9/27/2012

Electroforese

Digestão e Electroforese de DNA

Separação de componentes de uma mistura. Proteínas ou ácidos nucleicos – DNA ou RNA
Migração dependente da carga eléctrica da molécula.

Arne Tiselius

Polinucleótido – Cadeia simples de DNA
Cientista sueco ganhou o prémio Nobel da Química em 1948. Foi assistente de Svedberg e desenvolveu o método da electroforese para separação de proteínas em suspensão a partir da sua carga eléctrica

Carga global negativa

1

só é possível com luz UltraVioleta Visualização do DNA  Visualização de DNA Visualização do DNA W R T W R T W R T  Separa moléculas de DNA de diferentes tamanhos 2 .9/27/2012 Electroforese – Procedimento experimental Electroforese – Global  Em Gel de Agarose Toma partido da carga global negativa das moléculas de DNA A visualização do DNA corado com brometo de etídeo – corante fluorescente .

GATC-3' 3' -CTAG -5' 5' -G ANTC-3' 3' -CTNA G-5' 5' -G GATCC-3' 3' -CCTAG G-5' 5' . 5' overhang Blunt Sticky. 5’ overhang Sticky.NNNGGCGAG-5' 5' -G AATTC-3' 3' -CTTAA G-5' 5' -CTGCA G-3' 3' -G ACGTC-5' 5' -GC GGCCGC-3' 3' -CGCCGG CG-5' 5' -GCCNNNN NGGC-3' 3' -CGGN NNNNCCG-5' AluI Sau3AI HinfI BamHI BsrBI EcoRI PstI NotI BglI Blunt Sticky. Note that most. the sequence is the same in both strands. 3' overhang Moléculas híbridas DNAs de diferentes origens cortados pelas mesmas enzimas podem dar origem a moléculas híbridas ________________________________________ N = any nucleotide.NNNCCGCTC-3' 3' . 5' overhang Sticky. but not all.9/27/2012 DNA do Fago Lambda Enzimas de restrição  Corte cego Deixando extremidades adesivas ou  Figure 8-31 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008) Corte frequente ou raro Enzyme Recognition sequence Type of ends End sequences ________________________________________________________________________________ 5’ -AGCT-3´ 3' -TCGA-5’ 5’-GATC-3' 3' -CTAG-5' 5' -GANTC-3' 3' -CTNAG-5' 5' -GGATCC-3' 3' -CCTAGG-5' 5' -CCGCTC-3' 3' -GGCGAG-5' 5' -GAATTC-3' 3' -CTTAAG-5' 5' -CTGCAG-3' 3' -GACGTC-5' 5' -GCGGCCGC-3' 3' -CGCCGGCG-5' 5' -GCCNNNNNGGC-3' 3' -CGGNNNNNCCG-5' 5’ -AG CT-3' 3' -TC GA-5’ 5' . Biologia 2009 – 5ªaula _____________________________________ Figure 8-32 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008) 3 . 3' overhang Sticky. 5' overhang Sticky. 5' overhang Sticky. recognition sequences have inverted symmetry: when read in the 5'  3’ direction.

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