Cromatografa de gases

Tema 11

CROMATOGRAFIA DE GASES
La cromatografa de gases (CG) incluye todos los sistemas cromatogrficos en los que la fase mvil es un gas. Desde la dcada de los cincuenta, en la que Martin y James (1952) descubrieron la cromatografa gas-lquido hasta el desarrollo de la HPLC, puede considerarse como el mtodo de separacin mas importante. En la actualidad, la CG es una tcnica analtica usada rutinariamente en multitud de laboratorios universitarios, de investigacin e industriales, debido a su alta resolucin, sensibilidad y selectividad. La utilizacin de columnas capilares, as como el empleo de la CG en conjuncin con otras tcnicas, especialmente la espectrometra de masas, han aumentado espectacularmente sus posibilidades, siendo factible la separacin, cuantificacin y subsiguiente caracterizacin de una gran variedad de productos en distintas mezclas, desde gases permanentes y mezclas de istopos, hasta aceites esenciales en perfumes, cidos grasos en grasas animales y agentes contaminantes en aguas y suelos. Adems de las aplicaciones tpicamente analticas, la CG puede utilizarse a escala preparativa para la obtencin de compuestos de elevada pureza, as como tambin es posible la obtencin de datos fsico-qumicos relativos a propiedades superficiales, cintica y termodinmica de procesos de adsorcin y separacin, desarrollo de catalizadores, etc. Existen dos tipos de cromatografa en fase gaseosa: la cromatografa gas-slido (CGS) y la cromatografa gas-lquido (CGL), segn se utilice una fase estacionaria slida o una fase estacionaria lquida (sobre un soporte slido, o directamente sobre la pared interna de la columna), respectivamente. De las dos modalidades, la primera tiene unas aplicaciones bastante limitadas, por lo que en la prctica, casi siempre que se hace alusin a la cromatografa de gases est implicada la CGL. Por ello, en este capitulo, se tratar fundamentalmente de la CGL, y solo se har una breve referencia al final sobre la CGS.

Claudio Gonzlez Prez

PRINCIPIOS BASICOS
Los principios fundamentales de la cromatografa expuestos en el captulo anterior son aplicables a la cromatografa de gases con solo algunas ligeras modificaciones resultantes de las propiedades diferenciales entre el estado lquido y el estado gaseoso, principalmente la difusividad. Las principales diferencias entre gases y lquidos pueden concretarse en:
* Las interacciones entre las molculas de los gases, a diferencia de los lquidos, suelen ser pequeas. Por otra parte, los gases suelen tener poca capacidad para desalojar las molculas de soluto no voltiles fijadas a la fase estacionaria (ya sea sta slida o lquida). Por ello, en CG, la fase mvil no interacciona con las molculas de analito, siendo su funcin nicamente el transporte del analito a travs de la columna. * Los gases difunden entre s mucho mejor que los lquidos, lo cual influye en la resolucin y en la velocidad de separacin. As, a velocidades de fase mvil prxima a su valor ptimo, la cromatografa lquida proporciona mejor resolucin, si bien, en CG la velocidad ptima de flujo es del orden de 104 a 105 veces superior a la CL, con lo que pueden obtenerse separaciones en muy poco tiempo. Por otra parte, y como consecuencia de la mayor difusividad de los gases, el equilibrio de separacin se alcanza ms rpidamente. * Las propiedades superficiales de los lquidos tambin influyen sobre sus caractersticas cromatogrficas. As, la tensin superficial de los lquidos, y de la que carecen los gases, se utiliza en cromatografa sobre papel y de capa fina como fuerza impulsora de la fase mvil, lo que permite realizar separaciones sin columna. Este tipo de separaciones no son posibles en cromatografa de gases. * La mayor densidad de los lquidos respecto a los gases permite usar la gravedad o la fuerza centrfuga como fuerza motriz de la fase mvil, mientras que la pequea viscosidad de los gases, hace posible el empleo de columnas ms largas.

Debido a la compresibilidad de los gases, en CG es ms aconsejable utilizar volmenes de retencin en lugar de tiempos de retencin. Como se indic anteriormente, VR = tR F y VM = tM F, siendo F la velocidad media de flujo de fase mvil a travs de la columna*. Estos volmenes de retencin, VR y VM, dependen de la
* Generalmente, suele medirse el caudal a la salida de la columna con un medidor de pompas de jabn. El

caudal medido est relacionado con el caudal medio por la expresin: T c P P H 2O F = Fm Ta P donde Ta y Tc son las temperatura ambiente y de la columna respectivamente, P la presin atmosfrica y PH2O la presin de vapor de agua a Ta.

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presin media en el interior de la columna, por lo cual se utilizan volmenes de retencin corregidos, VRo y VMo, obtenidos a partir de, VRo = j VR ; VMo = j VM

donde j es el llamado factor de compresibilidad, dado por,

j=

3 . 2

Pi
Pi

Po 1
3

Po 1

siendo Pi y Po la presin en el interior y en el exterior de la columna respectivamente. En cromatografa de gases, y para estandarizar los volmenes de retencin, suele emplearse el volumen neto, obtenido por diferencia entre VRo y el volumen muerto, VN = VRo VMo y tambin el volumen de retencin especfico, Vg, definido como el volumen neto de analito por gramo de fase estacionaria a 0 C: Vg =
VN 273 . m Tc

donde Tc es la temperatura de la columna y m la masa, en gramos, de la fase estacionaria. El volumen de retencin especfico est relacionado con la constante de distribucin, K, por la expresin: Vg =
K s . 273 Tc

donde s es la densidad del lquido en la fase estacionaria. El factor 273/Tc corrige Vg a la temperatura de referencia de 273 K. Es necesario poner de manifiesto que a una determinada temperatura, Vg depende nicamente de la constante de distribucin y de la densidad del lquido que constituye la fase estacionaria, por lo que, en principio, podra ser un parmetro caracterstico con fines de identificacin. Asimismo, es necesario indicar que en CG la constante de distribucin depende marcadamente de las presiones de vapor de los componentes, y stas, a su vez, de la temperatura. El equilibrio depender claramente de la temperatura y, por lo tanto, este parmetro deber mantenerse de la forma ms precisa posible.

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LAS MUESTRAS PARA CROMATOGRAFIA DE GASES

La separacin de compuestos directamente, esto es, sin transformaciones previas, requieren que las muestras cumplan las condiciones siguientes:
* Compuestos en estado gaseoso, o bien en estado lquido y slido, con presiones de vapor de por lo menos 0.3 mm de mercurio a la temperatura mxima de la fase estacionaria empleada. * No descomponibles por el calor a la temperatura de la separacin. * No adsorbibles o descomponibles por el soporte slido de la columna. * Detectables a la salida.

Actualmente, se ha ampliado el campo de utilizacin de la CG a muchos compuestos que no cumplen los requisitos citados. As, es posible analizar compuestos, como azcares o aminocidos, totalmente no voltiles, pero que se transforman en derivados voltiles por reacciones apropiadas. Por otra parte, los mtodos de muestreo de los productos de descomposicin piroltica de muestras no voltiles, no dan informacin directa sobre la composicin de las sustancias, pero suministran datos de sus productos de descomposicin. Asimismo, compuestos no detectables, se transforman en otros sensibles al mtodo de deteccin y por diversos artificios se reduce el grado de descomposicin de muestras inestables.

INSTRUMENTACION
Un cromatgrafo de gases consta bsicamente de los siguientes componentes (figura 11.1.) * Fuente de gas portador con los correspondientes reguladores y medidores de presin. * Sistema para la introduccin de las muestras. * Columna cromatogrfica, con un medidor de caudal a la salida. * Detector. * Sistema para el tratamiento de datos y registrador.

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medidor de caudal de pompas de jabn medidor de presin

jeringa

termostatos detector

vlvula reguladora vlvula reductora columna botella de gas portador registrador

.
Figura 11.1. Componentes bsicos de un cromatgrafo de gases.

La columna cromatogrfica va introducida en un horno termostatizado por aire, con posibilidad de regular la temperatura entre 25 y 400 C, con precisiones comprendidas entre 0.1 y 0.01 C, dependiendo de la precisin deseada en la medida de los tiempos de retencin. Por otra parte, el sistema de introduccin de las muestras y el detector se mantienen generalmente a una temperatura superior en un 10% a la de la columna, para asegurar la rpida volatilizacin de la muestra y prevenir la condensacin.

