Sntesis y caracterizacin de nanopartculas de plata aplicadas en el sector de la biomedicina Cceres, A & Vega, R.

SNTESIS Y CARACTERIZACIN DE NANOPARTCULAS DE PLATA APLICADAS EN EL SECTOR DE LA BIOMEDICINA

Elaborado por A. Cceres Estudiante de la Carrera de Qumica Industrial Curso de Nanotecnologa Carrera de Qumica Industrial Universidad Nacional Profesor del curso Dr. Jos Roberto Vega Baudrit Catedrtico, Universidad Nacional Coordinador Red NanoUNA, Universidad Nacional Director del Laboratorio Nacional de Nanotecnologa LANOTEC-CeNAT-CONARE

Resumen La nanociencia estudia y sintetiza materiales en un rango de 1 a 100 nm. La reactividad y propiedades de estos materiales son diferentes al mismo material en escala macroscpica. A pesar de que varias nanopartculas de diferentes metales como la del cobre, oro, titanio, entre otros, poseen actividad antibacteriana, se ha demostrado que las nanopartculas de plata poseen mayor actividad antibacteriana contra bacterias, virus y hongos. En la siguiente resea se contemplarn diferentes sntesis de nanopartculas de plata, entre ellas la sntesis por el mtodo de reduccin qumica empleando nitrato de plata y borohidruro de sodio como agente reductor, sntesis de nanopartculas de oro y plata funcionalizadas in situ con un poli(fenilenetinileno), sntesis de nanopartculas de plata funcionalizadas con pptidos anlogos de lactoferrampina , sntesis de nanopartculas plata-slice a travs de un mtodo organometlico. Todas las sntesis se estudiarn con el fin de poder aplicarlas a la medicina y conocer cul es la mejor ruta para la obtencin de las nanopartculas de plata. Introduccin Debido a las enfermedades infecciosas causadas por bacterias patgenas y virus, adems de la resistencia a antimicrobianos, surge la necesidad de encontrar nuevos compuestos antibacterianos. Las infecciones ms frecuentes se encuentran en las heridas quirrgicas, y en las vas urinarias y respiratorias. Los microorganismos que se encuentran con frecuencia en este tipo de infecciones son la Pseudomona aeroginosa, Estafilococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans, de las cuales muchas de ellas son resistentes a la mayora de los antibiticos.1 Se ha demostrado que las nanopartculas de plata poseen propiedades bactericidas contra bacterias Gram positivas y Gram negativas.2 La alta toxicidad de la plata ha sido demostrada en al menos 16 especies, entre esas las mencionadas anteriormente. Existen estudios que explican las propiedades antibacteriales de los iones de plata, este efecto se debe a que los iones de plata disminuyen el tamao de la membrana citoplasmtica o desprenden la pared celular de la clula, esto provoca que las molculas de ADN comiencen a condensarse y perder la habilidad para replicarse bajo la infiltracin de los iones de plata, adems los iones

