Guide Technique Pour lElaboration de Monographies 4eme Edition

Guide technique
pour llaboration des monographies

Pharmacope Europenne
Direction Europenne de la Qualit du Mdicament
4
e
Edition - 2005
Conseil de lEurope, 67075 Strasbourg Cedex, France - 2005
La reproduction de ce chier des ns commerciales ou sa publication sur un site ouvert
la consultation publique est strictement interdite.

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
Edition (2005), Pharmacope Europenne 1
GUIDE TECHNIQUE POUR L'ELABORATION DES MONOGRAPHIES
4
e
Edition 2005
SOMMAIRE
1 INTRODUCTION........................................................................................................................................... 5
1.1 OBJECTIF DU GUIDE................................................................................................................................... 5
1.2 PROCEDURES D'ESSAI ................................................................................................................................ 5
1.3 EQUIPEMENT.............................................................................................................................................. 6
1.4 PRISES D'ESSAI ........................................................................................................................................... 6
1.5 REACTIFS................................................................................................................................................... 8
1.6 DENOMINATIONS COMMERCIALES ............................................................................................................. 8
1.7 ETALONS DE REFERENCE ........................................................................................................................... 8
2 MONOGRAPHIES DE SUBSTANCES POUR USAGE PHARMACEUTIQUE .................................... 9
2.1 DEFINITION.............................................................................................................................................. 10
2.1.1 Combinaisons.............................................................................................................................. 11
2.1.2 Teneur ......................................................................................................................................... 11
2.2 CARACTERES ........................................................................................................................................... 12
2.2.1 Aspect .......................................................................................................................................... 12
2.2.2 Saveur.......................................................................................................................................... 13
2.2.3 Odeur .......................................................................................................................................... 13
2.2.4 Solubilit ..................................................................................................................................... 13
2.2.5 Instabilit..................................................................................................................................... 13
2.2.6 Hygroscopicit ............................................................................................................................ 13
2.2.7 Proprits l'tat solide.............................................................................................................. 14
2.2.8 Autres caractristiques................................................................................................................ 14
2.2.9 Comportement en solution........................................................................................................... 14
2.3 IDENTIFICATION ...................................................................................................................................... 15
2.3.1 Gnralits .................................................................................................................................. 15
2.3.1.1 Mthodes requrant une instrumentation complexe................................................................................. 16
2.3.1.2 Autres mthodes ...................................................................................................................................... 16
2.3.2 Spectrophotomtrie d'absorption dans l'infrarouge.................................................................... 16
2.3.2.1 Sels d'acides ou de bases organiques ....................................................................................................... 16
2.3.2.2 Substances chimiquement apparentes .................................................................................................... 16
2.3.2.3 Polymorphisme........................................................................................................................................ 17
2.3.2.4 Isomres optiques .................................................................................................................................... 17
2.3.3 Spectrophotomtrie d'absorption dans l'ultraviolet et le visible ................................................. 17
2.3.4 Point de fusion, point de solidification et point d'bullition........................................................ 18
2.3.5 Pouvoir rotatoire spcifique........................................................................................................ 18
2.3.6 Chromatographie sur couche mince ........................................................................................... 19
2.3.7 Chromatographie en phase gazeuse et chromatographie liquide ............................................... 19
2.3.8 Ractions chimiques.................................................................................................................... 19
2.4 ESSAI ....................................................................................................................................................... 20
2.4.1 Gnralits .................................................................................................................................. 20
2.4.2 Titre............................................................................................................................................. 20
2.4.3 Solution S .................................................................................................................................... 20
2.4.4 Aspect de la solution ................................................................................................................... 22
2.4.4.1 Limpidit et degr d'opalescence ............................................................................................................. 22
2.4.4.2 Degr de coloration.................................................................................................................................. 22
2 GUIDE TECHNIQUE, 4
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Edition (2005), Pharmacope Europenne
2.4.5 pH ou acidit/alcalinit............................................................................................................... 23
2.4.6 Pouvoir rotatoire......................................................................................................................... 24
2.4.8 Substances apparentes............................................................................................................... 26
2.4.8.1 Chromatographie sur couche mince (CCM) ............................................................................................ 28
2.4.8.2 Chromatographie liquide (CL)................................................................................................................. 29
2.4.8.3 Chromatographie en phase gazeuse (CPG) .............................................................................................. 32
2.4.8.4 Electrophorse capillaire.......................................................................................................................... 33
2.4.9 Substances facilement carbonisables .......................................................................................... 34
2.4.10 Anions et/ou cations trangers .................................................................................................... 34
2.4.11 Mtaux lourds.............................................................................................................................. 35
2.4.12 Perte la dessiccation ................................................................................................................ 36
2.4.13 Thermogravimtrie (2.2.34) ........................................................................................................ 37
2.4.14 Semi-microdosage de l'eau (Karl Fischer 2.5.12).................................................................... 37
2.4.15 Microdosage de l'eau (2.5.32)..................................................................................................... 37
2.4.16 Dosage de l'eau par chromatographie en phase gazeuse............................................................ 37
2.4.17 Dtermination de l'eau par entranement (2.2.13) ...................................................................... 37
2.4.18 Cendres sulfuriques..................................................................................................................... 37
2.4.19 Rsidu l'vaporation................................................................................................................. 38
2.4.20 Solvants rsiduels........................................................................................................................ 38
2.5 DOSAGE................................................................................................................................................... 38
2.5.1.1 Mesure directe ......................................................................................................................................... 39
2.5.1.2 Mesure aprs raction colore.................................................................................................................. 39
2.5.2 Analyse volumtrique .................................................................................................................. 39
2.5.3 Mthodes chromatographiques ................................................................................................... 40
2.5.4 Dosage de l'azote aprs minralisation par l'acide sulfurique (semi-microdosage)................... 40
2.6 CONSERVATION....................................................................................................................................... 41
2.7 ETIQUETAGE............................................................................................................................................ 41
2.8 IMPURETES .............................................................................................................................................. 41
2.9 CARACTERISTIQUES LIEES A LA FONCTIONNALITE .................................................................................. 42
3 VALIDATION ANALYTIQUE................................................................................................................... 42
3.1 TERMES ET DEFINITIONS .......................................................................................................................... 42
3.1.1 Introduction................................................................................................................................. 42
3.1.2 Diffrents types de procdures analytiques................................................................................. 43
3.1.3 Paramtres et exigences de validation........................................................................................ 44
3.1.4 Glossaire ..................................................................................................................................... 45
3.2 METHODOLOGIE ...................................................................................................................................... 47
3.2.1 Introduction................................................................................................................................. 47
3.2.2 Spcificit .................................................................................................................................... 47
3.2.2.1 Identification............................................................................................................................................ 48
3.2.2.2 Dosage et essais de puret........................................................................................................................ 48
3.2.3 Linarit ...................................................................................................................................... 49
3.2.4 Intervalle (de mesure) ................................................................................................................. 49
3.2.5 Exactitude.................................................................................................................................... 50
3.2.5.1 Dosage ..................................................................................................................................................... 50
3.2.5.2 Impurets (quantification)........................................................................................................................ 51
3.2.5.3 Recommandations sur les donnes fournir............................................................................................ 51
3.2.6 Fidlit ........................................................................................................................................ 51

GUIDE TECHNIQUE, 4
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3.2.6.1 Rptabilit.............................................................................................................................................. 51
3.2.6.2 Fidlit intermdiaire............................................................................................................................... 51
3.2.6.3 Reproductibilit ....................................................................................................................................... 51
3.2.7 Limite de dtection ...................................................................................................................... 52
3.2.7.1 Evaluation visuelle................................................................................................................................... 52
3.2.7.2 Rapport signal/bruit ................................................................................................................................. 52
3.2.7.3 Ecart type des rponses et pente .............................................................................................................. 52
3.2.8 Limite de quantification .............................................................................................................. 53
3.2.8.1 Evaluation visuelle................................................................................................................................... 53
3.2.8.2 Rapport signal/bruit ................................................................................................................................. 53
3.2.8.3 Ecart type des rponses et pente .............................................................................................................. 53
3.2.9 Robustesse................................................................................................................................... 54
3.2.10 Vrification de la conformit du systme .................................................................................... 54
3.3 APPLICATION SPECIFIQUE A DES METHODES UTILISEES DANS LA PHARMACOPEE..................................... 55
3.3.1 Pouvoir rotatoire (2.2.7) ............................................................................................................. 55
3.3.1.1 Introduction.............................................................................................................................................. 55
3.3.1.2 Identification............................................................................................................................................ 55
3.3.1.3 Essai......................................................................................................................................................... 55
3.3.1.4 Dosage ..................................................................................................................................................... 56
3.3.2 Spectrophotomtrie d'absorption dans l'ultraviolet et le visible (2.2.25).................................... 56
3.3.2.1 Identification............................................................................................................................................ 56
3.3.2.2 Essais limites ........................................................................................................................................... 56
3.3.2.3 Dosage ..................................................................................................................................................... 56
3.3.3 Essais limites non instrumentaux ................................................................................................ 56
3.3.3.1 Aspect de la solution (2.2.1 et 2.2.2)........................................................................................................ 56
3.3.3.2 Acidit / alcalinit.................................................................................................................................... 57
3.3.3.3 Essais limites des anions/cations (2.4...) .................................................................................................. 57
3.3.4 Spectromtrie d'absorption atomique (2.2.23) ............................................................................ 58
3.3.4.1 Spcificit ................................................................................................................................................ 58
3.3.4.2 Etalonnage ............................................................................................................................................... 58
3.3.4.3 Effets de matrice ...................................................................................................................................... 59
3.3.4.4 Limites de dtection et de quantification (estimation fonde sur l'cart type du blanc) ........................... 59
3.3.5 Techniques sparatives ............................................................................................................... 60
3.3.5.1 Chromatographie sur couche mince (2.2.27) ........................................................................................... 60
3.3.5.2 Chromatographie liquide (2.2.29) ............................................................................................................ 61
3.3.5.3 Chromatographie en phase gazeuse (2.2.28)............................................................................................ 62
3.3.6 Semi-microdosage de l'eau (2.5.12) ............................................................................................ 64
3.3.7 Titrages volumtriques (2.5.11 - 2.2.19 - 2.2.20)........................................................................ 64
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GUIDE TECHNIQUE, 4
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GUIDE TECHNIQUE POUR L'ELABORATION DES 1
MONOGRAPHIES 2
1 INTRODUCTION 3
1.1 OBJECTIF DU GUIDE 4
Ce document constitue un guide l'usage des rdacteurs de monographies, ainsi qu'un outil 5
permettant de faire connatre aux utilisateurs de la Pharmacope europenne, notamment 6
l'industrie, les autorits d'enregistrement et les laboratoires officiels de contrle des 7
mdicaments, les principes directeurs de l'laboration des monographies. Comme les 8
principes dfinis et les indications fournies pour l'laboration des monographies sont les 9
mmes que ceux appliqus par les autorits d'enregistrement, le Guide Technique peut 10
galement servir de ligne directrice pour l'laboration de spcifications destines figurer 11
dans les dossiers d'enregistrement. 12
Il est important de rappeler que les monographies constituent des normes d'application 13
obligatoire dans le cadre des procdures d'enregistrement dans l'ensemble des tats 14
signataires de la Convention relative l'laboration d'une Pharmacope europenne. Les 15
procdures d'essai et de dosage prescrites dans les monographies individuelles doivent donc 16
avoir t valides conformment la pratique en cours au moment de leur laboration. 17
1.2 PROCEDURES D'ESSAI 18
Les mthodes choisies pour les identifications, les essais de puret et le(s) dosage(s) qui 19
constituent l'essentiel d'une monographie de pharmacope sont, de prfrence, celles dj 20
dcrites et appliques dans la Pharmacope europenne. A cet gard, l'auteur d'une 21
monographie doit se rfrer non seulement aux mthodes gnrales dcrites dans la 22
Pharmacope europenne, mais galement aux monographies dj publies sur des 23
substances similaires. Ces recommandations ont pour but d'assurer un degr raisonnable 24
d'harmonisation au sein de la Pharmacope et ne sont valables que si les mthodes sont 25
juges adaptes aux fins envisages. Il convient nanmoins de tenir compte galement du 26
dveloppement de nouvelles mthodes apportant un progrs significatif en matire de 27
sensibilit, de fidlit, d'exactitude ou de pouvoir discriminant (slectivit). 28
Les mthodes figurant dans les monographies doivent tre valides comme dcrit dans la 29
section "Validation analytique" de ce guide ou d'autres sections spcifiques applicables en la 30
matire. Les rapports de validation sont transmis la DEQM, mais ne sont ni publis ni 31
communiqus aux utilisateurs. 32
Toute procdure analytique dcrite dans une monographie doit faire l'objet d'une vrification 33
par au moins deux laboratoires, qui communiquent la DEQM les rsultats obtenus, afin 34
d'assurer la traabilit. 35
Les instructions entrant dans la description des procdures analytiques doivent couvrir 36
l'ensemble des facteurs qui sont susceptibles d'affecter les rsultats et sont jugs essentiels 37
pour permettre un analyste expriment, travaillant conformment aux pratiques de 38
laboratoire reconnues mais n'ayant pas pour autant une connaissance pralable de l'analyse en 39
question, d'effectuer cette analyse. Toute divergence dans la description de mthodes 40
similaires est viter. 41
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S'il est envisag, ou envisageable, qu'une mthode d'analyse devienne d'utilisation gnrale, 1
ou si elle requiert une longue description et est utilise dans plus d'un cas, il peut tre propos 2
de l'inclure dans les chapitres gnraux de la Pharmacope comme mthode gnrale 3
laquelle renverront les monographies individuelles. Les mthodes sont appliques l'chelle 4
conventionnellement utilise dans la Pharmacope, sauf dans les cas o une analyse petite 5
chelle semble prfrable pour des raisons de disponibilit du produit analys, ou en raison 6
de sa toxicit ou de son cot. 7
1.3 EQUIPEMENT 8
Si l'quipement utilis pour une mthode d'analyse n'est pas disponible dans tous les Etats 9
signataires de la Convention de la Pharmacope europenne, il doit pouvoir tre construit 10
partir de sa description dans la Pharmacope. 11
1.4 PRISES D'ESSAI 12
Pour prescrire les prises d'essai, c'est--dire les masses et volumes de substances, ractifs et 13
solvants utiliser pour les identifications, essais et dosages, la pratique en vigueur dans la 14
Pharmacope est d'indiquer le degr de prcision avec laquelle il convient de les mesurer 15
(voir les Prescriptions Gnrales). Cet aspect est donc prendre en compte pour la rdaction 16
des textes de la Pharmacope. 17
Pour rduire au minimum l'erreur associe la prparation des solutions analyser, il 18
convient de consulter le tableau 1, qui fournit des estimations de l'incertitude relative. 19
Afin d'viter l'emploi de prises d'essai trop faibles ou une consommation inutile de solvants, 20
il est souvent ncessaire de prescrire des dilutions en srie pour la prparation des solutions 21
utilises, notamment, pour les mesures spectrophotomtriques. Dans ce cas, les diffrentes 22
combinaisons d'tapes de dilution (habituellement au nombre de deux ou trois) ne sont pas 23
toutes quivalentes du point de vue de l'erreur alatoire associe la dilution. Si ncessaire, il 24
convient de prescrire la mthode de dilution optimale compte tenu de l'erreur relative 25
(tolrance de capacit divise par volume nominal) associe aux diffrentes tailles de pipettes 26
et fioles jauges communment utilises pour ces oprations (l'erreur relative de dilution est 27
estime d'aprs la formule habituelle : racine carre de la somme des carrs des erreurs 28
relatives individuelles). 29
On trouve dans la littrature des tableaux indiquant le nombre optimal et la nature des 30
dilutions successives ncessaires pour obtenir un rapport de dilution donn, sur la base des 31
spcifications relatives aux tolrances de capacit de la verrerie jauge. Le tableau 2 fournit 32
des indications sur ce point ( noter que les facteurs indiqus n'incluent pas les erreurs de 33
lecture). 34

GUIDE TECHNIQUE, 4
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Tableau 1 Incertitude relative associe la prparation des solutions 1
Incertitude relative (en pourcentage) Concentration
souhaite
Prparation de la
solution
Masse Volume Total
10g/1000 ml 10g/1000ml
1g/100ml
0,5g/50ml
0,25g/25ml
0,1g/10ml
< 0,01
0,02
0,04
0,08
0,02
0,05
0,12
0,17
0,23
0,50
0,05
0,12
0,17
0,24
0,54
1g/1000 ml 1g/1000ml
0,5g/500ml
0,25g/25ml
100mg/100ml
50mg/50ml
10mg/10ml
0,02
0,04
0,08
0,2
0,4
2,0
0,05
0,07
0,23
0,12
0,17
0,50
0,05
0,08
0,24
0,23
0,43
2,06
0,1g/1000 ml 100mg/1000ml
50mg/500ml
25mg/250ml
10mg/100ml
5mg/50ml
1mg/10ml
0,2
0,4
0,8
2,0
4,0
20,0
0,05
0,07
0,08
0,12
0,17
0,50
0,21
0,41
0,80
2,0
4,0
20,0
0,01g/1000 ml 10mg/1000ml
5mg/500ml
1mg/100ml
2,0
4,0
20,0
0,05
0,07
0,12
2,0
4,0
20,0
Le calcul des incertitudes relatives a t effectu sur la base d'une incertitude de pese de 0,2 mg. 2
3
Tableau 2 Erreur relative associe la dilution l'aide de verrerie jauge 4
(P : pipette / F : fiole) 5
tape 1 tape 2 Rapport de concentration Nombre d'tapes
P F P F
Erreur relative
1/2 1 25 50 0,16
1/2,5 1 20 50 0,18
1/5 1 20 100 0,17
1/10 1 25 250 0,13
1/12,5 1 20 250 0,16
1/30 1 15 500 0,20
1/50 1 20 1000 0,15
1/100 1 25 250 25 250 0,18
1/125 2 20 250 25 250 0,20
1/160 2 25 1000 25 100 0,19
1/200 2 25 500 25 100 0,18
1/250 2 20 250 25 500 0,20
1/400 2 25 250 25 1000 0,18
1/500 2 20 500 25 500 0,20
1/1000 2 20 1000 25 500 0,20
Source : R B Lam et T L Isenhour, Minimizing relative error in preparation of standard solutions by judicious choice of 6
volumetric glassware, Analytical Chemistry, 1980, 53, 1158-1161. 7
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1.5 REACTIFS 1
Lorsque la qualit d'un ractif est un ou plusieurs gards critique pour l'usage auquel il est 2
destin, il importe de bien dfinir la qualit requise, au besoin en prescrivant des essais 3
permettant de dmontrer que le ractif est de qualit adquate. En rgle gnrale, toutefois, 4
les ractifs utiliss sont de qualit analytique et il suffit d'indiquer leur nom, leur code CAS et 5
leur formule. 6
Il convient d'utiliser chaque fois que possible les ractifs, solutions de ractifs, solutions 7
titres et solutions talons pour essais limites dj dcrits dans la Pharmacope. Les solutions 8
simples de ractifs ou les solutions qui ne sont utilises qu'une fois sont dcrites dans la 9
monographie elle-mme. 10
L'emploi de ractifs reconnus comme fortement toxiques ou dangereux d'autres titres (par 11
exemple parce que cancrognes) est viter, surtout dans des conditions o ces proprits 12
sont difficiles contrler, comme lors de leur manipulation sous forme de poudre fine ou de 13
nbulisat. Il faut galement viter l'emploi de certaines substances interdites ou soumises 14
restriction dans un ou plusieurs des tats signataires de la Convention de la Pharmacope 15
europenne. 16
1.6 DENOMINATIONS COMMERCIALES 17
Les dnominations commerciales sont indiques systmatiquement dans les projets de 18
monographies, en note de bas de page, pour les plaques/colonnes chromatographiques ainsi 19
que dans tous les autres cas o cette information prsente une utilit pour l'analyste (trousses 20
d'analyse, ractifs disponibles auprs d'un seul fournisseur, etc.). Cette indication est 21
supprime du texte aprs son adoption, mais elle reste disponible sur le site internet de la 22
DEQM, dans la base de donnes Knowledge, aprs publication du texte dans la Pharmacope. 23
1.7 ETALONS DE REFERENCE 24
La politique et les procdures suivies en matire d'talons de rfrence sont dcrites dans le 25
chapitre gnral 5.12. Etalons de rfrence (actuellement ltat dun projet). L'obtention, 26
l'tablissement, la conservation et le monitorage des talons de rfrence sont du ressort de la 27
DEQM. De nombreux talons de rfrence, notamment ceux utiliss pour le contrle des 28
impurets, ne sont disponibles qu'en quantit limite. Avant la publication d'une monographie 29
dans Pharmeuropa, il est souhaitable que les talons de rfrence soient fournis en quantit 30
requise la DEQM, qui indiquera galement la meilleure stratgie suivre pour optimiser 31
l'emploi de substances disponibles en quantit limite (par exemple, la prparation d'un 32
chantillon dop de la substance plutt que l'envoi de la substance en l'tat). L'objectif de la 33
DEQM est de prsenter l'talon de rfrence pour adoption en mme temps que la 34
monographie ou, dfaut, au plus tard au moment de la publication. 35
Depuis la 5 dition, un changement a t apport la politique suivie en matire 36
d'tablissement de spectres IR de rfrence, qui tait jusqu'alors l'option recommande 37
lorsqu'un talon de rfrence servait uniquement pour l'identification IR. La prfrence est 38
dsormais donne aux substances chimiques de rfrence plutt qu'aux spectres de rfrence, 39
sauf dans certains cas spciaux (par exemple lorsque la mise disposition d'une substance de 40
rfrence pose des difficults pratiques). 41

