INSTRUCCIONES DE USO

Slides VITROS ALT DT de Bioqumica

ALT DT
Alanina aminotransferasa

Aplicacin
Para uso diagnstico in vitro. Los slides VITROS ALT DT determinan cuantitativamente la actividad de la alanina aminotransferasa (ALT) en suero y plasma.

Resumen y breve explicacin del ensayo

La alanina aminotransferasa presenta una elevada actividad en hgado, msculo esqueltico, corazn y rin. La ALT srica aumenta rpidamente en la necrosis celular heptica, la cirrosis heptica, los tumores hepticos, la ictericia obstructiva, el sndrome de Reye, el traumatismo generalizado del msculo esqueltico, la miositis, la miocarditis y el infarto de miocardio.1

Principios del procedimiento

El mtodo del slide VITROS ALT DT se realiza utilizando el slide VITROS ALT DT y el Kit de Calibrador VITROS DT en los Analizadores DT60/DT60 II. El slide VITROS ALT DT es un elemento analtico multicapa incorporado a un soporte de polister. En el slide se deposita una gota de muestra del paciente, que se distribuye uniformemente desde la capa difusora a las capas subyacentes. La capa difusora contiene los sustratos de la ALT, L-alanina y -cetoglutarato sdico. La alanina aminotransferasa cataliza la transferencia del grupo amino de la L-alanina al -cetoglutarato para producir piruvato y glutamato. A continuacin, la lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la conversin de piruvato y NADH en lactato y NAD+. La frecuencia de oxidacin del NADH se monitoriza por espectrofotometra de reflectancia. La frecuencia de cambio en la densidad de reflectancia es proporcional a la actividad enzimtica.

Secuencia de la reaccin
alanina + -cetoglutarato piruvato + NADH + H
+

ALT piridoxal-5-fosfato LDH

piruvato + glutamato lactato + NAD

+

Tipo y condiciones del ensayo

Tipo y condiciones del ensayo de ALT DT
Tipo de ensayo Frecuencia Mdulo VITROS DT60/DT60 II DTSC/DTSC II Tiempo aproximado de incubacin 5 minutos Temperatura 37C Longitud de onda 340 nm Volumen de la gota de muestra 10 l

Advertencias y precauciones
Para uso diagnstico in vitro. Tome precauciones cuando manipule materiales y muestras de origen humano. Como ningn mtodo de ensayo puede ofrecer una seguridad completa sobre la ausencia de agentes infecciosos, considere todas las muestras, controles y calibradores clnicos como potencialmente infecciosos. Manipule las muestras, los residuos slidos y lquidos, as como los componentes del ensayo, de acuerdo con las normativas locales y la directriz NCCLS M292 u otras pautas de seguridad publicadas en relacin con los riesgos biolgicos. Encontrar advertencias y precauciones especficas de los distintos calibradores, as como de los materiales de control de calidad y otros componentes en las Instrucciones de uso del producto VITROS correspondiente y en cualquier otra documentacin del producto facilitada por el fabricante.

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Alanina aminotransferasa

INSTRUCCIONES DE USO
Reactivos

Reactivos
Diagrama del slide

Ingredientes del slide

Ingredientes reactivos por cm
2

1. Montura superior del slide 2. Capa difusora (BaSO4)

Lactato deshidrogenasa (msculo porcino, E.C.1.1.1.27) 0,12 U; L-alanina 0,86 mg; -cetoglutarato sdico 54 g; dinucletido de adenina nicotinamida reducido 35 g; y piridoxal-5-fosfato sdico 11 g.

acetoglutarato sdico L-alanina tampn de pH 8,0 Lactato deshidrogenasa NADH piridoxal-5-fosfato

3. Capa reactiva

Otros ingredientes
Pigmentos, ligantes, tampn, tensioactivos, agente reticulante de polmeros y estabilizante.

