UNIVERSIDADE ESTADUAL DO SUDOESTE DA BAHIA - UESB PRO-REITORIA DE PESQUISA E PS-GRADUO PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA DE ALIMENTOS

MICELAS REVERSAS FORMADAS POR SURFACTANTE/SOLVENTE ORGNICO/GUA: ESTUDO TERMODINMICO E APLICAO PARA EXTRAO DE PROTENAS DA SEMENTE DE JACA

MAYCON FAGUNDES TEIXEIRA REIS

ITAPETINGA BAHIA BRASIL 2010

UNIVERSIDADE ESTADUAL DO SUDOESTE DA BAHIA UESB PRO-REITORIA DE PESQUISA E PS-GRADUO PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA DE ALIMENTOS

MAYCON FAGUNDES TEIXEIRA REIS

MICELAS REVERSAS FORMADAS POR SURFACTANTE/SOLVENTE ORGNICO/GUA: ESTUDO TERMODINMICO E APLICAO PARA EXTRAO DE PROTENAS DA SEMENTE DE JACA

Dissertao

apresentada

Universidade

Estadual do Sudoeste da Bahia - UESB, como parte integrante das exigncias do Programa de PsGraduao em Engenharia de Alimentos, rea de concentrao em Engenharia de Processos de

Alimentos, para obteno do ttulo de Mestre.

Orientador: Profa. D.Sc. Renata Cristina Ferreira Bonomo Co-orientadores: Profo. D.Sc. Paulo Bonomo Profa. D.Sc. Alexilda Oliveira de Souza

ITAPETINGA BAHIA BRASIL 2010

AGRADECIMENTOS A Deus; Aos meus pais Jos e Ismene, meus irmos Marcelo e Sandra, meu cunhado Geovane, minha cunhada Eliana, minha sobrinha Letcia e todos os demais familiares pelo incentivo e apoio nessa jornada; minha namorada Ada, por estar sempre presente me dando fora, amor e incentivo; professora Renata Bonomo pela orientao impecvel, amizade e conselhos durante todo o mestrado; Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia (UESB), pelo Programa de Ps-Graduao; FAPESB, pela bolsa concedida; Ao professor Paulo Bonomo e professora Alexilda Oliveira pela co-orientao, com sugestes muito validas para execuo do trabalho; Ao Professor Luis Henrique M. da Silva pela ajuda, conselhos e amizade; Ao professor Luis Antonio Minim, pela amizade, conselhos e toda ajuda na execuo do experimento; professora Cristiane Veloso por sua prestativa contribuio a este trabalho; Aos amigos Lo, Keko, Rogrio, Vitor, Osvaldo, Moyses, Ivan, Virgilo e Sandro, pela convivncia, amizade, momentos de alegria e apoio durante a graduao e o Mestrado; Aos colegas do mestrado Christian, Anglica, Ariane, Helmo, Juca, Viviane e Ravi; E a todos os amigos que de alguma forma contriburam neste trabalho e no foram aqui citados, meus sinceros agradecimentos.

SMARIO LISTA DE TABELAS .................................................................................................................. v LISTA DE FIGURAS .................................................................................................................. vi LISTA DE ABREVIATURAS E SMBOLOS .......................................................................... viii RESUMO ..................................................................................................................................... ix ABSTRACT .................................................................................................................................. x 1. INTRODUO......................................................................................................................... 1 2. OBJETIVOS .............................................................................................................................. 3 2.1. Objetivo geral ..................................................................................................................... 3 2.2. Objetivos especficos .......................................................................................................... 3 3. REVISO DE LITERATURA ................................................................................................. 4 3.1. Surfactante .......................................................................................................................... 4 3.1.1. Classificao dos Surfactantes..................................................................................... 5 3.1.2. Micelas ........................................................................................................................ 6 3.1.3. Micelas Reversas ......................................................................................................... 7 3.2. Lecitina de Soja .................................................................................................................. 9 3.3. Dodecil Sulfato de Sdio (SDS) ....................................................................................... 10 3.4. Jaca ................................................................................................................................... 11 3.5. Delineamentos Experimentais (FATORIAL FRACIONADO/DCCR/MSR) .................. 12 3.6. Calorimetria de Titulao Isotrmica (ITC) ..................................................................... 14 4. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .................................................................................... 15 CAPTULO 1 - OTIMIZAO DO PROCESSO DE EXTRAO DA PROTENA DA FARINHA DA SEMENTE DE JACA UTILIZANDO SISTEMA MICELAR REVERSO COMPOSTO POR SDS/H2O/BUTANOL. ................................................................................. 20 RESUMO .................................................................................................................................... 20 ABSTRACT ................................................................................................................................ 20 1. INTRODUO....................................................................................................................... 20 2. MATERIAIS E MTODOS.................................................................................................... 22 ii

2.1. Materiais e reagentes ........................................................................................................ 22 2.2. Preparo da Farinha da Semente de Jaca............................................................................ 22 2.3. Anlise Qumica ............................................................................................................... 22 2.3.1. Umidade .................................................................................................................... 22 2.3.2. Protena ...................................................................................................................... 22 2.3.3. Cinzas ........................................................................................................................ 22 2.3.4. Gordura ...................................................................................................................... 23 2.4. Preparao dos sistemas micelar reverso e extrao das protenas .................................. 23 2.5. Quantificao de protenas ............................................................................................... 23 2.6. Planejamento Experimental .............................................................................................. 23 3. RESULTADOS E DISCUSSES ........................................................................................... 25 3.1. Composio centesimal da farinha ................................................................................... 25 3.2. Efeito da relao molar H2O/SDS, %Butanol, temperatura, tempo e massa de farinha na extrao das protenas da farinha de semente de jaca ............................................................. 25 3.2.1. Avaliao do fatorial fracionado ............................................................................... 26 3.2.2. Ajuste de modelos (Resultados dos DCCR) .............................................................. 26 3.2.3. Efeito das variveis independentes na varivel resposta ........................................... 30 4. CONCLUSES ....................................................................................................................... 32 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .................................................................................... 33 CAPTULO 2 ESTUDO CALORIMETRICO DA MICROEMULSO DE LECITINA DE SOJA EM ISOOCTANO E BUTANOL. .................................................................................... 34 RESUMO .................................................................................................................................... 34 ABSTRACT ................................................................................................................................ 34 1. INTRODUO....................................................................................................................... 35 2. MATRIAIS E METDOS.................................................................................................... 36 2.1. Materiais: .......................................................................................................................... 36 2.2. Medidas de Titulao Turbidimtrica: ............................................................................. 37 2.3. Estudo microcalorimtrico do sistema. ............................................................................ 37 3. RESULTADOS E DISCUSSO ............................................................................................ 38

iii

3.1. Diagrama de solubilidade da gua no sistema ternrio composto por lecitina de soja/isooctano/butanol. ............................................................................................................ 38 3.2. Medidas de Entalpia de Mistura ....................................................................................... 40 4. CONCLUSO......................................................................................................................... 45 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .................................................................................... 45 CONCLUSO GERAL .............................................................................................................. 47

iv

LISTA DE TABELAS

TABELA 1. Variveis e nveis do delineamento fatorial fracionado (25-1) ................................. 24 TABELA 2. Composio qumica da farinha da semente de jaca (Artocarpus Integrifilia L.). 25 TABELA 3. Estimativa dos parmetros para o rendimento de extrao empregando um fatorial 25-1 (CV=25,56% E R2=61,58%). ................................................................................................ 26 TABELA 4. Dados do 1 DCCR feito com os fatores que tiveram efeitos no fatorial fracionado. ..................................................................................................................................................... 27 TABELA 5. Dados do 2 DCCR ajustando os parmetros a valores que tiveram bons rendimentos de extrao no 1 DCCR. ........................................................................................ 28 TABELA 6. Anova para o modelo de superfcie de resposta (CV= 36,48% E R2=62,67%) ...... 28 TABELA 7. Significncia dos coeficientes de regresso para a resposta (y).............................. 29

LISTA DE FIGURAS

REVISO DE LITERATURA

FIGURA 1: Representao esquemtica de uma micela aninica em meio aquoso. Fonte: (JONSSON ET. AL., 1998)........................................................................................................... 7 FIGURA 2: Composio de uma micela reversa (ADAPTADO DE SEOUD ET. AL., 1999) .... 9 FIGURA 3: Estrutura moleculare da fosfatidilcolina . FONTE: (MERTINS, 2004) .................. 10 FIGURA 4: Estrutura molecular do dodecil sulfato de sdio Fonte: (FERREIRA, 2006). ........ 11

CAPTULO 1 - OTIMIZAO DO PROCESSO DE EXTRAO DA PROTENA DA FARINHA DA SEMENTE DE JACA UTILIZANDO SISTEMA MICELAR REVERSO COMPOSTO POR SDS/H2O/BUTANOL.

FIGURA 1: Grfico de pareto dos efeitos padronizados das variveis %Butanol (X1), relao H2O/SDS (X2), e massa de farinha (X3) sobre o rendimento de extrao da protena FSJ.......... 29 FIGURA 2: Grfico de superficie de resposta para os efeitos da relao H2O/SDS (X2) e da MF (X3) sobre o rendimento de extrao da protena FSJ. ................................................................ 30 FIGURA 3: Grfico de superfcie de resposta para os efeitos da relao %Butanol (X1) e da MF (X3) sobre o rendimento de extrao da protena FSJ................................................................. 31 FIGURA 4: Grfico de superfcie de resposta para os efeitos da relao %Butanol (X1) e da relao H2O/SDS (X3) sobre o rendimento de extrao da protena FSJ. ................................... 32

CAPTULO 2 ESTUDO CALORIMETRICO DA MICROEMULSO DE LECITINA DE SOJA EM ISOOCTANO E BUTANOL.

FIGURA 1: Deflexes que correspondem variao de potncia ao se fazer injees consecutivas de gua em Isooctano/Lecitina de Soja/Butanol. ................................................... 38 FIGURA 2: Diagrama de solubilidade da gua no sistema ternrio Lecitina/Isooctano/Butanol a 25 C. ........................................................................................................................................... 39 FIGURA 3: Variao da entalpia de mistura com a titulao da gua em

Isooctano+Butanol+Lecitina de soja. .......................................................................................... 41 vi

FIGURA

4:

Variao

da

entalpia

de

mistura

com

titulao

da

gua

em

Isooctano+Butanol+Lecitina de soja, Isooctano+Lecitina de soja e Isooctano puro................... 42 FIGURA 5: Variao da entalpia de mistura com a titulao da gua em

Isooctano+Butanol+Lecitina de Soja, Butanol+Lecitina de soja e Butanol puro........................ 43

vii

LISTA DE ABREVIATURAS E SMBOLOS

SDSCMCFSJDFPFFDCCRMSRR.EMFITCHmixH-

Dodecil Sulfato de Sdio Concentrao Micelar Crtica Farinha da Semente de Jaca Delineamento Fatorial Planejamento Fatorial Fracionado Delineamento Central Composto Rotacional Metodologia de Superfcie de Resposta Rendimento de Extrao Massa de Farinha Microcalorimetria de Titulao Isotrmica Variao de Entalpia (kJ/mol) Variao de Entalpia de Mistura (kJ/mol)

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RESUMO

REIS, Maycon Fagundes Teixeira, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Fevereiro de 2010. Micelas reversas formadas por surfactante/solvente orgnico/gua: estudo termodinmico e aplicao para extrao de protenas da semente de jaca. Orientadora: Profa. D.Sc. Renata Cristina Ferreira Bonomo. Co-orientadores: Profo. D.Sc. Paulo Bonomo e Profa. D.Sc. Alexilda Oliveira de Souza. As microemulses so compostas de gua, leo e surfactante e, algumas vezes, de um lcool como co-surfactante. Estes sistemas tm sido muito estudados durante as ltimas dcadas, principalmente devido ao seu elevado poder dissolvente. Nesse trabalho foram feitos dois estudos utilizando duas microemulses com composies diferentes, uma feita com dodecil sulfato de sdio (SDS), butanol e gua, e outra composta por lecitina de soja, isooctano, butanol e gua. No primeiro estudo, foi utilizada a microemulso formada por SDS, butanol e gua, para extrair protena da farinha da semente de jaca por meio de micelas reversas. Os efeitos do tempo de agitao, temperatura, relao molar H2O/SDS, % Butanol e massa de farinha foram testados no sistema em batelada. Com base no modelo de regresso linear ajustado, somente para o fator % Butanol, foi obtido o timo de extrao que foi de 41,16 %, e baseado na anlise de metodologia de superfcie de resposta (MSR), pde-se observar a tendncia de otimizao do processo de extrao. No segundo estudo, foi feita uma anlise termodinmica utilizando um microcalormetro de titulao isotrmica, para avaliar a variao da entalpia de mistura ( mixH) da gua no sistema formado por lecitina de soja, isooctano e butanol, e nas combinaes entre os componentes. Observou-se que na titulao da gua no sistema formado por lecitina de soja, isooctano e butanol, ocorreu um comportamento termodinmico exotrmico associado ao processo de dissoluo da gua, devido ao fato de estarem formando micelas reversas no sistema avaliado, ocorrendo liberao de energia inferior a -2 kJ/mol, indicando assim uma contribuio entlpica para a agregao das molculas de lecitina, butanol e gua. Por fim, verificou-se tambm que a lecitina de soja no sofreu nenhum processo de degradao, visto que a energia envolvida no processo de titulao da gua nos sistemas contendo a mesma foi considerada baixa, podendo ser utilizada sem problemas nesse tipo de sistema.

ix

ABSTRACT REIS, Maycon Fagundes Teixeira, Southwest of Bahia University, in February 2010. Reverse Micelles formed by surfactant/organic solvent/water: Thermodynamic study and application of protein fron seed jack fruit. Advisor: Prof.. D.Sc. Renata Cristina Ferreira Bonomo. Co-advisors: Prof.. D.Sc. Paulo Bonomo and Profa. D.Sc. Alexilda Oliveira de Souza. Microemulsions are composed of water, oil and surfactant, and sometimes, of an alcohol as cosurfactant. These systems have been the subject of numerous studies over the past decades, mainly due to its high solvent power. In this work, two studies were made using two microemulsions of different compositions, one made of sodium dodecyl sulfate (SDS), butanol and water, and another consisting of soy lecithin, isooctane, butanol and water. In the first study, it was used a microemulsion formed by SDS, butanol and water to extract protein from flour of jack fruit seed, through reverse micelles. The effects of stirring time, temperature, molar ratio H2O/SDS,% butanol and mass of flour were tested in batch systems. Based on the adjusted model of linear regression, it was obtained an optimum extraction condition just for the factor % butanol, which was 41.16%. The analysis of the surface response has shown a tendency of optimization of the extraction process. In the second study, it was performed a thermodynamic analysis using an isothermal titration calorimeter to measure the change in enthalpy of mixing ( mixH) of water in the system consisting of soy lecithin, butanol and in the mixture of them. It was observed an exothermic thermodynamic behavior, related to the water dissolution, for the titration of pure water in the system composed by isooctane, butanol and soy lecithin, due to the formation of reverse micelles on the system. The energy release was lower than -2 kJ/mol, denoting enthalpy contribution on the aggregation of lecithin, butanol and water molecules. Finally, it was verified that soy lecithin did not suffer any degradation process, since the energy involved on the titration of water in systems containing this very component was considered low. Thus, it may be used without problems in this type of system.