GUIDE TECHNIQUE, 4
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De nombreux talons de rfrence, notamment ceux d'impurets, ne sont disponibles qu'en 1
quantit limite ; il faut alors prescrire, pour la prparation des solutions, l'utilisation d'une 2
quantit d'talon aussi faible que possible. 3
2 MONOGRAPHIES DE SUBSTANCES POUR USAGE 4
PHARMACEUTIQUE 5
Les monographies reposent sur les spcifications s'appliquant aux substances qui entrent dans 6
la composition des mdicaments approuvs dans les tats membres. Lorsqu'une monographie 7
est inscrite au programme de travail, la DEQM lance une enqute pour identifier les 8
fabricants de la substance, et toutes les donnes reues sont prises en compte pour 9
l'laboration de la monographie. Il convient d'inviter les parties intresses participer 10
l'laboration de la monographie avant sa publication dans Pharmeuropa, car la priode 11
d'enqute publique de 3 mois est souvent trop courte pour que toutes puissent vrifier le 12
projet de monographie. 13
Pralablement l'laboration de toute monographie, il est indispensable de runir le plus 14
d'informations possible sur la substance tudier. 15
Il importe, en particulier, d'tablir : 16
si la substance en question est d'origine naturelle, synthtique ou semi-synthtique, 17
s'il s'agit d'un mlange ou d'une entit unique, 18
le dtail du (des) procd(s) de prparation employ(s), 19
s'il existe diffrentes formes cristallines, car ce paramtre peut avoir une influence sur 20
les proprits de la substance, 21
s'il existe la fois un nantiomre et le racmate ou d'autres mlanges d'nantiomres, 22
s'il existe diffrentes formes hydrates, 23
s'il existe diffrentes entits (acide, base, sel, etc.). 24
Il convient de consulter la Pharmacope ainsi que tout autre document utile sur l'tat des 25
travaux, pour dterminer si des monographies portant sur des substances similaires ont t 26
publies ou sont en cours d'laboration. Si tel est le cas, il est important de reprendre la mme 27
approche pour la nouvelle monographie, moins qu'il existe de bonnes raisons de s'en carter 28
(par exemple des dveloppements rcents en matire de techniques d'analyse). 29
Il arrive que la substance dcrire dans une monographie fasse partie d'un groupe de 30
substances troitement apparentes (famille). Ceci est notamment le cas pour certains 31
excipients tels que les macrogols. Il convient alors de rdiger une monographie cadre qui 32
dcrive clairement les lments communs toutes les substances de la famille et puisse tre 33
utilise pour identifier individuellement chacune de ces substances (monographie de famille). 34
Toutes les substances actives et tous les excipients dcrits dans la Pharmacope europenne 35
sont soumis aux dispositions de la monographie gnrale Substances pour usage 36
pharmaceutique (2034). 37
Titre 38
Il convient d'utiliser, lorsqu'elle existe, la Dnomination Commune Internationale (DCI) 39
tablie par L'Organisation Mondiale de la Sant (OMS) ; cette dnomination est au besoin 40
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complte par le nom de l'anion ou du cation associ et par la mention "hydrate", "dihydrate", 1
"hydrat" (pour les degrs d'hydratation indfinis) ou "anhydre" (lorsque l'on sait qu'il existe 2
galement une forme hydrate). Dans le pass, le degr d'hydratation n'tait pas prcis dans 3
le titre sauf en cas d'existence connue de deux formes hydrates diffrentes ; les titres 4
existants de ce type ne sont pas modifis lors des rvisions, sauf en cas d'existence connue de 5
deux formes hydrates ou d'impratif de sant publique (par exemple, une teneur en eau 6
leve pouvant conduire des erreurs de formulation). La dsignation des anions et cations 7
comporte le cas chant la prcision "mono-", "di-", "tri-". 8
Lorsqu'une substance est utilise dans des mdicaments usage exclusivement vtrinaire 9
approuvs dans les tats membres, le titre comporte la mention "pour usage vtrinaire". 10
2.1 DEFINITION 11
Il convient de vrifier la structure chimique avec le plus de prcision possible, afin de pouvoir 12
tablir exactement : 13
la formule dveloppe, 14
la formule brute et la masse molculaire relative, 15
la dnomination chimique. 16
Ceci implique d'tudier en particulier : 17
l'existence ventuelle d'isomres, de faon spcifier quel est l'isomre utilis ou, au 18
contraire, prciser que le produit est un mlange d'isomres ; 19
dans le cas d'un isomre optique, il est insuffisant de se limiter au sens du pouvoir 20
rotatoire ; il convient d'indiquer la configuration absolue au moyen du systme R/S 21
pour les centres d'asymtrie, ou de tout autre systme appropri (par exemple pour les 22
glucides et les acides amins) ; 23
l'tat d'hydratation ou de solvatation, de faon clairement distinguer les hydrates ou 24
solvates bien dfinis des produits contenant des quantits variables de solvant(s). Pour 25
les premiers, des intervalles de teneur en eau ou en solvant(s) sont spcifis alors que, 26
pour les seconds, on ne mentionne gnralement qu'une teneur maximale. Lorsqu'une 27
substance existe la fois sous forme exempte d'eau ou de solvant(s) et sous forme 28
d'hydrate(s) ou de solvate(s) teneurs en eau ou en solvant(s) diffrentes, et que 29
toutes ces formes sont utilises, elles sont habituellement traites comme des 30
substances distinctes faisant l'objet de monographies spares. 31
Certaines substances chimiques, en particulier celles obtenues partir de matires premires 32
d'origine naturelle ou de substances obtenues par fermentation, peuvent tre difficiles 33
sparer de certaines substances apparentes (exemple : sels de quinine). Ces substances 34
peuvent tre traites comme : 35
une substance chimique, lorsqu'elles sont obtenues un tat de haute puret et 36
peuvent tre doses par une mthode physico-chimique, 37
une substance accompagne d'une certaine proportion de substances apparentes, 38
auquel cas seul le composant principal est dfini exactement (exemple : nomycine), 39
un mlange de plusieurs composants, parfois difficile dfinir, auquel cas une 40
description globale peut suffire (exemple : nystatine). 41

GUIDE TECHNIQUE, 4
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Il convient, s'il y a lieu, de spcifier l'origine de la substance (nom et souche de l'organisme 1
partir duquel est obtenue la substance). Le cas chant, la monographie prcise que la 2
substance est un produit semi-synthtique driv d'un produit de fermentation [pour clarifier 3
l'application de la monographie gnrale Substances pour usage pharmaceutique (2034)]. 4
2.1.1 Combinaisons 5
On utilise parfois en thrapeutique des combinaisons chimiques plus ou moins bien dfinies 6
(exemple : thophylline-thylnediamine), voire des mlanges. Il est alors indispensable de 7
dfinir prcisment chacun des constituants de la combinaison ou du mlange, avec sa 8
structure chimique et la proportion dans laquelle il est prsent. 9
2.1.2 Teneur 10
La substance dcrite dans une monographie n'est jamais une espce chimique parfaitement 11
pure, mais contient une proportion limite d'impurets. La teneur est donc un terme important 12
de la dfinition et elle est donne sous forme de limites l'intrieur desquelles doit se situer le 13
rsultat du dosage. Les limites de teneur doivent tenir compte la fois de la fidlit de la 14
mthode de dosage et de la puret acceptable de la substance. Elles sont normalement 15
exprimes par rapport la substance dessche ou anhydre ; la correction de teneur en 16
solvants rsiduels est sous-entendue [voir Substances pour usage pharmaceutique (2034)]. 17
Dans le cas d'un dosage non spcifique (par exemple titrimtrique), les limites de teneur 18
spcifies sont gnralement de 99,0 - 101,0 pour cent (sauf exception justifie). Dans le cas 19
d'un dosage spcifique effectu par une technique sparative (par exemple chromatographie 20
liquide ou en phase gazeuse), la limite suprieure de teneur est normalement de 102,0 pour 21
cent ; la limite infrieure est tablie en tenant compte des teneurs en impurets prsentes (le 22
cas chant) est peut donc tre infrieure 98,0 pour cent. 23
Ces limites de teneur en principe actif sont tablies en tenant compte : 24
du procd de prparation, qui dtermine le degr de puret pouvant tre 25
raisonnablement exig, 26
de la reproductibilit et de l'exactitude de la mthode analytique, 27
lorsqu'une technique sparative est utilise la fois pour l'essai des substances 28
apparentes et pour le dosage, de la teneur maximale admise en impurets et de 29
l'erreur analytique, 30
de l'valuation du degr de dtrioration tolrable en cours de conservation, 31
de rsultats exprimentaux obtenus en nombre suffisant partir de plusieurs lots (au 32
minimum 3), si possible d'origine et d'ge diffrents. 33
Lorsque la substance examiner contient exclusivement des impurets n'interfrant pas dans 34
le dosage, ou une trs faible proportion d'impurets interfrant dans le dosage, les rsultats du 35
dosage peuvent tre utiliss directement. Il est alors spcifi que la substance examiner 36
contient au minimum x pour cent et au maximum l'quivalent de y pour cent (au moins 37
100,5 pour cent, mais souvent un peu plus) de ... (dfinition chimique de la substance). La 38
teneur est habituellement exprime par rapport la substance anhydre ou dessche. Dans 39
certains cas, il est ncessaire de l'exprimer par rapport la substance exempte de solvant(s), 40
ou anhydre et exempte de solvant(s). La monographie gnrale Substances pour usage 41
pharmaceutique (2034) indique que la teneur est calcul par rapport la substance exempte 42
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de solvant(s), ce qui couvre le cas o lessai de solvant rsiduel nest pas mentionn dans la 1
monographie spcifique. 2
Lorsque la substance examiner contient une proportion relativement importante (de l'ordre 3
de quelques pour cent) d'impurets, qui sont doses en mme temps que le principe actif, il 4
convient d'employer une formulation approprie (par exemple, dans le cas des sels de 5
quinine : x pour cent de sels d'alcalodes totaux, exprims en sels de quinine ). 6
A titre exceptionnel, il peut n'tre fait rfrence qu' une partie ou un lment particulier de 7
la molcule (exemple : dosage de l'oxyde de magnsium dans le carbonate de magnsium 8
lger, ou du magnsium dans le starate de magnsium). 9
Dans le cas des antibiotiques titrs par voie microbiologique, la teneur en principe actif est 10
exprime en Units Internationales, lorsqu'elles existent, avec mention d'une teneur minimale 11
uniquement. 12
Voir galement la section 2.5 Dosage du prsent Guide. 13
2.2 CARACTERES 14
Comme indiqu dans les Prescriptions Gnrales, les descriptions figurant sous 15
CARACTRES ne sont pas interprter au sens strict et ne sont pas considres comme des 16
exigences analytiques. 17
Les points principaux auxquels il peut tre fait rfrence sous ce titre sont les suivants. 18
2.2.1 Aspect 19
Cette description inclut normalement la couleur et la forme physique. Il faut veiller ne pas 20
utiliser le mot blanc sans autre prcision car, par rapport une substance tmoin blanche, 21
trs peu de substances pharmaceutiques paraissent rellement blanches. Cette comparaison 22
n'est bien entendu pas suppose tre effectue, mais l'exprience montre que certains 23
utilisateurs de la Pharmacope persistent l'effectuer au titre d'un contrat d'achat. Il convient 24
donc d'employer l'expression blanc ou sensiblement blanc . La description des couleurs 25
est faite en termes de couleurs primaires ou de combinaisons de couleurs primaires. 26
Couleur. Les qualificatifs utiliss sont les suivants : 27
noir vert rouge 28
bleu gris violet 29
brun orang blanc/sensiblement blanc 30
incolore rose jaune 31
avec parfois des compositions telles que : 32
Franais Anglais 33
bleu-vert greenish-blue 34
vert-bleu bluish-green 35
rouge-violet violet-red 36
violet-rouge reddish-violet 37
rouge-brun brownish-red 38
brun-rouge reddish-brown 39

GUIDE TECHNIQUE, 4
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En franais, la couleur dominante vient en premier ; en anglais elle est place en second. Les 1
expressions telles que jaune citron, chamois, rose saumon sont viter ; on trouve dans les 2
dictionnaires courants, pour ce genre de termes, des quivalents en couleurs spectrales 3
prcises par des qualificatifs appropris (la couleur "chamois", par exemple, est dcrite 4
comme un "jaune terne"). Les adjectifs suivants sont galement utiliss : clair, faible, 5
fluorescent, intense, ple, terne, fonc. 6
Il est noter que les rgles dfinies pour la description des couleurs ou combinaisons de 7
couleurs s'appliquent galement aux changements de coloration des indicateurs dans les 8
essais d'acidit/alcalinit et les titrages volumtriques. 9
2.2.2 Saveur 10
La saveur n'est pas prendre en considration. 11
2.2.3 Odeur 12
Il n'est pas fait rfrence l'odeur en rgle gnrale, et en particulier pour les substances qui 13
prsentent un risque l'inhalation. Dans les autres cas, la mention de l'odeur doit tre 14
justifie. 15
2.2.4 Solubilit 16
Le chapitre gnral 5.11 Rubrique Caractres dans les monographies dcrit une mthode 17
recommande pour l'estimation de la solubilit. Toute indication de solubilit est exprimer 18
dans les termes dfinis dans les Prescriptions Gnrales. Les solvants cits se limitent 19
normalement l'eau, l'alcool et un solvant lipophile. La solubilit dans le chloroforme et dans 20
l'ther n'est pas mentionne. Il peut arriver que la solubilit de diffrents chantillons d'une 21
substance varie sensiblement mme si leur composition se situe dans les limites prescrites par 22
la monographie. Dans ce cas, la solubilit dans les diffrents solvants concerns est indique 23
de faon couvrir plusieurs classes de solubilit (exemple : assez soluble soluble 24
dans... , etc.). La solubilit ou miscibilit dans d'autres solvants auxquels la substance est 25
souvent associe en pratique (huiles grasses, etc.) peut galement tre mentionne. Dans 26
certains cas, il peut tre utile de prciser la solubilit dans les bases ou les acides et, en cas 27
d'insolubilit trs marque dans les solvants mentionns ci-dessus, un solvant particulier peut 28
tre mentionn (dimthylformamide ou dimthylsulfoxyde par exemple). Il n'est pas 29
ncessaire de spcifier la solubilit dans tous les solvants utiliss pour raliser les essais de la 30
monographie. 31
2.2.5 Instabilit 32
Toute manifestation d'instabilit lie l'exposition l'air, la lumire et/ou l'humidit est 33
signaler (exemple : virage au rouge du sulfate de physostigmine lorsqu'il est expos l'air et 34
la lumire). Cette indication, sous CARACTRES, fait l'objet d'une mention distincte de la 35
description de la substance. 36
2.2.6 Hygroscopicit 37
pragmatique recommande pour valuer la tendance d'une substance capter l'eau 39
atmosphrique (plutt qu'une relle dtermination de l'hygroscopicit). Le caractre 40
hygroscopique ou dliquescent de certaines substances peut poser des difficults de pese. Il 41
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convient alors de l'indiquer, en utilisant les termes dfinis dans le chapitre 5.11, pour 1
informer l'analyste et l'alerter sur les prcautions prendre pour manipuler la substance. 2
Lorsqu'une substance est caractrise comme hygroscopique ou dliquescente, sa 3
conservation en rcipient tanche est prescrite. 4
2.2.7 Proprits l'tat solide 5
Les proprits l'tat solide comprennent la cristallinit et le polymorphisme ainsi que la 6
masse volumique, la granulomtrie et la surface spcifique des solides. Ces proprits, 7
notamment le polymorphisme et le pseudopolymorphisme, peuvent avoir un impact sur la 8
biodisponibilit de la substance et la production du mdicament. Il convient de se rfrer au 9
Chapitre gnral 5.9 Polymorphisme. 10
recommande pour dterminer la cristallinit. 12
Dans les monographies d'excipients, les proprits l'tat solide ayant un impact sur la 13
fonctionnalit peuvent tre traites sous la rubrique CARACTERISTIQUES LIEES A LA 14
FONCTIONNALITE (voir plus loin). 15
La mention dans la Pharmacope de l'existence d'un polymorphisme vise alerter les 16
utilisateurs sur la ncessit d'valuer ce phnomne lors du dveloppement d'une forme 17
pharmaceutique. Lorsque l'existence d'un polymorphisme est connue, elle est signale sous la 18
forme d'une mention spare ( Le ... prsente le phnomne du polymorphisme ). 19
Deux cas sont distinguer lorsque l'existence d'un polymorphisme est connue : 20
dans le cas gnral, la monographie n'exclut aucune des formes cristallines possibles, 21
dans certains cas exceptionnels, si la substance est exclusivement utilise dans des 22
formes pharmaceutiques solides et s'il est tabli que l'une des formes cristallines est 23
prfrable du point de vue de la biodisponibilit ou prsente un meilleur profil 24
d'innocuit/efficacit, la monographie peut tre restreinte cette forme. Les 25
techniques requises pour l'identifier figurent alors sous la rubrique IDENTIFICATION. 26
2.2.8 Autres caractristiques 27
D'autres caractristiques physiques qui peuvent tre utiles titre d'information mais ne sont 28
pas suffisamment prcises pour figurer sous IDENTIFICATION ou ESSAI peuvent tre 29
mentionnes sous CARACTERES. Tel est gnralement le cas pour le point de fusion lorsqu'il 30
n'est pas assez prcis pour qu'un intervalle puisse tre indiqu (lorsque l'tablissement d'un 31
intervalle est possible, le point de fusion peut tre indiqu sous IDENTIFICATION). Si une 32
dcomposition peut se produire, cette caractristique doit tre signale. Il peut tre utile de 33
mentionner sous CARACTERES d'autres caractristiques gnrales, par exemple le sens de la 34
rotation optique dans un solvant particulier ou, pour les substances radioactives, la demi-vie 35
du radionuclide et le type de rayonnement mis. 36
2.2.9 Comportement en solution 37
Lorsque l'on sait qu'une dgradation rapide peut se produire en solution, cette information est 38
donne sous forme d'avertissement. 39

GUIDE TECHNIQUE, 4
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2.3 IDENTIFICATION 1
2.3.1 Gnralits 2
Dans une monographie, le but de la rubrique IDENTIFICATION est de confirmer l'identit de la 3
substance. L'identification, au sens de la Pharmacope, est donc gnralement de porte 4
beaucoup plus limite que l'lucidation de la structure d'une substance inconnue ou la 5
dtermination de la composition d'un mlange inconnu. La tche d'identifier une substance ne 6
doit pas tre confondue avec l'valuation de sa puret ou la dtermination de sa concentration 7
mme si, in fine, ces trois aspects sont complmentaires. 8
Il s'ensuit que l'objectif premier des essais et ractions physiques et/ou chimiques dcrits sous 9
IDENTIFICATION, considrs comme un ensemble, est d'assurer autant que possible la 10
spcificit. L'identification doit tre suffisamment spcifique pour permettre de distinguer les 11
uns des autres les excipients ou substances actives possdant des structures voisines. Les 12
identifications ne doivent pas tre trop sensibles, pour ne pas donner de fausses ractions 13
dues la prsence d'impurets tolres, ni exiger un travail exprimental plus important que 14
ncessaire pour diffrencier la substance en question d'autres substances pharmaceutiques 15
disponibles dans le commerce. A cet gard, il convient de tenir compte galement du temps 16
requis pour raliser un essai. 17
Un seul ensemble d'essais d'identification est normalement prescrit. Dans des cas justifis, 18
pour offrir aux utilisateurs de la Pharmacope le choix entre des mthodes ncessitant des 19
appareillages complexes et des mthodes plus simples, deux sries d'identifications peuvent 20
tre proposes. Ceci est habituellement le cas lorsque la substance est utilise dans les 21
pharmacies hospitalires et/ou en officine. La monographie comprend alors deux sries 22
d'essais respectivement intitules Premire identification et Seconde identification . Le 23
ou les essais de la Seconde identification peuvent tre utiliss en remplacement de ceux 24
de la Premire identification s'il peut tre tabli que la substance ou le mdicament 25
provient bien d'un lot certifi conforme l'ensemble des exigences de la monographie. 26
Certains des essais de puret d'une monographie peuvent galement servir l'identification, 27
ventuellement sous une forme modifie. Dans ce cas, il est possible d'utiliser un systme de 28
renvoi la rubrique ESSAI. Cette approche est notamment indique lorsque la diffrenciation 29
de substances troitement apparentes dpend de proprits qui interviennent galement dans 30
le contrle de la puret et de la composition, par exemple la teneur en eau de diffrents 31
hydrates, le pouvoir rotatoire de diffrents isomres, la viscosit de diffrents homologues de 32
longueur de chane d'un polymre. La rubrique IDENTIFICATION doit tre autosuffisante, 33
mme si elle comporte des renvois d'autres rubriques de la monographie. 34
La monographie d'une substance ne doit pas tre traite isolment. Lors de l'laboration d'une 35
srie d'identifications, il convient d'examiner en parallle d'autres substances similaires, 36
qu'elles fassent ou non l'objet de monographies de la Pharmacope, pour vrifier qu'une 37
combinaison particulire d'identifications, dans une srie, permet de distinguer entre elles des 38
substances similaires. Cette vrification doit tre effectue systmatiquement. 39
Dans le cas d'une monographie de famille, l'identification du type de substances peut tre 40
complte par des essais non spcifiques, mais discriminants, portant sur l'identification 41
individuelle des substances de la famille. 42
Des exemples de mthodes d'identification sont donns ci-dessous, avec pour certaines 43
d'entre elles des indications dtailles sur leur mise en oeuvre. 44
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2.3.1.1 Mthodes requrant une instrumentation complexe
Analyse spectrophotomtrique, par exemple enregistrement de spectres infrarouges ou 1
de spectres de rsonance magntique nuclaire. 2
Examen chromatographique par chromatographie en phase gazeuse ou 3
chromatographie liquide. 4
2.3.1.2 Autres mthodes
Dtermination de constantes physiques telles que le point de fusion, le point de 5
solidification, le point d'bullition, le pouvoir rotatoire spcifique, l'angle de rotation 6
optique, le spectre UV, l'absorbance spcifique, la densit, l'indice de rfraction et la 7
viscosit. 8
Ractions chimiques telles que ractions de coloration ou de prcipitation (y compris 9
la formation de drivs ou de produits de dgradation, qui peuvent ensuite tre soumis 10
un examen physique) et dtermination de constantes chimiques (indice de 11
saponification, d'esters, d'hydroxyle et d'iode). 12
Examen chromatographique par chromatographie sur couche mince. 13
2.3.2 Spectrophotomtrie d'absorption dans l'infrarouge 14
La spectrophotomtrie IR est gnralement considre comme une mthode autosuffisante 15
pour vrifier l'identit des substances organiques non ionises autres que les sels d'acides ou 16
de bases organiques. Cette mthode ncessite toujours l'utilisation d'une substance ou d'un 17
spectre de rfrence. L'emploi de substances de rfrence est aujourd'hui prfre celle de 18
spectres de rfrence. Ceux-ci sont utiliss lorsque la mise disposition de substances de 19
rfrence pose des difficults pratiques. 20
Les sels organiques de substances organiques, et certains sels inorganiques de substances 21
organiques (phosphates et sulfates par exemple) sont faciles diffrencier les uns des autres. 22
Dans le cas des sulfates, toutefois, il est ncessaire d'tendre la gamme habituelle 23
d'enregistrement (4000600 cm
-1
) 4000400 cm
-1
. 24
La mthode de prparation des chantillons (pastille, film entre 2 plaques d'un sel halogn, 25
pte, etc.) n'est pas spcifie dans la monographie, sauf si l'on a constat lors des travaux 26
d'laboration que l'obtention d'un spectre satisfaisant en dpend. 27
Dans certains cas, dcrits ci-dessous, le spectre IR seul ne suffit pas confirmer l'identit de 28
la substance et il est ncessaire de le complter par d'autres essais. 29
2.3.2.1 Sels d'acides ou de bases organiques
Pour certains ions ou groupes fonctionnels faisant partie de substances organiques, plusieurs 30
identifications sont dcrites dans les mthodes gnrales. Il est toutefois gnralement 31
suffisant d'en utiliser une seule. 32
2.3.2.2 Substances chimiquement apparentes
Certaines substances troitement apparentes la substance examiner peuvent prsenter des 33
spectres trop proches de celui de la substance en question pour qu'une identification sans 34
ambigut soit possible. Dans ce cas, la spectrophotomtrie IR est accompagne d'un autre 35
essai simple, par exemple le point de fusion ou une chromatographie sur couche mince 36
effectue par comparaison une substance de rfrence. 37

