UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO PETRUS MAGNUS AMARAL GALVO BIOACUMULAO DE SUBSTNCIAS TXICAS PERSISTENTES POR BIVALVES MARINHOS:

IMPLICAES PARA A MARICULTURA E MONITORAO AMBIENTAL

RIO DE JANEIRO 2012

Petrus Magnus Amaral Galvo BIOACUMULAO DE SUBSTNCIAS TXICAS PERSISTENTES POR BIVALVES MARINHOS: IMPLICAES PARA A MARICULTURA E MONITORAO AMBIENTAL

Tese de doutorado apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Biofsica (Biofsica Ambiental), Instituto de Biofsica Carlos Chagas Filho, Universidade Federal do Rio de Janeiro, como parte dos requisitos necessrios para a obteno do ttulo de doutor em Cincias Biolgicas (Biofsica Ambiental)

Orientador: Olaf Malm Rio de Janeiro 2012

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Galvo, Petrus Magnus Amaral. Bioacumulao de Substncias Txicas Persistentes por bivalves marinhos: implicaes para a maricultura e monitorao ambiental \ Petrus Magnus Amaral Galvo. Rio de Janeiro, 2012. x, 228f.: Il. Tese (Doutorado em Cincias Biolgicas Biofsica Ambiental) Universidade Federal do Rio de Janeiro, Instituto de Biofsica Carlos Chagas Filho, 2012. Orientador: Olaf Malm 1. Biomonitoramento 2. Contaminao 3. Organoclorados Teses. II. Malm, O. (Orient.) II. Universidade Federal do Rio de Janeiro. Instituto de Biofsica Carlos Chagas Filho. III. Ttulo. CDD:

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Petrus Magnus Amaral Galvo BIOACUMULAO DE SUBSTNCIAS TXICAS PERSISTENTES POR BIVALVES MARINHOS: IMPLICAES PARA A MARICULTURA E MONITORAO AMBIENTAL Tese de doutorado apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Biofsica (Biofsica Ambiental), Instituto de Biofsica Carlos Chagas Filho, Universidade Federal do Rio de Janeiro, como parte dos requisitos necessrios para a obteno do ttulo de doutor em Cincias Biolgicas (Biofsica Ambiental) Rio de Janeiro, 10 de maro de 2012

_______________________________________ (Olaf Malm, Ph.D. Universidade Federal do Rio de Janeiro)

_______________________________________ (Ricardo Erthal Santelli, Ph.D. Universidade Federal do Rio de Janeiro)

_______________________________________ (Flavio da Costa Fernandes, Ph.D Instituto Almirante Paulo Moreira )

_______________________________________ (Josino Costa Moreira, Ph.D. Fundao Oswaldo Cruz )

_____________________________________ (Joo Paulo Machado Torres, Ph.D. Universidade Federal do Rio de Janeiro)

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Sr. Arinaldo, pescador de Sepetiba (Ilha da Madeira), me dando uma carona em seu caco.

O resultado destes quatro anos de trabalho eu dedico s comunidades tradicionais de pescadores espalhadas por este extenso e rico litoral brasileiro. Minha dedicatria aos mestres do mar que assistem devastao dos ecossistemas marinhos, e com isso, de suas culturas tradicionais, sem terem foras para remar contra a mar do famigerado desenvolvimento econmico. v

AGRADECIMENTOS Agradeo ao Professor Olaf Malm pela oportunidade que me concedeu para eu seguir com meus estudos no Laboratrio de Radioistopos Eduardo Penna Franca. Agradeo principalmente pelos ensinamentos que no encontramos nos livros e artigos cientficos. Agradeo-te Prof. Olaf pelos inmeros exemplos que pode me oferecer de como um profissional da cincia lida com suas barreiras e dificuldades. Agradeo pelos ensinamentos de como enxergar a frente, e trabalhar no presente para alcanar a meta. A oportunidade que tive de ouvir sua leitura sobre as situaes, sempre de forma integral e pragmtica, realmente me enriqueceu muito como pessoa e profissional. Por essas e tantas outras, sou muito grato. Ao Professor Joo Paulo Machado Torres por suas inmeras contribuies em todos os momentos, e para todas as necessidades. Meu muito obrigado "biblioteca ambulante" do Laboratrio de Radioistopos, por todos os ensinamentos. Ao sempre presente "ouvido", que sempre com toda a ponderao, me mostrou os caminhos da resoluo acertada. Como outros j disseram neste momento, obrigado por ser o "Joo". Ao Professor Jean Remy Davee Guimares por suas sempre atenciosas e criteriosas contribuies para as mais variadas questes que eu pudesse levar a ele. Obrigado pelas contribuies na defesa do projeto de tese. Gr-Jean!!! Obrigado pelos papos descontrados nos intervalos e pelas leituras interessantssimas de sua coluna "Terra em Transe". Ao Professor Jos Lailson-Brito por me apresentar a proposta inicial desta tese, pelas contribuies na defesa do Projeto de Tese, e nas anlises descriminantes. Valewww Z!!!! Ao Professor Paulo Dorneles pelo exemplo de objetividade e produtividade que um pesquisador precisa aprender. Ao Professor Mauro Rebelo meu muito obrigado pelas eternas lies nos meus passos iniciais na cincia, e pelas sempre calorosas discusses cientficas. Ao Professor Karl-Werner Schramm, pela recepo em seu laboratrio no Helmholtz Zentrum (Institut fr kologische Chemie) em Munique, onde sempre procurou prover tudo o necessrio para a realizao deste trabalho. Obrigado tambm a toda sua equipe: Silke Bernhf, Josie Kunze, Norbert Fischer, Claudia Corsten, Bernhard Henkelmann, Marchela Pandelova, Walkiria Levy Lpez, Gerd Pfister. Pessoas que de fato contriburam em todas as etapas que permitiram a gerao dos dados de STP nas amostras ambientais. Agradecimento especial ao Professor Wolfgang Christian Pfeiffer, pessoa que eu tive o enorme prazer de ter tido a oportunidade de conviver no laboratrio de Radioistopos Eduardo Penna Franca (LREPF). Obrigado pelos ensinamento da absoro atmica de chama, pelas sugestes e incentivos na minha linha de pesquisa. Ademais, serei eternamente grato pela "chamada" que tomei antes de embarcar para Munique. Meu muito obrigado ao "velho lobo"!!!! Ao corpo discente do Instituto de Biofsica Carlos Chagas Filho (IBCCF), que sempre recebem de portas abertas em seus laboratrios, prontos para colaborar da melhor forma possvel. Ao corpo tcnico-administrativo do IBCCF, profissionais que inspiram o melhor sentido do funcionalismo pblico, fazendo qualquer brasileiro se orgulhar destes servidores pela excelncia do servio que prestam. Obrigado por terem feito este trabalho possvel. Agradeo aos incontveis alunos de iniciao cientfica e de ps-graduao que j passaram e que ainda esto no LREPF. Obrigado pela inmeras lies e aprendizados vi

cientficos, e de convivncia, alm das boas horas de papo no almoo e na hora do suco da tarde. Agradecimento especial ao Renan Thiago Laynes Longo por me dar a oportunidade de entender um pouco mais o sentido da frase "aprende quem ensina". Obrigado por sua confiana, e principalmente pela parceria no perrengue do trabalho de campo pesado!!! Ao responsvel tcnico do LREPF, Sr. Ricardo Thomaz, grande figura humana, e profissional gabaritado, que colaborou em diversas instncias para a concretizao deste trabalho, mas como minha formao profissional. Valew Ricardinho!!!!! Ao recm chegado funcionrio da UFRJ, locado no LREPF, Sr. Adan Lino. Obrigado pela oportunidade de desenvolvermos trabalhos em conjunto!!! Valew Ado!!! Chegar em um pas com cultura e lngua completamente estranhos, no foi tarefa fcil, e algumas pessoas que ainda no foram citadas aqui, mas que me ajudaram a superar essa dificuldade, merecem meu agradecimento neste momento: Joana Barbosa, Geza Kocsis, Ana Lilia e Nghia Nguyen. Agradecimento ao maricultor da Praia de Jurujuba, Sr. Glauco, pela parceria na realizao do trabalho de campo na Baa de Guanabara. Tambm agradeo ao maricultor da Praia do Forno em Arraial do Cabo, o "Sr. Pingo", e liderana local, Sra. Adriana Saad. Agradecimento tambm especial ao Projeto POMAR (Povoamento Marinho) do Instituto de Ecodesenvolvimento da Baa de Ilha Grande (IEDBIG), que, capitaneado pelo mega empreendedor Sr. Jos Luiz Zaganelli, apoiou de forma irrestrita a realizao do trabalho de campo em Angra dos Reis. Minha enorme gratido ao pessoal do projeto que, mesmo as vezes comprometendo o andamento normal dos seus trabalhos, sempre fizeram o possvel e o impossvel para viabilizar a realizao do campo na enseada da Biscaia. A Universidade Castelo Branco pela parceria estabelecida, por permitir que utilizssemos a estrutura de cultivo na Praia Grande na Ilha de Itacuru. Agradeo ao Conselho Nacional de Pesquisa (CNPq) pela bolsa de doutorado no Brasil, e Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Ensino Superior (CAPES) pela bolsa na Alemanha (PROBRAL - 270/07); Por ltimo, mas no menos importante, quero agradecer a Professora Luciana Romo, por toda as conversas onde me passou um pouco de suas experincias acadmicas, o qu muito me valeu. Tambm quero agradecer a minha amiga e companheira Luciana Romo pelas horas de lazer, por sua alegria e pelos momentos divertidos que tive o imenso prazer de desfrutar ao seu lado. E ainda, meu agradecimento mais carinhoso a minha namorada Luciana Romo, que meu vernculo incapaz de transmitir os sentimentos que cultivo por esta mulher.

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"O melhor resultado surgir quando cada elemento do grupo fizer o que melhor para si e para o grupo" John Forbes Nash Jr. viii

RESUMO A presena de contaminantes nos ambientes costeiros torna o pescado produzido nestas reas um potencial agente de transferncia de compostos txicos para os humanos, atravs do consumo desta importante fonte de protenas. Entre os contaminantes que so lanados nos ecossistemas marinhos, esto as chamadas Substncias Txicas Persitentes (STP). Dois grupos de contaminantes das STP foram objetos de estudo desta tese: as bifenilas policloradas (PCB), e os pesticidas organoclorados (OCP). Os moluscos bivalves tm sido utilizados como modelos biolgicos para monitorar a dinmica destes contaminantes no ambiente. No Brasil, o mexilho marinho Perna perna produzido em quantidade expressiva. Outro bivalve que tambm produto da maricultura nacional o coquille Nodipecten nodosus. Esta tese investigou a presena e a distribuio de OCP e PCB, em sistemas de cultivo destes dois bivalves marinhos. As reas de estudo foram plos de maricultura do litoral do Estado do Rio de Janeiro (RJ), envolvendo duas reas tidas como no impactadas (Baa de Ilha Grande BIG, e Arraial do Cabo AC), e duas com histrico de contaminao (Baa de Guanabara BG, e Baa de Sepetiba - BS). Em uma primeira abordagem, o ndice de condio (IC) foi utilizado para se avaliar o potencial de produtividade dos mexilhes cultivados na BG, BS e BIG. Nove mtodos de clculo do IC selecionados da literatura foram testados. Em oito meses de amostragens, dentro de um perodo de dez meses, os maiores valores de IC obtidos foram observados para os meses de dezembro e de janeiro, enquanto que os menores para os meses de setembro e agosto. A BS foi a que apresentou os maiores valores de IC, seguida da BG e da BIG. O segundo foco desta tese foi uma avaliao toxicolgica dos mexilhes e dos coquilles produzidos no litoral do RJ. Os organismos foram coletados em maro e setembro de 2009, da BG, BS, BIG e AC. Sendo que os coquilles foram obtidos apenas em AC, e na BIG. Foram quantificados 28 OCP e 18 PCB, de trs amostras compostas, de cada local de coleta/ms, injetando os extratos em sistema de espectroscopia de massa acoplado a um cromatgrafo a gs. Foi possvel diferenciar os perfis de acmulo das STP, entre os animais de diferentes procedncias, revelando a capacidade dos bivalves em refletir as diferentes exposies ambientais dos lugares, e do tempo. Os mexilhes mostraram maior risco toxicolgico para o consumo humano, quando comparado com os de coquilles. Contudo, os animais analisados nesta tese apresentaram concentraes seguras para consumo humano, com relao aos contaminantes quantificados no presente estudo. Na estimativa de consumo necessrio para se alcanar os limites de segurana recomendados, o p,p' DDT foi o que se mostrou mais preocupante. Porm, para uma criana de 30 kg atingir o limite de ingesto de p,p' DDT, seria necessrio consumir 342 mexilhes. A ltima abordagem desta tese foi dedicada avaliao do P. perna como organismo sentinela para a monitorao ambiental de STP. Para isso, sedimento superficial de fundo, slidos em suspenso (SS) e mexilhes foram coletados em trs locais: BG, BS, e BIG. As amostragens foram feitas nos meses de dezembro de 2008, e fevereiro de 2009. O SS foi obtido com coletores do tipo armadilha (sediment trap) e o sedimento com draga de Eckman. As concentraes de OCP e PCB foram determinadas em cada um destes compartimentos. Dois experimentos transplantes foram realizados, levando mexilhes da BG, para a BS, e de BG para BIG, onde os animais permaneceram por 30 dias. As concentraes de STP no sedimento e no SS ficaram em nveis comparveis, porm as observadas nos mexilhes tenderam a ser maiores. A variao das concentraes de PCB no sedimento mostrou influncia significativa na variabilidade das concentraes de PCB nos mexilhes. Os maiores fatores de concentrao sedimento-biota foram observados para os compostos com menores Kow. As concentraes de OCP e PCB no mexilho, sedimento e SS foram maiores na BG, quando comparadas com as observadas na BS e na BIG. Apesar da maior exposio ambiental a OCP e PCB na BG no foi possvel perceber com clareza a reduo nas concentraes dos compostos quantificados nos mexilhes transplantados para BS e para BIG, exceto para p,p' DDD e p,p' DDE. ix

ABSTRACT The presence of contaminants in the coastal environments, make the seafood produced in these areas, a potential pathway of toxic substances to the human beings. Among the contaminants that are released in the marine ecosystems, there are the Pesistent Toxic Substances (STP). Two groups of contaminants of the STP were objects of study of this thesis: the polychlorinated biphenyls (PCB), and the organochlorinated pesticides (OCP). The mollusks bivalves have been used as biological models for monitoring the dynamic of these contaminants in the environment. In Brazil, the marine mussel Perna perna is widely and expressively exploted all along the coast. Another bivalve that is also a product of the national mariculture is the scallop Nodipecten nodosus. This thesis studied the presence and the distribution of OCP, and PCB, in rearing systems of these two bivalves. The studied areas were mariculture poles in the coast line of the Rio de Janeiro State (RJ), including two areas that are considered as a reference site for a non impacted site (Ilha Grande Bay BIG, and Arraial do Cabo AC), and two historically contaminated (Guanabara Bay BG, and Sepetiba Bay - BS). In a first approach, the condition index (IC) was employed to assess the potential production of the mussels reared in the BG, BS and BIG. Nine methods to calculate the IC were selected from the literature. Sampling during eight months, along a period of ten months, the highest IC values were observed in the months of December and January, whereas the lowest values were in the months of September and August. Mussels from BS showed the highest values of IC, followed by those from BG, and from the BIG. The second focus of this thesis was a toxicological evaluation of the mussels and scallops reared in the Rio de Janeiro coastline. The sampling was performed in March and September 2009, in the BG, BS, BIG and AC. Scallops were sampled only in AC and BIG. 28 OCP and 18 PCB were quantified in three composites samples, containing five individuals each, from each sampling site / month. Extracts were inject in a mass spectrometer coupled with a gas chromatographie system. It was possible to distinguish the STP accumulation profiles, among animals from distinct origins, revealing the bivalves capacity to reflect the different environmental expositions of the sites, and sampling time. Mussels posed the highest toxicological risk to the human consumption, when compared with the observed to coquilles. However, the animals analyzed in this thesis showed concentration in a safety level for human consumption, regarding the contaminants here quantified. In the estimative of the required amount to be consumed to reach the recommended security limits, the p, p' DDT was the chemical that was more worrying. However, for a child of 30 kg body mass reaching the consumption limit of p, p' DDT, would be necessary to consume 342 mussels. The last approach of this thesis was dedicated to the evaluation of the mussel P. perna as a sentinel for the environmental monitoring of STP. In this proposal, superficial bottom sediment, suspended solids (SS), and mussels, were sampled in three sites: BG, BS, and BIG. Sampling were performed in December 2008, and February 2009. The SS was sampled by disposing sediment traps, and the sediment with Eckman's dredge. The concentrations of OCP and PCB were determined in each one of these matrixes. Two transplant experiments were carried out, taking mussels from BG to BS, and from BG to BIG, where the animals remained for 30 days. The STP concentrations in mussels showed a tendency to be higher than the observed in sediment and in SS, that were in comparable levels. The concentrations variability of PCB in the sediment showed significant influence to the variability of the PCB concentrations in the mussels. The highest biota-sediment accumulation factor (BSAF) were observed for the chemicals with lower Kow. The concentrations of OCP and PCB in mussel, sediment and SS were higher in the BG, when compared to those observed in the BS, and BIG. Despite the higher environmental exposition to OCP and PCB in BG, the transplanted mussels did not show a clear concentration reduction for the majority of the quantified chemicals, in exception for p,p' DDD and p,p' DDE x

SUMRIO 1. Introduo 1.1. A interface do ambiente terrestre com o marinho 1.2. Contaminao ambiental e a produo de pescado. 1.3. Substncias txicas persistentes nas cadeias trficas 1.4. Mtodos de estimativa do risco toxicolgico em alimentos 1.5. Moluscos bivalves: de alimento humano a sentinelas da contaminao ambiental 1.6. Os compartimentos ambientais na dinmica dos contaminantes nos ecossistemas aquticos 2. Hipteses 3. Objetivos 3.1. Objetivos especficos 4. rea de Estudo 1 1 4 8 12 16 22 23 24 25 26

5. Captulo I. Estimativa das variaes sazonais sobre o potencial de produo do mexilho Perna perna (Linnaeus, 1758) cultivados em trs baas tropicais usando diferentes mtodos de ndice de condio. 31 5.1. Introduo 5.2 Material e mtodos 5.3. Resultados 5.4. Discusso 5.5. Consideraes gerais 6. Captulo II - Ensaios Metodolgicos 6.1. Introduo 6.2. Material e mtodos 6.2.1. Coleta dos slidos em suspenso (SS) 6.2.2. Extrao de STP nas matrizes ambientais 6.2.3. Determinao das concentraes de STP nos bivalves e controle de qualidade 31 33 36 42 47 49 49 51 52 55 61

