Apuntes de Bioensayos.

1.- INTRODUCCIN Y PRINCIPIOS GENERA ES. Caractersticas generales del curso 1.1.1. Propsito y entrega de temario y calendario de prcticas de laboratorio. 1.2. Conceptos Bsicos. !ue es un Bioensayo"" Un bioensayo es el uso de un organismos VIVO como un agente de prueba para la presencia o concentracin de un compuesto qumico o un efecto ambiental. 1.2.1. Diseo Experimental. Un experimento es una investigacin planeada para descubrir nuevos hechos o para confirmar En un o negar los resultados se de investigaciones previas. experimento manipulan

deliberadamente una o m s variables independientes !supuestas causas" para anali#ar las consecuencias que la manipulacin tiene sobre una o m s variables dependientes !supuestos efecto"$ dentro de condiciones controladas por el investigador. El dise%o experimental$ es el proceso de planeamiento de un experimento$ tal que se tomen datos apropiados con la mayor realidad posible$ los cuales deben ser anali#ados mediante m&todos estadsticos que deriven conclusiones v lidas y ob'etivas. (odemos decir que la filosofa del dise%o experimental es la obtencin de informacin con una alta fidelidad sobre el mensa'e de la naturale#a a un costo mnimo. )os dise%os experimentales deben tener algunas caractersticas como*

1. Si#p$i%idad. )a seleccin de los tratamientos y la disposicin experimental deber hacerse de la forma m s simple posible. &. G'ado de p'e%isi(n. El experimento deber tener la

capacidad de medir diferencias entre tratamientos con los grados de precisin que desee el investigador. (ara cumplir con este propsito se deber partir de un dise%o y un n+mero de repeticiones adecuados. ). Ausen%ia de e''o' siste#*ti%o. ,e debe planear un experimento con el que de propsito reciban aquellas de un que asegurar reciben que otro las no unidades difieran experimentales sistem ticamente tratamiento

tratamiento$

procurando de esta manera obtener una estimacin insesgada del efecto de tratamientos. +. Ran,o de -a$ide. de $as %on%$usiones. Este deber ser tan amplio como sea posible. )os experimentos que contribuyen a aumentar el rango de valide# del experimento son los experimentos replicados y los experimentos con estructuras factoriales. /. C*$%u$o de$ ,'ado de in%e'tidu#0'e. En todo experimento existe alg+n grado de incertidumbre en cuanto a la validacin de las conclusiones. El experimento deber debido +nicamente al a#ar. ser concebido de modo que sea posible calcular la probabilidad de obtener los resultados observados

1.2.2. Organismo de Prueba. )a eleccin de un organismo de prueba adecuado para un -ioensayo depende del efecto que se desea evaluar y de las caractersticas del organismo$ por e'emplo$ un canario es un organismo adecuado de un bioensayo para detectar gases txicos o falta de oxgeno en una mina$ porque se tiene el antecedente de su uso para estos fines$ los mineros entraban con un canario y si el

canario mora$ por ser mas sensible$ ellos tenan la oportunidad de salir y no correr la misma suerte. Otros e'emplos de organismos de prueba son$ el uso de cerdos para detectar y colectar trufas$ perros para detectar explosivos y drogas$ gametos de eri#o de mar para detectar eco toxicidad en agua de mar$ Euglena gracilis para detectar niveles de vitamina -./. )o anterior es +til para asegurarse que la respuesta de una poblacin expuesta a cierto agente txico se deba al efecto de &ste y no a variaciones tanto de la sensibilidad de los organismos como de fallas operacionales en la aplicacin del m&todo. )os Organismos de prueba pueden ser* Organismos criados en )aboratorio Organismos colectados en campo.

En general$ es preferible utili#ar organismos criados en el laboratorio en ve# de los recolectados en el campo porque los ex menes estandari#ados requieren de un abastecimiento siempre disponible de organismos en buena salud provenientes de cultivos de condiciones conocidas y constantes. )os bioensayos hechos en el laboratorio usando organismos recolectados en el campo han sido menos satisfactorios$ est con muy pocas excepciones. )os organismos recolectados en el campo son m s satisfactorios cuando el laboratorio cerca al lugar de recoleccin y el abastecimiento de agua desde siempre disponible$ como es el caso de nuestro curso que all est

cuenta con un laboratorio que provee esas condiciones.

1.2.3. Material de Prueba. 0ualquier ob'eto org nico o inorg nico donde se van a aplicar los dise%os experimentales con el fin de observar una respuesta$ 0ompuestos qumicos$ extractos$ fuente de compuestos o materia que pueden generar una respuesta biolgica en los organismos de un ecosistema. (uede ser material de prueba$ el sedimento marino$ pesticidas$ materia org nica 1.2.3. plicacin del anlisis Estad!stico. En esta etapa se selecciona la!s" variable!s" respuesta!s" o variable !s" dependiente!s". El experimentador debe estar seguro que la respuesta que se va a medir realmente provee informacin +til acerca de la investigacin. 0ada respuesta medible$ est representada matem ticamente en un modelo lineal. )a idea general de un modelo es expresar las observaciones generalmente denotadas por $ en t&rminos de

1efectos22 que contribuyen a de Error.

. Esos efectos se pueden clasificar en

tres categoras* Efectos de 3ratamiento$ Efectos de 4ise%o y Efectos

)os efectos de tratamientos1 son un refle'o del efecto de dise%o como tambi&n de los tratamientos simples o combinaciones de factores. )os efectos de diseo1 son determinados por el dise%o de control de error$ en particular$ efectos debidos a las varias clases de bloqueo. )os efectos de error1 representan diferentes clases de variacin aleatoria. Estos son* !." el error experimental y !/" el error observacional.

E''o'

E2pe'i#enta$.

Una

caracterstica

de

todo

material

experimental es la variacin. 5sociada con la unidad experimental est el error experimental$ este error es el refle'o de que las UE no son iguales. 3ambi&n podemos decir que es una medida de la variacin existente entre las respuestas de las UE tratadas en forma similar. 0ontribuyendo al error experimental est n* a3 El error de tratamiento$ el cual resulta de cualquier falta de uniformidad en la reali#acin fsica del experimento o en la replicacin de un tratamiento. (or e'emplo$ si se van a administrar /6 ppm de cierta sustancia$ administramos .7 /. ppm. 03 El error de estado.o variabilidad inherente al material al cual se aplican los tratamientos$ el cual es debido a los cambios aleatorios en el estado fsico de una UE. (or e'emplo$ en un experimento de nutricin con camarones como material experimental$ los individuos tendr n constitucin gen&tica diferente$ &sta es una variabilidad inherente al material experimental o error de estado. )as camarones se colocar n en 'aulas su'etas a diferencias de calor$ lu# y otros factores8 esto constituye una falta de uniformidad en la reali#acin fsica del experimento o error de tratamiento. 5l hacer inferencia estadstica$ ya sea por intervalos de confian#a o pruebas de hiptesis$ la magnitud del intervalo de confian#a y el poder de la prueba estadstica dependen en definitiva del estimador de la varian#a del error experimental$ llamado %uad'ado #edio de$ e''o'1 . 5s que para obtener intervalos cortos o alto poder la prueba se debe hacer todo esfuer#o posible para reducir el error experimental. (ara lograr lo anterior debemos*

4ane5a' e$ #ate'ia$ e2pe'i#enta$ de tal manera que se logre reducir los efectos debido a la variabilidad inherente. Re6ina' $a t7%ni%a e2pe'i#enta$ . Es responsabilidad del experimentador que se haga todo lo posible para asegurar una t&cnica cuidadosa porque ning+n tipo de an lisis estadstico puede me'orar los datos obtenidos de experimentos mal efectuados. )a t&cnica defectuosa puede aumentar el error experimental de dos maneras* i3 (uede introducir fluctuaciones adicionales de una naturale#a m s o menos aleatoria y$ posiblemente$ su'etas a las leyes del a#ar. 3ales fluctuaciones$ si son grandes$ deber n revelarse por s mismas en la estimacin del error experimental$ posiblemente mediante la observacin del coeficiente de variacin . Este es una medida de variacin relativa y es utili#ado para comparar la precisin de dos experimentos o de dos medidas. ii3 9ediante errores no aleatorios. :stos no est n su'etos a las leyes del a#ar y no siempre pueden detectarse mediante la observacin de las medidas individuales. ,e dispone de pruebas estadsticas para detectarlo. )a t&cnica defectuosa tambi&n puede producir medidas

consistentemente sesgadas$ lo que no afecta el error experimental en las diferencias entre las medias de tratamientos$ pero s a los valores de las medias de tratamientos. En general la variacin proveniente de una t&cnica deficiente no es aleatoria y no est su'eta a las leyes del a#ar$ en la cuales se basa la inferencia estadstica. Esta variacin puede denominarse inexacitud$ en contraste con la falta de precisin. 4esafortunadamente$ la exactitud en la t&cnica no siempre produce alta precisin ya que &sta tambi&n tiene que ver con la variabilidad aleatoria entre las unidades experimentales$ la cual puede ser bastante grande.

El error experimental no puede detectar sesgos8 estima la precisin o la repetibilidad de las medidas$ pero no estima la exactitud. E''o' O0se'-a%iona$. ,e considera como parte del error observacional e$ e''o' de #edida$ es decir$ el error debido a la imprecisin de la medida o procedimiento de deteccin !aparatos" y e$ e''o' de #uest'eo debido a la seleccin de las UE para la investigacin. 1.3. Panormica de la Aplicacin del Bioensayo en problemas relacionados con la bioprospeccin en el medio marino. )a evaluacin de sustancias bioactivas o de condiciones

ecotxicas requiere de la medicin de una multiplicidad de par metros que se deben de tomar de manera y en cantidad suficiente para que permitan extraer conclusiones a trav&s de un an lisis estadstico correcto. 5 pesar de que en el mar viven unas ;66$666 especies lo que representa casi el <;= del total de especies del planeta$ el n+mero de sustancias bioactivas$ conocidas$ de origen terrestres superan considerablemente a las de origen marino. Esta diferencia se puede deber a que el medio marino es mucho mas homog&neo que el ambiente terrestre$ principalmente en factores como la disposicin de lu#$ nutrientes y temperatura$ sus variaciones no son tan dr sticas y probable la necesidad de generar sustancias para afrontar adversidades y competencia es menor en el medio marino. 3ambi&n es probable que el potencial de sustancias bioactivas del medio marino se encuentre subevaluado debido principalmente a la dificultad de acceso al medio marino$ lo que se ha ido solucionando con los avances en t&cnicas de buceo y de inmersin submarina. )a gran variedad de organismos que habitan en mares y oc&anos y las posibles propiedades farmacolgicas y m&dicas de sus extractos$ hacen del medio marino una fuente potencial de f rmacos y un campo abierto a la investigacin en farmacognoscia marina !4E )5>5?I,5,,I

et al.$ .7@7". 5 pesar de que en cantidad la lista de sustancias de origen marino es menor a las de origen terrestre$ en calidad hay muchos e'emplos de sustancias8 la saliva que el pulpo emplea para inmovili#ar cangre'os contiene un poderoso estimulante cardiaco llamado ;?A3$ )as microalgas generan toxinas muy potentes$ el fluido corporal del cangre'o cacerola inhiben el crecimiento de bacterias coliformes$ experimentacin exploratoria en este mismo curso de -ioensayos ha demostrado que la tinta del Invertebrado conocido como 1VaquitaB Aplysia californica inhibe significativamente el crecimiento de bacterias coliformes$ las espon'as producen Ectionina que es un antibitico de amplio espectro$ la holoturina de los pepinos de mar es un bloqueador nervioso. 5dem s de los organismos marinos$ en general el agua de mar es un suero biolgico que adem s de contener sales disueltas contiene una gran cantidad y variedad de materia org nica entre esta materia se encuentran disueltas hormonas$ en#imas$ toxinas y esteroides principalmente$ lo que hace del agua de mar un medio que inhibe y promueve reacciones bioqumicas. &. BIO8TICA ,eg+n la Encyclopedia of -ioethics !Cueva DorE .7<@$ vol. I$ p. FIF" la bio&tica es el Gestudio sistem tico de las ciencias de la vida y del cuidado de la salud$ examinada a la lu# de los valores y de los principios moralesG. "...una primera aproximacin -que podramos llamar perifrica- a la biotica, como conjunto de temas atravesado por el cuestionamiento a la idea del avance tecnocientfico como progreso lineal de la humanidad. Esta forma de hacer biotica es m s bien terica ! se inscribe en la visin crtica de la ciencia ! la tcnica.". (rincipalmente la bio&tica trata por medio de la aplicacin de la ciencia y la tecnologa buscar una me'or vida en sociedad y de me'orar

la calidad de vida humana. Esta disciplina esta conformada por la interaccin de varias ciencias por lo que se fundamenta en la experimentacin con seres vivos. ,e puede decir que en si$ esta ciencia trata de 'ustificar la investigacin en animales. Existen distintas agrupaciones humanas que recha#an la idea de experimentar en animales$ ya que estos +ltimos tienen el mismo derecho a la vida que un ser humano8 pero tambi&n hay algunos movimientos humanos que la apoyan y mantienen de esta manera a los laboratorios. 2.1. Utilidad del uso de los bioensayos en la investigacin biom dica y ambiental pros y contras. PROS )a utilidad de los bioensayos recae primordialmente en ser un m&todo de deteccin relativamente simple y que se puede emplear para el monitoreo de causas y sus efectos de tipo ambiental y en farmacologa. En un organismo$ especial$ la respuesta biolgica !efecto" se puede generar a concentraciones menores a los lmites de deteccin de los principales m&todos analticos y aunque$ un m&todo analtico sea lo suficientemente fino para evaluar un nivel o concentracin de compuesto o causa de da%o$ sus datos no nos indican el efecto biolgico al ecosistema o al organismo de prueba los cuales se pueden observar en los organismos aun cuando la exposicin a los compuestos o causas ha finali#ado. )a deteccin de efectos en organismos se puede emplear para monitoreo lo que es muy +til para Inspeccin o vigilancia antes y despu&s de un evento o dosificacin de alg+n compuesto. Vigilar la efectividad de un proceso de remediacin o biorremediacin.