GUIDE TECHNIQUE, 4
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2.3.2.3 Polymorphisme
Le chapitre gnral prvoit une recristallisation avant enregistrement du spectre. Lorsqu'une 1
monographie mentionne l'existence d'un polymorphisme, une mthode de recristallisation y 2
est dcrite moins que l'on ne souhaite restreindre le champ d'application de la monographie 3
la forme cristalline reprsente par la substance chimique de rfrence. Dans ce dernier cas, 4
la monographie indique que le spectre est enregistr "sans recristallisation". 5
Si, par exception, la monographie dcrit une ou plusieurs formes cristallines spcifiques, et si 6
le spectre IR n'est pas caractristique, un essai complmentaire est introduit. 7
2.3.2.4 Isomres optiques
Pour identifier un isomre particulier ou un racmate, un essai du pouvoir rotatoire spcifique 8
ou de l'angle de rotation optique est introduit. 9
2.3.3 Spectrophotomtrie d'absorption dans l'ultraviolet et le visible 10
A la diffrence de la spectrophotomtrie IR, cette mthode est habituellement non spcifique 11
(en tant qu'identification), moins que la courbe d'absorption ne prsente plusieurs 12
maximums et minimums, des rgions d'absorption inhabituellement fortes ou faibles, etc. Il 13
est peu frquent que des substances de rfrence soient utilises. Le spectre UV d'une 14
substance peut donc rarement servir lui seul de critre d'identification. 15
La concentration de la solution examiner est telle que l'absorbance, dtermine sous une 16
paisseur de 1 cm, se situe de prfrence entre 0,5 et 1,5. 17
L'intervalle des longueurs d'onde explorer doit tre indiqu ; en gnral, il ne s'tend pas 18
jusqu' la zone probable de fin d'absorption ou d'interfrence du solvant. Les longueurs 19
d'onde de maximums et minimums en forme de pics aigus sont indiques par une valeur 20
unique, avec un cart admis de 2 nm, tandis qu'un intervalle est indiqu pour les bandes 21
plus larges. Lorsqu'il est jug ncessaire de mentionner la longueur d'onde des paulements, 22
etc., le terme environ peut tre utilis. 23
Les absorbances spcifiques sont galement exprimes sous forme d'intervalle (gnralement 24
5 pour cent) afin de couvrir les variations de teneur de la substance absorbante et l'erreur 25
exprimentale. Il est noter que la tolrance instrumentale pour l'absorbance est de 0,01, ce 26
qui signifie que l'cart en pourcentage d cette source de variation dpend de la valeur 27
absolue de l'absorbance. De plus, la teneur en substance absorbante varie avec la teneur en 28
eau (ou autre solvant) autorise ; lorsque celle-ci ne dpasse pas 1 pour cent ou se situe dans 29
des limites bien dfinies, il convient gnralement de calculer l'absorbance spcifique de la 30
substance en l'tat et d'tablir les limites en consquence. Lorsque le spectre prsente 31
plusieurs maximums, il est possible de spcifier le(s) rapport(s) entre les absorbances 32
correspondantes, plutt que les absorbances spcifiques individuelles, condition que ce 33
rapport soit infrieur ou gal 5 ; ceci vite d'avoir corriger les absorbances pour tenir 34
compte de la teneur en solvant de la substance. 35
Il est important de choisir avec soin les solvants prescrits pour la spectrophotomtrie UV, et 36
de veiller leur puret, afin d'viter la prsence d'impurets susceptibles d'affecter 37
l'absorbance des substances examiner. 38
Dans certains cas d'identification par spectrophotomtrie d'absorption dans la rgion UV-VIS, 39
la rsolution de l'instrument peut constituer un facteur critique pour l'observation des 40
caractristiques spectrales recherches (exemple : spectres de type benznique prsentant une 41
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structure fine). Dans certains cas, la rsolution minimale requise est indique dans la 1
monographie. Pour dterminer cette valeur, il convient de faire varier la largeur de fente 2
jusqu' obtention d'un spectre parfaitement adapt l'objectif recherch. La rsolution 3
correspondant ce rglage est alors dfinie exprimentalement sur la base du rapport des 4
absorbances obtenu avec une solution de tolune R 0,02 pour cent V/V dans l'hexane R, 5
comme prescrit dans la mthode gnrale 2.2.25. Le rapport minimal est indiqu dans la 6
monographie avec deux chiffres significatifs. 7
Le tableau 3 montre, titre d'information, la relation approximative qui existe entre largeur 8
de fente et rapport des absorbances. 9
Tableau 3 Rsolution des spectrophotomtres en fonction de la largeur de fente
Largeur de fente (nm) Rapport des absorbances
0,25 2,3
0,5 2,2
1,0 2,0
2,0 1,4
3,0 1,1
4,0 1,0
2.3.4 Point de fusion, point de solidification et point d'bullition 10
L'utilisation de ces constantes physiques pour l'identification n'est approprie que si leur 11
valeur est bien dfinie et si leur dtermination ne s'accompagne pas d'une dcomposition 12
risquant de les rendre excessivement tributaires du mode opratoire. L'existence possible d'un 13
polymorphisme doit galement tre prise en compte ; les diffrences ventuelles de point de 14
fusion doivent tre indiques mme lorsqu'elles sont signales sous CARACTERES. Dans les 15
cas exceptionnels o il est ncessaire de distinguer une forme cristalline spcifique, la 16
dtermination du point de fusion peut aider exclure la ou les forme(s) indsirable(s). 17
Nanmoins, il est important de ne pas oublier que la valeur observe peut correspondre un 18
point de fusion apparent : une transition polymorphe solide-solide peut intervenir au cours de 19
l'essai et le point de fusion mesur sera alors celui de la forme rsultante. 20
La dtermination du point de fusion, seule ou combine une raction chimique, ne suffit pas 21
confirmer l'identit d'une substance. Nanmoins, il suffit souvent de le complter par une 22
autre identification, telle que la CCM. Le point de fusion dtermin par la mthode capillaire 23
habituelle est dfini dans la Pharmacope comme point de fusion de la dernire particule de 24
substance. Il ne doit pas tre confondu avec l'intervalle de fusion, mme si ces deux valeurs 25
sont donnes sous forme d'intervalle. 26
2.3.5 Pouvoir rotatoire spcifique 27
Lorsqu'une monographie dcrit un nantiomre, la rubrique IDENTIFICATION comporte une 28
dtermination du pouvoir rotatoire ou renvoie un essai de puret nantiomrique figurant 29
sous ESSAI. Lorsque le racmate (ou le mlange racmique) et l'nantiomre sont tous deux 30
disponibles, la monographie du racmate contient un essai du pouvoir rotatoire auquel 31
renvoie la rubrique IDENTIFICATION. Lorsque seul le racmate est disponible, une 32
dtermination du pouvoir rotatoire est prescrite sous ESSAI condition que le pouvoir 33

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
rotatoire spcifique de la forme chirale soit connu et suffisamment lev pour permettre la 1
confirmation du caractre racmique. 2
2.3.6 Chromatographie sur couche mince 3
Cette mthode d'identification requiert l'emploi de substances de rfrence. Il est possible 4
d'amliorer sa slectivit en combinant chromatographie sur couche mince et ractions 5
chimiques in situ, c'est--dire en employant des ractifs de pulvrisation appropris. Dans ce 6
cas, il n'y a pas lieu de rpter en tube essai la mme raction ou une raction similaire. 7
S'il est trs important d'assurer la sparation d'un couple critique dans un essai des substances 8
apparentes, cette sparation ne joue par contre qu'un rle mineur dans une identification. La 9
sparation d'un couple critique n'est plus exige dans le cadre des essais individuels 10
d'IDENTIFICATION, mais est maintenue dans la rubrique ESSAI. Nanmoins, au cours du 11
dveloppement et de la validation, la sparation de la substance de substances voisines doit 12
tre dmontre. 13
Un essai de sparation chromatographique est dcrit dans le chapitre REACTIFS pour permettre 14
de vrifier les performances du type de plaque concern. Cet essai est conu comme une 15
procdure de contrle qualit, mise en uvre de temps en temps par l'utilisateur de la plaque 16
CCM. Il est clair qu'une procdure gnrale de ce type ne peut tre adapte tous les 17
problmes de sparation chromatographique, et qu'il est parfois ncessaire de dcrire un 18
critre de sparation pour assurer l'identification de la substance. Dans de tels cas, qui restent 19
exceptionnels, un critre de sparation est spcifi dans la rubrique IDENTIFICATION. 20
Si un systme CCM est utilis dans la monographie pour un essai de puret, il est 21
recommand de l'employer galement pour l'identification, s'il est appropri. Pour 22
l'identification, la concentration de la solution examiner et de la solution tmoin 23
correspondante est gnralement rduite de faon ce que la quantit dpose sur la plaque 24
soit de l'ordre de 5 g 20 g. Il peut galement tre ncessaire de passer d'un systme de 25
dtection gnral un systme plus discriminant. 26
Des indications techniques sur cette mthode chromatographique figurent galement dans la 27
section traitant de l'essai des substances apparentes. 28
2.3.7 Chromatographie en phase gazeuse et chromatographie liquide 29
Les principes de base prsents pour l'identification par chromatographie sur couche mince 30
s'appliquent ici mutatis mutandis. La chromatographie en phase gazeuse et la 31
chromatographie liquide sont rarement utilises pour les identifications et, lorsqu'elle le sont, 32
renvoient un essai ou un dosage effectu par la mme mthode dans la monographie. Ces 33
techniques ne sont utilises qu'en l'absence d'autre mthode approprie, et jamais comme 34
unique essai d'identification. Des indications techniques sur la chromatographie en phase 35
gazeuse et la chromatographie liquide figurent galement dans la section traitant de l'essai des 36
substances apparentes. 37
2.3.8 Ractions chimiques 38
Plusieurs ractions d'identification de nature chimique couramment utilises sont dcrites 39
dans les mthodes gnrales de la Pharmacope, et il convient de les utiliser chaque fois que 40
possible. Lorsque le chapitre gnral 2.3.1 dcrit plusieurs ractions pour un ion ou un 41
groupement fonctionnel, il n'est normalement ncessaire de n'en prescrire qu'une dans la 42
monographie. Soulignons qu'il est ncessaire de prciser la quantit de substance, ou de 43
e
solution, utiliser pour la raction d'identification en question. Il en va de mme pour les 1
ractions qui doivent tre dcrites en dtail dans la monographie. 2
Les critres d'identification faisant appel la reconnaissance d'une odeur ou saveur sont 3
viter. 4
Chaque raction chimique doit tre choisie dans l'objectif de dmontrer la prsence d'une 5
partie diffrente de la molcule identifier. 6
Pour diffrencier au sein d'un mme groupe (famille) des substances se distinguant par : 7
le niveau de condensation, 8
la longueur de la chane hydrocarbone (exemple : acides gras), 9
il est ncessaire de renvoyer un ou plusieurs essai(s) de puret appropri(s) portant sur la 10
dtermination de certains indices (indice d'iode, indice de saponification, ...). 11
2.4 ESSAI 12
2.4.1 Gnralits 13
La rubrique ESSAI vise essentiellement limiter les impurets dans les substances chimiques. 14
Le chapitre gnral 5.10 Contrle des impurets dans les substances pour usage 15
pharmaceutique dcrit dans le dtail la politique appliquer. 16
Si l'une des fonctions essentielles des monographies est d'assurer une puret adquate des 17
substances, dans l'intrt de la sant publique, l'objectif de la Pharmacope n'est pas pour 18
autant d'imposer aux fabricants des exigences excessives qui limiteraient inutilement leur 19
capacit produire des produits conformes. 20
Dans un souci de transparence, des informations sont fournies chaque fois que possible sur 21
les impurets contrles par un essai et sur la teneur approximative (en pourcentage, ppm, 22
etc.) qui quivaut la limite prescrite pour les impurets ou classes d'impurets dfinies. 23
L'information associe la limite impose peut tre une teneur nominale dtermine au vu 24
des conditions d'essai, ou tre fonde sur des donnes issues d'expriences de recouvrement. 25
Il peut arriver qu'un essai s'applique spcifiquement une qualit spciale de la substance 26
(destine l'administration parentrale, la prparation de solutions pour dialyse, etc.), ou 27
comporte une limite spcifique s'appliquant un usage particulier ; le champ d'application 28
particulier de l'essai/limite est alors prcis dans l'essai. 29
2.4.2 Titre 30
Chaque fois que possible, le titre doit indiquer quelle est l'impuret ou classe d'impurets 31
limite par l'essai (par ex. : Acide oxalique, Potassium, Cuivre, Chlorures, etc.). Les essais 32
limites non spcifiques portent un titre plus gnral, convenablement choisi partir de la 33
terminologie usuelle de la Pharmacope (par ex. : Aspect de la solution, pH, Acidit ou 34
alcalinit, Mtaux lourds, etc.), ou un intitul similaire. Les titres qui se rfrent simplement 35
la mthodologie employe dans l'essai (par ex. : Absorbance, Pouvoir rotatoire spcifique) 36
sont viter dans la mesure du possible. 37
2.4.3 Solution S 38
Une solution de la substance examiner, appele Solution S , est prpare lorsque la 39
mme solution est utilise dans plusieurs essais (et/ou identifications). 40

GUIDE TECHNIQUE, 4
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Si ncessaire, plusieurs solutions S (dites S1, S2, ...) peuvent tre prpares selon des 1
modalits diffrentes, chacune tant toujours utilise pour au moins 2 essais. 2
Pour les substances insolubles, la solution S peut tre prpare par extraction. 3
Le solvant utilis dpend de la solubilit de la substance examiner et de celle des impurets 4
potentielles ; il peut s'agir 5
d'eau (cas le plus gnral) : 6
o eau exempte de dioxyde de carbone si la prsence de dioxyde de carbone peut 7
affecter de faon notable les rsultats d'un essai (par ex. essais pH ou 8
Acidit/alcalinit , voir plus loin), 9
o eau distille si la solution S sert pour les essais du baryum, du calcium ou des 10
sulfates, 11
o eau exempte de dioxyde de carbone prpare partir d'eau distille lorsque les 12
deux conditions ci-dessus s'appliquent, 13
d'un acide dilu ou d'une solution alcaline, 14
plus rarement, d'autres solvants (alcools, ttrahydrofurane, ...) qui fournissent des 15
solutions de champ d'utilisation plus rduit que celui des solutions aqueuses. 16
Le solvant utilis et la concentration retenue dpendent de la solubilit de la substance 17
examiner et de la nature des essais effectuer. Le solvant doit permettre de procder aux 18
essais prvus, soit directement, soit aprs dilution approprie explicitement indique dans 19
chaque essai. Gnralement, la concentration est de l'ordre de 20 g/l 50 g/l, mais elle peut 20
tre plus faible (10 g/l) ou plus leve (100 g/l, ou mme davantage dans des cas 21
exceptionnels). La quantit de solution S prpare doit suffire pour effectuer chacun des 22
essais auxquels elle est destine. Si la solution S doit tre filtre, il convient de tenir compte 23
de la perte intervenant lors de la filtration ; quand la partie insoluble ainsi spare doit servir 24
pour un autre essai, cela est clairement signal. 25
L'utilisation d'une mme prise d'essai de solution S pour plusieurs essais est viter, sauf 26
dans les cas o il parat souhaitable d'conomiser la substance (parce qu'elle est d'un cot 27
lev ou soumise des restrictions) ; cette latitude est alors clairement spcifie dans la 28
monographie. 29
Selon les essais, la concentration de la solution S est dfinie avec une plus ou moins grande 30
prcision : 31
pour les essais "Aspect de la solution", "pH" et certaines identifications, une prcision 32
de 5 10 pour cent est suffisante, 33
pour la plupart des essais limites, une prcision de l'ordre de 2 pour cent convient, 34
pour certains essais tels que la dtermination du pouvoir rotatoire spcifique, de 35
l'absorbance spcifique ou de divers indices chimiques, et plus gnralement pour les 36
essais dont le rsultat est obtenu par le calcul, une plus grande prcision est 37
ncessaire. 38
La prcision avec laquelle est dfinie la concentration de la solution S est celle requise par 39
l'essai le plus contraignant. 40
La description de la prparation de la solutions S doit donc inclure : 41
e
la quantit de substance examiner, avec la prcision requise (voir Prescriptions 1
Gnrales), 2
le volume, avec une dcimale (10,0 ml, 25,0 ml ...) lorsque la concentration doit tre 3
connue moins de 1 pour cent prs et sans dcimale (10 ml, 25 ml ...) lorsqu'une 4
prcision moindre est suffisante. 5
2.4.4 Aspect de la solution 6
Cet essai permet d'apprcier la puret gnrale d'une substance par mise en vidence 7
d'impurets insolubles dans le solvant choisi, ou d'impurets colores. 8
Il est presque systmatiquement prescrit pour les substances destines aux prparations pour 9
usage parentral. En dehors de ce cas, il n'est utiliser que s'il apporte des indications utiles 10
sur la puret gnrale de la substance. 11
Il peut comporter les deux essais suivants, ou seulement l'un d'eux : 12
limpidit et degr d'opalescence des liquides (2.2.1), 13
degr de coloration des liquides (2.2.2). 14
Ces deux essais sont presque toujours effectus sur des solutions identiques, gnralement la 15
solution S, mais ils peuvent aussi tre raliss sur des solutions diffrentes. 16
Le solvant utilis est habituellement de l'eau, mais d'autres solvants peuvent tre prfrables 17
selon la solubilit de la substance examiner. 18
Lorsqu'un solvant organique est utilis pour prparer la solution S, il peut tre ncessaire de 19
s'assurer qu'il satisfait lui-mme l'essai, surtout lorsque la norme applique est trs svre. 20
L'essai est d'autant plus svre que la solution est plus concentre. Pour les substances trs 21
pures ou utilises dose leve, la concentration choisie est de 50 g/l 100 g/l, alors que pour 22
les substances moins pures ou administres faible dose la concentration retenue est de 10 g/l 23
20 g/l. 24
2.4.4.1 Limpidit et degr d'opalescence
Cet essai est surtout mis en oeuvre pour les substances incolores ou donnant des solutions 25
faiblement colores, pour permettre une bonne comparaison avec les suspensions tmoins. 26
La quantit de solution ncessaire dpend du diamtre des tubes utiliss : elle varie de 7 ml 27
20 ml pour les tubes d'un diamtre de 15 mm 25 mm prescrits dans la mthode gnrale. 28
C'est donc ce dernier volume qu'il convient de prendre en compte. 29
Le plus souvent, la solution examine doit tre limpide (au sens de la Pharmacope). 30
Dans certains cas cependant, pour des substances non destines tre utilises en solution, 31
une opalescence plus marque peut parfois tre tolre. 32
2.4.4.2 Degr de coloration
Cet essai s'applique aux substances elles-mmes incolores mais susceptibles de contenir, ou 33
de former par dgradation, des impurets colores qu'il est possible de contrler en 34
appliquant une limite de coloration de la solution. 35
Deux procds sont dcrits dans le chapitre gnral (2.2.2) de la Pharmacope : 36

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
le procd I ncessite l'emploi de 2 ml de solution seulement, mais il est rarement 1
prescrit sauf pour des substances donnant des solutions trs colores, 2
le procd II, plus discriminant et donc plus frquemment utilis, ncessite l'emploi 3
d'un volume plus important de solution, identique celui de l'essai de limpidit. 4
Les rsultats obtenus par ces 2 procds ne concident pas ncessairement ; la monographie 5
doit donc prciser lequel des deux utiliser. 6
La solution est dcrite comme incolore lorsqu'elle est moins colore que la solution tmoin 7
B
9
. Lorsqu'elle est lgrement colore, elle est compare la solution tmoin approprie 8
(2.2.2). Lorsque la nuance de coloration varie selon les chantillons, il est admis de 9
mentionner deux solutions tmoins (ou plus) de mme degr de coloration, ou seulement le 10
degr de coloration sans spcifier la couleur relle. 11
Pour les substances destines un usage parentral ou les solutions fortement colores, 12
notamment lorsque l'emploi du procd I est envisag, il est prfrable d'indiquer une limite 13
d'absorbance, mesure l'aide d'un spectrophotomtre rgl sur une longueur d'onde 14
approprie (habituellement comprise entre 400 nm et 450 nm). La concentration de la 15
solution et la limite d'absorbance doivent tre prcises. Les conditions opratoires et la 16
limite doivent tre tablies sur la base de la courbe d'absorbance entre 400 nm et 450 nm et 17
des rsultats obtenus avec un certain nombre d'chantillons appropris, y compris si 18
ncessaire des chantillons examins aprs conservation ou dgradation. 19
2.4.5 pH ou acidit/alcalinit 20
Cet essai permet de limiter les impurets acides ou alcalines dues la mthode de prparation 21
ou de purification employe, ou rsultant de la dgradation de la substance (par exemple dans 22
des conditions de conservation inadquates). Il peut galement servir vrifier la 23
composition stchiomtrique de certains sels. 24
Deux types d'essais sont appliqus dans la Pharmacope pour les impurets protolytiques : 25
un titrage semi-quantitatif utilisant des indicateurs colors ou des mesures lectromtriques 26
pour dfinir des limites (essai d'acidit/alcalinit), ou une dtermination du pH. 27
La dtermination du pH est retenir si la substance possde un pouvoir tampon ; dans le cas 28
contraire, il est recommand d'employer une mthode titrimtrique. 29
Le choix entre l'essai d'acidit/alcalinit et la dtermination du pH peut tre effectu sur la 30
base d'une estimation du pouvoir tampon de la substance. A cette fin, une courbe de titrage 31
peut tre tablie partir d'une solution aqueuse (ou, si besoin est, d'un extrait) la 32
concentration prvue (10 g/l 50 g/l) d'un chantillon, de prfrence pur, de la substance 33
examiner, en utilisant respectivement de l'acide chlorhydrique 0,01 M et de l'hydroxyde de 34
sodium 0,01 M et en mesurant le pH par potentiomtrie. 35
Le point d'inflexion de la courbe de titrage reprsente le pH rel de la solution ; il se trouve, 36
pour une substance pure, au point d'intersection avec l'axe des pH. Le pouvoir tampon de la 37
solution examiner est donn par le dplacement total du pH, pH, lu sur la courbe de titrage 38
aprs addition d'une part de 0,25 ml d'hydroxyde de sodium 0,01 M 10 ml de la solution, 39
d'autre part de 0,25 ml d'acide chlorhydrique 0,01 M 10 ml de la mme solution. Le pouvoir 40
tampon est d'autant plus faible que pH est lev. Pour un chantillon non totalement pur, il 41
convient d'effectuer une translation de la courbe de titrage, de faon amener le pH rel de la 42
solution sur l'axe des pH, avant de procder la lecture de pH. 43
e
Le choix de la mthode utiliser pour limiter les impurets protolytiques est dtermin par 1
l'ordre de grandeur de pH pour la solution examine, suivant le schma suivant. La 2
classification adopte repose sur le fait que le virage de la plupart des indicateurs colors 3
intervient sur un intervalle de 2 units pH. 4
Classe A pH > 4 Essai Acidit/alcalinit avec deux indicateurs appropris
Classe B 4 > pH > 2 Essai Acidit/alcalinit avec un seul indicateur appropri
Classe C 2 > pH > 0,2 Mesure directe du pH
Classe D pH < 0,2 La puret protolytique ne peut pas tre raisonnablement
contrle. Les sels composs d'ions possdant plusieurs
fonctions basiques et/ou acides appartiennent cette classe et
pour eux, une mesure du pH peut contribuer vrifier la
composition si les limites sont suffisamment troites
Il est vident que le fait de changer la concentration de la solution examiner peut dans une 5
certaine mesure modifier la classification de la substance considre dans l'une ou l'autre des 6
classes de pouvoir tampon dfinies plus haut, puisque la forme de la courbe de titrage sera 7
galement modifie. Toutefois, il convient de ne pas dpasser l'intervalle de concentration 8
indiqu ci-dessus, sauf si la faible solubilit de la substance dans l'eau rend invitable 9
l'utilisation d'une solution plus dilue. 10
Dans certains cas, il est impossible d'effectuer un essai d'acidit/alcalinit au moyen 11
d'indicateurs en raison, par exemple, de la coloration de la solution examiner ; les limites 12
sont alors contrles par lectromtrie. D'autre part, si l'addition de l'acide ou de la base 13
provoque une dcomposition ou une prcipitation de la substance examiner, il peut tre 14
ncessaire de prescrire une dtermination du pH quel que soit le pouvoir tampon. 15
Lorsque, pour les raisons particulires mentionnes ci-dessus, une mesure du pH doit tre 16
prescrite pour des solutions dont le pouvoir tampon est faible ou nul, la solution examiner 17
est prpare avec de l'eau exempte de dioxyde de carbone. Par contre, il n'est pas ncessaire 18
d'employer de l'eau exempte de dioxyde de carbone pour la prparation de solutions dont le 19
pouvoir tampon est suffisant pour permettre une mesure directe du pH, car la prcision 20
requise, qui dpasse rarement 1/10 d'unit pH, ne s'en trouvera pas affecte. Lorsque, pour 21
exprimer une exigence d'acidit, il est spcifi que le volume d'hydroxyde de sodium 0,01 M 22
requis n'excde pas 0,1 ml pour 10 ml de solution examiner, cette dernire doit tre 23
prpare avec de l'eau exempte de dioxyde de carbone. Lorsque la solution S doit tre utilise 24
dans un essai de puret protolytique, il convient de tenir compte de ces considrations en 25
prescrivant sa composition. 26
2.4.6 Pouvoir rotatoire 27
Bien qu'tant parfois utile pour l'identification, la mesure du pouvoir rotatoire est surtout 28
utilise comme essai de puret pour : 29
soit apprcier globalement la puret d'une substance optiquement active, (liquide ou 30
solide en solution), en calculant le Pouvoir rotatoire spcifique (titre de l'essai), 31
soit limiter des impurets optiquement actives dans une substance optiquement 32
inactive (racmate ou mlange racmique), si le pouvoir rotatoire spcifique 33
589,3 nm est suffisant pour assurer une sensibilit satisfaisante. L'intervalle 34
normalement spcifi est alors de + 0,10 0,10, pour couvrir les substances qui ne 35