6.3. Resultados e discusso 66 6.3.1. Comparao entre amostras liofilizadas e no liofilizadas 66 6.3.2. Variabilidade das concentraes de STP entre rplicas de mexilho P. perna 73 6.3.3. Comparao das concentraes de STP em amostras de SS coletadas em coletores de PET e de alumnio 77 6.4. Consideraes gerais 81

7. Captulo III: Perfis de bioacumulao diferenciados de pesticidas e de compostos relacionados com dioxinas em moluscos bivalves cultivados em baas tropicais poludas e no poludas: risco de consumo e efeito sazonal 82 xi

7.1. Introduo 7.2. Material e mtodos 7.2.1 Desenho amostral e processamento dos tecidos 7.2.2. Extrao das STP dos bivalves 7.2.3. Estimativa de risco toxicolgico do consumo humano de bivalves 7.2.4. Tratamento dos dados 7.3. Resultados e discusso 7.3.1. Distribuio espacial e temporal dos contaminantes 7.3.3. Estimativa de toxicidade 7.4. Consideraes finais

82 83 83 85 85 87 87 90 110 112

8. Captulo IV - Avaliao do mexilho P. perna como organismo sentinela para monitorao ambiental de Substncias Txicas Persistentes. 114 8.1. Introduo 8.2. Material e mtodos 8.2.1. Coleta das amostras 8.2.2. Experimento de transplante 8.2.3. Clculo do fator de bioacumulao biota-sedimento (BSAF) 8.2.4. Quantificao das STP e tratamento dos dados 114 118 118 120 120 121

8.3. Resultados e discusso 124 8.3.1. Concentraes de STP nos mexilhes P. perna 125 8.3.2. Concentraes de STP no sedimento superficial de fundo 132 8.3.3. Concentraes de STP nos slidos em suspenso (SS) 142 8.3.4. Comparao entre as concentraes de STP no sedimento, no SS e nos mexilhes P. perna 150 8.3.5. Fator de bioconcentrao biota-sedimento (BSAF) 163 8.3.6. Comparao entre as concentraes de STP das trs reas de estudo 169 8.3.7. Experimento Transplante 171 8.4. Consideraes finais 9. Concluses gerais REFERNCIAS 182 185 187

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LISTA DE FIGURAS Figura 1: Esquema ilustrativo do sistema de cultivo de mexilho do tipo Long-line. As ncoras no leito marinho fixam e esticam o Long-line, que fica suspenso por bias (geralmente de plstico). As cordas mexilhoneiras so ento amarradas entre as bias, permanecendo entre 8 e 12 meses. ............................................................................................. 4 Figura 2: Mexilho Perna perna aberto, com suas valvas separadas. O tecido com colorao vermelho-tijolo a gnada de um indivduo fmea. .................................................................. 6 Figura 3: Coquille Nodipecten nodosus aberto, com suas valvas separadas. (imagem cedida pelo Projeto POMAR - Instituto de Ecodesenvolvimento da Baa de Ilha Grande - IEDBIG) . 7 Figura 4: Representao da molcula de 2,3,7,8-Tetraclorodibenzo-p-Dioxina. Sua estrutura planar favorece a interao com o receptor Aril hidrocarboneto. ............................................ 13 Figura 5: Congneres de PCB que apresentam conformao estrutural molecular parecida com a do grupo das dioxinas. Imagens obtidas no endereo http://www.caslab.com...................... 14 Figura 6: rea de Estudo. Amostras ambientais foram coletadas nas baas de Ilha Grande (BIG), Sepetiba (BS) e de Guanabara (BG), e da Enseada do Forno, em Arraial do Cabo (AC). ......................................................................................................................................... 27 Figura 7: Distribuio dos valores de Massa mida do Tecido Mole - MUTM (g) e do Comprimento Total - CT (cm) de todos os animais coletados em cada um dos locais de estudo: Baa de Sepetiba (BS), Baa de Ilha Grande (BIG) e Baa de Guanabara (BG). As caixas representam os dados entre os quartis de 25% a 75%. O trao horizontal dentro das caixas, as medianas. As barras verticais os valores mnimos e mximos. ............................... 37 Figura 8: Sistema de coletor de slido em suspenso feito em alumnio, aps 15 dias submersos na Praia de Jurujuba (Baa de Guanabara) .............................................................. 53 Figura 9: Coletores de slidos em suspenso (SS) elaborados com garrafas PET e tubos de vidro. ......................................................................................................................................... 54 Figura 10: Amostras compostas de slidos em suspenso (SS), antes de se retirar a gua sobrenadante (a esquerda), e depois (a direita)......................................................................... 55 Figura 11: Preparo das clulas de extrao do Acelerated Solvent Extractor ASE 200 (DIONEX) ............................................................................................................................. 56 Figura 12: Acelerated Solvent Extractor ASE-200 - Equipamento utilizado para obter o extrato das STP das amostras de bivalves. ............................................................................... 57 Figura 13: Colunas cromatogrficas para o primeiro passo de purificao dos extratos das amostras. ................................................................................................................................... 59 Figura 14: Sistema de vcuo para o segundo passo de purificao do extrato das amostras. .. 60 Figura 15: Sistema para reduo de volume da amostra sob fluxo de nitrognio, a 45C, no equipamento Trockentemperier- System -TCS. ........................................................................ 61 Figura 16: Obteno da massa mida do tecido mole de P. perna. Preparo das amostras compostas, com cinco indivduos para cada uma. .................................................................... 84 Figura 17: Soma de OCP medidos em todo o tecido mole dos mexilhes (Mex) P. perna e no msculo adutor e gnada do coquille (Coq) N. nodosus, expresso em pg.g-1 de massa mida, em maro (caixas preenchidas) e setembro (caixas vazias), coletados em: Baa de Guanabara (BG), Baa de Sepetiba (BS), Baa de Ilha Grande (BIG) e Arraial do Cabo (AC). Coquilles foram coletados apenas em BIG e AC. As caixas representam a variao das trs rplicas xiii

analisadas. Cada rplica uma amostra composta por cinco indivduos. Os OCP medidos foram: -, -, -, -, -HCH; Pentaclorobenzeno; Hexaclorobenzeno; Pentacloroanisol; p,p e o,p DDT; p,p e o,p DDD; p,p e o,p DDE; trans-, cis-, oxy-Clordano; Heptacloro; cisHeptacloro Epxido; Aldrin; Dieldrin; Endrin; Endosulfan-I e II; Metoxicloro; e Mirex. ...... 91 Figura 18: Soma dos PCB medidos em todo o tecido mole dos mexilhes (Mex) P. perna e no msculo adutor e gnada do coquille (Coq) N. nodosus, expresso em pg.g-1 de massa mida, em maro (caixas preenchidas) e setembro (caixas vazias), coletados em: Baa de Guanabara (BG), Baa de Sepetiba (BS), Baa de Ilha Grande (BIG) e Arraial do Cabo (AC). Coquilles foram coletados apenas em BIG e AC. As caixas representam a variao das trs rplicas analisadas. Cada rplica uma amostra composta por cinco indivduos. Os PCB medidos foram: PCB 28; 52; 101; 138; 153; 180; 77; 81; 126; 169; 105; 114; 118; 123; 156; 157; 167; 189. ........................................................................................................................................... 92 Figura 19: Grfico de disperso categorizado da Anlise Discriminante (AD) para os OCP. A primeira e a segunda funo (Root 1 e 2) da AD so representadas nos eixos X e Y respectivamente, mostrando os valores das funes calculados. Cada smbolo representa um grupo de anlises. Cada grupo possui trs rplicas, que so trs amostras compostas (cinco indivduos por amostras). Os grupos so descritos por local e pela matriz da amostra: Mex para mexilhes e Coq para coquilles; por local de coleta: BG - Baa de Guanabara, BS - Baa de Sepetiba, BIG - Baa de Ilha Grande, e AC - Arraial do Cabo. Os smbolos para cada grupo esto especificados na figura. As variveis consideradas nesta anlise foram: -, -, -, -, Hexaclorociclohexano (HCH); Pentaclorobenzeno; Hexaclorobenzeno; Pentacloroanisol; p,p e o,p DDT; p,p e o,p DDD; p,p e o,p DDE; trans-, cis-, oxy-Clordano; Heptacloro; cisHeptacloro Epxi; Aldrin; Dieldrin; Endrin e Endosulfan-I. ................................................... 94 Figura 20: Grfico de disperso categorizado da Anlise Discriminante (AD) para os PCB. A primeira e a segunda funo (Root 1 e 2) da AD so representadas nos eixos X e Y, respectivamente, mostrando os valores das funes calculados. Cada smbolo representa um grupo de anlises. Cada grupo possui trs rplicas, que so trs amostras compostas (cinco indivduos por amostras). Os grupos so descritos por local e pela matriz da amostra: Mex para mexilhes e Coq para coquilles; por local de coleta: BG - Baa de Guanabara, BS - Baa de Sepetiba, BIG - Baa de Ilha Grande e AC - Arraial do Cabo. Os smbolos para cada grupo esto especificados na figura. As variveis consideradas nesta anlise foram: PCB 28; 52; 101; 138; 153; 180; 77; 81; 126; 169; 105; 114; 118; 123; 156; 157; 167; 189. ..................... 96 Figura 21: Coleta de Sedimento superficial de fundo utilizando uma draga de "Eckman", retirando-se a camada superficial (<10cm). ........................................................................... 118 Figura 22: Percentuais dos grupos de congneres de PCB em mexilho, formados pelo nmero de cloro nas molculas. Triclorados (Tri): PCB 28; Tetraclorados (Tetra): PCB 52, 101 e 138; Pentaclorados (Penta): PCB 153, 180, 77, 81, 126 e 169; Hexaclorados (Hexa): PCB 105, 114, 118, 123, 156 e 157; Heptaclorados (Hepta): PCB 167 e 189; e ainda o grupo dos chamados congneres Indicadores (Indic.), formado pelos PCB 28; 52; 101; 118; 138; 153; 180. Baa de Guanabara (BG); Baa de Ilha Grande (BIG) e Baa de Sepetiba (BS). ... 131 Figura 23: Percentuais dos grupos de congneres de PCB em sedimento, formados pelo nmero de cloro nas molculas. Triclorados (Tri): PCB 28; Tetraclorados (Tetra): PCB 52, 101 e 138; Pentaclorados (Penta): PCB 153, 180, 77, 81, 126 e 169; Hexaclorados (Hexa): PCB 105, 114, 118, 123, 156 e 157; Heptaclorados (Hepta): PCB 167 e 189; e ainda o grupo dos chamados congneres Indicadores (Indic.), formado pelos PCB 28; 52; 101; 118; 138; 153; 180. Baa de Guanabara (BG); Baa de Ilha Grande (BIG) e Baa de Sepetiba (BS). ... 141

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Figura 24: Percentuais dos grupos de congneres de PCB no slido em suspenso (SS), formados pelo nmero de cloros nas molculas. Triclorados (Tri): PCB 28; Tetraclorados (Tetra): PCB 52, 101 e 138; Pentaclorados (Penta): PCB 153, 180, 77, 81, 126 e 169; Hexaclorados (Hexa): PCB 105, 114, 118, 123, 156 e 157; Heptaclorados (Hepta): PCB 167 e 189; e ainda o grupo dos chamados congneres Indicadores (Indic.), formado pelos PCB 28; 52; 101; 118; 138; 153; 180. Baa de Guanabara (BG); Baa de Ilha Grande (BIG) e Baa de Sepetiba (BS). ......................................................................................................................... 149 Figura 25: Histograma com todas as concentraes em pg.g-1 de massa seca de cada OCP quantificado para cada matriz ambiental. Os compostos marcados com (E) apresentam a escala no eixo y da esquerda e os marcados com (D), no eixo y da direita. As barras indicam o valor mediano e as medidas de disperso (intervalo de confiana de 95% dos dados).......... 151 Figura 26 Histograma com todas as concentraes em pg.g-1 de massa seca de cada PCB quantificado para cada matriz ambiental. Os compostos marcados com (E) apresentam a escala no eixo y da esquerda e os marcados com (D), no eixo y da direita. As barras indicam o valor mediano e as medidas de disperso (intervalo de confiana de 95% dos dados).......... 154 Figura 27: Grfico de disperso categorizado da Anlise Discriminante (AD) para os OCP. A primeira e a segunda funo (Root 1 e 2) da AD so representadas nos eixos X e Y respectivamente, mostrando os valores das funes calculados. Cada smbolo representa um grupo de anlises. Cada grupo possui de 5 a 8 rplicas, conforme as tabelas 17, 19 e 21. Os grupos so descritos por local, e pela matriz da amostra: Mex - mexilhes; SED - sedimento; SS - slidos em suspenso; BG - Baa de Guanabara; BIG - Baa de Ilha Grande; BS - Baa de Sepetiba. Os smbolos para cada grupo esto especificados na figura. As variveis consideradas nesta anlise foram: -, -, -, -, -HCH; Pentaclorobenzeno; HCB; PeCA; p,p e o,p DDT; p,p e o,p DDD; p,p e o,p DDE; Clordano trans-, cis-, oxy-; Heptacloro; cisHeptacloro Epxido; Aldrin; Dieldrin; Endrin, Endosulfan I e II, Mirex e Metoxicloro....... 156 Figura 28: Grfico de disperso categorizado da Anlise Discriminante (AD) para os PCB. A primeira e a segunda funo (Root 1 e 2) da AD so representadas nos eixos X e Y respectivamente, mostrando os valores das funes calculados. Cada smbolo representa um grupo de anlises. Cada grupo possui de 5 a 8 rplicas, conforme as tabelas 18, 20 e 22. Os grupos so descritos por local e pela matriz da amostra: Mex - mexilhes; SED - sedimento; SS - Slidos em Suspenso; BG - Baa de Guanabara; BS - Baa de Sepetiba; BIG - Baa de Ilha Grande. Os smbolos para cada grupo esto especificados na figura. As variveis consideradas nesta anlise foram: PCB 28; 52; 101; 138; 153; 180; 77; 81; 126; 169; 105; 114; 118; 123; 156; 157; 167; 189. ........................................................................................ 159 Figura 29: Interpolao entre os valores de BSAF de OCP, com seus respectivos valores de Kow, para cada baa estudada: Baa de Guanabara (BG), Baa de Sepetiba (BS) e Baa de Ilha Grande (BIG). ......................................................................................................................... 165 Figura 30: Interpolao entre os valores de BSAF de PCB, com seus respectivos valores de Kow, para cada baa estudada: Baa de Guanabara (BG), Baa de Sepetiba (BS) e Baa de Ilha Grande (BIG). ......................................................................................................................... 167 Figura 31: Concentraes em pg.g-1 de OCP em mexilhes do experimento de transplante conduzido em dezembro de 2008, coletando animais da Baa de Guanabara (condio inicial so as barras vazias) e tranplantando organismos para a Baa de Sepetiba, onde permaneceram por 30 dias antes da coleta (barras preenchidas com cinza). As barras preenchidas com preto representam os animais que permaneceram na Guanabara e foram coletados aps 30 dias da primeira coleta. Cada barra representa os valores das trs rplicas, e o trao no meio a xv

mediana. Na abscissa, esto os compostos acompanhados da indicao de qual ordenada seus respectivos valores esto plotados ("D" - eixo y da direita, "E" - eixo y da esquerda). ......... 173 Figura 32: Concentraes em pg.g-1 de massa seca de OCP em mexilhes do experimento de transplante conduzido em junho de 2009, coletando animais da Baa de Guanabara (condio inicial so as barras vazias) e transplantando organismos para a Baa de Ilha Grande, onde permaneceram por 30 dias antes da coleta (barras preenchidas com cinza). As barras preenchidas com preto so animais que permaneceram na Guanabara e foram coletados aps 30 dias da primeira coleta. Cada barra representa os valores das trs rplicas e o trao no meio a mediana. Na abscissa, esto os compostos acompanhados da indicao em qual ordenada seus respectivos valores esto plotados ("D" - eixo y da direita, "E" - eixo y da esquerda). . 174 Figura 33: Concentraes em pg.g-1 de massa seca de PCB em mexilhes do experimento de transplante conduzido em dezembro de 2008, coletando animais da Baa de Guanabara (condio inicial so as barras vazias) e transplantando organismos para a Baa de Sepetiba, onde permaneceram por 30 dias antes da coleta (barras preenchidas com cinza). As barras preenchidas com preto so animais que permaneceram na Guanabara e foram coletados aps 30 dias da primeira coleta. Cada barra representa os valores das trs rplicas e o trao no meio a mediana. Na abscissa, esto os compostos acompanhados da indicao em qual ordenada seus respectivos valores esto plotados ("D" - eixo y da direita, "E" - eixo y da esquerda). . 177 Figura 34: Concentraes em pg.g-1 de PCB em mexilhes do experimento de transplante conduzido em junho de 2009, coletando animais da Baa de Guanabara (condio inicial so as barras vazias) e transplantando organismos para a Baa de Ilha Grande, onde permaneceram por 30 dias antes da coleta (barras preenchidas com cinza). As barras preenchidas com preto so animais que permaneceram na Guanabara, e foram coletados aps 30 dias da primeira coleta. Cada barra representa os valores das trs rplicas e o trao no meio a mediana. Na abscissa, esto os compostos acompanhados da indicao de qual ordenada seus respectivos valores esto plotados ("D" - eixo y da direita, "E" - eixo y da esquerda). . 178