4. Soporte 5. Montura inferior del slide

Manipulacin del slide

AVISO: No utilice slides cuyo envoltorio presente daos o un sellado incompleto.

Preparacin del slide

IMPORTANTE: Los slides deben alcanzar la temperatura ambiente, 1828C, antes de abrir el envoltorio. No use slides cerrados que hayan estado a temperatura ambiente, 1828C ms de 48 horas.

1. Extraiga el slide cerrado del envase. 2. Atempere los slides sin abrir durante 15 minutos. Los slides sin usar que permanezcan en su envoltorio sellado pueden volver a guardarse en la nevera o el congelador. 3. Retire el acondicionamiento y coloque el slide en el centro de carga antes de 15 minutos desde su apertura.

Conservacin y estabilidad de los slides

Cuando se conservan y manipulan segn las indicaciones correspondientes, los slides VITROS ALT DT se mantienen estables hasta la fecha de caducidad que figura en el envase.

Conservacin y estabilidad de los slides de ALT DT

Slides Sin abrir Condiciones de conservacin Temperatura ambiente 1828C Refrigerado 28C Congelado -18C Temperatura ambiente 1828C Estabilidad <48 horas Hasta la fecha de caducidad Hasta la fecha de caducidad <15 minutos

Abiertos

Requisitos de las muestras

ADVERTENCIA: Manipule las muestras como material con riesgo biolgico potencial.

Muestras recomendadas
Suero Plasma: EDTA Heparina Se ha descrito que ciertos dispositivos de recogida de muestras pueden afectar a algunos ensayos y analitos.3 Confirme que los dispositivos de recogida utilizados son compatibles con este ensayo.

IMPORTANTE:

Muestras no recomendadas
No utilice muestras hemolizadas.4

Suero y plasma
Recogida y preparacin de las muestras
Recoja las muestras utilizando los procedimientos de laboratorio estndar.5, 6 Preparacin del paciente No se requiere ninguna preparacin especial del paciente. 2 N de pub. J20563 Versin 1.0

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Procedimiento del ensayo

ALT DT
Alanina aminotransferasa

Precauciones especiales Centrifugue las muestras y retire el suero o plasma del material celular dentro de un plazo de 3 das tras la recogida.7

Manipulacin y conservacin de las muestras

ADVERTENCIA: Manipule las muestras como material con riesgo biolgico potencial.

Manipule y conserve las muestras en recipientes cerrados para evitar su posible contaminacin o evaporacin. Mezcle las muestras por inversin suave y espere a que alcancen la temperatura ambiente, 1828C, antes del anlisis. No congelar la muestra.

IMPORTANTE:

Conservacin y estabilidad de las muestras para ALT DT: Suero y plasma7

Conservacin Temperatura ambiente Refrigerado Congelado Temperatura 1828C 28C -18C Estabilidad 3 das 1 semana No se recomienda

Procedimiento del ensayo

Materiales que se incluyen
Slides VITROS ALT DT de Bioqumica

Materiales necesarios pero no incluidos

Kit de Calibrador VITROS DT de Bioqumica Materiales de control de calidad, tales como los Controles I y II VITROS DT de Bioqumica BSA 7% VITROS de Bioqumica o solucin salina isotnica Pipeta VITROS DT

Instrucciones de funcionamiento
Consulte el manual del usuario de su Analizador VITROS DT60/DT60 II. Espere a que todos los lquidos y muestras alcancen la temperatura ambiente, 1828C, antes del anlisis. IMPORTANTE:

Dilucin de la muestra
Si la actividad de la alanina aminotransferasa excede el intervalo (dinmico) comunicable del sistema: 1. Diluya la muestra con BSA 7% VITROS o solucin salina isotnica. 2. Repita el anlisis. 3. Multiplique los resultados por el factor de dilucin para obtener un clculo de la actividad de la alanina aminotransferasa en la muestra original.