GUIDE TECHNIQUE, 4
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sont pas de vrais racmates. On mesure dans ce cas l' Angle de rotation optique 1
(titre de l'essai) du liquide ou du solide en solution, dans des conditions dfinies. 2
Il est gnralement plus appropri de contrler ces impurets par des mthodes de sparation 3
chirale, car le pouvoir rotatoire spcifique est souvent insuffisant pour permettre de limiter 4
l'nantiomre indsirable (distomre) en prsence de l'nantiomre actif (eutomre). 5
L'essai n'est pas applicable aux solutions fortement colores ou opalescentes (dans ce dernier 6
cas, une filtration peut parfois rendre possible la dtermination). 7
Dans la description de l'essai, il convient de prendre en compte les paramtres suivants : 8
la nature du solvant, qui dpend de la solubilit de la substance examiner et de son 9
pouvoir rotatoire dans ce solvant ; la puret et surtout la teneur en eau des solvants 10
non aqueux doivent souvent tre dfinies avec soin, 11
la concentration de la solution, qui doit tre assez leve pour permettre une lecture 12
fiable de l'angle de rotation, 13
la quantit de substance utiliser, qui doit tre dtermine avec une incertitude 14
relative suffisante (en gnral 1 pour cent), tout comme le volume auquel complter 15
(indiqu avec une dcimale), 16
le volume de solution requis, qui dpend de l'appareillage utilis ; toutefois, comme il 17
n'excde gnralement pas 25,0 ml, c'est ce volume qui est habituellement spcifi, 18
le degr d'hydratation ou de solvatation organique de la substance, ncessaire au 19
calcul du rsultat, 20
le rsultat est la moyenne d'au moins 5 mesures effectues, dans le cas d'une 21
dtermination visuelle, avec un appareil permettant la lecture 0,01 prs, 22
les valeurs mesures de l'angle de rotation optique (rarement suprieures 2) sont 23
indiques avec 2 dcimales, 24
les valeurs du pouvoir rotatoire spcifique sont indiques avec 2 ou 3 chiffres 25
significatifs : 2 pour les valeurs infrieures 10 et 3 pour les valeurs gales ou 26
suprieures 10 , 27
la limite de composition des racmates ou mlanges racmiques. 28
L'absorption du rayonnement lectromagntique peut tre utilise pour les essais de puret, 30
dans le cadre d'essais limites portant sur certaines impurets. Le cas type est celui des 31
impurets qui absorbent le rayonnement dans une rgion o la substance elle-mme est 32
transparente. On mesure alors l'absorbance d'une solution de la substance examiner, soit : 33
par mesure directe sur la solution ; une absorbance maximale une longueur d'onde 34
donne ou sur un intervalle de longueurs d'onde donn est alors prescrite, 35
aprs une raction chimique conduisant la formation, partir de l'impuret, d'un 36
produit de raction absorbant une longueur d'onde o la substance examiner est 37
transparente ; une absorbance maximale cette longueur d'onde est alors prescrite. 38
Pour les mesures dans l'ultraviolet, il est conseill de ne pas oprer au-dessous de 230 nm. 39
Il est important de dcrire prcisment les conditions opratoires, en particulier le mode de 40
prparation des solutions obtenues par dilutions successives. 41
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2.4.8 Substances apparentes 1
La politique suivie en matire de contrle des impurets est dcrite dans le chapitre gnral 2
5.10 Contrle des impurets dans les substances pour usage pharmaceutique et dans la 3
monographie gnrale Substances pour usage pharmaceutique (2034). Les monographies 4
doivent tre labores conformment cette politique. Elles ont pour vocation de couvrir les 5
substances entrant dans la composition de mdicaments autoriss dans les tats membres, et 6
doivent permettre un contrle appropri de toutes les impurets prsentes dans ces 7
substances, sous rserve que les informations et chantillons (substance et impurets) requis 8
puissent tre obtenus des fabricants. Si, pour une voie de synthse donne, les informations et 9
chantillons requis ne sont pas disponibles, la monographie risque de ne pas couvrir le profil 10
d'impurets correspondant. 11
Les dispositions concernant les substances apparentes de la monographie gnrale 12
Substances pour usage pharmaceutique (2034) sappliquent toutes les substances actives 13
qui font lobjet dune monographie de la Ph Eur, sauf indication contraire. La monographie 14
gnrale indique les exceptions suivantes : 15
produits biologiques ou biotechnologiques, aux peptides, aux oligonuclotides, aux 16
produits radiopharmaceutiques, aux produits de fermentation et produits semi- 17
synthtiques drivs, aux produits bruts dorigine animale ou vgtale ou aux produits 18
vgtaux. 19
Si une exception doit tre faite dans le cas dune autre substance, la monographie spcifique 20
lindique : 21
Les seuils indiqus sous Substances apparentes (Tableau 2034.-1) dans la monographie 22
gnrale Substances pour Usage Pharmaceutique (2034) ne sappliquent pas. 23
Les monographies doivent normalement spcifier des critres d'acceptation pour : 24
chaque impuret spcifie, 25
les impurets non spcifies ("toute autre impuret"), pour lesquelles le critre 26
correspond normalement au seuil d'identification, 27
les impurets totales. 28
Les impurets contrler comprennent : les intermdiaires et sous-produits de synthse, les 29
substances co-extraites dans les produits d'origine naturelle, les produits de dgradation. Les 30
monographies de substances chimiques organiques comportent gnralement un essai intitul 31
"Substances apparentes" (ou un essai assurant une fonction similaire mais sous un titre 32
diffrent), dont l'objectif est d'assurer le contrle des impurets organiques ; les impurets 33
inorganiques sont, le cas chant, gnralement couvertes par d'autres essais. Les solvants 34
rsiduels font l'objet de dispositions spcifiques [voir plus loin, ainsi que les textes 35
5.4 Contrle des solvants rsiduels et Substances pour usage pharmaceutique (2034)]. 36
La mthode privilgie, et la plus couramment utilise, pour contrler les impurets 37
organiques est la chromatographie liquide ; la chromatographie en phase gazeuse ou 38
l'lectrophorse capillaire peuvent dans certains cas lui tre prfres. Beaucoup de 39
monographies existantes font encore appel la chromatographie sur couche mince, mais la 40
politique recommande aujourd'hui est de rserver cette mthode des impurets spcifiques 41
pouvant difficilement tre contrles par CL ou CPG. Les essais par CCM qui ne sont pas 42
conformes cette politique seront progressivement remplacs, au fur et mesure que les 43
informations requises sur des essais CL ou CPG appropris seront disponibles. 44

GUIDE TECHNIQUE, 4
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Il est frquent qu'une monographie doive tre conue de faon couvrir diffrents profils 1
d'impurets, en raison de la multiplicit des voies de synthse et procdures de purification 2
utilises par les producteurs. La pratique usuelle est alors de dcrire un essai CL de porte 3
gnrale complt si ncessaire par d'autres essais (CL, CPG, EC, CCM, ou autres 4
techniques) visant des impurets spcifiques. Il est toutefois de plus en plus compliqu, dans 5
certains cas, de mettre au point un essai gnral simple, et il faut alors dcrire plusieurs essais 6
gnraux dont l'objet est dfini dans l'essai mme, avec renvoi la rubrique IMPURETES. 7
Les monographies couvrent un certain nombre d'impurets spcifies, dsignes dans la 8
rubrique IMPURETES ; sont dites "spcifies" les impurets qui sont prsentes dans les lots 9
actuels de substances utilises dans des mdicaments autoriss, et auxquelles est associ un 10
critre d'acceptation individuel. Chaque fois que possible, les monographies spcifient 11
galement des critres d'acceptation pour d'autres impurets (au seuil d'identification 12
applicable la substance) et une limite de teneur totale en impurets (ou de teneur totale en 13
impurets autres que certaines impurets spcifies, explicitement identifies) au-dessus du 14
seuil de dclaration. Le critre d'acceptation des impurets spcifies peut correspondre au 15
seuil d'identification applicable la substance. 16
Les critres d'acceptation des impurets spcifies doivent la fois tenir compte : 17
1. des donnes de qualification (le cas chant), la limite spcifie ne devant pas 18
dpasser la valeur laquelle l'impuret est qualifie ; les informations relatives la 19
qualification sont fournies par le producteur, et la compatibilit de la limite avec les 20
donnes de qualification et les spcifications approuves est vrifie par les autorits 21
comptentes pendant l'laboration de la monographie et/ou la phase d'enqute 22
publique via Pharmeuropa, 23
2. des rsultats d'analyse de lots, les critres d'acceptation tant tablis en tenant compte 24
de la production normale ; ces donnes sont fournies par le producteur pour des lots 25
types et vrifies lors de l'laboration de la monographie sur 3 lots au moins. 26
Mthodes sparatives. Dans le cadre de la pharmacope, l'objectif des essais de puret 27
effectus par une mthode sparative est habituellement de contrler les impurets drivant 28
des diffrents procds de fabrication et processus de dgradation connus. Cependant, les 29
conditions exprimentales choisies, notamment le systme de dtection, ne doivent pas 30
rduire excessivement la porte de l'essai. Les essais de puret par chromatographie 31
constituent souvent le meilleur moyen de mettre globalement en vidence les impurets 32
organiques drivant de nouveaux procds de fabrication ou d'une contamination 33
accidentelle. Il peut tre intressant de complter un essai chromatographique par d'autres 34
essais, chromatographiques ou autres. 35
Comme mentionn dans la section traitant de l'identification, un systme chromatographique 36
utilis pour les essais de puret peut, s'il est appropri, servir galement l'identification. 37
Lorsqu'un essai des substances apparentes utilisant une technique chromatographique est 38
prescrit, un chromatogramme reprsentatif est publi en mme temps que la monographie 39
dans Pharmeuropa. 40
Lorsque l'on ne dispose pas d'chantillons des diffrentes impurets comme substances de 41
rfrence, ou que le nombre des impurets pouvant tre dtectes dans la substance est lev, 42
un chromatogramme reprsentatif est fourni avec la substance de rfrence. 43
e
Les monographies doivent comporter un moyen fiable de situer les impurets spcifies dans 1
le chromatogramme. Lidentification des impurets non spcifies est ncessaire si un facteur 2
de correction doit tre appliqu. Les pics peuvent tre identifis au moyen : 3
dune substance chimique de rfrence pour chaque impuret ; 4
dune substance chimique de rfrence contenant un mlange des impurets, 5
accompagne dun chromatogramme. 6
Lidentification au moyen de la rtention relative nest pas en gnral considre suffisante 7
dans le cadre dune monographie de pharmacope, notamment dans le cas o un gradient 8
dlution est appliqu. 9
Si une substance chimique sous forme dun mlange dimpurets doit tre utilise, un 10
chantillon de chaque composant du mlange doit tre fourni la DEQM afin de permettre 11
ltablissement de la substance de rfrence. 12
Quelques considrations gnrales s'appliquent l'ensemble des techniques sparatives : 13
les concentrations/charges utilises sont gnralement leves, car la symtrie du 14
pic principal ou la forme de la tache ne constituent pas des facteurs critiques dans 15
les essais de puret, du moins en l'absence d'interfrence ; lorsque l'on utilise un 16
talon externe des fins de dtermination quantitative, il n'est pas ncessaire que 17
la rponse du pic principal se situe dans l'intervalle de linarit du dtecteur, 18
dans un essai des substances apparentes de porte gnrale, la substance 19
examiner ne doit pas faire l'objet d'une modification chimique (par ex. 20
drivatisation) avant ralisation de l'essai de puret, en raison du risque de 21
modification du profil d'impurets, 22
de mme, l'extraction de la base ou de l'acide libre avant ralisation de l'essai de 23
puret est viter. 24
2.4.8.1 Chromatographie sur couche mince (CCM)
La chromatographie sur couche mince ne doit normalement tre utilise que pour le contrle 25
d'une impuret spcifie, lorsque ni la chromatographie liquide, ni la chromatographie en 26
phase gazeuse ni l'lectrophorse capillaire ne conviennent (en gnral cause de l'absence 27
de systme de dtection appropri). 28
Il convient d'utiliser des plaques prfabriques disponibles dans le commerce, dcrites dans le 29
chapitre REACTIFS de la pharmacope ; la dnomination commerciale des plaques qui se 30
sont avres convenir est prcise en note de bas de page dans le projet de 31
monographie ; cette indication est supprime de la monographie aprs son adoption, mais 32
reste disponible sur le site internet de la DEQM, dans la base de donnes Knowledge. La 33
description des plaques dans le chapitre REACTIFS comprend, en plus des informations 34
concernant la phase stationnaire utilise (type de gel, type de liant), une procdure de contrle 35
d'acceptabilit. La monographie doit dcrire le type de plaque utiliser et spcifier un critre 36
de conformit du systme. Il arrive souvent que les substances qui conviendraient le mieux 37
pour le test de conformit du systme soient difficiles obtenir individuellement ; dans ce 38
cas, il est admis de prescrire l'utilisation d'un chantillon de la substance examiner les 39
contenant comme contaminants, voire d'un chantillon dlibrment dop avec ces 40
substances. Les plages de variation admises pour les diffrents paramtres opratoires sont 41
prcises dans le chapitre gnral 2.2.46 Techniques de sparation chromatographique. 42

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
Si la bonne ralisation de l'essai exige d'effectuer un prtraitement ou de raliser la 1
chromatographie dans des conditions de non saturation, cette information doit figurer dans le 2
texte de la monographie (ceci s'applique notamment aux plaques en phase inverse). 3
L'utilisation d'une ou plusieurs dilutions de la substance examiner comme solutions tmoins 4
s'avre souvent adquate condition que les impurets sur lesquelles porte la comparaison 5
prsentent un comportement similaire dans les conditions chromatographiques choisies. Ceci 6
suppose que les taches comparer aient des R
f
suffisamment proches, pour que l'erreur due 7
aux diffrences de diffusion des substances pendant leur migration ne soient pas trop 8
importante. Dans le cas contraire, il convient d'employer des solutions tmoins contenant les 9
impurets spcifies. Il peut tre ncessaire de demander l'analyste de ngliger une tache 10
restant sur la ligne de dpart souvent due l'ion appari d'un sel, qui ne migre pas. 11
La sommation des rponses correspondant aux diffrentes taches n'est acceptable que si 12
l'emploi d'un instrument adquat est prescrit. Il n'est pas recommand de prescrire une ou 13
plusieurs limites de concentration en impurets sans spcifier de limite pour le nombre des 14
impurets, sous peine d'atteindre une teneur totale thorique en impurets inacceptablement 15
leve. On peut contourner cette difficult en introduisant plusieurs (au moins deux) niveaux 16
de limitation des impurets, et en autorisant la prsence d'un nombre dfini d'entre elles au 17
taux le plus lev et le reste au-dessous du taux le plus bas. Par exemple, l'essai peut spcifier 18
qu'aucun contaminant ne peut dpasser une teneur relative de 1 pour cent et un seul 19
contaminant peut dpasser 0,25 pour cent ; ou qu'aucun contaminant ne peut dpasser une 20
teneur relative de 1 pour cent, un seul contaminant peut dpasser 0,5 pour cent et au 21
maximum 4 contaminants peuvent dpasser 0,25 pour cent. 22
2.4.8.2 Chromatographie liquide (CL)
La dfinition d'un systme chromatographique appropri constitue souvent l'un des 23
problmes majeurs rsoudre pour laborer un essai de puret par chromatographie liquide. 24
Dans le cas de la CL, la situation est encore complique par l'existence de nombreuses 25
variantes des phases stationnaires (particulirement dans le cas des phases inverses 26
chimiquement lies, o il existe des variations, non seulement de marque marque mais 27
parfois aussi de lot lot, qui peuvent influencer une sparation donne). La dnomination 28
commerciale de la ou des phases stationnaires/colonnes qui se sont avres convenir lors des 29
travaux d'laboration est prcise en note de bas de page dans le projet de monographie ; 30
cette indication est supprime de la monographie aprs son adoption, mais reste disponible 31
sur le site internet de la DEQM, dans la base de donnes Knowledge. 32
Les exigences de validation sont dcrites dans la Section 3. Les paramtres considrer sont 33
les suivants : 34
spcificit, 35
limite de dtection, 36
limite de quantification, 37
fidlit, 38
facteurs de rponse (pour les impurets individuelles), 39
linarit (sur l'intervalle considrer pour un essai des substances apparentes). 40
La description du systme chromatographique doit comprendre les indications suivantes : 41
dimensions de la colonne (longueur et diamtre intrieur), nature de la phase stationnaire 42
e
(dans le dtail), avec ventuellement tapes de prparation ou de prtraitement, composition 1
et dbit de la phase mobile, avec le cas chant le programme d'lution, temprature de la 2
colonne (si elle diffre de la temprature ambiante ou est rgle l'aide d'un thermostat), 3
mthode d'injection (si cette prcision est importante), volume d'injection et mthode de 4
dtection. Les plages de variation admises pour les diffrents paramtres opratoires sont 5
prcises dans le chapitre gnral 2.2.46 Techniques de sparation chromatographique. 6
Lorsque, aprs essai de diffrents types de phase stationnaire, un seul d'entre eux s'est avr 7
donner une sparation satisfaisante, il doit en tre fourni une description prcise comportant 8
par exemple les informations suivantes : type des particules (irrgulires ou sphriques), taille 9
des particules, surface spcifique (m
2
/g), dimension des pores (nm) et, dans le cas des 10
colonnes en phase inverse, proportion de carbone (en pourcentage) et utilisation ventuelle 11
d'un post-greffage ou autre traitement destin inactiver les groupes silanol rsiduels (ceci 12
est particulirement important lorsque des substances basiques doivent tre examines et qu'il 13
existe un risque de trane sur les pics). 14
Pour prparer la solution examiner et les solutions tmoins, il convient chaque fois que 15
possible d'utiliser la phase mobile comme solvant afin de limiter les anomalies des pics. 16
Pour plus de simplicit et pour une meilleure reproductibilit, il est prfrable de recourir 17
une lution isocratique et d'oprer temprature ambiante (18-22 C). Lorsque l'emploi de 18
tempratures diffrentes prsente un avantage, la temprature est spcifie ( 30 C). 19
Lorsqu'un systme gradient d'lution est dcrit, tous les paramtres utiles doivent tre 20
clairement indiqus : composition des phases mobiles, conditions d'quilibre, conditions de 21
gradient (linaire ou par paliers), etc. 22
De nombreuses substances pharmaceutiques actives possdent plusieurs voies de synthse ; la 23
liste des impurets potentielles limiter peut donc tre longue et leur sparation peut 24
constituer un vritable dfi analytique. Les mthodes de chromatographie liquide isocratiques 25
n'tant parfois pas suffisamment slectives, il est de plus en plus frquent d'avoir recourir 26
des mthodes gradient. Il faut alors avoir conscience des embches que peuvent recler des 27
diffrences significatives du volume compris entre mlangeur et colonne lors d'un transfert de 28
mthode. 29
Lorsque l'on envisage de recourir un gradient d'lution en chromatographie liquide, le 30
volume mort compris entre la chambre de mlange des solvants et le sommet de la colonne 31
(parfois appel dwell volume en anglais, et on parle galement de "dlai") est un important 32
paramtre considrer. Ce volume est not V
D
. D'importantes diffrences de volume V
D
entre 33
systmes de pompage entranent des diffrences dans l'lution des pics. Ce volume dpend de 34
la configuration du systme de pompage, et notamment des dimensions des capillaires, de la 35
chambre de mlange des solvants et de la boucle d'injection ; il est constant pour un systme 36
particulier. Son influence sur les temps de rtention affecte principalement les substances peu 37
retenues. Il faut donc veiller concevoir les systmes gradient de telle sorte que les analytes 38
ne soient pas lus en dbut de gradient. La meilleure solution est de procder l'lution des 39
composants les moins fortement retenus au moyen d'une phase isocratique initiale, qui sera 40
suivie d'un gradient assurant l'lution des composants plus fortement retenus. L'effet du 41
volume V
D
est alors attnu. Par ailleurs, une phase isocratique initiale permet de pallier des 42
diffrences marques de volume V
D
entre systmes de pompage. 43
Il semble que les spcifications relatives V
D
soient similaires pour les systmes de pompage 44
haute pression et basse pression (moins de 1,0 ml dans tous les cas). Il faut toutefois procder 45
une dtermination exprimentale de V
D
; si le volume mesur n'excde pas 1,0 ml, les 46
diffrences de temps de rtention ou de rtention relative entre systmes seront minimes. 47

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
En conclusion, il est recommand de recourir chaque fois que possible des systmes 1
isocratiques ; si toutefois l'emploi d'un gradient d'lution est invitable, il faudra : 2
dcrire en dtail les caractristiques de la phase stationnaire utilise, 3
faire prcder le gradient d'lution d'une tape isocratique assurant l'lution des 4
composants les moins retenus, 5
faire en sorte d'obtenir, pendant la phase gradient, un profil d'lution tel que les 6
analytes ne soient pas lus en dbut de gradient, 7
s'assurer que le systme de pompage utilis pour dvelopper la mthode prsente un 8
volume mort V
D
entre mlangeur et colonne infrieur 1,0 ml. 9
Si la mthode est dveloppe avec un systme prsentant un volume V
D
suprieur 1,0 ml, il 10
est essentiel de prvoir une tape isocratique initiale approprie. 11
Lors de la validation de la mthode, il convient de tester plusieurs phases stationnaires ; la 12
dnomination des produits qui se sont avrs adquats sera indique en note de base de page 13
dans le projet de monographie publi dans Pharmeuropa. 14
2.4.8.2.1 Critres de conformit du systme 15
Un ou plusieurs critres de conformit du systme doivent figurer dans l'essai. Les exigences 16
du chapitre 2.2.46 Techniques de sparation chromatographique sont galement applicables. 17
CAPACITE DE SEPARATION 18
Un critre de ce type est ncessaire dans tous les cas o une technique de sparation est 19
employe pour un dosage et/ou un essai des substances apparentes. Diffrentes approches, 20
dtailles ci-aprs, sont acceptables pour vrifier la conformit du systme sous cet aspect ; 21
elles reposent pour la plupart sur la sparation d'un couple critique. 22
Rsolution. Elle est calcule, par la formule indique dans la mthode gnrale (2.2.29), pour 23
deux pics voisins correspondant de prfrence la substance elle-mme et une impuret 24
potentielle. Toutefois, si les temps de rtention de ces deux pics sont trs diffrents, donc la 25
rsolution leve (> 5,0), l'emploi de la rsolution comme critre de conformit est d'un 26
intrt limit. Il est alors prfrable d'utiliser une autre impuret, ou une autre substance 27
chimiquement apparente la substance considre, donnant une rsolution moins leve. 28
Des pics de hauteur diffrente peuvent tre utiliss pour calculer la rsolution, mais des 29
diffrences trop importantes compromettront l'utilit de ce critre. 30
Rapport pic/valle. Ce paramtre peut tre employ lorsqu'il est impossible d'obtenir une 31
sparation complte entre 2 pics adjacents, c'est dire lorsque la rsolution est infrieure 32
1,5. 33
Dgradation in situ. Cette approche est envisageable pour tablir la conformit du systme 34
condition qu'une dgradation de la substance en solution soit possible dans des conditions de 35
"stress" modr et dans un temps raisonnablement court, et qu'elle donne des produits de 36
dcomposition dont les pics peuvent servir dterminer une rsolution ou un rapport 37
pic/valle. 38
Chromatogramme d'une substance impure ou "dope". Cette mthode constitue un autre 39
moyen possible de dfinir le systme. Elle peut tre utilise lorsqu'une impuret lue prs du 40
pic principal est difficile isoler en quantit suffisante pour tablir une substance de 41
rfrence. Dans ce cas, un chromatogramme peut tre fourni avec la SCR pour conformit du 42
e
systme, ou publi avec la monographie, ou encore dcrit dans le texte de l'essai des 1
L'emploi d'une substance impure ou dope ncessite de pouvoir se la procurer en quantit 3
suffisante pour permettre l'tablissement de la substance de rfrence, et la remplacer 4
ultrieurement par un matriel prsentant les mmes caractristiques. 5
Les mthodes privilgier pour tablir la conformit du systme sont le calcul de la 6
rsolution et du rapport pic/valle, et ceci est galement valable lorsque l'on utilise une SCR 7
constitue d'une substance impure ou dope. Si l'on opre avec un gradient d'lution, il est 8
prfrable de spcifier une exigence de conformit du systme pour chaque tape critique du 9
gradient. 10
Notons que l'indication de temps de rtention ou de rtentions relatives sert exclusivement 11
l'identification des pics et ne peut tre utilise comme critre de conformit du systme. 12
2.4.8.2.2 Quantification 13
La quantification est ncessaire dans lapplication des limites pour les impurets spcifies et 14
non spcifies et pour le total des impurets. Elle est le plus souvent effectue au moyen dun 15
talon externe ou exceptionnellement par le procd dit de normalisation . Lorsquune 16
limite pour le total des impurets est donne, une limite dexclusion est dfinie, 17
habituellement au seuil de dclaration [voir Substances pour usage pharmaceutique (2034)] ; 18
une dilution de la solution examiner est en gnral utilise pour tablir la limite dexclusion. 19
Etalon externe. Une dilution de la solution/substance examiner est utilise, sauf sil y a une 20
diffrence notable dans la rponse du dtecteur vis--vis dune impuret spcifie (et 21
exceptionnellement dune impuret non spcifie) ; un talon externe spcifique est alors 22
ncessaire et peut tre constitu par : 23
une solution de limpuret ; 24
une solution de la substance examiner ayant une teneur connue de limpuret. 25
Dans le cas dutilisation dune dilution de la substance examiner en tant qutalon externe, 26
si la rponse du dtecteur vis--vis de limpuret diffre de plus de 20 pour cent de celle vis- 27
-vis de la substance examiner, un facteur de correction est indiqu dans la monographie. 28
. 29
Normalisation.La quantification par normalisation des surfaces exige d'tre sr que tous les 30
soluts sont lus et dtects, de prfrence avec des facteurs de rponse uniformes, et qu'il 31
existe une relation linaire entre la rponse du dtecteur et les concentrations employes. Ces 32
aspects doivent tre valids. 33
2.4.8.3 Chromatographie en phase gazeuse (CPG)
Les difficults que pose la dfinition d'un systme chromatographique appropri sont 34
comparables celles mentionnes pour la chromatographie liquide, bien que pouvant 35
concerner d'autres aspects. Les dtails exprimentaux dcrire dans un essai de pharmacope 36
doivent donc tre ici encore formuls comme des exemples, pour qu'il soit possible de faire 37
varier les paramtres chromatographiques afin d'atteindre les performances exiges. La nature 38
de la phase stationnaire, c'est--dire la composition du matriau recouvrant le support (y 39
compris sa concentration) et le support inerte lui-mme (y compris la taille des particules et 40
les prtraitements ventuels) doivent tre dcrits en termes gnraux, mais les rfrences 41
dtailles des colonnes sont notifier pour publication dans Pharmeuropa. 42