GASES PORTADORES (FASES MOVILES)

El gas portador, que acta como fase mvil y transporta los componentes de la muestra a travs de la columna y hasta el detector, deber ser una especie qumicamente inerte respecto al analito y relativamente barata, ya que es expulsado a la atmsfera al final del proceso cromatogrfico. En la prctica, los gases ms utilizados son: helio, nitrgeno, hidrgeno, argon y dixido de carbono, especialmente los tres primeros. La eleccin de la fase mvil se hace normalmente en orden al coste, disponibilidad e inercia qumica, as como tambin en funcin del detector utilizado y,

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ocasionalmente, en cuanto a la eficacia de la separacin. En este sentido, con nitrgeno suelen obtenerse separaciones ms eficaces que con hidrgeno o helio, lo cual puede ser debido a su menor coeficiente de difusin y, consecuentemente, menor valor del trmino B de la ecuacin de Van Deemter. Sin embargo, para adquirir esa eficacia se requieren bajas velocidades de flujo, lo cual va en detrimento del tiempo necesario para el anlisis. Por este motivo, en ocasiones, resulta preferible utilizar hidrgeno o helio para las velocidades optimas ms elevadas, an a costa de sacrificar la eficacia. Sin embargo, el empleo de hidrgeno presenta otros problemas, ya que es altamente inflamable, puede formar mezclas explosivas con el aire y a veces puede reaccionar con los componentes de la muestra para originar "artefactos" hidrogenados. Un factor muy importante en las separaciones por cromatografa de gases es el ajuste del caudal, ya que este condiciona la velocidad de la separacin. Normalmente los caudales se controlan mediante un regulador de presin de dos niveles, colocado en la botella del gas, y algn tipo de regulador de presin instalado en el cromatgrafo. Los caudales pueden determinarse mediante un rotmetro situado a la cabeza de la columna, si bien, la forma ms exacta es utilizar un simple medidor de pompas de jabn colocado a la salida de la columna. El caudalmetro de burbuja representado en la figura 11.2. funciona de la forma siguiente: apretando la pera de goma se eleva el nivel de la disolucin jabonosa y se forma una burbuja; midiendo el tiempo que tarda en pasar entre dos marcas sobre un tubo graduado, que corresponden a un volumen conocido, se determina el caudal de gas portador. Para su construccin puede utilizarse una bureta de diferente capacidad, segn el caudal a medir.

burbuja
gas portador procedente de la columna

solucin jabonosa

Figura 11.2. Caudalmetro de burbuja.

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SISTEMAS PARA LA INTRODUCCION DE LA MUESTRA

Las muestras a separar por cromatografa de gases pueden ser de diferente naturaleza y estado fsico, pero necesariamente han de pasarse al estado de vapor. El procedimiento de vaporizar las muestras y de introducirlas en la columna tiene gran importancia desde el punto de vista de la eficacia de la separacin. Para que se cumplan las condiciones tericas del mecanismo de la separacin, la muestra ha de adsorberse totalmente en el primer plato de la columna sin mezclarse con el gas portador. Sin embargo, como en la prctica, la inyeccin no es instantnea, la muestra se mezcla en cierta medida con el gas portador y no se fija totalmente en el primer plato, el proceso de separacin se inicia simultneamente en varios platos a la vez, lo que origina un ensanchamiento de las bandas cromatogrficas. Por otra parte, es importante que el tamao de muestra sea el adecuado a las caractersticas del equipo utilizado. As, cuando se aade a la columna una cantidad de soluto superior a su capacidad, no se establece el equilibrio entre la fase gaseosa y la fase lquida en los primeros platos, reducindose su eficacia, a la vez que aparecen colas. Adems, el tamao de muestra viene condicionado por el detector utilizado, no pudiendo exceder el margen lineal de respuesta, para evitar la saturacin. En resumen,

deber inyectarse la cantidad adecuada de muestra, en el menor tiempo posible y conseguir la vaporizacin total de las muestras no gaseosas (las muestras slidas y
lquidas se introducen usualmente como disoluciones diluidas en un disolvente voltil). Para ello se emplean diversos artificios y tcnicas de muestreo.

Las muestras gaseosas se introducen generalmente en la columna cromatogrfica usando vlvulas rotatorias y bucles de volumen conocido, como el representado en la figura 10.17. (tambin pueden usarse estos dispositivos para muestras lquidas). Los distintos bucles son fcilmente intercambiables y sus volmenes suelen oscilar entre 0.1 y 10.0 mL. Adems, el sistema se disea para minimizar las fluctuaciones de presin que puedan tener lugar cuando la vlvula se cambia desde la posicin "llenado" a la de "inyeccin". Un mtodo prcticamente universal para la introduccin de muestras en CG, pero que se utiliza fundamentalmente con muestras lquidas implica el uso de una microjeriga para inyectar a travs de un diafragma o "septum" de silicona en una cmara de vaporizacin situada en la cabeza de la columna y calentada unos 50 C por

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encima del punto de ebullicin del componente menos voltil de la muestra. En la figura 11.3.a. se representa esquemticamente un dispositivo de este tipo.
gas portador cmara de vaporizacin

columna

jeringa septum

a)
gas portador g columna c

g atmsfera

b)
Figura 11.3.a) Inyeccin con jeringa. b) Repartidores de caudal.

Los diafragmas tienen un tiempo de vida limitado, dependiendo de la destreza del operador, la temperatura del inyector y la calidad del propio diafragma. Un operador suficientemente hbil pincha el septum en un nuevo lugar en cada inyeccin, con lo que se aumenta el nmero de veces que puede usarse. Por otra parte, las altas temperaturas del bloque de inyeccin conducen a una prdida de flexibilidad del septum de silicona como consecuencia de su degradacin, sobre todo cuando se opera a temperaturas superiores a 300 C. Esta degradacin del septum puede originar materiales despolimerizados de bajo peso molecular, los cuales darn origen a picos falsos, a la vez que producen fluctuaciones en la lnea base. Otro fenmeno es el relacionado con los efectos de memoria producidos como consecuencia de la facilidad para adsorberse de determinados compuestos que posteriormente sern de-sorbidos. Alternativamente, la inyeccin puede realizarse directamente en la columna. En estos casos, la aguja hipodrmica llega hasta el relleno de la propia columna, donde se deposita directamente la muestra lquida, de manera que la banda cromatogrfica se forma directamente sobre la fase estacionaria. Este tipo de inyeccin se utiliza en el caso de muestras que podran descomponerse si se calientan por encima de su punto de ebullicin. La muestra se inserta directamente al principio de la columna operando a

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una temperatura inicial relativamente baja, con lo que los solutos quedan en una zona muy estrecha. La separacin ocurre al elevarse la temperatura de la columna. El tamao de la muestra, para la columnas analticas ordinarias, vara entre unas pocas dcimas de micro-litro y 20 L, para lo cual suelen utilizarse divisores de muestra, los cuales permiten pasar a la columna solo una parte de la muestra inyectada, desechndose el resto. En la figura 11.3.b. se muestran diversos modelos de repartidores de caudal. En estos dispositivos , el caudal total de gas portador que contiene la muestra vaporizada se divide en dos porciones antes de entrar en la columna: una de ellas, la menor, se dirige a la columna, y la mayor desemboca a la atmsfera. En todos estos sistemas se coloca un limitador de caudal en la parte que desemboca a la atmsfera, para lo cual suelen usarse agujas hipodrmicas calibradas y tubos de vidrio capilares. Los repartidores de caudal se colocan en ocasiones tambin a la salida del detector, cuando ste tiene una respuesta lineal muy limitada y las cantidades de soluto separadas son excesivamente grandes, o cuando, al emplear detectores destructivos se ha de recuperar la muestra para su identificacin, o con fines preparativos. Recientemente se han desarrollado sistemas de vaporizacin a temperatura programada, los cuales resultan ventajosos cuando se opera con determinado tipo de muestras.

COLUMNAS Y FASES ESTACIONARIAS

La columna constituye la parte esencial del sistema cromatogrfico y de la que depende el xito o el fracaso de los anlisis. En ella est contenida la fase estacionaria, que determina la selectividad y la eficacia de las separaciones. Hasta hace poco tiempo, la mayor parte de las cromatografas de gases se realizaban con columnas empaquetadas o de relleno, mientras que actualmente se utilizan ms extensamente las columnas tubulares abiertas o capilares. Las primeras suelen tener una longitud comprendida entre 1 y 6 metros, con un dimetro interno que oscila entre 2 y 6 mm, mientras que las columnas capilares tienen longitudes entre 10 y 100 metros y dimetros comprendidos entre 0.1 y 0.6 mm. En cuanto a los materiales de que estn fabricadas, suelen ser acero inoxidable o vidrio para las columnas empaquetadas, y slice para las capilares, si bien se han utilizado tambin otros metales como aluminio o cobre, e incluso tefln.