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LISTA DE TABELAS Tabela 1: Valores das medianas e seus respectivos coeficientes de variao de cada ndice de Condio (IC) usado, para cada ms de amostragem na Baa de Sepetiba (BS). Letras "a" e "b" indicam diferena significativa entre os valores de IC dos meses com estas letras, segundo o teste de Dunn (p<0,05). ......................................................................................................... 38 Tabela 2:Valores das medianas e seus respectivos coeficientes de variao de cada ndice de Condio (IC) usado, para cada ms de amostragem na Baa de Ilha Grande (BIG). Letras "a" e "b" indicam diferena significativa entre os valores de IC dos meses com estas letras, segundo o teste de Dunn (p<0,05). ........................................................................................... 39 Tabela 3: Valores das medianas e seus respectivos coeficientes de variao de cada ndice de Condio (IC) usado, para cada ms de amostragem na Baa de Guanabara (BG). Letras "a", e "b" indicam diferena significativa entre os valores de IC dos meses com estas letras, segundo o teste de Dunn (p<0,05). ......................................................................................................... 40 Tabela 4: Resumo do resultado do teste Dunns na comparao entre todos os valores de ndice de Condio (IC) obtidos por cada mtodo de clculo de IC, para cada local de estudo: Baa de Sepetiba (BS), Baa de Ilha Grande (BIG) e Baa de Guanabara (BG). "SIM" e "NO" referem-se presena ou ausncia de diferenas significativas nas respectivas comparaes (p<0,05). ............................................................................................................. 42 Tabela 5: Resumo comparativo dos valores de ndice de Condio (IC) em diferentes locais do mundo, obtidos com os mesmos mtodos usados no presente estudo. Os lugares foram classificados como poludos (Pol) ou no poludos (No-P.) de acordo com a descrio dada pelos respectivos trabalhos. Resultados reportados em outras unidades no trabalho original foram transformados para as mesmas unidades do presente estudo. ........................................ 45 Tabela 6: Programa de extrao das STP utilizado nas amostras de mexilho no equipamento utilizado para realizar a extrao das STP do tecido mole dos bivalves (Acelerator Solvent Extractor - ASE)....................................................................................................................... 57 Tabela 7: Resumo dos parmetros adotados para a determinao das concentraes no sistema de Cromatografia a Gs de Alta Resoluo acoplado a um Espectrmetro de Massa de Alta Resoluo (HRGC-HRMS). .................................................................................................... 62 Tabela 8: Comparativo entre as concentraes de PAHs (pg.g-1) nos tecidos moles de P. perna liofilizado (L), e na amostra mida (U). Tambm so apresentadas as diferenas entre estes resultados (D%), expressos em percentual com relao a U [(LR-LU)*100/LU]. Valores abaixo do Limite de Deteco (LOD) so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos. E ainda, o log dos valores de Presso de Vapor (Pv) em Pa, retirados de (Ma et al., 2010) ......................................................................................................................................... 67 Tabela 9: Comparativo entre as concentraes de OCP (pg.g-1) nos tecidos moles de P. perna liofilizado (L), e na amostra mida (U). Tambm so apresentadas as diferenas entre estes resultados (D%), expressos em percentual com relao ao U [(L-U)*100/U]. Valores abaixo do Limite de Deteco (LOD) so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos. E ainda, o log dos valores de Presso de Vapor (Pv) em Pa, retirados de a (Beyer et al., 2002); e b ................................................................................................................................................. 69 Tabela 10: Comparativo entre as concentraes de PCB (pg.g-1) nos tecidos moles de P. perna liofilizado (L) e na amostra mida (U). Tambm so apresentadas as diferenas entre estes resultados (D%), expressos em percentual com relao ao U [(L-U)*100/U]. Valores abaixo do Limite de Deteco (LOD) so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos. E xvii

ainda, o log dos valores de Presso de Vapor (Pv) em Pa, retirados de (Beyer et al., 2002; Shen e Wania, 2005); ............................................................................................................... 72 Tabela 11: Concentraes de OCP (pg.g-1) das seis rplicas de amostras compostas (5 indivduos por amostra) de tecido mole do mexilho P. perna. Aps os resultados das seis rplicas, apresenta-se a mdia aritmtica, o desvio padro (DP), e o coeficiente de variao percentual em relao mdia (CV%). Valores abaixo do Limite de Deteco (LOD) so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos. ............................................................. 74 Tabela 12: Concentraes de PCB (pg.g-1) das seis rplicas de amostras compostas (5 indivduos por amostra) de tecido mole do mexilho P. perna. Aps os resultados das seis rplicas, apresenta-se a mdia aritmtica, o desvio padro (DP), e o coeficiente de variao percentual em relao mdia (CV%). Valores abaixo do Limite de Deteco (LOD) so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos. ............................................................. 76 Tabela 13: Resultado comparativo das concentraes de OCP (pg.g-1) em slidos em suspenso (SS) coletados com amostradores feitos com Politereftalato de etila (PET) ou com alumnio. As concentraes dos compostos oxi-clordan, trans-heptacloro epxido e aldrin permaneceram abaixo do Limite de Deteco (LOD) (<0,6; <8,3 e <0,8, respectivamente). Valores abaixo do LOD so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos. ............... 78 Tabela 14: Resultado comparativo das concentraes de PCB (pg.g-1) em slidos em suspenso (SS) coletados com amostradores feitos com Politereftalato de etila (PET) ou com alumnio. Valores abaixo do LOD so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos.80 Tabela 15: Amplitude das concentraes dos OCP expressas em massa mida do tecido mole do mexilho P. perna e do msculo e da gnada do coquille N. nodosus cultivados na costa do Estado do Rio de Janeiro: Arraial do Cabo (AC); Baa de Guanabara (BG); Baa de Sepetiba (BS); e Baa de Ilha Grande (BIG). Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. Quando todas as triplicatas apresentam o mesmo valor, apenas um resultado apresentado. ............................................................................. 100 Tabela 16: Amplitude das concentraes dos PCB expressas em massa mida do tecido mole do mexilho P. perna e do msculo e da gnada do coquille N. nodosus cultivados na costa do Estado do Rio de Janeiro: Arraial do Cabo (AC); Baa de Guanabara (BG); Baa de Sepetiba (BS); e Baa de Ilha Grande (BIG). Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. Quando todas as triplicatas apresentam o mesmo valor, apenas um resultado apresentado. ............................................................................. 105 Tabela 17: Concentraes de OCP (pg.g-1) expressas em massa seca, nos mexilhes P. perna coletados em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. .................................................................................................... 126 Tabela 18: Concentraes de PCB (pg.g-1), expressas em massa seca nos mexilhes P. perna coletados em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. .................................................................................................... 130 Tabela 19: Concentraes de OCP (pg.g-1) expressas em massa seca, no sedimento coletado em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. ....................................................................................................................... 133 Tabela 20: Concentraes de PCB (pg.g-1) expressas em massa seca, no sedimento coletado em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e xviii

Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. ....................................................................................................................... 139 Tabela 21 Concentraes de OCP (pg.g-1) expressas em massa seca, nos slidos em suspenso coletados em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. .................................................................................................... 145 Tabela 22: Concentraes de PCB (pg.g-1) expressas em massa seca, nos slidos em suspenso coletados em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto........................................................................... 148 Tabela 23: Resumo do resultado da anlise de regresso mltipla entre as concentraes de OCP quantificadas em Mexilho P. perna, slidos em suspenso (SS) e Sedimento (SED). Os nveis de significncia (p) dos coeficientes de regresso global ajustado (R2), obtidos por teste F, e dos coeficientes parciais padronizados (Beta), testados pelo teste t-Student, menores que 0,05, foram marcados com "*". .............................................................................................. 158 Tabela 24: Resumo do resultado da anlise de regresso mltipla entre as concentraes de PCB quantificadas em mexilho P. perna, slidos em suspenso (SS) e Sedimento (Sed). Os nveis de significncia (p) dos coeficientes de regresso global ajustados (R2), obtidos por teste F, e dos coeficientes parciais padronizados (Beta), testados pelo teste t-Student, menores que 0,05, foram marcados com "*". ....................................................................................... 160 Tabela 25: Valores de partio octanol-gua (log Kow), a 25C, pelo mtodo LDV, para compostos de OCP e PCB ...................................................................................................... 164 Tabela 26: Resumo do resultado da ANOVA e teste t-Student (marcados com *), comparando as concentraes de OCP quantificados nos mexilhes (Mex), sedimento (SED) e slidos em suspenso (SS), coletados nas baas de Guanabara (BG), Sepetiba (BS) e Ilha Grande (BIG), nos meses de dezembro de 2009 e fevereiro de 2010. As comparaes entre os conjuntos de dados que no apresentaram diferena significativa (p<0,05) so sinalizadas com "NO". Onde se detectou diferenas significativas, o resultado apresentado apontando qual local de estudo que se obteve a maior mdia. Para casos onde se tem dois ou menos valores, o que impossibilitou a realizao dos testes, indicou-se com "n" 2. ...................................... 170 Tabela 27: Resumo do resultado da ANOVA e teste t-Student (marcados com *), comparando as concentraes de PCB quantificados nos mexilhes (Mex), sedimento (SED) e slidos em suspenso (SS), coletados nas baas de Guanabara (BG), Sepetiba (BS) e Ilha Grande (BIG), nos meses de dezembro de 2009 e Fevereiro de 2010. As comparaes entre os conjuntos de dados que no apresentaram diferena significativa (p<0,05) so sinalizadas com "NO". Onde se detectou diferenas significativas, o resultado apresentado apontando qual local de estudo que se obteve a maior mdia. Para casos onde se tem dois ou menos valores, o que impossibilitou a realizao dos testes, indicou-se com "n" 2. ...................................... 171

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LISTA DE ABREVIATURAS

STP - Substncias Txicas Persistentes AC - Arraial do Cabo BG - Baa de Guanabara BS - Baa de Sepetiba BIG - Baa de Ilha Grande Mex - Mexilho Coq - Coquile Sed - Sedimento superficial de fundo SS - Slidos em suspenso PCB - Bifenilas Policloradas (Polychlorinated Biphenils - PCB) OCP - Pesticidas Organoclorados (Organochlorinated Pesticides) PAH - Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (Polycyclic Aromatic Hydrocarbons) DLC - Compostos parecidos com Dioxina (Dioxin-Like compounds) OCS - Octacloroestireno DDT - Dicloro-difenil-tricloroetano DDD - Dicloro-difenil-dicloroetano DDE - Dicloro-difenil-dicloroetileno p,p' - posies do Cloro na molcula - para, para o,p' - posies do Cloro na molcula - orto, para HCH - Hexaclorocicloexanos PeCB - Pentaclorobenzeno HCB - Hexaclorobenzeno PeCA - Pentacloroanisol PCB 28 - 2,4,4'-Triclorobifenil PCB 52 - 2,2',5,5'-Tetraclorobifenil PCB 101 - 2,2',4,5,5'-Pentaclorobifenil PCB 138 - 2,2',3,4,4',5'-Hexaclorobifenil PCB 153 - 2,2',4,4',5,5'-Hexaclorobifenil PCB 180 - 2,2',3,4,4',5,5'-Heptaclorobifenil PCB 77 - 3,3',4,4'-Tetraclorobifenil PCB 81 - 3,4,4',5-Tetraclorobifenil PCB 126 - 3,3',4,4',5-Pentaclorobifenil PCB 169 - 3,3',4,4',5,5'-Hexaclorobifenil PCB 105 - 2,3,3',4,4'-Pentaclorobifenil PCB 114 - 2,3,4,4',5-Pentaclorobifenil PCB 118 - 2,3',4,4',5-Pentaclorobifenil PCB 123 - 2,3',4,4',5'-Pentaclorobifenil PCB 156 - 2,3,3',4,4',5-Hexaclorobifenil PCB 157 - 2,3,3',4,4',5'-Hexaclorobifenil PCB 167 - 2,3',4,4',5,5'-Hexaclorobifenil PCB 189 - 2,3,3',4,4',5,5'-Heptaclorobifenil

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IC - ndice de Condio MUTM - Massa mida do Tecido Mole CT - Comprimento Total HRGC-HRMS - Cromatografia a Gs de Alta Resoluo acoplada a um Espectrmetro de Massas (High Resolution Gas Chromatography coupled to High Resolution Mass Spectrometer ) LOD - Limite de Deteco (Limit of Detection) DA - Anlise Discriminante (Discriminant Analysis) ANOVA - Anlise de Varincia (Analysis of Variance) DP - Desvio Padro CV% - Coeficiente de Variao percentual da Mdia BSAF - Fator de acumulao Biota-Sedimento (Biota-Sediment Accumulation Factor) MO - Matria Orgnica CO - Carbono Orgnico PET - Poli Tereftalato de Etileno PVC - Polivinil Carbono LR - Rplicas Liofilizadas LU - Rplicas midas Pv - Presso de Vapor ADI - Aceptable Daily Intake MR - Maximum Residue MRL - Maximum Residue Limit TEQ - Toxic Equivalent WHO - World Health Organization

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1 1. Introduo 1.1. A interface do ambiente terrestre com o marinho Este trabalho de pesquisa estudou fenmenos que ocorrem em um ecossistema limtrofe entre o Continente e o Mar, uma regio onde a interao entre as diferentes atividades scio-econmicas que ocorrem nos arredores de uma baa se concentram e interagem com os processos naturais dos ecossistemas. Ambientes estuarinos integram as contribuies das guas de sua bacia de drenagem, trazidas atravs das descargas fluviais e pluviais que chegam s guas do mar. Este corpo de gua est sob a influncia do ciclo de mar, o que aumenta a complexidade deste ambiente. Esse carter unificador de guas que uma baa possui torna a caracterizao destas reas um pouco mais complexa. Da mesma forma, a interpretao dos dados ambientais coletados nas guas desta baa deve ser feita com cuidado. A tentativa de se identificar possveis fontes de contaminantes em um ecossistema como o da Baa de Guanabara, onde chegam aproximadamente 200 mil litros de gua por segundo

(http://www.portalbaiadeguanabara.com.br), atravs de rios e canais, desafiador. Esta tarefa parece ficar ainda mais difcil em um pas como o Brasil, onde o poder pblico no disponibiliza dados sobre as atividades produtivas que se encontram na bacia de drenagem de uma baa. A limitao no volume de informao deste carter para a Baa de Guanabara, no menor que as de cunho cientfico, mesmo em se tratando de um ecossistema localizado no centro industrial de um dos principais Estados do Brasil, no podemos afirmar que a produo cientfica acompanha as transformaes que ocorrem neste ecossistema. Se a situao para um ecossistema to importante em nvel nacional est neste patamar, a disponibilidade de conhecimento para as reas adjacentes ainda mais restrita. o caso de Arraial do Cabo, cidade sede do primeiro instituto de pesquisa dedicado

2 exclusivamente s cincias do mar no Brasil (Instituto do Estudos do Mar Almirante Paulo Moreira). A produo cientfica publicada em jornais indexados que abrange esta rea escassa. Se por um lado, esse panorama limita a discusso de dados levantados em uma pesquisa nestas reas, por outro, fator que valoriza os dados produzidos nessas regies, uma vez que oferece um ponto de partida para a contnua construo do conhecimento. Contrapondo-se com a carncia de dados cientficos e gerenciais acerca dos ecossistemas costeiros no Brasil, nos deparamos com a produo de pescado nas mesmas guas onde se desenvolvem atividades petroqumicas, porturias, agrcolas, siderrgicas, e ainda, onde de despeja esgoto domstico sem tratamento adequado. O aporte continental de matria orgnica, principalmente onde antes abundavam os manguezais, ainda fertiliza as guas das enseadas. Isto impulsiona a produtividade primria, e toda a cadeia trfica, facilitando o crescimento de moluscos bivalves filtradores, que se aproveita da alta disponibilidade de alimento na coluna dgua. Porm, como ser apresentado com mais detalhes na sesso 1.6., o material de origem continental, tambm via de transporte de contaminantes para o corpo dgua estuarino (Phillips, 1995). Portanto, a regio propcia para a produo de pescado, tambm uma rea receptora de contaminantes emitidos em diferentes distncias, com a chegada das guas fluviais ao mar. Somado a isto, temos as contribuies atmosfricas, que por meio de deposio de partculas, ou por precipitao, tambm so uma fonte de entrada das chamadas Substncias Txicas Persistentes (STP) no sistema. Desta maneira, molculas transportadas por distncias continentais (Wania e Mackay, 1993), tambm podem chegar aos ambientes estuarinos. Ao considerarmos que o Brasil dispe de 7.367 km de costa banhada pelo Oceano Atlntico, onde existem importantes plos industriais ao longo deste litoral, necessrio se

3 investigar a qualidade do pescado produzido nestas guas. Nesta mesma linha de raciocnio, as reas perifricas prximas s reas de concentrao da atividade econmica, produziriam um pescado com menores concentraes de contaminantes. Ambientes estuarinos integram, portanto, os efeitos das atividades socioeconmicas de seu entorno, com as variaes das correntes ocenicas que influenciam determinada costa. Com isso, destaca-se a complexidade de se trabalhar nesta interface entre o continente e o mar. E este foi o ponto de partida para a definio de como os temas abordados nesta tese, seriam tratados. Parte desta tese ser descritiva, visando alimentar o banco de dados referente qualidade ambiental, ao potencial da atividade de mitilicultura (cultivo de mexilho), e segurana toxicolgica dos bivalves cultivados nas baas estudas. Ressalta-se que este estudo foi realizado em um momento que antecedeu um expressivo aumento na atividade porturia das reas estudadas. Duas intervenes merecem destaque: a instalao do Porto da Beira em So Gonalo (Baa de Guanabara), e o Superporto Sudeste em Itagua (Baa de Sepetiba). Estas atividades envolvem a dragagem do sedimento de fundo que visa ampliar a capacidade do calado das embarcaes que aportam nestas reas. O revolvimento do sedimento de fundo tende a potencializar a mudana no regime de transporte de slidos em suspenso na coluna d'gua destes locais, com reflexos que sero discutidos na sesso 1.3.. Outra parte desta tese dedicou-se a buscar uma relao numrica para a dinmica dos contaminantes aqui estudados, entre os compartimentos abiticos (sedimento de fundo e os slidos em suspenso), e os moluscos bivalves de um sistema de cultivo do tipo "long-line". A figura 1 ilustra uma instalao frequentemente utilizada para o cultivo de mexilhes na costa brasileira.

Figura 1: Esquema ilustrativo do sistema de cultivo de mexilho do tipo Long-line. As ncoras no leito marinho fixam e esticam o Long-line, que fica suspenso por bias (geralmente de plstico). As cordas mexilhoneiras so ento amarradas entre as bias, permanecendo entre 8 e 12 meses. 1.2. Contaminao ambiental e a produo de pescado. Os rios e mares tm sido utilizados como receptores finais dos resduos da produo industrial, resultando na contaminao destes corpos dgua. O que se observa em funo disto uma restrio do potencial aproveitamento das riquezas naturais destes ecossistemas, principalmente pela contaminao da biota. Neste cenrio, o pescado, uma importante fonte de protena na dieta humana, ao ser consumido, torna-se um possvel agente de transferncia de substncias txicas (Drea, 2008). Este quadro suscita discusso de quanto estes alimentos so realmente benficos sade, uma vez que contaminantes tambm so transferidos ao homem pela ingesto deste pescado (Sioen et al., 2008). Um aspecto a ser considerado, que, ao tornar o produto imprprio para o consumo (pescado contaminado), se reduz o estoque de peixe disponvel para consumo humano. Alm disso, a reduo do estoque pesqueiro tambm se d por sua explotao (Mullon et al., 2005), bem como pela a ao de substncias txicas na biota.