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
Dans la description du systme chromatographique, les facteurs mentionner sont pour 1
l'essentiel les mmes que pour la chromatographie liquide, avec les adaptations appropries : 2
programme de temprature (le cas chant) au lieu du programme d'lution, temprature de la 3
chambre injection et du dtecteur, etc. L'emploi de colonnes remplies est viter. Les 4
plages de variation admises pour les diffrents paramtres opratoires sont prcises dans le 5
chapitre gnral 2.2.46 Techniques de sparation chromatographique. 6
Pour plus de simplicit et pour une meilleure reproductibilit, il est prfrable d'oprer dans 7
des conditions isothermes. La quantification repose gnralement sur l'utilisation d'un talon 8
interne ou du procd de normalisation des surfaces. Les limitations mentionnes pour la CL 9
quant la sommation des pics s'appliquent galement ici. 10
2.4.8.4 lectrophorse capillaire
L'lectrophorse capillaire est de plus en plus utilise pour sparer et contrler les impurets 11
lorsqu'elles sont nombreuses et prsentent d'importantes diffrences de polarit. Elle permet 12
galement de contrler la teneur de l'nantiomre indsirable dans les substances 13
pharmaceutiques chirales. Lorsque la sparation est effectue en capillaire de silice fondue, le 14
problme de variabilit des performances en fonction de la phase stationnaire, rencontr en 15
chromatographie liquide en phase inverse, est limin. 16
La dtermination s'accompagne d'une production de chaleur par effet Joule et il est 17
ncessaire, pour obtenir une reproductibilit satisfaisante, de maintenir une temprature 18
constante l'aide d'un thermostat ou, dfaut, d'oprer basse tension. 19
La limite de dtection peut galement poser problme du fait des trs petits volumes injects 20
et de la brivet de la fentre de dtection dans le capillaire, mme si l'on a recours des 21
techniques de tassement. Pour le contrle des impurets ou les dosages, l'emploi d'un talon 22
interne est recommand pour obtenir la fidlit requise. Pour le reste, les principes suivre 23
sont similaires ceux dcrits plus haut pour la chromatographie liquide. 24
En analyse chirale, un slecteur chiral est ajout au tampon d'lectrophorse. Ce slecteur 25
doit tre soigneusement dcrit dans la monographie ou comme Ractif, en particulier s'il 26
s'agit d'un driv de cyclodextrine. Beaucoup de ces drivs tant substitus de faon 27
alatoire, il est important d'indiquer le degr prcis ou moyen et le site de substitution. Lors 28
de la validation de la mthode, il convient d'utiliser plusieurs lots du driv de cyclodextrine. 29
Paramtres exprimentaux considrer pour inclusion dans la monographie 30
Paramtres instrumentaux : tension, polarit, temprature, dimensions du capillaire 31
(diamtre et longueur longueur totale et longueur efficace jusqu'au dtecteur) 32
Matriau greff sur le capillaire (le cas chant) 33
Tampon : pH, molarit, composition 34
Solvant de l'chantillon 35
Sparation : polarit, U, I 36
Injection : t, U/p 37
Dtection : longueur d'onde, instrumentation 38
Temprature 39
Dure de conservation des solutions, le cas chant 40
e
Procdures de rinage (temps, ractifs, p) requises pour stabiliser les temps de 1
migration et la rsolution des pics 2
Prconditionnement des nouveaux capillaires 3
Prconditionnement du capillaire avant une srie de mesures 4
Rinage entre dterminations 5
En note de bas de page, pour transfert dans la base de donnes Knowledge de la DEQM aprs 6
adoption de la monographie : 7
en cas d'utilisation d'un capillaire greff, dnomination commerciale du capillaire qui 8
s'est avr convenir lors des travaux d'laboration de la monographie, 9
pour les sparations chirales, dnomination commerciale du slecteur chiral 10
(cyclodextrine ou autre) qui s'est avr convenir lors des travaux d'laboration de la 11
monographie. 12
Pour rduire le signal d l'coulement lectro-osmotique, il est souhaitable, chaque fois que 13
possible, d'utiliser de l'eau pour prparations injectables ou le tampon d'lectrophorse 14
comme solvant pour la prparation des solutions examiner et les solutions tmoins. 15
2.4.9 Substances facilement carbonisables 16
Cet essai non spcifique a beaucoup perdu de son intrt du fait de l'introduction des essais 17
chromatographiques, qui fournissent davantage d'informations sur les impurets organiques. 18
Son principal avantage rside dans sa sensibilit, souvent leve. Nanmoins, la pratique a 19
montr que les impurets qui produisent une coloration dans les conditions de l'essai donnent 20
souvent une rponse tout aussi satisfaisante lors d'un essai colorimtrique en simple solution 21
aqueuse ou alcoolique ; il convient dans ce cas d'viter une inutile duplication. 22
S'il apparat, lors de l'laboration d'une monographie, que certaines impurets susceptibles 23
d'tre prsentes ne sont pas contrles par les autres essais, il convient d'effectuer l'essai des 24
substances facilement carbonisables et de l'introduire dans la monographie s'il s'avre utile. 25
2.4.10 Anions et/ou cations trangers 26
Les bases et acides inorganiques forts tant d'un usage courant en synthse, la teneur d'une 27
substance en anions et/ou cations trangers peut constituer un indicateur du niveau de 28
purification assur. Elle peut galement rvler une ventuelle contamination par des 29
substances troitement apparentes. D'autre part, il est souvent possible d'liminer les 30
impurets ioniques des substances faiblement hydrosolubles (par traitement par l'eau) sans 31
pour autant liminer les impurets organiques. La recherche des anions et cations, sans 32
remplacer un essai des substances apparentes dans les substances organiques, peut en 33
revanche constituer un complment utile dans le cas de substances organiques hydrosolubles. 34
Pour les substances inorganiques, habituellement prpares partir d'autres substances 35
inorganiques, une gamme plus tendue de recherches d'ions trangers doit tre envisage. 36
Lorsque l'introduction d'une recherche d'anions trangers dans des substances organiques est 37
envisage, un seul essai (chlorures, sulfates, ou plus rarement nitrates) suffit gnralement, 38
mme lorsque plusieurs anions peuvent thoriquement tre prsents. Il convient alors 39
d'effectuer l'essai sur le plus abondant d'entre eux. 40

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
Certains cations doivent tre strictement limits du fait de leur toxicit ou de leur activit 1
catalytique. Ils sont traits sparment ci-aprs, dans l'essai des mtaux lourds. A moins 2
qu'existent des raisons particulires de limiter la prsence des cations, individuellement ou 3
par petits groupes, dans les substances organiques, une dtermination de la teneur en cendres 4
sulfuriques (voir plus loin) permet de contrler de faon adquate la majorit d'entre eux. 5
2.4.11 Mtaux lourds 6
Les mtaux lourds dtects par les diffrents essais dcrits dans la mthode gnrale sont 7
ceux qui prcipitent pH 3,5 sous forme de sulfures colors sous l'action d'ions sulfure ou de 8
ractifs capables de les produire : plomb, cuivre, argent, mercure, cadmium, bismuth, 9
ruthnium, or, platine, palladium, vanadium, arsenic, antimoine, tain et molybdne 10
(Pharmeuropa, Vol. 1, p. 249). L'agent de prcipitation utilis est le thioactamide ; le sulfure 11
de sodium est autoris comme option alternative, mais l'utilisateur doit en valider l'emploi 12
pour chaque substance au moyen de solutions de contrle. 13
La comparaison est effectue avec un tmoin contenant une quantit connue de plomb. La 14
teneur totale en "mtaux lourds" est donc exprime en "plomb", bien que la sensibilit pour 15
les diffrents mtaux ne soit pas la mme. 16
La Pharmacope propose sept essais diffrents. 17
Les essais A et B reposent sur l'emploi direct d'une solution dans l'eau ou dans un 18
solvant organique. Ils sont donc applicables aux substances solubles dans ces 19
conditions. Si la solution est suffisamment limpide et peu colore (intensit de 20
coloration infrieure au degr 6), l'essai peut tre effectu par comparaison directe des 21
solutions ; dans le cas contraire, il convient de prescrire une filtration et de comparer 22
les membranes filtrantes. Ces essais ne sont applicables que si la substance n'interfre 23
pas dans la prcipitation des sulfures par le ractif au thioactamide ni ne masque les 24
mtaux par chlation ; l'absence d'interfrence doit tre vrifie au moyen 25
d'expriences de recouvrement lors de la validation de l'essai en vue de son 26
introduction dans la monographie. Les essais A et B ne ncessitent pas la prparation 27
de solutions de contrle, sauf si l'agent de prcipitation utilis est le sulfure de 28
sodium, auquel cas il faut dmontrer pralablement l'acceptabilit de l'essai en 29
prparant des solutions de contrle comme indiqu dans la mthode gnrale. 30
L'essai E possde une limite d'applicabilit plus basse (2 g de plomb dans 30 ml de 31
solution). Il comporte une solution de contrle. 32
Les essais C, D, F et G font intervenir une minralisation pralable. Ils sont utiliss 33
lorsque les essais A et B ne sont pas applicables la substance (trop faible solubilit, 34
proprits de chlation, interfrence du ractif au thioactamide dans la prcipitation 35
des sulfures mtalliques). Les essais C et D manquent de robustesse, car certains 36
mtaux lourds (comme le mercure, le plomb ou l'arsenic) subissent lors de la 37
minralisation divers degrs de dperdition par volatilisation. La prfrence est 38
aujourd'hui donne aux essais F et G, qui reposent sur une minralisation par voie 39
humide. L'essai F est long raliser ; l'essai G, qui utilise une minralisation assiste 40
par micro-onde, est plus rapide et plus pratique. Tous deux font appel des solutions 41
de contrle. 42
En routine, les essais A, B, C, D F et G ne sont pas appropries pour tablir des limites au- 43
dessous de 5 ppm, moins qu'une filtration ne soit prescrite. Pour les limites infrieures 44
cette valeur, l'essai E, qui permet de descendre jusqu' 0,5 ppm, peut tre appliqu. Pour les 45
e
limites infrieures 0,5 ppm, il est ncessaire de recourir des essais spcifiques pour 1
chaque mtal, utilisant souvent la spectromtrie d'absorption atomique. 2
Critres d'introduction d'un essai des mtaux lourds : 3
Dose journalire > 0,5 g/jour, traitement < 30 jours Essai des mtaux lourds, limite 20 ppm
Dose journalire > 0,5 g/jour, traitement > 30 jours Essai des mtaux lourds, limite 10 ppm
Dose journalire < 0,5 g/jour, traitement > 30 jours Essai des mtaux lourds, limite 10 ppm si la
substance est administre par voie parentrale,
20 ppm dans le cas contraire
Dose journalire < 0,5 g/jour, traitement < 30 jours Pas d'essai des mtaux lourds
Des recherches de catalyseurs mtalliques particuliers sont introduites lorsque l'on sait qu'ils 4
interviennent dans la synthse d'une substance active ou d'un excipient. Les limites dpendent 5
de la toxicit, de la (des) voie(s) d'administration et du procd de fabrication. 6
2.4.12 Perte la dessiccation 7
En rgle gnrale, une limite suprieure de perte la dessiccation est spcifie. Si la 8
substance est un hydrate (ou un solvate), des limites infrieure et suprieure sont indiques. 9
La dessiccation est effectue jusqu' masse constante sauf si une dure de dessiccation est 10
spcifie dans la monographie, auquel cas il convient de fournir des donnes de validation 11
adquates. Lorsque la temprature de dessiccation est indique sous forme d'une valeur 12
unique, une tolrance de 2 C est sous-entendue. Pour les tempratures suprieures 13
105 C, il convient si ncessaire d'indiquer une tolrance plus large dans la monographie. 14
Le chapitre gnral dcrit cinq types de conditions opratoires standard, auxquelles il est fait 15
rfrence dans les monographies au moyen d'expressions conventionnelles : 16
a) dans un dessiccateur (sur du P
2
O
5
la pression atmosphrique et temprature 17
ambiante), 18
b) sous vide (sur du P
2
O
5
1,5-2,5 kPa et temprature ambiante), 19
c) sous vide, avec indication d'un intervalle de temprature (sur du P
2
O
5
1,5- 20
2,5 kPa et dans l'intervalle de temprature spcifi dans la monographie), 21
d) l'tuve, avec indication d'un intervalle de temprature (la temprature spcifie 22
est de prfrence de 105 C (pour harmonisation avec la JP et l'USP), avec une 23
tolrance implicite de 2 C), 24
e) sous vide pouss (sur du P
2
O
5
pression 0,1 kPa et la temprature prescrite 25
dans la monographie). 26
Si d'autres conditions sont appliques, elles sont intgralement dcrites dans la monographie. 27
L'essai peut tre effectu l'chelle d'une semi-microdtermination ; l'exactitude de pese de 28
la prise d'essai doit alors tre spcifie en consquence. 29
La mthode d) est utiliser de prfrence lorsque le produit est suffisamment stable 105 C. 30
Si tel n'est pas le cas, on a habituellement recours la mthode b) ou c). Il ne faut cependant 31
pas oublier que les solvants organiques ne sont pas toujours faciles liminer (exemple : 32
solvants organiques dans la colchicine). 33

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
Les limites infrieures 10 pour cent sont exprimes avec 2 chiffres significatifs, celles 1
gales ou suprieures 10 pour cent avec 3 chiffres significatifs. La prise dessai est choisie 2
de faon obtenir une diffrence entre les peses avant et aprs dessiccation de 5-50 mg ; elle 3
est exprime avec 4 chiffres significatifs. 4
2.4.13 Thermogravimtrie (2.2.34) 5
La perte la dessiccation peut tre dtermine par thermogravimtrie lorsqu'il faut oprer sur 6
des prises d'essai rduites, par exemple pour exposer le moins possible l'analyste ou lorsque 7
la substance est trs onreuse (exemples : sulfate de vincristine et sulfate de vinblastine). 8
2.4.14 Semi-microdosage de l'eau (Karl Fischer 2.5.12) 9
Des ractifs du commerce sans pyridine sont aujourd'hui utiliss au lieu du ractif 10
iodosulfureux R ; il est ncessaire de vrifier la stchiomtrie et l'absence d'interfrence (ces 11
donnes peuvent tre fournies par le fournisseur du ractif pour la substance en question). 12
Le nom commercial du titrant utilis pendant llaboration de la monographie est indiqu 13
dans une note de bas page et linformation est transfre la base de donnes Knowledge 14
aprs publication de la monographie. 15
Les limites infrieures 10 pour cent sont exprimes avec 2 chiffres significatifs, celles 16
gales ou suprieures 10 pour cent avec 3 chiffres significatifs. Le semi-microdosage de 17
leau nest pas recommand pour des teneurs en eau infrieures 0,5 pour cent. La prise 18
dessai est choisie de faon obtenir un volume de titrage dau moins 1 ml et elle est 19
indique avec 3 chiffres significatifs. 20
2.4.15 Microdosage de l'eau (2.5.32) 21
La mthode gnrale ne fournit pas de description dtaille de la composition du ractif 22
lectrolytique (anolyte et catolyte), car la plupart des laboratoires utilisent des ractifs du 23
commerce prts l'emploi. 24
Les limites sont exprimes avec 2 chiffres significatifs. La prise dessai est choisie de faon 25
obtenir une teneur en eau qui se situe entre 10 g et 10 mg ; le titrage de quantits de lordre 26
de 10 g nest prescrit que si la teneur en eau est trs faible ou si la prise dessai est limite 27
par le cot. La prise dessai est exprime avec 3 chiffres significatifs. 28
2.4.16 Dosage de l'eau par chromatographie en phase gazeuse 29
La teneur en eau peut galement tre dtermine par chromatographie en phase gazeuse. 30
2.4.17 Dtermination de l'eau par entranement (2.2.13) 31
Cette mthode est principalement utilise pour les drogues vgtales. Elle est applicable une 32
quantit de substance capable de librer 2 ml 3 ml d'eau. 33
2.4.18 Cendres sulfuriques 34
Cet essai est gnralement destin au dosage global des cations trangers prsents dans les 35
substances organiques, et dans les substances inorganiques se volatilisant dans les conditions 36
de l'essai. Pour la majorit des sels inorganiques de substances organiques, il prsente donc 37
un intrt limit en tant qu'essai de puret, en raison de l'erreur rsultante. 38
e
Sauf exception justifie, la limite de l'essai des cendres sulfuriques est habituellement tablie 1
0,1 pour cent. La quantit de substance utiliser pour l'essai doit tre telle qu'un rsidu 2
correspondant la limite pse au moins 1,0 mg ; la masse de la prise d'essai est alors 3
spcifie avec la prcision requise (1,0 g). 4
2.4.19 Rsidu l'vaporation 5
La quantit de substance liquide prescrite pour l'essai doit tre telle qu'un rsidu 6
correspondant la limite pse au moins 1,0 mg. La masse ou le volume de la prise d'essai est 7
normalement de l'ordre de 10 g 100 g (ou ml). 8
2.4.20 Solvants rsiduels 9
Le contrle des solvants rsiduels est trait dans le chapitre gnral 5.4 Solvants rsiduels et 10
la monographie gnrale Substances pour usage pharmaceutique (2034), lesquels mettent en 11
application le guideline ICH. 12
Un essai dun solvant de classe 1 est inclus dans la monographie sil est potentiellement 13
prsent dans un produit approuv. 14
Un essai pour les solvants de classe 2 nest pas inclus dans la monographie puisque la limite 15
peut tre fixe selon loption 2 du chapitre 5.4, qui prend en compte tous les composants de la 16
prparation pharmaceutique. 17
Un essai dun solvant de classe 3 est inclus dans la monographie sil est potentiellement 18
prsent dans un produit approuv un niveau suprieur 0,5 pour cent. 19
20
2.5 DOSAGE 21
Toute les monographies comportent un dosage, sauf dans les cas o : 22
toutes les impurets prvisibles peuvent tre dtectes et limites avec une fidlit 23
suffisante, 24
certains essais quantitatifs assimilables des dosages (pouvoir rotatoire spcifique, 25
absorbance spcifique, ...) sont effectus avec une fidlit suffisante, 26
des profils de composition spcifiques sont tablis, par exemple la composition de la 27
fraction acides gras (2.4.22) ou de la fraction strol (2.4.23) pour les graisses et les 28
huiles grasses, 29
les essais raliss suffisent tablir la qualit de la substance, gnralement au travers 30
d'un composant non actif tel que l'thanol ou l'eau. 31
Dans certains cas, il peut tre ncessaire de procder plusieurs dosages, lorsque : 32
la substance examiner se compose de 2 constituants qui ne sont pas obligatoirement 33
prsents en proportions absolument fixes, de sorte que le dosage d'un seul d'entre eux 34
ne permet pas de doser correctement l'ensemble de la substance (exemple : 35
thophylline et thylnediamine), 36
le rsultat des essais quantitatifs ne reflte pas totalement l'activit thrapeutique, 37
auquel cas un titrage biologique est introduit. 38

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
Dans le cas de sels bien dfinis, le dosage d'un seul des ions (de prfrence le composant 1
pharmacologiquement actif) est gnralement considr comme suffisant. Il n'est que 2
rarement ncessaire de doser tous les ions et, dans tous les cas, il est superflu de doser l'un 3
des ions par deux mthodes, mme fondes sur des principes diffrents. 4
Lorsque l'identification et les essais de puret sont suffisamment caractristiques et complets, 5
un titrage non spcifique mais fidle peut remplacer un titrage spcifique mais moins fidle. 6
Toute mthode de dosage propose doit tre valide selon les procdures dcrites pour les 7
diffrentes techniques dans la section 3 du prsent guide. 8
Les dosages spectrophotomtriques peuvent tre effectus soit directement, en lumire 10
ultraviolette ou visible, soit aprs une raction colore approprie ; leur fidlit est toutefois 11
moindre dans ce dernier cas. La prfrence est gnralement donne d'autres mthodes. 12
2.5.1.1 Mesure directe
Elle est non spcifique, mais d'une fidlit acceptable, et est habituellement ralise sans 13
substance de rfrence : l'absorbance de la solution est mesure au maximum d'absorption 14
spcifi, puis la concentration de la substance examiner est calcule sur la base de 15
l'absorbance spcifique indique dans la monographie. 16
La valeur de l'absorbance spcifique doit tre vrifie : 17
pour une nouvelle substance, le fabricant doit fournir des donnes de validation 18
justifiant la valeur adopte comme valeur vraie . Ces donnes concernent, par 19
exemple, la puret de la substance utilise pour tablir cette valeur. Elle doit tre 20
confirme au moyen de diffrentes mthodes, dont des techniques sparatives, des 21
mthodes absolues, les facteurs de rponse des impurets potentielles, etc. 22
Avec une substance de rfrence, la teneur en principe actif est calcule par comparaison de 23
l'absorbance de la solution examiner avec celle d'une solution de la substance de rfrence. 24
Pour les dtails exprimentaux et les rsultats, voir le chapitre 2.2.25 Spectrophotomtrie 25
d'absorption dans l'ultraviolet et le visible. 26
2.5.1.2 Mesure aprs raction colore
On opre par comparaison une substance de rfrence. La fidlit de la mthode peut tre 27
moindre en raison des manipulations effectues. 28
2.5.2 Analyse volumtrique 29
La quantit de substance utilise pour le dosage est telle que le volume de ractif titrant 30
consomm pour le titrage final soit infrieur 10 ml (de prfrence entre 7 ml et 8 ml), afin 31
de permettre l'emploi d'un quipement de titrage classique. Dans le cas d'un titrage en retour, 32
le volume fix pour le premier ractif titrant ajout doit en outre tre suffisamment important 33
pour que le rsultat du titrage ne soit pas fond sur une trop faible diffrence de volumes. 34
Des essais blanc doivent tre prescrits chaque fois que ncessaire, moins d'tre dj 35
stipuls dans la mthode gnrale applique. 36
La monographie peut spcifier une dtermination du point de fin de titrage par potentiomtrie 37
ou par observation visuelle du virage d'un indicateur color. La dtermination du point de fin 38
e
de titrage par potentiomtrie est applicable dans la plupart des cas, et est utiliser de 1
prfrence. Si elle est prescrite, la combinaison d'lectrodes approprie est si ncessaire 2
indique dans le texte. Le nombre de points d'inflexion considrer est galement prcis. A 3
titre exceptionnel, d'autres modes de dtection tels que la mthode ampromtrique (2.2.19) 4
peuvent tre spcifis. Quelle que soit la mthode retenue, elle doit tre suffisamment 5
reproductible et de prfrence stchiomtriquement exacte. Lorsque l'emploi d'un indicateur 6
color est spcifi, le changement de coloration n'est prcis que s'il est diffrent de celui 7
dcrit dans le chapitre REACTIFS de la Pharmacope europenne. 8
Les sels halogns des bases organiques et certaines substances fonction ammonium 9
quaternaire sont traditionnellement doss par titrage en milieu non aqueux avec, comme 10
ractif titrant, de l'acide perchlorique dans l'acide actique glacial et, comme solvant, de 11
l'acide actique glacial additionn d'actate mercurique. Pour viter l'emploi de sels de 12
mercure, il est recommand d'utiliser d'autres mthodes chaque fois que possible. Les 13
mthodes recommandes sont les suivantes. 14
a. Titrage alcalimtrique en milieu alcoolique. Pour effectuer ce type de titrage, il est 15
recommand d'ajouter 5 ml d'acide chlorhydrique 0,01 M avant le titrage et de mesurer le 16
volume de ractif titrant utilis entre les deux points d'inflexion. 17
b. Titrage par l'acide perchlorique avec dissolution de l'chantillon dans l'acide actique 18
anhydre avant addition d'anhydride actique ou d'un mlange d'anhydride actique et 19
d'acide formique anhydre. 20
c. Argentimtrie. 21
Les mthodes b et c sont souvent appropries pour les substances fonction ammonium 22
quaternaire. 23
2.5.3 Mthodes chromatographiques 24
Dans la pharmacope, les mthodes chromatographiques utilises pour les dosages se limitent 25
normalement la chromatographie liquide (CL) et la chromatographie en phase gazeuse 26
(CPG). La plupart des indications fournies plus haut pour la CL et de la CPG propos de 27
l'essai des substances apparentes sont galement valables pour le dveloppement des 28
dosages utilisant ces mthodes. L'emploi d'un talon externe en CL et d'un talon interne en 29
CPG est recommand. Ces mthodes impliquent l'utilisation d'une substance chimique de 30
rfrence ayant une teneur assigne en substance doser (voir section relative aux talons de 31
rfrence). 32
Une fois la mthode dveloppe et valide par l'auteur, il est ncessaire d'en valuer la 33
reproductibilit (voir section 3 du prsent Guide). 34
2.5.4 Dosage de l'azote aprs minralisation par l'acide sulfurique (semi- 35
microdosage) 36
A toute substance dose par cette mthode doit tre assign un temps de minralisation, aprs 37
dtermination de son profil de minralisation. 38
Le profil de minralisation peut tre dtermin de la faon suivante : peser individuellement 39
plusieurs prises d'essai de la substance, correspondant la quantit prescrite, et les soumettre 40
l'essai conformment la mthode gnrale, en faisant varier le temps d'bullition du 41
mlange ractif (normalement jusqu' 120 min) aprs clarification du mlange. En traant le 42
graphe des teneurs en azote obtenues en fonction du temps d'bullition, il est possible de 43