Vigilancia para asegurar el cumplimiento de par metros estatales y federales de calidad ambiental.

Estas acciones se pueden aplicar en* 3oma de decisiones de corporativos industriales yHo compa%as biom&dicas en el desarrollo$ manufactura y comerciali#acin de nuevos productos. 0umplir requisitos de regulacin para registrar nuevos productos o procesos. Obtener permisos de descarga. Evaluacin de riesgo ambiental. Elementos de cargo o descargo en litigios. Iuente de datos de calidad del medio ambiente para proteger organismos de futuras afectaciones. CONTRAS. )a principal desventa'a de un bioensayo es que sus resultados$ difcilmente$ generan informacin especifica de un compuesto$ causa o condicin ambiental. 4urante el desarrollo de los bioensayos los organismos de prueba son sometidos a diferentes condiciones experimentales en las cuales se incluye la muerte del organismo como un efecto normal y el problema es que las causas de este efecto pueden ser muchas y difciles de detectar por medio de un -ioensayo como para decir que en este proceso$ organismo. En evaluacin ambiental$ la presencia o sobre vivencia de una especie u organismo en un medio ambiente nos indica que este ecosistema le provee lo necesario para solventar sus necesidades$ (E>O la ausencia de un organismo en un ecosistema CO vali la pena el sacrificio del

necesariamente significa lo contrario o sea que el ecosistema no le provea lo necesario. 2.2. 2.3. !l "erec#o de los animales a no ser usados en la investigacin Biom dica. $ !l "erec#o del #ombre a utili%ar organismos para e&perimentacin. )a 5sociacin 9&dica 9undial afirma que el uso de animales en la investigacin biom&dica es esencial para el progreso m&dico$ y a pesar que se dice que en la experimentacin con animales deben de cumplirse las normas que rigen el trato compasivo de los animales$ esto no se cumple o de la misma manera sigue afectando al organismo. Da que al estar experimentando con animales y producir alguna lesin es un proceso traum tico aunque se utilicen anest&sicos ya que al terminar el efecto les producen dolor y se ven afectados en la disminucin de peso. 5s mismo$ el impacto de estr&s sobre los mecanismos fisiolgicos se ha estado anali#ando al igual que el miedo$ que tan solo con sentir el acercamiento del hombre les causa miedo$ una posible solucin sera tener un mayor acercamiento a los organismos para que mitiguen el miedo ante la presencia humana. ,e conoce que la bio&tica tiene por ob'eto material los actos humanos que suponen una intervencin sobre la vida !no slo humana sino tambi&n animal y vegetal" para considerarlos ba'o el punto de vista formal de la &tica$ a saber$ conocer si son buenos o malos para guiar su obrar. (uesto que el n+mero de animales que padece sufrimiento por su empleo en la investigacin representa un ba'o porcenta'e de las muertes animales por actividades humanas causadas por pesticidas$ deforestacin$ construccin civil$ maltrato$ entre otras$ el sacrificio animal dirigido a la investigacin cientfica es solo una peque%a parte de las perdidas comparadas a las actividades humanas. )o cual pudiese fundamentar el derecho de los humanos a usar animalitos u otros seres vivos.

2.'. (tras alternativas al uso de animales en e&perimentacin biom dica y en la ense)an%a en la carrera de oceanologa. )a creciente sensibilidad respecto a la experimentacin en animales en investigacin biom&dica y la ense%an#a de las ciencias naturales$ y la b+squeda de enfoques nuevos en los aspectos pr cticos de la misma son parte de un debate actual y$ probablemente$ necesario. )a utili#acin de animales de experimentacin en investigacin -iom&dica y en la ense%an#a de las pr cticas de diferentes y en especial en nuestra asignaturas de las 0iencias naturales

Iacultad en las pr cticas de Iisiologa$ -ioqumica$ Joologa$ Kumica Org nica$ 5provechamiento de (roductos 9arinos$ 5cuacultura y por supuesto en -IOEC,5DO, ha venido siendo la metodologa m s empleada por todos los profesores de estas disciplinas. Lracias a la utili#acin de estos animales$ los estudiantes han podido ver de cerca los diferentes fenmenos que se les haban explicado anteriormente en la clase de teora. -IOEC,5DO,$ En la mayora de los casos$ excepto en son pr cticas cruentas donde varios animales son

sacrificados y adem s en la mayora el fin did ctico no se cumple y el estudiante se convierte. en un simple espectador. Es obvio que &ste era el +nico m&todo del que disponan los profesores hace unos a%os para ense%ar. (ero en los +ltimos a%os las cosas han cambiado y el avance de la inform tica y de las tecnologas de la imagen ha permitido el desarrollo de numerosas alternativas que no requieren el uso de estos animales para lograr los ob'etivos docentes que nos planteamos con las pr cticas. El n+mero de animales utili#ados con fines educativos es relativamente peque%o comparado con el n+mero total de animales utili#ados en investigacin y se ha venido reduciendo en los +ltimos a%os$ pero a pesar de ello todava se puede reducir m s. En el artculo

/; de la 0onvencin Europea para la (roteccin de los 5nimales Vertebrados utili#ados en Experimentacin y otros Iines 0ientficos se especifica* "aquellos procedimientos llevados a cabo con fines educativos o de entrenamiento se deben restringir a los absolutamente necesarios para los fines relativos a la enseanza y el entrenamiento y se permitirn nicamente si sus objetivos no pueden ser conseguidos por mtodos audiovisuales u otros que sean suficientemente efectivos" En las legislaciones relacionadas con la proteccin de los animales de todos los pases se considera fundamental aplicar el principio de las M>s$ promulgado por >ussell y -urch en .7;7 !.". Este principio nos indica la necesidad de >eempla#ar los animales de experimentacin por otros m&todos$ siempre que sea posible y que el nuevo m&todo nos aporte el mismo grado de informacin. En el caso de la docencia e investigacin se plantea el reempla#o de los animales de experimentacin por otros m&todos. Entre los m&todos propuestos se pueden citar* a" modelos$ maniques y simuladores mec nicos8 b" pelculas y vdeos8 c" simulaciones de computadora y sistemas de realidad virtual8 d" autoexperimentacin en el propio individuo8 e" experimentos con plantas8 f" uso de material procedente de mataderos8 g" estudios in vitro con lneas celulares y h" aprovechamiento de animales muertos de forma natural o utili#ados despu&s de un procedimiento cientfico. ). RESPUESTA BIO GICA A AS SUSTANCIAS BIOACTI9AS 3.1. Composicin membranas. )a membrana celular est constituida de lpidos y protenas. )a formada por una pelcula y propiedades *isico+umicas de las

parte lipdica de la membrana est

bimolecular que le da estructura y constituye una barrera que impide el paso de substancias hidrosolubles.

)as protenas de la membrana est n suspendidas en forma individual o en grupos dentro de la estructura lipdica$ formando los canales por los cuales entran a las c&lulas$ en forma selectiva$ ciertas substancias. )a selectividad de los canales de protenas le permite a la c&lula controlar la salida y entrada de substancias as como los transportes entre compartimentos celulares. )as protenas de la membrana no solo hacen que el transporte a trav&s de ella sea selectivo$ sino que tambi&n son capaces de llevar a cabo transporte activo !transferencia en contra del gradiente de concentracin". )as dem s funciones de la membrana$ como son el

reconocimiento y unin de determinadas substancias en la superficies celular est n determinadas tambi&n por la parte proteica de la membrana. 5 estas protenas se les llaman receptores celulares. )os receptores est n conectados a sistemas internos que solo act+an cuando la substancia se une a la superficie de la membrana. 9ediante este mecanismo act+an muchos de los controles de las c&lulas$ algunos caminos metablicos no entran en accin a menos que la

mol&cula Gse%alG$ por e'emplo$ una hormona$ haya llegado a la superficie celular. En la membrana se locali#an unas glicoprotenas que identifican a otras c&lulas como integrantes de un individuo o como extra%as !inmunoreaccin". )as interacciones entre las c&lulas que conforman un te'ido est n basadas en las protenas de las membranas. >esumiendo$ la estructura de las membranas depende de los lpidos y las funciones dependen de las protenas. 3.2. Procesos de entrada de sustancias a trav s de membranas 5bsorcin )a absorcin de un Fenobitico se define como el proceso por medio del cual &ste atraviesa membranas y capas de c&lulas hasta llegar al torrente sanguneo. El mecanismo de ingreso del xenobitico al organismo usa los mismos mecanismos de transporte dise%ados para movili#ar compuestos de estructura similar. )os principales mecanismos de transporte son los siguientes*

Di6usi(n si#p$e :Pasi-o3. 4epende de la existencia de un gradiente positivo de concentracin. )a difusibilidad de una substancia a trav&s de las membranas biolgicas depende de sus propiedades fsicoqumicas$ las substancias polares de ba'o peso molecular !hasta N66 daltons" pasan a trav&s de los poros acuosos de las membranas$ mientras que$ las mol&culas hidrfobas se difunden a trav&s de las #onas lipdicas. En general$ los lpidos penetran m s f cilmente las membranas que las mol&culas ioni#adas. 5 trav&s de los poros

acuosos o canales de peque%o tama%o pueden pasar de modo pasivo los compuestos hidrfilos$ iones y electrlitos !(9 menor .66" )a difusin simple es el mecanismo de difusin pasiva se basa en la ley de IicE
dX DmAKmw(Cf Ci ) = dt d

transporte m s

importante en la absorcin de los Fenobiticos. )a velocidad de

4onde* 4m* 0oeficiente de difusin del Fenobitico en la membrana !cm/Hmin" 5* ,uperficie de la membrana !cm/" OmP* 0oeficiente de particin del Fenobitico en la interfase agua? membrana. 0f* 0oncentracin del xenobitico fuera de la membrana 0i* 0oncentracin del xenobitico en el interior de la membrana d* Lrosor de la membrana en cm.

http*HHPPP.d.umn.eduHQsdoPningH9embranesHdiffusion.html

3ransporte activo.? El t'anspo'te a%ti-o1 $a endo%itosis o $a di6usi(n #ediada po' un t'anspo'tado' son los mecanismos por los cuales se difunden los compuestos de peso molecular grande !sean polares o liposolubles" y los que se transportan en contra del gradiente de concentracin. >equieren de un transportador y se consume energia !53(". 0in&tica Extracelular 9emb Intracelular
v3 X '+ P X + P XP
V1 V2

El Fenobitico fuera de la membrana se absorbe y enla#a al portador 1(Ba una velocidad V. para formar el comple'o F($ la velocidad V/ es la velocidad de desorcin a la cual el xenobitico se separa de ( y permanece fuera de la c&lula.

V 1 [ F][ P ] V. = O.[ F][ P ] V 2 En el equilibrio V 1 = V 2 O.[ F][ P ] = K 2[ XP ] .

[ F(]

V/ = K 2[ XP ]

[ F][ P ] = K 2 = Kt [ XP ] O.

0onstante de 3ransporte

[ X ' ][ XP ] V 3 =K 3[ XP ] /

)a concentracin intracelular del Fenobitico es directamente proporcional a la concentracin del comple'o Fenobitico?(ortador.