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La temperatura es una variable importante en cromatografa analtica, siendo necesario su control preciso en orden a obtener resultados reproducibles. Por ello, las columnas cromatogrficas suelen disponerse en rollos de 10 a 30 cm de dimetro, con el fin de poder colocarlas en el interior de un horno termostatado que permita operar entre unos 10 C por encima de la temperatura ambiente y unos 450C, con una precisin de 0.1 C. En la prctica, suelen emplearse temperaturas ligeramente superiores al punto de ebullicin medio de la muestra, con lo que se obtienen tiempos de elucin razonables. Sin embargo, para muestras en las que los puntos de ebullicin de los componentes se presenten en un amplio intervalo, los picos correspondientes a los solutos ms voltiles estarn muy prximos y los correspondientes a los menos voltiles estarn muy espaciados. La resolucin no es igual para todos los picos, siendo deficiente al principio y excesiva al final. Por otra parte, los picos de los componentes ms voltiles son altos y estrechos, mientras que los de los componentes menos voltiles son bajos y anchos. Para evitar los inconvenientes anteriormente mencionados suele emplearse una programacin de temperatura, aumentando sta, linealmente o por etapas, mientras se realiza la separacin*. En la figura 11.4. se muestran los cromatogramas de una mezcla de hidrocarburos operando en condiciones isotermas (fig. 11.4.a.) y a temperatura programada (fig. 11.4.b.)
C-8 C-9 C-6 C-7 C-10 C-14 C-16 C-18 C-20

C-8 C-7 C-6 C-9 C-10

a)
C-14 C-16

C-18 C-20

b)

Figura 11.4. Cromatogramas de mezclas de hidrocarburos. a) Isotrmica. b) Temperatura programada.

* Tambin puede modificarse el caudal de gas portador, habindose desarrollado tcnicas de programacin

de esta variable e incluso una programacin mixta de temperatura y caudal.

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Columnas empaquetadas
Las columnas empaquetadas suelen ser tubos de vidrio o de acero inoxidable con las caractersticas de longitud y dimetro interno ya mencionadas, y que se llenan con un soporte slido de grano fino (60-100 mallas, 0.25-0.15 mm) recubierto de una capa delgada (0.05-1 m) de un lquido no voltil que acta de fase estacionaria. Una buena columna empaquetadas puede contener entre 1000 y 2000 platos tericos por metro, mientras que las columnas capilares pueden llegar hasta los 10000 platos por metro. El soporte slido deber presentar las siguientes caractersticas: * Superficie relativamente grande, para que la pelcula de la fase lquida depositada sea fina y se mantenga distribuida de forma que ofrezca el mximo contacto con los solutos de la fase mvil, para facilitar el rpido intercambio entre ambas fases. * Material relativamente duro, para que las partculas no se rompan durante el proceso de impregnacin con la fase lquida y de llenado. * Material estable trmicamente y poroso, para no producir una cada de presin excesiva. Por otra parte, la uniformidad del tamao de las partculas reduce el trmino A de la ecuacin de van Deemter, con lo que se reduce la altura de plato y se incrementa la resolucin. * La superficie ha de ser qumicamente inerte y no absorbente de los solutos, es decir, no deber contribuir a la separacin cromatogrfica. Aunque se han estudiado muchos materiales, ninguno cumple rigurosamente todas las condiciones enumeradas previamente. De todos ellos, el ms frecuentemente utilizado se prepara partir de tierra de diatomeas, constituida por esqueletos de miles de especies de plantas unicelulares que habitaban antiguos mares y lagos. Por tratamiento trmico de las diversas variedades de estas especies, con o sin adicin de fundentes, se modifican sus caractersticas generales y se obtienen los soportes slidos conocidos por distintas denominaciones comerciales, de las que, posiblemente, la ms popular sea "Chromosorb". Las variedades ms utilizadas de Chromosorb son:
* Chromosorb P. Soporte de color rosa, constituido por granos muy duros, de rea superficial elevada (4.0 m2/g) y que puede soportar gran cantidad de fase estacionaria (35% w/w). Presenta una marcada interaccin con los solutos, particularmente a temperatura elevada.

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* Chromosorb W. Soporte siliceo de color blanco, obtenido por tratamiento a 1600 C con un fundente alcalino. Presenta menor rea superficial (1.0 m2/g) que el Chromosorb P y puede impregnarse, como mximo, con un 15 % de fase lquida. * Chromosorb G. Es el ms duro de todos y doblemente denso que el Chromosorb W, presentando relativamente poca interaccin con compuestos polares. Debido a su pequea superficie, tiene poca capacidad de retencin de fase lquida.

Un problema importante que presentan los soportes slidos diatomceos es la marcada actividad superficial que presentan. Esta se debe, sobre todo, a la presencia de los grupos silanol (SiOH) que se forman sobre la superficie de los silicatos, debido a la humedad, los cuales constituyen puntos activos que provocan adsorcin de compuestos polares, as como la formacin de enlaces de hidrgeno con determinados compuestos, traducindose todo ello en la presencia de picos distorsionados y la aparicin de colas (El mismo problema presentan las columnas capilares de slice). La reduccin de la actividad superficial (desactivacin) de los soportes slidos puede llevarse a cabo de diversas formas, si bien, la ms utilizada es la silanizacin, consistente en el tratamiento con dimetilclorosilano*
Si OH
soporte slido

Cl
+

CH 3 Si CH 3

Si O
O Si O

CH 3 Si CH 3
+ 2 HCl

O Si OH

Cl

Para que la reaccin sea completa, los grupos OH deben ocupar puntos activos adyacentes. En presencia de un solo hidroxilo la reaccin es:
Si OH
soporte slido

Cl
+

CH 3 Si CH 3

Si O Si
Cl

CH 3
+ HCl

Cl

CH 3

* Tambien puede usarse hexametildisilazano, en cuyo caso la reaccin es

SiOH O SiOH + (CH3)3SiNHSi(CH3)3

CH 3 SiOSiCH 3 CH 3 + NH 3 O CH 3 SiOSiCH 3 CH 3

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Mediante un lavado con metanol, el segundo cloruro se sustituye por un grupo metoxi,

Si O
soporte slido

CH 3 Si
+ CH 3 OH

Si O Si
CH 3

CH 3
+ HCl

Cl

CH 3

CH 3

Los tratamientos silanizadores reducen considerablemente el rea de los soportes e influyen significativamente en los volmenes de retencin de los solutos. Por otra parte, la presencia de impurezas minerales (en muchas ocasiones, xidos metlicos) sobre la superficie de los soportes dan lugar a puntos activos que interaccionan con determinados tipos de compuestos. En estas ocasiones, un lavado con cidos, ntrico o clorhdrico, previo a la silanizacin, elimina estas impurezas. Entre los soportes no diatomceos usados en CG estn las micro-bolas de vidrio, el tefln y las micro-bolas de polmeros orgnicos, cuyas caractersticas mas importantes son: * Micro-bolas de vidrio. Soporte no poroso, de rea superficial baja y muy duro. Tiene una figura geomtrica muy definida y tamao uniforme, con lo cual se reduce el trmino A en la ecuacin de van Deemter, disminuyendo la altura de plato e incrementndose la resolucin. Por el contrario, admite cantidades muy pequeas de fase estacionaria. * Tefln. Desde el punto de vista de la actividad superficial, el tefln se acerca al ideal, ya que presenta muy poca interaccin sobre los solutos, pero tiene el inconveniente de su poca capacidad de retencin de lquidos sobre su superficie. Es til para la separacin de compuestos polares, tales como agua, cidos orgnicos, fenoles, aminas y gases cidos como HF, HCl, SO2 y xidos de nitrgeno. * Micro-bolas de polmeros orgnicos. Se preparan por polimerizacin, en suspensin, del estireno, usando como agente entre-cruzador el divinal-benceno. Su estructura fsica es la de una esfera porosa en la que se ha controlado el tamao de poro durante el proceso de fabricacin, si bien no puede considerarse estrictamente como soporte slido, ya que tambin acta como fase estacionaria.