5 Quanto a este ltimo ponto, j se tem notado a ao txica destes agentes sobre o sistema reprodutivo (Martin-Skilton et al., 2006; Marchand et al., 2008), e at mesmo na habilidade de evitar a predao (Sandahl et al., 2007). Para suprir a queda na extrao de pescado do ambiente, mtodos de cultivo de organismos na gua (aquicultura), e inclusive no mar (maricultura), tm sido desenvolvidos. Com isso, a aquicultura mundial registrou um crescimento mdio, no perodo de 1991 a 2004, de 9,5% por ano (Boscardin, 2008). Sua contribuio para o total de pescado produzido passou de 3,9% na dcada de 70, para 32,2% em 2000 (SEAP-PR, 2004). Em 2001, a maricultura foi responsvel por 50,2% (24,3 milhes de toneladas) do pescado produzido no mundo (Borghetti et al., 2003). No Brasil, a aquicultura registrou um crescimento de 344,2% entre 1996 e 2004, sendo que esta taxa para a maricultura no mesmo perodo foi de 947,2%, chegando a representar 33% do total de pescado produzido no pas (Boscardin, 2008). Um ramo da maricultura que ganha destaque por sua expanso, o cultivo de bivalves marinhos. Contabilizando apenas as espcies mais cultivadas no mundo, o total produzido saltou de pouco mais de 6 mil toneladas/ano em 1991, para 14 mil toneladas/ano em 2000. Por outro lado, neste mesmo perodo, o total de pescado obtido por extrao permaneceu entre dois e trs mil toneladas/ano (Helm e Bourne, 2004). No Brasil, se registrou um acrscimo de 155% na produo de bivalves entre 1996 e 2004 (Boscardin, 2008). Um produto do cultivo de bivalves marinhos no Brasil que merece destaque, o mexilho Perna perna (Linnaeus, 1758). A classificao taxonmica de P. perna retirada de (Lopes e Fonseca, 2008), dada a seguir:

6 Filo Mollusca (Linnaeus, 1758) Classe Bivalvia (Linnaeus, 1758) Subclasse Pteriomorphia (Beurlen, 1944) Ordem Mytiloida (Frussac, 1822) Superfamlia Mytiloidea (Rafinesque, 1815) Famlia Mytilidae (Rafinesque, 1815) Subfamlia Mytilinae (Rafinesque, 1815) Gnero Perna (Retzius, 1788) Espcie Perna perna (Linnaeus, 1758) Original do continente africano, acredita-se que P. perna tenha chegado s guas brasileiras pelos cascos dos navios negreiros, h mais de 200 anos. Atualmente, sua distribuio se estende ndia, Sri Lanka, costa atlntica da Amrica do Sul, Amrica do Norte e a ilhas do Caribe. Em ambiente natural habita substratos consolidados das regies entremars (F. C. Fernandes et al., 2008). A figura 2 apresenta a imagem do mexilho P. perna, mostrando o tecido mole dentro da valva direita ( direita), e a parte externa da valva esquerda ( esquerda)

Figura 2: Mexilho Perna perna aberto, com suas valvas separadas. O tecido com colorao vermelho-tijolo a gnada de um indivduo fmea. Em 2006, das 15,5 mil toneladas de bivalves produzidos no pas, 12 mil toneladas so provenientes da mitilicultura, com o Estado de Santa Catarina contribuindo com 95,56% da produo nacional de mexilho (IBAMA, 2006). A produo brasileira de P. perna para o ano seguinte foi estimada em 12 mil toneladas (IBAMA, 2007).

7 Um outro bivalve que apresenta menor volume de produo em relao ao P. perna, mas com maior valor de mercado, a espcie Nodipecten nodosus (Linnaeus, 1758), chamado coquille de Saint Jacques, ou vieira. Segue sua taxonomia, retirada de (Fonseca, 2004): Filo Mollusca (Linnaeus, 1758) Classe Bivalvia (Linnaeus, 1758) Subclasse Pteriomorphia (Beurlen, 1944) Ordem Ostreoida (Frussac, 1822) Superfamlia Pectinoidea (Rafinesque, 1815) Famlia Pectinedae (Rafinesque, 1815) Subfamlia Chlamydinae (Von Teppner, 1922) Gnero Nodipecten (Dall, 1898) Espcie Nodipecten nodosus (Linnaeus, 1758)

N. nodosus apresenta ocorrncia descontnua, entre a regio do Caribe, at as proximidades da Ilha de Santa Catarina, e em alguns pontos da frica (So Tom e Prncipe, Golfo do Gabo e Ilha Asceno) (Rios, 1994). uma espcie epibentnica, que ocupa a zona do infralitoral, entre os limites dos substratos rochosos e arenosos, geralmente em ambientes sombreados. Alm de ser encontrado fixado pelo bisso em substratos consolidados (rochas e corais), tambm pode apresentar vida livre sobre o fundo arenoso (Fonseca, 2004). A figura 3 apresenta N. nodosus, com seu tecido mole dentro da valva direita ( direita), e a parte externa da valva esquerda ( esquerda).

Figura 3: Coquille Nodipecten nodosus aberto, com suas valvas separadas. (imagem cedida pelo Projeto POMAR - Instituto de Ecodesenvolvimento da Baa de Ilha Grande - IEDBIG)

Em uma estimativa da produo deste molusco no Brasil feita em 2007, registrou-se uma produo de 18 toneladas, com o Estado do Rio de Janeiro responsvel por 76% da produo nacional, sendo apenas 1 tonelada de origem extrativista (IBAMA, 2007).

8 Esses nmeros mostram claramente a pujana que o setor de maricultura exerce sobre a produo deste coquilles, mas por outro lado, considerando a extenso do litoral brasileiro, estes nmeros so inexpressivos quando comparados, por exemplo produo de 110 mil ton de bivalves no Chile, em 2005 (Stegeman e Lech, 1991). Por serem animais suspensvoros filtradores, os bivalves necessitam de filtrar grande volume de gua (5L/h) (Anandraj et al., 2002) para se alimentarem. Desta forma, estes animais concentram em seus tecidos o alimento que est disperso, e heterogneo na frao no dissolvida na coluna dgua (>45m), chamada slidos em suspenso (SS). Os SS servem como substrato de adsoro para os contaminantes, atuando ento como uma via de transferncia de compostos txicos para a biota (Phillips, 1995). Experimentos mostram que PCB mais hidrofbicos apresentam maior eficincia de assimilao em bivalves filtradores, justamente por se complexarem ao fitoplncton, e serem absorvidos no trato digestrio do bivalve (Bjrk e Gilek, 1999).

1.3. Substncias txicas persistentes nas cadeias trficas Contaminantes com alto Kow tm maior tendncia a se acumularem no tecido adiposo dos animais, entrando nas cadeias trficas dos ecossistemas. E ainda, a estabilidade qumica de alguns destes compostos, favorece que estes no sejam totalmente degradados no ambiente. Compostos com estas caractersticas tm suas concentraes aumentadas ao longo dos elos das cadeias trficas, resultando no chamado processo de biomagnificao. Os compostos que atendem a estas caractersticas so classificados como Substncias Txicas Persistentes (STP) (Almeida et al., 2007). Como alguns destes compostos tambm so volteis, sendo assim transportados pela atmosfera para alm das fronteiras polticas e geogrficas, aumenta a ateno necessria para a monitorao global das STP (Wania e Mackay, 1993).

9 O Programa das Naes Unidas para o Meio Ambiente (UNEP), atravs do relatrio intitulado Avaliao Regional das Substncias Txicas Persistentes, considerou prioritrios para a monitorao na Amrica do Sul os seguintes contaminantes entre as STP (UNEP, 2002): as Bifenilas Policloradas (Polychlorinated Biphenils - PCB); entre os pesticidas organoclorados (Organochlorinated Pesticides - OCP) o Dicloro-Difenil-Tricloroetano (DDT) e seus metablitos (o,p DDT, p,p DDT, o,p DDD, p,p DDD, o,p DDE, p,p DDE); Aldrin; Dieldrin; Endrin; Hexaclorocicloexanos (-HCH, -HCH, -HCH e -HCH); Endossulfan; Heptacloro e o Clordano. Com relao ao grupo dos PCB, a Agncia de Proteo Ambiental (Environmental Protection Agency - EPA), dos Estados Unidos da Amrica, prioriza a anlises dos congneres 28, 52, 101, 118, 138, 153 e 180 (EPA, 2008). Pela alta estabilidade trmica e elevada constante dieltrica, as misturas tcnicas dos congneres de PCB foram amplamente utilizadas em equipamentos eltricos, principalmente em capacitores e transformadores, e tambm em pesticidas como diluentes. Estes compostos so capazes de promover tumores, alm de alterar o desenvolvimento neurolgico, a homeostase intracelular do Ca2+, e reduzir os nveis de dopamina. Apesar de poucas evidncias sobre o potencial carcinognico destes compostos, j se tem bem estabelecida a sua imunotoxicidade (ASTDR, 2000). A partir da Portaria Interministerial 19, de 1981, a produo, a comercializao e uso dos PCB foram proibidos no Brasil (Penteado e Vaz, 2001). Porm, ainda possvel que existam vazamentos de estoques antigos dessas misturas comerciais (Ascarel), principalmente nas proximidades de instalaes eltricas e grandes fundies (Torres et al., 1999). A respeito dos pesticidas, importante destacar que o Brasil o maior mercado de pesticidas no mundo (IBAMA, 2011). Um dos OCP que foi amplamente utilizado como

10 inseticida nas lavouras at a dcada de 70 no Brasil, foi o Dicloro-Difenil-Tricloroetano (DDT). O DDT, assim como outros compostos clorados, interfere no balano inico, principalmente nas clulas nervosas (transporte dos ons de clcio), o que leva excitao do sistema nervoso (ATSDR, 2002). A partir de 1985, o Ministrio da Agricultura, atravs da portaria n329, proibiu a comercializao, o uso e a distribuio destes agrotxicos destinados agropecuria. Entre estes compostos, destacam-se: -HCH (Lindano), pentaclorofenol, hexaclorobenzeno (HCB), DDT, heptacloro, aldrin, dieldrin, endrin, endosulfan e metoxicloro. Porm, a mesma portaria permitia o uso do DDT em campanhas de combate a vetores de doenas tropicais, pelos rgos pblicos. O DDT foi usado no controle do mosquito transmissor da Malria, Anopheles darlingi, principalmente na Amaznia. Em 1991, o governo brasileiro realizou a ltima compra oficial do DDT, adquirindo um montante de trs toneladas (D'Amato et al., 2002). Seguindo a conveno de Estocolmo, o DDT foi proibido por Lei Federal n 11.936/09, em 2009. Compostos organoclorados, como o -HCH (lindano) e o dieldrin, tambm foram amplamente usados durante a dcada de 50 no controle do vetor da doena de Chagas (Massad, 2008). Agindo geralmente sobre o equilbrio inico (Na+, K+ e Ca2+) dos sistemas nervoso, renal e endcrino, estes contaminantes tambm tm potencial carcinognico (ATSDR, 2002). O mecanismo descrito para a ao txica de uma grande variedade de compostos clorados (entre PCB e pesticidas) envolve basicamente os receptores de intracelulares, como os da famlia Aril-hidrocarbonetos (AhR).

11 Os compostos clorados podem atuar como agonistas ou antagonistas dos receptores AhR, desencadeando um processo estrognico e/ou antiandrognico, como revisado em (Kojima et al., 2010). Desde que alguns compostos foram banidos por lei, registra-se despejos de agrotxicos em aterros ilegais, o que representa uma fonte potencial de contaminao para a bacia de drenagem local, e finalmente para as guas costeiras (Nascimento et al., 2004). Com o intuito de proteger a sade humana e o meio ambiente, o Brasil assinou a Conveno de Estocolmo em e 2001 se

(http://chm.pops.int/Countries/StatusofRatifications/tabid/252/Default.aspx),

comprometeu em reduzir e/ou eliminar o despejo dos chamados Poluentes Orgnicos Persistentes (Persistents Organic Pollutants - POPs). Neste mbito, em 2001, foi criado o Programa de Anlise de Resduos de Agrotxicos em Alimentos (PARA), a cargo da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA). Porm, esta iniciativa abrange apenas os alimentos que so tratados com pesticidas, deixando de fora os pescados consumidos no mercado. Este quadro contrasta com esforos observados em outros pases do mundo, que contemplam um variado espectro de alimentos. Alguns exemplos podem ser citados: nos Estados Unidos da Amrica, atravs da agncia federal de regulao (Food and Drugs Administration - FDA); na Unio Europia, por meio de agncia especfica (European Food Safety Authority - EFSA); e ainda na Organizao Mundial da Sade (WHO - World Health Organization) em conjunto com a organizao das Naes Unidas (Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives - JECFA). Em todos os casos, h um programa de anlise de resduos de pesticidas e outros compostos clorados, como PCB, que se baseia em limites de segurana para qualificar os produtos disponibilizados para mercado.

12 Portanto, considerando a persistncia ambiental das STP, a sua potencial entrada nas teias trficas dos ecossistemas onde estas substncias bioacumulam e biomagnificam, e ainda suas aes txicas para os animais silvestres e para a sade humana, fundamental que se monitore as suas concentraes nos diferentes compartimentos ambientais.

1.4. Mtodos de estimativa do risco toxicolgico em alimentos Em um descompasso com o incio da comercializao de compostos qumicos, sem que fossem avaliados os potencias danos vida selvagem e ao homem, o poder pblico passa, a partir da dcada de 60, a direcionar maior ateno para esta problemtica. Neste ponto, a publicao de Rachel Carson, intitulada "Primavera Silenciosa" tornase um cone na virada da gesto pblica para o controle de pesticidas. Aps este trabalho relacionar o uso de DDT na produo agropecuria, com o decaimento da populao da guia calva (Haliaeetus leucocephalus), muitos outros trabalhos vieram mostrar os efeitos adversos da entrada dos compostos organoclorados na teia trfica. Entre os efeitos deletrios do DDT, a promoo do crescimento e reproduo de clulas cancerosas que j existam no organismo, e a interferncia no sistema endcrino so os mais marcantes (ATSDR, 2002). A partir de ento, inicia-se o estabelecimento de critrios para o controle das STP no ambiente. Uma das principais metodologias para se propor limites de concentrao dos PCB nos alimentos o chamado clculo do equivalente toxicolgico (Toxic Equivalent - TEQ). O clculo do TEQ se faz com base em um composto do grupo das chamadas Dioxinas (polychlorinated dibenzopara-dioxins - PCDDs), que apresenta maior afinidade molecular com o receptor AhR, o 2,3,7,8-Tetraclorodibenzo-p-Dioxina (figura 4).

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Figura 4: Representao da molcula de 2,3,7,8-Tetraclorodibenzo-p-Dioxina. Sua estrutura planar favorece a interao com o receptor Aril hidrocarboneto. A afinidade dos receptores AhR com as dioxinas est relacionada com o carter planar da molcula, seu tamanho e aos tipos de interao eletrosttica entre a molcula ligante e o receptor AhR (Denison et al., 2002). Desta forma, atribuiu-se 2,3,7,8-Tetraclorodibenzo-pDioxina um fator de equivalncia toxicolgica (Toxicological Equivalent Factor - TEF) igual a 1 (van den Berg et al., 2000). Em termos do mecanismo de toxicidade via receptor AhR, o grupo dos PCB apresenta uma diferena estrutural molecular fundamental em relao s dioxinas. Nos PCB, a ligao entre os dois anis benznicos feita por uma ligao simples, o que permite a rotao da molcula. Esta rotao ocorre principalmente nos ismeros que apresentam o cloro nas posies prximas ligao dos anis, chamada posio "orto". Rotacionando os dois anis benznicos, as molculas de PCB perdem a forma planar, ficando menos parecidas com a estrutura das dioxinas, tendo assim menos afinidade de ligao com o receptor AhR. Dos 209 congneres de PCB, 12 apresentam conformao estrutural parecida com a das dioxinas, sendo ento chamadas de compostos parecidos com dioxinas (Dioxin-Like compounds - DLC) (Rodan e Cleverly, 2011), como apresentado na figura 5. A estes compostos, atribui-se valores de TEF menores que um.

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Figura 5: Congneres de PCB que apresentam conformao estrutural molecular parecida com a do grupo das dioxinas. Imagens obtidas no endereo http://www.caslab.com

Em 2005, a WHO atualizou os valores de TEF para os compostos parecidos com Dioxina (van den Berg et al., 2006). A equao para se determinar o TEQ descrita a seguir: TEQ = (PCDDi X TEFi) + (PCDFi X TEFi) + (PCBi X TEFi), onde PCDD (Polychlorinated Dibenzo-p-dioxins) so os compostos de Dibenzodioxinas Policloradas, PCDF (Polychlorinated Dibenzofurans) os Dibenzofuranas Policloradas, e PCB as Bifenilas Policloradas (van den Berg et al., 2000). Desta forma, os TEQs dos alimentos so calculados a partir das concentraes destes contaminantes encontrados na amostra, devendo este valor estar entre 1 e 4 pg Total-TEQ/Kg de peso corpreo, conforme a Organizao Mundial de Sade (WHO, 1998).