1. INTRODUO As microemulses so compostas de gua, leo e surfactante e, algumas vezes, de um lcool como co-surfactante. Estes sistemas tm sido muito estudados durante as ltimas dcadas, principalmente devido ao seu elevado poder dissolvente (PATEL et al., 2006; GULN et al., 2003). Possuem uma ampla aplicao industrial, sendo utilizados na constituio de materiais polimricos (XU et al., 1999), como transportadores de drogas via oral, administrao parenteral e tpica, grande potencial nas reas de cosmticos e diversos produtos de consumo (WATNASIRICHAIKUL et al., 2000). Alm disso, a segurana no uso de fosfolpidos (por exemplo, Lecitinas), por serem atxicos, vem aumentando o uso de microemulses, principalmente pela indstria alimentcia e farmacutica, na constituio de produtos e ultimamente tm sido amplamente utilizados na extrao de biomolculas. Apesar do interesse crescente em utilizar microemulses, e da abundncia de dados tericos e experimentais, a formulao desses sistemas ainda feita por tentativa e erro (TAHA et al., 2005). A aplicao em potencial de microemulses formadas por produtos altamente biocompatveis aos alimentos, cosmticos e produtos farmacuticos como meios de solubilizao de solues hidroflicas, hidrofbicas, anfiflicos e materiais funcionais, aumenta a cada ano (LESER et al., 2006). O potencial tcnico e aplicaes comerciais de microemulses esto principalmente ligadas s suas propriedades nicas, como a estabilidade termodinmica, clareza ptica e alta capacidade de solubilizao. No entanto, o problema mais crtico quanto ao uso de microemulses na alimentao, na composio de cosmticos e farmacuticos a toxicidade dos seus componentes. Formulao e caracterizao de microemulso com constituintes atxicos na sua composio, com base biolgica anfiflica e diferentes leos, foram estudados h mais de uma dcada. Um exemplo de surfactante atxico a lecitina de soja, que uma combinao natural de fosfolipdios, que so extrados durante o processamento de leo de soja. Nos ltimos anos, a lecitina tem sido utilizada com sucesso na constituio de microemulses atxicas (PAPADIMITRIOU et al., 2008). O estudo de microemulses de grande importncia, frente a sua larga utilizao pelos vrios setores do mercado. Saber a formulao correta, o comportamento e quais as melhores condies de uso das microemulses, so informaes de grande valia para aplicao desses sistemas nas inmeras reas de uso. Considerando que cada componente utilizado na formulao das microemulses leva a um comportamento diferente do produto final, os diversos tipos de surfactante e solventes utilizados devem ser estudados combinados e separadamente, visto que existe uma vasta opo desses componentes que podem ser utilizados na formulao desse tipo de sistema. 1

Considerando a importncia do estudo e da utilizao de microemulses, o presente trabalho teve como objetivo estudar o rendimento de extrao de protenas de uma fonte alternativa, nesse caso a farinha da semente de jaca (Artocarpus integriflia L), utilizando micelas-reversas formadas por dodecil sulfato de sdio (SDS) em butanol e gua. Foi feito tambm o estudo da variao da entalpia de mistura de gua em isooctano/butanol e lecitina de soja, utilizando a microcalorimetria de titulao isotrmica (ITC). O trabalho foi estruturado em dois captulos, alm da introduo, objetivos e reviso da literatura. No primeiro captulo, foi estudada a extrao da protena da farinha da semente de jaca por micelas reversas. O sistema micelar reverso utilizado foi formado por dodecil sulfato de sdio (SDS) como surfactante, butanol como solvente orgnico e gua. No segundo captulo, foi feita uma anlise de titulao turbidimtrica associada anlise termodinmica, na qual foi utilizado um microcalormetro de titulao isotrmica para avaliar a variao da entalpia de mistura (
mixH)

da gua na microemulso formada por lecitina de soja, isooctano e butanol, e

em isooctano puro, butanol puro, lecitina de soja e isooctano, lecitina de soja e butanol, e em isooctano e butanol.

2. OBJETIVOS 2.1. Objetivo geral Estudar o comportamento termodinmico na formao da microemulso composta por lecitina de soja, isooctano, butanol e gua. Estudar a aplicao de microemulses extraindo a protena da farinha de semente de jaca por meio de micelas reversas formadas por dodecil sulfato de sodio (SDS), butanol e gua. 2.2. Objetivos especficos Avaliar a variao entalpia de mistura (
mixH)

da gua em lecitina de soja,

isooctano e butanol, utilizando microcalorimetria de titulao isotrmica (ITC). Obter os pontos de timo, utilizando a metodologia de superfcie de resposta (MSR), na extrao da protena da farinha da semente de jaca utilizando micelas reversas, variando os fatores: tempo, temperatura, massa de farinha, relao H2O/SDS e % Butanol; Ajustar um modelo para os dados experimentais para predio do rendimento de extrao;

3. REVISO DE LITERATURA 3.1. Surfactante A palavra surfactante derivada da contrao da expresso surface active agent, termo que significa, literalmente, agente de atividade superficial. Os surfactantes so molculas anfipticas, compostas por uma parte polar ou hidroflica e uma cadeia carbnica apolar ou hidrofbica, sendo que a parte polar pode ser carregada positiva ou negativamente (catinica ou aninica), pode ser dipolar (zwitterinica) ou no carregada. Os surfactantes podem promover a solubilizao e a emulsificao de materiais insolveis e podem reduzir a tenso superficial da soluo para facilitar o processamento (GRIFFITHS et al., 2002). Isto evidencia uma importante propriedade dos surfactantes, que a formao de um filme molecular, ordenado nas interfaces, que reduz a tenso interfacial e superficial. Este um importante aspecto do seu uso, que inclui aplicaes industriais em decorrncia de propriedades como: detergncia, emulsificao, lubrificao, capacidade espumante, molhabilidade, solubilizao e disperso de fases. O papel comum do surfactante em todas estas aplicaes a de modificar a caracterstica da interface. (NITSCHKE et al., 2002). Uma caracterstica fundamental que est diretamente ligada ao dos surfactantes que em meio aquoso, acima de uma determinada concentrao, os surfactantes formam micelas e outros agregados, nos quais a poro lipoflica das molculas fica orientada para o interior da micela enquanto apenas os grupos polares ficam na parte externa da micela em contato com a gua. Foras eletrostticas concentram compostos hidroflicos junto superfcie de micelas enquanto compostos lipoflicos podem ser solubilizados em seu interior (MINATTI, 2005). Os surfactantes apresentam as seguintes propriedades (SCHWEITZER, 2003; SANTOS, 1993): (i) Quando em soluo, diminuem a tenso interfacial, devido adsoro e orientao na interface; (ii) (iii) Existncia de molculas dispersas em soluo; Formao de micelas acima de uma determinada concentrao micelar critica (cmc) devido ao decrscimo de energia livre do sistema; (iv) Solubilizao de substncias insolveis em gua pelas micelas As mais utilizadas nas indstrias de alimentos so principalmente os surfactantes no-inicos

(monoacilglicerois, ster de sacarose de cidos graxos), aninicos (cidos graxos), ou zwitterinicos (lecitina) que apresentam as propriedades combinadas de surfactantes inicos e no-inicos.

Devido a sua grande utilizao pelas indstrias, a produo mundial de surfactantes excede 3 milhes de toneladas/ano, com sua utilizao se concentrando nas indstrias de petrleo, de cosmticos, de produtos de higiene e de limpeza (BANAT, 2000), onde este ltimo o setor que utiliza a maior parte dos surfactantes produzidos como matria-prima para fabricao de detergentes de uso domstico (NITSCHKE et al., 2002). 3.1.1. Classificao dos Surfactantes Um surfactante tpico possui a estrutura R-X, onde R uma cadeia de hidrocarboneto variando de 8 a 18 tomos (normalmente linear) e X o grupo polar (ou inico). Dependendo da caracterstica do grupo X, os surfactantes podem ser classificados como no-inicos, catinicos, aninicos ou anfteros. Os surfactantes catinicos possuem em geral a frmula RnX+Y, onde R representa uma ou mais cadeias hidrofbicas, X um elemento capaz de formar uma estrutura catinica e Y um contra on. Em principio, X pode ser nitrognio, fsforo, enxofre, arsnio, telrio, antimnio, bismuto ou um halognio. Dentre os surfactantes aninicos mais freqentemente utilizados, esto aqueles que possuem sais de cidos carboxlicos (graxos) monoprticos ou poliprticos com metais alcalinos ou alcalinos terrosos, cidos como o sulfrico, o sulfnico ou o fosfrico, contendo um substituinte de hidrocarboneto saturado ou insaturado (MANIASSO, 2001). Os surfactantes inicos contm uma cabea polar carregada, tanto positivamente (catinicos) como negativamente (aninicos). Os exemplos mais clssicos so o SDS, que contm carga negativa no seu grupo sulfato, enquanto o brometo de cetil trimetil amnio (CTAB) contm uma carga positiva no seu grupo trimetilamnio. Alm disso, os surfactantes inicos contm uma cadeia de hidrocarboneto como o SDS e o CTAB, ou uma estrutura esteroidal rgida como o colato de sdio (sal biliar) (BHAIRI, 2001, BHAIRI e MOHAN, 2007). Os Surfactantes Aninicos contm geralmente um dos quatros grupos polares solveis (carboxilato, sulfonato, sulfato ou fosfato) combinado com uma cadeia hidrocarbonada hidrofbica. Os surfactantes catinicos so muito utilizados em detergentes, agentes de limpeza, lquidos de lavar pratos e cosmticos em geral, e so compostos por uma molcula lipoflica e outra hidroflica, contendo um ou vrios grupos amnio tercirios ou quaternrios (KIRK, 1997). Os surfactantes no-inicos no contm carga, mas apresentam grupos altamente hidroflicos na parte polar. Em geral, a poro polar da molcula formada por polioxietilenos ou grupos glicosdios (Ex: Brij, Triton X-100, Tween CxEy, dodecyl--D-maltosdeo, digitonina). Esse tipo de surfactante no se dissocia em ons hidratados em meio aquoso. As propriedades hidroflicas so observadas pela hidratao dos grupos amida, amina, teres e hidroxilas (KIRK, 1997; MATTSSON et al., 1994). 5

