9/27/2012

Electroforese

Digestão e Electroforese de DNA

Separação de componentes de uma mistura. Proteínas ou ácidos nucleicos – DNA ou RNA
Migração dependente da carga eléctrica da molécula.

Arne Tiselius

Polinucleótido – Cadeia simples de DNA
Cientista sueco ganhou o prémio Nobel da Química em 1948. Foi assistente de Svedberg e desenvolveu o método da electroforese para separação de proteínas em suspensão a partir da sua carga eléctrica

Carga global negativa

1

só é possível com luz UltraVioleta Visualização do DNA  Visualização de DNA Visualização do DNA W R T W R T W R T  Separa moléculas de DNA de diferentes tamanhos 2 .9/27/2012 Electroforese – Procedimento experimental Electroforese – Global  Em Gel de Agarose Toma partido da carga global negativa das moléculas de DNA A visualização do DNA corado com brometo de etídeo – corante fluorescente .

5' overhang Blunt Sticky. 3' overhang Sticky. 3' overhang Moléculas híbridas DNAs de diferentes origens cortados pelas mesmas enzimas podem dar origem a moléculas híbridas ________________________________________ N = any nucleotide. 5’ overhang Sticky.NNNGGCGAG-5' 5' -G AATTC-3' 3' -CTTAA G-5' 5' -CTGCA G-3' 3' -G ACGTC-5' 5' -GC GGCCGC-3' 3' -CGCCGG CG-5' 5' -GCCNNNN NGGC-3' 3' -CGGN NNNNCCG-5' AluI Sau3AI HinfI BamHI BsrBI EcoRI PstI NotI BglI Blunt Sticky. 5' overhang Sticky.GATC-3' 3' -CTAG -5' 5' -G ANTC-3' 3' -CTNA G-5' 5' -G GATCC-3' 3' -CCTAG G-5' 5' . 5' overhang Sticky. the sequence is the same in both strands. but not all.NNNCCGCTC-3' 3' . Note that most.9/27/2012 DNA do Fago Lambda Enzimas de restrição  Corte cego Deixando extremidades adesivas ou  Figure 8-31 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008) Corte frequente ou raro Enzyme Recognition sequence Type of ends End sequences ________________________________________________________________________________ 5’ -AGCT-3´ 3' -TCGA-5’ 5’-GATC-3' 3' -CTAG-5' 5' -GANTC-3' 3' -CTNAG-5' 5' -GGATCC-3' 3' -CCTAGG-5' 5' -CCGCTC-3' 3' -GGCGAG-5' 5' -GAATTC-3' 3' -CTTAAG-5' 5' -CTGCAG-3' 3' -GACGTC-5' 5' -GCGGCCGC-3' 3' -CGCCGGCG-5' 5' -GCCNNNNNGGC-3' 3' -CGGNNNNNCCG-5' 5’ -AG CT-3' 3' -TC GA-5’ 5' . 5' overhang Sticky. recognition sequences have inverted symmetry: when read in the 5'  3’ direction. Biologia 2009 – 5ªaula _____________________________________ Figure 8-32 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008) 3 .

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