15 Trabalhos prvios indicam que a maior contribuio para o TEQ no pescado dada pelo grupo dos PCB (Shen et al., 2009). Portanto, possvel se ter uma boa estimativa de TEQ, determinando-se apenas as concentraes de PCB, que apresenta uma metodologia de quantificao mais simples, quando comparada com a envolvida na determinao de PCDD e PCDF. Uma ferramenta que auxilia a garantir a segurana dos alimentos em relao presena de agentes txicos o estabelecimento dos chamados limites mximos de resduo (Maximum Residue Limit - MRL). Os MRL podem ser estabelecidos atravs de comisses de profissionais experientes no assunto, ou por meio de modelos estatsticos. Produtos de diferentes procedncias, variedades e estoques, alm de mtodos de anlise distintos, geram uma base de dados com valores de concentraes dos contaminantes obtidas por diferentes amostragens. Desta forma, os MRL so estabelecidos em um patamar geralmente acima dos mais altos valores encontrados nesta base de dados (MacLachlan e Hamilton, 2010). A abordagem do MRL apresenta um carter mais comercial, pois tende a atender as necessidades de aceitao de um produto no mercado. No Brasil, o sistema de regulao da segurana dos alimentos tambm segue critrios comerciais, e fica a cargo da ANVISA, que adota os mesmos parmetros estabelecidos pelas agncias internacionais para exercer a fiscalizao da produo brasileira. Portanto, fica clara a necessidade de se avanar na capacidade analtica dos programas de monitoramento conduzido no Brasil, no sentido de se ampliar no s o espectro de compostos analisados, como o dos alimentos tambm. Estabelecer programas de vigilncia da segurana toxicolgica dos produtos alimentcios produzidos no Brasil um importante fator para fortalecer o setor de aquacultura, uma vez que atualmente no h legislao especfica para cada um dos produtos deste segmento. Neste sentido, o presente estudo contribui no s disponibilizando dados sobre a

16 qualidade do produto, como tambm para se elaborar mtodos de avaliao de reas onde se pretende implantar um sistema de cultivo de bivalves. Outro mtodo, utilizado para se estimar as concentraes seguras mximas de contaminantes em um alimento, considera a dose diria ingerida de um determinado composto ou elemento. Este mtodo leva em conta a massa corprea do indivduo que est ingerindo o alimento, estimando-se assim a carga corporal do contaminante em foco, dentro de um intervalo temporal. Este mtodo gera uma dose de referncia chamada de Ingesto Diria Tolervel (ou Aceitvel) (Tolerable Daily Intake - TDI, ou Aceptable Daily Intake - ADI), a qual o indivduo no deve ultrapassar, para se resguardar dos efeitos deletrios promovidos pelo agente txico em questo. Estas doses seguras para consumo so estimadas a partir de ensaios onde se estabelecem concentraes que o efeito adverso do composto qumico no observado (No Observed Adverse Effect Level - NOAEL). Fatores de segurana so aplicados a estes valores, mesmo quando estes so obtidos a partir de observaes feitas em humanos, considerando a variao na suscetibilidade interindividual (WHO, 1997).

1.5. Moluscos bivalves: de alimento humano a sentinelas da contaminao ambiental A opo de se determinar a concentrao de um composto ou elemento em um organismo vista como sendo a nica forma de se obter uma medida de biodisponibilidade do contaminante no ambiente (Cairns e Mount, 1990). J na dcada de 60, os moluscos bivalves foram sugeridos como um modelo biolgico para se avaliar a dinmica de contaminantes no ambiente (Brooks e Rumsby, 1967). Em 1975, os bivalves foram apontados como possveis biomonitores para o programa internacional de

17 monitoramento de poluentes no ambiente marinho: o Mussel Watch, da agncia americana National Oceanic and Atmospheric Administration (NOAA) (Goldberg, 1975). Em 2004, o Programa de Meio Ambiente das Naes Unidas (UNEP) tambm recomendou o emprego de bivalves para o mesmo fim (UNEP, 2004). No mbito dos pases da Amrica Sul, no h nenhum programa do gnero, o que deixa uma lacuna no conhecimento sobre a dinmica dos contaminantes (ex.: meia vida de um elemento ou substncia txica) nas espcies nativas do Brasil, e demais naes da regio. Determinar se uma espcie de molusco bivalve possibilita o estabelecimento de uma relao estatstica simples entre a concentrao encontrada na fonte de contaminantes (sedimento, gua, particulado em suspenso etc) e a observada em seu tecido, fundamental para se avaliar o seu potencial enquanto organismo sentinela. Esta relao informa o seu poder de resoluo e permite avaliar em que escala de tempo/espao a espcie responde variao das concentraes ambientais dos contaminantes (Beeby, 2001). Existem algumas caractersticas e razes que levaram diversos pesquisadores a adotarem os moluscos bivalves filtradores como modelo biolgico para o estudo da dinmica ambiental de contaminantes. Tais como: 1) As espcies podem apresentar ampla distribuio geogrfica, o que facilita a comparao de dados produzidos em locais distantes. E ainda, como ambientes tropicais apresentam maior biodiversidade, este ponto especialmente interessante, pois aumenta a chance de se encontrar nestas reas uma espcie relacionada filogeneticamente com outra, de outras regies. 2) Ocorrem em densidade satisfatria em esturios, possibilitando uma amostragem ao longo de todo o ano de indivduos com diferentes tamanhos, sem causar problemas para a preservao da estrutura populacional da espcie no local de estudo;

18 3) Esses animais esto geralmente presentes em ecossistemas estuarinos, justamente o corpo d'gua que integra diversas descargas de efluentes txicos (como discutido na sesso 1.1), estando assim em reas crticas; 4) A maioria dos bivalves so ssseis sedentrios, o que facilita a coleta e fornecem de fato uma informao integradora sobre a rea onde foram coletados; 5) A massa corprea de um indivduo adulto, geralmente suficiente para proceder a anlise de contaminantes, possibilitando avaliar a variao interindividual; 6) Algumas espcies suportam amplas variaes de salinidade (eurihalinos) e temperatura (termohalinos), possibilitando ao pesquisador deslocar o animal de um local para outro, em situaes experimentais de campo; 7) Ao serem coletados, no so necessrios maiores cuidados para o seu acondicionamento, caso seja de interesse transportar os organismos vivos para o laboratrio. Isto porque, os bivalves podem fechar suas valvas, e se manterem com a gua da cavidade palial; 8) Mesmo bioacumulando pesticidas em seus tecidos com concentraes at 200 vezes maior que a encontrada na gua (Ozkoc et al., 2007), estes organismos apresentam pouco comprometimento fisiolgico, viabilizando sua permanncia em ambientes contaminados. Considerando as dificuldades analticas em se determinar as concentraes de analitos em nvel trao na coluna d'gua, este ponto ganha ainda mais relevncia. E ainda, a resposta do aparato enzimtico responsvel pela metabolizao de STP nos moluscos bivalves seria menos pronunciada, quando comparada com a observada em peixes (Stegeman e Lech, 1991), ou de fato inexpressiva (Cheung et al., 2002). Estas observaes estariam relacionadas ao inibitria das STP, sobre as enzimas envolvidas no sistema metablico. 9) O conhecimento de sua biologia permite que sejam cultivados em laboratrio, viabilizando experimentos sob condies controladas. E ainda, o tempo de vida longo (at 8 anos) permite estudos de longo prazo;

19 10) Espcies de bivalves tm interesse comercial para o consumo humano, o que acrescenta importncia na determinao das concentraes de contaminantes nestes organismos, a fim de se avaliar a segurana deste alimento. E ainda, como h o cultivo comercial de bivalves, o pesquisador pode se valer da estrutura desta atividade para sua pesquisa. Isto muito til no s como fonte de animais com idade e procedncia conhecidas, mas tambm como uma facilidade para desempenhar experimentos de campo. Espcies do gnero Mytillus que ocorrem no hemisfrio norte (M. galloprovincialis, M. edulis e M. trossulus) so bem estudadas com relao aos padres de bioacumulao de contaminantes em seus tecidos (O'Connor, 1998; Galassi et al., 2008; Kimbrough et al., 2008). Uma srie de publicaes recentes, sobretudo sobre dados de pases asiticos, vem demonstrando o uso potencial de espcies da famlia Mytilidae, como sentinelas para monitorar a contaminao por STP (Kim et al., 2002; Jin et al., 2008; Liu et al., 2008). Estes trabalhos demonstram que as concentraes bioacumuladas nos tecidos dos bivalves respondem s variaes encontradas no ambiente. Uma avaliao de risco sade humana pela exposio s STP atravs da ingesto de pescado (inclusive bivalves) apontou um nvel de risco na sia maior que os observados na Europa e nos Estados Unidos (Jiang et al., 2007). No h registro de estudos com esta abordagem no Brasil, nem na Amrica Latina. No Chile, uma espcie representante da famlia Mytilidae (Perumytilus purpuratus) foi considerada um bom biomonitor para contaminao ambiental por PCB, revelando um gradiente de distncia para as concentraes ambientais (Mendoza et al., 2006). Esta escassez de conhecimento a respeito das espcies de bivalves que ocorrem na Amrica Latina como um todo, contrasta fortemente com a disponibilidade de dados encontrados para espcies que ocorrem no hemisfrio norte.

20 Como exemplo, pode-se citar um estudo sobre a cintica e o metabolismo de PCB e pesticidas em Dreissena polymorpha (Pallas 1771), espcie nativa do Mar Cspio e Mar Negro, mas atualmente distribuda por toda a Europa (Karatayev et al., 2003). Por outro lado, poucos estudos sobre a ocorrncia de STP em espcies com distribuio na Amrica do Sul so encontrados. Tambm so escassos os estudos comparativos entre a bioacumulao de STP por diferentes espcies de bivalves. Um estudo, que realizou um comparativo de duas espcies de bivalves de um mesmo ambiente, observou concentraes comparveis entre as Mytilus edulis e Crassostrea gigas (Doerr e Liebezeit, 2009). Assim, h a necessidade de se entender melhor a variabilidade espcie especfica dos padres de bioacumulao e metabolismo das STP em bivalves, principalmente naquelas espcies com ocorrncia em ambiente tropical. Com relao a uma espcie da famlia Mytilidae que ocorre na costa brasileira, o mexilho Perna perna, h dados escassos e isolados na literatura sobre a bioacumulao de STP. Esta situao dificulta a interpretao dos dados sobre incorporao dos contaminantes em P. perna, uma vez que no h estudos voltados para avaliar o seu poder de resoluo. Esta carncia de dados pode ser entendida pelas dificuldades analticas enfrentadas para a determinao destes compostos (alto custo de equipamentos e qualificao de pessoal), ou mesmo pela deficincia/ausncia de legislao especfica, que obrigue o controle da qualidade do pescado produzido. No Brasil, os nicos trabalhos de bioacumulao das STP em bivalves no ambiente marinho foram realizados na Baa de Guanabara (Xavier de Brito et al., 2002; Francioni et al., 2007), na costa de So Paulo (Gorni e Weber, 2004), e na Baa de Todos os Santos (Tavares et al., 1988). Na Bahia, os autores, que no coletaram P. perna, relatam concentraes baixas, porm com um padro de acmulo dos mesmos congneres de PCB nas diferentes espcies de bivalves estudadas.

21 No Estado do Rio de Janeiro, h dados de bioacumulao dos pesticidas HCB, Lindane, Aldrin, Dieldrin, Endrin, DDT e seus metablitos em amostras de P. perna (Xavier de Brito et al., 2002). As amostras referentes estao seca (agosto) foram as que apresentaram valores mais elevados (16,9 ng.g-1 DDT), mas ainda assim, estes valores esto duas ordens de grandeza abaixo dos relatados para o mar da China em M. edulis e Ostrea edulis (1.540 e 2.680 ng.g-1) (Jin et al., 2008). Em outro estudo conduzido na Baa de Guanabara, onde se utilizou a tcnica de transplante, verificou-se uma boa correlao entre os Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (Polycyclic Aromatic Hydrocarbons - PAH) bioacumulados por P. perna e a concentrao destes poluentes encontrados na frao dissolvida da gua (Francioni et al., 2007). Estes autores apontam para o potencial uso desta espcie como biomonitor da contaminao por PAH, apesar da amostragem ter sido realizada apenas durante trs meses do vero. Retirar indivduos de um local e transplant-los para outro, tem sido uma tcnica utilizada para se avaliar a biodisponibilidade de um contaminante no meio ambiente, alm de estimar o intervalo de integrao (incorporao e eliminao) deste contaminante com o organismo (Wallner-Kersanach et al., 2000; Amaral, 2002). Estes experimentos de transplante permitem um maior controle do tempo de exposio. Deve-se destacar que este tipo de experimento deve ser conduzido em paralelo com uma monitorao de longo prazo, a fim de que se obtenham resultados confiveis das variaes espaciais e temporais da abundncia e ocorrncia dos contaminantes (Gunther et al., 1999). Os estudos conduzidos com P. perna, como organismos sentinela para a monitorao ambiental das STP at o momento, so baseados em amostragens momentneas. Assim, a variabilidade nas taxas de bioacumulao dos diferentes contaminantes ao longo do tempo e do espao no foi ainda estabelecida. Estas informaes so primordiais para que um

22 organismo sentinela seja calibrado (Beeby, 2001). Esta lacuna limita a interpretao dos dados de acmulo das STP no mexilho P. perna e limita seu uso como ferramenta (modelo biolgico) para a biomonitorao. Outra fonte de variabilidade a ser considerada so os efeitos sazonais. Dois pontos podem ser destacados: a maior desoro de compostos apolares no sedimento em funo do aumento da temperatura (Borghini et al., 2005); e a maior contribuio de contaminantes com origem continental para o mar na estao chuvosa, por meio de run off. Estes fatores podem promover um efeito sazonal na exposio ambiental dos organismos s STP. Mesmo assim, ainda no se obteve at o momento uma consistente avaliao da sazonalidade sobre as taxas de incorporao/detoxificao dos STP em P. perna.

1.6. Os compartimentos ambientais na dinmica dos contaminantes nos ecossistemas aquticos Uma vez que entram nos sistemas aquticos, contaminantes hidrofbicos tendem a formar complexos com os slidos em suspenso (SS) e sedimentarem. Mecanismos fsicos e/ou qumicos so responsveis pela estabilidade da interao matriz-substncia, de forma que o termo soro refere-se ao conjunto destes fenmenos (Gdaniec-Pietryka et al., 2007). Assim, um importante compartimento a ser considerado na dinmica de poluentes nos ecossistemas aquticos so os SS. Estes compreendem o sston (plncton e partculas orgnicas e inorgnicas) e o sedimento, que esto suspensos na coluna dgua. Estas partculas podem permanecer suspensas, mas tambm podem sedimentar, e novamente voltar coluna d'gua junto com o sedimento de fundo por ressuspenso (Turner e Millward, 2002). E ainda, o carbono orgnico associado ao sedimento e ao SS favorece reaes de xido-reduo entre estes compartimentos e o meio.

23 Portanto, os sucessivos eventos de ressuspenso e sedimentao de partculas, fazem com que os slidos em suspenso assumam um papel importante na disponibilidade, no transporte (inclusive longitudinal), na ciclagem e na destinao final de contaminantes nos ecossistemas aquticos (Baskaran e Santschi, 1993). Uma vez que os contaminantes presentes na coluna dgua formam um complexo com os SS, as substncias txicas podem permanecer adsorvidas matria orgnica e sedimentar, ou se solubilizarem novamente por desoro (Cornelissen et al., 2005). Em casos onde o tempo de residncia das guas do corpo hdrico considerado longo, as concentraes das STP encontradas nos SS podem se aproximar da observada na gua do entorno das partculas (Koelmans et al., 1997).

2. Hipteses So onze as hipteses que norteiam esta tese. 1 - A baa de Sepetiba a que apresenta maior potencial de produtividade para o mexilho P. perna, quando comparadas com as baas de Guanabara e Ilha Grande; 2 - Os mexilhes cultivados nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande apresentam uma variao sazonal em suas produtividades, sendo o final do inverno a poca mais propcia para a despesca; 3 - Considerando apenas os locais de maricultura das baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande, e ainda a enseada do Forno em Arraial do Cabo, h um gradiente de contaminao por STP crescente da seguinte forma: Arraial do Cabo<Baa de Ilha Grande<Baa de Sepetiba<Baa de Guanabara; 4 - Bivalves cultivados em baas com diferentes nveis de impacto ambiental apresentam distintos perfis de bioacumulao de STP em seus tecidos moles, sendo bons organismos sentinelas para a contaminao ambiental por STP em ambientes estuarinos tropicais;

24 5 - A carga txica bioacumulada no tecido de N. nodosus (msculo adutor e gnada) comercializado para consumo humano, menor que a carga observada no tecido comestvel de P. perna (todo o tecido mole), no que diz respeito s STP quantificadas nesta tese; 6 - Dos bivalves cultivados nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande, apenas os provenientes da Baa de Guanabara apresentam risco toxicolgico para o consumo humano com relao s STP quantificadas nesta tese; 7 As maiores concentraes de STP bioacumuladas pelos mexilhes e pelos coquilles, so observadas na estao chuvosa (final de vero), devido maior contribuio do aporte continental dos contaminantes por run off; 8 - Um ms o tempo suficiente para que os mexilhes P. perna transplantados de um local mais contaminado, para outro menos contaminado, reflita o mesmo perfil de contaminao de STP observado em indivduos crescidos nos locais de destino do transplante; 9- As concentraes de STP so maiores no mexilho P. perna, que as verificadas no sedimento e no SS, uma vez que os organismos filtradores tendem a concentrar os contaminantes encontrados na coluna dgua; 10 - A variao nas concentraes de STP determinadas nos mexilhes P. perna responde mais em funo das observadas no SS, do que as verificadas no sedimento; 11 - As STP com maiores coeficientes de partio octanol-gua (Kow), apresentam os maiores valores de fatores de bioacumulao sedimento-biota (BSAF).

3. Objetivos O objetivo geral desta tese foi avaliar a bioacumulao de STP pelo mexilho P. perna e pelo coquille N. nodosus e suas conseqncias para as atividades de cultivo comercial e monitorao ambiental.

25 Para atingir este objetivo geral, as hipteses levantadas nesta tese foram abordadas em quatro captulos. Dois captulos dedicados ao tema de monitoramento da contaminao ambiental por STP utilizando bivalves. E um captulo que tratou da produtividade de mexilhes P. perna em trs importantes baas do Estado do Rio de Janeiro, e das possveis metodologias para aferi-las. E ainda, um captulo dedicado adequao das metodologias empregadas neste estudo.

3.1. Objetivos especficos As hipteses levantadas nesta tese foram avaliadas atravs dos seguintes objetivos especficos, os quais foram divididos por captulos. Captulo I a) Comparar os ndices de condio de mexilhes cultivados nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande; b) Verificar se h diferenas entre os valores dos ndices de condio medidos em mexilhes P. perna coletados nos meses do vero e inverno; Captulo II c) Determinar as concentraes de STP em indivduos de P. perna em tamanho comercial provenientes de reas de cultivo das baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande, e da enseada do Forno em Arraial do Cabo. E determinar tambm, as concentraes de STP de coquilles com tamanho comercial provenientes de cultivo de Arraial do Cabo e da Ilha Grande. A partir destas informaes, pode-se estimar a contaminao ambiental por STP dos locais onde os bivalves foram cultivados; d) Comparar as concentraes de STP bioacumuladas por indivduos de P. perna e N. nodosus coletados no final do vero e no final do inverno, no intuito de se verificar a

26 existncia de tendncias para um possvel efeito sazonal sobre a bioacumulao de STP por estes bivalves; e) Analisar os perfis das concentraes de STP bioacumulados em mexilhes P. perna e em coquilles N. nodosus, a fim de se caracterizar os locais de procedncia dos animais e a diferena entre as espcies; f) Comparar as cargas txicas das STP determinadas nesta tese, entre P. perna e N. nodosus; g) Utilizar as metodologias de avaliao de risco toxicolgico para o consumo humano, visando identificar se os bivalves estudados apresentam uma ameaa para a segurana alimentar, no tocante aos compostos aqui investigados; Captulo III h) Avaliar a cintica de depurao de STP bioacumuladas em P. perna, atravs de um experimento transplante de um local mais contaminado, para um menos contaminado, em duas estaes do ano (vero e inverno); i) Determinar, comparar e correlacionar as concentraes de STP em mexilhes P. perna, em slidos em suspenso, e em sedimento superficial de fundo, de trs baas tropicais (Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande) coletados em dois meses do vero; j) Determinar o fator de bioacumulao biota-sedimento (BSAF) das STP estudadas nesta tese, e correlacion-los com os seus respectivos Kow.