www.tribuglobal.com

Sntesis y caracterizacin de nanopartculas de plata aplicadas en el sector de la biomedicina Cceres, A & Vega, R.
interaccionan con los grupos tiol de las protenas, fosfatos, carboxilatos, imidazol, hidroxilo, indol o aminas , provocando la desactivacin de las protenas bacteriana.1 La plata ha sido utilizada como metal precioso en joyera, utensilios, monedas, entre otros, adems es utilizada en el tratamiento de quemaduras pero ms que todo, es utilizada por ser altamente efectiva como agente antimicrobial contra bacterias y virus. Una de las propiedades ms importantes de las nanopartculas de plata es su efecto cicatrizante, al estar insertadas en los vendajes, adems son capaces de controlar procesos inflamatorios mediante la inhibicin de citoquinas pro-inflamatorias. La plata no requiere de ningn agente fotocataltico para la accin bactericida, como si lo necesitan otros metales, el uso de las nanopartculas de plata es mejor que muchos antibiticos utilizados en la actualidad.7 Para la sntesis de nanopartculas metlicas como la plata, se debe de dar importancia al tamao, forma, composicin, cristalinidad y estructura, ya que las propiedades de la nanopartcula dependen de estas variables Las nanopartculas de plata, presentan propiedades pticas que se basan en la oscilacin colectiva de los electrones de la banda de conduccin al interaccionar con un campo electromagntico incidente, denominado resonancia de plasmn superficial, el campo elctrico de la radiacin electromagntica induce la formacin de un dipolo en la nanopartcula crendose una fuerza restauradora en la nanopartcula que intenta compensar ese efecto, es por esto que las nanopartculas de plata presentan disoluciones coloidales de colores intensos cuyas frecuencias de resonancia de plasmn aparecen en el rango visible y que dependen del tamao y forma de la partcula.3 En estas propiedades pticas es por lo que se desarrolla las aplicaciones de dichas nanopartculas. Es por esto que se han desarrollado diferentes mtodos para la sntesis de nanopartculas de plata, la mayora de los mtodos se basan en reacciones de reduccin de sales metlicas de plata. La manipulacin de las condiciones de sntesis permite el control racional de la morfologa de las partculas y provee los medios para adaptar las propiedades de los materiales durante el proceso de sntesis, se debe tomar en cuenta la estabilizacin de la nanopartcula, para as mantener su tamao y forma en funcin del tiempo. La sntesis de las nanopartculas permite explotar sus propiedades y llevar a cabo nuevas aplicaciones en catlisis, electrnica, fotnica, magnetismo y sensado qumico y biolgico.4 Sntesis de nanopartculas de plata Una de las sntesis de nanopartculas de plata, por medio de la polimerizacin en microemulsin, se emplea para encapsular las nanopartculas de plata, con un iniciador como el 2,2azobisisobutironitrilo recristalizado con metanol, adems de la utilizacin de un surfactante como el bromuro de centiltrimetilamonio, esto se realiza en un reactor enchaquetado de vidrio. Para determinar el tamao de las nanopartculas se puede utilizar un microscopio electrnico de barrido con emisin de campo (STEM) y un microscopio electrnico de transmisin (TEM). Las morfologas obtenidas en el estudio aplicado en el artculo muestran que las partculas tienen forma esfrica y de un tamao menor a 100nm, adems de poseer cierto grado de encapsulacin de las nanopartculas de plata, como se observa en la Fig 1. Luego para comprobar la accin antibacterial, se preparan los inculos de las bacterias en estudio, y se miden los halos de inhibicin. Se logra demostrar que entre menor tamao tenga la nanopartcula mayor actividad antibacterial y esto se debe a su mayor rea superficial.1 Otro tipo de sntesis de nanopartculas de plata, es el uso de las mismas con pptidos antimicrobianos, esto se da a partir de la resistencia a antibiticos que se ha suscitado en los
www.tribuglobal.com

Sntesis y caracterizacin de nanopartculas de plata aplicadas en el sector de la biomedicina Cceres, A & Vega, R.
ltimos aos. Las nanopartculas de plata poseen la mayor actividad bactericida y biocompatibilidad, entre otras nanopartculas de otros metales, este no requiere agentes fotocatalticos para dicha accin.

Figura 1. Micrografa de STEM y TEM respectivamente de un nanocompuesto de PMMA/NAg y PS/NAg. Extrado de Betancourt, R. A.R. Paredes, Mata-Padilla, C. Cabrera, B.A, Puente, S, O. Rodrguez (2011), Propiedades antibacteriales de nanocompuestos de PS y PMMA con nanopartculas de plata como potenciales aplicaciones en la prevencin de infecciones nosocomiales, 6 (72), pp. 662-674

