Universidad Nacional Andrs Bello Laboratorio Qumica Analtica e Instrumental QUI-141 Profesora: Karina Gonzlez

LABORATORIO 12:

Espectrofotometra de Absorcin Molecular Visible

Integrante: Eduardo Valderrama Curso: QUI141 Seccin 03 Fecha de entrega: sbado 30 de Noviembre del 2013

Introduccin
La Espectrofotometra es uno de los mtodos de anlisis instrumental ms comunes, en especial el de UVVisible, que consiste en convertir las sustancias en derivados coloreados para poder ser analizados. Generalmente se utilizan aparatos que miden absorcin de luz monocromtica, de una longitud de onda conocida, llamados espectrofotmetros. La cantidad de luz absorbida est relacionada con la concentracin de la sustancia en estudio segn la ley de Beer: A=xCxb
ecuacin 1

Siendo A la absorbancia o densidad ptica, medida por el aparato, C la concentracin de la sustancia en estudio, b el espesor de disolucin atravesada por la luz o paso ptico, y es la absortividad o absortividad molar si se usa la concentracin en molaridad, la cual es caracterstica de cada sustancia medible colorimtricamente. El paso ptico de las cubetas usualmente de 1 cm. Las cubetas suelen ser de plstico o vidrio ptico para las mediciones en el espectro visible, y de cuarzo para las que se llevan a cabo en la regin ultravioleta (por debajo de 360 nm). De acuerdo con la formula 1, para una sustancia determinada, medida en condiciones similares (igual cubeta e igual longitud de onda) se cumple: A =c A* c* Por lo tanto, existe una proporcionalidad entre la absorbancia y la concentracin. La ley de Beer dice que la absorbancia total de una mezcla a determinada longitud de onda, ser igual a la suma de las absorbancias individuales de las especies que absorben. En el anlisis qumico podemos construir una curva de calibrado de patrn externo, que consistente en medir cantidades conocidas de analito (patrones o estndares) y luego puede utilizarse para interpretar la respuesta a la cantidad de una muestra desconocida. As a partir de una grfica se puede determinar la concentracin de una muestra problema, ocupando la absorbancia medida vs la concentracin de analito:

Las disoluciones blanco, contienen todos los disolventes y reactivos pero sin el analito, y por lo tanto pueden utilizarse para medir las respuesta a impurezas o especies interferentes y utilizarlas como un cero en la medicin de la absorbancia. Tambin puede realizarse otro mtodo al hacer uso de adicin-patrn y construir una curva de calibracin de patrn interno, donde aadimos cantidades conocidas de analito a la muestra problema. As a partir del aumento de la absorbancia se analiza cuanto analito hay en la muestra problema.

Los objetivos del prctico son el anlisis del contenido de fsforo en una muestra real mediante espectrofotometra UV Visible y la Aplicacin de mtodos de cuantificacin haciendo uso de curvas de calibracin y de adicin estndar. La transmitancia (T) se define como la radiacin incidente transmitida por la solucin. La relacin entre la absorbancia y la transmitancia es la siguiente: A = - log T.

Objetivos
Conocer y aprender sobre el uso de un espectrofotmetro. Obtener, interpretar y calcular el rango de concentraciones de trabajo en un espectro. Utilizar mtodos de cuantificacin por curva de calibracin y de adicin estndar.

Parte experimental
1. Materiales y reactivos: Equipo espectrofotmetro de doble haz UV-Visible. Matraces aforados de 50 mL Bureta de 10 mL Cubeta de 1 cm de paso ptico Matraces aforados de 100 mL Propipeta NH3 2,6 M CuSO4 patrn 5,0 g/L (0.079 M) Agua destilada Vaso precipitado de 250 mL Muestra problema

2. Mtodos y Condiciones Experimentales: A. Espectros de absorcin de una solucin Complejo Cu-Amoniacal, Cu(NH3)42+: Se comenz preparando una solucin de complejo amoniacal de Cu2+ de 0.5 g/L por dilucin de una solucin de Cu2+ de 5,0 g/L (tomando 10 ml) y mediante la adicin de 10 ml de amoniaco 2,6 M, para obtener una concentracin final de 0.26 mol/L.