4. rea de Estudo Quatro pontos da costa do Estado do Rio de Janeiro foram adotados como rea de estudo para esta tese (figura 6). So eles: Baa de Guanabara (BG), Baa de Sepetiba (BS), Baa da Ilha Grande (BIG), e Arraial do Cabo (AC).

27

Trs os estudados, so de relevante importncia e socioeconmica. Figura 6: rea depontos Estudo. Amostras ambientais foram coletadashistrica nas baas de Ilha Grande (BIG), Sepetiba (BS) e de Guanabara (BG), e da Enseada do Forno, em Arraial do Cabo (AC). Existem menos atividades econmicas no municpio de Arraial do Cabo (AC), quando comparado com as demais reas de estudo. Desta forma, assumi-se esta rea de estudo de referncia para valores basais das STP aqui quantificadas. Em cada local de estudo, trabalhou-se em sistemas de cultivo dos bivalves. Dois pontos de estudo so historicamente poludos (BG e BS). J nos outros dois locais, no se observam fontes expressivas de contaminao ambiental, principalmente quando comparadas com BG e BS. Apesar do mexilho P. perna ser cultivado em todos os pontos estudados, N. nodosus cultivado apenas em BIG e AC. Isto decorre por que esta espcie apresenta menor resistncia a guas com temperaturas mais elevadas (Velasco, 2006). Com 412 km2 de espelho d'gua, a BG cercada por 12 municpios, incluindo a capital do Estado do Rio de Janeiro. O nmero total de habitantes em seu entorno de aproximadamente 11 milhes, sendo que cerca de apenas 25% do esgoto domstico recebe tratamento secundrio (Perin et al., 1997). Considerando a sua bacia de drenagem, a BG recebe efluentes de 12 mil indstrias, e ainda tem instalado ao seu redor duas refinarias de petrleo, duas bases navais e dois estaleiros (Kjerfve et al., 1997).

28 Desde 1992, a atividade de cultivo do mexilho P. perna tem sido desenvolvida na poro sudoeste da BG, prximo barra da baa, onde j foram descritas elevadas concentraes de metais (Baptista Neto et al., 2000). O cultivo, promovido pela Associao Livre dos Maricultores de Jurujuba, teve uma produo anual estimada em 130 t e 65 t em 2005 e 2006, respectivamente (Lage e Jablonski, 2008). A logstica do trabalho de campo na praia de Jurujuba (225559S; 0460640O) foi viabilizada a partir da colaborao de um maricultor local. No melhor de nosso conhecimento, no h dentro da BG, outro local com cultivo de mexilhes que seja feito de forma sistemtica como observado na regio de Jurujuba. A Baa de Sepetiba drena as guas da regio industrial e rural de Santa Cruz e Itagua, e est mais relacionada atividade metalrgica e tambm porturia (Porto de Sepetiba). Podese dizer que a expanso da cidade para a zona oeste do municpio do Rio de Janeiro foi facilitada com a possibilidade de escoamento da produo pela Baa de Sepetiba. Um exemplo disto o projeto de expanso do porto de Sepetiba, no final da dcada de 90, que visou transform-lo no maior porto da Amrica Latina. As fontes de poluentes desta baa tambm so difusas. Uma contribuio expressiva para a entrada de contaminantes neste sistema o Rio Guandu (Torres et al., 2002). Este rio drena as guas do distrito industrial de Nova Iguau, da rea urbana de Queimados (maior contribuio no aporte de contaminantes para o Guandu) e est na zona de influncia de atividades agrcolas. Como o lodo da estao de tratamento do Rio Guandu re-introduzido no rio, a baa de Sepetiba receptor final de efluentes industriais e domsticos gerados a longa distncia. As coletas para esta tese se realizaram na fazenda experimental de maricultura da Universidade Castelo Branco, na Ilha de Itacuru (Praia Grande) situada na poro norte da BS (225704S; 0435428O). A aproximadamente 10 km deste ponto de coleta, econtra-

29 se a foz do rio que drena o sistema do Rio Guandu para a BS, chamado Canal de So Francisco, responsvel pela principal entrada de STP nesta baa (Japenga et al., 1988). A Baa de Ilha Grande no drena nenhuma rea industrial, ou urbana de relevncia, e sua comunicao com o mar limitada por uma ilha (Ilha Grande). A abrupta elevao da Serra do Mar logo s margens desta baa impede que a ocupao do solo avance no entorno desta baa. Este ecossistema tem sido considerado como rea de referncia dos nveis basais de contaminantes metlicos (Cardoso et al., 2001; Freret-Meurer et al., 2010). No entanto, a presena de um estaleiro (Estaleiro BrasFELS, antigo Verolme) uma possvel fonte de contaminantes para o ambiente. As coletas foram realizadas em um sistema de cultivo experimental de coquilles do laboratrio de maricultura do projeto POMAR (Programa de Repovoamento Marinho) do Instituto de Ecodesenvolvimento da Baa de Ilha Grande (IEDBIG), situado na enseada da Biscaia (230138S; 0441414O). Os mexilhes amostrados neste local fixaram-se naturalmente nas estruturas de "long-line". O quarto ponto de estudo, AC, est localizado a 160 km da cidade do Rio de Janeiro, e possui aproximadamente 27 mil habitantes. uma regio turstica e possui apenas um estaleiro de pequeno porte (Estaleiro Cassinu), alm de um cais de embarcaes tursticas, onde tambm se realizam reparos nos barcos. Na regio, registrado o fenmeno da ressurgncia, sobre tudo entre os meses de dezembro a maro, quando intensos ventos de quadrante nordeste incidem com maior frequncia (Paes e Moraes, 2007). No se encontrou na literatura dados sobre a presena e distribuio de STP nesta rea. As coletas para esta tese se deram na Enseada do Forno (225750S; 0420045), onde h o cultivo do coquille N. nodosus e da ostra Crassostrea gigas. Os maricultores locais

30 tambm utilizam as gaiolas penduradas em sistema long-line. Nestas estruturas, os mexilhes P. perna se fixam naturalmente. Como todos os locais de estudo desta tese so fontes de recurso pesqueiro, fundamental que se avalie o nvel de contaminao destes ecossistemas pelas STP. A partir desta informao, pode-se estimar o risco de exposio humana a estes contaminantes pela ingesto do pescado produzido nestas regies.

31 5. Captulo I. Estimativa das variaes sazonais sobre o potencial de produo do mexilho Perna perna (Linnaeus, 1758) cultivados em trs baas tropicais usando diferentes mtodos de ndice de condio.

5.1. Introduo A atividade de maricultura teve um crescimento de 20% no mundo de 1999 a 2008 (F.A.O., 2010), e uma das famlias de bivalves comercializadas mais importante a Mytilidae. No Brasil, o mexilho marinho mais produzido o Perna perna (Linnaeus, 1758) (Molusca: Bivalvia) (Mitilidae), que representa 15% do total produzido por toda a maricultura brasileira (IBAMA, 2007) . O ndice de Condio (IC) tem sido usado como uma ferramenta para se avaliar o estado fisiolgico dos bivalves. Parte-se do princpio que em uma condio tima de sade, o preenchimento do volume da cavidade palial pelo tecido mole do indivduo mximo. Assim, o IC usado como uma estimativa da relao entre o tecido mole do bivalve e o volume da cavidade palial, o que fornece uma informao til para os maricultores, uma vez que indica a qualidade comercial dos animais (Orban et al., 2002) e um indicativo da melhor rea para cultivo (Sasikumar e Krishnakumar, 2011). H o entendimento de que os animais apresentam diferentes atividades fisiolgicas (crescimento, reproduo, excreo etc.) para condies ambientais distintas, e o IC pode ser uma medida que resuma estas variaes (Lucas e Beninger, 1985). Estudos tm sido conduzidos no intuito de se estabelecer os parmetros responsveis pelas flutuaes nos valores de IC. Tem-se demonstrado que o IC fortemente influenciado pelo estgio da gametognese do animal. H um decrscimo da massa corprea no perodo de transio da ltima desova e o estgio de inatividade sexual, uma vez que o espao interfolicular no est preenchido pelo tecido conjuntivo (Bressan e Marin, 1985).

32 A baixa disponibilidade de alimento, (sston orgnico e fitoplncton) e as primeiras desovas no vero tm sido relacionadas com a ocorrncia de menores valores dos IC observados em P. perna para esta poca do ano em uma baa da Venezuela (Narvez et al., 2008). Por outro lado, temperaturas altas podem inibir a desova (Vlez e Epifanio, 1981), o que favoreceria um aumento nos valores de IC, no vero. Outra abordagem para a anlise sobre a variao nos valores de IC fornecida por alguns estudos que sugerem que mexilhes coletados em locais contaminados apresentam menores valores de IC, quando comparados com animais provenientes de reas menos impactadas (Pampanin et al., 2005). Tambm se observa uma relao positiva entre valores de IC e as concentraes de alguns contaminantes, o que poderia ser entendido pela incorporao destes contaminantes juntamente com o alimento, apesar dos efeitos negativos destes agentes txicos para os parmetros fisiolgicos (Carro et al., 2010). Outro fator de influncia sobre a variabilidade nos resultados de IC so as estaes climticas, que podem exercer um papel importante sobre as variaes dos valores de IC, apesar de no influenciar nas respostas dos biomarcadores de contaminao ambiental (Kagley et al., 2003). Diferentes mtodos para se estimar IC esto disponveis na literatura, mas no h um consenso sobre qual reflete melhor a real condio fisiolgica do animal, ou qual o mais preciso. Os parmetros mais usados em equaes de clculo do IC so: massa total, massa da concha, massa do tecido mole, volume interno e comprimento total. Estudos tm sido realizados no sentido de se estabelecer uma equao de IC mais confivel. Uma reviso sobre os mtodos do clculo de IC para se estimar a condio fisiolgica de mexilhes, indica que a melhor abordagem seria feita atravs da metodologia chamada Net Growth Efficiency (Lucas e Beninger, 1985). Este mtodo envolve medies de

33 respirao e taxa de clareamento, o que torna o mtodo muito laborioso para ser inserida na rotina de maricultores. Quando consideramos a maricultura em reas tropicais ou sub-tropicais, observamos que poucos dados sobre IC esto disponveis em jornais indexados, e esta informao ainda mais escassa quando pesquisamos estudos dedicados especificamente ao mexilho P. perna Este captulo ofereceu uma avaliao comparativa entre o potencial produtivo de P. perna em trs baas tropicais, bem como uma estimativa dos efeitos sazonais sobre os valores do IC. Para isto, nove mtodos diferentes para o clculo de IC, foram selecionados da literatura.

5.2 Material e mtodos Neste captulo, trabalhou-se com mexilhes de trs baas: BG, BS e BIG. As amostragens foram feitas no vero (dezembro, janeiro, fevereiro e maro) e no inverno (junho, julho, agosto e setembro), de 2008 a 2009. Nove mtodos foram escolhidos da literatura, com o intuito de se obter diferentes abordagens sobre a estimativa do IC. O critrio de seleo foi baseado principalmente na viabilidade do uso destes mtodos por parte dos maricultores, j que entendemos que o IC pode se tornar uma ferramenta til na produo de bivalves. Os mtodos so baseados em conceitos distintos, e, consequentemente, espera-se que diferentes aspectos do meio ambiente, e das variaes ambientais, sejam refletidos por cada equao. Assim, em uma dada comparao, se houver uma diferena realmente expressiva entre os potenciais de produtividade de P. perna de duas reas, esta ser apontada por distintos mtodos de clculo de IC, baseados em diferentes abordagens. As equaes selecionadas para este estudo so descritas abaixo:

34 IC I - [peso seco do tecido mole (g)] x [peso mido da concha (g) x 100]-1 (Davenport e Chen, 1987) IC II - [peso mido do tecido mole (g)] x [peso mido da concha (g) x 100]-1 (Davenport e Chen, 1987) IC III - [peso mido do tecido mole (g) x 100] x [peso mido total do animal (g)]-1 (Marques, 1998) IC IV - [peso seco do tecido mole (g)] x [volume interno da cavidade palial (ml) x 100]-1 (Rebelo et al., 2005) IC V [peso mido do tecido mole (g)] x [comprimento da concha (mm) x 100] -1 (Kagley et al., 2003) IC VI - [peso seco do tecido mole (g)] x 100 x [comprimento da concha (cm)]-1 (Martin et al., 1984) IC VII [peso seco do tecido mole (g) x 100] x [peso seco total do animal (g)]-1 (Narvez et al., 2008) IC VIII [peso seco do tecido mole (g)] x 100 x [peso mido total do animal (g) - peso mido da concha (g)]-1 (Hickman e Illingworth, 1980) IC IX [peso seco do tecido mole (g)] x [comprimento da concha ao cubo (cm3)] (Granby e Spliid, 1995) O mtodo de IC IV, descrito por Rebelo e colaboradores (2005), requer mais tempo e trabalho manual para se determinar o volume interno da cavidade palial. Porm, ainda assim um mtodo vivel de ser aplicado por produtores de bivalves. Trinta espcimes de P. perna com tamanho comercial (6 - 8 cm) foram coletados mensalmente de cada local de estudo durante o inverno e o vero. Como os trabalhos de campo foram realizados durante dois dias, a cada ms de coleta, no foi possvel obter as

35 medidas biomtricas dos animais frescos, sendo as amostras levadas ao laboratrio e mantidas a -20C. Antes das medies, os espcimes foram descongelados a temperatura ambiente. Os epibiontes foram removidos, a poro externa do bisso foi cortada, e a massa mida total foi obtida. O tecido mole foi dissecado, cortando-se o msculo adutor, e a poro interna do bisso removida. Em seguida, a Massa mida do Tecido Mole (MUTM), e a massa da concha foram anotados ( 0,01 de preciso). A massa seca do tecido mole foi obtida aps liofilizao. O Comprimento Total (CT) da concha foi determinado usando-se um paqumetro digital ( 0,02 mm de preciso). Para comparar os valores de IC obtidos neste estudo com os observados na literatura, importante notar que, para obter o peso mido do tecido mole, as amostras no foram colocadas sobre papel toalha antes de se pesar, como descrito por Marques e colaboradores (1998) para o mtodo IC III. Como alternativa para este procedimento, buscando dinamizar o mtodo, os organismos foram comprimidos nas mos do analisador. Assim, buscou-se padronizar o contedo de gua nos tecidos, extraindo o mximo de gua possvel, sem comprometer a integridade do tecido, para em seguida pes-lo. No foi possvel obter os dados para o mtodo IC IV das amostras coletadas em agosto na BS. As conchas destes animais estavam frgeis, no permitindo a confeco do modelo da cavidade palial, impedindo a estimativa de volume interno do animal. As anlises estatsticas foram realizadas no pacote estatstico Graphpad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc.). A normalidade dos dados foi verificada pelo teste de ShapiroWilkes, e a diferena das varincias com o teste de Kruskall-Wallis. O teste a posteriori de Dunn foi aplicado para identificar as diferenas entre os locais de coleta. O nvel de significncia adotado foi de 5% para todos os testes.

36 Visando identificar tendncias do efeito sazonal sobre os valores de IC obtidos, fez-se um ranking (do maior para o menor) com os valores de IC para cada mtodo, de cada baa. Adicionalmente, foram verificadas as diferenas entre os primeiros, e os segundos maiores valores de IC obtidos para cada mtodo, em relao aos meses subsequentes.

5.3. Resultados Todos os animais analisados foram cultivados no sistema tipo long-line, o que significa que permaneceram submergidos durante todo o tempo, permitindo a eles um acesso contnuo fonte de alimento. Este fato importante ser registrado antes de comparar os dados aqui reportados com os da literatura, uma vez que h um sistema de cultivo onde os animais so retirados da gua diariamente por algumas horas, e depois mergulhados novamente. Este procedimento conhecido como "castigo", e se realiza com o intuito de se prevenir o excesso de bioincustrao nas conchas dos organismos, o que provavelmente reduz a taxa de alimentao dos animais. A mdia do CT de todos os animais analisados foi de 7,5 cm, e a massa mdia do tecido mole seco foi de 9,9g. Os valores de CT e da MUTM obtidos em cada local de estudo esto em um mesmo nvel (figura 7), o que permitiu uma apropriada comparao dos valores de IC calculados pra cada baa, uma vez que estudos prvios relataram o registro de maiores valores de IC em organismos com maiores massa de tecido mole (Mubiana et al., 2006).

37

Figura 7: Distribuio dos valores de Massa mida do Tecido Mole - MUTM (g) e do Comprimento Total - CT (cm) de todos os animais coletados em cada um dos locais de estudo: Baa de Sepetiba (BS), Baa de Ilha Grande (BIG) e Baa de Guanabara (BG). As caixas representam os dados entre os quartis de 25% a 75%. O trao horizontal dentro das caixas, as medianas. As barras verticais os valores mnimos e mximos. Em quase todos os mtodos, dezembro foi o ms que apareceu no topo do ranking dos valores de IC, para as trs baas estudadas. Quando dezembro no esteve no topo da sequncia, este ms apareceu em segunda posio. Porm, no se detectou diferena significativa (p<0,05) entre os valores de IC observados para dezembro, e os obtidos para os meses que ocuparam os segundos lugares no ranking. A nica exceo para esta observao foi com relao ao mtodo IC VI, na BIG. Neste caso, dezembro ficou em quarto na sequncia de valores de IC, mas novamente no se detectou diferenas significativas entre os quatro meses com maiores IC (tabelas 1, 2 e 3).

