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eb Ils Leur sont utilisation lusage ne exclusif doit donner des tudiants lieu aucune en dehors exploitation de toute commerciale exploitation commerciales D. LOCKER Professeur D. LOCKER des Universits Spcialit: PR Gntique Universit GntiquedOrlans Orlans UFR/Facult des Sciences

La gntique des bactriophages

Structure des phages du type T4

Le cycle cycle du du phage phage T4 T4 Le


X 21 600 Avant linfection

4 aprs linfection

10 aprs linfection

14 aprs linfection

30 aprs linfection

Comment voir voir les les phages phages ? ? Comment

Diffrentesmorphologies morphologiesdes desplages plagesde de Diffrentes lyseformes formespar parle lephage phageT4 T4 lyse

h+r+ = plage trouble; petite h r+ = plage claire ; petite h+r = plage trouble ; grande hr = plage claire ; grande

Gntique des des phages phages Gntique


Il existe des souches mutantes de phages. Les principales mutations affectent: - la dpendance de la croissance vis vis de la temprature (mutant conditionnel) - La morphologie des plages de lyse. La dpendance de la croissance vis vis dune souche bactrienne. Les mutations peuvent tre cartographies grce des infections mixtes des bactries. Il faut utiliser une multiplicit dinfection leve. Consquence: les bactries sont infectes par de nombreux phages. La cartographie est faite comme chez les eucaryotes :

Phages recombins distance = x 100 total phages

Exempledun duncroisement croisementdeux deuxpoints pointschez chezle lephage phage Exemple

La Gntique Bactrienne

Les bactries

Elles sont partout (arobies, anarobies) Taille: 1m (levure 10 humaine 100

m)

m, cellule

Culture facile et conomique

La bactrie E. coli

Le gnome dE. coli

Circulaire 4x106 paires de bases (4000kb, 4Mb) ~4000 gnes Densit ~90% de rgions codantes

Les Plasmides

Circulaires (4000-100,000pb) Replication autonome Prsence de gnes de rsistance aux antibiotiques

Quelques exemples de phnotypes bactriens


Phnotypes: croissance morphologie des colonies Rsistance aux virus Rsistance aux antibiotiques
Milieu slectif: absence dun nutriment prsence dun antibiotique prsence de virus

Caractristiques de la croissance bactrienne Prototrophe = apte crotre sur un milieu minimum Auxotrophe = apte crotre sur un milieu supplment par des substances non requises pour la croissance du sauvage

Tonr mutants = resistant to T1 phage

La recombinaison chez les bactries Comment les gnes sont ils organiss chez les bactries? Y-a-t-il un chromosome ? De la liaison?

Exprience de Lederberg et Tatum (1946):

Les rsultats montrent lchange dinformation entre les bactries

B. Davis (1950) Lchange ncessite le contact physique entre les bactries

Le filtre tablit une barrire entre les bactries

W. Hayes (1953): Le transfert linformation est unidirectionnel

de

Il y a des diffrences physiques entre donneur et rcepteur


donneur

pilus

rcepteur

Le facteur F
Bactrie F+ = donatrice Bactrie F- = rceptrice Les bactries donatrices contiennent le facteur F qui confre le statut de donneur
Le facteur F est rpliqu et transfr la rceptrice Le facteur F dcide du transfert notamment par la formation du pilus

(transfert)

tra gnes

IS3

IS2 IS3

The F plasmid 100kb

oriT (origine du transfert) rep gnes et oriV

(rplication)

Le transfert du facteur F

Dcouverte des Hfr (1950-1953)


Hayes dcouvre des souches qui transfrent haute frquence les marqueurs gntiques (plus que les F+) Ces souches transfrent seulement certains gnes haute frquence (1000x) Ces souches ne transfrent pas le statut de donneur aux rceptrices

Origine des Hfr : intgration du facteur F dans le chromosome

Hfr

Transfert dinformation par lHfr

Les expriences de conjugaison interrompue

La conjugaison interrompue
Croisement: Hfr thr+strSaziRtonRgal+lac+ x F-thr-strRaziStonSgal-lac-

Str dans la bote

Les expriences de conjugaison interrompue

Milieu slectif: Hfr strs et F- strr sont utilises Les exconjugants sont tals sur streptomycine et un milieu minimum pour slectionner un auxotrophe particulier Les donneurs sont tus par la streptomycine et seuls les recombinants dun type particulier survivent

Transfert des gnes: Les gnes les plus proches de lorigine sont transfrs en premier Les gnes les plus loigns ne sont transfrs qu une petite partie de la population

Les lignes F et le phnomne de sexduction

Lac+

Lac+ Sortie normale du F du chromosome FLac Lac+ Lac+

Mauvaise sortie du F du chromosome

La sexduction Exemple des tests de dominance/rcessivit

Lac+ F Lac+ Sms FLac F-LacSmr

Lac-

Etalement des exconjuguants en prsence de streptomycine tude de la possibilit dutilisation du lactose comme seule source de carbone

Un autre autre type type danalyse danalyse gntique: gntique: Un la transformation transformation bactrienne bactrienne la

Heteroduplex DNA

La transduction transduction gnralise gnralise La

La transduction transduction spcialise: spcialise: La Un autre autre moyen moyen dobtenir dobtenir une une Un bactrie partiellement partiellement diplode diplode bactrie

cycle du phage

Sortie normale du chromosome

Mauvaise sortie du chromosome

Consquences de la transduction spcialise: Obtention dun diplode partiel Possibilit de faire un test de complmentation Possibilit de tester dominance/rcessivit