Os surfactantes zwiterinicos so os nicos que apresentam propriedades combinadas de surfactantes inicos e no-inicos, de acordo com o pH do meio. Como os no-inicos, no apresentam uma carga lquida, tm baixa condutividade e mobilidade eletrofortica e no se ligam em resinas de troca inica, (Ex: CHAPS, SB 3-10, ASB) (CHEVALLET et. al., 1998). 3.1.2. Micelas Uma caracterstica das molculas de surfactantes, quando se encontram em soluo, adsorver preferencialmente nas interfaces, devido ao carter hidrofbico de suas caudas, resultando na diminuio da tenso superficial do lquido. Porm, se todas as interfaces disponveis estiverem saturadas energeticamente, a diminuio da energia livre pode ser conseguida por outros caminhos. A manifestao fsica de um dos possveis mecanismos a cristalizao ou precipitao do surfactante na soluo, ou seja, uma separao de fases. Um mecanismo alternativo a formao de agregados moleculares ou micelas, que permanecem termodinamicamente estveis como espcies dispersas em soluo, possuindo propriedades distintas daquelas de um monmero. A faixa de concentrao onde ocorre a formao das primeiras micelas denominada concentrao micelar crtica (CMC). Quando a concentrao de surfactante solvel em gua aumentada, a concentrao micelar crtica pode ser estimada monitorando-se propriedades fsicas da soluo como a condutividade e a tenso superficial. Estas apresentam descontinuidade quando a CMC alcanada, indicando a presena de micelas na soluo (MYERS, 1999). A natureza do solvente em que os surfactantes esto dissolvidos determina a existncia de dois tipos de micelas: as micelas diretas e as micelas inversas. As micelas diretas se formam na presena de solventes polares, onde a parte polar do surfactante fica orientada para o meio polar, enquanto que a cauda apolar agrupa-se no interior da micela, evitando o contato com o diluente. Porm, as micelas reversas apresentam o comportamento inverso, ou seja, so formadas em solventes apolares com as cabeas hidroflicas voltadas para o centro e cercadas pelas caudas hidrofbicas (FLORNCIO, 1995). Quando em meio aquoso, os surfactantes tendem, em determinadas condies e concentraes, a se auto-organizarem naturalmente, formando estruturas esfricas ou elipsoidais denominadas micelas; expondo suas pores hidroflicas ao meio e retraindo sua poro hidrofbica ao interior das micelas. O ncleo hidrofbico das micelas tem seu raio limitado pelo comprimento da cadeia carbnica estendida (TESTARD e ZEMB, 2002, VOLPE e SILVA FILHO, 1995). As micelas so entidades lbeis formadas pela agregao no covalente de monmeros de surfactante. Sua forma e seu tamanho variam com o tipo de surfactante utilizado, alm de temperatura, concentrao e composio do surfactante, fora inica e pH, podendo

adquirir configurao esfrica, cilndrica ou planar (discos ou bicamadas) (RANGUEL-YAGUI et. al., 2004). Uma caracterstica importante da micela a existncia de um equilbrio dinmico entre o agregado e molculas livres de surfactante em soluo, ou seja, a micela no uma estrutura esttica. A sada de um monmero que compe uma micela ocorre na escala de tempo de microssegundos e sua recaptura ocorre a velocidades similares quelas provindas de processos controlados por difuso (por volta de k = 108 109 mol L-1 s-1). O tempo de vida de uma micela da ordem de milissegundos (MYERS, 1999). O modelo clssico para estrutura de micelas proposto por Hartley em 1939, sugere que as micelas sejam essencialmente gotculas lquidas de dimenses coloidais com os grupos polares da molcula de surfactante situados na superfcie (Figura 1). A micela formada por trs regies distintas: um ncleo hidrocarbnico, cujo raio depende do tamanho da cadeia alqulica; uma regio na qual se localizam os grupos hidroflicos e os contraons associados, conhecida como camada de Stern, cuja espessura depende do tamanho do grupo polar; uma regio denominada dupla camada eltrica de Gouy-Chapman, que contm os contraons no associados micela. Na verdade, os modelos de micelas, mesmo os mais sofisticados, no podem representar todas as funes as quais eles tentam mimetizar. O modelo de Hartley pode ser considerado uma representao mdia de vrias estruturas dinmicas de uma micela esfrica (FENDLER, 1982).

Figura 1: Representao esquemtica de uma micela aninica em meio aquoso. Fonte: (JONSSON et. al., 1998) 3.1.3. Micelas Reversas A micela reversa composta por 3 regies, sendo que a primeira formada pela cauda hidrofbica do surfactante, que fica em contato direto com o solvente apolar; a segunda a 7

periferia micelar onde as molculas de gua esto fortemente ligadas aos ncleos polares das molculas do surfactante e a terceira o centro micelar, formado pela gua contida no interior da micela que est ligada ao surfactante ou gua livre (AIRES-BARROS e CABRAL, 1991). A solubilizao de surfactantes em meio orgnico ocorre devido s caractersticas apolares do meio e inverso de conformao micelar, ou seja, a estrutura micelar mantm-se. Porm, neste meio a poro hidrofbica a que fica exposta e a poro hidroflica se retrai para o interior da micela. Nesta situao, temos a chamada micela reversa; aglomerados moleculares analogamente elipsoidais ou esfricos, cujo ncleo por suas caractersticas hidroflicas pode em determinadas condies reter gua, a qual fica parcialmente protegida do contato com o solvente orgnico pelo agregado de molculas de surfactante (YANG e ROBB, 2005). Do ponto de vista estrutural, define-se as micelas reversas como sendo aglomerados moleculares relativamente ordenados, caracterizados por um raio mdio, um nmero de agregao e densidade de empacotamento bem definidos (BORDI e CAMETTI, 1998). Micelas reversas so formaes espontneas e reversveis de agregados esfricos de molculas anfiflicas em soluo apolar. Na presena de gua, os centros aquosos presentes nestes agregados so capazes de solubilizar protenas e outras substncias de origem biolgica, promovendo sua purificao (RODRIGUES et. al., 1999). Micelas reversas so conhecidas como microemulses de gua/leo. Uma microemulso uma disperso isotrpica termodinamicamente estvel de dois lquidos imiscveis consistindo de microdomnios de um ou ambos os lquidos estabilizados por um filme interfacial de molculas de surfactante (KILIKIAN et. al., 2000). A natureza da gua presente no ncleo micelar de grande importncia na solubilizao de biomolculas, uma vez que desse componente que depende a manuteno das propriedades estruturais responsveis pela funcionalidade de uma enzima encapsulada na micela reversa. A gua intracelular pode ter propriedades fsico-qumicas distintas da gua pura, assemelhando-se gua presente nas membranas e interfaces biolgicas e pode ser classificada em 2 tipos principais: a gua ligada ao surfactante, de menor polaridade e maior viscosidade, e as gua livre, com propriedades semelhantes a da gua pura (KILIKIAN et. al.,2000). Entre os solventes orgnicos utilizados como meio dispersivo na formao de micelas, destacam-se os hidrocarbonetos alifticos, como o n-octano, isooctano e n-heptano; porm os aromticos como o benzeno e o xileno e os halogenados como o clorofrmio, tambm podem ser utilizados (YANG e ROBB, 2005). A gua da periferia micelar tem caractersticas diferentes, pois, existe uma fora eletrosttica devido fora de atrao dos ncleos polares das molculas do surfactante com as molculas de gua. Portanto, quanto menor a quantidade de gua no interior da micela menor 8

ser a extrao do bioproduto para o seu interior, j que as condies no so favorveis para solubilizao do bioproduto (KREI e HUSTEDT, 1992). Na Figura 2, encontra-se a representao esquemtica de uma micela reversa.

Figura 2: Composio de uma Micela Reversa (Adaptado de SEOUD et. al., 1999) 3.2. Lecitina de Soja A lecitina a designao dada a uma mistura de glicolpidos, triglicridos e fosfolpidos (por exemplo: fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina e fosfatidilinositol). Contudo, em bioqumica, o termo lecitina , usualmente, utilizado como sinnimo de fosfatidilcolina pura, um fosfolpido que constitui o principal componente da frao fosfatada que se obtm da gema de ovo ou de gros de soja, de onde extrada por meios mecnicos ou qumicos, utilizando hexano (MERTINS, 2004). A lecitina um subproduto do processamento de leo de soja bruto e removido durante a etapa de degomagem de refino do leo. leo de lecitina livre um material plstico pegajoso, uma mistura com metade do seu peso de leo de soja reduzindo acentuadamente a viscosidade para se chegar ao produto conhecido como lecitina fluida. O material bruto escuro, quase negro (principalmente por causa das altas temperaturas utilizadas durante o processamento), por isso preciso fazer o branqueamento para ficar com uma cor castanha clara mais aceitvel (STAUFFER, 2005). A Fostatidilcolina (Lecitina de Soja) um fosfolipdio natural de massa molar igual a 780 g/mol e =0,05 g/cm3 (WILLARD et. al., 1998). Faz parte da composio molecular das membranas biolgicas e tambm se encontra presente no plasma sanguneo como constituinte de lipoprotenas. biocompatvel, biodegradvel e tem ao detergente. Sua estrutura (Figura 3) formada por duas longas cadeias hidrocarbnicas, uma saturada e outra insaturada, que 9

constituem a poro hidrofbica ou apolar da molcula. A poro hidroflica ou polar formada pelo glicerol, o grupo fosfato e a colina (MERTINS, 2004).

Figura 3: Estrutura moleculare da fosfatidilcolina . Fonte: (MERTINS, 2004) A fosfatidilcolina um slido amarelado, higroscpico e pouco estvel. facilmente decomposta em altas temperaturas e degradada pela ao do oxignio quando exposta ao ar e umidade por longos perodos. Seu principal produto de degradao a lisofosfatidilcolina, resultante da hidrlise da funo ster no carbono de posio 1 ou 2 do glicerol, fornecendo uma molcula com apenas uma cadeia apolar (KISHIMOTO et. al., 2002). Sua presena aumenta consideravelmente a permeabilidade das membranas de lipossomas, diminuindo a capacidade de reteno de material encapsulado nos lipossomas (LUTZ et. al., 1995). A fosfatidilcolina de soja obtida do subproduto no processo de fabricao do leo de soja. Essa matria prima constituda de uma mistura de um grande nmero de cidos graxos, lipdios, protenas, pigmentos e fosfolipdios de diferentes estruturas moleculares, com a fostatidilcolina representando entre 10 e 20%. A purificao industrial e laboratorial feita por cromatografia em coluna. Os processos mais acessveis utilizam colunas de slica ou alumina e misturas de clorofrmio: metanol como eluente (MERTINS, 2004). Atualmente, a fosfatidilcolina largamente empregada nas indstrias farmacutica e cosmtica como emulsificante excipiente e na produo de lipossomas, bem como nas indstrias alimentcias e de tintas como estabilizante e emulsificante (MARON et. al., 2007). 3.3. Dodecil Sulfato de Sdio (SDS) O dodecil sulfato de sdio, mais conhecido como SDS, com frmula molecular CH3(CH2)11OSO3Na (Figura 4), se encontra na forma de pequenos cristais brancos ou amarelados com leve odor caracterstico. Solvel em dez partes de gua, parcialmente solvel em lcool e quase insolvel em clorofrmio e em ter, com ponto de ebulio em torno de 204207 C. um ster de sulfato de C12, lcool dodecanol. Comercialmente, o lcool produzido 10

pela reduo do leo de cco, a mistura resultante chamada lcool lauril. A poro de lcool do lauril sulfato de sdio uma mistura de comprimentos de cadeia, a composio aproximada de 8 % de C8, 7 % de C10, 48 % de C12, 20 % de C14, 10 % de C16, e pequenas quantidades de cadeias mais longas. (STAUFFER, 2005).

Figura 4: Estrutura molecular do Dodecil Sulfato de Sdio Fonte: (FERREIRA, 2006). Estes compostos vm sendo usados ao longo dos anos para diferentes finalidades e usos distintos, a saber, banhos de espuma, cremes emolientes, cremes depilatrios, loes para mos, xampus, dentifrcios, alm de produtos saneantes (detergentes domissanitrios). Este uso tem sido motivado em razo das suas propriedades detergente, espumante, emulsificante e solubilizante (FERREIRA, 2006). 3.4. Jaca A jaca (Artocarpus integriflia L) pertence famlia Moraceae e encontra-se largamente distribuda em pases como o Brasil, Tailndia, Indonsia, ndia, Filipinas e Malsia (CHOWDHURY et. al., 1997). Pela facilidade com que se dissemina, prolifera espontaneamente nas regies mais quentes do Brasil. Atualmente, cultivada em toda a regio Amaznica e toda a costa tropical brasileira, do Estado do Par ao Rio de Janeiro (SOUZA et. al., 2009). A jaca apresenta caracterstica de sazonalidade bem especfica, marcada pela concentrao da oferta no perodo de dezembro/abril. Os bagos podem ser de consistncia um pouco endurecida ou totalmente mole, da a distino de duas variedades muito conhecidas e denominadas popularmente de jaca-mole e jaca-dura (SOUZA et. al., 2009), pode ser encontrada em feiras, mercados, ou no CEASA com facilidade nas pocas chuvosas, de Dezembro a Maro, pois nesta poca que os frutos esto prontos para serem consumidos. Dos subprodutos existentes, as sementes da jaqueira (15 a 25 % do fruto), so muito usadas na alimentao humana, podendo ser cozidas ou torradas em forno ou assadas brasa, alm de serem nutritivas, so saborosas (SILVA, 2007). A jaca um fruto comercializado e consumido quase que exclusivamente na forma in natura o que leva a um ndice elevado de perda na ps11