Tabela 1: Valores das medianas e seus respectivos coeficientes de variao de cada ndice de Condio (IC) usado, para cada ms de amostragem na Baa de Sepetiba (BS). Letras "a" e "b" indicam diferena significativa entre os valores de IC dos meses com estas letras, segundo o teste de Dunn (p<0,05).
IC I Ms Med DEZ MAR FEV JUN AGO JAN SET JUL
a

IC II Ms Med DEZ MAR AGO FEV JUN JAN SET JUL

a

IC III Ms Med DEZ MAR FEV AGO JUN JAN JUL SET
a

IC IV Ms Med DEZ MAR FEV JAN JUN JUL SET

a a

BS IC V Ms Med DEZ FEV JAN MAR AGO JUN JUL SET

ab a

IC VI Ms Med DEZ FEV JAN MAR JUN AGO JUL SET

ab a

IC VII Ms Med DEZ MAR FEV AGO JUN JAN SET JUL
a

IC VIII Ms Med DEZ FEV MAR AGO JAN JUN JUL SET
a a

IC IX Ms Med DEZ FEV AGO JUN MAR JAN JUL SET

a

15 (13.2) 13 (16.4)

77 (13.2) 71 (16.4)

44 (7.2) 42 (10.8)

12 (38.9) 10 (33.7) 9.4 (37.5) 7.9 (40.7)

38 (19.1) 36 (16.3) 31 (18.6) 28 (37.8)

2 (19.1) 1.9 (18.6) 1.6 (16.3) 1.5 (37.7)

14 (11.3) 13 (14.7)

17 (1.1) 17 (2.2) 17 (2.1) 17 (2.8)

0.6 (10.2) 0.54 (15.6)

11 (20.2)

61 (20.2)

38 (12.3)

11 (17.9)

0.49 (19.1)

11 (22.4)

60 (20.2)

38 (13.5)

11 (18.3)

0.48 (20.1)

11 (20.2)

57 (22.4)

36 (14.8)

ab

7 (46.1)

ab

26 (27)

ab

1.4 (27)

10 (20.2)

16 (2.2)

0.47 (43.5)

ab

9.1 (16)

ab

48 (16)

ab

32 (10.6)

ab

6.4 (42.7)

ab

25 (27.9)

ab

1.4 (24.3)

ab

8.9 (14.5)

16 (3)

0.45 (11.5)

ab

7.3 (38.3)

ab

39 (38.3)

ab

28 (12.8)

ab

4.8 (48.1)

ab

22 (24.2)

ab

1.2 (28)

ab

7.3 (33.1)

ab

16 (3.1)

ab

0.34 (21.1)

ab

7.1 (17.7)

ab

38 (17.7)

ab

28 (21.9)

ab

18 (34.2)

ab

0.96 (34.3)

ab

7.1 (16.4)

ab

16 (3.9)

ab

0.32 (35.7)

38

Tabela 2:Valores das medianas e seus respectivos coeficientes de variao de cada ndice de Condio (IC) usado, para cada ms de amostragem na Baa de Ilha Grande (BIG). Letras "a" e "b" indicam diferena significativa entre os valores de IC dos meses com estas letras, segundo o teste de Dunn (p<0,05).
IC I Ms Med DEZ FEV AGO JAN JUN SET MAR JUL
a

IC II Ms Med DEZ FEV AGO JAN JUN SET MAR JUL

a

IC III Ms Med DEZ FEV AGO JAN JUN SET MAR JUL
a

IC IV Ms Med FEV DEZ MAR JAN JUN JUL AGO SET

ab a

BIG IC V Ms Med MAR DEZ JAN FEV JUN AGO JUL SET
a a

IC VI Ms Med MAR JAN FEV DEZ JUN JUL AGO SET

a a

IC VII Ms Med DEZ FEV AGO JAN JUN SET MAR JUL
a

IC VIII Ms Med DEZ FEV JAN MAR JUN JUL AGO SET
a

IC IX Ms Med FEV DEZ JUN MAR AGO JAN JUL SET

ab a

13 (25) 10 (12.9)

67 (25.1) 54 (12.9)

40 (21.4) 35 (8.3)

9.1 (30.4) 8.2 (26.4) 6.8 (27.4) 6.4 (17.4) 5.3 (34.6)

1.3 (23.2) 1.2 (13.7) 1.2 (13.2) 1.2 (16.9) 1.1 (19.4)

25 (23.2) 23 (13.2) 23 (17) 22 (13.5) 20 (19.4)

12 (23.8) 9.9 (11.6)

17 (18) 17 (1.5)

0.39 (18.3) 0.38 (14.4) 0.38 (13.9) 0.36 (33.9) 0.33 (14.9) 0.32 (9.1)

9.2 (17.1)

50 (17.1)

33 (11.6)

9.1 (15.6)

16 (3.6)

8.8 (27.8)

47 (27.8)

32 (17.7)

8.7 (24.7)

ab

16 (2.6)

ab

8.7 (16.5)

ab

47 (16.5)

ab

32 (11.4)

ab

8.6 (15.1)

ab

16 (2.4)

ab

8.7 (16.4)

ab

47 (16.4)

ab

32 (11.6)

ab

4.8 (18)

ab

0.87 (22.3)

ab

16 (18.1)

ab

8.6 (15.1)

ab

16 (3.1)

ab

8.1 (19.3)

ab

43 (19.3)

ab

30 (12.9)

ab

4.5 (23.4)

ab

0.85 (18.1)

ab

16 (22.2)

ab

8.1 (17.5)

ab

16 (2.4)

ab

0.28 (13.9)

ab

7.3 (21.6)

ab

39 (21.6)

ab

28 (14.7)

ab

4 (25.1)

ab

0.75 (17.2)

ab

14 (17.2)

ab

7.3 (19.7)

ab

16 (2.5)

ab

0.26 (11.4)

39

Tabela 3: Valores das medianas e seus respectivos coeficientes de variao de cada ndice de Condio (IC) usado, para cada ms de amostragem na Baa de Guanabara (BG). Letras "a", e "b" indicam diferena significativa entre os valores de IC dos meses com estas letras, segundo o teste de Dunn (p<0,05).
CI I Ms DEZ FEV AUG SET JAN MAR JUN JUL
a a

CI II Med Ms
11 (15.4) 10 (18) 10 (17.3) 9.8 (14) 9.3 (24.4)

CI III Med Ms Med Ms

a

CI IV Med Ms
a

BG CI V Med Ms
a

CI VI Med Ms
a

CI VII
31 (17) 28 (16.4)

CI VIII CI IX Med Ms Med Ms Med

10 (13.7) 10 (15.5)

DEZ AUG FEV SET JAN MAR JUN JUL

56 (15.4) 55 (17.3) 53 (18) 53 (14)

FEV DEZ AUG SET JAN MAR JUN JUL

38 (12.3) 36 (9.6) 35 (11) 35 (9.1) 33 (15.9)

DEZ FEV MAR SET JAN JUL JUN AUG

10 (18.2) 9.6 (22.7) 8.5 (24.3) 8.3 (38.4)

JAN DEZ FEV MAR SET AUG JUN JUL

1.7 (17) 1.5 (16.1) 1.4 (18.9)

JAN DEZ FEV MAR SET AUG JUN JUL

DEZ AUG FEV SET JAN MAR JUN JUL

DEZ FEV AUG JAN MAR JUN JUL SET

17 (1.8) 17 (2) 17 (2) 16 (3.2)

JAN DEZ FEV MAR SET AUG JUN JUL

0.31 (17) 0.28 (16.1) 0.27 (18.9)

27 (18.9)
a

9.8 (15.9) 9.6 (12.6)

a

1.2 (16.1)

23 (16.1)

0.23 (16.1)

49 (24.4)

8 (22.8)

1.2 (16.3)

23 (16.3)

9.1 (21.9)

16 (2.7)

0.23 (16.3)

8.8 (23.7)

47 (23.7)

ab

32 (14.7)

ab

6.1 (26.1)

ab

1.1 (19.1)

ab

21 (19.1)

8.7 (21)

ab

16 (1.8)

ab

0.21 (19.1)

ab

8.6 (12.9)

ab

46 (12.9)

ab

32 (8.8)

ab

5.9 (22.8)

ab

0.9 (14.2)

ab

16 (14.2)

ab

8.5 (11.8)

ab

16 (3.1)

ab

0.16 (14.2)

ab

7.5 (19.5)

ab

41 (19.5)

ab

29 (13.9)

ab

5.8 (33.5)

ab

0.8 (20.2)

ab

15 (20.2)

ab

7.5 (18)

16 (1.7)

ab

0.15 (20.2)

40

41 Observando-se o segundo ms com maiores valores de IC, os meses do vero foram quase sempre presentes, alternando entre janeiro, fevereiro e maro. Os mtodos IC II e IC VII na BG foram as nicas excees, onde Agosto apareceu como o ms com segundo maior valores de IC. Porm, mais uma vez, no se detectou diferena significativa em relao ao ms subsequente (fevereiro). Analisando as ltimas posies do ranking, os meses de inverno apareceram em quase todas as sequncias. A exceo para este caso foi o ms de maro na BIG, que nos mtodos de IC I, IC II e IC III, este ms ocupou a penltima posio. importante destacar que, em todos os casos detectou-se uma diferena significativa entre os meses que ocuparam as duas primeiras posies do ranking, e os que ficaram nas duas ltimas. Quando os valores de IC de todos os meses de amostragem so agrupados por mtodo de clculo de IC, observou-se distribuio normal apenas nos dados dos mtodos IC III, IC IV, IC VII e IC IX na BG, e dos mtodos IV e VII na BIG. Portanto, os dados foram todos tratados com os testes no-paramtricos. Nove mtodos diferentes para se estimar IC em mexilhes foram aplicados. Quando consideramos os resultados de todos os meses de amostragem, a anlise de Kruskall-Wallis mostra uma diferena significante entre as varincias de cada baa, para todos os mtodos utilizados. O teste a posteriori de Dunn revela que os valores de IC da BS so significativamente maiores (p<0,05) em relao aos observados na BIG, para todos os mtodos (tabela 4).

42 Tabela 4: Resumo do resultado do teste Dunns na comparao entre todos os valores de ndice de Condio (IC) obtidos por cada mtodo de clculo de IC, para cada local de estudo: Baa de Sepetiba (BS), Baa de Ilha Grande (BIG) e Baa de Guanabara (BG). "SIM" e "NO" referem-se presena ou ausncia de diferenas significativas nas respectivas comparaes (p<0,05). Mtodo BS X BIG BS X BG BIG X BG IC I SIM NO NO IC II SIM NO NO IC III SIM NO SIM IC IV SIM NO SIM IC V SIM SIM SIM IC VI SIM SIM SIM IC VII SIM NO NO IC VIII SIM NO SIM IC IX SIM SIM SIM

Os valores de IC da BG foram significativamente maiores que os da BIG para seis dos mtodos. Quando a BG e BS so comparadas diretamente, apenas trs mtodos mostraram valores de IC significativamente maiores na BS.

5.4. Discusso Quando se compara os valores de IC obtidos para cada baa, possvel sugerir que BS apresenta um maior potencial para o cultivo de mexilho. Dois aspectos podem ajudar no entendimento deste resultado; a ocupao do solo do entorno das baas, e a fisionomia das baas. A BS e a BG apresentam uma limitada comunicao com o mar aberto, e so rodeadas por expressivos centros urbanos e/ou reas industriais. Portanto, a contribuio continental de matria orgnica e de nutrientes para estas duas baas, atravs do despejo de esgoto sem tratamento, promove a eutrofizao destes sistemas aquticos (Molisani et al., 2004; Borges et al., 2009). Este enriquecimento de nutrientes nas guas destas baas reflete uma maior disponibilidade de alimento para os mexilhes criados na BS e na BG. Por outro lado, a rea de estudo na BIG apresenta uma conexo com o mar aberto mais livre (Guerra e Soares, 2009), reduzindo o tempo de residncia da matria orgnica de origem

43 continental no sistema. Adicionalmente, a ocupao urbana e industrial do entorno de BIG menos expressiva, quando comparada com BG e BS, resultando em uma contribuio menor de matria orgnica proveniente do esgoto domstico para a coluna d'gua. Neste cenrio, a disponibilidade de alimento parece ser o fator relevante para determinar as variaes nos valores de IC, a despeito da presena de contaminantes no sistema, como previamente reportado para ostras nativas da regio (Rebelo et al., 2005). Para melhor estimar a produtividade de cada baa estudada, seria importante obter os dados a respeito da taxa de crescimento dos mexilhes cultivados nas respectivas baas, mas esta informao ainda no est disponvel na literatura, at onde se sabe. Ento, no possvel estimar se os menores valores do IC observados na BIG poderiam ser compensados por uma maior taxa de crescimento, resultando em uma produtividade anual similar observada na BS e na BG. Para estimar o efeito da sazonalidade sobre os valores do IC, mexilhes das trs baas foram coletados mensalmente durante oito meses (quatro meses do vero e quatro do inverno). Os resultados sugerem um efeito sazonal nos valores do IC, onde o incio do vero apresenta-se como sendo a melhor poca para a despesca das cordas mexilhoneiras. Estes dados esto de acordo com os valores de IC observados para P. perna da costa do Estado de So Paulo, que mostraram maiores valores de IC em outubro e novembro, e menores entre abril e maio (Henriques et al., 2001). Porm, os resultados encontrados nesta tese contrastam com os dados obtidos em outro estudo conduzido com P. perna, tambm na costa de So Paulo. Quando juvenis de mexilhes (chamados "sementes") foram colocados em gaiolas nas diferentes estaes climticas, os autores no observaram efeitos sazonais no crescimento, nem em sua produtividade (Marques et al., 1998).

44 A influncia sazonal nos valores de IC dos mexilhes j foi reportada para Mytilus galloprovincialis cultivado no Mar Adritico, onde os autores sugeriram o final do outono e inverno como sendo as melhores pocas para a despesca (Peharda et al., 2007). Em outro estudo conduzido com P. perna no Estado de Santa Catarina, os autores indicaram o final da primavera como o melhor momento para a despesca do mexilho (Marenzi e Branco, 2005). Este quadro est de acordo com o presente estudo, que mostrou dezembro como o ms que apresenta maiores valores de IC. Mexilhes P. perna cultivados na Venezuela mostraram uma tendncia a terem maiores valores de IC em janeiro, com um expressivo aumento a partir de dezembro (Arrieche et al., 2002). Tem se estabelecido que P. perna apresenta uma desova parcial, com uma rpida recuperao de gametas durante o vero em clima subtropical. Isto seria devido alta disponibilidade de alimento, e uma relativa baixa variao de temperatura (Marques et al., 2008). Apesar de o estgio da gametognese no ter sido determinado nos animais coletados no presente estudo, os resultados obtidos mostraram-se de acordo com este cenrio. notrio que dados acerca de ambientes tropicais, ainda so escassos quando se compara com o volume de informao disponvel sobre ambientes de clima temperado. Portanto, as diferenas climticas devem ser consideradas antes de se comparar os resultados do presente estudo, com os de outras regies do mundo. Considerando isso, quando se compila os dados de IC disponveis na literatura, referentes aos mesmos mtodos adotados neste estudo, no se observou uma diferena expressiva em relao variao de valores de IC (tabela 5).

Tabela 5: Resumo comparativo dos valores de ndice de Condio (IC) em diferentes locais do mundo, obtidos com os mesmos mtodos usados no presente estudo. Os lugares foram classificados como poludos (Pol) ou no poludos (No-P.) de acordo com a descrio dada pelos respectivos trabalhos. Resultados reportados em outras unidades no trabalho original foram transformados para as mesmas unidades do presente estudo. Mtodo Espcies Local Pol. / No-P. Variao Referncia Esturio Conwy (North Wales) - GBR No-P. 8,51 - 11,67 (Davenport e Chen, 1987) Mytilus edulis Baa de Mali Ston (Sul do Mar Adriatic) No-P. 9,0 - 18,5 (Mladineo et al., 2007) Modiolus barbatus IC I Baa de Buzzards (Flrida) - EUA 4,0 - 11,0 (Culbertson et al., 2008) Geukensia demissa Costa do Rio de Janeiro - BRA 7,05 - 14,6 Presente estudo Perna perna Esturio Conwy (North Wales) - GB No-P. 47,32 - 58,49 (Davenport e Chen, 1987) M. edulis Esturio Jade (Mar do Norte) -DEU 20,0 - 135,0 (Brenner et al., 2009) M. edulis IC II British Columbia - CAN No-P./Pol. 82 142 (Grout e Levings, 2001) M. edulis Costa do Rio de Janeiro - BRA 38,05 - 77,45 Presente estudo P. perna Pol. 14,1 - 29,7 (Romo et al., 2003) Mytilus galloprovincialis Baa de Nice FRA Costa de So Paulo - BRA 17 - 32 (Henriques et al., 2001) P. perna IC III M. edulis e M. trossulus Baa de Gaspe (Quebec) - CAN No-P. 44,0 - 65,0 (Cartier et al., 2004) Costa do Rio de Janeiro - BRA 27,5 - 43,6 Presente estudo P. perna Baa de Elliott (Seacrest) - EUA Pol. 4,0 - 8,5 (Kagley et al., 2003) M. edulis Ilha Whidbey (Coupeville) - EUA No-P. 8,0 - 19,0 (Kagley et al., 2003) M. edulis IC V Canal de Limski (Norte do Mar Adritico) No-P. 4,61 - 6,55 (Hamer et al., 2008) M. galloprovincialis Costa do Rio de Janeiro - BR 7,47 20,14 Presente estudo P. perna Baa de So Francisco Bay - EUA Pol. 3,7 - 4,6 (Martin et al., 1984) M. edulis Baa de Alfacs (Mar Mediterrneo) - ESP 10,4 - 17,4 (Galimany et al., 2011) M. galloprovincialis IC VI Hong Kong (litoral leste) - CHN Pol. 4,61 - 6,55 (Fang et al., 2010) Perna Viridis Costa do Rio de Janeiro - BRA 13,8 - 37,9 Presente estudo P. perna Guayacn (north coast of Sucre) - VEN No-P. 11,64 - 19,49 (Narvez et al., 2008) P. perna IC VII Ensenada de Turpialito - VEN No-P. 12,06 - 19,1 (Narvez et al., 2008) P. perna Costa do Rio de Janeiro - BRA 7,08 - 13,63 Presente estudo P. perna

45

Tabela 5: (continuao) Mtodo IC VIII Espcies Perna canaliculus M. galloprovincialis M. edulis P. perna M. edulis M. edulis e M. trossulus M. trossulus P. perna Local Pol. / No-P. Ilha Stewart - NZL Ensenada (Baja California) - MEX Pol. Loch Etive e Loch Leven - Esccia No-P. Costa do Rio de Janeiro - BRA Costa da Dinamarca - DNK Pol. Porto de Halifax - CAN Pol. Golfo de Gdask (Sul do Mar Bltico) -POL Pol. Costa do Rio de Janeiro - BRA Variao 12.2 - 27.5 25.5 - 50.0 25.0 - 55.0 15.51 - 17.2 0.19 - 1.17 0.5 - 1.3 0.1 - 0.8 0.14 - 0.59 Referncia (Taylor e Savage, 2006) (Cceres-Martnez et al., (Okumus e Stirling, 1998) Presente estudo (Granby e Spliid, 1995) (Hellou et al., 2003) (Piercieniak et al., 2010) Presente estudo

IC IX

46

47 O consenso entre os dados disponveis na literatura, e os aqui encontrados, indicou que a elevada latitude de outros locais de estudo (ex. a costa da Dinamarca), e o elevado nvel de poluio dos pontos de coleta, exercem pouca interferncia na variao dos IC.