Los pptidos antimicrobianos son componentes de las defensas naturales de los seres vivos contra microorganismos patgenos, tambin poseen actividad antibacteriana. Son relativamente pequeos, catinicos, anfipticos, y de longitud de secuencia y estructura variable. Estos pptidos poseen mecanismos de accin que consisten en formar canales de manera que las superficies hidroflicas apunten hacia adentro produciendo un poro acuoso y as perdindose contenido celular y el otro es que los pptidos estn en contacto con la cabeza de los fosfolpidos en la zona externa de la membrana por lo que afecta su permeabilidad.7 Se ha encontrado que al aumentar la carga neta positiva de estos pptidos, cerca del extremo C-terminal aumenta significativamente la actividad antibacteriana y antifngica in vitro.5 Para dicha sntesis de la nanopartcula se requiere un precursor metlico, un agente reductor y un agente estabilizante. La formacin de dicha partcula se da en dos etapas, la primera es una nucleacin siguiendo por un crecimiento. Se encuentran varias formas de la accin antimicrobiana de las nanopartculas de plata, una de ellas es su absorcin a la membrana bacteriana logrando penetrar al interior de la bacteria, la nanopartcula de plata interacciona con las protenas sulfuradas de la bacteria, atacando la cadena respiratoria y el proceso de divisin celular produciendo la muerte de la clula, liberando tambin iones Ag+, mejorando la actividad bactericida. 7 La lactoferrampina es un pptido antimicrobiano, y se encuentra formado por 17 aminocidos, el cual posee un amplio espectro de accin antibitica contra bacterias, hongos y virus, mediante ciertos mecanismos como el modelo de ruptura por barril, el cual forma unos poros, provocando perdida del contenido celular llevando a la muerte celular y por medio del modelo de capa, donde el pptido est en contacto con la cabeza del fosfolpido de la zona externa de la membrana, afectando la permeabilidad de la misma. El mtodo ms habitual para obtenerlo es la unin del aminocido carboxi-terminal (C- terminal) a un soporte insoluble y posterior elongacin
www.tribuglobal.com

Sntesis y caracterizacin de nanopartculas de plata aplicadas en el sector de la biomedicina Cceres, A & Vega, R.
secuencial, aminocido tras aminocido, de la cadena peptdica, esto provoca mayores rendimientos, lavado y filtrado sencillo de los pptidos y la posibilidad de automatizacin del proceso de sntesis.7 Al sintetizar la nanopartcula de plata con la lactoferrampina, se logra que la plata entre con mayor facilidad a la membrana debido a que el pptido afecta la permeabilidad de la membrana, adems dicho pptido controla la forma y tamao de la nanopartcula de plata, mejorando la estabilidad, biocompatibilidad y capacidad de dispersin de la nanopartcula.7 La investigacin demuestra que dependiendo de la sntesis de la nanopartcula y del tipo de pptido va a tener un mayor efecto antimicrobiano realizados a la E. coli (Fig 2). Los primeros mtodos de sntesis de nanopartculas de plata, consisten en utilizar nitrato de plata como precursor metlico y citrato de sodio como agente reductor, sin embargo en este mtodo se encuentra un amplia variedad de tamaos de las nanopartculas, por lo que otro mtodo ms utilizado es utilizar borohidruro de sodio como agente reductor, ya que los tamaos son de 10nm y una distribucin de tamao limitado.

Figura 2. Microscopia electrnica de las nanopartculas de plata. Extrada de la tesis Sntesis de nanopartculas de plata funcionalizadas con pptidos anlogos de lactoferrampina con potencial antibitico contra Escherichia coli O157:H7

La sntesis por medio del mtodo de reduccin, emplea como materia principal el nitrato de plata y borohidruro de sodio como agente reductor, obteniendo dispersiones coloidales de plata amarilla. En este caso se agrega un exceso del borohidruro de sodio para reducir los iones Ag+, estabilizando as las nanopartculas formadas, mediante la reaccin: AgNO3 + NaBH4 H2 + B2H6 + NaNO3

Las nanopartculas son mantenidas en suspensin por fuerzas electroestticas repulsivas por el NaBH4 absorbido, este estabiliza conforme se da el crecimiento de las nanopartculas, la cantidad debe ser suficiente para estabilizar las partculas, pero no debe de pasarse, debido a que podra
www.tribuglobal.com