Se Realiz un barrido automtico de longitudes de onda entre 400-800 nm para el complejo. Y el espectro obtenido se observ para establecer la longitud de mxima absorcin y tambin la Absorbancia de la solucin de 0.5 g/L. B. Ley de Beer: Curva de calibracin: Con los datos obtenidos de A para la solucin de 0.5 g/L se calcularon los rangos de concentracin para preparar una curva de calibracin en la zona de menor de 20, 30, 50,60 y 70 %, por lo que se prepar un esquema de dilucin para preparar los 5 puntos de la curva, y se ocuparon los diferentes volmenes para preparar las soluciones, de los cuales hablaremos mas adelante. La muestra problema se prepar agregando 2,5 ml a un matraz aforado de 50 mL, 10 ml de amoniaco y luego aforando con agua. Con las soluciones ya preparadas se realizaron las siguientes acciones: - Se ajust el cero de absorbancia colocando solucin blanco en el haz de medicin. - Se midi la A (%T) para cada una de las soluciones preparadas anteriormente. - Se registraron los datos de A vs C en una tabla confeccionada en un cuaderno. - Se grafic y calcul la ecuacin de la recta por ajuste de mnimos cuadrados. Se determin el coeficiente de correlacin. - Se prepar la muestra problema en forma similar a las soluciones estndares. - Se midi la A de la muestra problema en forma inmediata, 3 veces y luego concentracin. se interpol su

- Finalmente se calcul la concentracin de la muestra recibida, considerando la dilucin efectuada. C. Mtodo de adicin estndar: Se prepar una batera de 4 matraces aforados y a cada uno de ellos se agreg 5,0 mL de solucin de la muestra problema. El primer matraz se afor directamente luego de agregar 5 ml de amoniaco. A los otros matraces aforados se agreg un volumen creciente de la solucin estndar de Cu2+ (1, 2,3 mL) y despus se agreg amoniaco y finalmente se enrasaron con agua destilada. Se midieron las absorbancias a cada una de las soluciones, y con estos valores obtenidos se calculo la ecuacin lineal entre la absorbancia vs Volumen (Ml) de estndar agregado.

3. Descripcin de la tcnica: La tcnica ocupada hace uso de un instrumento comnmente utilizado en la espectrometra ultravioletavisible llamado espectrofotmetro UV-Vis, que mide la intensidad de luz que pasa a travs de una muestra, y la compara con la intensidad de luz antes de pasar a travs de la muestra. Los componentes bsicos son: una fuente de radiacin, un sistema que permita seleccionar una banda estrecha de longitudes de onda, una cubeta o recipiente que contenga la muestra, un detector, y un sistema de tratamiento y lectura de la seal.

Resultados
1. Esquema de dilucin usado para preparar 5 puntos para la curva de calibracin:

% Transmitancia

Absorbancia

Concentracin (g/L)

20 30 39,60 50 60 70

0,699 0,523 0,402 0,301 0,222 0,155

0,869 0,650 0,5 0,374 0,276 0,193

Volumen de estndar Cu2+ (5 g/L) ocupado en soluciones de matraces de 50 ml 8,7 6,5 3,7 2,8 1,9

(En rojo los datos experimentales utilizados para calcular los otros datos de la tabla.)

2. Tabla de datos obtenidos para la curva de calibracin:

Concentracin 0,869 0,650 0,374 0,276 0,193 Muestra Problema

Absorbancia 0,806 0,610 0,396 0,300 0,199 0,259 0,261 0,259

3. Curva de calibracin y calculo de la concentracin de la muestra problema:

0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 0.2 0.4 0.6 Concentracin

Absrobancia

y = 0.871x + 0.0507 R = 0.9962

0.8

(x1, x2 y x3 = Concentraciones) 0,259 = 0,871x1 + 0,0507

x1 = 0,239 g/L, y tomamos en cuenta las diluciones: 0,239 g/L estn en 50 mL, y la alcuota ocupada de muestra problema fue de 2,5 ml por lo tanto la concentracin es: 4,78 g/L. 0,261 = 0,871x1 + 0,0507

0,261 = 0,871x1 + 0,0507 x1 = 0,241 g/L estn en 50 mL, y la alcuota ocupada de muestra problema fue de 2,5 ml por lo tanto la concentracin es: 4,82 g/L. 0,259 = 0,871x1 + 0,0507

x3 = 0,239 g/L y por la dilucin la concentracin es: 4,78 g/L. Promedio de las concentraciones: 4,79 g/L Desviacin Estndar: Coeficiente de variacin de la muestra:

4. Curva de Adicin Estndar: Volumen aadido de estndar 0 mL 1 mL 2 mL 3 mL Absorbancia 0,123 0,166 0,188 0,212

0.25 0.2 Abosrbancia 0.15 0.1 0.05 0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Volumen y = 0.0289x + 0.1289 R = 0.9728

5. Calculo de la concentracin de la muestra problema:

Discusin
Al comienzo se encontr la longitud de onda de mxima para el complejo el cual es un paso muy importante; en el siguiente esquema se explica como al elegir la longitud de onda de mxima absorcin para medir la absorbancias, se obtengan las de mayores valores y que al construir el respectivo grafico la curva que se forme siga la ley de Beer y no presente desviaciones con respecto a la linealidad de esta.

