El Recobro Mejorado con Microorganismos (MEOR) es una tecnologa alternativa terciaria donde el metabolismo microbiano (biomasa, biopolmeros, gases,

cidos, solventes, enzimas y sulfatos activos) y sus actividades (metabolismo de hidrocarburos) se utilizan para mejorar la recuperacin de crudo residual de agotamiento y depsitos marginales, extendiendo as la vida del yacimiento.

Esta tecnologa se aprovecha de la capacidad de los microorganismos autctonos o inyectados para sintetizar productos tiles mediante la fermentacin de materias primas econmicas. Como ya se haba hablado, las ventajas de MEOR es que, no consume grandes cantidades de energa, ni depender del precio del petrleo como muchos procesos qumicos. Adems, los productos microbianos son biodegradables y tienen baja toxicidad.
DEGRADACION DE FRACCIONES PESADAS DEL PETROLEO POR MICROORGANISMOS Promueve la reduccin de la viscosidad del aceite y la mejora de su movilidad a travs del depsito. Pocos estudios presentan a las cepas de Bacillus como posibles degradadoras de n-alcanos. Pero se demostr que B. subtilis permite la degradacin de las fracciones de mayor crudo parafnico, aumentando as las caractersticas de flujo del depsito. PRODUCCION DE BIOSURFACTANTES Entre ellos, los biosurfactantes lipopptidos producidos por la especie de Bacillus son capaces de generar la baja tensin interfacial entre el hidrocarburo y las fases acuosas que se requieren para movilizar el crudo atrapado

La Produccin de biosurfactantes por microorganismos in situ, constituye un mecanismo eficaz para recuperar grandes cantidades del crudo residual de los campos petroleros Como se sabe, para aumentar el potencial MEOR es importante combinar mltiples mecanismos, tales como la degradacin de fracciones pesadas del petrleo y la produccin de biosurfactantes, que pueden ser obtenidos mediante el uso de cepas de microorganismos con diferentes propiedades.

Para este trabajo, se utiliz:

MICROORGANISMOS Tres cepas de BACILLUS SUBTILIS productoras de biosurfactantes y degradadoras de crudo. (#309, #311 y #573) * Condiciones: Temperatura: -80C 20% (v/v) de glicerol. Medio de suplemento: (LURIA BERTANI) NaCl 10.0 (g/l) Triptona 10.0 (g/l) Extracto de levadura 5.0 (g/l) pH= 7.0

*(aisladas de una muestra de crudo de un campo de petrleo de brasileo.)

MODELO DE COLUMNA SAND-PACK: Las columnas de paquetes de arena fueron diseadas y simuladas como depsito de petrleo y usadas para evaluar el efecto de los microorganismos en la recuperacin del petrleo. Consiste en unas columnas de acrlico Orientadas verticalmente con un volumen de 250ml, uniformemente empacadas con acido y lavadas con arena. Las columnas contenan un tamiz y una tapa fija en el fondo. Las tapas finales de de ambas columnas fueron provistas con orificios para la insercin de entrada y salida de tubos. Estos orificios fueron rodeados y sellados hermticamente con Anillos de caucho.

SEGUNDA COLUMNA En la segunda columna, el hidrocarburo fue inyectado de la misma manera, reemplazandolo por agua hasta que no hubiera un efluente de salida de agua. El petrleo inicial (OOIP, ml) fue calculado como el volumen de hidrocarburos retenidos en la columna. La saturacin inicial del petrleo (Soi,%) y la saturacin inicial del agua(Swi,%) fueron calculados asi:

CONDICIONES DEL EXPERIMENTO El experimento se llevo a cabo a 40c usando petrleo pesado. PRIMERA COLUMNA La primera columna fue bombeada con agua a un flujo constante de 3 ml/min. El volumen del poro (PV,ml), definido como el volumen vacio del modelo, fue calculado midiendo el volumen de agua requerido para la saturacin de la columna. La porosidad (%) de la columna fue calculada tomando PV dividido por el volumen total de la columna (250ml). OOIP original oil in place = aceite original in situ es la cantidad de aceite o petrleo q se encuentra en el yacimiento. SOI saturacin de aceite inicial es el porcentaje de los poros de la roca q est ocupado por determinado fluido en este caso el petrleo. El porcentaje se obtiene respecto a la cantidad total de fluido en el yacimiento

El modelo de columna SAND-PACK fue encubado a 40c por 24 horas y despus fue inundada de nuevo con agua para remover el exceso de hidrocarburos. La cantidad de aceite recuperado despus de la segunda inundacin con agua fue determinado volumtricamente. La saturacin de aceite residual (Sor) fue calculada con la siguiente expresin:

Saturacin de aceite residual Sor. Es lo q queda de la saturacin de petrleo, es decir el punto al cual el petrleo ya no fluye mas. El crudo residual fue sometido a procesos microbiales de recuperacin, Las de columnas fueron inoculadas con 50ml de diferentes cepas de bacterias aislados en un medio llamado MSS(OD600nm=0.2) Selladas y encubadas durante 14 dias a 40c. Las columnas de control fueron inoculadas solo con MSS e incubadas a las mismas condiciones

El MSS consiste en (g/l) de:

NA:CL 10:0; NA2HPO4 5:0, KH2PO4 2:0; MGSO4 7H2O 0,2; Sacarosa 10.0

Despus de la incubacin la columna fue inundada con agua y el volumen de hidrocarburo recuperado despus de la inundacin microbial (Sormf, ml) fue medido. Adicionalmente el petrleo recuperado(AOR%) fue calculado de la siguiente manera

Saturacin de petrleo residual a la primera presin de fondo Sormf Saturacin de petrleo residual a cualquier presin de fondo Sorwf

DETERMINACION DE LA DEGRADACION DE HIDRUCARBUROS El crudo adicional recuperado en el final tratamiento en las columnas sand-pack fue diluido a (20mg/ml) en diclorometano para una cromatografa de gases (GC). El Analisis por cromatografa de gases para cada muestra fue realizado con CP 3800 . Variando el gas con el equipo de cromatografa con una columna de inyeccin. Se utiliz Helio como gas cargador y un flujo constante de 18ml/min El inyector y detector de temperaturas fue de 350 y 370c respectivamente. La temperatura del horno fue establecido a 40c durante 5 minutos, incrementndose a 350c a una rango de 5c/min y duro hasta los 350c. Durante 15minutos todas las muestras fueron analizadas tres veces

RESULTADOS Y DISCUSIONES Bacillus subtilis #309, #311 y #573 fueron usados para la recuperacin de crudo pesado usando columnas de SAND-PACK. Con el previo aislamiento de los microorganismos, stos mostraron diversas propiedades que podran ser untilizadas en MEOR. Ellos pueden crecer bajo condiciones anaerbicas en presencia de crudo, en medio de concentraciones de NaCl por mas de 100g/l y una temperatura mayor a 50C. Los biosurfactantes producidos por estos microorganismos muestran toleracncias a medios salinos y temperaturas altas. Reducen la tensin superficial por arriba de 30mN/m, Emulsifican los hidrocarburos y las concentraciones de la biomasa es my baja.

En la siguiente tabla se pueden observar los resultados promedio obtenidos de los 3 experimentos con los 3 tipos de bacillus con su desviacin estndar.