Calibracin
Calibradores necesarios
Kit de Calibrador VITROS DT de Bioqumica, frascos 1, 2 y 4

Preparacin, manipulacin y conservacin de los calibradores

Consulte las Instrucciones de uso correspondientes al Kit de Calibrador VITROS DT.

Procedimiento de calibracin
Consulte el Manual del usuario correspondiente a su Analizador VITROS DT60/DT60 II.

Cundo calibrar
Realice una calibracin en las siguientes circunstancias: Cuando cambie el nmero de lote de los slides. Cuando se sustituyan piezas esenciales del analizador durante un procedimiento de mantenimiento o reparacin. Cuando as lo requieran las normativas gubernamentales. Por ejemplo, en EE.UU., las normas de la CLIA exigen que la calibracin se realice o se compruebe al menos una vez cada seis meses.

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Control de calidad
Tambin puede ser necesario calibrar el ensayo VITROS ALT DT: Si los resultados de control de calidad estn consistentemente fuera del intervalo aceptable. Tras llevar a cabo determinados procedimientos de reparacin. Encontrar informacin adicional en el Manual del usuario correspondiente a su Analizador VITROS DT60/DT60 II.

Clculos
Tomando como base lecturas secuenciales de la reflectancia del slide a 340 nm durante el periodo de incubacin definido, se determina la frecuencia de cambio de la reflectancia. Esta frecuencia se utiliza en el modelo de calibracin de multifrecuencia residente en el software para calcular la actividad enzimtica. Despus de haberse establecido la calibracin de cada lote de slides, puede determinarse la actividad de la alanina aminotransferasa en muestras desconocidas a partir de la frecuencia de cambio en la reflectancia medida en cada uno de los slides de ensayo desconocidos.

Validez de la calibracin
Los parmetros de calibracin son evaluados automticamente por el Analizador VITROS DT60/DT60 II por comparacin con un conjunto de parmetros de calidad residentes en el software del analizador. El fracaso para satisfacer cualquiera de los parmetros de calidad predefinidos da lugar a una calibracin fallida. El informe de calibracin debe usarse conjuntamente con los resultados de control de calidad para determinar la validez de una calibracin.

Intervalo (dinmico) comunicable

Intervalo (dinmico) comunicable del ensayo ALT DT
Unidades convencionales y SI (U/l) 3950 Para muestras fuera del intervalo, consulte el apartado Dilucin de la muestra.

Trazabilidad de la calibracin
Los valores asignados al Kit de Calibrador VITROS DT de Bioqumica en el ensayo de alanina aminotransferasa pueden rastrearse al mtodo de la alanina aminotransferasa recomendado por la Federacin Internacional de Qumica Clnica (IFCC),8 adaptado a un analizador centrfugo a 37C.

Control de calidad
Recomendaciones metodolgicas
ADVERTENCIA: Manipule los materiales de control de calidad como si presentaran riesgos biolgicos.

Elija niveles de control apropiados para verificar el intervalo pertinente desde el punto de vista clnico. Analice los materiales de control de calidad del mismo modo que las muestras de pacientes, antes o durante el procesamiento de las muestras. Para verificar el rendimiento del sistema, analice los materiales de control: Tras realizar una calibracin. De acuerdo con las normativas locales y, al menos, una vez cada da que se realice el ensayo. Tras realizar los procedimientos de reparacin especificados. Consulte el Manual del usuario correspondiente a su Analizador VITROS DT60/DT60 II. Si los resultados de control estn fuera del intervalo aceptable, investigue las causas antes de decidir si se va a informar o no de los resultados del paciente. Encontrar recomendaciones genricas sobre el control de la calidad en el documento Statistical Quality Control or Quantitative Measurements: Principles and Definitions; Approved Guideline-Second Edition9 u otras directrices publicadas. Encontrar informacin adicional en el Manual del usuario correspondiente a su Analizador VITROS DT60/DT60 II.