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La fase estacionaria para cromatografa gas-lquido deber reunir las siguientes caractersticas: * Baja volatilidad a la temperatura de la columna. Se sugiere que su punto de ebullicin sea, al menos, 100 C mayor que la mxima temperatura de trabajo. * Estabilidad trmica a la temperatura de la columna. * Inercia qumica, ya que, salvo casos especiales, no deber reaccionar qumicamente con los componentes de la muestra. En cuanto a la seleccin de la fase estacionaria ms adecuada a cada caso, hay que considerar, adems de los factores mencionados, que el lquido deber tener un cierto poder disolvente para la muestra. En este sentido, la antigua regla de que "lo semejante disuelve a lo semejante", donde el trmino "semejante" se refiere a las polaridades del soluto y de la fase estacionaria, permite predecir qu solutos sern retenidos por cada fase lquida. As, por ejemplo, el hidrocarburo saturado escualano (C30H62, punto de ebullicin 350C) de polaridad muy baja, es una buena fase lquida para la separacin de alcanos, mientras que el polietilenglicol, de polaridad mucho ms elevada, se puede utilizar para la separacin de alcoholes. Sin embargo, no es necesario que el lquido estacionario tenga un grupo funcional igual al del soluto y, en ocasiones, una fase lquida puede servir para la separacin de una amplia variedad de mezclas. Esto ha llevado a considerar algunas "columnas para propsitos generales", si bien esto no debe interpretarse de forma estricta, ya que ninguna fase lquida puede tener una eficacia completa para separar todo tipo de solutos. El nmero de fases lquidas empleadas en las separaciones por cromatografa de gases es muy elevado, si bien, puede afirmarse que el 90 % de los anlisis pueden llevarse a cabo utilizando un reducido nmero de ellas. En la tabla 11.1. se muestran algunas de ms utilizadas, situadas en orden creciente de polaridad. De todas las fases estacionarias que se indican en la tabla, el escualano obtenido por hidrogenacin del escualeno, C30H50, es la fase lquida menos polar, utilizndose fundamentalmente para la separacin de hidrocarburos saturados. Por su parte, el Apiezon L tiene algo de polaridad debida a impurezas que pueden eliminarse por tratamiento trmico; es una fase de uso general para compuestos de puntos de ebullicin elevados.

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Tabla 11.1. Fases estacionarias para cromatografa de gases

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Fase lquida

Estructura
2,6,15,19,23,hexametiltetracosano, C30H62

Usos
hidrocarburos, haluros de alquilo, mercaptanos comp. poco polares de punto de ebullicin elevado

Escualano

20120

Apiezon L

[CH 2 CHCHCH 2 ]n
CH 3

50280

Polidimetilsiloxano SE30*
CH 3

Si O CH 3
n

50350

hidr. aromticos polinucleares, esteroides, PCBs

C 6 H5 C 6 H5

5% OV 3* 50% OV 17*

Fenildimetilsilicona

Si O Si O CH 3
n

0350 0380
drogas. esteroides, pesticidas

50% trifluoropropilmetil silicona

OV 210* Polietilenglicol Carbowax 1000*

0280 [OCH2CH2]nOH 30150

aromticos clorados nitroaromticos

alcoholes, cidos libres, teres, glicoles, aminas

* Denominacin comercial Los polmeros basados en la estructura Si O Si constituyen la base de un grupo muy amplio de fases estacionarias. Se diferencian unas de otras en su peso molecular medio, su estabilidad trmica y su viscosidad, mientras que sus propiedades qumicas dependen del grado de sustitucin en los tomos de silicio. Las metil fenil siliconas constituyen un conjunto de fases estacionarias en las que diferentes proporciones de grupos metilo han sido sustituidas por grupos fenilo, y en ellas, la polaridad aumenta al hacerlo el nmero de grupos fenilo. Adems, es posible obtener fases lquidas de mayor polaridad mediante la sustitucin de grupos metilo de las dimetil-siliconas por grupos polares como trifluoropropil o ciano.

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Los compuestos conocidos con el nombre de Carbowax ( y ms recientemente, Superox) son polietilenglicoles, y en ellos, el nmero despus del nombre indica el peso molecular medio del polmero. Cuanto menor es, mayor es la polaridad. Adems de las fases mencionadas, se han desarrollado fases estacionarias especiales para determinadas tcnicas analticas, tales como cromatografa de gases espectrometra de masas, donde es esencial que el "sangrado"* sea mnimo, o bien para separaciones de ciertos tipos de solutos. En este sentido, se han desarrollado fases estacionarias estables a elevadas temperaturas (del orden de 450 C) consistentes en copolmeros siliconacarboranos (figura 11.5.), as como fases quirales, utilizadas para la separacin cromatogrfica de enantimeros.
CH3 Si CH 3
C BH

CH 3 Si O Si O Si O CH 3 CH 3 CH 3

CH 3

CH 3

"Dexil 300"

.
Figura 11.5. Estructura de fase estacionaria para operar a temperaturas elevadas.

La cantidad de fase lquida aplicada al soporte slido es necesario controlarla de forma adecuada, ya que si hay demasiado lquido, los solutos pasan mucho tiempo difundindose en esa fase, disminuyendo la eficacia de la separacin, y si se carga la columna con una cantidad de fase lquida insuficiente, los solutos pueden interaccionar con el slido mediante fenmenos de adsorcin, con la consiguiente perturbacin de la separacin. La carga de lquido depende del tipo de soporte slido, el tamao de la muestra y otros factores, pero, en general, vara entre el 3 y el 15 % (en volumen).

Columnas capilares
Las columnas tubulares abiertas o columnas capilares son mucho ms estrechas y suelen ser mucho ms largas que las columnas empaquetadas. La teora de las columnas
* El "sangrado" de una columna consiste en la prdida de fase estacionaria, bien durante el proceso de

elucin, o cuando se limpia con un disolvente para eliminar los contaminantes.

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sin relleno fue inicialmente expuesta por Golay en 1957 y como consecuencia inmediata de esta teora se deduce que el primer trmino (A) de la ecuacin de van Deemter debe ser cero, si el flujo de la columna es laminar. Los dos tipos ms importantes de columnas capilares son las de pared recubierta (WCOT) y con soporte recubierto (SCOT) (ver figura 10.4.), existiendo una tercera modalidad denominada de capa porosa (PLOT), cuyas caractersticas se resumen ms adelante. Las columnas de pared recubierta son sencillamente tubos capilares con la pared interna recubierta de una fina capa de fase estacionaria, mientras que en las columnas SCOT la superficie interna del capilar est recubierta de una fina capa de un material soporte recubierto a su vez de una fase lquida estacionaria. En general, la eficacia de una columna SCOT es menor que la de una columna WCOT, si bien bastante mayor que la de una columna empaquetada. Por ello, las columnas SCOT han sido sustituidas casi en su totalidad por las WCOT. Inicialmente, las columnas WCOT se construyeron con acero inoxidable, vidrio tratado qumicamente para que la superficie interna fuera rugosa, plstico y algunos metales como cobre o aluminio. Actualmente, casi todas son de slice fundida, fabricadas con slice prcticamente exenta de xidos metlicos y con un recubrimiento externo protector de poliimida. Las principales empaquetadas son: diferencias entre las columnas WCOT y las columnas

* Las columnas capilares proporcionan mayor resolucin que las columnas empaquetadas. Ello se debe a que la longitud de la columna es mayor, con lo que se aumenta el nmero de platos tericos, pudindose llegar a los 500000, frente a 10000 de las columnas empaquetadas. * El tiempo necesario para realizar un anlisis (tiempos de retencin) con columnas WCOT es menor que con columnas empaquetadas, como consecuencia del menor contenido de fase estacionaria, con lo que los solutos se retienen menos tiempo. * La cantidad de muestra utilizada con columnas capilares suele ser del orden de los nano-gramos, frente a los microgramos que se usan frecuentemente en las columnas empaquetadas. * Aunque en las columnas capilares se utiliza una cantidad de muestra considerablemente menor que en las columnas empaquetadas, el lmite de

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deteccin es del mismo orden de magnitud, debido a que con aquellas tiene lugar un menor ensanchamiento de las bandas, originndose picos estrechos bien definidos. Las fases estacionarias usadas en las columnas capilares suelen ser las mismas que en las columnas con relleno, si bien se denominan comercialmente de forma distinta. As, la fase SE30 (ver tabla 11.1.) corresponde con X1 en una columna WCOT, la OV210 con X200, la Carbowax 20M con XWAX, etc. En la prctica, con solo cuatro o cinco fases estacionarias diferentes, pueden separarse los componentes de casi todas las muestras a analizar, especialmente cuando se opera a temperatura programada. Asimismo, se han desarrollado fases estacionarias especiales para aplicaciones muy concretas, tales como muestras de productos petrolferos, fases quirales para la separacin de enantimeros, etc. Las columnas capilares de capa porosa consisten en columnas de slice en las que la fase estacionaria est constituida por partculas de un slido activo sobre su superficie interna. Con esta finalidad, desde 1981 viene utilizndose almina, en la que la actividad superficial se debe a la matriz AlOAl , si bien, dicha actividad puede modificarse por la adicin de sales, tales como KCl o Na2SO4. Estas columnas se desarrollaron inicialmente para el anlisis de compuestos de bajo peso molecular, tales como gases atmosfricos e hidrocarburos C1 a C6.