colheita. Esse fato evidencia a necessidade de processos simples e baratos que possam oferecer para os produtores aproveitarem melhor o fruto da jaqueira. (MELO et al., 2006). De acordo com Franco (1995), 100 g de caroo de jaca, possui 136 calorias, 30 g de glicdios, 3,50 g de protenas, 0,30 g de lipdios, 50 mg de clcio, 80 mg de fsforo e 8,00 mg de ferro. A farinha de caroo de jaca pode ser aproveitada na alimentao humana como ingrediente de multimisturas, devido sua riqueza em protenas e ferro (SILVEIRA, 2000). 3.5. Delineamentos Experimentais (FATORIAL FRACIONADO/DCCR/MSR) Para os autores NETO (2003) e MONTGOMERY (2005), o desenvolvimento de algumas pesquisas experimentais (trabalho de pouca ou nenhuma informao sobre o sistema em estudo at a otimizao das variveis do processo) pode ser alcanado atravs de sucessivas aplicaes de tcnicas especficas de estatstica. Essas tcnicas so: planejamento fatorial fracionrio (PFF), delineamento fatorial (DF), pelo arranjo quadrados, e da metodologia de superfcie de resposta (MSR). A escolha da melhor estratgia do planejamento experimental depende principalmente do nmero de variveis independentes ou fatores que se deseja estudar e do conhecimento inicial que se tem sobre o processo. Quando o nmero de fatores muito grande, mais conveniente escolher um primeiro fatorial fracionado que reduz o nmero de ensaios. Desta forma, todo o tempo e recurso para o desenvolvimento da pesquisa no so gastos diretamente num primeiro planejamento. Isto porque muitas vezes se est longe das condies timas. Portanto, a anlise dos efeitos como informao inicial pode dirigir sequencialmente o pesquisado, atravs de novos fatoriais fracionados at se chegar ao completo, atingindo-se as condies desejadas. A relao custo x benefcio muito importante nesta escolha. Ela o diferencial para planejar criteriosamente e se chegar s condies de otimizao mais rapidamente, a um menor custo e com o suporte estatstico na discusso dos resultados (RODRIGUES e IEMMA, 2005). Segundo MONTGOMERY (2003), a finalidade do planejamento experimental visa determinar os efeitos dos fatores ou variveis do processo e da interao entre eles sobre o resultado do experimento fatorial. As razes para a opinio de Montgomery so baseadas no fato de que, em geral, apenas dois nveis de fatores so usados neste tipo de delineamento: um menor fator representado pelo sinal (-) e um superior, representado pelo sinal (+), e todas as combinaes possveis destes dois nveis so investigados. O nmero de experimentos necessrios em um delineamento fatorial com dois nveis dada por 2k, onde 2 e k representam os nveis e nmero de variveis, respectivamente. No entanto, quando o nmero de fatores a 12

serem investigados alto, o delineamento fatorial pode ser fracionado, a fim de reduzir o nmero de experimentos. Com a reduo de experimentos algumas informaes sobre os efeitos da interao entre as variveis sobre o resultado do experimento so afetadas, mas os principais efeitos das variveis isoladas no so (TEOFILO et al., 2006). A prxima etapa aps verificar quais parmetros avaliados teve maior efeito sobre a resposta em estudo, seria a utilizao de outra ferramenta estatstica muito eficiente para maioria dos casos estudados, o Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR), que segundo RODRIGUES e IEMMA (2005), um Delineamento Composto Central que tem pontos axiais assim definidos. De modo geral, num DCCR com 2 nveis originais, tem-se 2k pontos fatoriais + 2 x K pontos axiais + um nmero arbitrrio de pontos centrais. O Delineamento Composto Central uma alternativa que possibilita a explorao de todo o espao amostral com um menor nmero de ensaios. No entanto necessrio pressupor que o estudo da superfcie de resposta ocorre em intervalos dos fatores de interesse com provvel ajuste de um modelo de 1 grau. Este tipo de Delineamento possui um valor de a que particulariza esse delineamento, pois o mesmo pode ser escolhido para tornar os coeficientes de regresso ortogonais, ou para minimizar o desvio que resulta ser a forma verdadeira da superfcie de resposta, se esta no for quadrtica, ou para dar ao delineamento a propriedade de ser rotacional (DCCR), isto , todos os pontos so eqidistantes do ponto central (MATEUS et al., 2001). Outra ferramenta muito utilizada para otimizao de processos a Metodologia de Superfcie de Resposta (MSR). Essa metodologia foi desenvolvida por Box e Wilson em 1951 (BOX, 1978) e aplicada, primeiramente, no campo da Engenharia Qumica. Atualmente, sua aplicao envolve as cincias qumicas, fsicas, clnicas e engenharias. De forma geral, consiste em tcnicas de anlise e planejamento de experimentos empregados na modelagem matemtica de respostas. Ou seja, procura-se identificar o relacionamento que existe entre os fatores controlveis (variveis independentes) e as respostas (variveis dependentes) do sistema analisado (MYERS, 1995). Segundo GUNAWAN (2005) esse um mtodo estatstico eficaz para a otimizao de variveis empregando a tcnica para se obter o ponto timo, sendo amplamente utilizada para otimizar os parmetros de processos, especialmente determinar as condies timas para as investigaes qumicas e maximizar os rendimentos da reaes. A Metodologia de Superfcie de Resposta (MSR) pode ser entendida como uma combinao de tcnicas de planejamento de experimentos, anlise de regresso e mtodos de otimizao. Essa metodologia compreende um grupo de tcnicas matemticas e estatsticas para a construo e explorao de modelos empricos, usados para desenvolver, melhorar e otimizar 13

processos. Tem importantes aplicaes na formulao e desenvolvimento de novos produtos. Atravs de um cuidadoso planejamento e anlise de experimentos, a MSR busca relacionar uma resposta, ou varivel de sada, aos nveis dos fatores de entrada. Em geral a varivel resposta representada por Y, e funo de variveis independentes ou fatores X1, X2, ..., Xk (MONTGOMERY, 2003). Quando se tem vrios fatores a serem avaliados, a Metodologia de Superfcie de resposta torna-se uma ferramenta para otimizar a eficincia do processo, sendo essa uma tcnica muito til para esta finalidade, pois fornece modelos estatsticos que ajudam na compreenso das interaes entre os parmetros que foram otimizados (HAMEED et al., 2009). As vantagens da utilizao MSR foram relatadas para incluir a reduo do nmero de ensaios experimentais, necessrios para avaliar vrios parmetros e da capacidade da ferramenta estatstica para identificar interaes. Alm de analisar os efeitos das variveis independentes, a metodologia experimental tambm gera um modelo matemtico que descreve o processo global (BATISTA, 1999). Os planejamentos experimentais discutidos vm sendo muito utilizados em experimentos de uma forma geral. ZHANG e colaboradores (2009) utilizaram o fatorial fracionado com o objetivo de elaborar um modelo matemtico para a sntese de ZSM-5 e obter a sua condio de sntese mais adequada. SUN e colaboradores (2008) utilizaram a Metodologia de Superfcie de Resposta para otimizar as condies de extrao da protena da farinha de trigo (DWGP) utilizando micelas reversas, variando os efeitos da concentrao de surfactantes, tempo de extrao, concentrao de protena, temperatura, concentrao de cloreto de potssio (KCL) e pH. 3.6. Microcalorimetria de Titulao Isotrmica (ITC) A entalpia associada mistura e reao de duas solues de composies diferentes pode ser medida pela microcalorimetria de titulao isotrmica. Dessa forma, os processos fsicos e qumicos podem ser acompanhados pela liberao ou absoro de energia. O calormetro composto, basicamente, de uma cela de referncia e uma cela de amostra que contm a mesma soluo. Pequenas alquotas de um determinado composto so injetadas atravs de uma seringa cela de amostra e, a energia produzida ou consumida medida em funo do tempo. (HEERKLOTZ e SEELIG, 2000). Os microcalormetros de titulao isotrmica podem ser chamados de microcalormetros de conduo ou microcalormetros de fluxo de energia. Neste tipo de equipamento, a energia liberada (ou absorvida) na cela de reao para um trocador de calor que fica sua volta, 14

geralmente um bloco de alumnio. O fluxo de energia registrado pelas termopilhas posicionadas entre a amostra e o trocador de calor. A diferena de temperatura entre a amostra e o trocador de calor ir gerar um potencial eltrico sobre a termopilha. A mistura das solues realizada atravs de titulaes de uma determinada soluo presente na seringa, a um volume fixo, em L, com injees em tempos determinados, em outra soluo presente na cela de amostra dentro do microcalormetro, todo esse processo realizado sob agitao constante (SILVA, 2002) Cada medida de fluxo de energia gera um pico que representa a energia associada injeo de um pequeno volume da soluo da seringa na soluo presente na clula de amostra. medida que a soluo presente na clula de amostra vai atingindo a saturao, o sinal de energia liberada vai diminuindo at atingir a saturao completa. Integrando a rea de cada pico (energia liberada ao longo de um intervalo de tempo) obtm-se a medida do H (em unidades de joules por mol do componente A) resultante do processo de mistura a ser estudado. Com posse dessa informao chega-se aos outros parmetros termodinmicos desejados no estudo em questo (GOMES, 2009). 4. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS AIRES-BARROS, M.R., CABRAL, J.M.S. Selective separation and purification of two lipases from Chromobacterium viscosum using AOT reversed micelles. Biotechnologv and Bioengineering, v.38, p.1302-1307, 1991. BANAT, I. M. Biosurfactants, more in demand than ever. Biofutur, vol.44, p. 198, 2000. BATISTA, L. Recovery of proteins from fish waste products by alkaline extaction. Eur. Food res. Technol., vol. 210, pp. 85-89, 1999. BHAIRI, S. M. Detergents A Guide to the Properties and Uses of Detergents in Biological Systems. Calbiochem-Novabiochem Corporation. La Jolla, 2001. BHAIRI, S. M., MOHAN, C. Detergents A Guide to the Properties and Uses of Detergents in Biological Systems. Calbiochem-Novabiochem Corporation. La Jolla, 2007. BORDI, F., CAMETTI, C. Water doplet charging process in water-in-oil microemulsions: an electrical conductivity study. Colloid and Polimer Science, n.276, p. 1044-1049, 1998 BOX, G. E. P. Statistics for experimenters: an introduction to design, data analysis, and model building. New York: John Wiley, p. 653, 1978. CHEVALLET, M., SABTONI, V., POINAS, A., ROUQUI, D., FUCHS, A., KIEFFER, S., ROSSIGNOL, M., LUNARDI, J., GARIN J., RABILLOUD, T. New zwitterionic detergents improve the analysis of membrane proteins by two-dimensional electrophoresis. Electrophoresis 19: 1901-1909, 1998. CHOWDHURY, F. A.; RAMAN, A.; MIAN, A. J. Distribution of free sugars and fatty acids in jackfruit (Artocarpus heterophyllus). Food Chemistry, v.60, n.1, p.25-28, 1997. 15

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CAPTULO 1 - OTIMIZAO DO PROCESSO DE EXTRAO DA PROTENA DA FARINHA DA SEMENTE DE JACA UTILIZANDO SISTEMA MICELAR REVERSO COMPOSTO POR SDS/H2O/BUTANOL. RESUMO Neste trabalho foi avaliada a extrao da protena da farinha da semente de jaca por micelas reversas. O sistema micelar reverso utilizado foi formado por dodecil sulfato de sdio (SDS) como surfactante, butanol como solvente orgnico, e gua. Os efeitos do tempo de agitao, temperatura, relao molar H2O/SDS, % Butanol e massa de farinha foram testados no sistema em batelada. Com base no modelo de regresso linear ajustado, somente para fator % Butanol, foi obtido o timo de extrao de 41,16 %, e baseado na anlise de metodologia de superfcie de resposta (MSR), para temperatura de 25C, tempo de agitao de 120 minutos, massa de farinha de 100 mg, relao H2O/SDS de 50, possvel obter o melhor rendimento de extrao. Os resultados experimentais demonstraram que possvel alcanar rendimentos de extrao de 79,00 %, sendo esse um mtodo de extrao eficiente. Palavras chave: Micelas reversas; protena da farinha de semente de jaca; extrao; docecil sulfato de sdio (SDS). ABSTRACT In this work it was evaluated the extraction of protein from flour of jackfruit seeds by reverse micelles. The reverse micellar system used was composed of sodium dodecyl sulfate (SDS) as surfactant, butanol as solvent, and water. The effects of stirring time, temperature, molar ratio H2O/SDS, % butanol and mass of flour were tested in batch systems. Based on the adjusted linear regression model, only the factor % butanol presented an optimum extraction condition, which was 41.16%. Based on the analysis of the surface response, at 25 C, shaking time of 120 minutes, mass of flour of 100 mg, ratio H2O/SDS of 50, it is possible to obtain the best extraction yield. The experimental results showed that it is possible to achieve extraction yields of 79,00 %, which was an efficient method of extraction. Keywords: reversed micelles; protein of flour seed of jack fruit ; extraction; docecil sodium sulfate (SDS). 1. INTRODUO Experimentos visando utilizao de resduos das indstrias de alimentos como fonte alternativa de protena vm sendo conduzidos com freqncia na tentativa de suprir as 20

