INSTRUCCIONES DE USO

Slides VITROS ALKP DT de Bioqumica

ALKP DT
Fosfatasa alcalina

Aplicacin
Para uso diagnstico in vitro. Los slides VITROS ALKP DT determinan cuantitativamente la actividad de la fosfatasa alcalina (ALKP) en suero y plasma.

Resumen y breve explicacin del ensayo

La fosfatasa alcalina est presente principalmente en el hueso, el hgado, los riones, el intestino, la placenta y los pulmones. La fosfatasa alcalina srica puede estar elevada cuando el metabolismo seo est aumentado, por ejemplo en los adolescentes y durante la curacin de una fractura; el hiperparatiroidismo primario y secundario; la enfermedad de Paget en el hueso; el carcinoma metastsico seo; el sarcoma osteognico; y la enfermedad de Hodgkin si los huesos estn invadidos. Las enfermedades hepatobiliares que implican colestasis, inflamacin o cirrosis, aumentan la actividad de la fosfatasa alcalina; la actividad de la fosfatasa alcalina puede estar aumentada en los casos de infarto y fallo renal y en las complicaciones del embarazo. Ocasionalmente puede verse una actividad de fosfatasa alcalina baja en el hipotiroidismo.1

Principios del procedimiento

El mtodo del slide VITROS ALKP DT se realiza utilizando los slides VITROS ALKP DT y el Kit de Calibrador DT VITROS de Bioqumica en los Analizadores VITROS DT60/DT60 II. El slide VITROS ALKP DT es un elemento analtico multicapa incorporado a un soporte de polister. En el slide se deposita una gota de muestra del paciente, que se distribuye uniformemente desde la capa difusora a las capas subyacentes. La capa difusora contiene el sustrato de fosfato de p-nitrofenilo y dems componentes necesarios para la reaccin. La ALKP contenida en la muestra cataliza la hidrlisis del fosfato de p-nitrofenilo a p-nitrofenol en pH alcalino. El p-nitrofenol se difunde a la capa subyacente, donde se controla mediante espectrofotometra de reflectancia. La frecuencia del cambio en la densidad de reflexin se convierte a actividad enzimtica.

Secuencia de la reaccin
fosfato de p-nitrofenilo
ALKP Mg , AMP
+2

p-nitrofenol + H3PO4

Tipo y condiciones del ensayo

Tipo y condiciones del ensayo de ALKP DT
Tipo de ensayo Frecuencia Mdulo VITROS DT60/DT60 II DTSC/DTSC II Tiempo aproximado de incubacin 5 minutos Temperatura 37C Longitud de onda 400 nm Volumen de la gota de muestra 10 l

Advertencias y precauciones
Para uso diagnstico in vitro. Tome precauciones cuando manipule materiales y muestras de origen humano. Como ningn mtodo de ensayo puede ofrecer una seguridad completa sobre la ausencia de agentes infecciosos, considere todas las muestras clnicas, controles y calibradores como potencialmente infecciosos. Manipule las muestras, los residuos slidos y lquidos, as como los componentes del ensayo, de acuerdo con las normativas locales y la directriz NCCLS M292 u otras pautas de seguridad publicadas en relacin con los riesgos biolgicos. Encontrar advertencias y precauciones especficas de los distintos calibradores, as como de los materiales de control de calidad y otros componentes en las Instrucciones de uso del producto VITROS correspondiente y en cualquier otra documentacin del producto facilitada por el fabricante.

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ALKP DT
Fosfatasa alcalina

INSTRUCCIONES DE USO
Reactivos

Reactivos
Diagrama del slide

Ingredientes del slide

Ingredientes reactivos por cm
2

1. Montura superior del slide 2. Capa difusora (BaSO4)

Fosfato de p-nitrofenilo 55 g; 2-amino-2-metil-1-propanol (AMP) 0,1 mg; y sulfato de magnesio 1,6 g.

sulfato de magnesio AMP p-nitrofenil tampn de pH 10,5

Otros ingredientes
Pigmentos, ligantes, tampn, tensioactivos, un agente reticulante de polmeros y un estabilizante.

3. Capa reactiva 4. Capa de Soporte 5. Montura inferior del slide

Manipulacin del slide

AVISO: No utilice slides cuyo envoltorio presente daos o un sellado incompleto.