Sntesis y caracterizacin de nanopartculas de plata aplicadas en el sector de la biomedicina Cceres, A & Vega, R.
aumentar la fuerza inica y provocar que ocurra agregacin. Como resultado el tamao de la nanopartcula es aproximadamente de 12 nm.10 En este tipo de reacciones la oxidacin de las nanopartculas formadas es desfavorecida termodinmicamente debido al alto potencial de reduccin de la plata, lo que permite la formacin de suspensiones acuosas o alcohlicas sin la presencia de agentes estabilizantes. La doble capa elctrica formada alrededor de las nanopartculas en soluciones coloidales de alta fuerza inica es necesario el uso de agentes estabilizantes como monocapas autoensambladas, estos agentes no slo protegen las nanopartculas del medio ambiente y evitan su aglomeracin, sino que tambin juegan un papel importante en el control de la forma y tamao de las nanopartculas.7 Las nanopartculas de plata presentan propiedades bactericidas y las de oro catalticas, por lo que se realiza una sntesis para la aplicacin en medicina. Al utilizar un poli(fenilenetinileno) en los cuales la combinacin de anillos aromticos con triples enlaces conjugados se da una elevada deslocalizacin electrnica que posee propiedades pticas de emisin. 9 Ambos metales se sintetizan por mtodos qumicos coloidales, tambin para la plata se emplea ablacin lser. Al caracterizar ambas partculas por MET, segn el trabajo de investigadores de Centros de Investigacin de Mxico e Italia, el tamao promedio del oro es de 5,8 nm, con una morfologa icosadrica para las partculas funcionalizadas con tioles, sin formar aglomerados (ver fig 1), adems de presentar una disminucin en el rendimiento cuntico de aproximadamente el 20% con respecto al polmero, la conductividad elctrica de la superficie aumento. En el artculo plantean con base en los resultados, la aplicacin en celdas solares. En el caso de la plata, el tamao de las partculas por el mtodo qumico es de 10,1 nm y por ablacin lser 21,2 nm, en este caso hay presencia de aglomeracin (ver fig 1) por los dos mtodos precipitndose. Suponen que el polmero interacta con las nanopartculas de plata por medio de los tomos de azufre. Las partculas obtenidas por ablacin laser, presentan un incremento notable en el rendimiento cuntico por lo que podra utilizarse como marcadores fluorescentes, en estado slido para biosensores o diodos electroluminiscentes. Aun as, concluyen que se debera de buscar una tcnica que elimine el exceso de polmero y disminuya el tamao de la nanopartcula. 6

www.tribuglobal.com

Sntesis y caracterizacin de nanopartculas de plata aplicadas en el sector de la biomedicina Cceres, A & Vega, R.

Figura 3. Imgenes bidimensionales MFA por tapping 10m X 10m de una pelcula en ITO de pPET3OC12sqS (arriba) y Au(pPET3OC12-sqS) (abajo). Extrada del artculo Nanopartculas de plata y oro funcionalizadas in situ con el polmero conjugado fluorescente pPET3OC12-sqS. Sntesis, propiedades, morfologcas, pticas y elctricas.

La sntesis de nanopartculas a partir de un mtodo organometlico, se logra controlar de mejor manera el tamao, forma y composicin de la nanopartcula. Dicha investigacin demuestra que usando hexadecilamina como agente estabilizante, logra que las nanopartculas de plata posean un dimetro de 9,8 nm, con una buena capacidad bactericida, adems la utilizacin de alquitiolatos tambin como agente estabilizador, crea superredes cristalinas de nanopartculas de 6 nm.9 La sntesis se da a partir del complejo [Ag (C6F5)], sintetizado a partir de la siguiente reaccin: [NBu4] [Ag(C6F5)2] + AgClO4 [NBu4] ClO4 + 2 [Ag(C6F5)]

Luego se agrega en exceso la polivinilpirrilidona como agente estabilizante, utilizando THF como disolvente. Posteriormente se emple etilenglicol como disolvente. Al formar este complejo, (Fig 4) se logra de mejor manera que las nanopartculas estn rodeadas por slice, sin embargo al complejo formado usando como disolvente etilenglicol, se obtienen nanopartculas de tamaos ms homogneos, y ninguna nanopartcula queda fuera de las lminas de slice. 9 Las nanopartculas causan deformacin de la membrana debido a la probable produccin de especies reactivas de oxgeno, produciendo radicales libres, lo cual puede provocar estrs oxidativo, inflamacin y dao consecuente, no solo de las membranas sino tambin del ADN y las protenas. Esto se puede confirmar por medio de microscopia de Transmisin Electrnica, ya que se observa la formacin de pozos en la pared celular de la bacteria y la acumulacin de plata en la
www.tribuglobal.com