necessidades nutricionais dirias com fontes de protenas eficientes e economicamente viveis populao em geral. A substituio de alimentos proticos de origem animal por alimentos proticos de origem vegetal vem sendo realizada na tentativa de utilizao de novas fontes alimentares com boas propriedades tecnolgicas e nutritivas (NUNES et al., 2003). As sementes da jaca, subprodutos do fruto (em mdia 15,00 % a 25,00 % do fruto), so muito usadas na alimentao humana, podendo ser cozidas ou torradas em forno ou assadas brasa e alm de serem nutritivas, so bastante saborosas (SILVA, 2007). A farinha da semente um resduo da fruta da jaca que pode ser considerada uma fonte alternativa de protenas, carboidratos e fibras. Uma alternativa em potencial como mtodo de extrao da protena da semente de jaca o uso de micelas reversas. As micelas reversas so agregadas de molculas de surfactantes, de tamanhos nanomtricos dispersos em solventes orgnicos, sendo estes termodinamicamente estveis, produzindo sistemas opticamente transparentes. A relevncia biotecnolgica dessas estruturas resulta da sua capacidade de solubilizar gua e molculas hidroflicas, como protenas, em seus ncleos polares (SUN et al., 2008). Existem vrios grupos de pesquisa que esto envolvidos em estudar a extrao de protenas por micelas reversas (ANDREWS e HAYWOOD, 1994; MATZKE et al., 1992). Sun e colaboradores (2008) estudaram a utilizao de micelas reversas contendo AOT (bis-2-etilhexil sulfosuccinato de sdio) como surfactante e o isooctano como solvente orgnico, para a extrao de protenas de germe de trigo desengordurado, utilizando a metodologia de superfcie de resposta para otimizar o processo de extrao. Em geral, os autores verificaram que o mtodo de extrao de protenas por micelas reversas tem as seguintes vantagens: os surfactantes e os solventes orgnicos podem ser usados repetidamente atravs da recuperao dos mesmos, diminuindo os custos de extrao; o ncleo polar das micelas reversas mantm as caractersticas de atividade das protenas dissolvidas. Considerando que a semente de jaca um resduo no utilizado pela indstria de alimentos, e que estudos de extrao de protenas da semente de jaca utilizando micelas reversas no foram relatados anteriormente, esse trabalho teve como objetivo desenvolver um mtodo alternativo de extrao de protena da farinha da semente de jaca (FSJ) utilizando micelas reversas, tendo o dodecil sulfato de sdio (SDS) como surfactante e o butanol como solvente orgnico. Com o intuito de otimizar o processo de extrao da protena, foi utilizado inicialmente um fatorial fracionado para avaliar os efeitos da % Butanol, tempo de agitao, temperatura, relao H2O/SDS, e massa de farinha nos sistemas em batelada. Em seguida, foi utilizado o Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR) para testar os fatores que foram significativos ao nvel de 5 %, no fatorial fracionado. Posteriormente, foi aplicada a Metodologia 21

de Superfcie de Resposta (MSR) para otimizar as condies de extrao da protena da FSJ a partir do sistema micelar reverso. 2. MATERIAIS E MTODOS 2.1. Materiais e reagentes O presente trabalho foi desenvolvido nos Laboratrios de Engenharia de Processos da Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia UESB, Itapetinga Ba, e no laboratrio de Engenharia de Processos do Departamento de Tecnologia de Alimentos (DTA) da Universidade Federal de Viosa - UFV, Viosa-MG. As sementes para o preparo da farinha foram obtidas de jacas comercializadas na cidade de Itapetinga-Ba e regio. O dodecil sulfato de sdio (SDS) e o 1-Butanol foram obtidos da Vetec Qumica Fina (Rio de Janeiro Brasil). Todos os reagentes utilizados no experimento foram de grau analtico. 2.2. Preparo da Farinha da Semente de Jaca As sementes foram lavadas com gua, para a remoo de fibras, trituradas com gua e filtradas varias vezes para retirada do amido, secas a 50 C (em secador tipo bandeja) durante 24 h, em seguida trituradas em moinho de martelos, posteriormente peneiradas com peneiras de 20 Mesh, para obter a granulometria desejada. Aps essa fase, o produto foi armazenado em frascos plsticos a temperatura ambiente. 2.3. Anlise Qumica 2.3.1. Umidade A determinao de umidade foi realizada por mtodo gravimtrico em estufa regulada a 105 C, at peso constante, conforme as Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz (1985). 2.3.2. Protena O teor de protena total foi determinado pelo mtodo de Semi-micro Kjeldahl, conforme as Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz (1985). 2.3.3. Cinzas A determinao de cinzas foi realizada por mtodo gravimtrico em forno tipo mufla, at peso constante, conforme as Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz (1985).

22

2.3.4. Gordura O teor de lipdeos totais foi determinado pelo mtodo de extrato etreo, conforme as Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz (1985). 2.4. Preparao dos sistemas micelar reverso e extrao das protenas Os sistemas de micelas reversas foram formados por SDS, butanol e gua. Para o preparo das solues micelares, cada reagente utilizado foi pesado separadamente. Em seguida, o SDS foi misturado com o butanol e ento adicionou-se a quantidade de gua estabelecida para cada sistema. As variveis estudadas no processo de extrao foram relao molar H2O/SDS, % Butanol, temperatura, tempo e massa de farinha, para o fatorial fracionado, e relao molar H2O/SDS, % Butanol e massa de farinha, para o Delineamento Composto Central Rotacional. Ao fazer os sistemas contendo as micelas reversas (GALLEGO et al., 2004), os valores das variveis independentes foram combinados de acordo com cada delineamento ao acaso. Todos os experimentos de extrao foram conduzidos em tubos Falcon de 40 ml, com extrao direta da farinha. Os sistemas foram agitados em agitador de tubos tipo Vortex a 40 rpm durante os intervalos de tempo e temperaturas propostas. Para o controle da temperatura, o agitador foi colocado em Estufa B.O.D (Tecnal TE-184, Brasil). O resduo foi separado por centrifugao, em Centrfuga (5804, EPPENDORF, Alemanha) a 10000 rpm por 15 minutos. 2.5. Quantificao de protenas No final da extrao, a concentrao de protena foi determinada com uso do Espectrofotmetro (Biomate 3, Thermo Scientific, USA) 280 nm em cubeta de Quartzo. Para estimar a quantidade de protena em cada amostra determinada, determinou-se a quantidade de protena presente por massa de farinha pelo mtodo Semi-micro Kjeldahl. Utilizando a informao da porcentagem de protena presente na farinha, e da quantidade de protena presente na amostra analisada no espectrofotmetro com o auxlio de uma curva padro, feita previamente utilizando o BSA (Albumina do Soro Bovino), foi obtido o rendimento de extrao (R.E) utilizando a equao 1.

R.E.(%)

MPM

MF % Pr ot.F

100

(1)

Onde: MPM a massa de protena na micela reversa, MF (mg) a massa de farinha colocada em cada batelada e % Prot.F a quantidade de protena presente na farinha. 2.6. Planejamento Experimental Primeiramente, um planejamento fatorial fracionado 25-1 adicionados a 4 repeties no ponto central foi implementado a fim de avaliar a influncia da relao molar H2O/SDS, % 23

Butanol, temperatura, tempo e massa de farinha na porcentagem de extrao da protena da farinha (varivel dependente) por micelas reversas. Os valores dos nveis das variveis estudadas esto apresentados na Tabela 1. Os resultados obtidos nos experimentos foram submetidos anlise de varincia (ANOVA) e os efeitos foram considerados significativos para p < 0,02. A partir dos resultados da ANOVA para os experimentos do fatorial fracionado, um primeiro delineamento composto central rotacional (DCCR) foi usado para otimizar ou verificar uma tendncia de otimizao do processo de extrao da protena da farinha.

Tabela 1. Variveis e nveis do delineamento fatorial fracionado (25-1) Nvel Varivel -1 0 H2O/SDS %Butanol (%m/m) Temperatura (C) Tempo de agitao (min) Massa de farinha (mg) 32,20 45,00 15 30 200 36,50 62,50 25 180 300

1 42,70 80,00 35 330 400

Os efeitos significativos foram estudados em dois nveis, com quatro repeties no ponto central, que foram utilizados para avaliar o erro experimental e da adequao do modelo proposto. Para cada uma das variveis independentes estudadas, maior valor (valor codificado: +1) e menor valor (valor codificado: -1), para os pontos axiais maior valor (valor codificado: +1,68) e menor valor (valor codificado:-1,68), os pontos definidos foram selecionados de acordo com os resultados obtidos a partir de planejamento fatorial fracionado. Com um modelo polinomial de segunda ordem (Eq. 2) foram ajustados os dados experimentais e os coeficientes de regresso foram obtidos por regresso linear mltipla

Xi

ii

X i2

ij

Xi X j

(2)

A partir dos resultados deste DCCR, foi instalado um novo DCCR com novos valores para as variveis a fim de otimizar o processo de extrao. As variveis utilizadas neste novo 24

delineamento foram as mesmas do primeiro DCCR, porm com valores que tendiam para a regio de timo. Nos dois delineamentos Composto Central Rotacional, os resultados foram analisados estatisticamente por meio de anlises de varincia e de regresso, considerando-se a falta de ajuste, a significncia dos parmetros e o coeficiente de regresso. Por meio da anlise da metodologia de superfcie de resposta, determinaram-se as melhores condies de extrao das protenas nos intervalos de condies experimentais utilizados. Todas as anlises estatsticas necessrias foram realizadas no pacote estatstico Statystical Analysis System verso 9.0, procedimento RSREG (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA), licenciado pela Universidade Federal de Viosa. 3. RESULTADOS E DISCUSSES 3.1. Composio centesimal da farinha Os valores encontrados para a composio centesimal da farinha do caroo de jaca so apresentados na Tabela 2. Tabela 2. Composio qumica da farinha da semente de jaca (Artocarpus integrifilia L.). Anlises Valores (%) Desvio Umidade Protenas Cinzas Lipdeos 9,40% 12,00% 1,53% 8,98% 1,34 0,02 0,13 0,32

O teor de umidade encontrado na farinha da semente de jaca (Artocarpus integriflia L.) de 9,40 ( 1,34), inferior aos 15,00% estabelecido pela legislao em vigor (Brasil, 1978) para farinhas vegetais. Cruz et. al. (2007) estudando a obteno da farinha da semente de jaca por diferentes mtodos encontraram um teor de umidade de 13,16% e Silveira (2000), que analisando farinhas de caroo de jaca das variedades dura e mole, obteve como resultados, 12,67% e 9,76% respectivamente. Essa diferena no teor de umidade se deve ao fato do processo de obteno da farinha ser diferente entre os trabalhos comparados. O teor de protena da farinha da semente de jaca encontrado foi de 12,00 % ( 0,02), e o teor de lipdeos (8,89 %). O teor de protena foi superior ao encontrado por Cruz et. al., 2007, que obtiveram um percentual de 10,78 % e do encontrado por Silveira (2000), que avaliando os teores de protena contidos nas farinhas de caroo de jaca das variedades duros e moles, observou que as mesmas continham 5,05 % e 5,14 % respectivamente. Variao essa, que em parte pode ser explicada pelas diferenas tecnolgicas no preparo das amostras. 25

Para as cinzas, a farinha apresentou um teor de 1,53 % ( 0,13), bem abaixo do teor mximo de 4,00% permitido para a farinha de vegetais pela legislao brasileira. E tambm menor que o teor de 2,37 encontrado por Cruz et. al (2007) e Silveira (2000), que obtiveram teores de cinzas nas farinhas de caroo de jaca das variedades dura e mole de 4,80 % e 3,57 % respectivamente. 3.2. Efeito da relao molar H2O/SDS, % Butanol, temperatura, tempo e massa de farinha na extrao das protenas da farinha de semente de jaca 3.2.1. Avaliao do fatorial fracionado Com o intuito de avaliar quais fatores tiveram efeito significativo no processo de extrao da protena do farelo de jaca utilizando micelas reversas de SDS, gua e Butanol, foi feita uma anlise de varincia ANOVA e uma anlise de estimativa dos parmetros (Tabela 3) para o fatorial fracionado 25-1. Tabela 3. Estimativa dos parmetros para o rendimento de extrao usando fatorial 25-1 Variveis G.L Estimativa Valor t Pr > t %Butanol Temperatura Tempo H2O/SDS M.F. 1 1 1 1 1 -10.5504 1.9397 2.2666 5.4802 -6.0362 -3.52 0.65 0.76 1.83 -2.02 0.0037 0.5283 0.4624 0.0901 0.0649

Observando os valores de probabilidade obtidos na Tabela 3, observa-se que somente a % Butanol, a relao molar H2O/SDS e a massa de farinha (M.F.) tiveram efeito significativo sobre a extrao de protena a p < 0,1 pelo teste t. 3.2.2. Ajuste de modelos (Resultados dos DCCR) Com as informaes obtidas a partir do fatorial fracionado, utilizou-se duas vezes o Delineamento Central Composto Rotacional (DCCR) com os fatores que tiveram efeitos significativos no processo de extrao da protena da FSJ para tentar otimizar os valores das variveis significativas, relao molar H2O/SDS, % Butanol e massa de farinha, no processo de extrao. Os fatores que no tiveram efeito, a temperatura e tempo, foram fixos no DCCR em 25 C e 120 minutos, respectivamente. Os resultados de extrao nesse primeiro DCCR (Tabela 4) demonstram que ao fixar os outros fatores, o rendimento de extrao diminui com o aumento da % Butanol utilizado no sistema micelar. 26

Percebe-se tambm que quando se fixa os outros fatores e aumenta a relao H2O/SDS o rendimento de extrao tende a aumentar. Ao manter a % Butanol e a relao H2O/SDS, e aumentar a massa de farinha (MF), o rendimento de extrao tende a diminuir. Tabela 4. Dados do 1 DCCR feito com os fatores que tiveram efeitos no fatorial fracionado. Ensaio 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 %But 45,00 80,00 45,00 80,00 45,00 80,00 45,00 80,00 33,10 91,90 62,50 62,50 62,50 62,50 62,50 62,50 62,50 62,50 62,50 62,50 H2O/SDS 30,20 30,20 46,70 46,70 30,20 30,20 46,70 46,70 38,45 38,45 24,59 52,31 38,45 38,45 38,45 38,45 38,45 38,45 38,45 38,45 MF 200 200 200 200 400 400 400 400 300 300 300 300 132 468 300 300 300 300 300 300 %But -1 1 -1 1 -1 1 -1 1 -1,68 1,68 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 H2O/SDS -1 -1 1 1 -1 -1 1 1 0 0 -1,68 1,68 0 0 0 0 0 0 0 0 MF -1 -1 -1 -1 1 1 1 1 0 0 0 0 -1,68 1,68 0 0 0 0 0 0 % Extrao 63,92 37,61 81,65 42,77 36,36 38,64 46,43 41,48 46,78 14,07 47,23 47,28 20,30 25,17 23,17 24,08 24,06 25,39 24,78 23,80

Com base nessas informaes, fez-se um novo DCCR (Tabela 5), diminuindo a % Butanol, aumentando a relao H2O/SDS e diminuindo a MF, sempre buscando valores que ficassem prximos de rendimentos mais altos. Os resultados obtidos experimentalmente do 2 DCCR foram submetidos Anlise de Varincia e Anlise de Regresso Linear Mltipla, a fim de se verificar a influncia dos fatores estudados sobre o rendimento de extrao da protena da farinha de semente de jaca por meio de micelas reversas. A equao para a eficincia da extrao da protena da farinha (Y) encontrada foi:

54,9200 7,2124 X 1 11,6281X 2 10,2147 X 3 14,0861X 12

(3)

Em que X1 a %Butanol, X2 a relao H2O/SDS e X3 a Massa de Farinha (MF).