Preparacin del slide

IMPORTANTE: Los slides deben alcanzar la temperatura ambiente, 1828C, antes de abrir el envoltorio. No use slides cerrados que hayan estado a temperatura ambiente, 1828C, ms de 48 horas.

1. Retire los slides individuales del envase. 2. Atempere el slide cerrado durante al menos 15 minutos. Los slides sin usar que permanezcan en su envoltorio sellado pueden volver a guardarse en la nevera o el congelador. 3. Retire el envoltorio y coloque el slide en el centro de carga antes de 15 minutos desde su apertura.

Conservacin y estabilidad de los slides

Cuando se conservan y manipulan segn las indicaciones correspondientes, los slides VITROS ALKP DT se mantienen estables hasta la fecha de caducidad que figura en el envase.

Conservacin y estabilidad de los slides de ALKP DT

Slides Sin abrir Abiertos Condiciones de conservacin Temperatura ambiente 1828C Refrigerado 28C Congelado -18C Temperatura ambiente 1828C Estabilidad <48 horas Hasta la fecha de caducidad Hasta la fecha de caducidad <15 minutos

Requisitos de las muestras

ADVERTENCIA: Manipule las muestras como material con riesgo biolgico potencial.

Muestras recomendadas
Suero Plasma:3 Heparina Se ha descrito que ciertos dispositivos de recogida de muestras pueden afectar a algunos ensayos y analitos.4 Confirme que los dispositivos de recogida utilizados son compatibles con este ensayo.

IMPORTANTE:

Muestras no recomendadas
EDTA Citrato Oxalato de fluoruro No usar muestras hemolizadas. Plasma:5

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Procedimiento del ensayo

ALKP DT
Fosfatasa alcalina

Suero y plasma
Recogida y preparacin de las muestras
Recoja las muestras utilizando los procedimientos de laboratorio estndar.6, 7 Preparacin del paciente No se requiere ninguna preparacin especial del paciente. Precauciones especiales Si desea obtener informacin acerca del efecto de una concentracin elevada de bilirrubina sobre los resultados del ensayo, consulte el apartado Limitaciones del procedimiento. Centrifugue las muestras y retire el suero del material celular dentro de un plazo de 4 horas tras la recogida.5

Manipulacin y conservacin de las muestras

ADVERTENCIA: Manipule las muestras como material con riesgo biolgico potencial.

Manipule y conserve las muestras en recipientes cerrados para evitar su posible contaminacin o evaporacin. Mezcle las muestras por inversin suave y espere a que alcancen la temperatura ambiente, 1828C, antes del anlisis.

Conservacin y estabilidad de las muestras en el ensayo ALKP DT: Suero y plasma5

Conservacin Temperatura ambiente Refrigerado Congelado Temperatura 1828C 28C -18C Estabilidad 4 das 4 das 4 das

Procedimiento del ensayo

Materiales que se incluyen
Slides VITROS ALKP DT de Bioqumica

Materiales necesarios pero no incluidos

Kit de Calibrador DT VITROS de Bioqumica Materiales de control de calidad, tales como los Controles I y II DT VITROS de Bioqumica BSA 7% VITROS de Bioqumica Pipeta VITROS DT Solucin salina isotnica

Instrucciones de funcionamiento
Consulte el Manual del usuario de su Analizador VITROS DT60/DT60 II. Espere a que todos los lquidos y muestras alcancen la temperatura ambiente, 1828C, antes del anlisis. IMPORTANTE:

Dilucin de la muestra
Si la actividad de la fosfatasa alcalina excede el intervalo (dinmico) comunicable del sistema: 1. Diluya con solucin salina isotnica o con BSA 7% VITROS. 2. Repita el anlisis. 3. Multiplique los resultados por el factor de dilucin utilizado para obtener un clculo de la actividad de fosfatasa alcalina en la muestra original.

Calibracin
Calibradores necesarios
Kit de Calibrador DT VITROS de Bioqumica, frascos 1, 2, y 4

Preparacin, manipulacin y conservacin de los calibradores

Consulte las Instrucciones de uso correspondientes al Kit de calibrador DT VITROS.

Procedimiento de calibracin
Consulte el Manual del usuario correspondiente a su Analizador VITROS DT60/DT60 II.

