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OBJETIVOS
GENERALES: ESPECFICOS:
Identificar los procedimientos de laboratorio que se emplean para evaluar la inmunidad celular. Esquematizar las fases del estudio de la inmunidad celular en los procedimientos de laboratorio. Definir los criterios clnicos para la solicitud de stos anlisis.
Identificar los procedimientos de laboratorio que permiten la valoracin de la inmunidad celular in vitro.
CONOCIMIENTOS PREVIOS
Desarrollo, diferenciacin, propiedades particulares y funciones de los Monocitos, Neutrfilos, Basfilos, NK, LT y LB.
Ac. Monoclonales
SEPARACIN
IDENTIFICA CIN
RECUENTO
VALORACIN FUNCIONAL
M. Fsicos Fycoll-Hypaque Adhesin selectiva Ms: vidrio, plstico LB, LT: nylon, algodn M. Inmunoqumicos Poblaciones Subpoblaciones
Cualitativa M. Inmunoqumico Clulas Formadoras de Rosetas Cuantitativa M. Fsicos S. Magntica S. Por afinidad de columnas M. Inmunoqumico -Globulina Antihumana Citometra de Flujo con FACS
Test de Actividad Fagoctica Directa Indirecta P. De Proliferacin Celular Ensayo de Proliferacin Reaccin linfocitaria mixta LT-CD4 Prueba del IFN- ELISPOT Citometra de Flujo (Citoquinas internas) LT-CD8 y NK ADCC
MATERIALES
SUSTRATO CELULAR: Citologa: Suspensiones frescas de sangre (plasma) * Histologa: Usual: Puncin M.O.* Transoperatorios Biopsias Post mortem Especial: Punciones de extraccin de lquido
TCNICA HISTOLGICA
PROCEDIMIENTOS
OBTENCIN DE LA MUESTRA
PROCESAMIENTO
FIJACIN
INCLUSIN
CORTE
COLORACIN
ANLISIS
SEPARACIN
AISLAMIENTO POR CENTRIFUGACIN EN GRADIENTE DE DENSIDAD: TCNICA FICOLL-HYPAQUE SEPARACIN POR ADHESIN SELECTIVA
Los linfocitos B se fijan a columnas o jeringas en lana de nylon o algodn (se obtienen poblaciones separadas de LB y LT)
TCNICA FICOLL-HYPAQUE
ADHESIN SELECTIVA
LT M s
IDENTIFICACIN
Cualitativa
M. Inmunoqumico
Clulas Formadoras de Rosetas
Cuantitativa
M. Fsicos
S. Magntica S. Por afinidad de columnas Cargas elctricas (LB , LT) Aglutininas Man: Timocitos inmaduros Soja: LB
M. Inmunoqumico
CD -Globulina Antihumana Citometra de Flujo con FACS
MTODOS FSICOS
MAGNTICA
POR AFINIDAD DE COLUMNAS
Ag para LT
Produccin de Ac. a los globulina+ fluorocromo LT Identificacin de los marcadores de LT por el antisuero resultante
Timocitos, LT sp., LT cultivo cont., LT leucmicos cabras o conejos Hibridoma murino Demostracin de especificidad
IF Directa Microscopio de fluorescencia Citmetro de flujo* Tincin vital con azul trpano Anlisis de liberacin de Cr51 (RIA)
Timocitos NK
LT supresores/ctx. NK
RECUENTO
Microscopa de fluorescencia
Citometra de flujo
IF
RIA
CITOMETRA DE FLUJO
PROCEDIMIENTO: RESULTADOS:
Reticulocitos Deteccin de Ig. Relacionadas con Px. Pruebas cruzadas en transplantes Citogentica
VALORACIN FUNCIONAL
Test de Actividad Fagoctica Prueba de Proliferacin Celular
Migracin
LT-CD4
LT-CD8 y NK
LT-CD8: Determinacin de lisis celular (CMHI)Cr51
ADCC
Ingestin
Clulas+Ac
Digestin
Degranulacin: Fagocitosis frustrada Muerte Intracelular: NBT, Quimioluminiscen cia, 502 de S. aureus
ELISPOT
ACTIVIDAD FAGOCTICA
PROLIFERACIN CELULAR
ENSAYO DE PROLIFERACIN REACCIN LINFOCITARIA MIXTA
LT-CD8: CITOTOXICIDAD
NK Y CLULAS TUMORALES
ADCC
IMPORTANCIA
FISIOLGICA
Inmunidad antiinfecciosa
PATOLGICA
Trastornos de inmunodeficiencia
Inmunidad transfusional
Inmunidad tumoral Enfermedades autoinmunitarias
AVERIGUAR
Nombres de mitgenos especficos. Importancia del cultivo mixto linfocitario en la medicina transfusional. Lneas de clulas tumorales empleadas en los ensayos de laboratorio para la valoracin de la actividad de los NK. Citoquinas implicadas en la :
Migracin Adherencia Lisis mediada por Ms.
Indique la importancia de la citometra de flujo en la estadificacin del VIH. Consultar las causas de variacin (en y en ) de la relacin LT-CD4/LT-CD8. Seale las diferencias entre Th1 y Th2. Enumere los Ag. Relacionados con clulas leucmicas.
BIBLIOGRAFA
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