DETECTORES
Los solutos eluidos de una columna cromatogrfica se ponen de manifiesto mediante detectores que deben medir el componente minoritario en mezclas binarias muy diluidas. En CG se han utilizado numerosos mtodos de deteccin que van desde los ms sencillos, como la valoracin volumtrica directa, usado por Martin y James en sus trabajos iniciales, hasta los ms sofisticados, como el espectrmetro de masas.

Clasificacin
Debido a la gran diversidad de fenmenos fsicos o fsico-qumicos implicados en los mtodos de deteccin, no es fcil hacer una clasificacin racional de los detectores. De todas formas, suelen agruparse segn algunas caractersticas comunes en:

Cromatografa de gases * Integrales, diferenciales. * Destructivos, no destructivos. * Discriminativos, no discriminativos.

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Los detectores integrales proporcionan en cualquier instante una medida de la cantidad total del material eluido desde que comienza la deteccin. Los cromatogramas consisten en una serie de escalones cuyas alturas indican las cantidades de soluto (figura 11.6.a.). La bureta de Martin perteneca a este tipo de detectores. .
3

a)
2 Respuesta del detector

. b)
1 2

tiempo

Figura 11.6. Cromatogramas de la misma muestra. a) Detector integral. b) Detector diferencial.

Los detectores diferenciales responden a la primera derivada de la variacin de la concentracin del efluente en funcin del tiempo, y el cromatograma consiste en una serie de picos, como se muestra en la figura 11.6.b: Estos detectores tienen la ventaja sobre los integrales de su mayor versatilidad (ver ms adelante). Por otra parte, el rea de pico es la variable que normalmente se utiliza desde el punto de vista cuantitativo. Los detectores destructivos descomponen las sustancias durante el proceso de deteccin y suelen responder a la velocidad a la que la muestra pasa por el sistema de deteccin (flujo msico). Por su parte, los detectores no destructivos tienen la propiedad de no alterar los compuestos medidos y responden generalmente a la concentracin del compuesto medido en el gas portador. En cromatografa de gases

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preparativa o en sistemas multi-canales con varios detectores montados en serie, se han de emplear detectores no destructivos. Sin embargo, los muy sensibles, aunque sean destructivos, pueden aplicarse a la preparacin de compuestos puros. En estos casos, el efluente de la columna se divide en dos partes con un repartidor de caudal, pasando al detector una fraccin muy pequea del compuesto, y la mayor parte, a otro detector o al sistema colector de fracciones. Los detectores no discriminativos dan informacin de la cantidad de muestra eluida, pero no la identifican. Como los datos de retencin por s solos no suelen ser suficientes para caracterizar de forma inequvoca las sustancias, tiende a utilizarse detectores discriminativos. Los ms empleados son el espectrmetro de masas y el espectrmetro de infrarrojo. Por otra parte, existen detectores que pueden considerarse como intermedios entre unos y otros, pues solamente responden a un determinado nmero de compuestos y presentan cierto grado de discriminacin.

Caractersticas
Aunque ninguno de los mtodos de deteccin utilizados en CG puede considerarse como el detector universal, y tampoco parece probable que pueda llegar a disearse, el detector ideal debe reunir las caractersticas siguientes: * Sensibilidad adecuada. Puede considerarse que la sensibilidad es una medida de la magnitud de la seal originada por el detector para una cantidad o concentracin de analito determinada. Podra expresarse, por ejemplo, en mV/concentracin (mV.g1.s). En principio, la sensibilidad debera ser independiente de la concentracin de analito, por lo que la representacin grfica de la seal del detector frente a la concentracin sera lineal. Sin embargo, en la prctica, esta linealidad nicamente se observa en un margen de concentracin determinado. Por ello, el margen dinmico lineal de un detector se define como el intervalo de concentracin en el cual la respuesta es constante en un 5%. Generalmente se expresa por un nmero que representa la relacin entre la mxima y la mnima concentracin entre las que la respuesta del detector es lineal. La creciente demanda de anlisis de trazas en distintos campos ha estimulado el desarrollo de detectores cada vez ms sensibles. As, el conocimiento que actualmente se tiene sobre el impacto de trazas de contaminantes en los ecosistemas biolgicos ha creado un mercado de detectores muy sensibles para

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estudios de contaminacin de aguas, as como residuos de pesticidas en productos alimenticios*. * Buena estabilidad y reproducibilidad. La lnea base de un cromatograma est sometida a fluctuaciones fortuitas, conocidas como "ruido de fondo" (figura 11.7.a.), el cual se puede originar en los distintos componentes del instrumento, como los amplificadores, registradores, etc., as como en fluctuaciones del gas portador.
Respuesta del detector

b)
RN

a)
tiempo

Figura 11.7. Lneas base de cromatogramas. a) Ruido de fondo. b) Deriva.

Muchos de estos ruidos pueden eliminarse utilizando componentes de alta calidad y operando adecuadamente con el cromatgrafo, si bien, siempre existir un ruido inherente al detector, el cual, junto con la sensibilidad, establece el lmite de deteccin de un determinado soluto (ver en el Tema 1, "Sensibilidad y lmite de deteccin de los mtodos instrumentales"). En cromatografa, el lmite de deteccin suele considerarse como la mnima cantidad de muestra para la cual el detector proporciona una seal, S, de, al menos, el doble del nivel de ruido. En la prctica, esto corresponde a un pico cuya altura sea, al menos, el doble del nivel de ruido, S 2 RN y hmin 2 RN

Por otra parte, la lnea base puede desviarse, tal como se muestra en la figura 11.7.b., lo que se conoce con el nombre de "deriva". En ocasiones, la deriva se observa cuando en una operacin a temperatura programada la columna alcanza una temperatura a la que se volatiliza la fase estacionaria. * Tiempo de respuesta. El detector debe responder con rapidez a los cambios de concentracin del analito, si bien en el tiempo total de respuesta del cromatgrafo influyen tambin la inercia de otros componentes, como el registrador.
* Respecto a los niveles de contaminantes detectados en relacin con cuestiones medioambientales, es

preciso sealar que un nivel "cero" para un poltico significa cero, mientras que para un qumico analtico significa una cantidad inferior a la que puede detectarse con la metodologa disponible.

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* Versatilidad. El detector deber responder a una gran variedad de analitos y, a ser posible, proporcionar una respuesta semejante para todos ellos. Los detectores ms utilizados en cromatografa de gases, y de los que se indicarn seguidamente sus principales caractersticas, son el de conductividad trmica (TDC), el de ionizacin de llama (FID) y el de captura electrnica (ECD), si bien, tambin se usan otros, como el de nitrgeno-fsforo (NPD), el fotomtrico de llama (FPD), el de ionizacin (PID) etc.

Detector de conductividad trmica (TCD)

Se basa en los cambios de conductividad trmica de la corriente de gas ocasionados por la presencia del analito. Consiste en un filamento metlico o un termistor* que al calentarlo, en condiciones de estado estacionario, adquiere una temperatura por la conductividad trmica del gas que se encuentra en sus proximidades. Cuando cambia la composicin del gas, cambia la temperatura del elemento (filamento o termistor) y esto se refleja mediante un cambio en su resistencia elctrica. Las medidas absolutas de conductividad trmica son muy difciles de realizar, por lo que se emplea un mtodo de medida diferencial. Para ello, se utilizan dos clulas, conteniendo cada una de ellas un sensor. Por una pasa gas portador puro, y por la otra, el gas portador que sale de la columna cromatogrfica (figura 11.8.).
filamentos efluente de la columna bloque metlico

conexiones al puente de Wheatstone gas portador puro

Figura 11.8. Esquema de un detector de conductividad trmica.

* Los termistores son glbulos pequeos fabricados con mezclas de xidos metlicos, con una capa

protectora de vidrio y con un coeficiente de temperatura/resistencia elctrica extraordinariamente grande.