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Fosfatasa alcalina

INSTRUCCIONES DE USO
Control de calidad

Cundo calibrar
Realice una calibracin en las siguientes circunstancias: Cuando cambie el nmero de lote de los slides. Cuando se sustituyan piezas esenciales del analizador durante un procedimiento de mantenimiento o reparacin. Cuando as lo requieran las normativas gubernamentales. Por ejemplo, en EE.UU., las normas de la CLIA exigen que la calibracin se realice o se compruebe al menos una vez cada seis meses. Tambin puede ser necesario calibrar el ensayo VITROS ALKP DT: Si los resultados de control de calidad estn consistentemente fuera del intervalo aceptable. Tras llevar a cabo determinados procedimientos de reparacin. Encontrar informacin adicional en el Manual del usuario correspondiente a su Analizador VITROS DT60/DT60 II.

Clculos
Tomando como base lecturas secuenciales de la reflectancia del slide en 400 nm durante el periodo de incubacin definido, se determina la frecuencia de cambio de la reflectancia. Esta frecuencia se utiliza en el modelo de calibracin de multifrecuencia residente en el software para calcular la actividad enzimtica. Despus de haber realizado una calibracin de cada lote de slides, puede determinarse la actividad de fosfatasa alcalina en muestras desconocidas a partir de la frecuencia de cambio en la reflectancia determinada para cada slide de ensayo desconocido.

Validez de la calibracin
Los parmetros de calibracin son evaluados automticamente por el Analizador VITROS DT60/DT60 II por comparacin con un conjunto de parmetros de calidad residentes en el software del analizador. El fracaso para satisfacer cualquiera de los parmetros de calidad predefinidos da lugar a una calibracin fallida. El informe de calibracin debe usarse conjuntamente con los resultados de control de calidad para determinar la validez de una calibracin.

Intervalo (dinmico) comunicable

Intervalo (dinmico) comunicable del ensayo ALKP DT
Unidades convencionales y SI (U/l) 151500 Para muestras fuera del intervalo, consulte el apartado Dilucin de la muestra.

Trazabilidad de la calibracin
Los valores asignados al Kit de calibrador DT VITROS de Bioqumica para fosfatasa alcalina pueden rastrearse al mtodo recomendado para la fosfatasa alcalina por la Federacin Internacional de Qumica Clnica (IFCC),8, 9 adaptado a un analizador centrfugo a 37C.

Control de calidad
Recomendaciones metodolgicas
ADVERTENCIA: Manipule los materiales de control de calidad como si presentaran riesgos biolgicos.

Elija niveles de control apropiados para verificar el intervalo pertinente desde el punto de vista clnico. Analice los materiales de control de calidad del mismo modo que las muestras de pacientes, antes o durante el procesamiento de las muestras. Para verificar el rendimiento del sistema, analice los materiales de control: Tras realizar una calibracin. De acuerdo con las normativas locales y, al menos, una vez cada da que se realice el ensayo. Tras realizar los procedimientos de reparacin especificados. Consulte el Manual del usuario correspondiente a su Analizador VITROS DT60/DT60 II. Si los resultados de control estn fuera del intervalo aceptable, investigue las causas antes de decidir si se va a informar o no de los resultados del paciente. Encontrar recomendaciones genricas sobre el control de la calidad en el documento Statistical Quality Control for Quantitative Measurements: Principles and Definitions; Approved Guideline-Second Edition10 u otras directrices publicadas. Encontrar informacin adicional en el Manual del usuario correspondiente a su Analizador VITROS DT60/DT60 II.

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Valores esperados y unidades de medida

ALKP DT
Fosfatasa alcalina

Seleccin de materiales de control de calidad

IMPORTANTE: Se recomienda utilizar los Controles I y II DT VITROS siempre que se trabaje con Analizadores VITROS DT60/DT60 II. Antes de utilizar cualquier otro lquido de control comercial, evale su compatibilidad con el ensayo.

Otros materiales de control distintos de los Controles I y II DT VITROS pueden mostrar diferencias en comparacin con otros mtodos aplicables a la fosfatasa alcalina si: No corresponden a una matriz verdaderamente humana. Contienen altas concentraciones de conservantes, estabilizantes u otros aditivos no fisiolgicos. La actividad enzimtica tambin puede variar dependiendo del origen de la enzima, la temperatura del diluyente y el tiempo de activacin durante la reconstitucin. No utilice materiales de control estabilizados con etilenglicol.