Sntesis y caracterizacin de nanopartculas de plata aplicadas en el sector de la biomedicina Cceres, A & Vega, R.
membrana bacteriana lo cual incrementa la permeabilidad y logra producir la muerte celular.7 Otro mecanismo se relaciona con la absorcin a la membrana logrando penetrar el interior de las bacterias. Dicha membrana contiene protenas sulfuradas y las nanopartculas interactan con estas protenas y con el fsforo que contienen las molculas de ADN, cuando las nanopartculas ingresan a la clula bacteriana, forman una regin de bajo peso molecular en el centro de la bacteria, por lo que atacan la cadena respiratoria y el proceso de divisin celular conduciendo a la muerte de las clulas.8

Figura 4. Sntesis de nanopartculas de plata estabilizadas con polivinilpirridona a partir de un compuesto organometlico. Extrado de la tesis Sntesis de nanopartculas plata -slice a travs de un mtodo organometlico.

Conclusiones A partir de la revisin de cada sntesis, se logra concluir que, a pesar de la tcnica utilizada, se logran nanopartculas de plata que, aunque de diferentes tamaos, tienen la misma funcin antimicrobiana contra bacterias, virus y hongos. Depende del objetivo buscado, se debe seleccionar el mtodo que mejor se ajuste al tamao de partcula requerido, tomando en cuenta las variables como equipo, reactivos, costo de la sntesis, entre otros. A partir de la sntesis nanopartculas de plata y su aplicacin en bacterias se logra demostrar que las nanopartculas ms pequeas, poseen mayor accin antibacteriana, por lo que su aplicacin en diferentes campos mdicos lograra ser un avance para evitar las contaminaciones de microorganismos. Al comprobar que entra ms pequea sea la nanopartcula de plata, mayor poder antibacterial posee, es recomendable escoger el tipo de sntesis que produzca la nanopartcula ms pequea, evitando la aglomeracin de la misma. Referencias
1. Betancourt, R. A.R. Paredes, Mata-Padilla, C. Cabrera, B.A, Puente, S, O. Rodrguez (2011), Propiedades antibacteriales de nanocompuestos de PS Y pmma con nanopartculas de plata como potenciales aplicaciones en la prevencin de infecciones nosocomiales, 6 (72), pp. 662-674 C.N.R. Rao, A.Muller, A.K. Cheetham, Nanomaterials Chemistry, 2007, 185. P.K.Stoinmenov, et all. Metal Oxide Nanoparticles as bactericidal Agents Langmuir (2002) 18, 66796686
www.tribuglobal.com

2. 3.

Sntesis y caracterizacin de nanopartculas de plata aplicadas en el sector de la biomedicina Cceres, A & Vega, R.
4. 5. Rodolfo Zanella. (2012). Metodologas para la sntesis de nanopartculas. Mundo nano, 5, 13. Haney EF, Lau F, Vogel HJ. Solution structures and model membrane interactions of lactoferrampin, an amtimicrobial peptide derived from bovine lactoferrin. Biochim. Biophys. Acta 2007; 1768(10) : 2355-64 6. H.avila, KJ Moreno, I. Moggio, E. Arias, G. Castruita, R.A. Vazquez, D.I. Medellin, R.F Ziolo (2008) Nanopartculas de plata y oro funcionalizadas in situ con el polmero conjugado fluorescente Ptet30c12-sqS.,21 (1)pp. 20-25 7. Sistema Web accesado el 08 de setiembre, 2013. Disponible en : http://repositorio.uis.edu.co/jspui/bitstream/123456789/7392/2/143147.pdf 8. Morones J, Elechigerra J, Camacho A. Ramrez J. The bacterial effect of silver nanoparticles. Nanotech 2005; 16:2346-53 9. Sistema Web accesado el 14 de setiembre, 2013, Disponible en: http://biblioteca.unirioja.es/tfe_e/TFE000189.pdf 10. Sistema Web accesado el 07 de setiembre,2013. Disponible en: http://www.qi.fcen.uba.ar/materias/cqi/2010/practicas/practica2

www.tribuglobal.com