27

Tabela 5. Dados do 2 DCCR ajustando os parmetros a valores que tiveram bons rendimentos de extrao no 1 DCCR. Ensaio 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 %But 30,00 60,00 30,00 60,00 30,00 60,00 30,00 60,00 19,80 70,20 45,00 45,00 45,00 45,00 45,00 45,00 45,00 45,00 45,00 45,00 H2O/SDS 35,00 35,00 45,00 45,00 35,00 35,00 45,00 45,00 40,00 40,00 31,60 48,40 40,00 40,00 40,00 40,00 40,00 40,00 40,00 40,00 MF 150 150 150 150 300 300 300 300 225 225 225 225 99 351 225 225 225 225 225 225 %But -1 1 -1 1 -1 1 -1 1 -1,68 1,68 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 H2O/SDS -1 -1 1 1 -1 -1 1 1 0 0 -1,68 1,68 0 0 0 0 0 0 0 0 MF -1 -1 -1 -1 1 1 1 1 0 0 0 0 -1,68 1,68 0 0 0 0 0 0 % Extrao 32,05 35,75 47,91 49,39 19,64 29,18 49,83 49,52 29,19 3,76 64,97 79,43 54,72 21,41 71,63 32,04 33,07 32,46 32,01 50,26

A significncia estatstica da equao (3) foi verificada pelo teste F, e os resultados da anlise de varincia (ANOVA) encontram-se na Tabela 6. Pelo fato do valor F do modelo ser um valor de probabilidade baixa (p=0,0035), verifica-se que o modelo foi altamente significativo. Tabela 6. ANOVA para o modelo de superfcie de resposta (CV= 36,48% e R2=62,67%) FV Modelo Falta de Ajuste Erro Total GL 4 10 15 19 SQ 6879,838 2875,677 4098,390 10078,000 QM 1719,959 287,567 273,226 F Cal. 6,30 1,18 p<0,005 0,0035 0,4552

O teste para a falta de ajuste, associado com os erros dos pontos centrais, no foi significativo nesse caso (p <0,05). A partir da anlise de regresso realizada (Tabela 7), para os dados experimentais do 2 DCCR, pode ser observado que de acordo com o teste t, para a significncia dos parmetros,os fatores relao molar e massa de farinha tiveram o efeito linear significativo no rendimento de extrao da protena FSJ, enquanto a % Butanol foi significativa no efeito quadrtico. As estimativas das variveis independentes e os correspondentes valores p sugeriram que mesmo X1 (% Butanol) no tendo um efeito significativo sobre Y (R.E da protena FSJ) seu termo quadrtico teve efeito significativo sobre a resposta Y. Segundo 28

Gallego e colaboradores (2004), %Butanol um fator fundamental na formao das micelas reversas, podendo influenciar a concentrao de micelas no meio. O coeficiente positivo para X2 revelou um efeito linear para aumentar a resposta Y, enquanto os coeficientes negativos para X1 e X3 mostraram um efeito linear de diminuio da resposta Y, o coeficiente X11 mostrou um o efeito quadrtico de diminuio da resposta Y. Neste trabalho X1, X2, X3 e X11 foram os fatores significativos do modelo. Tabela 7. Significncia dos coeficientes de regresso para a resposta (Y). Termo do modelo X0 X1 X2 X3 X11 Estimativa 54,9200 -7,2124 11,6281 -10,2147 -124,0861 Erro padro 4,7284 4,4748 4,4748 4,4748 4,3226 Valor t 11,61 -1,61 2,60 -2,28 -3,26 Valor p <,0001 0,1278 0,0202 0,0375 0,0053

O resultado da ANOVA para o modelo completo pode ser visualizado em um grfico de Pareto (Figura 1), em que os valores absolutos da amplitude e do efeito estimado padronizado (efeito da estimativa dividido pelo erro padro) de cada fator foram plotados em ordem decrescente em comparao com um mnimo fator significativo com 95% de confiana (p = 0,05), representada pela linha vertical.

Figura 1: Grfico de Pareto dos efeitos padronizados das variveis %Butanol (X1), relao
H2O/SDS (X2), e Massa de Farinha (X3) sobre o rendimento de extrao da protena FSJ. O grfico de Pareto, sobre o rendimento de extrao da protena da FSJ (Figura 1), mostra que a relao quadrtica da %Butanol teve maior efeito sobre o rendimento. Alm disso, a relao molar H2O/SDS e a Massa de Farinha (MF), sem suas interaes, tambm tm um 29

importante efeito sobre o rendimento de extrao, uma vez que esses fatores esto relacionados quantidade de micelas reversas no meio e quantidade de protena dissolvida nas micelas reversas. 3.2.3. Efeito das variveis independentes na varivel resposta Fazendo uso da Metodologia de Superfcie de Resposta (MSR), as relaes entre os fatores e a resposta podem mais bem compreendidas, ficando visvel o comportamento de cada efeito no rendimento do processo de extrao. No grfico de MSR da Figura 2, fixaram-se os valores de % Butanol, variando somente a relao H2O/SDS e a Massa de Farinha, sendo observado que o aumento da quantidade de gua no sistema micelar reverso avaliado leva a um aumento do rendimento de extrao (R.E) da protena da FSJ. O aumento da massa de farinha no melhora o rendimento da extrao, no sendo necessrio colocar uma quantidade muito grande de farinha para que o rendimento de extrao seja elevado.

Figura 2: Grfico de Superficie de Resposta para os efeitos da relao H2O/SDS (X2) e da MF

(X3) sobre o rendimento de extrao da protena FSJ. A partir desse grfico, percebe-se que o timo de extrao, com a % Butanol fixa, tende a valores da relao H2O/SDS por volta de 50, e que a MF, nas condies estudadas, pode estar por volta de 100 mg, para que se aproxime do timo de extrao da protena da FSJ. O aumento da extrao de protenas por micelas reversas com o aumento da relao H2O/SDS a valores prximos de 50 ocorre devido necessidade de se ter um equilbrio entre a quantidade de gua e de surfactante para a formao de micelas-reversas nesse tipo de sistema. Segundo Gallego e colaboradores (2004), a relao H2O/SDS deve ser de cerca de 42.70, de acordo com esses 30

autores este valor foi encontrado por Jobe e colaboradores (1989) em estudos do diagrama de fases de sistemas micelares reversos composto por SDS, Butanol e gua. Para avaliar a influncia dos fatores % Butanol (X1) e MF (X3) no rendimento de extrao, foi feito um grfico de Superfcie de Resposta (Figura 3), fixando a relao H2O/SDS. possvel assegurar atravs da anlise do grfico, que o rendimento de extrao se aproxima do timo quando a % Butanol est em torno de 40,00 % para os sistemas estudados, e que em uma grande faixa de valores de % Butanol, de 20,00 a 60,00 %, o rendimento de extrao varia de 70,00 a 95,00 % com o ponto timo de extrao por volta de 40,00 % de Butanol. Com relao aos valores de MF, o ponto de timo RE est prximo de 100 mg de farinha. Vale salientar que de acordo com o grfico anterior (Figura 2), o rendimento de extrao diminui quando se aumenta muito a massa de farinha nas condies estudadas. O Butanol atua no sistema micelar reverso estudado, como solvente orgnico, sendo assim, caso a % Butanol se encontre em valores acima do timo (40,00 %), as quantidades de surfactante e gua presentes no sistema tendem a diminuir, consequentemente a quantidade de micelas reversas capazes de extrair as protenas da FSJ tambm diminui, diminuindo o rendimento de extrao.

Figura 3: Grfico de Superfcie de Resposta para os efeitos da relao %Butanol (X1) e da MF

(X3) sobre o rendimento de extrao da protena FSJ. Para avaliar a influncia da % Butanol e da relao H2O/SDS foi fixado o valor de massa de farinha, no grfico de superfcie de resposta (Figura 3), observando-se que o rendimento timo de extrao para a % Butanol continuou prximo de 40,00 %, como discutido anteriormente, e que para a relao de H2O/SDS o timo ficou prximo de 50, confirmando os resultados obtidos no grfico da Figura1. 31

Figura 4: Grfico de Superfcie de Resposta para os efeitos da relao %Butanol (X1) e da

relao H2O/SDS (X3) sobre o rendimento de extrao da protena FSJ. Com os dados dos grficos de Superfcie de Resposta, tm-se informaes da tendncia que evidencia a regio do timo para os fatores MF e relao H2O/SDS, como somente a % Butanol teve efeito quadrtico, esse o nico fator para o qual se obtm o valor timo para o processo de extrao da protena FSJ, utilizando micelas reversas feitas a partir do sistema ternrio contendo SDS, gua e Butanol. O valor de timo para a % Butanol foi obtido pela derivada do modelo com os valores no codificados (Equao 4)

112,59738 5,15358 X 1 2,32562 X 2

0,13620 X 3 0,06260 X 12

(4)

Derivando a Equao 4 em relao a X1, obtm-se a equao 5

dY dX 1

5,1536 0,1252 X 1
dY dX 1

(5)

Fazendo

0 obtm-se o timo da equao, ou seja, a % Butanol em que o

41,16% .

rendimento de extrao mximo, sendo X 1

Portanto, as melhores condies de extrao da protena da FSJ predita pela MSR so obtidas quando se utiliza 41,16 % de butanol, 100 mg de MF e a relao H2O/SDS igual a 50. 4. CONCLUSES Os resultados experimentais confirmaram a viabilidade da extrao da protena da farinha de semente de jaca utilizando sistemas micelares reversos constitudos por Butanol, SDS e gua. Esse mtodo de extrao considerado vantajoso do ponto de vista do rendimento de 32

extrao que chegou a 79,00 %. Somente para % Butanol foi encontrado o valor que maximiza a extrao, sendo que esse valor foi de 41,16%. Estudos adicionais devem ser realizados para saber se as protenas extradas podem ter suas propriedades alteradas pelos reagentes que fazem parte do sistema e se os custos envolvidos no processo de extrao, utilizando este tipo de sistema micelar reverso, so viveis. 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ANDREWS, B.A., HAYWOOD, K. Effect of pH, ion type and ionic strength on partitioning of proteins in reverse micelles systems. Journal of Chromatography A 668, 5560, 1994. GALLEGO, M. J. P., BRAVO-DIAZ, C., ROMERO, G. E. Fluorimetric determination of structural parameters of BuOH/SDS/H2O reverses micelles. Colloids and Surfaces A: Physicochem Eng. Aspects. n. 249, p. 25-28, 2004. INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz: mtodos qumicos e fsicos de anlises de alimentos. 3 ed. So Paulo-SP: Guanabara Dois, 1985. JOBE, D.J., DUNFORD, H.B., PICKARD, M., HOLWARTH, J.F.Reactions in compartmental liquids,in: W. Knoche (Ed.), Springer Verlag, Helldelberg, Germany, 1989. MATZKE, S.F., CREAGH, A.L., HAYNES, C.A., PRAUSNITZ, J.M., BLANCH, H.W. Mechanisms of protein solubilization in reverse micelles. Biotechnology and Bioengineering 40, 91102, 1992. NUNES, M.C.; BATISTA, P.; RAYMUNDO,A.; ALVES, M.M.; SOUSA, I. Vegetable proteins and milk puddings. Colloid Surface B., v.31, p.21-29, 2003. SAS Institute Inc. Getting Started with the SAS 9,1 ADX Interface for Design of Experiments. Cary, NC: SAS Institute Inc., 2004. SILVA, J. H. V; JORDO FILHO; RIBEIRO, M. L. G; SILVA, E. L; Efeitos da incluso do farelo de sementes de jaqueira Artocarpus heterophyllus Lam.) na rao sobre a produo, pigmentao da gema e umidade fecal em codornas. Revista Cinc. Agrotec., v.31, n.2, 2007. SUN, X. H.; ZHU, K. X.; ZHOU, H. M. Protein extraction from defatted wheat germ by reverse micelles: Optimization of the forward extraction. Journal of Cereal Science, vol. 48, pp. 829835, 2008.