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Los elementos sensibles se hallan incorporados a un puente de Wheastone, de forma que cuando pasa solamente gas portador a travs de ambas clulas, el puente se equilibra a cero. Cuando se eluye de la columna algn componente, la conductividad trmica de la mezcla de gases vara, por lo que cambia la temperatura del elemento sensible, y como consecuencia de ello tambin la resistencia, desequilibrndose el puente. Con este tipo de detector deber usarse helio o hidrgeno como gas portador, ya que su conductividad trmica es mucho mayor que la de casi todos los compuestos orgnicos, de modo que, incluso en presencia de pequeas cantidades de materia orgnica, tiene lugar una disminucin relativamente grande de la conductividad trmica del efluente de la columna y, en consecuencia, el detector experimenta un marcado aumento de temperatura*. El detector de conductividad trmica es uno de los primeros detectores que se usaron en CG; es relativamente sencillo y no es muy caro. Responde adecuadamente a una gran cantidad de compuestos orgnicos e inorgnicos, con lmites de deteccin del orden de 109 g/mL. Por su parte, es un detector no destructivo y el margen lineal es de 104.

Detector de ionizacin de llama (FID)

Se basa en la conductividad elctrica de los gases. A temperatura y presin normales, los gases se comportan como aislantes, pero si en su interior existen tomos o molculas cargadas elctricamente, o electrones libres, se produce un incremento en la conductividad. El detector de ionizacin de llama, representado esquemticamente en la figura 11.9., consiste en un quemador en el que se produce una llama de hidrgeno, la cual origina muy pocos iones. Sin embargo, la energa trmica de la llama es suficiente para ionizar muchas molculas, con lo que aumenta la conductividad elctrica a travs de los compuestos de la llama. Entre el extremo del mechero y un segundo electrodo colector de iones se aplica un potencial de unos cientos de voltios, midindose la intensidad de la corriente originada por la ionizacin en la llama, la cual difiere de la presentada por el gas portador y la originada por una gran variedad de sustancias.
* Si se toma como referencia el helio, al que se le asigna un valor de 100 para su conductividad trmica, la

correspondiente para el hidrgeno es 128, mientras que para una gran cantidad de analitos orgnicos, los valores oscilan entre 6 y 17.

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Como las corrientes originadas son muy pequeas ( 1012 A) es necesaria la correspondiente amplificacin.
llama

amplificador

registrador aire H2

efluente de la columna

Figura 11.9. Detector de ionizacin de llama.

El detector de ionizacin de llama es uno de los ms utilizados actualmente. Responde a casi todos los compuestos orgnicos, mientras que es insensible a gases no combustibles como CO2, SO2, xidos de nitrgeno y el propio vapor de agua. Esto hace que el detector sea particularmente adecuado para el anlisis de compuestos orgnicos contaminados con agua, azufre u xidos de nitrgeno. Su sensibilidad es ms elevada que la del TCD (1012 g/mL) y presenta un gran intervalo lineal (107), si bien, se trata de un detector destructivo.

Detector de captura electrnica (ECD)

En el detector de captura electrnica se mide una prdida de seal cuando el analito se eluye de la columna cromatogrfica. En la figura 11.10. se representa un esquema del ECD, que opera de la forma siguiente: el gas portador, N2 Ar, se hace pasar a travs de una cmara que contiene un emisor de partculas (Ni-63 o tritio adsorbido sobre una lmina de platino) de alta energa, las cuales, al interactuar con dicho gas portador producen grandes cantidades de electrones trmicos que se dirigen hacia un electrodo colector (por aplicacin de un voltaje entre 1 y 100 V), originndose una corriente uniforme o corriente-base. N2 + <> N2+ + e Ar + <> Ar* + Ar+ + e

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columna

63 Ni

electrodo colector

Figura 11.10. Detector de captura electrnica.

Cuando molculas del analito con alta afinidad electrnica entran al detector, capturan algunos electrones segn el proceso, AB + e > AB y A. + B con lo que se produce una disminucin de la corriente. Esta seal se procesa electrnicamente para formar el cromatograma. El detector de captura electrnica tiene un lmite de deteccin pequeo (1016 mol/mL) y no altera la muestra significativamente, si bien la respuesta no es lineal, aunque, pulsando el voltaje, puede alcanzarse un margen lineal de 0.5 a 103. La mayor ventaja de este detector es su selectividad, no respondiendo a hidrocarburos (excepto algunos aromticos), alcoholes y cetonas, mientras que es especialmente sensible a molculas que contienen halgenos, grupos carbonilo conjugados, grupos metilo, compuestos nitro y compuestos organometlicos. Por ello, muchas de sus aplicaciones inciden en anlisis de trazas de muestras medioambientales para disolventes clorados, gases clorofluorocarbonos, pesticidas y herbicidas (DDT, BHC/lindano, aldrn), organometlicos (plomo tetraetilo), hidrocarburos aromticos polinucleares cancergenos, etc.

APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFIA GAS-LIQUIDO

Las aplicaciones ms numerosas de la CGL se encuentran en el campo del anlisis cualitativo y cuantitativo de mezclas complejas de compuestos orgnicos. Aunque la cromatografa es bsicamente un mtodo de separacin, de cada cromatograma se

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obtiene informacin cualitativa a partir de la posicin de los picos, y cuantitativa, a partir de la medida de su altura o de su rea.

Anlisis Cualitativo
Tericamente, el tiempo de retencin o el volumen de retencin de un determinado soluto, obtenido en una columna particular a una temperatura y velocidad de flujo controlados cuidadosamente, es una propiedad caracterstica suya, como lo es el punto de ebullicin o el ndice de refraccin, y podra servir para identificarlo. Sin embargo, cuando se parte de una muestra totalmente desconocida, es prcticamente imposible identificar sus componentes por este procedimiento, ya que los miles de compuestos conocidos hace que existan demasiadas posibilidades entre las que elegir. En este sentido, la CG no puede competir con tcnicas como la espectrometra de masas, la espectrometra de infrarrojo o la resonancia magntica nuclear. Afortunadamente, el analista no siempre se enfrenta con muestras totalmente desconocidas, por lo que, en muchos casos, el problema puede resolverse cromatogrficamente. Para ello pueden seguirse varios caminos. El procedimiento ms simple de anlisis cualitativo se realiza con ayuda de patrones: los tiempos de retencin de los picos desconocidos se comparan con los

tiempos de retencin de compuestos conocidos, separados en la misma columna y en las mismas condiciones experimentales. Como alternativa, si se sospecha la

existencia de un determinado compuesto en una mezcla, se aade ste, con lo que el rea de ese pico aumentar respecto a los otros picos del cromatograma. Esta identificacin no es definitiva cuando se realiza con un mismo tipo de columna, pero es casi concluyente cuando se hace con dos o ms tipos de columnas. Es muy poco probable que dos compuestos con el mismo tiempo de retencin en una fase estacionaria tengan el mismo tiempo de retencin en dos fases estacionarias distintas.

El tiempo de retencin no es el parmetro ideal para la identificacin de un compuesto, ya que, como se ha mencionado, depende de la temperatura, velocidad de flujo y volumen de fase lquida. Por ello, es ms adecuado utilizar un parmetro que sea independiente de dichos factores. En este sentido. se han propuesto los ndices de retencin de Kvats, los cuales relacionan el volumen de retencin, VR (o el tiempo de retencin, tR) del compuesto desconocido con el de dos alcanos lineales que se eluyan inmediatamente antes y despus del compuesto problema. Para ello, a cada uno de los dos alcanos lineales se adscribe un ndice I, dado por, I = 100 n

Cromatografa de gases siendo n el nmero de tomos de carbono del alcano. El ndice de retencin del compuesto desconocido se obtiene de la expresin:

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I = 100
donde,

log VR problema log VR log VR log VR

x+1 x1

x1

+ 100 x

VR(problema) = volumen de retencin del compuesto desconocido. VRx1 = volumen de retencin del alcano eluido antes del compuesto desconocido. VRx+1 = volumen de retencin del alcano eluido despues del compuesto desconocido. x = nmero de tomos de carbono del alcano eluido antes del compuesto desconocido. La escala logartmica de la ecuacin anterior se debe a que el logaritmo de los volmenes de retencin en las series homlogas vara linealmente con el nmero de tomos de carbono (figura 11.11.)
.
nonano

octano

log V R

.
heptano

hexano

n Figura 11.11. Relacin entre VR y n para la serie homloga de los alcanos.

