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Fermentacin de la lactosa (Mc Conkey) El agar Mc Conkey es un medio slido, diferencial y selectivo.

Se usa para la discriminacin de bacterias con capacidad de fermentar la lactosa (Lac + y -).Composicin g/l : - Peptona 20.0 : fuente de nitrgeno y carbono para las Lac -. - Lactosa 10.0 : fuente de carbono para las Lac +. - Sales biliares 2.5 : le confiere carcter selectivo, inhibiendo el crecimiento de Gram +. - Cloruro sdico 5.0 : para mantener la tonicidad del medio (evitar osmosis). - Rojo neutro 0.05 : indicador que va hacer que el medio vire de coloracin. Si las bacterias son Lac +, producirn cidos derivados de la fermentacin que darn al medio un aspecto rosceo; si por el contrario son Lac -, el medio se basificar por el uso de la peptona y se tornar amarillo. - Cristal violeta 0.001 : interfiere junto con las sales biliares en la selectividad del medio. - Agar-agar 15.0: da consistencia al medio.

Lac +

Lac -

Agar Hierro de Kliger (KIA) El agar Hierro de Kliger (KIA), es un medio slido y diferencial. El fundamento se basa en la capacidad de fermentacin de dos azucares (glucosa y lactosa), en la produccin de c. sulfhdrico y en la produccin de gas. Composicion g/l: Extracto de carne 3.0 Peptona 20.0 Glucosa 1.0 Extracto de levadura 3.0

Lactosa 10.0 Cloruro sdico 5.0

Citrato frrico amnico 0.5 Tiosulfato sdico 0.5 : fuente de azufre, las bacterias lo reducen produciendo c. sulfhdrico (precipitado negro) Rojo de fenol 0.03 : indicador, si vira a rosceo , indica basicidad del medio, si es amarillo indica acidificacin (derivada de c. de la fermentacin) Interpretacin del Kliger: NC o SC: no cambio o sin cambio LC, Alk o K : alcalinidad

H2S o subndice s: si produce c. sulfhdrico

G: productora de gas

Ejemplo: A/As indica que es fermentador de glucosa, lactosa y productor de sulfhdrico

Prueba del Indol Pone de manifiesto la presencia de la encima Triptofanasa en nuestras bacterias, si esta presente degradar el triptofano y liberar al medio Indol, para revelar su presencia usaremos el reactivo de Kovac; si hay indol se formar un anillo rojo en la superficie, sino este ser amarillo. Para esto sembramos en caldo con triptofano. Indol+ Indol-

Citrato de Simmons Cit + Cit -

Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como nica fuente de carbono y compuesto amoniacales como nica fuente de nitrgeno. El medio contiene citrato sdico, fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador; este se tornar azul cuando el medio se basifica. Las bacterias que metabolizan el citrato liberan iones amonio al medio (degradacin del fosfato amnico) lo que provoca que este se alcalinice y el indicador vire azul. Agar Hierro Lisina (LIA)

Este medio pone de manifiesto: - Si la bacteria posee la enzima descarboxilasa (LDC). el medio contiene como indicador Purpura de Bromocresol, cuando la lisina se descarboxila, el medio se acidifica y el indicador vira amarillo en el fondo.

- Si es productora de c. sulfhdrico, en cuyo caso el precipitado negro nos impedir ver si es LDC + o -.

- Si es productora de gas

Agar Urea de Christensen Urea - Urea + Pone de manifiesto la actividad de la enzima ureasa, para degradar la urea en dos molculas de amoniaco. El medio lleva como indicador Rojo fenol, que se torna amarillo cuando es negativo y rosa cuando es positivo. Hay que tener precaucin por que tambin puede ocurrir que no se produzca cambio de coloracin, en este caso es negativo. el medio posee un color rosceo (mucho menos intenso que los verdaderos positivos) lo que puede llevarnos a error (considerar falsos positivos). Prueba de la Fenilalanina Desaminasa (PPA) PPA PPA +

Determina la capacidad e la bacteria para desaminar el aminocido fenilalanina en cido fenilpirvico por accin de la enzima Fenilalanina desaminasa, esto va a producir una acidificacin del medio, que se va a poner de manifiesto mediante la aplicacin de 0,2 - 0,3 mL de Cloruro frrico al 10 %, si hay en el medio c. fenilpirvico aparece una coloracin verde-azulada. Reduccin de Nitratos Va a poner de manifiesto la capacidad de transformar los Nitratos en Nitritos. Para esto inoculamos tres tubos en el medio para dicha prueba y los incubamos 24, 49 y 72 horas respectivamente. Tras 24 h. aadimos 2 o 3 gotas del reactivo "A-B", si aparece coloracin rojo cereza indica que es positivo, si no aparece coloracin es un presunto negativo, para confirmarlo basta con aadir una punta de esptula de Zinc y si realmente es negativo se tornara rojo. Si el ultimo da (72 h.) la bacteria da negativo, entonces podemos decir con seguridad que no tiene capacidad para reducir los nitratos. Se realiza una siembra en picadura, y tras incubar 24 h. observamos si se ha producido crecimiento entorno a la zona inoculada.

Rojo de Metilo - Voges Proskauer Las enterobacterias son anaerobios facultativos que usan la glucosa en dos fases: 1 Degradan la glucosa por la va oxidativa hasta que consumen el oxigeno del medio. 2 Metabolizan la glucosa por la va fermentativa, que puede ser de dos tipos: - Fermentacin cido mixta: los productos finales son cidos orgnicos, que disminuyen el pH del medio, lo que se manifiesta con el Rojo de metilo. - Fermentacin butiln-gliclica: los productos finales, como butanodiol y etanol, son neutros y producen como intermediarios acetoina, que puede detectarse con el reactivo de Voges

Proskauer, el react. A que es KOH, y el B alfa-naftol, estos reaccionan con la acetoina originando coloraciones violceas. Para realizar el ensayo, dividimos el medio inoculado y que ha incubado tres das en dos tubos (la mitad en cada uno) y revelamos con los reactivos. Rojo de metilo (posit. y negat.) Voges Proskauer (negativo) Prueba de la Oxidasa y la Catalasa Ambas pruebas se caracterizan por poder realizarse de forma inmediata a partir de nuestro cultivo problema. La oxidasa, es una prueba que se usa para poner de manifiesto el sistema citocromoxidasa, que se encuentra en organismos aerobios, anaerobios facultativos y ocasionalmente en microaerfilos, careciendo los anaerobios estrictos de esta. El mtodo ms frecuento es el indirecto, se realiza en un trocito de papel de filtro, de forma que colocamos una gota del reactivo de Kovacs en el papel y posteriormente tomamos parte de nuestra colonia con el asa de siembra, que frotaremos sobre el papel. El resultado ser positivo se se produce una reaccin de color a los pocos segundos. La catalasa, va a degradar el peroxido de oxigeno que se produce como consecuencia de la acumulacin de oxigeno. Para esto en un tubo de ensayo colocamos 2 o 3 ml de peroxido de oxigeno, tomamos muestra con el asa de siembra y la introducimos en el tubo, el resultado ser positivo si se observa la produccin de pequeas burbujas.