Explicacion de los datos obtenidos *El volumen del poro de las columnas rankiadas fue mas o menos desde 93 hasta 96.5 ml *La porosidad fue entre 37.2 y 38.6%

*El OOIP vari desde 90 hasta 93 ml significando que mucha agua que estaba presente en la columna fue remplazada por el petrleo. Despus del proceso de inundacin con agua ms del 55% de crudo residual permanece en las columnas. *Los porcentajes de saturacin (siguientes en la tabla) fueron hallados con las formulas anteriormente descritas. Despus del proceso de inundacin, el 55% de crudo que permanece es recuperado gracias a la accin de los microorganismo que fueron introducidos dentro de las columnas con los nutrientes adecuados (MSS) y encubados durante 14 dias a 40c (como ya se haba dicho anteriormente). Gracias a la accin de los microorganismos (podemos ver en la tabla) se puede apreciar que el porcentaje de crudo adicional fue de #309(15.4%) y las cepas #311 y #573 tuvieron resultados similares (17.1-17.7%) Tomando en cuenta la cantidad de petrleo recuperado en la columna de control (cerca de un 7%) podemos concluir que 8-10% del petrleo fue recuperado debido a la accin de los microorganismos. DEGRADACION DE HIDROCARBUROS Wt variacin (%) -Las respectivas variaciones de la fraccin del peso relativo de cada n-alcalino presentado en el petrleo pesado son ilustrados en la figura

EXPLICACION DE LA GRAFICA El crudo recuperado fue analizado por cromatografia de gases GC y la degradacin relativa de cada n-alcano fue medida. La figura muestra la variacin del peso relativo de los n-alcanos presentes en el crudo pesado despus del tratamiento en las columnas de arena empaquetada SAND-PACK que contenan los tres tipos de cepas de bacterias #309, #311 y #573. Por catorce das a una temperatura de 40 oC como se compar con el control de barras de errores representados en el porcentaje de error. El anlisis por cromatografa de gases GC, mostro que el crudo pesado recuperado despus del tratamiento con las cepas #309, #311 y #573, fueron degradadas. Entre ellas la cepa aislada #311, present un alto grado de degradacin con un incremento de la fraccin de peso relativa de n-alcanos menores que C19 y un decrecimiento del porcentaje del peso de n-alcanos mayores que C19.

Estos resultados indican que estas cepas degradan los mas pesados n-alcanos en mas ligeros durante los ensayos en las columnas de arena enpaquetada.

Las cepas #573 mostraron una gran habilidad para degradar n-alcanos mayores que C25 (>C25). Aumentando asi los porcentajes de n-alcanos con cadenas de 20 a 22 carbonos o menores que 17 carbonos. Por ultimo las cepas #309 presentaron diferentes degradaciones del crudo. Degradando n-alcanosv mayores que C28 (>C28). As como los alcanos menores que C17.

CONCLUSIONES Produccion de biosurfactantes que reducen la tensin superficial Emulsificacion de hidrocarburos que pueden contribuir en la reduccin de la tensin interfacial crudo-agua. Degradacin de hidrocarburos por medio de la reduccin de la viscosidad. Mejoramiento de la movilidad del crudo. Produccin de gases lo que incrementa la recuperacin del petrleo al incrementar la presin dentro de la columna. Perforacin de canales de permeabilidad debido a la acumulacin de biomasa la cual permite redireccionar agua a las zonas de crudo, incrementando la produccin de petrleo.

En el presente trabajo se ven tres tipos diferentes de cepas de B. subtilis (#309, #311 y #573) que fueron aislados de una reserva Brasilera para mejorar su habilidad de degradar fracciones de petrleo pesado y para recubrir el mejoramiento del petrleo en columnas de empaques de arena. Estos microorganismos aislados pudieron recuperar entre 8 10 % del petrleo pesado atrapados en columnas de arena. Ademas, todas las cepas exibieron la capacidad para degradar los alcanos altos encontrados en el petrleo pesado. Estos resultados subrayan que el tratamiento del petrleo pesado con cepas de B. subtilis pueden contribuir para mejorar la fluidez del petrleo, incrementando adicionalmente la recuperacin del mismo. *A diferencia de otras cepas de microorganismos trabajadas en otros estudios, Bacillus Subtilis demostr ser un buen candidato para la aplicacin en procesos MEOR.