La identificacin de componentes a partir de datos de retencin no es un mtodo general aplicable a todo tipo de muestras. Otra forma de identificacin consiste en recoger los efluentes de las columnas en trampas y analizarlos mediante tcnicas qumicas o fisicoqumicas, si bien, esta forma de operar est condicionada por las pequeas cantidades de muestra colectadas. En los procedimientos de

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identificacin ms sofisticados, los efluentes de la columna se pasan directamente a un detector discriminativo, como el espectrmetro de masas o de infrarrojo. La asociacin cromatografa de gases/espectrometra de masas (CG/EM) proporciona una herramienta muy potente para la identificacin de los componentes de una mezcla compleja. La figura 11.12. muestra un diagrama de bloques donde se indican los componentes principales de un sistema CG/EM controlado por un computador.
Espectrmetro de masas

Cromatgrafo de gases

Analizador

Interfase

Cmara de ionizacin

de masas

Detector

Sistema de vaco

Computador

Registrador

Figura 11.12. Sistema cromatografa de gases/espectrometra de masas.

La interfase o conexin entre el cromatgrafo y el espectrmetro deber tener un volumen muerto que sea mnimo, con objeto de no provocar ensanchamiento de bandas cromatogrficas. Por otra parte, deber reducir convenientemente la presin, ya que la columna cromatogrfica opera normalmente a una presin ligeramente superior a la atmosfrica, mientras que en el interior del espectrmetro la presin es inferior a 103 torr. Asimismo, y sobre todo cuando se opera con columnas de relleno, deber reducirse el caudal a introducir en el espectrmetro, lo cual se consigue mediante dispositivos separadores. La formacin de iones se produce en la cmara de ionizacin, donde los electrones emitidos por un filamento caliente son acelerados y dirigidos hacia un nodo colector. En su trayectoria chocan con las molculas orgnicas del analito, originndose iones moleculares y, en muchos casos, iones secundarios como consecuencia de procesos de fragmentacin, M + e > M+ + 2 e > A+ + B+ + C+ etc. (M+: in molecular)

Cromatografa de gases

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El papel que desempea el analizador de masas es separar los iones emergentes de la cmara de ionizacin segn su relacin masa/carga. Con esta finalidad se utilizan dispositivos de dos tipos: espectrmetros de sector magntico y de cuadrupolo. Los detectores pueden presentar los datos de dos formas: a tiempo real y reconstruidos por ordenador. Hay que considerar que cada especie que emerge de la columna cromatogrfica origina, adems del in molecular, todo un conjunto de picos correspondientes a los distintos tipos de fragmentaciones, por lo que el nmero de especies detectadas por el espectrmetro puede ser considerable. La identificacin de compuestos se hace por comparacin con colecciones de espectros de masas de sustancias conocidas. Una vez completada la separacin, los cromatogramas pueden reconstruirse por ordenador y presentarse en una pantalla o imprimirse. En la figura 11.13.a. se muestra el cromatograma de una mezcla constituida por acetaldehido, etanol, acetona y benceno, y en la figura 11.13.b. el espectro de masas del pico correspondiente al benceno.
1. acetaldehido 2. etanol 3. acetona 4. benceno 1 3 2 4

. a)

tiempo

20

40

60

80

100

120

b)

m/z

Figura 11.13. a) Cromatograma reconstruido por ordenador. b) Seales del pico nmero 4 (benceno).

El espectro infrarrojo de un compuesto puede considerarse como su huella digital, y puede utilizarse para su identificacin, por comparacin con espectros estndar. Los primeros acoplamientos cromatografa de gases/espectrometra infrarroja datan de 1967, si bien su aplicacin prctica no tuvo lugar de forma inmediata debido a las dificultades derivadas de la baja sensibilidad y del tiempo necesario para obtener cada espectro con un instrumento convencional. Actualmente, con espectrmetros de infrarrojo de Transformada de Fourier, se requieren tiempos del orden de 0.2 segundos, que son perfectamente compatibles con las anchuras de pico obtenidas con columnas capilares. Igual que en el caso de la CG/EM, se dispone de colecciones de espectros digitalizados y sistemas de bsqueda para manipular la enorme cantidad de datos que producen los instrumentos mencionados.

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Anlisis Cuantitativo
La cromatografa de gases es una poderosa herramienta de la que dispone el anlisis cuantitativo para mezclas complejas. Como ya se indic en el Tema 10 (en la seccin "La Cromatografa y el Anlisis Qumico") el parmetro cuantitativo es el rea de pico (con detectores diferenciales, que son los que se utilizan casi siempre), y no las alturas de pico, por depender stas de un gran nmero de variables. Las reas de pico se obtienen por mtodos convencionales, tales como triangulacin, planimetra o mediante el uso de integradores, mecnicos o electrnicos. La obtencin del calibrado se basa en la utilizacin de patrones y se obtiene operando como se indica en la seccin ya mencionada del Captulo anterior.

Determinaciones indirectas por cromatografa de gases

Existe una gran cantidad de compuestos qumicos que no pueden ser analizados directamente por cromatografa de gases, bien porque no sean suficientemente voltiles o por otros motivos. En muchos casos, puede llevarse a cabo la determinacin indirecta aplicando alguno de los mtodos que seguidamente se mencionan. Derivatizacin. Puede estimarse que entre el 80 y 90 % de los compuestos orgnicos no son adecuados para su determinacin directa por CG debido a su baja volatilidad. Tal es el caso de una gran cantidad de muestras biolgicas, como protenas, hidratos de carbono, aminocidos, etc. Una solucin a esta aplicabilidad limitada est en la preparacin de derivados adecuados, para lo que se utilizan normalmente los mtodos de sililacin, acilacin y esterificacin. La sililacin es la tcnica de derivatizacin ms empleada, y consiste en la sustitucin de algn tomo de hidrgeno activo del analito por un grupo trialquilsilil, tal como Si(CH3)3. As, por ejemplo, la reaccin entre un alcohol y trimetilclorosilano transcurre segn, R-OH + Cl-Si(CH3)3 > R-O-Si(CH3)3 + HCl Estos procesos se llevan a cabo normalmente usando piridina como disolvente y suelen ocurrir muy rpidamente. La esterificacin consiste generalmente en la formacin de steres metlicos, para lo cual se pueden emplear distintos reactivos, utilizndose con frecuencia trifluoruro de boro en metanol,

Cromatografa de gases R-COOH + CH3OH/BF3 > R-COOCH3

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La acilacin con anhidrido de cido o con acil-imidazoles se usa para transformar alcoholes y aminas primarias y secundarias en derivados estables

R-OH +

R1 CO R1 CO

O N

R1 -COOR + R1 -COOH N .

R-OH + R1 -CO-N

R1 COOR + HN

En muchas ocasiones se utilizan derivados fluorados para aumentar la sensibilidad cuando se usa un detector de captura electrnica. El mayor inconveniente de los mtodos de derivatizacin reside en la necesidad de utilizar una cantidad de muestra relativamente grande y la posibilidad de que se pierda algo del componente de inters. Adems, el exceso del reactivo utilizado puede reducir el tiempo de vida de la columna si no se elimina antes de la inyeccin. Cromatografa de espacio de cabeza. Es una tcnica que hace posible la determinacin de los constituyentes voltiles de muestras slidas o lquidas por anlisis de la fase de vapor que est en equilibrio termodinmico con la fase slida o lquida. Dichos voltiles pueden determinarse en casi todo tipo de matrices sin necesidad de recurrir a procesos de extraccin, disolucin o incluso dilucin. Para ello, las muestras se colocan en dispositivos adecuados que se mantienen a temperatura constante el tiempo suficiente para que se establezcan los equilibrios slido o lquido/vapor correspondientes y seguidamente se transfiere un determinado volumen de la fase gaseosa a la columna cromatogrfica. La temperatura debe ser controlada de forma precisa debido a la dependencia entre esta variable y la presin de vapor y, por supuesto, la calibracin tiene que hecerse en idnticas condiciones a las de la muestra. La determinacin de especies voltiles en alimentos se lleva a cabo en muchas ocasiones utilizando la tcnica cromatogrfica de espacio de cabeza. Los compuestos voltiles presentes en muchos alimentos pueden ser aceites esenciales, compuestos aromatizantes o bien, distintos disolventes. Estos pueden proceder de la elaboracin de los propios alimentos (acetona en la purificacin de ciertas grasas, diclorometano en el caf descafeinado, etc.) o del material utilizado para el envasado (disolventes empleados en la fabricacin de las tintas usadas). En cualquier caso, en los alimentos, la proporcin entre las materias no voltiles y las sustancias voltiles es muy elevada,

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por lo que si se introdujera la totalidad de la muestra en la columna, probablemente sta se inutilizara rpidamente. Sin embargo, mediante la tcnica de espacio de cabeza, se resuelve fcilmente el inconveniente mencionado. Pirlisis en cromatografa de gases. Una gran cantidad de materiales slidos pueden analizarse indirectamente por cromatografa de gases sometindolos a pirlisis. Para ello, la muestra se calienta en la cmara de inyeccin de un cromatgrafo de gases a una temperatura a la que tenga lugar su descomposicin. Cromatografiando los productos originados en el proceso de pirlisis, es posible, al menos tericamente, elucidar la estructura del material original. El mtodo ms comn para pirolizar muestras consiste en la utilizacin de un filamento metlico, con frecuencia de platino, que se calienta elctricamente. A veces, los productos de pirlisis pueden identificarse, pero a menudo, se obtiene un patrn complejo con muchas bandas de elucin no identificadas. En cualquier caso, con esta tcnica se obtiene algo as como una "huella digital" de la muestra.

