ANTICUERPOS MONOCLONALES (mAb)

Por: Sofa Jaramillo Q.

OBJETIVOS
GENERALES: ESPECFICOS:

Aprender generalidades sobre los Ac. Monoclonales.

Extrapolar los conocimientos adquiridos. Reconocer la importancia del desarrollo cientfico en el diagnstico, la teraputica y la investigacin mdica.

CONOCIMIENTOS PREVIOS
Ac: concepto, estructura, origen, tipos. Acciones desencadenadas por el dominio Fc de los Ac. Naturaleza monoclonal y policlonal. Mieloma. Hbrido. Generalidades sobre la tcnica de la clonacin.

COMPARACIN ANTISUERO vs. AC. MONOCLONAL

GENERALIDADES

CONCEPTO

Un Ac. Monoclonal es un Ac. especfico para un solo determinante o eptopo.

HISTORIA

1994 1975 1963 1960 1959

Burnet Teora de la Seleccin Clonal Monoclonalidad (Ag. conocido) Mieloma (Ag. desconocido) Potter Induccin de mielomas en ratones por un aceite mineral Transplante in vivo y crecimiento in vitro (clonacin y mutacin) Littlefield Aislamiento por medio de cultivos selectivos lneas celulares fusgenas mutantes George Khler y Csar Milstein Proceso de inmortalizacin de los LB: Hibridoma=LB+Clulas Mielomatosas Primer Ac. monoclonal autorizado para uso clnico.

PRODUCCIN

PRODUCCIN DE HIBRIDOMAS SECRETORES DE AC. MURINOS

INMUNIZACIN FUSIN/TCAS. DE ING. GENTICA SELECCIN EN MEDIO HAT CARACTERIZA CIN DEL AC
SUBCLONACIN

CONGELACIN

CULTIVO MASIVO

Propiedades del Ag.: Naturaleza qumica To. mol. relativo Aplicacin de Coadyuvantes Expectativas para el Ac. Ratones BALB/c, ratas, hmsters

3-4 das despus de la ltima inmunizacin LB (linfoblastos) Clulas mielomatosas Agente fusgeno: Virus Sendai isolecitina Polietilnglic ol (PEG)*: origen, pureza, condiciones del medio: pH, temperatura, buffer

Eficiencia de clonacin Enriquecimien to del medio mediante glucosa y una suspensin de clulas del bazo de un animal histocompatibl e no inmune Crecimiento SOLO de los hbridos (1014 das despus de la fusin): ELISA Aglutinacin IFI FACS

Dilucin lmite Hbrido secretor de > proliferacin que el hbrido no secretor

Medio Citoprotector N2 lquido Clulas parentales Reclones

in vitro: Cultivo estacionario en botella roller Encapsulaci n en alginato de Na+ Perfusin de fibras huecas Biorreactores de burbujeo de agitacin constante in vivo: Tumores secretores de lquido asctico (Plasmocitom as): Irradiacin Tto. con aceite mineral

PRODUCCIN DEL HIBRIDOMA

Induccin de mielomas en el ratn

HIBRIDOMAS (BIOLOGA+GENTICA)

Uso de cultivos in vitro selectivos

Fusin de clulas somticas

CARACTERSTICAS DEL HIBRIDOMA

Expresin de Ac. codominante.

Ac. que ya se producen. Lnea secretora + Lnea no secretora*= Produccin mutua.

Clulas de mieloma produce Ac. por fusin con LB.

TIPOS DE HIBRIDOMAS

Heterohibridomas

Hibridomas Humanos

MEDIO HAT

DESAFOS EN LA PRODUCCIN
Medios de cultivo no aptos para Clulas Plasmticas. Cantidades limitadas de Ac.

