoso sistmico, artritis reumatoide, s"ndrome de 1+Ggren y esclerodermia(H infecciones crnicas %tuberculosis, lepra, paludismo, Iala6&$ar, actinomicosis y mononucleosis infecciosa(, 'eoplasias %enfermedad de 9odgJin y metstasis(. )onoclonal. )ieloma m*ltiple, )acroglobulinemia de KaldenstrGm y gammapat"as monoclonales de significado indeterminado.

Gammapat"a policlonal Inmuno2lo5ulinas%

Gammapat"a monoclonal

1on glicoprote"nas plasmticas que tienen actividad de anticuerpos y son producidos por los linfocitos C y plasmocitos. Ellas migran electroforticamente como gammaglobulinas y comprenden cinco clases mayores de inmunoglobulinas %inmunoglobulina G, inmunoglobulina &, inmunoglobulina ), inmunoglobulina D e inmunoglobulina E(. Estas molculas estn formadas por cadenas polipept"dicas de diferente tama8o molecular con dos cadenas pesadas idnticas y dos ligeras idnticas. #a regin constante de las cadenas pesadas son la G, &, ), D y E, tienen un peso molecular entre 0.000 y /0.000 y determina la clase inmunoglobulina y las dos ligeras pueden ser Jappa %J( o , estn presentes en las cinco clases de inmunoglobulinas y tienen un)(lambda peso molecular aproximado de :-.000. Estas cadenas polipept"dicas dispuestas en forma de LDM, estn constituidas por dos bra$os %formados por una porcin de cadena pesada y una de cadena ligera( y el tallo %constituido por dos porciones de cadena pesada(. #os bra$os y el tallo estn unidos por puentes desulfuro. El sitio de unin de los ant"genos se ubica en la parte final de los bra$os y se conoce como la parte >&C de las inmunoglobulinas. El tallo %parte >,(, cumple otras funciones biolgicas como la activacin del complemento y la unin a receptores de la superficie de las clulas %basfilos, neutrfilos, linfocitos y macrfagos(. & continuacin se describen las diferentes inmunoglobulinas. Inmuno2lo5ulina G% Es la inmunoglobulina ms abundante en el suero %/ N de todas la inmunoglobulinas(, con un vida media de - semanas. Tiene propiedades antivirales, antibacterianas, de opsonificacin y neutrali$adoras de toxinas. Es la *nica inmunoglobulina que atraviesa la barrera placentaria, 7ec7o que garanti$a la inmuni$acin del recin nacido en los primeros meses. #os anticuerpos ?g G enla$ados al ant"geno %comple+o inmune o comple+o ant"geno6anticuerpo( pueden fi+ar y activar el complemento por la v"a clsica. 3or otra parte, las clulas del sistema mononuclear fagocitario poseen receptores espec"ficos para las inmunoglobulinas GH por esta ra$n participa en los mecanismos de fagocitosis como sistema de ampliacin de la respuesta inmunolgica.