Aplicabilidad de la cromatografa gas-lquido

Las aplicaciones concretas de la CGL son extraordinariamente numerosas, pues cada ao se publican miles de artculos en relacin con el tema y la tcnica se ha extendido a muchos otros campos aparte de la qumica. Por ello, a continuacin solo se mencionan algunas aplicaciones puntuales de inters. En anlisis de alimentos, ya se ha mencionado que la tcnica de espacio de cabeza se usa frecuentemente para determinar especies voltiles, las cuales son, en muchas ocasiones, responsables de olores y sabores caractersticos. A veces se recurre a procesos de derivatizacin, tales como la formacin de steres metlicos para la determinacin de lpidos y cidos grasos, hidrlisis cida seguida de esterificacin para las protenas, o procesos de sililacin para hidratos de carbono. El anlisis de drogas por cromatografa de gases suele complementarse por HPLC, si bien, en anlisis fornsico se utiliza extensamente la CG para la caracterizacin de ciertas sustancias. El material de partida suele ser muy diverso; desde preparaciones comerciales a fluidos biolgicos (sangre, orina). lo que hace necesaria la correspondiente extraccin previa. Adems, en ocasiones, despus de la extraccin o disolucin se requiere un proceso de derivatizacin. La pirlisis en CG se utiliza para la caracterizacin de alquitranes, pinturas, pelculas y fibras sintticas, e incluso material biolgico. As, por ejemplo, se ha

Cromatografa de gases

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descrito la caracterizacin de hasta cuarenta y siete especies de Salmonella de forma correcta en muestras de la bacteria sometidas a pirlisis. La CGL se aplica extensamente para el seguimiento y control de la distribucin de contaminantes en el medio ambiente. En este sentido, y por ejemplo, la Agencia de Proteccin del Medio Ambiente en Estados Unidos y la Union Europea ha publicado un conjunto de mtodos para el anlisis de polutantes en aguas*, donde se incluyen hasta 40 derivados clorados, 40 organofosforados y varios carbamatos. En relacin con la contaminacin atmosfrica, unos compuestos particularmente importantes por su elevada peligrosidad son las dibenzo-p-dioxinas policloradas (PCDD)**
O

Cl

Cl

O Cl x Cl y

Cl

Cl

PCDD

TCDD

Se conocen unos 75 ismeros de PCDD, muchos de los cuales se han identificado en las emisiones de los incineradores de basura municipales, tanto en las cenizas arrastradas por el aire, como en las emisiones de las chimeneas. El procedimiento de anlisis utilizado consiste en la toma de muestras atmosfricas con dispositivos especiales, someter a las cenizas a un tratamiento cido, seguido de extraccin con tolueno y metoxietanol y, finalmente, separar los compuestos por cromatografa gaslquido (o por HPLC) e identificarlos por CG-EM. Por otra parte, hidrocarburos aromticos (benceno, tolueno) en gases de escape de automviles pueden determinarse fcilmente por CGL con detector de ionizacin de llama y polietilenglicol como fase estacionaria. Aunque muchos compuestos inorgnicos no son voltiles, pueden ser analizados por CG transformando las especies metlicas en derivados voltiles. Con esta finalidad y para la determinacin de ciertos elementos metlicos (Be, Al, Cu, Fe, Cr) se recurre a la formacin de quelatos bastante voltiles con acetilacetona y sus derivados fluorados.

for Solid Waste, Method Series 8000. US Environmental Protection Agency, Cincinnati OH. ** La variedad tetraclorada, TCDD, alcanz una lamentable notoriedad a nivel internacional como consecuencia del vertido a la atmsfera, a causa de una explosin, de unos 600 Kg del compuesto, en el verano de 1976 en la localidad de Seveso.

* USEPA, Determination of Organic Compounds in Drinking Water, Method Series 500; GC Methods of Analysis

Claudio Gonzlez Prez

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CROMATOGRAFIA GAS-SOLIDO
La cromatografa gas-slido se basa en la adsorcin de especies gaseosas sobre fases estacionarias slidas. Puede considerarse que es una tcnica complementaria de la CGL, si bien se utiliza de forma mucho ms limitada que sta. Ello se debe, entre otras cuasas, a que las isotermas de adsorcin son frecuentemente no lineales, excepto para concentraciones muy bajas de soluto, lo cual se traduce en la formacin de picos asimtricos y tiempos de retencin que dependen del tamao de la muestra. Adems, los tiempos de retencin suelen ser excesivamente grandes, debido a la gran rea superficial de los adsorbentes, y, por otra parte, muchos adsorbentes son difciles de preparar y estandarizar de forma reproducible. Por otra parte, muchos adsorbentes son activos catalizadores. La instrumentacin en CGS es la misma que en CGL, excepto en la naturaleza de la fase estacionaria. Esta puede estar contenida en columnas empaquetadas y tambin en columnas tubulares abiertas (ver figura 10.4.a.). Los principales adsorbentes utilizados como fase estacionaria son slice, almina, tamices moleculares y polmeros porosos. La slice porosa se encuentra disponible comercialmente en una gran variedad de reas superficiales y dimetros de poro. Aquellas comprenden desde 185 (tipo B) a 100 (tipo C) m2/g y los dimetros varan entre 15 y 30 nm respectivamente. Estas fases estacionarias se aplican fundamentalmente para la determinacin de hidrocarburos saturados y no saturados de bajo peso molecular. La almina es una sustancia de polaridad elevada que interacta fuertemente con molculas polares, tales como el agua. La activacin por calefaccin a temperaturas superiores a 500 C produce un incremento en la polaridad por prdida de agua, y la absorcin de sta la reduce, alcanzndose un mnimo cuando se absorbe una cantidad suficiente para formar una mono-capa. El rea superficial tpica es del orden de 250 m2/g y la superficie puede modificarse por adicin de sales inorgnicas. Los tamices moleculares constituyen unas fases estacionarias ampliamente usadas en cromatografa. Suelen ser zeolitas preparadas artificialmente con sodio,

Cromatografa de gases

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potasio y alumino-silicatos. Su estructura se muestra esquemticamente en la figura 11.14., donde se representa la interconexin de ocho cubos-octaedros de Si, Al y O para originar una cavidad dentro de la cual pueden penetrar molculas pequeas que son parcialmente retenidas, siendo posible la separacin de mezclas conteniendo O2, N2, CO2, H2, CH4, etc. Los tamices moleculares son excelentes agentes deshidratantes para el gas portador por su gran afinidad por el agua, la cual es retenida con prioridad antes que cualquier otra molcula. Cuando se utilizan con esta finalidad pueden regenerarse calentando a 300 C en el vaco o en atmsfera de nitrgeno. La separacin de hidrocarburos ligeros (C1C3) y gases permanentes puede llevarse a cabo con tamices moleculares de carbono, constituidos por un esqueleto carbonoso formado por pirlisis de materiales polimricos, si bien, los carbonos activos son slidos difciles de preparar de forma reproducible.
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cavidad abierta
Figura 11.14. Estructura de tamices moleculares

Los polmeros microporosos se obtienen normalmente por co-polimerizacin de divinilbenceno con estireno u otros monmeros. La naturaleza precisa del mecanismo de las separaciones con estos materiales no se conoce con exactitud, pues, junto con un proceso de adsorcin, parece que tiene lugar algo de reparto, si bien predomina aquel, especialmente a bajas temperaturas. Estas sustancias se aplican en cromatografa para la separacin de especies gaseosas polares, tales como xidos de nitrgeno, sulfuro de hidrgeno, dixido de carbono, metanol y otras.