Prctica Nro.

10

RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS EN NCTARES Y JALEAS

I.GENERALIDADES:

La contaminacin microbiana de alimentos es un problema serio para la industria alimentaria por las grandes prdidas econmicas que trae consigo. Este fenmeno es mixto por la participacin de bacterias, hongos filamentosos y levaduras, pero ha sido estudiado mayormente en bacterias y hongos filamentosos por su protagonismo en el dao. Los hongos y levaduras pueden utilizar ciertos sustratos como pectinas, carbohidratos como polisacridos, cidos orgnicos, protenas y lpidos. Tambin pueden causar problemas a travs de: (a) sntesis de metabolitos txicos (micotoxinas), (b) resistencia al calor, congelamiento, antibiticos o irradiacin y (c) habilidad para alterar sustratos no favorables permitiendo el crecimiento de bacterias patgenas. Pueden tambin causar malos olores y sabores y la decoloracin de las superficies de alimento (Gamazo 2007). Debido a su crecimiento lento y a su baja competitividad, los hongos y levaduras se manifiestan en los alimentos donde el crecimiento bacteriano es menos favorable. Estas condiciones pueden ser bajos niveles de pH, baja humedad, alto contenido en sales o carbohidratos, baja temperatura de almacenamiento, la presencia de antibiticos, o la exposicin del alimento a la irradiacin. Por lo tanto pueden ser un problema potencial en frutas, bebidas de frutas, especias, oleaginosas, granos, cereales y sus derivados y alimentos de humedad intermedia como las mermeladas, cajetas, especias, etc. (Gamazo 2007). Objetivos: Recuento en placa de mohos y levaduras a partir de muestra de jugos y jaleas II. 2.1 2.2 2.3 MATERIALES Material biolgico: Frascos sellados de nctar y jaleas Medio de cultivo AGAR OGY(Oxitetraciclina-Glucosa Agar) ANEXO 1 Material de vidrio: Pipetas de 1 mL, estril Tubos de ensayo con 9 mL con SSP Matraz de 250 mL estril Placas petri Asa Drigalski mecheros

2.4 2.5 2.6

Equipos: Autoclave Estufa Reactivos Terramicina (500 mg) Otros Propipeta

III. 3.1 3.1.1

PROCEDIMIENTO Anlisis microbiolgico de jaleas y nctar Preparacin de solucin madre y diluciones Se recomienda trabajar en Campana de flujo laminar o muy cerca al fuego de un mechero. Medir 10 mL de muestra, diluirlo en 90 mL de Solucin salina peptonada (SSP), por agitacin (3 minutos aproximadamente), para la obtencin de la solucin madre. A partir de ella realizar diluciones 10 -1 y 10 -2, en tubos de ensayos, lo cual consiste en diluir 1mL de la solucin madre en 9 mL de SSP, (Tubo I); y de ste pipetear 1 mL y diluirlo en 9 mL de SSP, para el Tubo II. Pipetear 0.1 mL de las diluciones realizadas y cultivarlo en agar OGY (Figura 1) Extender la muestra con asa Drigalski hasta secar, tapar la placa petri y cubrir con parafilm. Llevarlo a Estufa e incubar a 22 oC por 7 das.

9 mL SSP

9 mL SSP

10 mL + 90 mL SSP

1 mL

1 mL

0.1 mL

0.1 mL

Solucin Madre
agar Oxitetraciclina-Glucosa Agar Figura 1. Esquema general de diluciones de muestra a analizar FUNDAMENTO: El agar OGY, dentro de sus reactivos que lo componen se encuentra la Oxitetraciclina, en su forma comercial como Terramicina, es un antibitico de amplio espectro, que tiene por funcin evitar el crecimiento bacteriano, que probablemente se encuentra en la muestra a analizar.

Como el objetivo de sta prctica es analizar el crecimiento de mohos y levaduras, entonces con el antibitico evitamos posibilidad que crezcan bacterias. IV RESULTADOS

A continuacin, el estudiante deber esquematizar y detallar, graficando y coloreando, los resultados obtenidos, deber tener en cuenta redactar al pie del grfico la formacin de colonias, coloracin y apariencia, de igual forma el crecimiento de mohos. CUESTIONARIO: Si se prepara 500 mL de medio de cultivo OGY, cuantos mililitros de oxitetraciclina (al 0.1mg/mL) debo incorporarle?. Redacta el procedimiento de preparacin del medio OGY y los clculos del oxitetraciclina al 0.05 mg/mL

V VI

CONCLUSIN REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Gamazo C. y Lpez G. 2007. Manual Prctico de Microbiologa. 3ra Edicin. Ed. Masson. Silva M.; Glorio P.; Espino L. 2007. Guia de prctica Microbiologa de Alimentos. Per ANEXO 1 AGAR OGY(Oxitetraciclina-Glucosa Agar) Extracto de Levadura Glucosa Agar Agua destilada pH Oxitetraciclina (Terramicina) 5 g. 15 g. 15 g. 1000 mL 7.0 0.1mg/mL

La concentracin comercial de Terramicina es 500 mg, dicha concentracin la disolvemos en 50 mL de agua destilada y obtenemos la concentracin stock (C1): 500mg/50mL; si la concentracin que requiere es (C2): 0.1mg/mL, y a un volumen final (V2) de 1000mL, de medio de cultivo, procedemos de la siguiente manera, para calcular el volumen que debemos incorporar (V1) al medio de cultivo: Aplicamos la frmula: C1.V1 =C2.V2 V1= 10 mL (500mg/50mL)(V1) = (0.1mg/mL)(1000mL)