,i

[ Pt ] = [ P ] + [ XP ]
de +

entoces [ P ] = [ Pt ] [ XP ]

[ X ][[ Pt ] [ XP ]] = Kt [ XP ]

XPt-XPX = Kt MP

XPt-XPX = KtXP XPt = KtXP + XPX XPt = XP ( Kt + X ) de * V 3 = K 3[ XP ] El trasn!orte m#imo se d cuando todos los !ortadores estan enlazados con el #eno)itico cuando 'MP( = Pt entonces la Vma# = K 3[ Pt ] V% Vma# V% K 3[ XP ] V% [ XP ] sustituimos en $%& = = Vma# K 3[ Pt ] Vma# [ Pt ] si se divide V% = V max X Kt + X Esta ecuacin nos revela la cin"tica de trasn!orte activo si ue la ecuacin de Michaelis - Menten El Portador es de naturaleza enzimtica X XP = Kt + X Pt 3

X XP = Kt + X Pt

V% X = Vma# Kt + X

)a Endocitosis Existen dos formas la Iagocitosis proceso y activo la por (inocitosis$ se trata de un e'emplo la asimilacin de vitaminas a$ d$ y c

Difusin Facilitada

,e reali#a a favor de un gradiente de concentracin

Cecesita un portador Co consume energia

3.3 ,actores in#erentes a los principios activos +ue in*luyen en el e*ecto *armacolgico. )as propiedades fisicoqumicas de los Fenobioticos (eque%o radio atmico o molecular Lrado de ioni#acin 0oeficiente de particin (Ea 3ama%o )ipofilicidad ,olubilidad En general pasan mas f cilmente mol&culas de ba'o peso molecular$ neutras y lipoflicas. )a absortividad de cidos y bases d&biles depende de su estado

de ioni#acin y por lo tanto del pA y (Ea. ,e transportan m s f cilmente las formas no disociadas. )a cantidad absorbida depende de

la velocidad de absorcin y del tiempo de residencia del agente en la superficie de transporte. 3.'. ,actores in#erentes a los organismos +ue in*luyen en el e*ecto *armacolgico. 0uando el txico se ingiere$ entra al 3racto Lastro Intestinal !3LI"$ la mayor cantidad se absorbe en el estmago y en los intestinos aunque tambi&n puede haber absorcin en cualquier lugar del 3LI$ incluyendo las absorciones sublingual y rectal. El sitio de absorcin depende en parte del estado de ioni#acin del compuesto. )os cidos d&biles es m s probable que se absorban en el estmago$ donde hay un pA ba'o$ mientras que las bases d&biles$ que est n menos ioni#adas a pA alto$ se absorben me'or en el intestino donde existen estas condiciones. )a gran tengan rea de absorcin del intestino y los largos tiempos de considerables aunque el flux$ cantidad

residencia$ dependiendo de la movilidad intestinal$ permiten que se absorciones transportada por unidad de rea y de tiempo$ sea peque%o. )a absorcin de los xenobiticos usa los mismos mecanismos que tiene el 3LI para absorber los nutrimentos. (or e'emplo$ el plomo se absorbe en el intestino usando el sistema de transporte del calcio. (ara que un compuesto ingerido pueda alcan#ar la circulacin general$ accesar el resto del organismo y tener la posibilidad de causar un da%o$ debe primero ser capa# de resistir*

la accin de las en#imas digestivas$ el pA del estmago$ la biodegradacin por la flora intestinal. la biotransformacin por las en#imas hep ticas.

)a absortividad del txico ingerido depende de sus propiedades fsicoqumicas. 0omo se mencion antes$ los compuestos liposolubles de ba'o peso molecular y los compuestos no ioni#ados se absorben me'or. )os xenobiticos se pueden ligar reversiblemente a las protenas plasm ticas$ por medio de distintos tipos de uniones* interacciones hidrfobas$ puentes de hidrgeno y fuer#as de van der Raals. )a mol&cula de protena tiene un n+mero limitado de sitios donde se pueden ligar$ tanto los xenobiticos$ como los compuestos endgenos. 5s que$ un agente determinado tiene que competir con los dem s compuestos !xenobiticos yHo endgenos" por los sitios de unin disponibles. )a unin reversible del compuesto a las protenas impide la difusin simple pero no limita su transporte activo. 3.-. .odelos organismos. 3.".1. D#E. 5dsorbcin. 4istribucin -iotransformacin Eliminacin. 3.".2. DME 5dsorcin 4istribucin 9etabolismo Eliminacin +ue e&plican y la absorcin/ de distribucin/ por los

biotrans*ormacin

e&crecion

sustancias

)os

modelos de

54-E

549E en

representan un organismo

la y

cin&tica su

de

transferencia

xenobiticos

efecto

farmacolgico$ a traves del estudio de estos modelos se generan las terapias correspondientes para eliminar su efecto. )a interaccin din mica de todos los procesos que constituyen el 549E$ determina el tiempo que permanecer un agente dentro del organismo despu&s de que &ste ha sido expuesto a una dosis determinada. A$ estudio de $a -e$o%idad de %a#0io de $a %on%ent'a%i(n de $as espe%ies t(2i%as dent'o de$ o',anis#o se $e %ono%e %o#o to2i%o%in7ti%a. )as tasas de cambio que se presentan en cada fase del 549E se pueden modelar matem ticamente e integrarlas en un modelo que represente la din mica global del txico dentro del organismo. 0ada proceso$ sea este de cambio de lugar yHo de identidad qumica$ se puede representar por una ecuacin diferencial en la que la derivada de la concentracin con respecto al tiempo en un sitio determinado$ se expresa como una funcin de la concentracin en ese lugar. )a constante de proporcionalidad se denomina velocidad especfica y normalmente se representa por la letra GEG. !http*HHsuperfund.pharmacy.ari#ona.eduHtoxambHc/?M?;.html" (odemos representar al cuerpo por un modelo de un solo compartimiento que sigue una cin&tica de primer orden si se supone que se llega r pidamente al equilibrio en la interface sangre?te'ido. En este caso$ el cambio de concentracin en plasma refle'a el cambio de concentracin en los te'idos. Este modelo establece que la velocidad de eliminacin de un compuesto$ en un momento dado$ slo es proporcional a su concentracin. )a variable eliminacin incluye la expulsin del compuesto por todas las rutas de excrecin y la desaparicin por biotransformacin. )a cin&tica de primer orden se representa matem ticamente de la siguiente manera*

dC;dt < - =e$C donde C primer S concentracin orden plasm tica =e$ S constante de velocidad de eliminacin de t S tiempo al que se muestre la sangre. Este modelo indica que la velocidad global a la que procede el 549E de un compuesto es directamente proporcional a la concentracin y que la velocidad no vara linealmente con la dosis$ sino que su variacin es exponencial. )a velocidad de eliminacin es alta cuando la dosis es alta$ pero disminuye fuertemente a medida que la concentracin del txico disminuye. Vida media es el tiempo que tarda el organismo en reducir a la mitad la concentracin del txico. ,i un compuesto tiene una vida media de /T horas y su concentracin en un momento dado es T6 mgH)$ en un da se ba'ar la concentracin a /6 mgH)$ pero ba'ar esta concentracin otros /6 mgH) !bueno$ casi /6 mgH)$ digamos .7.@ mgH)" requerir de m s de N das. )a constante Eel se puede evaluar graficando la concentracin plasm tica contra el tiempo en escala semilogartmica. ,e obtiene una lnea recta con pendiente ? Eel. )a mayora de los compuestos siguen una cin&tica de primer orden$ pero no todos$ el alcohol etlico sigue una cin&tica de orden cero$ en la cual la velocidad de eliminacin es independiente de la concentracin y slo es funcin del tiempo. )a cin&tica de orden cero se presenta cuando se saturan las en#imas de un camino metablico. ,i la concentracin de un agente es muy alta$ se saturar n las en#imas

y su eliminacin mostrar una cin&tica de orden cero aparente$ aunque a concentraciones no saturantes presente una cin&tica de primer orden. (or el contrario$ los compuestos que normalmente se eliminan siguiendo una cin&tica de orden cero$ cuando las concentraciones son muy ba'as$ su eliminacin sigue una cin&tica de primer orden aparente. El modelo que representa la cin&tica de orden cero es*

dC;dt < >o 4onde* Eo es la constante de velocidad de orden cero$ 0 y t tienen el mismo significado que en la ecuacin anterior 0uando se tienen dosis repetidas el nivel del txico se aproxima a la concentracin de estado estacionario porque las velocidades de eliminacin y de absorcin son iguales. ,e necesitan aproximadamente ; vidas medias para alcan#ar el estado estacionario$ as que los compuestos que se eliminan muy lentamente tardan mucho en alcan#arlo. El c lculo de la concentracin en estado estacionario se hace con la siguiente ecuacin* C? < @D;tTs 4onde* 0U es la concentracin en el estado estacionario8 4 es la dosis8 I la biodisponibilidad o fraccin de la dosis absorbida8

3s es el tiempo de residencia en el organismo y t es el intervalo entre dosis.

3.0. Biotrans*ormacin. #iotrans$ormacin %ase & !http*HHsuperfund.pharmacy.ari#ona.eduHtoxambHc/?M?T?..html" )a Iase I es un con'unto de reacciones de oxidacin que preparan a los txicos para que puedan transformarse por las reacciones de la Iase II. Esto lo logran transformando los grupos funcionales del xenobitico en sitios que pueden llevar a cabo reacciones de la Iase II$ o bien introducen grupos nuevos que le dan esta caracterstica. (ara hacer este traba'o las c&lulas cuentan con dos sistemas de en#imas$ que tienen la funcin de introducir en el substrato un tomo de oxgeno proveniente del oxgeno molecular !oxigenasas de funcin mixta". Estos dos sistemas son las amino? oxigenasas y los 0itocromos (?T;6. 5mbos sistemas se encuentran locali#ados en el retculo endopl smico. )as amino?monoxigenasas oxidan aminas y compuestos sulfurados. )os diferentes$ 0itocromos una tiene (?T;6 est n formados por dos protenas una

funcin de reductasa y la otra es

hemoprotena con actividad de oxigenasa. )a oxigenasa es una protena$ que en estado reducido y monoxicarbonada$ presenta un pico de absorcin a T;6 nm. Kue es lo que le da el nombre a esta familia de en#imas". El mecanismo de la reaccin de la oxidacin del xenobitico catali#ada por citocromo (?T;6$ en t&rminos generales es como sigue* :A3 el xenobitico entra a su sitio activo que se encuentra en la oxigenasa$ :B3 la reductasa transfiere un electrn al hierro hem tico

reduci&dolo del nivel !III" a !II"$ de f&rrico a ferroso$ :C3 la reduccin abre el sitio activo del O/$ :D3 el O/ entra a su sitio activo y oxida al xenobitico que est en la superficie de la en#ima transfiri&ndole uno de los tomos de oxgeno. Existen varios 0itocromos (?T;6 que se diferencian en su especificidad$ por e'emplo$ el (?T;6 IIE oxida al etanol y el (?T;6 I5 oxida al alfa?ben#o?pireno. ,i la concentracin de oxgeno en la c&lula es muy ba'a$ entonces la reaccin catali#ada por el 0itocromo (?T;6 es una reduccin en la que el C54(A act+a como donador de iones hidruro. )as reacciones de reduccin m s comunes son la transformacin de nitroderivados arom ticos a aminas$ la a#oreduccin de aminas primarias y la deshalogenacin reductiva. )a reduccin puede dar lugar a la formacin de un radical libre m s txico que el xenobitico original$ capa# de producir da%os en el 54C. Esta biotransformacin es entonces una bioactivacin. (or e'emplo8 el tetracloruro de carbono sufre la deshalogenacin reductiva produciendo el radical libre triclorometilo.

Reacciones Comunes de Oxidacin en la Fase I.

Reacciones de Reduccin Catalizada por Citocromo P-45 .

Reacciones de !xposicin de "rupos Funcionales )os 0itocromos (?T;6 exponen grupos funcionales catali#ando reacciones de desalquilacin$ desaminacin y deshalogenacin . )as peroxidasas catali#an reacciones entre los xenobiticos y los perxidos

endgenos$ permitiendo$ al mismo tiempo$ que la c&lula oxide al xenobitico y se deshaga de estos compuestos endgenos altamente txicos. El producto de esta reaccin es un alcohol que puede ser destoxificado por una alcohol deshidrogenasa. #iotrans$ormacin %ase && )a -iotransformacin Iase II$ tal como se mencion

anteriormente$ consiste en reacciones de con'ugacin$ catali#adas por un con'unto de en#imas$ la mayora de ellas locali#adas en el citosol. )as reacciones consisten en agregar un grupo polar de tama%o relativamente grande a los productos de las reacciones de la Iase I o a los xenobiticos originales que contienen los grupos funcionales apropiados para ser substratos de las reacciones de con'ugacin. )os donadores de los grupos polares tienen que ser compuestos de alta energa$ ya que las reacciones de con'ugacin no son termodin micamente favorables. El resultado que se logra con estas reacciones es un gran incremento de la solubilidad en agua del xenobitico. G$u%u'onida%i(n.? )a reaccin consiste en agregar un grupo glucuronil en un grupo hidroxilo$ amino o sulfhidrilo del txico. )a en#ima que catali#a la reaccin es la U4( glucuronil transferasa y el donador del grupo polar es el cido U4( glucurnico. )a en#ima se encuentra locali#ada en el retculo endopl smico$ a diferencia de las otras en#imas de la Iase II que se locali#an en el citosol. )os compuestos glucuronidados son muy solubles en agua y aparecen en la orina y en la bilis. Existe un n+mero muy grande de xenobiticos que son substrato de esta en#ima. Su$6ata%i(n.? )a reaccin consiste en la transferencia de un grupo sulfato de (5(, !MV?fosfoadenosil?;V?fosfosulfato" a un grupo hidroxilo o amino en el xenobitico. )a reaccin es catali#ada por

sulfotransferasas$ en#imas solubles locali#adas en el citosol. El producto de la reaccin es un sulfato org nico ioni#ado$ muy soluble en agua que se excreta en la orina. A#inoa%ida%i(n.? )a reaccin consiste en la formacin de una unin peptdica entre el grupo amino de un amino cido$ normalmente glicina$ y un carboxilo en el xenobitico. Obviamente para que esta reaccin se pueda dar es indispensable que el xenobitico tenga un grupo carboxilo. Estos con'ugados son eliminados en la orina debido a que el sistema de transporte del ri%n reconoce al amino cido. G$utationi.a%i(n.? )a glutationi#acin consiste en la adicin de glutatin !L,A"$ a trav&s de su grupo sulfhidrilo !nucleoflico"$ con un carbn electroflico del xenobitico. )a reaccin es catali#ada por la glutatin?,?transferasa y el glutatin mismo es el cofactor de alta energa. El glutatin es un trip&ptido$ Llu?Lli?0is. El compuesto que se forma se rompe en el ri%n produciendo el 0is?derivado$ que se acetila para producir un con'ugado del cido mercapt+rico$ el cual se excreta en la orina. Esta reaccin es importante en la destoxificacin de epxidos y perxidos. )a glutatin?,?transferasa se encuentra en c&lulas de muy diversos te'idos. ,i esta reaccin disminuye significativamente el nivel celular de glutatin$ el organismo puede sufrir da%os considerables debido a la peroxidacin de lpidos o por otros tipos de agresin qumica. 4eti$a%i(n.? )a metilacin 'uega un papel menor en la