Seleccin de materiales de control de calidad

IMPORTANTE: Se recomienda utilizar los Controles I y II VITROS DT siempre que se trabaje con Analizadores VITROS DT60/DT60 II. Antes de utilizar cualquier otro lquido de control comercial, evale su compatibilidad con el ensayo.

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Valores esperados y unidades de medida

ALT DT
Alanina aminotransferasa

Los materiales de control distintos de los Controles I y II VITROS DT pueden mostrar diferencias en comparacin con otros mtodos aplicables a la alanina aminotransferasa si: No corresponden a una matriz verdaderamente humana. Contienen altas concentraciones de conservantes, estabilizantes u otros aditivos no fisiolgicos. La actividad enzimtica tambin puede variar dependiendo del origen de la enzima, la temperatura del diluyente y el tiempo de activacin durante la reconstitucin. No utilice materiales de control estabilizados con etilenglicol.

Preparacin y conservacin de materiales de control de calidad

Consulte las Instrucciones de uso de los Controles I y II VITROS DT de Bioqumica u otra documentacin del producto facilitada por el fabricante.

Valores esperados y unidades de medida

Intervalo de referencia
Estos intervalos de referencia son el 95% central de los resultados de un estudio interno de 2444 adultos aparentemente sanos (547 mujeres y 1897 hombres).

Intervalo de referencia para ALT DT

Unidades convencionales y SI (U/l) Adultos Mujeres Varones 1369 952 2172

Cada laboratorio debe confirmar la validez de estos intervalos en la poblacin a la que atiende.

Unidades de medida
El Analizador VITROS DT60/DT60 II puede programarse para expresar los resultados de alanina aminotransferasa en unidades convencionales y SI.

Unidades de medida para ALT DT

Unidades convencionales y SI U/l

Limitaciones del procedimiento

Interferencias conocidas
No se ha identificado ninguna.

Otras limitaciones
Se sabe que ciertos frmacos y condiciones clnicas alteran la actividad de la alanina aminotransferasa in vivo. Si desea ms informacin, consulte alguno de los resmenes publicados.10, 11

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INSTRUCCIONES DE USO
Caractersticas de rendimiento

Caractersticas de rendimiento
Comparacin de mtodos
El grfico y la tabla muestran los resultados de comparar las muestras analizadas en el Sistema VITROS DT60 II con las analizadas usando el Sistema VITROS 950. Los ensayos se efectuaron segn el protocolo NCCLS EP9.12

Comparacin de mtodos para ALT DT: Suero

Unidades convencionales y SI

Sistema VITROS DT60 II (U/l)

Mtodo comparativo: Sistema VITROS 950 (U/l)

Comparacin de mtodos para ALT DT: Suero

Unidades convencionales y SI (U/l) Coeficiente Pende diente correlacin 1,03 0,999 Intervalo de actividad muestra 6863 Interseccin -3,92

n Sistema DT60 II frente al mtodo comparativo 59

Sy.x 11,22

Precisin
La precisin se evalu con materiales de control de calidad en el Analizador VITROS DT60 II segn el protocolo NCCLS EP5.13 Los datos facilitados son una representacin del rendimiento del ensayo y se ofrecen a modo de orientacin. Variables tales como la manipulacin y la conservacin de muestras y reactivos, el entorno de laboratorio y el mantenimiento del sistema pueden afectar a la reproducibilidad de los resultados del ensayo.

Precisin del ensayo de ALT DT: Suero

Unidades convencionales y SI (U/l) Sistema VITROS DT60 II
* **

Actividad media 35 190

SD intrada* 1,6 1,7

SD intralab.** 2,0 3,4

% CV intralab.** 5,7 1,8

N observ. 84 84

N das 21 21

La precisin intrada se determin a partir de dos anlisis por da con de dos repeticiones. La precisin intralaboratorio se determin utilizando un nico lote de slides y efectuando una calibracin semanal.