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
dterminer le temps minimal de minralisation ncessaire pour obtenir une valeur constante. 1
Si le temps requis dpasse 30 min, il est spcifi dans la monographie. 2
2.6 CONSERVATION 3
Bien que les indications figurant sous ce titre dans les monographies ne constituent pas des 4
exigences de pharmacope, il convient de fournir le cas chant les informations utiles au 5
maintien de la qualit de la substance au cours de sa conservation. 6
Il faut alors utiliser la terminologie indique dans les chapitres 1. Prescriptions Gnrales et 7
3.2 Rcipients de la Pharmacope. Notons que l'expression rcipient bien ferm 8
n'implique pas une protection contre les pertes/gains d'lments via la phase gazeuse, qui 9
exige l'emploi d'un rcipient tanche . Un rcipient scell est de fait inviolable , 10
alors que l'inverse n'est pas toujours vrai. 11
Il doit tre demand aux fabricants de fournir des donnes de stabilit. Pour tablir les 12
indications qui figureront dans la monographie, sont prendre en compte le comportement de 13
la substance lors de l'exposition l'atmosphre, divers taux d'humidit, diffrentes 14
tempratures et la lumire du jour. 15
A cet gard, il faut souligner que la mthode dcrite pour l'hygroscopicit dans le chapitre 16
5.11 Rubrique Caractres dans les monographies n'a pas vocation permettre de dfinir les 17
conditions de conservation. Elle constitue simplement un moyen rapide, pour l'analyste, 18
d'obtenir une indication sur l'hygroscopicit de la substance, qui l'aidera prendre les 19
prcautions ncessaires lors de l'examen de la substance dans les conditions du laboratoire. 20
2.7 TIQUETAGE 21
L'tiquetage des produits pharmaceutiques fait l'objet d'accords internationaux et de 22
rglementations nationales et internationales ; de ce fait, les indications figurant dans la 23
rubrique ETIQUETAGE d'une monographie ne sont pas exhaustives : elles comprennent des 24
mentions caractre obligatoire (ncessaires l'application de la monographie) et d'autres 25
mentions qui constituent de simples recommandations. En rgle gnrale, dans la 26
pharmacope, les exigences d'tiquetage pour les substances (actives) en vrac se limitent aux 27
points essentiels la bonne interprtation des autres exigences de la monographie. Lorsque, 28
par exemple, une matire premire est tenue, pour certains usages, de satisfaire des 29
exigences particulires (strilit, etc.), l'tiquette doit indiquer que le contenu du rcipient est 30
(dans les cas appropris) conforme ces exigences. Par ailleurs, lorsque l'ajout de certains 31
stabilisants ou autres additifs est autoris par la monographie, leur prsence doit en rgle 32
gnrale tre signale sur l'tiquette. 33
2.8 IMPURETS 34
Les monographies de substances chimiques organiques doivent normalement comporter une 35
rubrique IMPURETES ; celle-ci dfinit les impurets qui sont dtectes par les essais de la 36
monographie et ont t prises en considration lors de la dfinition des critres d'acceptation 37
applicables aux substances apparentes. Ces impurets y sont divises en deux sous- 38
rubriques : Impurets spcifies et Autres impurets dcelables . Toutes les impurets 39
spcifies couvertes par la monographie sont cites dans la rubrique IMPURETES. Il peut 40
galement tre utile d'y faire figurer des informations sur les autres impurets dcelables 41
e
(impurets dtectes par les essais de la monographie, mais pour autant que l'on sache non 1
dceles teneur suprieure au seuil d'identification dans les lots de production actuels. 2
La rubrique IMPURETES indique, pour chaque impuret cite, sa structure et sa nomenclature 3
chimiques (celles de l'acide/base le cas chant). Les impurets sont dsignes par une lettre 4
capitale (A, B, C, D, etc.). Leur dnomination courante peut tre indique entre parenthses 5
dans les cas (rares) o il est jug qu'elle apporte une information utile. 6
La rubrique IMPURETES peut galement contenir des informations sur l'essai ou les essais 7
limitant une impuret donne, par exemple lorsqu'il ne s'agit pas de l'essai des substances 8
apparentes ou lorsque la monographie comporte plusieurs essais des substances apparentes. 9
2.9 CARACTERISTIQUES LIEES A LA FONCTIONNALITE 10
Les monographies portant sur des excipients peuvent comporter une rubrique intitule 11
CARACTERISTIQUES LIEES A LA FONCTIONNALITE (CLF). Ce titre est suivi d'un paragraphe 12
introductif standard prcisant le caractre non obligatoire des essais dcrits. Les usages de la 13
substance pour lesquels chaque CLF est pertinente sont galement indiqus. Les CLF peuvent 14
tre prsentes : 15
simplement par leur nom, 16
par leur nom avec indication d'une mthode recommande parmi les chapitres 17
gnraux de la Ph. Eur., 18
par leur nom avec indication d'une mthode et de tolrances recommandes, 19
par leur nom avec indication d'une mthode, de tolrances et de critres d'acceptation 20
recommands. 21
3 VALIDATION ANALYTIQUE
Cette section du Guide technique dcrit les procdures appliquer pour valider les essais 22
prescrits dans les monographies de la Pharmacope europenne. Ces essais peuvent tre des 23
identifications, des essais de puret instrumentaux ou non instrumentaux ou des dosages, et 24
les exigences de validation varieront selon le type d'essai considr et la technique utilise. 25
Cette section du Guide reprend les textes relatifs la validation analytique adopts dans le 26
cadre ICH en 1994, l'extension du texte ICH Validation of Analytical Procedures, qui 27
contient des informations utiles sur les exigences de validation en rapport avec 28
l'enregistrement, et des indications spcifiques sur la validation de diffrentes techniques 29
analytiques mises en uvre dans les mthodes pharmaceutiques. 30
3.1 TERMES ET DEFINITIONS 31
[Document ICH. Texte adopt et publi dans le cadre ICH (International Conference on 32
Harmonisation of Technical Requirements for the Registration of Pharmaceuticals for 33
Human use) (1994)]. 34
3.1.1 Introduction 35
Le prsent document traite des paramtres considrer pour la validation des procdures 36
analytiques figurant dans les dossiers d'enregistrement prsents dans l'UE, au Japon et aux 37
USA. Il ne couvre pas ncessairement les essais susceptibles d'tre exigs pour 38

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
l'enregistrement dans d'autres rgions du monde ou l'exportation vers ces rgions, et n'a pas 1
non plus pour objet de fournir des indications sur la faon d'effectuer la validation ; il se 2
prsente plutt comme un ensemble de termes et dfinitions, tablis dans l'objectif de 3
rapprocher les points de vue souvent divergents des pharmacopes et autorits rglementaires 4
de l'UE, du Japon et des USA. 5
La validation d'une procdure analytique a pour objectif de dmontrer que cette procdure est 6
approprie l'usage qui en est prvu. Un rsum des paramtres pertinents selon que l'on 7
considre une identification, un essai de puret ou un dosage est fourni plus loin sous forme 8
de tableau. Le prsent document est susceptible d'tre ultrieurement tendu d'autres types 9
de procdures analytiques. 10
3.1.2 Diffrents types de procdures analytiques 11
Les quatre types les plus courants de procdures analytiques sont traits ici : 12
identification, 13
dtermination quantitative de teneurs en impurets, 14
essais limites de contrle d'impurets, 15
dtermination quantitative, dans un chantillon d'une substance pharmaceutique ou 16
d'un mdicament, de la teneur en principe actif ou en d'autres composant(s) 17
slectionn(s) du produit. 18
Il existe certes beaucoup d'autres types de procdures analytiques, par exemple les essais de 19
dissolution pour les produits pharmaceutiques ou la dtermination de la taille des particules 20
pour les substances pharmaceutiques, mais ils ne sont pas traits dans ce premier texte sur la 21
validation analytique. Leur validation est nanmoins tout aussi importante que celles des 22
types d'essais cits ici et pourra faire l'objet de documents venir. 23
Les diffrents types d'essais considrs dans le prsent document sont brivement dcrits ci- 24
dessous. 25
Les identifications ont pour objet de confirmer l'identit d'une substance analyser 26
dans un chantillon. Cette confirmation est gnralement ralise par comparaison de 27
l'chantillon et d'un matriel de rfrence pour une certaine proprit (spectre, 28
comportement chromatographique, ractivit chimique, etc.). 29
Les essais de puret peuvent tre soit des essais quantitatifs soit des essais limites 30
portant sur les impurets contenues dans un chantillon. Dans l'un et l'autre cas, l'essai 31
est cens reflter avec exactitude les caractristiques de puret de l'chantillon. Les 32
paramtres de validation considrer pour un essai quantitatif et pour un essai limite 33
sont diffrents. 34
Les dosages ont pour objet de mesurer la quantit de substance analyser contenue 35
dans un chantillon donn. Dans le contexte du prsent document, le dosage 36
reprsente une analyse quantitative du (des) composant(s) majeur(s) de la substance 37
pharmaceutique. Pour les produits pharmaceutiques, des paramtres de validation 38
semblables s'appliquent au dosage des principes actifs et d'autres composants 39
slectionns. Les mmes paramtres de validation s'appliquent galement aux dosages 40
associs d'autres procdures analytiques (dissolution par exemple). 41
e
3.1.3 Paramtres et exigences de validation 1
Il est important de bien dfinir l'objectif de la procdure analytique considre, car de cet 2
objectif dpendent les paramtres de validation qu'il conviendra d'valuer. Les paramtres de 3
validation types considrer sont les suivants : 4
exactitude 5
fidlit 6
o rptabilit 7
o fidlit intermdiaire 8
spcificit 9
limite de dtection 10
limite de quantification 11
linarit 12
intervalle (de mesure). 13
Chacun de ces paramtres de validation est dfini dans le glossaire figurant ci-aprs. Le 14
tableau donne la liste des paramtres considrs comme les plus importants pour la validation 15
des diffrents types de procdures analytiques. Cette liste est interprter comme une liste 16
type pour la catgorie de procdures considre, mais autorise des exceptions traiter au cas 17
par cas. Il est noter que la robustesse n'est pas cite, mais elle doit nanmoins tre prise en 18
compte une tape approprie du dveloppement de la procdure analytique. 19
Par ailleurs, une revalidation peut tre ncessaire dans les circonstances suivantes : 20
modification de la voie de synthse de la substance pharmaceutique, 21
modification de la composition du produit fini, 22
modification de la procdure analytique. 23
L'ampleur de la revalidation requise dpend de la nature des modifications intervenues. 24
Certaines autres modifications peuvent galement ncessiter une revalidation. 25

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
TYPE DE PROCDURE ANALYTIQUE
IDENTIFICATION ESSAI DE PURETE DOSAGE
Quantitatif Limite Mesure de dissolution
uniquement
Teneur / activit
CARACTERISTIQUE
Exactitude + +
Fidlit
Rptabilit + +
Fidlit intermdiaire
+
*
+
*
Spcificit
**
+ + + +
Limite de dtection

***
+
Limite de quantification + -
Linarit + - +
Intervalle de mesure + - +
Signifie que cette caractristique n'est normalement pas value. 1
+ Signifie que cette caractristique est normalement value. 2
*
Si la reproductibilit (voir glossaire) a t value, il n'est pas ncessaire d'valuer la fidlit intermdiaire. 3
**
Le manque de spcificit d'une procdure analytique peut tre compens par le recours une ou plusieurs 4
mthodes complmentaires. 5
***
Ncessaire dans certains cas. 6
3.1.4 Glossaire 7
Procdure analytique. La procdure analytique est le mode de ralisation d'une analyse. Elle 8
doit dcrire dans le dtail les diffrentes tapes ncessaires la ralisation de l'analyse : 9
prparation de l'chantillon, de l'talon de rfrence et des ractifs, utilisation de 10
l'appareillage, tablissement de la courbe d'talonnage, application des formules de calcul, 11
etc., cette liste n'tant pas restrictive. 12
Spcificit. La spcificit d'une procdure analytique est sa capacit permettre l'valuation 13
univoque de la substance analyser, en prsence des autres composants susceptibles de 14
l'accompagner. Ceux-ci comprennent typiquement les impurets, les produits de dgradation, 15
la matrice, etc. 16
Le manque de spcificit d'une procdure analytique peut tre compens par le recours une 17
ou plusieurs autres procdures complmentaires. 18
Cette dfinition se traduit de la faon suivante : 19
IDENTIFICATION garantir l'identit de la substance analyser 20
ESSAIS DE PURETE garantir que l'ensemble des procdures analytiques appliques 21
permettent une valuation exacte de la teneur en impurets 22
d'une substance (substances apparentes, mtaux lourds, 23
solvants rsiduels, etc.). 24
DOSAGE (teneur ou activit) fournir un rsultat exact permettant d'valuer avec exactitude la 25
concentration ou l'activit de la substance analyser dans un 26
chantillon. 27
e
Exactitude. L'exactitude d'une procdure analytique exprime l'troitesse de l'accord entre la 1
valeur accepte comme conventionnellement vraie, ou comme valeur de rfrence, et la 2
valeur trouve. 3
Elle est parfois appele justesse. 4
Fidlit. La fidlit d'une procdure analytique exprime l'troitesse de l'accord (mesure de la 5
dispersion) entre une srie de mesures obtenues partir de plusieurs prises d'essai provenant 6
d'un mme chantillon homogne, dans les conditions prescrites. Elle peut tre considre 7
3 niveaux : rptabilit, fidlit intermdiaire et reproductibilit. 8
La fidlit doit tre value au moyen d'chantillons homognes authentiques. Cependant, s'il 9
n'est pas possible d'obtenir un chantillon homogne, elle peut tre value au moyen 10
d'chantillons prpars artificiellement ou d'une solution chantillon. 11
La fidlit d'une procdure analytique est en gnral exprime en termes de variance, d'cart 12
type ou de coefficient de variation d'une srie de rsultats de mesure. 13
La rptabilit est la fidlit obtenue dans des conditions opratoires identiques et dans un 14
court intervalle de temps. Elle est galement appele fidlit intra-essai. 15
La fidlit intermdiaire est l'expression de la variabilit intra-laboratoire (mesures 16
effectues des jours diffrents, par des analystes diffrents, avec des quipements diffrents, 17
etc.). 18
La reproductibilit est l'expression de la variabilit inter-laboratoires (tudes collaboratives, 19
gnralement conduites aux fins de standardisation de la mthode). 20
Limite de dtection. La limite de dtection d'une procdure analytique donne est la plus 21
petite quantit de la substance considre qui peut tre dtecte dans un chantillon, sans 22
forcment pouvoir tre quantifie de faon exacte. 23
Limite de quantification. La limite de quantification d'une procdure analytique donne est 24
la plus petite quantit de la substance considre qui peut tre quantifie, dans un chantillon, 25
avec une exactitude et une fidlit appropries. La limite de quantification est un paramtre 26
intervenant dans l'analyse quantitative des substances prsentes faible concentration dans 27
des matrices chantillons ; elle est notamment utilise pour le dosage des impurets et/ou des 28
produits de dgradation. 29
Linarit. La linarit d'une procdure analytique donne est sa capacit ( l'intrieur d'un 30
intervalle donn) fournir des rsultats directement proportionnels la concentration 31
(quantit) de substance prsente dans l'chantillon. 32
Intervalle (de mesure). L'intervalle (de mesure) d'une procdure analytique est l'intervalle 33
(limites infrieure et suprieure incluses) de concentration/quantit de la substance analyser 34
(dans l'chantillon) sur lequel il a t dmontr que la procdure possde une fidlit, une 35
exactitude et une linarit appropries. 36
Robustesse. La robustesse d'une procdure analytique est une mesure de sa capacit ne pas 37
tre affecte par des modifications faibles, dlibres, de facteurs associs la procdure ; 38
elle donne une indication de la fiabilit de la procdure dans les conditions normales 39
d'application. 40

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
3.2 METHODOLOGIE 1
[Document ICH. Texte adopt et publi dans le cadre ICH (International Conference on 2
Harmonisation of Technical Requirements for the Registration of Pharmaceuticals for 3
Human use) (1998)]. 4
3.2.1 Introduction 5
Ce document vient en complment du document ICH initial o sont prsents et discuts les 6
paramtres considrer pour la validation analytique. Son objectif est de fournir des 7
indications et recommandations sur la faon de considrer les diffrents paramtres de 8
validation pour chaque procdure analytique. Dans certains cas (par exemple la 9
dmonstration de la spcificit), il est possible d'tudier les performances globales de 10
plusieurs procdures analytiques, mises en oeuvre concurremment pour s'assurer de la qualit 11
de la substance ou du mdicament. Le document contient galement des indications sur les 12
donnes prsenter dans le cadre de la demande d'AMM d'un nouveau mdicament. 13
Toutes les donnes pertinentes recueillies en cours de validation et toutes les formules 14
utilises pour calculer les paramtres de validation sont fournir, avec discussion le cas 15
chant. 16
D'autres approches que celles proposes dans ce document sont dans certains cas applicables 17
et acceptables. Il relve de la responsabilit du demandeur de choisir la procdure analytique 18
et le protocole de validation les mieux appropris au produit considr. Nanmoins, il est 19
important de ne pas oublier que l'objectif principal de la validation d'une procdure 20
analytique est de dmontrer son adquation pour l'usage qui en est prvu. Les procdures 21
analytiques utilises pour les produits biologiques et biotechnologiques, du fait de leur 22
complexit, peuvent tre valides selon des approches diffrentes de celles exposes dans ce 23
document. 24
Lors des tudes de validation, il convient d'utiliser des substances de rfrence bien 25
caractrises, de puret tablie. Le degr de puret requis dpend de l'usage prvu de ces 26
substances. 27
Par souci de clart et de cohrence avec le document initial, les diffrents paramtres de 28
validation sont ici envisags successivement. La squence adopte reflte le processus de 29
dveloppement et d'valuation des procdures analytiques. 30
Dans la pratique, il est gnralement possible d'organiser les travaux exprimentaux de faon 31
pouvoir considrer simultanment les diffrents paramtres de validation pertinents, afin de 32
parvenir une valuation globale et cohrente de la procdure analytique considre (par 33
exemple : spcificit, linarit, intervalle de mesure, exactitude et fidlit). 34
3.2.2 Spcificit 35
Une tude de la spcificit est ncessaire pour la validation des identifications, des essais de 36
puret et du dosage. Les procdures mises en oeuvre pour dmontrer la spcificit dpendent 37
du type d'application prvu de la procdure analytique. 38
Il est parfois impossible de dmontrer la spcificit d'une procdure analytique pour une 39
substance donne (discrimination totale). Dans ce cas, la combinaison de plusieurs mthodes 40
d'analyse est recommande, pour parvenir au niveau de discrimination voulu. 41
e
3.2.2.1 Identification
Les identifications doivent permettre d'tablir une discrimination entre substances de 1
structure apparente susceptibles d'tre prsentes. L'un des moyens de confirmer le pouvoir 2
de discrimination d'une procdure analytique est de procder paralllement une 3
identification positive (ventuellement par comparaison avec une substance de rfrence 4
connue) sur des chantillons contenant la substance analyser, et une identification 5
ngative sur des chantillons ne contenant pas cette substance. On peut galement appliquer 6
l'essai d'identification des substances structurellement semblables ou troitement 7
apparentes la substance analyser, pour confirmer la ngativit de la rponse. Le choix de 8
ces substances constituant des facteurs d'interfrence potentiels doit reposer sur des critres 9
scientifiquement fonds prenant en considration les interfrences potentielles. 10
3.2.2.2 Dosage et essais de puret
Dans le cas des mthodes chromatographiques, il convient pour dmontrer la spcificit 11
d'utiliser des chromatogrammes reprsentatifs sur lesquels les diffrents composants sont 12
clairement identifis. L'approche suivre est similaire pour les autres techniques de 13
sparation. 14
Les sparations critiques, en chromatographie, doivent tre tudies au niveau appropri ; il 15
est possible de dmontrer la spcificit sur la base de la rsolution obtenue pour deux 16
composants lus des positions trs voisines. 17
Les dosages non spcifiques doivent tre coupls des mthodes d'analyse complmentaires 18
permettant d'assurer la spcificit globale. Par exemple, lorsque le dosage de la substance 19
active est effectu par titrimtrie, il peut tre coupl un essai de puret appropri. 20
L'approche suivre est similaire pour les dosages et les essais de puret. 21
Les impurets sont disponibles 22
Pour dmontrer la spcificit dans le cas d'un dosage, il faut tablir la capacit de la 23
procdure analytique permettre la discrimination de la substance analyser en 24
prsence des impurets et/ou des excipients. Dans la pratique, il est possible 25
d'atteindre cet objectif en ajoutant la substance ou produit pur des quantits 26
appropries d'impurets et/ou d'excipients, et en dmontrant que le rsultat du dosage 27
n'est pas affect par la prsence de ces substances ajoutes (par comparaison au 28
rsultat obtenu avec des chantillons non dops ). 29
Dans le cas des essais de puret, on peut tablir la discrimination en dopant la 30
substance ou le produit avec des quantits appropries d'impurets et en apportant la 31
preuve de la sparation de ces impurets, entre elles et/ou par rapport d'autres 32
composants de la matrice de l'chantillon. Une autre approche acceptable, pour les 33
procdures moins discriminantes, est de dmontrer que ces impurets peuvent encore 34
tre doses avec une exactitude et une fidlit appropries. 35
Les impurets ne sont pas disponibles 36
Si l'on ne dispose pas d'chantillons des impurets ou des produits de dgradation, il est 37
possible de dmontrer la spcificit en comparant les rsultats obtenus avec des chantillons 38
contenant ces impurets ou produits de dgradation et les rsultats obtenus par une seconde 39
procdure, bien caractrise, par exemple une mthode de pharmacope ou une autre 40
procdure analytique valide (procdure indpendante). A cet effet, il convient le cas chant 41