biotransformacin de xenobiticos$ excepto en la destoxificacin de ars&nico. )os compuestos inorg nicos de ars&nico se transforman en metabolitos monometilados y dimetilados que son menos txicos. )a reaccin consiste en la transferencia de un grupo metilo a un hidroxilo$ amino o sulfhidrilo$ es catali#ada por las metiltransferasas y el compuesto donador de grupos metilo es la ,59 !,?adenosil? metionina". )a metilacin es importante en la transformacin de

compuestos endgenos y forma parte en la biosntesis de varios amino cidos y esteroides$ as como en la metilacin del 54C. )as reacciones de la Iase I activan grupos funcionales$ la metilacin los enmascara impidiendo que participen en reacciones de la fase II$ por lo tanto$ si se metilan los xenobiticos se disminuye la tasa de eliminacin del compuesto. 0omo se puede ver$ varias de las reacciones de la Iase II requieren de los mismos grupos funcionales$ as que los compuestos que pueden ser modificados por m s de una en#ima entran en reacciones que son mutuamente competitivas. Ku& tanto tiene lugar una reaccin determinada depende$ de la capacidad del te'ido para llevar a cabo la reaccin y de la afinidad de la en#ima por el substrato. )a capacidad est xenobitico. Capacidades # $finidades de las Reacciones de Con%u&acin REACCIN Llucuronidacin 5minoacidacin ,ulfatacin Llutationi#acin 5cetilacin CAPACIDAD 5lta 9edia -a'a -a'a Variable A@INIDAD -a'a 9edia 5lta 5lta Variable definida por la cantidad de cofactor presente en el te'ido cuando &ste es expuesto al

(or e'emplo$ el fenol contiene un grupo hidroxilo y puede ser transformado por una glucuroniltransferasa o una sulfotransferasa. )a capacidad de estas reacciones depender de U4( glucuronato y (5(,. 0uando se administran cantidades peque%as de fenol$ aparece el sulfoester en la orina$ si se administran cantidades crecientes de fenol$ de la concentracin celular

se incrementar aparecer

la concentracin del sulfoester y posteriormente hasta

el derivado glucuronidado. Esto significa que el fenol tiene

mayor afinidad por la sulfotransferasa$ esta reaccin proceder

que se agote la disponibilidad de (5(,. 0uando se agota el (5(, se empie#a a utili#ar el U4(glucuronato. En el caso de la C?acetilacin$ las afinidades y capacidades pueden cambiar debido al polimorfismo de esta en#ima !acetiladores lentos contra los acetiladores r pidos".

>eacciones de 0on'ugacin de Iase II. )os hidrocarburos arom ticos policclicos !(5As" tienden a bioacumularse en peces y moluscos$ mientras que los peces tienen un con'unto de en#imas de la fase I y II que asimila$ distribuye$ metaboli#a y elimina !549E" estos compuestos y en cuestin de das despu&s de la exposicin de estos txicos solo se encuentran niveles detectables de (5As en la bilis en forma de compuestos hidrosoluble$ producto de la fase II.

En los moluscos esta biotransformacin es muy lenta y los (5As tienden a acumularse en estos organismos. #ioacti'acin )a bioactivacin es el con'unto de reacciones metablicas que incrementan la toxicidad de los xenobiticos$ o sea que los metabolitos resultantes de la biotransformacin de la sustancia absorbida son m s txicos que el compuesto original. (or e'emplo las toxinas de las mareas ro'as incrementan su toxicidad cuando son metaboli#adas en el hgado de los peces. )a mayora de las bioactivaciones son producidas por las en#imas de la Iase I$ aunque algunas de las en#imas de la Iase II tambi&n pueden bioactivar algunos xenobiticos. Este efecto lateral indeseable de la biotransformacin ocurre cuando se producen especies qumicas muy reactivas$ normalmente compuestos electroflicos con gran afinidad por los nuclefilos. El 54C$ las protenas y los lpidos son nuclefilos. )a mayora de las reacciones en los que se generan productos de aduccin de 54C y protenas se deben a la interaccin de estas macromol&culas con los productos de las reacciones de bioactivacin. El acetoaminof&n se C?hidroxila en el hgado$ va un 0itocromo (?T;6. El producto de la hidroxilacin reacciona con protenas del hgado$ produciendo hepatotoxicidad. )a aduccin del 54C es un tema de estudio de gran importancia$ ya que da por resultado la transformacin de las c&lulas normales en cancerosas. El ben#o?alfa?pireno es un cancergeno que es bioactivado en el hgado$ formando un epoxidiol altamente electroflico que se liga al 54C. E2isten -a'ios #e%anis#os po' #edio de $os %ua$es una su0stan%ia puede in%'e#enta' $a to2i%idad de ot'a*

Induccin de En#imas. Un xenobitico puede inducir una en#ima que bioactiva a otro xenobitico. (or e'emplo el etanol induce la sntesis del 0itocromo (?T;6 que bioactiva al tetracloruro de carbono. Esta interaccin hace que el tetracloruro de carbono sea m s txico cuando se administra 'unto con alcohol

Inhibicin de en#imas. )a inhibicin tambi&n puede incrementar la bioactivacin. (or e'emplo$ una substancia que bloquee la sntesis de los 0itocromos (?T;6 har que el organismo se vuelva m s susceptible a los txicos que son destoxificados por los (?T;6. )as substancias que inhiben la sntesis de 0itocromo (?T;6 tambi&n pudieran servir de antdoto si la especie txica es producto de la bioactivacin del xenobitico por el 0itocromo (? T;6 'as rutas de (ioacti)acin son las si&uientes*

.. El

te'ido

blanco

contiene

las

en#imas

para

bioactivar

el

xenobitico y es el sitio activo para la especie txica. El e'emplo cl sico de esta ruta es la bioactivacin del tetracloruro de carbono va la deshalogenacin por el (?T;6 del hgado$ produciendo el radical libre triclorometilo$ el cual reacciona con protenas y lpidos del hgado. /. Un te'ido no blanco bioactiva al xenobitico$ el cual experimenta otra bioactivacin en el te'ido blanco. E'emplo$ el benceno es oxidado a fenol por los (?T;6 del hgado y este compuesto se transporta hasta la m&dula sea donde se transforma en hidroquinol$
un diol que causa da%o en la m&dula sea.

M. Un te'ido no?blanco bioactiva el xenobitico$ el cual tiene sus efectos en el te'ido blanco. E'emplo* el hexano se transforma en /$;?hexanodiona por la accin del (?T;6 y la alcohol deshidrogenasa del hgado. Este metabolito produce ligaduras

cru#adas en los neurofilamentos causando da%o en nervios perif&ricos.

E'emplos de >eacciones de -ioactivacin En resumen*

)a

biotranformacin

Iase

son

reacciones

de

oxidacin

catali#adas por un sistema comple'o de en#imas que convierten los xenobiticos no polares en compuestos solubles en agua. )a mayora de los xenobiticos no seran substrato de las en#imas de la Iase II sin las transformaciones introducidas por las reacciones de la Iase I

5 ba'as concentraciones de oxgeno$ los 0itocromos (?T;6 pueden catali#ar reducciones de los xenobiticos

)as reacciones de la Iase I pueden dar lugar a bioactivaciones )as reacciones de la Iase II son adiciones de residuos polares en los grupos funcionales del xenobitico$ normalmente producidos

en la Iase I$ que dan productos mucho m s solubles en agua que los compuestos absorbidos y los productos de la Iase I

5lgunas reacciones de la Iase II producen compuestos menos solubles en agua

)a capacidad de los te'idos para hacer transformaciones Iase II depende de la cantidad disponible de cofactores en las condiciones fisiolgicas en las que se encuentra el organismo

+ormalmente el or&anismo tiene las defensas adecuadas para mane%ar la a&resin ,u-mica para lo cual cuenta con lo si&uiente*

las en#imas de las dos fases de la biotransformacin la presencia de antioxidantes que eliminan radicales libres y reducen especies txicas

las protenas plasm ticas que ligan los txicos en el plasma sanguneo impidiendo su difusin hacia los te'idos )a toxicidad ocurre cuando todas las defensas han sido vencidas.

(or e'emplo el fenol$ como vimos anteriormente$ se destoxifica primero por sulfatacin y despu&s por glucuronidacin. 0uando se agotan los dos cofactores para estas reacciones$ el fenol se empie#a a acumular y se produce su distribucin hacia su sitio activo$ la m&dula sea$ donde produce su respuesta txica.

Oxiradicales y Estr(s Oxidati'o >and .77;. 0ap .< Iund. 5quatic 3oxicology. El Oxgeno vital para la vida$ oxida la materia org nica mientras se reduce a agua. 0ada mol&cula de O/ requiere Te? para reducirse a agua$ la secuencia de la reaccin es*

-2 +e - 2
2. -2 +e . 2- 2 . . . 2- 2 + e -. + . 2. . -. + e . 2+ + +

>eaccin Ceta En esta

. - 2 + 4e 4 . 2-

secuencia

se

producen

radicales

como

el

O /?

!superxido"$ A/O/ !perxido de Aidrgeno" y OA ?$ que son muy reactivos y per'udiciales a los sistemas biolgicos. El O /?$ y el OA? son radicales libres del oxgeno. El agua oxigenada8 A /O/$ aunque no es un radical libre es tambi&n muy reactiva y 'unto con el O /? es un precursor del OA?*
- 2 + . 2- 2 .-. + -. + - 2

Esta reaccin es muy lenta sin embargo metales como el Ie y 0u catali#an la reaccin y facilitan la produccin de .OA.*
- 2 + 0e +3 /uelato - 2 + 0e +2 /uelato 0e +2 /uelato + . 2- 2 .-. + -. +0e +3 /uelato

>eaccin Ceta* - 2 + . 2- 2 .-. + -. + - 2

)ompuestos *ue generan radicales libres+ Kuinonas$ -leumicina. Mecanismos de de$ensa , ntioxidantes)os mecanismos de defensa de antioxidantes es el costo -ioqumico que se paga por la eficiencia del oxgeno para producir energa. )os radicales libres se generan por el oxgeno disuelto$ la lu# UV y por reactivos oxidantes. )os antioxidantes$ que reducen su efecto nocivo$ pueden ser de naturale#a hidrosoluble y liposoluble* Aidrosoluble Llutationa )iposoluble Vitamina E ! ?3ocoferol" Aerbicidas$ Citro?5rom ticos$ Aidroxi?5minas

5rom ticas$ 0ompuestos 5#o$ Kuelatos de 9etales8 Ie?E435 $ 0u?

Vitamina 0

Vitamina 5 !?caroteno" Fantofilas ,uperOxidasa4ismutasa !,O4" 0atalasa

,-D 2- 2 +2 . + . 2- 2 +- 2 CA1 2 . 2- 2 2 . 2- +- 2

)a c&lula no est

indefensa contra estas especies reactivas$ tiene

dos lneas principales de defensa para protegerse.

)a primera es la presencia de antioxidantes los cuales donan o aceptan un electrn para formar intermediarios estables. E'emplos de ellos son el alfa?tocoferol$ ascorbato y L,A.

(robablemente de mayor importancia$ particularmente en la destoxificacin de radicales oxigenados y del perxido de hidrgeno$ son los sistemas de en#imas protectoras. :stas incluyen la perxido dismutasa$ la cual convierte el superxido en perxido de hidrgeno$ la LA, peroxidasa y la catalasa convierten al perxido de hidrgeno en agua. ,i el radical libre no es inactivado causar da%os a la c&lula y

puede hacerlo va la unin a un blanco o capturando un hidrgeno del blanco. )os radicales libres neutros$ como el AOU y el 0l M0U$ se pueden unir covalentemente a biomol&culas y alterar su funcin$ o en el caso que se unan a 54C el resultado sea una mutacin. )os radicales libres pueden capturar un hidrgeno de otras mol&culas$ convirti&ndolos en radicales libres. )a abstraccin de hidrgeno del 54C produce rompimiento o ligaduras cru#adas de las cadenas$ la abstraccin por lpidos inicia la peroxidacin de estos compuestos.