33

CAPTULO 2 ESTUDO CALORIMETRICO DA MICROEMULSO DE LECITINA DE SOJA EM ISOOCTANO E BUTANOL. RESUMO No presente trabalho foi feita uma anlise termodinmica, na qual foi utilizado um microcalormetro de titulao isotrmica para avaliar a variao da entalpia de mistura (
mixH)

da gua na microemulso formada por lecitina de soja, isooctano e butanol. Estas energias foram utilizadas para a determinao das foras motrizes associadas formao de micelas reversas. Foi observado que para a curva de titulao da gua em isooctano puro e em isooctano com lecitina de soja, os valores encontrados para
mixH

foram de -9,46x10-3 kJ/mol e -5,68x10-3

kJ/mol respectivamente, evidenciando que a gua no realiza interaes intermoleculares com estes componentes. Com a titulao da gua no sistema formado por lecitina de soja, isooctano e butanol, foi observado comportamento termodinmico exotrmico com valores de
mixH

variando de +2,17 kJ/mol a -1,63x10-2 kJ/mol, associado ao processo de dissoluo da gua, devido ao fato de estarem formando micelas reversas no sistema avaliado. A diferena no comportamento entre as curvas, de variao de entalpia de mistura da gua, formadas pelos sistemas contendo butanol e lecitina de soja, butanol puro e isooctano com butanol, com o comportamento da curva do sistema contendo lecitina de soja, isooctano e butanol, demonstra claramente que nesse ltimo sistema ocorreu a formao de agregados (micelas reversas). Por fim verificou-se tambm que a lecitina de soja no sofreu nenhum processo de degradao, visto que a energia envolvida no processo de titulao da gua nos sistemas contendo a mesma foi considerada baixa, podendo ser utilizada sem problemas nesse tipo de sistema. Palavras chave: microemulso; lecitina de soja; entalpia de mistura; micelas reversas. ABSTRACT In this work, a thermodynamic analysis was carried out using an isothermal titration calorimeter to measure the change in enthalpy of mixing ( mixH) water in the microemulsion composed by soybean lecithin, butanol and isooctane. Such energy measurements were used on the determination of the driving forces related to the generation of reverse micelles. The
mixH

values found for the titration curves of water in pure isooctane and water in isooctane with lecithin were -9,46x10-3 kJ/mol e -5,68x10-3 kJ/mol, respectively, denoting that water do not perform intermolecular interactions with the components. The titling of water in the system composed by soy lecithin, butanol and isooctane presented an exothermic thermodynamic behavior, which
mixH

values ranging from +2,17 kJ/mol to -1,63x10-2 kJ/mol, related to the

dissolution of water, due to the generation of reverse micelles in the system. The difference in behavior between the curves of change of enthalpy of mixing of water formed by the systems 34

containing butanol and soy lecithin, pure butanol and isooctane with butanol, the yield curve of the system containing soy lecithin, butanol and isooctane, clearly shows that this latter system was the formation of aggregates (reversed micelles). Finally, it was verified that soy lecithin did not suffer any degradation process, since the energy involved in the process of titling water in the systems containing such component was considered low, thus it may be used in this type of system without any problems. Keywords: microemulsion; soy lecithin, enthalpy; reverse micelles. 1. INTRODUO Ao longo das ltimas dcadas, as microemulses tm sido objeto de muitos estudos, principalmente devido a suas potenciais aplicaes em diversos campos, como na preparao de nanopartculas com propriedades catalticas e eletrocatalticas, a separao de substncias solveis em gua e lipdios, vitaminas lipossolveis e outros compostos lipdicos por cromatografia eletrocintica ou cromatografia lquida, recuperao aprimorada de petrleo, extrao lquido-lquido, remoo de contaminantes de superfcies slidas ou capilares do tecido para as indstrias farmacuticas e cosmticas (HELLWEG, 2002). O interesse crescente em microemulses para cosmticos e aplicaes farmacuticas est ligado s suas propriedades fsicas, tais como estabilidade termodinmica, a formao espontnea, aparncia clara, baixa viscosidade e alta capacidade de solubilizao (SCHMIDTS et al. 2009; MALMSTEN, 2002). As microemulses so compostas de gua, leo e surfactante e, algumas vezes, de um lcool como co-surfactante. Estes sistemas tem sido alvo de numerosos estudos durante as ltimas dcadas, principalmente devido ao seu elevado poder dissolvente (PATEL et al., 2006; GULN et al., 2003) O uso do lcool como co-solvente na preparao de microemulses tem uma longa histria. O lcool adicionado a surfactantes inicos para compensar o efeito salting-out, o qual consiste na reduo da interao de protenas com a gua, ocasionada pela solvatao dos ons presentes em solues salinas. Esse efeito evidenciado por uma leve turvao da soluo. No caso de surfactantes no-inico, o papel do lcool tipicamente equilibrar a interao desse surfactante com a gua e o solvente orgnico, diminuindo assim a tenso interfacial entre a fase leo e a fase de gua, a qual muitas vezes elevada pelos surfactantes comerciais (GRADZIELSKI, 1998). O lcool pode modificar a curvatura espontnea da pelcula surfactante quando a sua penetrao na interface suficientemente importante para aumentar a flexibilidade da interface (lcool como co-tensoativo), ou ele pode mudar a polaridade das fases polares e apolares (lcool como co-solvente) (SHEVACHMAN et al., 2004). 35

A Lecitina (fosfatidilcolina) um fosfolipdio natural que faz parte da composio da maioria dos organismos, mais de 50 % da matriz lipdica das membranas biolgicas. O comportamento da lecitina em gua e solventes orgnicos de grande interesse por vrias razes. Desde que a lecitina vista como uma substncia totalmente biocompatvel, que ela amplamente utilizada na vida diria como surfactante, misturas de lecitina, gua e leos so utilizadas na alimentao humana e animal, em medicamentos, cosmticos e produtos farmacuticos (ANGELICO et al., 2004). So encontrados muitos estudos de microemulses de Lecitina de Soja. Angelico e colaboradores tm feito inmeros estudos utilizando microemulses de lecitina de soja em diferentes solventes orgnicos, como isooctano, decano, ciclohexano entre outros, avaliando principalmente o comportamento de fase desses sistemas (ANGELICO et al., 1998, 1999, 2000, 2002, 2004). A investigao do comportamento de fases de microemulses de lecitina de soja em triacilglicerol e gua, em diferentes tipos de lcool, foi feita por Leser e colaboradores (1996), observando que o lcool atua como co-solvente na formao de micelas reversas nos sistemas avaliados. Caboi e colaboradores (2005) avaliaram o uso do Butanol em sistemas compostos por lecitina, gua e leo tripalmitico, observando que a presena do butanol promove a formao de uma vasta fase liquida isotrpica no diagrama de fases desse sistema, demonstrando que o butanol ajudou estabilizar esse sistema atuando como co-surfactante na formao de micelas reversas. Apesar da lecitina de soja ser amplamente utilizada para estabilizao de misturas de gua e leos comestveis, na formulao de medicamentos e de cosmticos (CORSWANT et al., 1998), na extrao de biomolculas por meio de micelas reversas (HASMANN et al., 2007), o estudo termodinmico calorimtrico de sistemas contendo lecitina de soja, gua, solvente orgnico (isooctano) e lcool (butanol) no foi realizado, com o intuito de avaliar a energia de reao envolvida no processo de formao de micelas desse tipo de sistema. Sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi determinar a quantidade de energia envolvida no processo de formao de micelas da lecitina de soja em isooctano e butanol, utilizando a titulao microcalorimtrica isotrmica (ITC). 2. MATRIAIS E METDOS 2.1. Materiais A lecitina de soja foi adquirida da Cargill do Brasil (So Paulo Brasil), com 85 % de pureza (fosfotidil colina). Os solventes isooctano e o butanol foram adquiridos da Vetec Quimica Fina (Rio de Janeiro Brasil). Todos os reagentes utilizados possuam grau analtico. 36

2.2. Medidas de Titulao Turbidimtrica Adicionou-se 1 mL de uma soluo contendo Lecitina de Soja, isooctano e butanol em um tubo de 4 mL que foi termostatizado a uma temperatura de 25 C. As concentraes de Lecitina de Soja foram variadas de 1,00 a 20,00 % (m/m), as concentraes dos solventes foram fixadas um em relao ao outro em 75,00% (m/m) de isooctano e 25,00% (m/m) para o butanol. A esta soluo foram adicionadas continuamente alquotas de 2 L de gua destilada at o surgimento de turvao na soluo resultante. Este sistema foi deixado em repouso (15 a 30 minutos) at o aparecimento de duas fases lmpidas. A quantidade de gua adicionada a cada sistema, na qual havia o surgimento das duas fases era anotada. Este procedimento foi repetido em cada tubo que possua o sistema com a concentrao de lecitina de soja em isooctano e butanol sendo aumentada, totalizando no final do experimento 20 tubos. Com os valores da quantidade de gua solubilizada em cada sistema foi possvel obter uma curva de solubilidade da gua nas solues contendo lecitina de soja (1,00 a 20,00 % m/m), em isooctano e butanol. 2.3. Estudo microcalorimtrico do sistema As medidas de variao de entalpia de mistura,
mixH,

foram realizadas utilizando um

Microcalorimetro de Titulao Isotrmica da marca CRC (EUA, modelo ITC 4200). O microcalormetro composto por um par de clulas com capacidade aproximada de 1.8 mL de soluo, na qual uma delas, a clula de reao, foi utilizada para colocar a amostra a ser titulada e a outra clula para colocar amostra utilizada como referncia. Ao redor dessas clulas existe um sistema de termopilhas que so sensveis a pequenos fluxos de energia na forma de calor. Uma seringa foi utilizada para adicionar 1L de gua com intervalo de tempo de 3600 segundos a clula de reao. Ao mesmo tempo em que a soluo foi agitada a 300 rpm a uma temperatura de 25 C. O experimento foi dividido em 6 ciclos termodinmicos, com a relao de molculas entre os componentes sempre igual ao primeiro ciclo: no 1 ciclo foi utilizado um sistema de lecitina de soja (5,00 % m/m) em isooctano (70,00 % m/m) e butanol (25,00 % m/m), no 2 ciclo foi utilizado lecitina de soja + Isooctano, j no 3 ciclo a clula de reao foi preenchida com lecitina + butanol, no 4 ciclo o sistema utilizado era composto por isooctano +butanol, no 5 ciclo a clula de reao foi preenchida com isooctano puro, por fim no ltimo ciclo foi utilizado butanol puro para ser titulado com gua. Cada medida de fluxo de energia gera um pico que representa a variao de energia associado injeo de um pequeno volume de gua no sistema analisado (Figura 1). medida que o sistema analisado vai atingindo a saturao, o sinal de energia liberada vai diminuindo at atingir a saturao completa. Integrando a rea de cada pico (energia liberada ao longo de um

37

intervalo de tempo) obtm-se a medida do

H (em unidade de joules por mol de gua)

proveniente reao da gua com os componentes de cada sistema avaliado.

Figura 1: Deflexes que correspondem variao de potncia ao se fazer injees consecutivas de gua em Isooctano/Lecitina de Soja/Butanol.
3. RESULTADOS E DISCUSSO 3.1. Diagrama de solubilidade da gua no sistema ternrio composto por lecitina de soja/isooctano/butanol A adio de gua em isooctano puro ou isooctano com lecitina de soja produz um sistema bifsico no qual, mesmo pequenas quantidades de gua (1L) separam-se do solvente orgnico, independentemente da presena da lecitina de soja. Entretanto, com a presena do butanol ocorre o aumento da miscibilidade da gua nesse sistema ternrio. Os resultados das medidas de solubilidade de gua no sistema formado por isooctano 70,00 % (m/m)/butanol 25,00 % (m/m) com diferentes concentraes de lecitina de soja so apresentados na Figura 2. Na regio abaixo da curva formada pelos pontos experimentais obtidos a partir do surgimento da primeira turbidez, a gua adicionada forma um sistema homogneo com a mistura lecitina/isooctano/butanol. Assim, esse diagrama de solubilidade contm importantes informaes, indicando a regio limite para se trabalhar com sistemas macroscopicamente homogneos. Dessa forma, para uma dada concentrao de lecitina de soja, isooctano e butanol, ele fornece a mxima quantidade de gua que tal concentrao consegue solubilizar. 38

Figura 2: Diagrama de solubilidade da gua no sistema ternrio Lecitina/Isooctano/Butanol a

25 C. Inicialmente, na regio compreendida entre 1,00 5,00 % de lecitina, a quantidade de gua incorporada constante e igual 7,70x10-4 mol de H2O por ml de sistema ternrio. Essa incorporao inicial de gua se deve presena do butanol que interage com as molculas de gua via ligaes de hidrognio. Para confirmar essa hiptese, molculas de gua foram adicionadas a um sistema binrio formado por butanol e isooctano que foi capaz de incorporar 7,70x10-4 mol de H2O por ml de soluo. A partir da concentrao de 0,05 m/m de lecitina de soja, ocorre um aumento na solubilidade da gua no sistema lecitina/isooctano/butanol, que prossegue at a concentrao de 0,17 m/m de lecitina de soja. Esse aumento na miscibilidade de gua um indicativo da ocorrncia de um processo termodinmico cooperativo que ocorre nessa faixa de concentrao de lecitina. Baseando-se em resultados da literatura para sistemas ternrios semelhantes: lecitina/gua/isooctano lecitina/gua/ciclohexano e lecitina/gua/decano (ANGELICO et al., (ANGELICO 2000), et al., 2004), e

lecitina/gua/butanol

lecitina/gua/propanol (KAHLWEI et al., 1995), lecitina/gua/butanol/leo tripalmitico (CABOI et al., 2005), lecitina/gua/butanol/triacilglicerol (LESER et al., 1996), este novo processo termodinmico pode est associado a um processo de autoagregao das molculas de lecitina e butanol formando micelas reversas nas quais o butanol desempenha um papel de cosurfactante, estabilizando assim as nanoestruturas formadas.

