PRODUCCIN DE ACIDO CLAVULNICO POR FERMENTACIN DE Streptomyces clavuligerus: EVALUACIN DE DIFERENTES MEDIOS DE CULTIVO Y MODELADO MATEMTICO PRODUCTION OF CLAVULANIC

ACID BY FERMENTATION OF Streptomyces clavuligerus: EVALUATION OF DIFFERENT CULTURE MEDIA AND MATHEMATICAL MODELING lvarez Heidera, Ochoa Jorlana, Orozco Kevina, Pjaro Jessera
a

Estudiantes de ingeniera qumica de la universidad de Cartagena.

RESUMEN En el articulo examinado se evaluaron cinco medios de cultivos para la produccin de acido clavulanico (AC), teniendo en cuenta parmetros dinmicos como la concentracin de glicerol y de biomasas. El modelo matemtico propuesto por los autores incluye una cintica de tipo Contois para la biomasa y una cintica de formacin de producto parcialmente asociada al crecimiento. Los modelos de ajustes propuestos y desarrollado por los autores fueron comparados con los modelos de ajustes presentados en el siguiente artculo. En este caso, el modelo matemtico presentado por los autores, solo se ajusto a las condiciones del quinto cultivo, que fue donde se presento la mayor produccin de AC, alcanzando alrededor de los 994 mgL-1. Palabras Claves: acido clavulanico, glicerol, biomasas, cintica de tipo Contois. ABSTRACT The article examined five means of crops for the production of clavulanic acid (AC) were evaluated, taking into account dynamic parameters such as the concentration of glycerol and biomass. The authors proposed mathematical model includes type Contois kinetics for biomass and product formation kinetics partially associated with growth. The models proposed adjustments and developed by the authors were compared with models adjustments presented in the following article. In this case, the mathematical model presented by the authors, only adjusted to the conditions of the fifth crop, which was where the increased production of AC is present, reaching around 994 mgL-1. Words keys: Clavulanic acid, glycerol, biomass, type Contois kinetics.

INTRODUCCIN El desarrollo de resistencia microbiana a los antibiticos est directamente relacionado con su grado de exposicin a ellos, y puesto que los antibiticos lactmicos (ej. Penicilinas,

cefalosporinas, etc.) Contribuyen al 40% del mercado total de antibiticos [2], se ha observado que los mecanismos de resistencia bacteriana a antibiticos blactmicos representan actualmente el principal problema clnico a nivel mundial.

En sntesis, la potente actividad inhibitoria de las enzimas -lactamasas que ofrecen las molculas de cido clavulnico (AC), es el principal atractivo para la comercializacin en el campo farmacutico ms especficamente en el rea de los antibiticos como combinaciones, con antibiticos tales como la amoxicilina (Augmentin TM), tetraciclina (Timentn TM) [1] y tambin un producto genrico. Adems de su papel inhibidor descubierto en el ao 1976 y sobre esta caracterstica se han desarrollado estudios exhaustivos con el fin de mejorar los ttulos del antibitico haciendo uso de el proceso de fermentacin propios de la bacteria que lo produce (Streptomyces clavuligerus (Sc)). Por tanto, es de gran importancia continuar abordando estudios tendientes a mejorar la produccin del AC, lo que permitir reducir sus costos y hacerlo ms accesible a la poblacin de escasos recursos. Por otro lado la productividad del proceso en cuestin depende de innumerables factores, entre ellos la concentracin y el tipo de nutrientes, las condiciones de operacin de la fermentacin y del correcto funcionamiento de los mecanismos intracelulares de biosntesis. A pesar de los esfuerzos de los investigadores que trabajan en el tema alrededor del mundo, an no se ha conseguido obtener valores de produccin (titulo) de AC superiores a 1g.L-1 [2, 3], por consiguiente la mayora de las investigaciones que hacen alusin a este tema la optimizacin de estos valores ha sido inferior a 500 mg.L-1 [7-9]. A travs de la informacin suministrada por las patentes farmacuticas de

empresas reconocidas se la logrado conocer que los valores de produccin de AC entre 561 y 1000 mg L-1 [10, 11]. Estudios preliminares para la produccin de AC Streptomyces clavuligerus en cultivos discontinuos sin y con pulsos de glicerol bajo y diferentes condiciones de temperatura por Ceclia L.L. Costa, y Alberto C. Badino, son parte de la investigacin e importancia que tiene el estudio y el modelado y simulacin de este producto en los distintos campos del conocimiento. El principal objetivo del trabajo es modelar de manera satisfactoria utilizando los mtodos numricos necesarios, el sistema de ecuaciones diferenciales que describen el proceso, ajustando los parmetros presentados como problemas y comparndolos por los obtenidos por los autores. METODOLOGA: Modelo Matemtico: El modelo propuesto para el proceso de produccin de AC a partir de Sc, se obtiene realizando balances de masa en un sistema por lote para la biomasa, el sustrato y el producto. Para la velocidad de crecimiento especfica se propuso el modelo de Contois (1). La velocidad de crecimiento microbiano se representa por (2). La velocidad de consumo de glicerol se representa como una funcin directa de la velocidad de crecimiento microbiano (3) y la velocidad de produccin de AC se representa como una funcin aditiva de la velocidad de crecimiento microbiano y la concentracin de biomasa (4) ( ) (1)