El da%o por radicales libres est causadas por agentes qumicos$ enve'ecimiento y reperfusinHisquemia. Metabolismo de Metales y .oxicidad. ,e pueden clasificar en dos tipos 9etales esenciales * 0u$ 9n$ Jn 9etales no esenciales* 0d$ (b$ Ag

implicado en las lesiones radiacin$ inflamacin$

por

)a exposicin a concentraciones elevadas de ambos tipos de metales es txica$ los metales generan enlaces no especficos a biomol&culas. El metabolismo y biotransformacin de un metal y su enlaces dentro de las c&lulas$ generan quelatos que bien pueden ser almacenados en compartimientos intracelulares o pueden eliminarse. )os mecanismos de biotransformacin en macro y microalgas pueden implicar diferentes procesos como la unin con 9etalotioeninas$ sntesis de fitoquelatos o la formacin de comple'os con polifenoles o 3aninos. )as 9etalotieneinas son protenas de ba'o peso mol&cular ricas en cysteina que comple'a iones met licos en anillos 3iol. )a funcin de estas protenas es la de quelar las tra#as de metales y reducir la concentracin de iones libres$ citotxicos. )as microalgas se pueden emplear en la purificacin de agua contaminada con metales pesados. !R. LeEeler$ E. Lrill$ E. RinnacEer$ and 9.A. JenE$ Arc! "icrobiol# 1ABB$ $%&$ .7<." En las algas pardas y en menor proporcin las algas ro'as$ contienen diferentes tipos de polifenoles sulfatados que tienen la capacidad de quelar o secuestrar irreversiblemente una gran cantidad de metales pesados. de )os polifenoles de algales estan compuestos principalmente unidades .$M$;?trihydroxyben#oid

!floroglucinol?". )os

3ambien los -romochlorofenoles como la sal

dib sica del potasio de /$M$?dibromo?;?hydroxyl?.W$T?disulfato son muy efectivos en secuestrar iones met licos. Estos mecanismos de biotransformacin actuan como

reguladores de metales esenciales y no esenciales y modulan su biodisponibilidad para las macromol&culas. ,e conoce que algas pardas como el 'ucus vesiculosus tienen la capacidad de asimilar grandes cantidades de metales sin sufrir da%o en su metabolismo.

+. CRITERIOS PARA PRUEBA.

A SE ECCIN DE ORGANIS4OS DE

'.1. Principios de 1eil. /.1.1. 0eme1an2a Metablica de un medicamento

(ara generar la dosis de referencia !4>f"

para su aplicacin en Aumanos se debe de considerar que existe un factor de incertidumbre !Uf" que se presenta cuando se usan animales de prueba como modelos de toxicidad para humanos. )a magnitud de esta incertidumbre de puede determinar por evaluacin de las variaciones Inter?qumicas que existen entre las proporciones de dosis asociadas con efectos toxicolgicos similares en animales de laboratorio y humanos* (f) *+AE, cr-nico en Animales. *+AE, cr-nico en /umanos CO5E) !Con Observed 5dverse Effects )evel" es el nivel de exposicin experimental que representa el m ximo nivel probado al cual no se observan efectos txicos. (ara el propsito de evaluacin de riesgos &ste es el dato clave que se obtiene de los estudios de 4osis? >espuesta. ,i las exposiciones experimentales fueron intermitentes$ se corrige el valor del CO5E) para que representen exposiciones continuas. 4e esta evaluacin se observa que* )a evidencia de toxicidad se incrementa con el peso corporal$ sin embargo los humanos no son siempre mas sensibles a una dosis que los animales. )os valores de las proporciones de Uf son menores a .6 en la mayoria de los casos pero no para todas las drogas.

9ientras mas informacin se tenga sobre una droga en diferentes especies$ abulones$ camarones$ alme'as y monos$ la dosis de referencia$ 4>f$ que se obtiene permite reducir el factor de incertidumbre$ Uf.

)os datos de comparacin entre especies sugieren que las proporciones pueden variar seg+n la dosis empleada en el ensayo.

5dem s de las consideraciones anteriores para la evaluacin del Uf$ se debe de tener en cuenta la variabilidad interhumana$ porque cuando se tienen datos suficientes sobre el efecto de una droga en Aumanos$ su dosis se puede estimar sin la necesidad de aplicar el factor de incertidumbre Uf. (ero$ cuando no existen datos suficientes sobre seres humanos sensibles$ al Uf se agrega otro factor de incertidumbre que expresa la variabilidad en respuestas entre individuos y se trata con un factor de .6 veces. Este factor de incertidumbre asume que existe variabilidad de respuesta entre humanos y que esta variabilidad no se puede obtener categricamente debido al tama%o de la muestra que se puede usar es muy reducido. Este factor tambi&n implica que existen sub?poblaciones de humanos que son mas sensibles a la toxicidad de un producto qumico que el promedio de la poblacin mundial. )a variabilidad de respuesta a dosis de drogas es mayor en humanos que en entre animales humanos de en laboratorio$ su existen de diferencias metaboli#ar considerables poblacin. (ara calcular )a dosis de referencia 4>f se dividen los niveles CO5E) sobre el producto de todos los factores de incertidumbre Uf$ observados. capacidad

Fenobioticos y el factor de .6 veces incluye entre el @6 y 7;= de la

4>fS CO5E)H Ufn /.1.2. 3ias de entrada. Conside'a%iones so0'e $a -Ca de e2posi%i(n . )a filosofa detr s del c lculo de la 4>f es la misma$ independientemente de cual sea la va de exposicin$ sin embargo$ la forma de calcularla es diferente. ,i en los estudios experimentales la exposicin fue intermitente$ la 4>f se calcula a'ustando los valores observados de tal manera que refle'en exposiciones continuas. El procedimiento de c lculo de las dosis de referencia orales es el descrito anteriormente. )os valores tabulados de las 4>f est n expresados en mg de substancia por Og de masa corporal por da. 0uando la va de exposicin es el aparato respiratorio$ la extrapolacin de datos obtenidos con animales debe de considerar

)as diferencias anatmicas entre el animal de estudio y el hombre. Estas diferencias pueden afectar el patrn de deposicin$ salida y redistribucin de los contaminantes. 0onsecuentemente$ las diferentes especies$ no recibir n la misma dosis de contaminante en los mismos lugares del aparato respiratorio$ aunque hayan estado expuestos a las mismas concentraciones de partculas o gases.

)as dosis calculadas en animales se convierten a dosis equivalentes en humanos sobre las bases de consideraciones de fisiologa comparada$ v.g.$ par metros de ventilacin y superficie de las diferentes regiones pulmonares.

)as diferencias en las caractersticas fsicoqumicas de los contaminantes$ tales como tama%o y forma de las partculas$ o si el contaminante es un aerosol o un gas$ tambi&n influyen en los patrones de deposicin$ salida y redistribucin.

)os valores de 4>f tabulados se expresan en funcin de la concentracin del txico en el aire en mg por metro c+bico para una exposicin continua de /T horas por da. Ot'os Cndi%es. 5dem s de las 4>f se han calculado y publicado otros ndices de toxicidad que se denominan A5 . y A5.6 para exposiciones de corta duracin. ,on concentraciones de contaminantes en agua potable$ a las cuales no se presentan efectos adversos si la exposicin es de una duracin especificada$ un da o .6 das respectivamente. Estos ndices de toxicidad no?cancergena se obtienen dividiendo el CO5E) por los Uf y UI9 adecuados. ,e basan en que un ni%o de .6 Og. ingiere . litro de agua por da y se incluye un margen de seguridad para proteger a los miembros m s sensibles de la poblacin. )os A5s no incluyen ning+n riesgo cancergeno a+n si la substancia es un cancergeno potencial. '.2. Criterios para la seleccin de organismos de prueba. ,e entiende por bioensayo un ensayo en que un te'ido$ organismo o grupo de organismos vivos se usan como reactivo para determinar la potencia de cualquier sustancia fisiolgicamente activa cuya actividad se desconoce !I5O$ .7@.". )os bioensayos$ o pruebas de toxicidad son experimentos que miden el efecto de uno o m s contaminantes en una o m s especies !>eish y Oshida$ .7@<"$ permiten evaluar el grado de toxicidad de una sustancia qumica$ un efluente$ un cuerpo de agua$ etc.$ empleando organismos vivos !Esclap&s$ .777". (uede determinarse la influencia relativa de cada factor sobre los par metros biolgicos estudiados. )os rangos de variacin de los factores considerados pueden ser mayores que los existentes en el ambiente natural$ lo que muchas veces facilita el estudio de su modo de accin. 3ambi&n pueden estudiarse combinaciones de dos o m s factores$ lo que permite revelar la existencia de antagonismos o sinergismos entre ellos. )a posibilidad de

controlar muchas de las variables hace posible la eliminacin de las fluctuaciones propias de las condiciones naturales$ que generalmente oscurecen o interfieren con la finalidad principal del estudio llevado a cabo !>odrgue# et al.$ .77;". .eleccin de !species (ara obtener la m xima informacin de los bioensayos es necesario escoger los organismos m s apropiados. ,e debe tener en cuenta que requieren diferentes perodos de aclimatacin en el laboratorio$ seg+n las especies$ y es sumamente importante que los organismos de ensayo se manipulen con cuidado$ no sufran da%os$ se encuentren sanos y sean de edad o tama%o uniformes !I5O$ .7@."8 ,eg+n Aenry !.7@@" la seleccin de organismos para bioensayos debe basarse en*

)os ob'etivos del programa toxicolgico )a informacin disponible sobre los posibles organismos )as caractersticas de las especies )as instalaciones y equipos de laboratorio El nivel de capacitacin de los t&cnicos Criterios &enerales de seleccin* XExiste suficiente informacin sobre la historia de vida del organismoY X,obre las t&cnicas de cultivoY X,obre los procedimientos de bioensayosY !Aenry$ .7@@". )os organismos acu ticos frecuentemente tienen ciclos de vida y requerimientos de cultivo y de mane'o comple'os. El desarrollo de esta informacin es una tarea larga que frecuentemente requiere a%os de investigacin. Es recomendable que se consideren solo aquellos organismos de los que se tiene suficiente.

5daptabilidad de los organismos como especies para bioensayos.

$dapta/ilidad del or&anismo Or&anismos para /ioensa#os Culti)o de la/oratorio Recoleccin de campo

Com0nmente utilizado como un or&anismos para /ioensa#os

1. $l&as

!xcelente

Dispono/le 3u# dif-cil de

.i

2. Protozoos

!xcelente

recolectar culti)o puro

3u# limitado

3. In)erte/rados a. Planctnicos 3u# dif-cil de 1. Rot-feros (ueno recolectar culti)o puro $lta tasa de mortandad 2. Cladceros !xcelente despu4s de la recoleccin de campo $lta tasa de mortandad 3. Cop4podos 3ediano despu4s de la recoleccin de campo 4. Camarones (ueno (ueno .i 'imitado .i 'imitado

/. (4nticos 1. $n4lidos 2. Insectos 3. 3oluscos 4. Crust5ceos 4. Peces 3ediano (a%o (ueno (a%o !xcelente 3ediano 3ediano 3ediano 3ediano $lta tasa de mortandad despu4s de la recoleccin de campo 67enr#8 19::; XEs apropiado el ciclo de vida de los organismos a los ob'etivos y dise%osY !Aenry$ .7@@". El dise%o de los bioensayos tiene que ser cuidadosamente considerado en el contexto del ciclo de vida del organismo. )a mayora de los protocolos de bioensayos agudos y crnicos requieren organismos 'venes o reci&n nacidos. ,in embargo$ algunos protocolos tales como la prueba de crecimiento de ostras$ se aplican a organismos adultos. 5simismo$ para pruebas crnicas que involucran reproduccin$ el tiempo requerido para la reproduccin del organismo es un factor clave !Aenry$ .7@@". XEl bioensayo es para toxicidad en agua o en sedimentosY (ara sedimentos$ Xes el ob'etivo determinar las sustancias txicas que se filtrar n hacia el agua superficial o las sustancias txicas que pueden acumularse en los organismos b&nticosY !Aenry$ .7@@". .i 'imitado .i .i

)os sedimentos pueden servir como fuentes de sustancias txicas para el agua superficial o para los organismos b&nticos que viven en los sedimentos. )as sustancias txicas que se mueven desde los sedimentos hacia el agua superficial pueden ser determinados preparando lixiviados del sedimento para bioensayos. 3ambi&n pueden ser de preocupacin las sustancias txicas que est n estrechamente ligadas a los sedimentos y que pueden ser bioconcentradas en organismos bentnicos$ particularmente cuando &stos son un componente importante de una cadena alimenticia que resulta en la exposicin humana !Aenry$ .7@@". )os bioensayos para determinar toxicidad en agua o de sedimentos en contacto con agua se reali#an en me'or forma con organismos planctnicos o de libre natacin. 5+n cuando el sedimento puede ser el material de prueba$ la toxicidad puede ser evaluada exponiendo los organismos planctnicos a un lixiviado o a un extracto del sedimento usando el agua superficial !Aenry$ .7@@". ,i se sospecha la presencia de sustancias txicas firmemente ligadas a los sedimentos$ entonces deben usarse los organismos bentnicos en contacto directo con los sedimentos. Estas pruebas revelar n cualquier toxicidad de los sedimentos y tambi&n el potencial de bioacumulacin de las sustancias txicas y su transferencia a trav&s de la cadena alimenticia !Aenry$ .7@@". 0aractersticas de un organismo ptimo para bioensayos* >epresentativo del ambiente$ de amplia distribucin en el pas o de importancia comercial !Esclap&s$ .777". 4isponibilidad$ ser f ciles de encontrar$ en n+mero suficiente y colectarse sin dificultad. ,e debe tomar en cuenta

problemas con el transporte !I5O$ .7@.". 0on un tama%o suficientemente peque%o para poseer los necesarios por experiencia y que sean representativos para los estudios estadsticos !I5O$ .7@.".

