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BIOLOGO MICROBIOLOGO
MEDIOS DIFERENCIALES
'on empleados para detectar reacciones bioqumicas, con car$cter di%erencial de grupos, g"neros o especies microbianas, mediante el vira&e de color del indicador presente en el medio, demostrando algunas de sus caractersticas# Estos medios son el /'0, )0*, 1itrato de 'immons, '0+, 1aldo .rea#
Es el acto de colocar el material bacteriolgico en el medio de cultivo para promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicacin# El resultado de una siembra se llama : Cul'i-o 2 )as siembras pueden ser:
, Pri+!ri!$: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez , Se u%)!ri!$: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria MTODOS GENERALES: ./ SIEMBRA POR DILUCI0N: 'e toma el tubo de ensayo con medio lquido, como el caldo simple# 'e toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el material bacteriolgico, se agita, con movimientos moderados# Me)io )e ul'i-o: )iquido I%$'ru+e%'o: *sa Fi%!li)!): poner la bacteria en suspensin 1/ SIEMBRA POR ESTR2AS SIMPLE: 'e siembra el material en la super%icie de el agar inclinado en un tubo de ensayo, all se e(tiende por toda la super%icie con el asa bacteriolgica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo estras no muy amplias, pero tampoco muy estrechas# 'e inicia por la parte m$s pro%unda de la super%icie inclinada y se termina la estra en la parte m$s cerca de la boca del tubo# +edio de cultivo: agar base inclinado 0nstrumento: asa o agu&a bacteriolgica
En este medio sembraremos por picadura y estras en super%icie, como ya conocemos, para estudiar los cambios que ocurrir$n en super%icie y pro%undidad# * lo largo del canal se desarrollan los microorganismos, y seg.n lo hagan en la parte superior o in%erior del tubo, estar$n indicando su comportamiento %rente a los azucares, los cambios indican lo siguiente:
PROCEDIMIENTO:
/eniendo la sepa de e# coli vamos a sembra por estra E# coli )uego sembramos en cada uno de los agar las pruebas bioqumicas o di%erenciales
SIEMBRAS
TSI: 'embrado por puntura y estra SIM: 'embrado por puntura UREA: 'embrado por estra simple CITRATO: Estra simple
FUNDAMENTO:
En este medio se busca determinar la capacidad de la bacteria para degradar y los azucares y la %ormacin de gas y 9:'# la %ermentacin aerobia se produce en pico del tubo y la anaerobia en el %ondo del tubo# )a degradacin de la lactosa ocurre en la parte superior, la de la sacarosa en la parte intermedia y de la glucosa en la parte pro%unda produci"ndose un vira&e de ro&o a amarillo El tiosul%ato es reducido a 9:' quien reacciona con el citrato %"rrico amoniacal para dar %ormacin a sul%uro de %ierrro que es de color negro
FORMACION DE GAS
FORMACION DE 91S
la desaminacin de la lisina en un al%a ceto$cido# Estas dos reacciones se ponen de mani%iesto por el vira&e del indicador p.rpura de bromocresol ' )a %ormacin de 9:' se pone de mani%iesto por la presencia del tiosul%ato sdico, que dar$ %ormacin al sul%ato %"rrico
CITRATO
CARACTERISTICA COLOR: Ver)e IN9IBIDORES: no tiene INDICADOR: azul de bromo cresol SUSTRATO PRINCIPALES: citrato de sodio SUSTRATO SECUANDARIO: %os%ato dipotasio, cloruro de sodio, sul%ato de magnesio y %os%ato monoamonio FUNDAMENTO Nos permite comprobas la capacidad de la bacteria de utilizar el citrato como .nica %uente carbono )a degradacin del citrato conlleva a la alcalinizacin del medio y el vira&e del indicador azul de bromo timol de verde a azul 3rusia 1on este medio podemos di%erenciar entre las coli%ormes %ecales y itrobacter como algunas especies de Salmonella
MEDIO I%)ol,
SIM 6Sul;uro,
Mo'ili)!)/ CARACTERISTICA COLOR: crema, transparente IN9IBIDORES: no tiene INDICADOR: no tiene SUSTRATO PRINCIPALES: peptona SUSTRATO SECUANDARIO: tisul%ato de sodio, hierro y amonio Este medio se utiliza para comprobar la movilidad, la produccin de h:s y la produccin de indol por parte de la bacteria FUNDAMENTO El tript%ano es un amino$cido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser o(idado por algunas bacterias para %ormar indol# En el proceso interviene un con&unto de enzimas llamadas tripto%anasa# El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de <ovac=s o de Erlich, para originar un compuesto de color ro&o# )as cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sul%hdrico se distinguen por la %ormacin de un precipitado negro de sul%uro de hierro a partir del tiosul%ato siempre que el medio se mantenga a un p9 mayor a >#:#
MOVILIDAD
9IDROGENO SULFURADO: *qu se estudia el metabolismo de la cisteina que posee dos mol"culas de asu%re,'- que ser$n liberados como 9:' por accin de la cisteinasa y con la presencia de sales %errosas %ormaran ':5e que le dar$ un precipitado de color negro
INDOL:
para la demostracion de indol de usa el reactivo de <obacs, que mani%iesta la degradacion del tripto%ano por la enzima tripto%anasa en indol, que se combina con el aldehido,paradimetilbenzaldehido- presente en el reactivo de <obacs, para producir un color ro&o
UREA 1*?*1/E?0'/01* 1O)O?: *+*?0))O 0N@01*@O?: no tiene 'A'/?*/O 3?0N103*)E': Area 'A'/?*/O 'E1A*N@*?0O: e(tracto de levadura, %os%ato monopotasio y %os%ato dipotasio
FUNDAMENTO: 'e observa la capacidad de la bacteria de degradar la urea por medio de la enzima ureasa %ormando amoniaco y carbonato de aminio, que alcaliniza el medio por lo cual el ro&o de %enol vira a un ro&o cereza
BIBLIOGRAFIA
)ibro medio de cultivo , +*NAE) +EN@O ?AB0O )ibro microbiologa , AN0CE'0@*@ 1*DE/*NO 9E?E@0*-
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