(2) ( (( ) ) ) (3)

Solucin de las EDO por Runge Kutta multivariable de 4Orden: (8)

(4) (5) ) (6) Con las pendientes dadas por: ) (7) K1: ( ( ( ) ) ) (10) (9)

Remplazamos (1) en (2), (3) y (4). ( (

(

)
)

((

Dnde: X es la concentracin de la biomasa (gL-1), S es la concentracin de glicerol (gL-1), P es la concentracin de AC (mgL-1), es la velocidad de crecimiento especfica (h-1), es la velocidad de crecimiento mxima especfica (h-1),KS es la constante de saturacin de Monod (gL-1), YXS es el rendimiento biomasa en glicerol, YXP es el rendimiento de biomasa en AC(gmg1 ), a que es una productividad de AC especfica (mgg-1h-1) y w(t) es una "funcin de paso" que asume un valor de 0 en los rangos de tiempo entre 0-48 h y el valor de 1 en el rango de tiempo entre 48-136 h. Estructura Matemtica: Para la solucin del sistema de ecuaciones diferenciales, se deben suponer valores iniciales para los parmetros problemas. , , ,

K2: (

) ) )

K3: ( )

) ) (14) Aplicamos Newton Rapshon a las derivadas de la funcin optimizacin: Construccin del jacobino:

K4: ( ( ( ) ) [ Evaluamos las Funciones derivadas de la optimizacin en el vector inicial: ] )

Aplicando Optimizacin Por mnimos Cuadrados a la solucin de la Ecuacin (7): Por diferenciacin numrica se obtienen las derivadas con respecto a cada parmetro de la funcin de optimizacin:

Resolvemos por Gauss-Jordn con pivoteo parcial y rescalado de columnas (GJPPRC):

(11) Determinamos los nuevos valores para los parmetros:

(12)

(13) Error asociado a los parmetros:

| | | | | |

Algoritmo: | Inicio

Error Local de integracin por esquema de duplicado: | |

Suponemos Vector inicial , ,

| Solucinanos (EDO) por Runge Kutta de 4 Orden

| Dnde:

Aplicamos optimizacin por mnimos cuadrado para los valores obtenidos de P

Determinamos las derivadas por diferenciacin numrica de cada parmetro: ( Parmetros optimizados: )

Aplicamos Newton Rapshon a las derivadas de la funcin optimizacin Construccin del jacobino

Si [ ]

Evaluamos las Funciones derivadas de la optimizacin en el vector inicial

Si

Resolvemos por GJPPRC la matriz formada

Si

Imprimir resultados

Fin

RESULTADOS Y DISCUSIN Fermentacin en birreactor de laboratorio: De acuerdo con el comportamiento del modelo y comparando los datos experimentales, los modelados por los autores del artculo y los presentados en el siguiente artculo, se puede observar que hay un ajuste significativo con los datos de concentracin de glicerol y de formacin de AC y un mejor ajuste con los datos de produccin de biomasa. Grafica 1. Concentracin en (gL-1) de glicerol y biomasa Vs Tiempo. para una concentracin inicial de glicerol 50 (gL1 ).Lnea roja: Glicerol. Lnea azul: biomasas.

Grafica 2. Concentracin en (mgL-1) de AC Vs Tiempo. Obtenida por la simulacin del artculo.

La comparacin de los parmetros obtenidos, por mtodos numricos empleado por los autores, fueron comparados con los parmetros presentados en el siguiente artculo, obteniendo ajustes significativos de los mismos. Tabla 1.Comparacion de parmetros calculado en este articulo, con referencia a los calculados por los autores. Parmetro (h-1) , (gg-1) (mgg-1) (gL-1) Valor Autores 0.0461 0.0103 0.0025 0.45 Valor Articulo 0.04645 0.01119 0.0022 0.51 Error (%) 0.7592 8.64 12 13

REFERENCIA BIBLIOGRAFICAS [1] Song, J.Y., Jensen, S.E. and Lee, K.J., Clavulanic acid biosynthesis and genetic manipulation for its overproduction, Appl Microbiol Biotechnol, 88(3), pp. 659-69, 2010. [2] Jensen, S.E., Wong, A., Griffin, A. and Barton, B., Streptomyces clavuligerus has a second copy of the proclavaminate amidinohydrolase gene, Antimicrob Agents Chemother, 48(2), pp. 514-20, 2004. [3] Teodoro, J.C., Baptista-Neto, A., Araujo, M., Hokka, C. and Badino, A., Influence of glycerol and ornithine feeding on clavulanic acid production by Streptomyces clavuligerus, Brazilian Journal of Chemical Engineering, 27(4), pp. 499 - 506, 2010.