4e f cil cultivo$ lo que garanti#a un adecuado suministro de organismos en los ensayos y el establecimiento con exactitud de la edad o estado de desarrollo. )a edad es de suma importancia en los bioensayos$ ya que la sensibilidad puede variar significativamente durante su desarrollo !Esclap&s$ .777".

Especies

con

gran

susceptibilidad

exposiciones

con

sustancias xenobiticas. Laranti#ando cubrir el peor de los escenarios$ y proporcionando resultados que ofrecen una alta proteccin al resto de la cadena trfica !Esclap&s$ .777". El uso de m s de una especie permitir una determinacin m s

cuidadosa de toxicidad porque los organismos acu ticos varan en su respuesta a las sustancias txicas. (or e'emplo$ los peces pueden ser m s sensibles que los invertebrados a una sustancia qumica$ mientras que puede suceder lo contrario con otra sustancia qumica !Aenry$ .7@@". Organismos criados en el laboratorio para bioensayos. Venta'as* 4isponibilidad en forma inmediata de organismos aclimatados$ saludables$ que han sido criados ba'o las mismas condiciones !Aenry$ .7@@". )os organismos cultivados minimi#an la variabilidad gen&tica que supondra traer individuos capturados en diferentes localidades geogr ficas !Esclap&s$ .777". )a respuesta de los organismos para bioensayos a la sustancia txica est dieta !los animales bien influenciada por factores tales brindan respuestas m s como su edad !los animales 'venes son usualmente m s sensibles"$ alimentados consistentes"$ estr&s !los organismos alterados son m s sensibles" y condiciones fsicas como temperatura$ lu# y el nivel de oxgeno disuelto en el agua !Aenry$ .7@@". )os organismos para bioensayos cultivados en laboratorio representan una fuente predecible de organismos de prueba de una edad conocida. El uso de condiciones est ndares de

laboratorio y de alimentacin asegurar

que todos los organismos de

prueba responder n a las sustancias txicas en forma similar con el paso del tiempo. Es una caracterstica importante cuando se comparan los resultados de diferentes laboratorios !Aenry$ .7@@". 4esventa'as* 9uchos organismos con ciclo comple'o de vida o informacin insuficiente sobre su cultivo no pueden ser cultivados en el laboratorio. (or lo tanto$ la variedad de organismos est limitada cuando se usan los que han sido cultivados en el laboratorio. )os requerimientos de cultivo para organismos acu ticos varan sustancialmente$ a+n entre especies estrechamente relacionadas. Es necesario conocer el alimento ptimo$ la temperatura$ el ciclo de lu# y el agua a fin de mantener cultivos continuos en el laboratorio. 5unque muchas algas$ invertebrados y especies de peces se han usado como organismos para bioensayos$ slo existe informacin disponible sobre algunas especies$ que permiten un cultivo satisfactorio de laboratorio !Aenry$ .7@@". Ialta de representatividad a las condiciones y organismos en la comunidad a ser probada. El aspecto negativo de los organismos est ndares criados en el laboratorio es que ellos no son necesariamente representativos de la comunidad acu tica o de las condiciones de salud de los organismos de cada lugar. (or lo tanto$ si el ob'etivo es estudiar un efluente especfico o la descarga a un ro o lago$ entonces deben considerarse los organismos recolectados en el campo como una alternativa !Aenry$ .7@@". Organismos recolectados en el campo para bioensayos

,eg+n Aenry !.7@@"$ existen circunstancias en las que los organismos recolectados en el campo son apropiados. )as siguientes son algunas preguntas que necesitan hacerse antes de decidir usar los organismos recolectados directamente del medio.

X(uede recolectarse el organismo directamente del campoY XEsto ocurre en poblaciones grandes$ monoespecficasY

XEst n los organismos disponibles durante todo el a%o o slo durante ciertas estacionesY

XEs el organismo sensible al mane'o durante su recoleccin y transporte al laboratorioY

X,e adaptar

el organismo al agua del laboratorio o se

necesita un abastecimiento de agua fresca diariamente desde el campoY Venta'as* >epresentativo de la comunidad impactada por el efluente. ,e puede seleccionar una especie importante en una comunidad especfica !Aenry$ .7@@". )as pruebas de microcosmos conteniendo muchas especies pueden prepararse f cilmente. ,e pueden desarrollar ex menes con varias especies en la misma c mara de prueba. )os organismos que son compatibles$ tales como caracoles$ alme'a$ peces y plantas acu ticas pueden incluirse en la misma c mara de prueba$ permitiendo un estudio simult neo de efectos m+ltiples !Aenry$ .7@@". )os bioensayos hechos en el laboratorio utili#ando organismos recolectados en el campo han sido menos satisfactorios$ est con muy pocas excepciones. )os organismos recolectados en el campo son m s satisfactorios cuando el laboratorio cerca al lugar de recoleccin y el abastecimiento de agua desde siempre disponible !Aenry$ .7@@". 4esventa'as* El estr&s y la all est

mortalidad frecuentemente est n asociadas con los procedimientos de recoleccin y transferencia. 9uchos organismos pueden morir antes o durante la prueba y otros pueden ser inusualmente sensibles a sustancias txicas como resultado de la presin asociada con los procedimientos de recoleccin y transferencia. )as muertes en los controles pueden invalidar la prueba !Aenry$ .7@@". )a disponibilidad de los organismos puede estar limitada. 9uchas especies no abundan

durante todo el a%o o tienen varios cambios en su ciclo de vida !Aenry$ .7@@". )a edad$ salud y condiciones de cultivo de los organismos son desconocidas. Co existe manera de obtener organismos Gestandari#adosG del campo y frecuentemente hasta la edad es desconocida !Aenry$ .7@@". )os invertebrados son un grupo mucho m s diverso que las algas o los peces$ con diferencias dram ticas en su forma fsica$ sus caractersticas histricas de vida y sus requisitos de cultivo !Aenry$ .7@@". Es conveniente el uso del plancton en los bioensayos debido a su peque%o tama%o y porque con ellos es posible reali#ar muchos ensayos en espacios reducidos. ,u ciclo vital es muy corto y se conocen sus necesidades nutricionales. ,on buenos para los estudios de bioacumulacin$ puesto que se ubican en el nivel m s ba'o de la pir mide trfica !I5O$ .7@.".

ESTRATEGIAS

PARA

9A ORACIN

DE

SUSTANCIAS

BIOACTI9AS. -.1. Bioprospeccin. )a bioprospeccin es la b+squeda de elementos +tiles de la naturale#a$ generalmente para fines comerciales o medicinales. El potencial biom&dico de los organismos marinos representa una fuente muy grande de compuestos con actividad biolgica de importancia medicinal pero aun mas importante que esto representan una fuente de modelos moleculares para la sntesis de medicamentos mas eficientes. ".1.1. P4 5E )&65 7 #809:ED DE 5.E)EDE5.E0

0omo la meta de la bioprospeccin es la identificacin de nuevos agentes farmacolgicos$ una pregunta muy importante es que actividades se han observado y que conclusiones se han generado de

ellasYY 0on respecto a la relacin de actividad de acuerdo al phyla$ ambiente marino$ temperatura$ profundidad$ localidad geogr fica. 0on respecto al phyla se ha observado que la actividad es una propiedad general$ pero hay actividades especficas que se concentran en cientos phylas$ por e'emplo la actividad antifungal se observa principalmente en los Aolothuridos !Echinodermata". 4urante la campa%a 5A0E .7<@ !5lpha Aelix 0aribbean Expedition" se evaluaron unas N;6 especies en actividades antibacteriales$ antifungales y antivirales$ adem s de citotxicas. 5ctividades$ antimicrobianas$ antivirales y citotxicas en

diferentes pilas. -ioprospeccin 5lpha Aelix 0aribbean. .7<@. % de Especies activas Phylum P$%i&e%a #+ida%ia Ect$p%$cta .$llusca /++elida /%th%$p$da Echi+$de%mata #h$%data #ya+$phyta #hl$%$phyta Phae$phyta 0h$d$phyta 1%ache$phyta Especies E.c evaluadas 1'( (, 1 2, 3 * 3* 2( 42 1) 43 3 14 4 1,, 33 , , 12, ( , 1, , B.s. 41 2* 1,, 1, , 3 3( *, -3( 3, S.c. 1) ( , , , , -, 12, 1, , ( , P.a. 11(13') 2 (**) , , (1() , , 2*(2() 14(22) , (4) - (41) , (1') , , S!"1 14 1( , , , , 1* 23 1,, ( 21( 33 #!"1 *2 -* , 33 , , (2 (, ', 3* -, 43 ,

E.c. Escherichia coli2 B.s. 2acillus su)tilis2 S.c. ,accharom3ces cereviseae2 P.a. Penicill3m atrovenetum.2 S! i+hi3ici4+ del vi%us del e%pes simples2 #!2cit$t$xicidad a las c5lulas del hi6ad$ de chimpa+c5 a 78 2,, 96:disc$

)os datos de la expedicin >HV ,ePard Zonson ,ea (harm en el caribe occidental en .7@; y en Islas Lalapagos en .7@N$ comparan las actividades respecto a la profundidad e indican que a pesar de ser localidades diferentes$ las actividades son similares en las dos localidadas. )a actividad presenta patrones parecidos en organismos bentnicos de profundidades de N66 a <N/m. )a principal limitante en la colecta de organismos a profundidades superiores es por supuesto el costo. ,on pocas las variaciones con la profundidad las actividades antibacteriales y antifungales se reducen generalmente en organismos colectados en aguas profundas. Este fenmeno probable esta relacionado con las temperaturas del agua$ ya que la incidencia de actividades antibacteriales y antifungales en organismos colectados en la costa oeste de Espa%a asi como en 9aine y Cueva Escocia son muy ba'as mientras que las actividades citotxicas y antivirales se presentan en intervalos normales. )as actividades con respecto a la temperatura del agua indican que los organismos de #onas trpicales exhiben mayores actividades que aquellos de aguas templadas. Esto se refle'a principalmente en la presencia de Icthiotoxinas de espon'as y holoturidos. )as aguas frias de las costas Cororientales de Estados Unidos$ orientales de 0anada$ Oeste de Espa%a y Cueva Jelanda son #onas ricas de aprovisionamiento de sustancias con actividades antitumor$ citotxicas y antivirales )a bioprospeccin de una gran cantidad de especias marinas han producido la generacin de agentes farmac&uticos en diferentes reas como antitumorales$ antiinflamatorios$ antivirales$ antibacteriales y citotxicos. ".1.2. M(todos para la colecta y acopio de datos.
Re%o$e%%i(n de datos

(ara la recoleccin de los datos o toma de observaciones se deben tener en cuenta las siguientes recomendaciones* i3. El experimentador debe liberarse de toda simpata personal hacia determinado tratamiento que pudiera sesgar los resultados. ii3. 3odas las observaciones que se tomen deben ser anotadas cuidadosamente en un registro apropiado$ no de'ando nada a la memoria. )os datos deben anotarse en forma ordenada$ de tal forma que puedan ser utili#ados por otro experimentador si fuese necesario en una fecha m s o menos le'ana$ quien debe poder entender todas las anotaciones. iii3 ,e recomienda que el experimentador cu les tome son las los

observaciones

!aleatoriamente"

olvid ndose

tratamientos de las parcelas a fn de no de'arse influir por pre'uicios sobre determinados tratamientos. i-3. En algunos experimentos no es pr ctico tomar

observaciones en toda la unidad experimental$ tal es el caso de determinaciones qumicas. En estos casos es recomendable muestrear la unidad experimental para obtener subunidades. Leneralmente hay mas variabilidad entre las unidades que entre las subunidades experimentales. Es por esto que no debe haber mucho inter&s en muchas determinaciones qumicas en cada unidad experimental$ ya que las subunidades solo sirven para estimar las UE$ y el experimentar est basado en la variabilidad entre las UE y no entre subunidades experimentales. Un aspecto muy importante en el desarrollo de los bioensayos es la reproducibilidad de estas pruebas$ lo que consiste en obtener resultados similares con la misma sustancia qumica. Esto requiere que las pruebas sean estandari#adas de acuerdo a protocolos muy definidos. En el caso de la especie en estudio$ el n+mero de resultados consecutivos contemplados se a'usta a lo recomendado por U,E(5

!.776"$ organismo que establece para una correcta intra calibracin un n+mero mnimo de cinco !;" bioensayos triplicados consecutivos. Otros organismos internacionales$ como E(, !.776"$ indican que se debe e'ecutar un n+mero mnimo de veinte !/6" bioensayos de toxicidad consecutivos con el txico de referencia antes que se pueda reali#ar una calibracin intralaboratorio. El )aboratorio de -ioensayos ha traba'ado estrechamente ba'o la gua de la U, E(5$ )os bioensayos$ como toda herramienta de medicin$ deben tener cierta precisin y exactitud en sus resultados. Organi#aciones internacionales !5,39$ .77N8 OE04 .77M8I,O$ .77N8E0$ .77/ y U,E(5$ .77T" han estandari#ado metodologas para la reali#acin de estos bioensayos con distintos organismos$ en donde adem s se describen m&todos de cultivo$ condiciones de los experimentos$ aplicabilidades y restricciones. Una ve# estandari#adas las metodologas experimentales$ los laboratorios que e'ecuten el bioensayo deben reali#ar una calibracin de su m&todo. )a calibracin es un proceso relacionado con los conceptos que rigen el control de calidad$ y cuyo ob'etivo es determinar la precisin y exactitud que puede y debe alcan#arse en los resultados generados por un determinado bioensayo. )o anterior es +til para asegurarse que la respuesta de la poblacin expuesta a cierto agente txico se deba al efecto de &ste y no a variaciones tanto de la sensibilidad de los organismos como de fallas operacionales en la aplicacin del m&todo. )a precisin y exactitud se determina con el concurso de un qumico llamado txico de referencia$ el cual permite definir un rango de variabilidad m ximo aceptable en los resultados generados por el bioensayo. 5dem s$ los resultados de la calibracin permiten definir en forma estadstica el rango de sensibilidad de la especie frente al txico de referencia$ al tiempo de exposicin y a la manifestacin biolgica empleados.