Preparacin y conservacin de materiales de control de calidad

Consulte las Instrucciones de uso de los Controles I y II DT VITROS de Bioqumica u otra documentacin del producto facilitada por el fabricante.

Valores esperados y unidades de medida

Intervalo de referencia
Este intervalo de referencia es el 95% central de los resultados de un estudio interno realizado en 273 adultos aparentemente sanos seleccionados entre una poblacin trabajadora (154 mujeres y 119 varones).

Intervalo de referencia del ensayo ALKP DT

Unidades convencionales y SI (U/l) 38126 Cada laboratorio debe confirmar la validez de estos intervalos en la poblacin a la que atiende.

Unidades de medida
El Analizador VITROS DT60/DT60 II puede programarse para comunicar los resultados de ALKP DT en unidades convencionales y SI.

Unidades de medida del ensayo ALKP DT

Unidades convencionales y SI U/l

Limitaciones del procedimiento

Interferencias conocidas
El mtodo de slides VITROS ALKP DT ha sido analizado para la deteccin de sustancias interferentes segn el protocolo NCCLS EP7.11 Las sustancias relacionadas en la tabla produjeron las desviaciones mostradas cuando se analizaron en las concentraciones indicadas.

Interferencias conocidas del ensayo ALKP DT

Actividad de fosfatasa alcalina Unidades conv./SI (U/l) 120 130 120 Desviacin media Unidades conv./SI (U/l) 18,0 24,0 29,0

Interferente* Bilirrubina Metotrexato Nitrofurantona

*

Interferente Concentracin 20 mg/dl 200 g/ml 40 g/ml (342 mol/l) (440 mol/l) (168 mol/l)

Es posible que haya otras sustancias que presenten interferencias. Estos resultados son representativos; no obstante, sus resultados pueden diferir ligeramente debido a la variacin entre ensayos. El grado de interferencia para concentraciones distintas de las indicadas puede no ser predecible.

Otras limitaciones
Algunos frmacos que tienen una absorbancia de luz significativa en la regin de los 400 nm pueden dar lugar a interferencias en el espectro. Se sabe que ciertos frmacos y condiciones clnicas alteran la actividad de la fosfatasa alcalina in vivo. Si desea ms informacin, consulte alguno de los resmenes publicados.12, 13

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INSTRUCCIONES DE USO
Caractersticas de rendimiento

Caractersticas de rendimiento
Comparacin de mtodos
El grfico y la tabla muestran los resultados de comparar las muestras analizadas en el Analizador VITROS DT60 II con las analizadas usando el mtodo comparativo de la IFCC modificado8, 9 adaptado a un analizador centrfugo a 37C. Los ensayos se efectuaron segn el protocolo NCCLS EP9.14

Comparacin de mtodos en el ensayo ALKP DT: Suero

Unidades convencionales y SI

Sistema VITROS DT60 II (U/l)

Mtodo comparativo: IFCC Modificado (U/l)

Comparacin de mtodos en el ensayo ALKP DT: Suero

Unidades convencionales y SI (U/l) n Sistema DT60 II frente al mtodo comparativo 94 Pendiente 0,99 Coeficiente de correlacin 0,994 Intervalo de actividad de la muestra 361348 Interseccin 5,78 Sy.x 39,10

Precisin
La precisin se evalu con materiales de control de calidad en el Analizador VITROS DT60 II segn el protocolo NCCLS EP5.15 Los datos facilitados son una representacin del rendimiento del ensayo y se ofrecen a modo de orientacin. Variables tales como la manipulacin y la conservacin de muestras y reactivos, el entorno de laboratorio y el mantenimiento del sistema pueden afectar a la reproducibilidad de los resultados del ensayo.

Precisin del ensayo ALKP DT: Suero

Unidades convencionales y SI(U/l) Sistema VITROS DT60 II
* **

Actividad media 113 446

SD intrada* 1,9 6,4

SD intralab.** 3,9 12,7

% CV intralab.** 3,5 2,9

N de observ. 88 88

N de das 22 22

La precisin intrada se determin a partir de dos anlisis por da con dos repeticiones. La precisin intralaboratorio se determin utilizando un nico lote de slides y efectuando una calibracin semanal.