39

A concentrao na qual ocorre o aumento abrupto da solubilidade da gua no sistema ternrio denominada de concentrao micelar crtica (CMC), que indicaria a faixa de concentrao, na qual o processo de formao de um agregado formado por molculas de gua em seu interior inicia-se, cercadas por molculas de butanol e lecitina orientadas com suas regies hidroflicas voltadas para o interior do agregado e suas regies hidrofbicas orientadas para o solvente isooctano. O processo de autoagregao das molculas presentes no sistema ternrio ocorre para a minimizao da energia livre de Gibbs do sistema. Este parmetro termodinmico formado por uma componente configuracional que caracteriza a probabilidade da distribuio espacial das molculas no sistema, denominada entropia. A outra componente, denominada entalpia, expressa as interaes intermoleculares presentes nos diferentes microambientes. Objetivando medir as contribuies entlpicas para o processo de formao das micelas reversas, foram realizadas medidas de variao de entalpias de mistura associadas adio de gua ao sistema ternrio lecitina/isooctano/butanol. 3.2. Medidas de Entalpia de Mistura Com o intuito de analisar a contribuio entlpica para a termodinmica de mistura da H2O no sistema ternrio isooctano-butanol-lecitina de soja, foram realizadas medidas de ITC que consistiram em adicionar, consecutivamente, pequenas quantidades de gua (1 L) nos seguintes sistemas: i) ternrio formado por lecitina/isooctano/butanol; ii) butanol/lecitina de soja; iii) isooctano-butanol; iv) isooctano puro e v) butanol puro. O sistema contendo isooctano+butanol+lecitina de Soja foi composto por 5,00 % (m/m) de concentrao de lecitina de soja, 25,00 % (m/m) de butanol e 70,00 %(m/m) de isooctano. Para cada soluo estudada, a relao molar entre os componentes foi mantida constante. A Figura 3 apresenta a variao da entalpia de mistura da gua no sistema ternrio formado por isooctano+butanol+lecitina de soja. A entalpia de mistura da gua neste sistema ternrio um processo endotrmico que absorve +2,17 kJ/mol quando 1 L de gua adicionado a 1,8 ml da mistura isooctano/butanol/lecitina. Com um aumento da quantidade de gua adicionada, a energia absorvida torna-se cada vez menor, mostrando assim a ocorrncia de um comportamento termodinmico exotrmico associado ao processo de dissoluo da gua neste sistema ternrio. Aps a adio de 22L de gua a entalpia de mistura aproxima-se de 0,00 kJ/mol. Experimentos de titulao turbidimtrica mostraram que aps 22 L o sistema gua/isooctano/butanol/lecitina torna-se bifsico. A anlise desses dois resultados mostrou que o 40

processo termodinmico de separao de fases no o responsvel pela variao da entalpia de mistura do sistema observada para as quantidades de gua adicionadas inferiores a 22 L. Desta forma, podemos atribuir a variao da entalpia de mistura da gua com a quantidade de gua adicionada formao de micela reversa descrita anteriormente.

Figura 3: Variao da entalpia de mistura com a titulao da gua em Isooctano+Butanol+Lecitina de soja. Essas micelas reversas ocorrem com liberao de energia inferior a -2,00 kJ/mol, indicando assim uma contribuio entlpica para a agregao das molculas de lecitina, butanol e gua. Esse pequeno valor de energia mostra a inexistncia de processos de formao e quebra de ligaes qumicas, descartando assim qualquer chance da ocorrncia de decomposio das molculas de lecitina no sistema avaliado. Os valores de
mixH

medidos no sistema ternrio

envolvem a quebra e a formao das seguintes interaes intermoleculares: Quebra- H2O-H2O, butanol-butanol, isooctano-isooctano, lecitina-lecitina. Formao- H2O-butanol, H2O-lecitina, butanol-lecitina; lecitina-isooctano e butanol-isooctano. Objetivando discriminar a contribuio de cada uma dessas interaes para os valores de
mixH

medidos, foram realizados experimentos

de mistura de gua em sistemas contendo diferentes combinaes dos componentes presentes no sistema ternrio. A Figura 4 mostra a variao da entalpia de mistura da gua nos seguintes sistemas: i) isooctano+butanol+lecitina de soja; ii) isooctano+lecitina, iii) isooctano.

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Figura 4: Variao da entalpia de mistura com a titulao da gua em Isooctano+Butanol+Lecitina de soja, Isooctano+Lecitina de soja e Isooctano puro. Ao titular gua em isooctano puro (curva preta), observou-se que praticamente no ocorreu variao do
mixH,

ficando esses valores prximos a -9,46x10-3 kJ/mol H2O.

Experimentos de titulao turbidimtrica mostraram que mesmo a adio de 1 L de gua promove a formao de um sistema bifsico no qual uma das fases rica em gua e a outra rica em isooctano. Os resultados calorimtricos associados aos turbidimtricos comprovam que a interao das molculas de gua com as molculas de isooctano so desfavorveis termodinamicamente, levando a processos de separao de fases que liberam quantidades muito pequenas ( 9,38x10-3 kJ/mol) de energia. Dessa forma, pode-se concluir que as interaes isooctano-isooctano e isooctano-H2O no contribuem para o processo de formao das micelas reversas. Os mesmos resultados foram obtidos quando a gua foi titulada no sistema isooctano+lecitina de soja (curva vermelha), ficando claro que necessria a presena de um co-surfactante, o butanol, no sistema para promover o processo de agregao das molculas de butanol e lecitina de soja formando micelas reversas. Na Figura 5 apresentada a variao da entalpia de mistura da gua nos sistemas formados por: i) isooctano+butanol+lecitina de soja; ii) butanol+lecitina; iii) butanol. Aps titular gua em butanol puro (curva roxa), observou-se que ocorreu uma variao do
mixH,

dentro do intervalo de +2,21 kJ/mol H2O a +1,12 kJ/mol H2O. Esta variao de entalpia est associada ao rompimento das interaes intermoleculares H2O-H2O e butanol-butanol e formao da interao H2O-butanol.

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Figura 5: Variao da entalpia de mistura com a titulao da gua em Isooctano+Butanol+Lecitina de soja, Butanol+Lecitina de soja e Butanol puro. O fato dessas entalpias serem positivas resulta da liberao da energia na formao das interaes ser menor do que a energia absorvida no rompimento das mesmas. Isso nos leva a concluso de que a interao H2O-butanol menos intensa do que H2O-H2O. Aps a adio de 70 L de H2O em 1,8 ml de butanol, ocorreu o processo de separao de fase, no sendo observada nenhuma variao abrupta na curva de
mix

H x Vol. H2O para este ponto critico. Os

resultados calorimtricos associados aos turbidimtricos comprovam que a interao das molculas de gua com as molculas de butanol so favorveis termodinamicamente, ocorrendo interao das molculas de gua com as molculas de butanol por meio de ligaes de hidrognio. Resultados parecidos foram obtidos quando a gua foi titulada no sistema butanol+lecitina de soja (
mixH,

variando de +2,16 kJ/mol H2O a +0,94 kJ/mol H2O), ficando

claro que a presena de lecitina de soja no sistema, no provocou interaes intermoleculares muito diferentes das ocorridas entre butanol-H2O. Sendo assim, pode-se dizer que para esse tipo de sistema as interaes gua-butanol predominam para a espontaneidade termodinmica, sendo pouca a contribuio da interao gua-lecitina de soja para a mistura espontnea da gua nesse sistema binrio. Entretanto pode-se verificar na Figura 5, que a presena dos trs componentes (lecitina de soja/isooctano/butanol) permitiu a ocorrncia de um processo termodinmico diferente daquele presente na mistura binria e no butanol puro. Este novo processo pode ser atribudo formao das micelas reversas, contendo um interior rico em molculas de gua, cercado por molculas de lecitina e butanol, solvatadas por molculas de isooctano. Fica evidente com esses dados que o processo de formao das micelas exotrmico, sendo assim pode ser determinado tambm entalpicamante. 43

A Figura 6 mostra a variao da entalpia de mistura da gua nos sistemas formados por: i) isooctano+butanol+lecitina de soja; ii) isooctano+butanol.

Figura 6: Variao da entalpia de mistura com a titulao da gua em Isooctano+Butanol+Lecitina de soja e Isooctano+Butanol.
Por fim, foi feita a titulao de gua no sistema composto por isooctano+butanol (curva verde). Nesse sistema o valor da
mixH

da gua variou de 4,80 kJ/mol H2O -1,20x10-1 kJ/mol

H2O, sendo observado que nos primeiros 22 L de gua adicionados a esse sistema ocorre uma brusca variao da entalpia de mistura, que se torna cada vez menos endotrmica, demonstrando a ocorrncia de um processo termodinmico exotrmico, medida que se aumenta a concentrao de gua no sistema em questo. A partir de 22 L de gua adicionada ao sistema, comea a ocorrer o processo de mudana de fases, visto que a variao de energia de mistura de gua passa a ser praticamente nula. Essa ltima curva no se assemelha com a curva de titulao do butanol, pelo fato das molculas de isooctano estarem interferindo na interao das molculas de gua com as molculas de butanol, podendo estar ocorrendo algum tipo de organizao das molculas de butanol com molculas de gua que leve a um considervel gasto de energia de mistura. A diferena de comportamento entre as curvas do sistema contendo

isooctano+butanol+lecitina de soja (curva azul) e a do sistema contendo isooctano+butanol (curva verde), como j apontado anteriormente, indica que, com a adio de gua no sistema ternrio, passa a ocorrer um tipo de organizao das molculas de todos os componentes do sistema, nesse caso micelas-reversas, formadas pelas molculas da lecitina que agem como 44

surfactante, molculas do butanol que agem como co-surfactante, molculas de gua que ficam no interior das micelas e pelo isooctano que tem a funo de solvente orgnico. Caso a formao de micelas-reversas no estivesse ocorrendo, o comportamento termodinmico da curva de titulao de gua no sistema ternrio seria igual curva do sistema contendo isooctano+butanol, ou igual curva do sistema contendo butanol+lecitina de soja. O estudo demonstrou que a lecitina de soja pode ser utilizada como surfactante em microemulses constitudas por isooctano, butanol e gua, uma vez que a energia envolvida do processo de formao desse tipo de microemulso considerada baixa, no variando a valores muito superiores a 2,00 kJ/mol H2O, indicando que no est ocorrendo nenhum processo de deteriorao da lecitina de soja, como oxidao, por exemplo, sendo esse o maior problema envolvendo sistemas contendo lecitina de soja. 4. CONCLUSO As anlises de titulao turbidimtrica e calorimtrica demonstraram comportamento da microemulso composta por isooctano-butanol-lecitina de soja e gua, indicando que as molculas de gua interagem com as molculas de butanol e com as molculas de lecitina de soja para formar agregados, nesse caso micelas reversas. Alm disso, o estudo verificou que a lecitina de soja no est sofrendo nenhuma modificao em sua estrutura, como oxidao, por exemplo, visto que a energia envolvida no processo de formao das micelas considerada inferior quelas observadas em processos envolvendo quebra e formao de ligaes qumicas. Sendo assim, pode-se inferir que a lecitina de soja pode ser utilizada em sistemas constitudos por isooctano-butanol e gua. 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ANGELICO, R., PALAZZO, G., COLAFEMMINA, G., CIRKEL, P.A., GIUSTINI, M., CEGLIE, A. Water diffusion and headgroup mobility in polymer-like reverse micelles: evidence of a sphere-to-rod-tosphere transition. J. Phys. Chem. B vol. 102, pp. 28832889, 1998. ANGELICO, R., BALINOV, B., CEGLIE, A., OLSSON, U., PALAZZO, G., SODERMAN, O. Water diffusion in polymer-like reverse micelles. 2. composition dependence. Langmuir vol. 15, pp. 16791684, 1999. ANGELICO, R., AMBROSONE, L., CEGLIE, A., PALAZZO, G., MORTENSEN, K., OLSSON, U. Structure and dynamics of polymer-like reverse micelles. Prog. Colloid Polym. Sci. vol. 116, pp. 3741, 2000. ANGELICO, R., OLSSON, U., MORTENSEN, K., AMBROSONE, L., PALAZZO, G., CEGLIE, A. Relaxation of shear-alignedwormlike micelles. J. Phys. Chem. B, vol. 106, pp. 24262428, 2002. 45

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CONCLUSO GERAL Levando em considerao tudo que foi exposto e discutido, conclui-se que sistemas micelares reversos formados por dodecil sulfato de sdio (SDS), butanol e gua, nas condies estudadas, podem ser utilizados para extrair protenas de fontes alternativas como a farinha da semente de jaca, e que mais estudos devem ser feitos para avaliar se a utilizao dessa metodologia em escala industrial e a viabilidade financeira. Pde-se concluir tambm que a lecitina de soja pode ser utilizada em sistemas contendo isooctano, butanol e gua sem que ocorra deteriorao da mesma. Observou-se que no possvel formar micelas reversas em sistemas contendo lecitina de soja, isooctano e gua sem a presena de um co-surfactante, nesse caso um lcool.

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