Us Epa. .776. 9ethods for measuring the acute toxicity of effluents and receiving Paters to freshPater and marine organism. Iourth Edition. >eport N66HT?76H6/<I.

(ruebas de hipotesis ,i queremos decidir entre dos hiptesis que afectan a un cierto par metro de la poblacin$ a partir de la informacin de la muestra usaremos el %ont'aste de Dip(tesis$ cuando optemos por una de estas dos hiptesis$ hemos de conocer una medida del error cometido$ es decir$ cuantas veces de cada cien nos equivocamos. En primer lugar$ veremos %(#o se es%'i0i'Can $as Dip(tesis que queremos contrastar* EF se llama Dip(tesis nu$a y es lo contrario de lo que sospechamos que va a ocurrir !suele llevar los signos igual$ mayor o igual y menor o igual" E1 se llama Dip(tesis a$te'nati-a y es lo que sospechamos que va a ser cierto !suele llevar los signos distinto$ mayor y menor"
os %ont'astes de Dip(tesis pueden se' de dos tiposG -ilateral* En $a Dip(tesis a$te'nati-a apa'e%e e$ si,no distinto.

Unilateral* En $a Dip(tesis a$te'nati-a apa'e%e o e$ si,no H o e$ si,no I.

Pode#os a%epta' una Dip(tesis %uando en 'ea$idad no es %ie'ta1 enton%es %o#ete'e#os unos errores1 Jue pod'*n se' de dos tiposG Error de tipo IG Consiste en a%epta' $a Dip(tesis a$te'nati-a %uando $a %ie'ta es $a nu$a. Error de tipo IIG Consiste en a%epta' $a Dip(tesis nu$a %uando $a %ie'ta es $a a$te'nati-a. Estos e''o'es $os a%epta'e#os si no son #uy ,'andes o si no nos i#po'ta Jue sean #uy ,'andes.

alfaG Es $a p'o0a0i$idad de %o#ete' un e''o' de tipo I. betaG Es $a p'o0a0i$idad de %o#ete' un e''o' de tipo II.

De $os dos1 e$ #*s i#po'tante es a$6a Jue $$a#a'e#os nivel de significacin y nos in6o'#a de $a p'o0a0i$idad Jue tene#os de esta' eJui-o%ados si a%epta#os $a Dip(tesis a$te'nati-a. De0ido a Jue $os dos e''o'es ante'io'es a $a -e. son i#posi0$es de %ont'o$a'1 -a#os a 6i5a'nos so$a#ente en e$ ni-e$ de si,ni6i%a%i(n1 este es e$ Jue nos inte'esa ya Jue $a Dip(tesis a$te'nati-a Jue esta#os inte'esados en p'o0a' y no Jue'e#os a%epta'$a si en 'ea$idad no es %ie'ta1 es de%i'1 si a%epta#os $a Dip(tesis a$te'nati-a Jue'e#os eJui-o%a'nos %on un #a',en de e''o' #uy peJueKo. E$ ni-e$ de si,ni6i%a%i(n $o #a'%a#os nosot'os. Si es ,'ande es #*s 6*%i$ a%epta' $a Dip(tesis a$te'nati-a %uando en 'ea$idad es 6a$sa. E$ -a$o' de$ ni-e$ de si,ni6i%a%i(n sue$e se' un /L1 $o Jue si,ni6i%a Jue / de %ada 1FF -e%es a%epta#os $a Dip(tesis a$te'nati-a %uando $a %ie'ta es $a nu$a. So$a#ente -a#os a estudia' e$ %ont'aste 0i$ate'a$ pa'a $a #edia.

CO+<R$.<! D! 7IP=<!.I. (I'$<!R$' P$R$ '$ 3!DI$

,i se cumple una de las siguientes Dip(tesis* E$ ta#aKo de $a #uest'a es #ayo' de )F y $a -a'ia0$e si,ue un #ode$o no'#a$. E$ ta#aKo de $a #uest'a es #ayo' de 1FF.

Estudia'e#os e$ si,uiente contrate de hiptesis bilateralG

Ca$%u$a#os $os si,uientes -a$o'esG 1 valor experimental Jue se %a$%u$a a pa'ti' de $a #uest'a.

1 valor terico y es e$ -a$o' Jue en $a dist'i0u%i(n N:F113 de5a a su de'e%Da un *'ea de a$6a;& pa'a un ni-e$ de si,ni6i%a%i(n a$6a. Es e$ -a$o' . Jue de6inCa#os a$a p'in%ipio de$ te#a.

a regla de decisin 6i5ado e$ ni-e$ de si,ni6i%a%i(n1 a$6a1 es $a si,uienteG Si se a%epta $a Dip(tesis a$te'nati-a1 $$e,a#os a $a %on%$usi(n de Jue $a Dip(tesis es %ie'ta. Si se a%epta $a Dip(tesis nu$a1 en 'ea$idad no pode#os a6i'#a'

Jue sea %ie'ta1 sino Jue $a Dip(tesis a$te'nati-a no es %ie'ta1 ya Jue e$ #a',en de e''o' %on e$ Jue se a%epta $a Dip(tesis nu$a es #uy ,'ande.

5ctividad /.. Un eJuipo de psi%($o,os Dan %o#p'o0ado Jue en %ie'ta po0$a%i(n in6anti$1 e$ tie#po :en #inutos3 e#p$eado en 'ea$i.a' dete'#inada a%ti-idad #anua$1 si,ue un #ode$o No'#a$ de p'o0a0i$idad. Un ,'upo de )M niKos1 se$e%%ionados a$eato'ia#ente en di%Da po0$a%i(n1 'ea$i.a'on esa a%ti-idad #anua$ en un tie#po #edio de M1/ #inutos %on una des-ia%i(n tCpi%a #uest'a$ de 11/ #inutos. A pa'ti' de esta in6o'#a%i(n1 pa'a un ni-e$ de si,ni6i%a%i(n de$ 1L :a$6a<F1F13 NpodCa#os 'e%Da.a' $a Dip(tesis de Jue e$ tie#po #edio en $a po0$a%i(n es de O #inutos" Uti$i.a $a es%ena si,uiente.

No pode#os a%epta' $a Dip(tesis a$te'nati-a1 y po' $o tanto no pode#os 'e%Da.a' $a Dip(tesis de Jue e$ tie#po #edio en $a po0$a%i(n es de O #inutos.

5ctividad //. E$ ,e'ente de una e#p'esa se$e%%iona a$eato'ia#ente ent'e sus t'a0a5ado'es una #uest'a de 1MA y anota e$ nP#e'o de Do'as de t'a0a5o Jue %ada uno de e$$os Da pe'dido po' %ausa de a%%identes $a0o'a$es en e$ aKo &FF1. A pa'ti' de $a in6o'#a%i(n o0tenida dete'#ina1 en esos 1MA

t'a0a5ado'es1 un nP#e'o #edio de Do'as pe'didas po' a%%identes $a0o'a$es en e$ &FF1 de )M1/ Do'as. Sa0iendo JueG

donde

'ep'esenta e$ nP#e'o de Do'as pe'didas po' e$ i-7si#o t'a0a5ado'.

a3 NPod'Ca#os 'e%Da.a'1 %on un ni-e$ de si,ni6i%a%i(n de$ 1L $a Dip(tesis de Jue e$ nP#e'o #edio de Do'as pe'didas a %ausa de a%%identes $a0o'a$es en esa e#p'esa du'ante e$ aKo &FF1 6ue de )/ Do'as" 03 NY pa'a un ni-e$ de si,ni6i%a%i(n de$ /L"

Adaptacin de .ara 2icenta Cabalgante Perera de la unidad3

>ttp*??descartes.cnice.mecd.es?(ac>@7C.@2?inferencia@estadistica?index@inferencia.>tm

en If adequate toxicity data on humans do not exist$ then experimental animal data are used as the basis of the assessment$ and an uncertainty factor of .6 is routinely applied to the CO5E). 3he basic assumptions for this uncertainty factor are that the results seen in experimental animals are relevant to humans$ that toxicoEinetic and toxicodynamic differences exist among species$ and that humans are more sensitive than animals at a given mgHEgHday dose or mgHm M concentration. 5 number of authors have tried to quantify this area of uncertainty by investigating the ratios betPeen animals and humans$ and betPeen different animal species for a number of parameters.

Reil$ 0.,. !.7</". ,tatistics vs safety factors and scientific 'udgment in the evaluation of safety for man. 2!armacol. &1$ T;T?TNM. Reil$ 0.,.$ and 9c0ollister$ 4.4. !.7NM". >elationship betPeen short? and long?term feeding studies in designing an effective toxicity test. Agric 'ood 3!em 11$ T@N?T7.. Iactores de Incertidumbre en dosis de medicamentos entre Aumanos y pruebas con animales 4ariabilidad 5e 6nter!uman ,iempre que sea posible$ los datos sobre seres humanos se utilicen para conducir el gravamen de riesgo del noncancer$ de tal modo evitando los problemas inherentes con la extrapolacin de los interspecies. ,i existen los suficientes datos sobre individuos sensibles$ la dosis subliminal se puede estimar directamente$ es decir$ sin la necesidad de un factor de la incertidumbre. ,i no existen los datos adecuados sobre seres humanos sensibles$ se encuentra una incertidumbre que se debe tratar ?ma2s a menudo con un factor .6? fold. Este factor de la incertidumbre asume que ocurre la variabilidad en respuesta a partir de un ser humano al siguiente y que esta variabilidad no se pudo haber detectado en el estudio$ generalmente debido al tama%o de muestra peque%o. Este factor puede tambi&n asumir que existen las subpoblaciones de seres humanos que sean m s sensibles a la toxicidad del producto qumico que la poblacin media. Dourson # .tara 619:3; descri/en un an5lisis de los datos a&udos de la toxicidad en animales de experimento en 49 productos ,u-micos de Aeil 619B2;8 ,ue su&iri ,ue para el cerca de 92C de los productos ,u-micos un factor de diez )eces rindiera una reduccin adecuada de una respuesta mediana . Conclu#eron ,ue un factor de diez )eces para explicar 0o1icol Appl

)aria/ilidad inter>uman fue apo#ado indirectamente8 pero ,ue puesto ,ue los animales de experimento son &eneralmente menos >etero&4neos cuando est5n comparados a los seres >umanos8 el factor de diez )eces no era necesariamente conser)ador. Cala/rese 619:5; encontr diferencias considera/les entre temas >umanos en su capacidad de meta/olizar sustancias extran%eras8 # conclu# ,ue un factor de diez )eces proporcion la proteccin para cerca de : -95C de la po/lacin. !sta conclusin8 sin em/ar&o8 fue /asada en la suposicin ,ue el factor de diez )eces era explicar la &ama total de la )aria/ilidad >umana. 7attis et el al. 619:B; analiza/an 1 1 modems de los par5metros toxicoDinetic indi)iduales para 49 sustancias espec-ficas 6so/re todo dro&as; en los &rupos de adultos cinco o m5s sanos. !stos datos su&irieron ,ue un factor de diez )eces de la incertidum/re considerara el cerca de 9EC de la )ariacin en estos par5metros toxicoDinetic. .in em/ar&o8 estos datos tam/i4n midi la &ama total de la )aria/ilidad >umana en este experimento8 # no el punto medio a la )aria/ilidad >umana sensi/le. .>eeman # "a#lor 6199 ; compararon los cocientes
del 'D