NOMENCLATURA POR SU TIPO

NOMENCLATURA POR SU FUNCIN

TIPOS

MURINO Hibridoma de ratn Limitaciones: Difcil interaccin entre el fragmento Fc murino y el receptor celular humano Corta vida media Produccin de HAMA

QUIMRICO

HUMANIZADO Transferencia de las regiones determinantes de la complementariedad de los Ac. del ratn a una Ig humana Limitaciones: Produccin de HAMA

HUMANO

Regin variable murina Regin constante humana Limitaciones: Produccin de HACA

Cultivos bacterianos (tecnologa de ADN recombinante) Ratones transgnicos

CLASIFICACIN DE ACUERDO A LA ACCIN

BLOQUEADORES DEL TNF

Anakinra

ANTIINTERLEUKINAS

ANTI-CD

ANTI-INTEGRINAS

ANTI RECEPTORES DE MEMBRANA

DESAFOS DE LOS HIBRIDOMAS HUMANOS

Fuente de LB. Ausencia de lneas mielomatosas de humanos con crecimiento estable Ac. Quimricos.

IMPORTANCIA

IMPORTANCIA

Ac. Producidos in vitro. Especificidad definida (nivel eptopo). Cantidades ilimitadas no variantes en el tiempo.

APLICACIONES

UTILIDAD
ASPECTOS RAMAS Biologa
Biotecnologa:

Anlisis en Investigacin Bsica Anlisis en Investigacin Aplicada.

Medicina
Inmunologa
Inmunoontogenia:
CD3, CD4, CD8 MHCI, MHCII

Inmunodiagnstico Inmunoterapia

Patologa

APLICACIONES
Purificacin y caracterizacin de receptores de hormonas y factores de crecimiento, con sus respectivos ligandos. Estudio de vas metablicas (ez.). Estructura y funcin de numerosas protenas (grupos sanguneos, MHC). Conocimiento y organizacin del citoesqueleto y de la matriz extracelular.. Desarrollo embrionario. Monitoreo de drogas teraputicas. Determinacin de Ag. relacionados con enfermedades infecciosas. Identificacin de marcadores tumorales.

APLICACIONES
Construccin de biosensores, tiles en las industrias:
Farmacutica Alimenticia Petroqumica

Posibilidad de utilizarlos como enzimas (Ac. catalticos o Abzimas) Generacin de:

Ac. monoclonales inmunosupresivos (tto. enf. autoinmunes, prevencin y tto. del rechazo en transplantes) Sondas de localizacin de tumores y mts. Inmunotoxinas. Ac. monoclonales para el tto. de:
Inf. bacterianas CA

INDICACIONES APROBADAS
Enf. Autoinmunes:

Enf. Alrgicas:

Enf. Inflamatorias Crnicas:

Enf. Inflamatoria Intestinal (Colitis Ulcerosa y Enf. de Crohn)

Enf. Hematolgicas:

Oncologa:

Artritis reumatoide

Tumores Slidos: Linfoma Folicular

CA de mama mts. CA de colon quimiorrefractario Ca de colon mts

Espondilitis anquilosante

Asma

Psoriasis

Enf. de Behcet

PERSPECTIVAS DE FUTURO

ANEXOS

CONSULTAR

Cmo se demuestra que los Ac, producidos en contra de un determinante Ag. nico son heterogneos? Cul es el mecanismo de fusin de los virus Sendai? Investigue el nombre de protenas transportadoras o carriers de inmunogenicidad probada. Cules son las lneas de fusin ms utilizadas para la fusin de hibridomas de ratn? Por qu se deben emplear linfoblastos para conseguir la fusin? Por qu el proceso de fusin es de bajo rendimiento y requiere de una posterior clonacin? En qu rgano linfoideo se procede a la fusin y por qu? Haga un cuadro de doble entrada comparando las caractersticas de avidez y afinidad de los Ac (Recuerden que de ello depende la seleccin del mtodo de revelado, si poseen mayor afinidad por su Ag., se emplea el EIA o RIA; mientras que si son ms vidos, se prefiere la Aglutinacin) Qu es la HAMA (Respuesta de Ac. Humanos Antimridos), qu patologa se puede producir, qu es HACA? Realice un cuadro de entrada mltiple en el que se detallen las ventajas y desventajas de los Ac. Monoclonales y Ac. Policlonales. El antisuero est formado por Ac. Monoclonales o por Ac. Policlonales? Justifique su respuesta.

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