Segn el grafico la banda A presenta una pequea desviacin debido a que la absortividad vara poco a lo largo de la misma, en cambio en la banda B presenta una apreciable desviacin por el cambio significativo que sufre la absortividad molar en esta regin. En la determinacin de calibrado de patrn externo, se obtuvo un grafico lineal con un r 2 = 0,9962, por lo que sabemos que a la concentraciones trabajadas y el complejo de cobre utilizado y analizado cumple la ley de Beer, adems de que la longitud de onda de mxima absorcin fue la correcta El r2 de la curva de calibracin de patrn externo adems demuestra una buena precisin en el preparado de las soluciones, por lo que la concentracin de fsforo calculada, la cual es de 4,79 g/L es confiable, adems de que la desviacin estndar y el coeficiente de variacin de la muestra as los demuestran, como la medicin se hizo tres veces se observa una pequea variacin de las absorbancias. En esta determinacin se hizo el uso de un blanco que al contener todo los solventes y reactivos sin el analito, que sirvi para descartar las interferencias en la medicin y ocuparla como un punto cero en la medicin de absorbancia. En la determinacin de calibrado de patrn interno (adicin de patrn) se obtuvo un grfico lineal con un r2 = 0,9728, lo cual indica que la curva presenta una buena confiabilidad de la concentracin calculada (4,46 g/L). Aunque el r2 obtenido es inferior al r2 obtenido con el calibrado de patrn interno. Por esto creemos que la concentracin obtenida la cual fue de 4,79 g/L puede estar mas cercana a la concentracin real de complejo en la muestra problema que el valor obtenido en el calibrado de patrn interno.

La matriz es todo lo que hay en la muestra problema y el efecto que produce es el cambio que experimenta la absorbancia con todo lo que hay en la muestra adems del analito. Es por esto que la matriz afecta a la absorbancia medida. Puede que la matriz tenga componentes desconocidos que sean imposibles de incluir en las disoluciones de patrn al construir la curva de calibrado. As cuando se agrega un volumen pequeo de solucin del patrn a la muestra desconocida, no vara significativamente la absorbancia medida (que se traduce en la concentracin calculada) y se debe a que la matriz ejerce el mismo efecto sobre el mismo analito aadido sobre el que hay en la muestra problema. Cabe destacar que el efecto matriz es un efecto indeterminado de las especies que rodean a la muestra que afectan a la sensibilidad, cuando el efecto de una especie es determinado (y aditivo) se habla de interferencia. El uso de la adicin de patrn es especialmente til cuando la composicin de la muestra es desconocida y afecta a la seal analtica. Pero la desventaja es que este mtodo est basado en la extrapolacin por lo tanto no es tan preciso y se puede cometer un error. En cambio el mtodo utilizando la determinacin por patrn externo se basa en la interpolacin y por lo tanto la absorbancia medida para la muestra problema cae dentro de la proporcionalidad de la absorbancia con la concentracin, el cual es bastante preciso y fcil de visualizar. En este caso no podemos estar seguro de si ocurre o no un efecto de matriz sin tener una forma de comparar ambos mtodos utilizados. Pero estamos seguros de que la concentracin real de la muestra problema debe de estar en el rango de las concentraciones obtenidas en ambos mtodos porque la espectroscopia UV-Visible es un mtodo bastante preciso, a pesar de esto no tenemos el valor real de la concentracin de la muestra problema para saber la exactitud.

Conclusin
Se hizo cumplimiento de los objetivos en razn de que se pudo cuantificar, mediante espectrofotometra de absorcin molecular, el contenido de complejo de cobre en una muestra real gracias a las absorbancias obtenidas experimentalmente, al realizar las correspondientes curvas de calibracin. Pero no estamos seguros de cual concentracin obtenida de ambos mtodos, 4,79 o 2,46 g/L, est mas cercana a la concentracin real de la muestra problema. A pesar de esto el prctico se considera como exitoso porque se aprendi sobre el uso del espectrofotmetro y se pudo interpretar y calcular correctamente un rango de concentraciones de trabajo en el espectro de absorcin.

Bibliografa

F. Pino Prez. D. Prez Bendito, Anlisis de elementos-traza por espectrofotometra de absorcin molecular Ultravioleta-visible, Capitulo 6, espectrofotometra UVvisible, instrumentacin. Universidad de Sevilla (1983). Pp. 123-124. K. Danzer, L. A. Currie. Guidelines for calibration in analytical chemistry. Part 1. Fundamentals and single component calibration. Pure Appl. Chem. 70 (1998) pp. 993-1014 K. Danzer, M. Otto, L. A. Currie. Guidelines for calibration in analytical chemistry. Part 2: Multicomponent calibration (IUPAC Technical Report). Pure Appl. Chem. 76 (2004) pp. 1215-1225