5 del adulto a los mam-feros reci4n nacidos

para 23: productos ,u-micos como medida de )aria/ilidad de los intraspecies. !l cociente mediano era 28E 6adulto a reci4n nacido;. 'os cerca de :EC por de los )alores eran menos ,ue un cociente de diez )eces8 similar a las o/ser)aciones Dourson # .tara 619:3;. !n &eneral8 el )alor prefi%ado de 1 para la )aria/ilidad inter>uman aparece ser protector al comenzar de una respuesta mediana8 o por inferencia8 de un +O$!' asumido para ser de un &rupo medio de seres >umanos. .in em/ar&o8 cuando +O$!'s est5 disponi/le en una su/po/lacin >umana sensi/le conocida8 o si el toxicoDinetics o el toxicod#namics >umano se sa/e con una cierta certeza8 este )alor prefi%ado de 1 se de/e a%ustar o su/stituir por consi&uiente. $nimal to 7uman If adequate toxicity data on humans do not exist$ then experimental animal data are used as the basis of the assessment$ and an uncertainty factor of .6 is routinely applied to the CO5E). 3he basic

assumptions for this uncertainty factor are that the results seen in experimental animals are relevant to humans$ that toxicoEinetic and toxicodynamic differences exist among species$ and that humans are more sensitive than animals at a given mgHEgHday dose or mgHm M concentration. 5 number of authors have tried to quantify this area of uncertainty by investigating the ratios betPeen animals and humans$ and betPeen different animal species for a number of parameters. For example8 (roFn and Fa/ro 619:3; identified t>e loFest effecti)e dose to cause terato&enicit# in animals and >umans for ei&>t c>emicals. Ratios 6animal-to->uman; )ar# from 1.: to 5 8 Fit> a &eometric mean of B. For t>e c>emicals examines8 t>ese aut>ors state t>at >umans appear to /e more sensiti)e8 alt>ou&> t>e difference is &enerall# less t>an an order of ma&nitude. Dourson and .tara 619:3; s>oFed an interspecies ad%ustment factor calculated as t>e cu/ed root of t>e ratio /etFeen t>e assumed a)era&e >uman /od# Fei&>t 6B D&; and animal Fei&>t. $ssumin& t>at suc> an ad%ustment could account for all of t>e differences in animal to >uman extrapolation8 t>en a 1 -fold factor accounts for man# of t>e experimental animal to >uman differences. Ford 6199 ; su&&ests t>at Dinetic and meta/olic data8 F>en a)aila/le8 s>ould /e used in t>e assessment of t>e liDel# >uman >ealt> >azard of reproducti)e toxicants from animal toxicit# data. Cala/rese et al. 61992; and 7oel et al. 619B5; >a)e recommended t>at an uncertaint# factor for animal-to->uman extrapolation and a tec>ni,ue for dose normalization /e considered separatel#. In t>is case8 t>e ad%ustment /ased on /od# Fei&>t mi&>t account for toxicoDinetic differencesG toxicod#namic differences Fould /e addressed /# a separate factor. $n example of t>is recommendation F>ic> mi&>t /e ForDed into t>e existin& su/t>res>old dose met>ods is pro)ided in t>e RenFicD 61993; approac> discussed in t>e next section. Per>aps t>e most promisin& researc> in t>e area is t>at of p>#siolo&icall#/ased p>armacoDinetic 6P(PH; modelin&. .uc> modelin& can ser)e as t>e /asis for replacin& t>e toxicoDinetic component of t>e traditional 1 -fold uncertaint# factor for interspecies extrapolation in noncancer risD

assessment. <>e use of P(PH models for t>is purpose is liDel# to &roF 6Iara/eD 1995a8/;. $&encies suc> as 7ealt> Canada8 IPC.8 and !P$ >a)e positions reflectin& t>e use of reduced interspecies JF F>en dosimetric ad%ustments8 toxicit# data or comparati)e toxicoDinetics are a)aila/le. 'ess-t>an-C>ronic .tudies to C>ronic <>e su/c>ronic-to-c>ronic JF is /ased on t>e assumption t>at an effect seen at s>orter durations Fill also /e seen after a lifetime of exposure8 /ut at loFer doses. <>is factor also assumes t>at effects ma# onl# /e seen after an experimental &roup is exposed c>ronicall#. In fact8 se)eral in)esti&ators >a)e examined su/c>ronic-to-c>ronic ratios of +O$!'s and 'O$!'s8 and t>e a)era&e differences /etFeen su/c>ronic and c>ronic )alues are onl# 2 to 38 F>ile some small percenta&e of c>emicals >a)e ratios t>at exceed 1 -fold 63c+amara8 19BEG Dourson and .tara 19:3G Aoutersen et al.8 19:4G $ida et al. 1992G Hadr# et al.8 1995;. 'eFis 61993; s>oFed an anal#sis of su/c>ronic-to-c>ronic +O$!' ratios /ased on peerre)ieFed literature or information from t>e J... +ational <oxicolo&# Pro&ram. Criteria for inclusion in t>eir anal#sis Fere ri&orous. Of 54 c>emicals considered8 onl# 1: c>emicals Fere anal#zed. Of t>ese8 B:C >ad ratios of 3.5 or less. $ll /ut one of t>ese ratios 61B?1:8 or 94C; >ad ratios of 1 -fold or less. Jnpu/lis>ed ForD in !P$ 6.Fartout8 1995; encompasses more c>emicals t>an descri/ed a/o)e8 /ut t>e criteria for inclusion are not as ri&orous. Despite t>is lacD of ri&or8 >oFe)er8 t>e mean of t>ese unpu/lis>ed ratios lies /etFeen 2- and 3-fold Fit> approximatel# 95C of t>e ratios Fit> )alues of 1 -fold or less. <>e data s>oFn >ere su&&ests t>at t>e routine use of a 1 -fold default factor for t>is area of uncertaint# s>ould /e closel# examined. For example8 s>ort term 62 FeeDs; and su/c>ronic 69 da#s; +O$!'s are often a)aila/le for comparison8 F>ic> can &i)e an indication of t>e possi/le differences in t>e su/c>ronic +O$!' and t>e expected c>ronic +O$!'. 7oFe)er8 F>en suc> data are not a)aila/le8 a 1 -fold uncertaint# factor ma# not /e unreasona/le8 /ut it s>ould /e considered as a loose upper-/ound estimate to t>e o)erall uncertaint#.

'O$!' to +O$!' If a 'O$!' exists on F>ic> to /ase t>e estimation of a su/t>res>old dose8 t>e uncertaint# in t>e +O$!' must /e addressed. $nal#sis of se)eral data /ases su&&est t>at a factor of 1 or loFer is ade,uate and t>at use of data does support a loFer factor Fit> certain c>emicals. For example8 Dourson and .tara 619:3; descri/e ratios of 'O$!'s to +O$!'s of eit>er su/c>ronic or c>ronic exposures /ased on data from Aeil and 3cCollister 619E3;. +inet#-six percent of t>ese ratios >ad )alues of 5-fold or less. Hadr# et al. 61995; also e)aluated t>e uncertaint# factor for 'O$!' to +O$!' extrapolation for se)eral c>lorinated compounds. Ratios Fere 1.4 to :.9 for met>#lene c>loride8 2 to 5 for pentac>lorop>enol8 2 or 4.2 for monoc>loro/enzene8 3.3 or 1 for c>lorp#rifos8 and 1.E or 2.2 for 181dic>loret>ane. <>e aut>ors conclude t>at 91C of t>ese ratios Fere E-fold or lessG all of t>em Fere 1 -fold or less. <>e results of t>e researc> on 'O$!' to +O$!' extrapolation are not extensi)e8 nor unexpected. !xperiments are seldom desi&ned Fit> doses in excess of 1 -fold apart8 leadin& to t>e common statement t>at t>ese ratios depend more on dose spacin& t>an in>erent toxicit#. <>e c>oice of dose spacin&8 >oFe)er8 often reflects t>e %ud&ment on t>e liDel# steepness of t>e dose-response slope8 Fit> steeper slopes resultin& in ti&>ter dose spacin&. <>e data indicate t>at F>en faced Fit> a 'O$!' and not a +O$!'8 t>e c>oice of uncertaint# factor s>ould &enerall# depend on t>e se)erit# of t>e effect at t>e 'O$!'. 3ore se)ere effects s>ould /e %ud&ed to need a lar&er uncertaint# factor /ecause t>e expected +O$!' is furt>er aFa# from t>e 'O$!'. 'ess se)ere effects Fould not re,uire a lar&e factor8 /ecause8 presuma/l#8 t>e 'O$!' is closer to t>e unDnoFn +O$!'.

2.5.1 Cur)as Dsis-Respuesta .i se o/tiene una respuesta de una ma&nitud definida para cada dosis8 dentro de un ran&o de dosis8 se dice ,ue la respuesta es K&radualK. !s decir ,ue a diferentes dosis8 D18 D28...Di8 se o/ser)an los efectos8 !18 !28...!i8

,ue )ar-an en forma continua # tienen un )alor 0nico para cada dosis 6dentro de la )aria/ilidad normal ,ue siempre se o/ser)a cuando se >acen /ioensa#os;. 'a cur)a dosis-efecto se constru#e &raficando en las ordenadas los !fectos 6!; causados en el or&anismo expuesto a una su/stancia ,u-mica # en las a/sisas las Dosis 6D; a las ,ue fue expuesto. .i la experimentacin se >izo con el te%ido /lanco aislado expuesto directamente a la su/stancia8 la respuesta o/ser)ada normalmente es una funcin >iper/lica de la dosis de una forma similar a la ecuacin 3ic>aelis-3enten para expresar la )elocidad inicial de una reaccin enzim5tica. 'a cur)a pasa por el ori&en del sistema de coordenadas cartesianas # la pendiente m5xima se presenta en el ori&en. 'a pendiente permanece aproximadamente constante durante un ran&o amplio de la dosis 6cin4tica de primer orden;8 despu4s la pendiente disminu#e con la dosis >asta ,ue se )uel)e cero 6cin4tica de orden cero; # la respuesta ad,uiere su )alor m5ximo. $ este )alor m5ximo se le denomina efecto m5ximo 6!max; # es una medida de la eficacia del txico. !n al&unas ocasiones8 la relacin dosis-efecto no es tan definida # dentro de una po/lacin se o/ser)a una distri/ucin de respuestas para cada dosis. !n este caso el efecto ,ue se mide no es la ma&nitud8 se mide el porcenta%e de la po/lacin en estudio ,ue presenta una determinada respuesta para cada dosis suministrada. !ste tipo de efecto se le denomina cuantal. !n estos casos se acostum/ra &raficar8 en la ordenada8 el por ciento de la po/lacin ,ue presenta un determinado )alor de la respuesta # en la a/sisa8 el lo&aritmo de la dosis suministrada. !sta cur)a tiene forma si&moidal.

Fi&ura 2.5.1.$.- Cur)a Dosis-Respuesta. a 1.-Re&in +O$!'G 2.-'O$!'G 3.-Re&in 'inealG # 4.-Respuesta 35xima. 'a cur)a pasa por el ori&en 6cuando la dosis es cero8 la respuesta es cero; # a )alores mu# /a%os de la dosis8 la cur)a es >orizontal con un )alor del efecto i&ual a cero 6la cur)a )a so/re el e%e de las dosis;. 'a respuesta empieza a tener un )alor ma#or ,ue cero cuando la dosis lle&a al ni)el l-mite. De all- en adelante la pendiente de la cur)a crece con la dosis8 >asta ,ue se lle&a a una pendiente m5xima. !sta pendiente se mantiene por un amplio ran&o de dosis en el ,ue la respuesta es directamente proporcional a la dosis 6l-nea recta;. $ dosis ma#ores la pendiente empieza a decrecer >asta ,ue la cur)a se )uel)e asinttica a un )alor m5ximo de la respuesta 6!max;. $ la re&in de la cur)a donde los efectos no son medi/les8 se le conoce como re&in +O$!' 6por sus si&las en in&les +o O/ser)ed $d)erse !ffects 'e)el;. 'a re&in lineal de la cur)a a/arca aproximadamente del 1E al :4C de la respuesta m5xima. !l )alor de !max es una medida de la eficacia del txico o la dro&a 6Fi&ura 2.5.1.$;. $l&unas su/stancias presentan relaciones dosis-respuesta diferentes a la descrita # la cur)a no tiene la forma de .. 7a# compuestos peli&rosos ,ue presentan dos cur)as dosis-efecto8 una cur)a ,ue representa efectos txicos # otra los efectos letales. Cuando se aumenta el ni)el de la dosis8 se pasa de una 5rea de la cur)a en la ,ue no se o/ser)an efectos daLinos a otra donde se o/ser)an efectos txicos

crecientes. Cuando se aumenta a0n m5s la dosis se presentan los efectos letales crecientes ,ue tam/i4n se relacionan con la dosis en la misma forma ,ue los efectos anteriores. 'as dos cur)as son paralelas 6Fi&ura 2.5.1.(;.

Fi&ura 2.5.1.(. Cur)a Dosis-Respuesta. Compuesto ,ue presenta las dos cur)as. 1M cur)a de dosis-efectos txicosG # 2M cur)a de dosis-efectos letales.
&./.1.1 Poten%ia -s. E6i%a%ia

Potencia se refiere al ran&o de dosis dentro del cual una su/stancia produce respuestas crecientes. 'a cur)a del txico 6o dro&a; m5s potente aparece m5s cercana al ori&en.

Fi&ura 2.5.1.C.- Potencia # !ficacia de 3 Compuestos.

'a potencia de un dro&a est5 influenciada por factores tales como la a/sorcin8 el meta/olismo8 etc. 'a eficacia est5 relacionada a una accin m5s fundamental de la dro&a8 es una medida de la capacidad intr-nseca de la dro&a para producir un efecto. !ste )alor se estima midiendo la altura m5xima de la cur)a dosis-respuesta 6cuando la cur)a se )uel)e asinttica a las a/sisas; #8 como #a )imos anteriormente8 se le denomina ! max. Dos dro&as ,ue son cualitati)amente i&uales en producir un efecto particular pueden diferir en su eficacia8 en su potencia8 o en am/as 6Fi&ura 2.5.1.C;. !l compuesto 1 es m5s potente ,ue el compuesto 28 # el compuesto 2 es m5s potente ,ue el compuesto 3G los compuestos 1 # 2 tienen i&ual eficacia8 pero el compuesto 3 es menos eficaz ,ue 1 # 2 .