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
d'utiliser des chantillons ayant t exposs des facteurs de dgradation appropris (lumire, 1
chaleur, humidit, hydrolyse acide/basique, oxydation). 2
Pour les dosages, la comparaison porte sur les deux rsultats. 3
Pour les essais de puret, la comparaison porte sur les deux profils d'impurets. 4
Une analyse de puret des pics (exemple : barrette de diodes, spectromtrie de masse) peut 5
tre utile pour tablir que le pic attribu la substance analyser ne correspond pas 6
plusieurs composants. 7
3.2.3 Linarit 8
La linarit doit tre tablie sur tout l'intervalle de mesure (voir 3.2.4) de la procdure 9
analytique considre. Elle peut tre dmontre en appliquant la procdure directement la 10
substance (dilutions prpares partir d'une solution mre), et/ou en l'appliquant des 11
mlanges synthtiques, doss sparment, des diffrents composants du produit. L'valuation 12
de la linarit peut tre effectue lors de l'tude de l'intervalle de mesure. 13
Pour tablir la linarit, il convient d'tablir un graphique des rponses obtenues en fonction 14
de la concentration/teneur, et de procder une valuation visuelle de ce graphique. Si la 15
relation est linaire, il faut alors analyser les rsultats par des mthodes statistiques 16
appropries, par exemple en calculant la droite de rgression par la mthode des moindres 17
carrs. Il peut tre ncessaire dans certains cas, pour obtenir une relation linaire entre 18
rsultats de dosage et concentration, d'appliquer une transformation mathmatique aux 19
rsultats d'essai avant d'effectuer l'analyse de rgression. Les informations fournies par la 20
droite de rgression peuvent tre utiles pour obtenir des estimations mathmatiques du degr 21
de linarit. Le coefficient de corrlation, l'ordonne l'origine, la pente de la droite de 22
rgression et la somme des carrs rsiduels doivent tre indiqus. Une reprsentation 23
graphique des rsultats doit galement tre fournie. Enfin, une analyse de l'cart entre les 24
rsultats effectifs et la droite de rgression peut galement tre utile pour valuer la linarit. 25
Pour certaines procdures analytiques, par exemple les immunodosages, il est impossible de 26
dmontrer la linarit mme aprs transformation mathmatique. Dans ce cas, il convient de 27
dterminer la fonction qui dcrit de faon approprie la relation entre les rsultats d'analyse et 28
la concentration (quantit) de la substance dans un chantillon. 29
Pour tablir la linarit, il est recommand d'utiliser au minimum 5 concentrations. Le 30
recours d'autres approches doit tre justifi. 31
3.2.4 Intervalle (de mesure) 32
L'intervalle de mesure spcifi dcoule normalement des tudes de linarit, et dpend du 33
type d'application prvu de la procdure analytique. Pour l'tablir, il faut confirmer que cette 34
procdure assure un degr acceptable de linarit, d'exactitude et de fidlit lorsqu'elle est 35
applique des chantillons contenant la substance des concentrations comprises dans 36
l'intervalle (bornes comprises) correspondant l'intervalle de mesure spcifi. 37
Les intervalles minimum considrer, selon les cas, sont les suivants. 38
Pour le dosage d'une substance ou d'un produit fini : de 80 pour cent 120 pour cent 39
de la concentration d'essai. 40
e
Pour le dosage d'une impuret : de 50 pour cent de la limite spcifie pour chaque 1
impuret, ou de la limite de quantification (LQ) si elle est suprieure cette valeur, 2
120 pour cent de la limite spcifie. 3
Pour les impurets dont on sait qu'elles possdent une activit inhabituellement 4
leve, ou exercent un effet toxique ou une action pharmacologique indsirable, la 5
limite de dtection/quantification et la concentration limite tolre doivent tre du 6
mme ordre. 7
Note : pour la validation des essais de puret en cours de dveloppement, il peut tre 8
ncessaire de considrer l'intervalle encadrant une limite hypothtique (probable). 9
Si le dosage et le contrle de puret sont effectus ensemble, sous la forme d'un essai 10
unique, et que l'on utilise seulement une solution non dilue, l'tude de linarit doit 11
couvrir l'intervalle allant de 50 pour cent de la limite spcifie pour chaque impuret, 12
ou de la limite de quantification (LQ) si elle est suprieure cette valeur, 120 pour 13
cent de la teneur spcifie. 14
Pour l'uniformit de teneur : au minimum 70 pour cent 130 pour cent de la 15
concentration d'essai, sauf si l'emploi d'un intervalle plus large est justifi pour la 16
forme pharmaceutique considre (exemple : inhalateurs valve doseuse). 17
Pour les essais de dissolution : 20 pour cent sur l'tendue spcifie : par exemple, 18
dans le cas d'un mdicament libration contrle, si les taux de dissolution spcifis 19
vont de 20 pour cent aprs 1 h 90 pour cent aprs 24 h, l'intervalle de validation doit 20
tre de 0-110 pour cent de la teneur indique sur l'tiquette. 21
3.2.5 Exactitude 22
L'exactitude doit tre tablie sur tout l'intervalle de mesure de la procdure analytique. 23
3.2.5.1 Dosage
Substance pharmaceutique 24
Il existe plusieurs approches possibles pour dterminer l'exactitude : 25
application de la procdure analytique un chantillon de puret connue (par 26
exemple : substance de rfrence), 27
comparaison des rsultats respectivement obtenus par la procdure valider et par une 28
seconde procdure, bien caractrise, dont l'exactitude est indique et/ou dfinie 29
(procdure indpendante), 30
dtermination de l'exactitude lors de l'acquisition des donnes relatives la fidlit, la 31
linarit et la spcificit. 32
Mdicament 33
Il existe plusieurs approches possibles pour dterminer l'exactitude : 34
application de la procdure analytique des mlanges de synthse contenant les 35
diffrents composants du produit et auxquels sont ajoutes des quantits connues de la 36
substance analyser, 37
lorsqu'il est impossible d'obtenir des chantillons de tous les composants du produit, il 38
peut tre acceptable de procder soit en ajoutant au produit des quantits connues de 39
la substance, soit en effectuant une comparaison avec les rsultats obtenus par une 40

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
seconde procdure, bien caractrise, dont l'exactitude est indique et/ou dfinie 1
(procdure indpendante), 2
dtermination de l'exactitude lors de l'acquisition des donnes relatives la fidlit, la 3
linarit et la spcificit. 4
3.2.5.2 Impurets (quantification)
L'exactitude doit tre value sur des chantillons (de la substance ou du produit) dops avec 5
des quantits connues d'impurets. 6
Lorsqu'il est impossible de disposer d'chantillons de certaines impurets et/ou certains 7
produits de dgradation, il est acceptable d'effectuer une comparaison avec les rsultats 8
obtenus par une procdure indpendante. Le facteur de rponse de la substance peut tre 9
utilis. 10
3.2.5.3 Recommandations sur les donnes fournir
Il convient d'valuer l'exactitude sur la base d'au moins 9 dterminations, avec au minimum 11
3 concentrations couvrant l'intervalle (de mesure) spcifi (exemple : 3 concentrations avec 12
3 rptitions pour chaque concentration). 13
L'exactitude doit tre indique en termes de pourcentage de recouvrement d'une quantit 14
connue de substance ajoute l'chantillon, ou en termes de diffrence entre la moyenne 15
obtenue et la valeur conventionnellement vraie, avec les intervalles de confiance 16
correspondants. 17
3.2.6 Fidlit 18
La validation des analyses quantitatives (dosage de la substance ou des impurets) comprend 19
une valuation de la fidlit. 20
3.2.6.1 Rptabilit
La rptabilit doit tre value 21
soit sur la base d'au moins 9 dterminations couvrant l'intervalle (de mesure) spcifi 22
(exemple : 3 concentrations avec 3 rptitions pour chaque concentration), 23
soit sur la base d'au moins 6 dterminations 100 pour cent de la concentration 24
d'essai. 25
3.2.6.2 Fidlit intermdiaire
L'ampleur des tudes effectuer pour valuer la fidlit intermdiaire dpend des 26
circonstances dans lesquelles il est prvu d'appliquer la procdure analytique. Le demandeur 27
doit tablir l'effet de diffrents vnements alatoires sur la fidlit de la procdure. Les 28
facteurs de variation types tudier comprennent les variations d'un jour un autre, d'un 29
analyste un autre, d'un quipement un autre, etc. Il n'est pas ncessaire d'tudier 30
individuellement ces effets. L'emploi d'un plan d'exprience (matrice) est conseill. 31
3.2.6.3 Reproductibilit
La reproductibilit est value au moyen d'une tude inter-laboratoires. Elle est considrer 32
dans le cas de la standardisation d'une procdure analytique (par exemple pour l'introduction 33
e
de nouvelles procdures dans les pharmacopes). Ces donnes ne font pas partie du dossier 1
de demande d'AMM. 2
Pour chaque type de fidlit tudi, il convient d'indiquer l'cart type, l'cart type relatif 3
(coefficient de variation) et l'intervalle de confiance. 4
3.2.7 Limite de dtection 5
Plusieurs approches sont possibles pour dterminer la limite de dtection, selon que la 6
mthode considre est instrumentale ou non. D'autres approches que celles dcrites ci- 7
dessous peuvent tre acceptables. 8
3.2.7.1 valuation visuelle
Une valuation visuelle peut tre utilise pour les mthodes non instrumentales, mais 9
galement pour les mthodes instrumentales. 10
La limite de dtection est dtermine par analyse d'chantillons contenant la substance des 11
concentrations connues, puis dtermination de la concentration minimale laquelle une 12
dtection fiable de la substance est possible. 13
3.2.7.2 Rapport signal/bruit
Cette approche n'est applicable qu'aux procdures analytiques caractrises par l'existence 14
d'un bruit par rapport la ligne de base. La dtermination du rapport signal/bruit est effectue 15
par comparaison des signaux respectivement mesurs avec des chantillons contenant la 16
substance des concentrations (faibles) connues et avec des blancs, puis dtermination de la 17
concentration minimale laquelle une dtection fiable de la substance est possible. Un 18
rapport signal/bruit de 3:1 2:1 est gnralement acceptable. 19
3.2.7.3 cart type des rponses et pente
La limite de dtection (LD) peut tre exprime par la relation : 20
LD =
3,3
S
= cart type de la rponse, 21
S = pente de la courbe d'talonnage. 22
La pente S peut tre estime partir de la courbe d'talonnage tablie avec la substance 23
analyser. L'estimation de peut tre effectue par diffrentes mthodes, par exemple celles 24
dcrites ci-dessous. 25
Mthode de l'cart type du blanc 26
On mesure la rponse correspondant au bruit de fond analytique en analysant un nombre 27
appropri d'chantillons blanc et en calculant l'cart type des rponses obtenues. 28
Mthode de la courbe d'talonnage 29
Une courbe d'talonnage spcifique est tablie avec des chantillons contenant la substance 30
dans des quantits de l'ordre de grandeur de la LD. On peut alors utiliser, comme cart type, 31
l'cart type rsiduel d'une droite de rgression ou l'cart type des ordonnes l'origine des 32
droites de rgression. 33

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
Il convient d'indiquer la limite de dtection et la mthode utilise pour la dterminer. 1
Lorsque l'estimation de la limite de dtection est obtenue par le calcul ou par extrapolation, 2
cette estimation peut tre valide par analyse indpendante d'un nombre appropri 3
d'chantillons de concentration gale la limite de dtection ou voisine de cette limite. 4
3.2.8 Limite de quantification 5
Plusieurs approches sont possibles pour dterminer la limite de quantification, selon que la 6
mthode considre est instrumentale ou non instrumentale. D'autres approches que celles 7
dcrites ci-dessous peuvent tre acceptables. 8
3.2.8.1 valuation visuelle
Une valuation visuelle peut tre utilise pour les mthodes non instrumentales, mais 9
galement pour les mthodes instrumentales. 10
La limite de quantification est dtermine par analyse d'chantillons contenant la substance 11
des concentrations connues, puis dtermination de la concentration minimale laquelle la 12
quantification de la substance est possible avec une exactitude et une fidlit acceptables. 13
3.2.8.2 Rapport signal/bruit
Cette approche n'est applicable qu'aux procdures analytiques caractrises par l'existence 14
d'un bruit par rapport la ligne de base. La dtermination du rapport signal/bruit est effectue 15
par comparaison des signaux respectivement mesurs avec des chantillons contenant la 16
substance des concentrations (faibles) connues et avec des blancs, puis dtermination de la 17
concentration minimale laquelle une quantification fiable de la substance est possible. Le 18
rapport signal/bruit type est de 10:1. 19
3.2.8.3 cart type des rponses et pente
La limite de quantification (LQ) peut tre exprime par la relation : 20
LQ =
10
S
21
= cart type de la rponse, 22
S = pente de la courbe d'talonnage. 23
La pente S peut tre estime partir de la courbe d'talonnage tablie avec la substance 24
analyser. L'estimation de peut tre effectue par diffrentes mthodes, par exemple celles 25
indiques ci-dessous. 26
Mthode de l'cart type du blanc 27
On mesure la rponse correspondant au bruit de fond analytique en analysant un nombre 28
appropri d'chantillons blanc et en calculant l'cart type des rponses obtenues. 29
Mthode de la courbe d'talonnage 30
Une courbe d'talonnage spcifique est tablie avec des chantillons contenant la substance 31
dans des quantits de l'ordre de grandeur de la LQ. On peut alors utiliser, comme cart type, 32
l'cart type rsiduel d'une droite de rgression ou l'cart type des ordonnes l'origine des 33
droites de rgression. 34
e
Il convient d'indiquer la limite de quantification et la mthode utilise pour la dterminer. 1
L'estimation obtenue doit tre valide par analyse d'un nombre appropri d'chantillons de 2
concentration gale la limite de quantification ou voisine de cette limite. 3
3.2.9 Robustesse 4
Une valuation de la robustesse est envisager lors de la phase de dveloppement de la 5
procdure analytique. Elle dpend du type de procdure considr. Son objectif est de 6
dmontrer la fiabilit d'une analyse lorsque l'on introduit des variations dlibres de 7
diffrents paramtres. 8
Si les mesures sont sensibles aux variations des conditions d'analyse, il convient de maintenir 9
ces conditions constantes ou d'introduire un avertissement dans la description de la 10
procdure. L'valuation de la robustesse doit notamment conduire l'tablissement d'une 11
srie de paramtres de conformit du systme (par exemple test de rsolution), et ainsi de 12
s'assurer que la validit de la procdure analytique est maintenue chaque application. 13
Les variations types sont les suivantes : 14
stabilit des solutions soumises l'analyse, 15
utilisation d'quipements diffrents, 16
intervention d'analystes diffrents. 17
Dans le cas de la chromatographie liquide, les variations types sont les suivantes : 18
influence des variations du pH de la phase mobile, 19
influence des variations de la composition de la phase mobile, 20
emploi de diffrentes colonnes (lots et/ou fournisseurs diffrents), 21
temprature, 22
dbit. 23
Dans le cas de la chromatographie en phase gazeuse, les variations types sont les suivantes : 24
emploi de diffrentes colonnes (lots et/ou fournisseurs diffrents), 25
temprature, 26
dbit. 27
3.2.10 Vrification de la conformit du systme 28
La vrification de la conformit du systme fait partie intgrante de nombreuses procdures 29
analytiques. Les tests effectus reposent sur l'ide que l'quipement, l'lectronique, les 30
oprations analytiques et les chantillons analyser constituent un systme global pouvant 31
tre valu en tant que tel. Les paramtres de conformit du systme tablir dpendent du 32
type de procdure analytique sur lequel porte la validation (pour plus ample information, voir 33
les pharmacopes). 34

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
3.3 APPLICATION SPECIFIQUE A DES METHODES UTILISEES 1
DANS LA PHARMACOPEE 2
Cette section traite d'un certain nombre de points concernant la validation de mthodes 3
s'appuyant sur des techniques analytiques spcifiques. Les indications qui y figurent viennent 4
en complment des chapitres gnraux de la Pharmacope europenne et des exigences de 5
validation prcdemment dcrites (documents ICH). 6
3.3.1 Pouvoir rotatoire (2.2.7) 7
3.3.1.1 Introduction
Le solvant choisi doit permettre d'obtenir un angle de rotation aussi lev que possible. La 8
stabilit de l'angle de rotation de la solution doit tre vrifie sur un intervalle de temps de 2 h 9
au moins. Si besoin est, l'emploi d'une solution rcemment prpare peut tre spcifi. Dans 10
certains cas exceptionnels, il peut tre ncessaire prescrire une phase d'quilibrage avant la 11
ralisation de l'essai. 12
Il convient, chaque fois que possible, de travailler la longueur d'onde de la raie D du 13
sodium. 14
Lorsque la substance examine est un nantiomre, le pouvoir rotatoire spcifique est utilis 15
pour l'identification. 16
S'il sert uniquement l'identification, sa valeur peut ne pas tre calcule par rapport la 17
substance dessche ou la substance exempte de solvant. Les limites spcifies doivent tenir 18
compte des variations de teneur ou de puret observes avec des chantillons de diffrentes 19
origines satisfaisant la monographie. 20
Si le pouvoir rotatoire spcifique est galement utilis pour contrler la puret des 21
nantiomres, il peut tre indiqu sous IDENTIFICATION que la substance satisfait l'essai du 22
pouvoir rotatoire spcifique. 23
3.3.1.3 Essai
Le pouvoir rotatoire spcifique peut tre utilis pour vrifier la puret d'un nantiomre. Cette 24
mthode est toutefois moins sensible que la chromatographie chirale. Lorsqu'il s'agit de 25
limiter un seul nantiomre par mesure du pouvoir rotatoire spcifique, il doit tre dmontr 26
que, dans les conditions de l'essai, cet nantiomre possde une activit optique suffisante 27
pour pouvoir tre dtect. Le rsultat est calcul par rapport la substance dessche ou la 28
substance exempte de solvant. Il convient, si possible, de dterminer l'influence des impurets 29
potentielles. Les limites spcifies pour le pouvoir rotatoire spcifique doivent tenir compte 30
de la teneur admise en impurets. En l'absence d'informations sur le pouvoir rotatoire des 31
substances apparentes, et lorsque l'on ne dispose pas des substances apparentes en quantit 32
suffisante, les limites sont souvent fixes, conventionnellement, 5 pour cent autour de la 33
valeur moyenne obtenue pour des chantillons satisfaisant la monographie. Il convient, 34
chaque fois que possible, d'examiner des chantillons de diffrentes origines. Il est galement 35
utile d'examiner des chantillons proches de la date de premption, afin d'obtenir des 36
informations sur l'effet du vieillissement naturel. 37
La mesure de l'angle de rotation peut servir vrifier le caractre racmique d'une substance. 38
Dans ce cas, l'usage est de prescrire des limites de + 0,10 0,10. 39
e
Il convient si possible de dmontrer que, dans les conditions de l'essai, l'nantiomre possde 1
une activit optique suffisante pour pouvoir tre dtect. 2
Dans des cas exceptionnels, on utilise l'angle de rotation pour vrifier la puret d'un 3
nantiomre (exemple : cas de la mthyldopa o du chlorure d'aluminium est ajout pour 4
augmenter l'angle de rotation par formation d'un complexe). 5
3.3.1.4 Dosage
Dans des cas exceptionnels, on utilise l'angle de rotation pour doser une substance (exemple : 6
chlorhydrate d'thambutol). Ceci implique l'emploi d'une substance de rfrence de puret 7
optique connue. 8
(2.2.25) 10
Il est ncessaire, dans tous les cas, de vrifier que les conditions opratoires utilises (nature 11
et qualit des solvants employs, pH de la solution, etc.) sont appropries. 12
Sous sa forme classique, la spectrophotomtrie UV est une mthode possdant un pouvoir de 13
discrimination limit, mais il est possible de l'amliorer en utilisant les techniques dites de 14
drive premire et seconde. 15
La spectrophotomtrie UV est rarement employe seule pour les identifications. Lorsqu'elle 16
est utilise dans le cadre d'une srie d'identifications, son pouvoir de discrimination doit tre 17
dmontr par comparaison du spectre de la substance analyser et de celui de substances 18
similaires. Il est possible d'obtenir un meilleur pouvoir de discrimination en utilisant les 19
rapports d'absorbance plutt que les valeurs directes de l'absorbance. 20
3.3.2.2 Essais limites
Lorsque la spectrophotomtrie UV est utilise pour un essai limite, il doit tre dmontr que, 21
la longueur d'onde de mesure, la contribution l'absorbance mesure de la substance 22
limiter est suffisante. L'absorbance correspondant la concentration limite de la substance 23
limiter doit tre tablie. 24
3.3.2.3 Dosage
Lorsque la spectrophotomtrie UV est utilise pour un dosage, il faut valuer la contribution 25
l'absorbance des impurets connues. L'emploi dans les dosages de valeurs de l'absorbance 26
spcifique est dconseill. Si des valeurs de l'absorbance spcifique sont indiques, elles 27
doivent tre valides au moyen d'une tude inter-laboratoires portant sur un lot de puret 28
connue. La puret doit tre estime par diverses techniques, dont des techniques sparatives 29
et des techniques absolues. 30
3.3.3 Essais limites non instrumentaux 31
3.3.3.1 Aspect de la solution (2.2.1 et 2.2.2)
Ces essais visuels simples consistent comparer la coloration (ou l'opalescence) de la 32
solution examiner celle d'une srie de solutions tmoins. En gnral, la solution 33
examiner doit tre limpide et incolore. L'objectif de ces essais est une valuation globale de la 34

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
puret de la substance. Lorsqu'un certain degr de coloration (ou d'opalescence) est autoris, 1
la nature des impurets et la concentration laquelle correspond ce degr de coloration ne 2
sont souvent pas connues. La validation repose alors sur l'examen de donnes de lots fournies 3
par le(s) fabricant(s). Par contre, si l'impuret qui est l'origine de l'opalescence ou de la 4
coloration est connue, il est possible de valider l'essai visuel par comparaison une technique 5
analytique plus sophistique. 6
3.3.3.2 Acidit / alcalinit
Cette mthode permet une valuation globale de la puret. Il s'agit d'un essai non spcifique 7
utilis pour le contrle des impurets protolytiques. Ses rgles d'application sont dcrites plus 8
haut dans le dtail. 9
3.3.3.3 Essais limites des anions/cations (2.4...)
Il s'agit d'essais simples et rapides, mais dont il faut dmontrer, par des tudes de 10
recouvrement et/ou par comparaison avec d'autres mthodes plus sophistiques, qu'ils 11
donnent des rsultats satisfaisants. 12
Cendres sulfuriques (2.4.14). L'essai des cendres sulfuriques constitue une mthode de 13
dosage global des cations prsents dans les substances organiques, mais qui n'est videmment 14
pas applicable aux sels inorganiques de substances organiques acides. La limite spcifie est 15
en gnral de 0,1 pour cent. Cette mthode gravimtrique sert limiter la teneur en cations 16
trangers un niveau appropri, constituant une indication de la qualit de la production. Elle 17
peut tre considre comme suffisamment bien tablie pour ne pas ncessiter de validation 18
complmentaire. 19
Mtaux lourds (2.4.8). Les lments toxiques, dont beaucoup sont contrls par l'essai des 20
mtaux lourds (ex. : plomb, cuivre, argent, mercure, cobalt, cadmium et palladium) doivent 21
faire l'objet de limites adquates (basses). 22
L'essai repose sur la prcipitation de ces mtaux lourds sous forme de sulfures et la 23
comparaison visuelle avec un tmoin prpar partir d'une solution de plomb. 24
Cinq procds diffrents sont dcrits dans la mthode gnrale de la Pharmacope (2.4.8) et 25
des explications les concernant figurent dans la section 2 du prsent guide. Le plus souvent, 26
la limite est fixe 10 ppm ou 20 ppm. Il est possible de spcifier une limite plus basse, mais 27
condition d'utiliser le procd E. Il est toutefois important de choisir le procd le mieux 28
appropri la substance examiner, et de vrifier la rponse la limite propose. 29
Le procd dont l'emploi est envisag est appliqu l'chantillon ainsi qu' un chantillon 30
dop avec du plomb concurrence de la limite souhaite. L'opalescence brune obtenue 31
avec l'chantillon doit tre infrieure celle du tmoin, celle obtenue avec l'chantillon 32
dop gale ou suprieure. 33
Il est noter que, pour certains des procds dcrits, qui ncessitent une incinration, il peut y 34
avoir une perte en certains mtaux lourds (par exemple le mercure et le plomb) en prsence 35
de chlorures. Si ce risque existe, il convient de doser les mtaux concerns par spectromtrie 36
d'absorption atomique ou une autre technique instrumentale approprie. 37
Lorsque l'on sait qu'un catalyseur (palladium, nickel ou rhodium par exemple) a t employ 38
pour la synthse, il est parfois plus appropri de le doser par une mthode colorimtrique ou 39
instrumentale spciale (spectromtrie d'absorption atomique, fluorimtrie ICP, etc.). 40
e
Ractions colores ou ractions de prcipitation. Des essais limites sont galement dcrits 1
pour des cations et anions particuliers ; ils reposent sur la comparaison visuelle d'une 2
coloration ou d'une opalescence. Il est essentiel de dmontrer les points suivants : 3
la coloration ou opalescence est visible la concentration cible (limite), 4
le recouvrement de l'ion ajout est le mme dans la solution examiner et dans les 5
solutions tmoins (vrification par observation visuelle et si possible mesure 6
d'absorbance), 7
la rponse est suffisamment discriminante sur l'intervalle encadrant la valeur cible 8
(50 pour cent, 100 pour cent et 150 pour cent de la valeur cible), ce qui peut tre 9
vrifi par mesure de l'absorbance la longueur d'onde approprie du spectre visible, 10
une exprience de recouvrement la concentration cible est effectue 6 fois, et l'cart 11
type de rptabilit est calcul. Le recouvrement doit tre suprieur 80 pour cent et 12
l'ETR de rptabilit doit tre infrieur 20 pour cent. 13
Il est souhaitable, le cas chant, de comparer les rsultats respectivement obtenus partir 14
d'une tude de recouvrement conduite au moyen de l'essai limite envisag et partir d'une 15
analyse quantitative ralise par une mthode diffrente, par exemple la spectromtrie 16
d'absorption atomique pour les cations ou la chromatographie ionique pour les anions. Les 17
rsultats obtenus dans les deux cas doivent tre comparables. 18
3.3.4 Spectromtrie d'absorption atomique (2.2.23) 19
La spectromtrie d'absorption atomique est exclusivement utilise dans des essais portant sur 20
le dosage d'lments spcifiques, prsents dans les substances en tant qu'impurets. Les 21
paramtres de validation suivants sont considrer. 22
3.3.4.1 Spcificit
Cette technique est en principe spcifique de l'lment doser, si l'on opre avec une source 23
et une longueur d'onde appropries, puisque l'mission ou l'absorption du rayonnement par 24
l'atome s'effectue des raies spectrales discrtes. Nanmoins, des interfrences dues des 25
facteurs optiques et/ou chimiques peuvent se produire. Avant de s'engager dans le programme 26
de validation, il est donc important d'identifier ces interfrences et, si possible, de rduire 27
leurs effets par des mthodes appropries. 28
Ces interfrences peuvent entraner une erreur systmatique, si la mthode d'talonnage 29
employe est directe, ou affecter la sensibilit de la procdure analytique. Les principales 30
sources d'erreur en spectromtrie atomique sont associes l'talonnage et l'interfrence de 31
la matrice (il faut veiller viter les effets mmoire). 32
3.3.4.2 talonnage
Des solutions de rfrence aqueuses diffrentes concentrations, chelonnes sur l'intervalle 33
d'talonnage, sont prpares et analyses. 34
Le nombre de concentrations utiliser dpend du modle d'talonnage employ. Pour 35
dmontrer l'applicabilit du modle de rgression linaire, il convient de prparer des 36
solutions de rfrence 4 concentrations au moins. L'emploi d'une courbe de rgression 37
parabolique requiert galement 4 concentrations au moins. Ces concentrations sont de 38
prfrence rparties de faon uniforme sur l'intervalle d'talonnage. 39