Inmuno2lo5ulina A% Est ubicada en la superficie de las mucosas y es producida por los linfocitos C de las placas de 3eyer, am"gdalas y otros te+idos linfoides mucosos. Existe la inmunoglobulina & secretora y la inmunoglobulina & srica. #a inmunoglobulina & secretora es la principal inmunoglobulina de los anticuerpos con accin antimicrobiana protectora de la saliva, lgrimas, sudor, calostro, l"quido prosttico, moco nasal y secreciones bronquiales, gastrointestinales y genitourinarias. #a inmunoglobulina & srica comprende las antitoxinas, aglutininas, isoaglutininas y crioglobulinas y se pueden elevar en las enfermedades del te+ido conectivo, alco7olismo, ictericia obstructiva y la cirrosis biliar primaria y, tambin pueden estimular el complemento por la v"a alterna. Inmuno2lo5ulina M% Es una macroglobulina que se ubica en la superficie de las clulas CH constituye el primer anticuerpo que se genera en la respuesta inmunolgica %respuesta primaria aguda( y es el primero que se forma en el neonato. Es un excelente activador de la citolisis dependiente del complemento, por lo que es una defensa poderosa de primera l"nea contra las bacterias. Disminuye en el s"ndrome nefrtico y la agammaglobulinemia. Inmuno2lo5ulina D% ,onstituye uno de los receptores de ant"genos ms importantes de la membrana de los linfocitos C. Inmuno2lo5ulina E. Es la inmunoglobulina de menor concentracin en el suero y la ms importante en los trastornos alrgicos. #as clulas inflamatorias que forman parte de la respuesta alrgica %basfilos y mastocitos( poseen anticuerpos inmunoglobulina E absorbidos de la sangre y act*an como receptores de ant"genosH cuando estas clulas entran en contacto con el ant"geno, liberan sustancias mediadoras inflamatorias causantes de las manifestaciones cl"nicas de las enfermedades alrgicas. 3or esta ra$n es importante en la 7ipersensibilidad inmediata %tipo ?( y contiene los anticuerpos implicados en la anafilaxia y la sensibilidad cutnea. GAMMA-AT;A" #as gammapat"as pueden presentarse en dos formas! la monoclonal %inmunoglobulina )(, observada en el mieloma m*ltiple %))(, )acroglobulinemia de KaldenstrGm y en la enfermedad de cadenas pesadas y, la policlonal con aumento de todas las inmunoglobulinas, en enfermedades inflamatorias crnicas como el lupus eritematoso sistmico %#E1( y la 7epatitis activa crnica. En el mieloma m*ltiple cualquier inmunoglobulina puede elevarse, mientras que, la inmunoglobulina ) es ms frecuente en otras entidades malignas como la macroglobulinemia de KaldenstrGm. Gammapat"a monoclonal. #a gammapat"a monoclonal comprende un grupo de enfermedades por lo general de carcter maligno que se caracteri$a por la elevacin notable y exclusiva de las gammaglobulinas. #a electroforesis de las prote"nas sricas revela la prote"na monoclonal caracter"stica %espiga6)( en el O0N de los casos. Atros exmenes que complementan el estudio de estos pacientes son la cuantificacin de las inmunoglobulinas sricas, la inmunoelectroforesis de las prote"nas en la orina, el calcio srico, examen de la mdula sea, macroglobulina alfa:, viscosidad sangu"nea y crioglobulinas del suero. En l"neas generales, la gammapat"a monoclonal se pueden clasificar en! Gammapat#as monoclonales mali2nas% )ieloma m*ltiple. >ormas especiales de mieloma m*ltiple! mieloma indolente, mieloma quiescente, no secretor, biclonal, osteoesclertico %s"ndrome de 3AE)1(, mieloma con mielofibrosis. 3lasmocitoma locali$ados! seo solitario y extramedular. Enfermedades linfoproliferativas malignas! )acroglobulinemia de KaldenstrGm, linfoma no 9odgJin con gammapat"a monoclonal, leucemia linfoide crnica con gammapat"a monoclonal. Enfermedades de las cadenas pesadas! gamma, alfa, mu, delta. Gammapat#as monoclonales de si2nificado desconocido% Gammapat"a monoclonal idioptica o esencial. 3roteinuria de Cence64ones. Gammapat"a monoclonal asociada a carcinoma %pulmn, colon, prstata(.

$% TE(NI(A DE E"TUDIO DEL LI<UIDO ARTI(ULAR

Es una tcnica muc7o mas invasiva, donde se reali$a una puncin en la articulacin inflamada con los cuidados aspticos necesarios para no llevar una infeccin a la articulacin. 1e le reali$a un estudio f"sico qu"mico, citolgico y con cristales con lu$ polari$ada. El liquido articular es un ultrafiltrado que presenta todos los factores del plasma excepto el factor de coagulacin, para obtener la muestra se reali$a una artrocentesis asptica. 1e utili$a para el diagnostico de artritis inflamatorias, artritis spticas y por cristales. #o principal que se quiere encontrar es una artritis sptica o descartar si presenta cristales y es gota o si simplemente es inflamatoria. Tambin sirve para evacuar la articulacin que presenta una gran inflamacin. 1e utili$a un microscopio de lu$ polari$ada para ver la presencia de cristales.
normal /iscosidad color aspecto leucocito>mm6 ?-MN micro5iol*2ico cristales mucina 2lucosa alta incoloro transparente Q:00 Q: negativo negativo firme "dem plasma no inflamatorio alta pa+i$o transparente :006:000 : 6 0 negativo negativo firme "dem plasma inflamatorio ba+a amarillo translucidoP turbio :0006500000 06/ negativo positivo o negativo friable 7asta : N menor sptico ba+a variable opacoP purulento R500000 R/ positivo o negativo negativo friable Q.0N

=% Otras tcnicas
Reacciones de a2lutinaci*n donde se +unta el reactivo con el suero del paciente y se ve a simple vista. Reacciones de precipitaci*n que tambin se ven a simple vista. ,omo la citometr"a de flu+o, que se utili$a para ver las clulas alteradas, anemias, para medir la ,D.. Reacciones radioacti/as para descartar la reaccin antigeno anticuerpo que se produce en el examen de &nti D'&< = que es muc7o me+or que la medicin del antiD'& nativo en el proto$oo.