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Bibliografa

ALT DT
Alanina aminotransferasa

Bibliografa
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. Tietz NW (ed). Fundamentals of Clinical Chemistry. ed. 3. Philadelphia: WB Saunders; 369371; 1987. NCCLS. Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids and Tissue; Approved Guideline. NCCLS Document M29 (OSBN 1-56238). NCCLS, Wayne, PA 19087; 1997. Calam RR. Specimen Processing Separator Gels: An Update. J Clin Immunoassay. 11:8690; 1988. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. Washington D.C.: AACC Press; 37; 1993. NCCLS. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture. NCCLS Document H3. Wayne, PA: NCCLS; 1991. NCCLS. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Skin Puncture. NCCLS Document H4. Wayne, PA: NCCLS; 1991. Clinical Laboratory Handbook for Patient Preparation and Specimen Handling. Fascicle VI: Chemistry/Clinical Microscopy. Northfield, IL: College of American Pathologists; 1992. Bergmeyer HU, Horder M, Rej R. Approved Recommendation (1985) on IFCC Methods for the Measurement of Catalytic Concentration of Enzymes. Part 3. IFCC Method for Alanine Aminotransferase. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 24:481; 1986. NCCLS. Statistical Quality Control for Quantitative Measurements: Principles and Definitions; Approved Guideline-Second Edition. NCCLS Document C24. Wayne, PA: NCCLS; 1999. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. ed. 4. Washington D.C.: AACC Press; 1995. Friedman RB, Young DS. Effects of Disease on Clinical Laboratory Tests. Washington, D.C.: AACC Press; 1990. NCCLS. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline. NCCLS Document EP9. Wayne, PA: NCCLS; 1995. NCCLS. User Evaluation of Precision Performance with Clinical Chemistry Devices. NCCLS Document EP5. Wayne, PA: NCCLS; 1992.

Glosario de smbolos
La tabla dedicada al glosario de smbolos define los smbolos utilizados en los envases y en las hojas de anlisis de los productos qumicos VITROS.

Glosario de smbolos
No reutilizar Usar antes de o Fecha de caducidad (AAAA-MM-DD) Nmero de lote N de serie del fabricante Referencia de catlogo o Cdigo del producto Atencin: Consultar las instrucciones de uso. Fabricante Representante autorizado Contiene suficiente para n ensayos Para uso diagnstico in vitro Almacenar a o por debajo de Almacenar a o por encima de Almacenar entre Consultar las instrucciones de uso Frgil; manipular con cuidado Mantener seco Este lado hacia arriba

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Historial de revisiones

Historial de revisiones
Fecha de revisin 2003-10-01 Versin 1.0 Descripcin de cambios tcnicos* Nuevo formato Nueva organizacin y secciones conformes con la directiva sobre diagnstico in vitro Materiales necesarios pero no incluidos y Dilucin de la muestra se ha aadido BSA 7% VITROS Seleccin de materiales de control de calidad se han aadido las frases relativas a la actividad enzimtica y al etilenglicol Intervalo de referencia se han actualizado todos los datos Interferencias conocidas se ha eliminado la frase relativa a protenas totales elevadas Comparacin de mtodos se ha actualizado la comparacin y el grfico Precisin se han actualizado todos los valores Bibliografa se han aadido todas excepto 8

Las barras de cambio indican la posicin de las modificaciones tcnicas efectuadas en el texto con respecto a la versin anterior del documento.

Al sustituir estas Instrucciones de uso, firme y ponga la fecha en el espacio que hay a continuacin y consrvelas segn lo especifiquen los reglamentos locales o las polticas de laboratorio, si procede.

_________________________________ Firma

_____________ Fecha de obsolescencia

Ortho-Clinical Diagnostics Mandeville House 62 The Broadway Amersham Buckinghamshire HP7 OHJ England Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. 100 Indigo Creek Drive Rochester, NY 14626-5101 VITROS es una marca registrada de Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., 2003. Reservados todos los derechos. Impreso en EE.UU.

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