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
En rgle gnrale, il est recommand d'effectuer 5 mesures au moins pour chaque 1
concentration. 2
Les problmes lis l'talonnage peuvent souvent tre dtects visuellement. Nanmoins, les 3
reprsentations graphiques ne constituent pas une preuve suffisante de l'adquation de la 4
procdure d'talonnage. 5
a) Tracer un graphique des absorbances mesures en fonction de la concentration, ainsi 6
qu'une courbe reprsentant la fonction d'talonnage et les intervalles de confiance 7
correspondants. Cette courbe doit prsenter un bon ajustement aux donnes. 8
b) Tracer un graphique des rsidus, c'est dire des carts entre l'absorbance mesure et 9
l'absorbance estime, en fonction de la concentration. La procdure d'talonnage utilise 10
est satisfaisante si les rsidus prsentent une distribution alatoire autour de l'axe des x. 11
Lorsque la variance du signal crot avec la concentration, ce qui est souvent le cas en 12
spectromtrie atomique et peut tre dtect par la reprsentation graphique des rsidus ou un 13
test t unilatral, l'emploi d'un modle pondr permet une meilleure estimation. Pour trouver 14
le modle le plus adquat, on applique aux donnes des fonctions de pondration linaire et 15
quadratique. 16
Pour appliquer un modle pondr, tablir un graphique des rsidus pondrs (rsidu 17
multipli par le coefficient de pondration) en fonction de la concentration : 18
a) tracer le graphe des absorbances mesures comme fonction pondre de la concentration, 19
ainsi que la courbe reprsentant la fonction d'talonnage et les intervalles de confiance 20
correspondants, 21
b) tracer le graphe des rsidus pondrs en fonction de la concentration. 22
Il faut dmontrer que le modle prsente un bon ajustement aux donnes. L'application d'un 23
modle de rgression linaire exige de vrifier la linarit de la droite d'talonnage. 24
3.3.4.3 Effets de matrice
Lorsque l'on utilise des solutions de rfrence aqueuses pour estimer la fonction d'talonnage, 25
il convient de vrifier que les sensibilits respectivement obtenues dans la solution 26
chantillon et en milieu aqueux sont similaires. Si le modle d'talonnage appliqu est 27
linaire, il est possible de dtecter d'ventuelles diffrences de sensibilit en comparant la 28
pente obtenue avec un ajout dos et avec la droite d'talonnage en milieu aqueux. La fidlit 29
de l'estimation des pentes des deux droites de rgression dpend du nombre et de la 30
distribution des points de mesure. Il est par consquent recommand d'tablir les deux droites 31
de rgression partir d'un nombre suffisant de points de mesure (en gnral > 5), et de 32
concentrer principalement ces points aux bornes de l'intervalle d'talonnage. 33
On compare les pentes respectives de la droite obtenue avec un ajout dos et de la droite 34
d'talonnage en milieu aqueux, en appliquant un test t, pour vrifier si ces deux pentes 35
prsentent une diffrence significative. Il convient alors d'appliquer le Procd II (ajouts 36
doss) si cette diffrence est significative, ou le procd I (talonnage direct) si elle ne l'est 37
pas. 38
3.3.4.4 Limites de dtection et de quantification (estimation fonde sur l'cart type du
blanc)
Pour obtenir une estimation des limites de dtection et de quantification, prparer et analyser 39
des blancs reprsentatifs. Utiliser de prfrence des blancs-matrice, c'est dire des blancs 40
e
contenant tous les composants de l'chantillon l'exception de la substance analyser. 1
Toutefois, si l'on ne dispose pas de blancs-matrice, il est possible d'utiliser des blancs-ractif, 2
c'est dire des blancs qui contiennent tous les ractifs et sont prpars de la mme manire 3
que la solution chantillon. 4
Les autres aspects du programme de validation sont traits plus haut. 5
3.3.5 Techniques sparatives 6
Mthodes chromatographiques 7
Les diffrentes techniques chromatographiques (chromatographie sur couche mince, 8
chromatographie en phase gazeuse et chromatographie liquide) peuvent tre mises en uvre 9
dans les monographies, sous les rubriques IDENTIFICATION, ESSAI (pour la limitation des 10
substances apparentes) et DOSAGE (pour le dosage du principe actif). Elles doivent tre 11
valides selon les principes gnraux dj dcrits, mais il convient de tenir compte galement 12
de certaines particularits propres chacune d'elles. 13
3.3.5.1 Chromatographie sur couche mince (2.2.27)
Cette technique chromatographique est largement employe dans la Pharmacope pour les 14
identifications (par comparaison une substance de rfrence) et pour la limitation des 15
impurets (avec ou sans substance de rfrence). Son application l'analyse quantitative des 16
impurets exige l'emploi d'instruments appropris. Dans la plupart des cas, la silice est 17
utilise comme phase stationnaire, mais on a aussi parfois recours des phases inverses (gel 18
de silice silanis par exemple) ou base de cellulose. Les caractristiques suivantes sont 19
nanmoins communes l'ensemble des techniques de chromatographie sur couche mince, 20
qu'elles soient utilises pour une identification ou un essai des substances apparentes. 21
Spcificit Il est admis que, pour les identifications, cette technique n'assure pas 22
elle seule la spcificit, mais qu'on peut en revanche en attendre une bonne 23
discrimination elle doit tre complte par d'autres techniques qui assurent 24
concurremment la spcificit. Celle-ci peut galement tre insuffisante pour certains 25
essais limites, auquel cas il convient de dcrire un ou plusieurs autres essais 26
permettant de contrler la (les) impuret(s) non spare(s). Le pouvoir de 27
discrimination doit tre tabli. Pour les identifications, il est parfois possible de 28
l'amliorer en utilisant un ractif de pulvrisation qui permet de diffrencier des 29
substances similaires d'aprs leur coloration. 30
Phase stationnaire Il faut dmontrer que l'essai est applicable avec des plaques de 31
mme type, mais d'origine diffrente, et viter si possible les sparations qui ne sont 32
ralisables qu'avec un type particulier de plaque. 33
Test de conformit du systme Un test de ce type est gnralement effectu pour 34
vrifier la sparation de deux substances ayant un temps de migration voisin, la 35
substance proprement dite et une substance proche (couple critique). Il faut dmontrer 36
que la sparation de ces deux substances constitue une garantie de l'adquation du 37
systme chromatographique. Ce critre de conformit est essentiel dans le cas des 38
essais des substances apparentes. 39

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
D'autres aspects sont galement tudier lorsqu'une CCM est utilise pour un essai des 1
Dtection Dans les cas d'un essai des substances apparentes, l'emploi de ractifs 3
de pulvrisation spcifiques est viter, sauf si l'essai est destin limiter une 4
impuret dsigne, au moyen d'une substance de rfrence. 5
Limite de dtection Lors de l'emploi d'une technique instrumentale quantitative, il 6
convient d'appliquer l'une des mthodes dcrites pour le calcul de la limite de 7
dtection. Si l'on utilise une mthode visuelle, il doit tre dmontr que la quantit 8
correspondant la limite spcifie est dtectable. 9
Facteurs de rponse Si les impurets connues sont disponibles, il convient de 10
dmontrer que leur facteur de rponse est du mme ordre que celui de la substance 11
elle-mme, dans les conditions de dtection indiques. Pour un essai limite, des 12
diffrences de rponse peuvent tre mises en vidence par comparaison des limites de 13
dtection visuelles. 14
Limite de quantification, linarit, intervalle (de mesure) et rptabilit Des 15
donnes relatives ces paramtres sont galement ncessaires lorsqu'une technique de 16
CCM quantitative instrumentale est employe. 17
3.3.5.2 Chromatographie liquide (2.2.29)
La chromatographie liquide est gnralement utilise pour limiter la teneur en impurets 18
d'une substance (on emploie dans ce cas un talon externe, qui est en gnral une dilution 19
approprie de la solution examiner), pour doser une substance (en employant un talon 20
externe) et parfois comme moyen d'identification, par renvoi l'un des deux types d'essais 21
prcdents. Un certain nombre d'aspects spcifiques de la chromatographie liquide appellent 22
une attention particulire. 23
3.3.5.2.1 Identification 24
Spcificit Il est admis que, pour les identifications, cette technique n'assure pas 25
elle seule la spcificit, mais qu'on peut en revanche en attendre une bonne 26
discrimination elle doit tre complte par d'autres techniques qui assurent 27
concurremment la spcificit. Le pouvoir de discrimination doit tre tabli au moyen 28
des temps de rtention, des rtentions relatives ou du coefficient de distribution 29
massique de la substance elle-mme et de substances proches. Ces informations 30
doivent tre fournies pour une gamme de phases stationnaires de mme type. 31
3.3.5.2.2 Essais limites 32
Spcificit 33
Pouvoir discriminant de la sparation. Il faut dmontrer que le systme permet une 34
sparation adquate des impurets connues et potentielles, par rapport la 35
substance elle-mme et, si possible, entre elles. On peut assurer la spcificit en 36
utilisant la spectromtrie de masse pour la dtection. Si une ou plusieurs impurets 37
ne sont pas spares de la substance, elles doivent tre contrles par une autre 38
mthode. Les temps de rtention, les rtentions relatives ou les coefficients de 39
distribution massique de la substance et des impurets doivent tre enregistrs. Ces 40
informations doivent tre obtenues pour une gamme de phases stationnaires de 41
mme type. 42
e
Pouvoir discriminant du systme de dtection. Le choix du dtecteur et des 1
conditions de dtection employes doit tre valid (par exemple en faisant varier la 2
longueur d'onde de dtection pour l'UV) ; on peut assurer la spcificit en ayant 3
recours la spectromtrie de masse pour la dtection. 4
Facteurs de rponse Il est essentiel de dmontrer que la substance et les impurets 5
connues ont des facteurs de rponse du mme ordre, pour la dtection UV ( la 6
longueur d'onde de dtection) mais galement pour d'autres mthodes de dtection 7
(indice de rfraction, conductimtrie, ...). Si une impuret connue possde un facteur 8
de rponse suprieur 1,2 fois ou infrieur 0,8 fois celui de la substance examiner, 9
il peut tre ncessaire d'appliquer des facteurs de correction ou d'utiliser une impuret 10
particulire comme talon externe lorsque la limite propose est gale ou suprieure 11
0,1 pour cent. 12
Limites de dtection et de quantification Ces limites doivent tre dtermines pour 13
l'talon externe, qui peut tre une dilution de la substance examiner ou une impuret 14
connue. Lorsqu'un pic correspondant une impuret est lu proximit de celui de 15
la substance, notamment si cette impuret est lue aprs la substance, les limites de 16
dtection et de quantification doivent tre dtermines sur cette impuret. On utilise 17
l'une des mthodes de calcul de la limite de dtection et de la limite de quantification. 18
Stabilit Des donnes de stabilit doivent tre prsentes pour tablir la dure de 19
conservation des solutions tmoins et des solutions examiner. 20
Recouvrement Lorsqu'un procd d'extraction est employ, une tude de 21
recouvrement doit tre effectue au moyen d'impurets connues disponibles, dans des 22
conditions optimales, et les rsultats doivent tre enregistrs. Il doit tre dmontr que 23
le recouvrement prsente une fidlit acceptable. 24
Drivatisation Lorsqu'une drivatisation pr- ou post-colonne est effectue, il est 25
important d'tablir les conditions optimales de raction (temps et temprature), ainsi 26
que d'tudier la stabilit des produits drivs dans les conditions normales d'emploi. 27
Test de conformit du systme Voir plus haut la chromatographie sur couche 28
mince. L'emploi du rapport signal/bruit n'est ncessaire que lorsque la limite de 29
dtection et la limite spcifie sont voisines. 30
3.3.5.2.3 Dosage 31
Spcificit Cette caractristique est souhaitable, mais non indispensable si 32
l'impuret interfrente est prsente faible concentration et est contrle par un autre 33
essai. 34
mince. 36
Les essais limites et dosages doivent tre valids selon les indications donnes plus haut pour 37
la linarit, la rptabilit et la reproductibilit. 38
3.3.5.3 Chromatographie en phase gazeuse (2.2.28)
3.3.5.3.1 Identification 39
Spcificit Voir plus haut la chromatographie liquide. 40

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
3.3.5.3.2 Essais limites 1
Spcificit voir plus haut la chromatographie liquide. 2
Facteurs de rponse (voir chromatographie liquide) Il faut connatre les facteurs de 3
rponse et les comparer celui de la substance elle-mme. Ceci est particulirement 4
important lorsque l'on utilise des techniques de dtection slectives (capture 5
d'lectrons, dtection des composs azots et phosphats, etc.). 6
Limites de dtection et de quantification Voir plus haut la chromatographie 7
liquide. 8
Stabilit Voir plus haut la chromatographie liquide. 9
Drivatisation Voir plus haut la chromatographie liquide. 10
talon interne Il doit tre dmontr que, dans les conditions chromatographiques 11
utilises, le pic d l'talon interne n'interfre pas avec ceux des impurets ou de la 12
substance elle-mme. 13
Paramtres de recouvrement Voir plus haut la chromatographie liquide. 14
3.3.5.3.3 Test de conformit du systme 15
Il convient de fournir une description dtaille des critres auxquels doit satisfaire l'utilisateur 16
pour raliser l'essai de faon satisfaisante. 17
Rapport signal/bruit : ce critre est gnralement utilis lorsque le signal est voisin de 18
la limite de dtection. 19
Rsolution entre les pics respectivement dus la substance et une impuret lue 20
un temps voisin, ou entre les pics respectivement dus la substance et l'talon 21
interne. Il est galement utile de prciser l'intervalle de valeurs acceptable pour le 22
facteur de symtrie lorsqu'il diffre de celui spcifi dans la mthode gnrale 23
(2.2.28), soit 0,8 1,2. Ce point est particulirement important lorsque l'on emploie 24
des colonnes remplies et que le pic d'une des impurets contrler est lu 25
immdiatement aprs le pic principal. La vrification des performances au moyen 26
d'une colonne similaire, chaque fois que possible, est recommande. 27
Technique espace de tte Cette technique d'injection est utilise pour les 28
substances hautement volatiles. Il est important de dmontrer que la temprature et le 29
temps de prchauffage du flacon assurent la ralisation des conditions d'quilibre. Il 30
faut galement vrifier l'existence (ou l'absence) de tout effet dit de matrice . Un 31
moyen possible de valider les conditions d'espace de tte consiste effectuer des 32
extractions multiples (l'espace de tte est vacu aprs chaque injection, et le flacon 33
rquilibr avant rinjection de la phase gazeuse). La condition pralable l'obtention 34
de bonnes conditions opratoires est l'existence d'une relation linaire, avec un 35
coefficient de rgression de 1,0, entre les valeurs logarithmiques de la surface du pic 36
de la substance analyser et le nombre d'extractions. Le problme des effets de 37
matrice peut tre surmont par la technique des ajouts doss. 38
3.3.5.3.4 Dosage 39
Spcificit Voir plus haut la chromatographie liquide. 40
e
mince. 2
Les essais limites et dosages doivent tre valids selon les indications de la section 3.2 pour 3
la linarit, la rptabilit et la reproductibilit. 4
3.3.5.3.5 Identification et contrle des solvants rsiduels (2.4.24) 5
Le mode de prparation des chantillons et les systmes de CPG utiliss doivent tre valids 6
pour la substance examiner selon les critres gnraux applicables la CPG, en portant une 7
attention particulire aux critres suivants : 8
spcificit 9
limites de dtection et de quantification 10
recouvrement 11
rptabilit 12
linarit, pour les analyses quantitatives. 13
3.3.6 Semi-microdosage de l'eau (2.5.12) 14
Il existe dans le commerce divers ractifs de Karl Fischer ; il est donc important de s'assurer 15
de l'aptitude l'emploi du ractif utilis, par une procdure de validation faisant par exemple 16
appel la mthode des ajouts doss. 17
Mthode des ajouts doss 18
Dterminez la teneur en eau m
H
2
O
de l'chantillon dans les conditions proposes. Ajoutez 19
ensuite l'chantillon, dans des conditions tanches, un volume appropri d'une solution 20
titre d'eau dans le mthanol R et dterminez la teneur en eau m
i
, en milligrammes d'eau ; 21
rptez cette opration au moins 5 fois. 22
Calculez la droite de rgression de la teneur en eau mesure en fonction de la quantit d'eau 23
ajoute (en valeurs cumulatives). Calculez la pente b, l'ordonne l'origine a et le point 24
d'intersection d de la droite extrapole avec l'axe des abscisses. 25
La pente b est acceptable si elle est comprise entre 0,975 et 1,025 (cart admis 2,5 %). Les 26
erreurs e
1
et e
2
sont infrieures 2,5 pour cent. 27
e
1
=
a mH
2
O
mH
2
O
100
28
e
2
=
d mH
2
O
mH
2
O
100
29
Calculez le recouvrement pour chacune des tapes d'addition d'eau. Le recouvrement moyen 30
est acceptable s'il est compris entre 97,5 pour cent et 102,5 pour cent. 31
3.3.7 Titrages volumtriques (2.5.11 - 2.2.19 - 2.2.20) 32
Lors du dveloppement de nouvelles mthodes de dosage fondes sur un titrage 33
volumtrique, il est recommand de titrer dans les conditions prescrites au moins 7 prises 34
d'essai de masse diffrente, dans un ordre randomis, de faon obtenir des volumes au point 35
final compris entre 20 pour cent et 90 pour cent du volume de la burette utilise. Les rsultats 36

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
obtenus font l'objet d'un traitement statistique et doivent satisfaire un certain nombre de 1
critres pour que la procdure de titrage soit accepte. 2
L'erreur relative de lecture sur la masse pese et sur le volume au point final doit tre 3
infrieure 0,5 pour cent des valeurs obtenues. 4
Les rsultats, exprims en volume au point final V
i
en fonction de la masse m
i
, font l'objet 5
d'une analyse de rgression linaire. La droite de rgression calcule est caractrise par la 6
pente b
obs
, l'ordonne l'origine (obtenue par extrapolation) a
obs
et la fidlit exprime par 7
l'cart type sdv(V). 8
Critre 1 : erreur systmatique (biais) proportionnelle 9
La pente calcule b
obs
, qui prend en compte la concentration de la solution titre utilise, ne 10
s'carte pas de plus de 0,3 pour cent (dtermination potentiomtrique) ou 0,5 pour cent 11
(dtermination visuelle) de la valeur thorique b
theor
donne comme constante de titrage. On 12
calcule 13
b
obs
b
theor
b
theor

100 14
o b
theor
=
Z
M
r
C
r
, 15
M
r
tant la masse molculaire relative, Z le facteur stchiomtrique de la raction chimique 16
et C
r
la concentration molaire du ractif titrant. 17
Critre 2 : erreur systmatique (biais) additionnelle 18
L'ordonne l'origine a
obs
obtenue par extrapolation est infrieure 0,4 pour cent 19
(dtermination potentiomtrique) ou 0,6 pour cent (dtermination visuelle) du volume de 20
titrage attendu ou volume de titrage cible. Il arrive que ce critre ne soit pas satisfait lorsque 21
le titrage a t effectu trop rapidement (dtermination potentiomtrique) ou que l'indicateur 22
utilis n'tait pas appropri (dtermination visuelle). On calcule 23
a
obs
V
T

100 24
o a
obs
est l'ordonne l'origine de la droite de rgression extrapole et V
T
le volume de 25
titrage attendu ou volume de titrage cible. 26
Critre 3 : fidlit (erreur statistique) 27
L'cart type estim rsiduel sdv(V) est infrieur 0,3 pour cent (dterminations 28
potentiomtriques) ou 0,5 pour cent (dterminations visuelles) du volume moyen consomm 29
au point final lorsque l'on utilise la procdure de titrage introduire dans la monographie. On 30
calcule 31
sdv(V)
V
T

100 32
o sdv(V) est l'cart type estim 33
sdv(V) =
Sdd
n 2
34
avec 35
e
Sdd = (V
i
a
obs
b
obs
m
i
)
2
1
V
i
tant le volume de titrage, m
i
la masse de la prise d'essai et n le nombre de titrages 2
effectus. 3
Critre 4 : erreur relative pratique 4
Il peut arriver qu'une procdure de titrage ne satisfasse pas aux critres 1 et 2, mais prsente 5
un biais faible, acceptable, au volume de titrage cible (8 1 ml pour une burette de 10 ml). 6
Dans ce cas, les critres 1 et/ou 2 ci-dessus n'tant pas satisfaits, calculez l'exactitude relative 7
au volume de titrage cible. 8
a
obs
V
T
+
b
obs
b
theor
b
theor

100
Lorsque la procdure de titrage est bien tablie, toutefois, il suffit de vrifier que la 9
rptabilit et l'exactitude du titrage (6 rplications au minimum) ne sont pas suprieures aux 10
limites indiques dans le tableau et dans l'arbre de dcision ci-dessous. 11
12
TYPE DE TITRAGE LIMITES DE
TENEUR
(POUR CENT)
REPETABILITE
(ETR)
EXACTITUDE
RELATIVE
(POUR CENT)
Acido-basique 1,0 0,33 0,67
Milieu non aqueux 1,0 0,33 0,67
Acide conjugu de la
base
1,0 0,33 0,67
Redox 1.5 0,5 1,0
Argentomtrique 1,5 0,5 1,0
Complexomtrique 2,0 0,67 1,33
Les valeurs indiques dans le tableau sont donnes titre de guide et il peut parfois tre 13
dmontr que des limites plus strictes sont applicables. L'emploi d'un titrage volumtrique 14
n'est envisageable que lorsqu'il a t dmontr que la teneur en impurets est faible ; dans le 15
cas contraire, il convient de recourir d'autres mthodes de dosage. 16

GUIDE TECHNIQUE, 4
e
ARBRE DE DECISION POUR LA VALIDATION DES TITRAGES VOLUMETRIQUES 1
Rptabilit ETR (n = 6) 2
Exactitude relative =

theor
theor
3

OUI
ETR < 0,33

OUI
x < 0, 67 99,0 101,0

N
O
N

OUI OUI
ETR < 0,50 x < 1, 0 98,5 101,5

N
O
N

OUI OUI
ETR < 0,67 x < 1, 33 98,0 102,0

N
O
N

AUTRE
METHODE
D'ESSAI

4

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