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Bibliografa

ALKP DT
Fosfatasa alcalina

Bibliografa
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. Tietz NW (ed). Fundamentals of Clinical Chemistry. ed. 3. Philadelphia: WB Saunders; 385386; 1987. NCCLS. Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids and Tissue; Approved Guideline. NCCLS Document M29 (OSBN 1-56238). NCCLS, Wayne, PA 19087; 1997. Doumas BT, et al. Differences Between Values for Plasma and Serum in Tests Performed in the Ektachem 700 XR Analyzer, and Evaluation of Plasma Separator Tubes (PST). Clin. Chem. 35:151153; 1989. Calam RR. Specimen Processing Separator Gels: An Update. J Clin Immunoassay. 11:8690; 1988. Clinical Laboratory Handbook for Patient Preparation and Specimen Handling. Fascicle VI: Chemistry/Clinical Microscopy. Northfield, IL: College of American Pathologists; 1992. NCCLS. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture. NCCLS Document H3. Wayne, PA: NCCLS; 1991. NCCLS. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Skin Puncture. NCCLS Document H4. Wayne, PA: NCCLS; 1991. Bretaudiere JP, Vassault A, et al. Criteria for establishing a standardized method for determining alkaline phosphatase activity in human serum. Clin. Chem. 23:22632274; 1977. Tietz NW, Rinker AD, Shaw L M. IFCC Methods for the Measurement of Catalytic Concentration of Enzymes, Part 5. IFCC Method for Alkaline Phosphatase. J Clin. Chem., Clin. Biochem. 21:731748; 1983. NCCLS. Statistical Quality Control for Quantitative Measurements: Principles and Definitions; Approved Guideline-Second Edition. NCCLS Document C24. Wayne, PA: NCCLS; 1999. NCCLS. Interference Testing in Clinical Chemistry. NCCLS Document EP7. Wayne, PA: NCCLS; 1986. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. ed. 4. Washington D.C.: AACC Press; 1995. Friedman RB, Young DS. Effects of Disease on Clinical Laboratory Tests. Washington, D.C.: AACC Press; 1990. NCCLS. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline. NCCLS Document EP9. Wayne, PA: NCCLS; 1995. NCCLS. User Evaluation of Precision Performance with Clinical Chemistry Devices. NCCLS Document EP5. Wayne, PA: NCCLS; 1992.

Glosario de smbolos
La tabla dedicada al glosario de smbolos define los smbolos utilizados en los envases y en las hojas de anlisis de los productos qumicos VITROS.

Glosario de smbolos
No reutilizar Usar antes de o Fecha de caducidad (AAAA-MM-DD) Nmero de lote N de serie del fabricante Referencia de catlogo o Cdigo del producto Atencin: Consultar las instrucciones de uso. Fabricante Representante autorizado Contiene suficiente para n ensayos Para uso diagnstico in vitro Almacenar a o por debajo de Almacenar a o por encima de Almacenar entre Consultar las instrucciones de uso Frgil; manipular con cuidado Mantener seco Este lado hacia arriba

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Historial de revisiones

Historial de revisiones
Fecha de revisin 2003-04-30 Versin 1.0 Descripcin de cambios tcnicos* Nuevo formato Nueva organizacin y secciones conformes con la directiva sobre diagnstico in vitro Conservacin y estabilidad de la muestra se han actualizado todos los valores de estabilidad Dilucin de la muestra se ha aadido BSA 7% como diluyente Materiales necesarios pero no incluidos se ha aadido la Pipeta DT VITROS Seleccin de materiales de control de calidad se ha aadido la frase relativa al etilenglicol Limitaciones del procedimiento se ha eliminado la teofilina, se han aadido la bilirrubina, el metotrexato y la nitrofurantona Comparacin de mtodos se han actualizado los valores de la comparacin y el grfico Precisin se han actualizado todos los valores Bibliografa se han aadido todas

Las barras de cambio indican la posicin de las modificaciones tcnicas efectuadas en el texto con respecto a la versin anterior del documento.

Al sustituir estas Instrucciones de uso, firme y ponga la fecha en el espacio que hay a continuacin y consrvelas segn lo especifiquen los reglamentos locales o las polticas de laboratorio, si procede.

_________________________________ Firma

_____________ Fecha de obsolescencia

Ortho-Clinical Diagnostics Mandeville House 62 The Broadway Amersham Buckinghamshire HP7 OHJ Inglaterra Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. 100 Indigo Creek Drive Rochester, NY 14626-5101, EE.UU. VITROS es una marca registrada de Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., 2003. Reservados todos los derechos. Impreso en EE.UU.

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