5.5. Consideraes gerais De forma geral, considera-se que, no caso de no se detectar diferena significativa em uma comparao direta entre resultados obtidos por um nico mtodo de IC, duas situaes podem ser consideradas: 1) realmente no h diferena no estado de sade dos animais dos grupos estudados (locais ou tempos diferentes de coleta); 2) o mtodo em questo no est apto a detectar a diferena existente entre eles devido, por exemplo, a uma alta variabilidade dos dados (rudo). Quando se realiza uma anlise geral sobre o que foi detectado pelos diferentes mtodos usados no presente estudo, observou-se que os maiores valores de IC foram obtidos nos meses do comeo do vero, observando um consenso na resposta dada pelos mtodos. Apesar disto, no foi possvel chegar a uma total concordncia a respeito das diferenas entre os valores de IC quando se compara BS com BG e BIG com BG. Isto decorreu do fato de que a diferena significativa entre os valores de IC destas baas foi apontada por uns mtodos de clculo do IC, enquanto que por outros mtodos esta diferena no foi significativa. Ento, quando um mtodo de clculo de IC revelou uma diferena significativa entre os valores de IC de dois locais, mas outro mtodo no o fez, pode-se sugerir que a equao do primeiro caso apresenta uma melhor resoluo, em relao ao segundo caso. Baseando-se neste princpio, e nos dados obtidos neste estudo, pode-se sugerir a utilizao dos mtodos IC V, IC VI e IC IX em futuros estudos, uma vez que estes mostraram diferenas significativas entre todas as reas de estudo, enquanto outros no.

48 Analisando as equaes usadas pelos mtodos IC V e VI, o contedo de gua parece no exercer um papel importante nestas, uma vez que ambas as equaes geraram as mesmas concluses. Isto permite aos maricultores utilizarem o mtodo mais simples, o IC V [peso mido do tecido mole (g)] x [comprimento da concha (mm) x 100] -1 (Kagley et al., 2003).

49 6. Captulo II - Ensaios Metodolgicos 6.1. Introduo Antes de se iniciar os experimentos que culminaram na elaborao dos dois captulos que sucedem a este, trs ensaios foram realizados, a fim de se ajustar os mtodos que seriam empregados nos experimentos subsequentes. A primeira questo com a qual se defrontou foi com relao possvel perda de compostos volteis e semi-volteis, durante o processo de secagem a frio (liofilizao) das amostras. Alguns estudos indicam a secagem a frio como sendo a melhor alternativa para a preservao das amostras, inclusive sem que haja perdas expressivas do elemento mercrio nos tecidos tratados (Lasorsa e Allen-Gil, 1995). Apesar de se encontrar muitos trabalhos na literatura que adotam a secagem a frio em seus mtodos, para posterior determinao das concentraes de contaminantes ambientais, so raros os dados sobre as possveis perdas de compostos volteis durante a liofilizao. Com relao matriz ambiental "tecido de bivalve" especificamente, no foi encontrado nenhum estudo dedicado a esta avaliao. Contudo, existem diversos estudos que adotaram a liofilizao do tecido mole de bivalves, antes dos processos de extrao de contaminantes, inclusive na elaborao de materiais certificados de referncia, com valores certificados e de referncia para Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (Polycyclic aromatic hydrocarbons - PAH) (Poster et al., 2004). Porm, h dados que apontam para perda de PAH em amostras liofilizadas de solo de floresta, quando comparadas com amostras frescas. Isto estaria relacionado com a volatilizao de compostos, principalmente o naftaleno, ou com a reduo da eficincia de extrao dos PAH da amostra seca (Wilcke et al., 2003). O mesmo estudo indica a

50 comparao feita com as concentraes de PCB, que apresenta uma pequena diferena entre os tratamentos. Em outra avaliao utilizando tecidos de cinco espcies de peixes, comparando as concentraes de 8 congneres de PCB (77, 81, 126, 169, 105,114, 156, 157), as amostras liofilizadas apresentaram uma tendncia de recuperao menor em relao as preparadas com Na2SO4 (Witczak e Chlewinska, 2008). Neste estudo, apenas para uma espcie de peixe (Clupea harengus), esta tendncia foi significativa, sendo exceo para o PCB 81. Em uma reviso sobre resultados comparativos entre amostras liofilizadas e no liofilizadas (Luque de Castro e Izquierdo, 1990), os autores apontam para uma falta de consenso na literatura a respeito de qual seria o melhor mtodo de preservao das amostras. Na mesma reviso, os autores indicam os resultados de um trabalho onde h indcios de perda de pesticidas durante o processo de liofilizao, e ainda, a ocorrncia de degradao de compostos clorados em amostras liofilizadas, quando estas so armazenadas em temperatura ambiente. J em outro trabalho, no se observou diferenas nas concentraes de OCP entre as amostras de tomate enriquecidas com OCP que foram liofilizadas e as que no foram (Colum et al., 2001). Diante da necessidade de se transportar uma expressiva quantidade de amostras de bivalves, do Brasil para Alemanha, onde as concentraes das STP foram determinadas, optou-se por liofilizar as mesmas. Porm, se realizou um ensaio comparativo, a fim de se avaliar possveis perdas de compostos volteis e semi-volteis do tecido mole de bivalves, durante o processo de liofilizao. A segunda questo metodolgica com que se deparou foi com relao necessidade de se avaliar a variabilidade das concentraes de STP entre as rplicas de amostras compostas de um mesmo local e mesmo tempo de coleta. Como no se encontrou nenhum

51 estudo com dados comparativos entre rplicas feitas de amostras compostas de bivalves, visando levantar a variabilidade interindividual de STP, de forma a sugerir um desenho amostral mais adequado para se trabalhar com uma variabilidade aceitvel, um ensaio neste sentido foi realizado. O mtodo de coleta de SS empregado nos trabalhos encontrados na literatura, chamado de "armadilhas de sedimento" (sediment trap), geralmente so aparatos feitos em teflon. Este material considerado praticamente inerte, no representando uma expressiva fonte de contaminao para o material coletado, nem um stio de adsoro para os analitos de interesse. Com relao aos aparatos utilizados para a amostragem de STP no SS, tambm no se encontrou estudos que comparassem as concentraes de STP em SS coletados com aparatos de PET, com os coletados em armadilhas de sedimento feitas em alumnio. Estudos indicam uma baixa transferncia de compostos como o ftalato, de embalagens de PET, para a gua (Amiridou e Voutsa, 2011). Porm, j se demonstrou a reduo das

concentraes de PCB presente em gua, quando mantida em embalagem de PET (Sklarsova et al., 2007). Isto seria um indcio de que estes compostos poderiam ficar adsorvidos nas paredes do coletor de SS feito de PET, interferindo na amostragem ambiental. Portanto, o ltimo tpico a ser abordado neste captulo ser a possvel interferncia do material do coletor de SS sobre as concentraes de STP de interesse nesta tese.

6.2. Material e mtodos Para avaliar a perda de analitos da amostra durante o processo de liofilizao, cinco amostras compostas de mexilhes foram preparadas, cada uma contendo dez indivduos, coletados na Praia Grande da Ilha de Itacuru, na Baa de Sepetiba, em novembro de 2009. Cada amostra composta foi homogeneizada em liquidificador com copo de vidro e

52 lmina de ao inox. Aps cada homogeneizao, o copo foi lavado com detergente neutro (tipo Extran), rinsando em seguida com n-Hexano e Acetona. As amostras compostas foram divididas em duas sub-amostras. Uma foi liofilizada, e outra no. Para facilitar a visualizao dos dados, calculou-se tambm a diferena (D) entre as concentraes das rplicas liofilizadas (L) e as rplicas midas (U). O resultado foi expresso em percentual com relao s concentraes encontradas nas amostras midas (U), segundo a equao: D%=(L-U)*100/U. Parte-se da premissa que os compostos que apresentem maior Presso de Vapor (Pv), tenderiam a ser os primeiros a serem perdidos durante o processo de liofilizao. Portanto, a discusso dos resultados do experimento de liofilizao foi feita com base nos valores de Pv. Por definio, Pv a presso exercida por um gs em equilbrio dinmico com seu lquido, de forma que esta medida depende da tendncia de escape das molculas na fase lquida. Portanto, se as interaes entre as molculas so fracas, h o escape das molculas, aumentando o valor de Pv (Russel, 1994). Os valores de Pv aqui apresentados se referem ao estado lquido (Pl) medidos pelo mtodo de LDV, a 25C. Para o ensaio de variabilidade entre as rplicas, foram determinadas as concentraes de STP de seis rplicas de amostras compostas (5 indivduos por amostra) de mexilhes da Ilha Gaba (Baa de Sepetiba), coletadas em novembro de 2008. Estas amostras foram liofilizadas e trituras em moinho de copo de alumnio e lmina de ao inox.

6.2.1. Coleta dos slidos em suspenso (SS) Dois sistemas de amostragem de SS foram utilizados para avaliar a influncia do material com que o aparato de coleta feito, sobre as concentraes de STP quantificadas na amostra obtida. Um feito de alumnio, com fundo em Polivinil Clorado (PVC), colado com cola epxi (Araldite - Brascola). E outro feito em Poli Tereftalato de Etileno (PET).

53 Cinco coletores de alumnio foram instalados em paralelo com os coletores feitos em PET, entre uma profundidade de 1,5m e 2m, na Praia de Jurujuba (Baa de Guanabara), durante 15 dias dos meses de agosto e setembro de 2009. A figura 8 mostra o sistema em alumnio, logo que retirados do mar, portanto incrustados por diversos organismos bentnicos.

Figura 8: Sistema de coletor de slido em suspenso feito em alumnio, aps 15 dias submersos na Praia de Jurujuba (Baa de Guanabara)

Para o aparato construdo a partir de garrafas tipo PET e tubos de vidro, as garrafas, previamente lavadas com gua e sabo, tiveram seu fundo cortado, e amarradas trs a trs. Cada conjunto de garrafas recebeu um peso para auxiliar na manuteno do aparato na posio vertical em relao coluna d'gua. Ao gargalo de cada garrafa, foram fixados tubos de vidro, e uma rede era fixada ao redor do tubo, prendendo-o ao gargalo da garrafa, de forma a garantir a permanncia do tudo coletor na posio correta. Desta maneira, a garrafa PET funcionou como um funil, permitindo que o material em suspenso se depositasse no tubo de vidro (figura 9).

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Figura 9: Coletores de slidos em suspenso (SS) elaborados com garrafas PET e tubos de vidro.

Quatro conjuntos de coletores de SS foram instalados ao longo de um espinhel de cultivo de mexilho, em cada local de coleta. Os tubos de vidro de cada garrafa PET foram retirados, vazando a gua cuidadosamente, mantendo apenas uma lmina d'gua sobre o SS coletado. Antes de verter o SS coletado no tubo de vidro para o pote de armazenamento, agitava-se o tubo coletor, a fim de facilitar a total transferncia do material coletado. Tanto para os coletores de PET, como para os de alumnio, juntou-se o material coletado em potes de vidro obtendo-se amostras compostas, para garantir massa de SS suficiente para as anlises das STP. Duas amostras compostas de SS foram obtidas para cada sistema de amostragem (PET e Alumnio). O nmero de tubos de vidro que eram agrupados para formar uma amostra composta, variou conforme a quantidade que cada unidade coletora obteve no perodo amostral. De forma geral, entre 4 e 6 tubos eram agrupados, para formar uma amostra composta. Antes de serem congeladas a -20C, retirou-se o mximo de gua dos potes armazenadores de amostras de SS, sem que a superfcie de SS coletado fosse perturbada (figura 10).

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Figura 10: Amostras compostas de slidos em suspenso (SS), antes de se retirar a gua sobrenadante (a esquerda), e depois (a direita).

Os SS tambm foram congelados a -80C, liofilizados, separando a frao menor que 74 m, utilizando peneiras de ao em agitador, e armazenadas em frascos de vidro com tampa de rosca.

6.2.2. Extrao de STP nas matrizes ambientais Esta parte do trabalho foi realizada no Laboratrio de Dioxina, do Instituto de Qumica Ambiental no Helmholtz Zentrum, em Munique (DE), que acreditado para anlises de pesticidas organoclorados (certificado de qualidade DIN EN ISO/IEC 17025). Esta parceria foi viabilizada atravs do projeto aprovado no mbito do Programa Brasil Alemanha (PROBRAL - 270/07). Os bivalves e os SS foram submetidos aos mesmos tratamentos para se obter as concentraes de STP. Pode-se dividir o procedimento de quantificao em trs etapas: extrao dos contaminantes das amostras; purificao do extrato obtido (clean up); e a determinao das concentraes de STP nas amostras por cromatografia a gs de alta resoluo acoplada a um espectrmetro de massa (High Resolution Gas Chromatography couple to High Resolution Mass Spectrometer - HRGC-HRMS).

56 O processo de extrao das STP dos tecidos dos bivalves se deu sob alta temperatura e presso. Em um bquer, pesou-se um grama da amostra de mexilho. Em seguida, adicionouse Hidromatrix (VARIAN) como agente secante (1:1). Aps ter homogeneizado bem a mistura, e com o auxlio de funis de vidro, as amostras foram transferidas para as chamadas clulas de extrao do equipamento Acelerated Solvent Extractor ASE 200 (DIONEX), sendo comprimidas com um basto de teflon. A clula de extrao foi preenchida por completo com agente secante (figura 11).

Figura 11: Preparo das clulas de extrao do Acelerated Solvent Extractor ASE 200 (DIONEX)

Para se evitar o entupimento do filtro de metal das tampas da clula de extrao, um filtro de celulose foi colocado em sua base, e no topo de cada clula, entre a amostra e as tampas. As clulas foram ento levadas para o ASE 200, onde tambm foram colocados frascos de vidro com tampas de plstico com rosca e batoque em teflon, nos quais os extratos eram recolhidos das clulas de extrao (figura 12).

57

Figura 12: Acelerated Solvent Extractor ASE-200 - Equipamento utilizado para obter o extrato das STP das amostras de bivalves.

As clulas de extrao foram aquecidas no forno do equipamento, e atravs dos orifcios de suas tampas, tanto o solvente, como o nitrognio, foram injetados na parte superior da clula de extrao. O programa de temperatura, tempo e presso seguido pelo equipamento apresentado na tabela 6. Tabela 6: Programa de extrao das STP utilizado nas amostras de mexilho no equipamento utilizado para realizar a extrao das STP do tecido mole dos bivalves (Acelerator Solvent Extractor - ASE). Parmetro Descrio Solvente N-Hexano/Acetona 3:1 Temperatura 120 C Presso 120 bar Fase de aquecimento 5 min Pr-aquecimento 0 min Fase esttica de extrao 10 min Ciclos estticos 2 Lavagem 70% Lavagem (N2) 300 sec

Aps a obteno do extrato, a estimativa do contedo de lipdeo na amostra foi feita pelo mtodo gravimtrico. Os extratos foram transferidos dos frascos utilizados no ASE, para frascos de fundo redondo, que foram previamente pesados. No caso das amostras midas, a nica observao a ser feita no momento da transferncia do extrato obtido no ASE 200 para o vidro com fundo redondo. Para se retirar

58 uma parte da gua presente na amostra, colocou-se l de vidro em um funil de vidro e sobre este material adicionou-se 3g de Na2SO4. Desta forma, utilizou-se o Na2SO4 como agente secante, ao se fazer passar o extrato obtido com o ASE pelo funil. Em seguida, o volume de solvente foi reduzido em um rotaevaporador, com temperatura de banho a 50C, rotao a 1200 rpm e presso variando de 500 mBar a 350 mBar. Na sequncia, o volume foi reduzido at aproximadamente 0,2 mL e em seguida, secou-se a amostra sob fluxo de Nitrognio (5.0). Quando a amostra atingiu a secura, determinou-se a massa do frasco de vidro com fundo redondo com a amostra livre de reagente, obtendo-se a estimativa do contedo de lipdeo na amostra. A fim de no deixar a amostra seca, cerca de 1,5 mL de NHexano:Diclorometano (1:1, V:V) foram adicionados em cada frasco. A etapa de purificao se fez em duas etapas, sendo ambas pelo princpio da cromatografia em coluna de fase mvel, lquida clssica, por adsoro. No primeiro passo, utilizou-se o chamado mtodo de cromatografia de fase normal, onde a fase estacionria mais polar que a fase mvel, de forma que os interferentes mais polares que os contaminantes que se deseja purificar no foram eludos pelo solvente. Em uma coluna cromatogrfica (63200 m, LGC Standards), fez-se o empacotamento dos absorventes na seguinte ordem: 2g de Na2SO4, 10g de Slica Gel 60 (previamente aquecida a 550C/12hs), 5g de xido de Alumnio a 3% de H2O, e por ltimo mais 2g de Na2SO4. Para assegurar a remoo de contaminantes que estejam nos absorventes da fase estacionria, a coluna foi ento rinsada com 60mL de N-Hexano:Diclorometano (1:1, V:V). Correu-se o solvente at atingir a poro superior da fase estacionria. Aps rinsar a coluna cromatogrfica, vidros de fundo redondo so colocados embaixo de cada coluna para recolher a amostra aps a corrida cromatogrfica.

59 As amostras foram ento transferidas para as colunas cromatogrficas com pipetas do tipo Pasteur em vidro. Novamente, fez-se a fase mvel correr at o nvel da fase estacionria. Utilizou-se 100 mL de N-Hexano:Diclorometano (1:1, V:V) para a eluio da amostra, retirando-se desse volume, o necessrio para se rinsar os frascos redondos das amostra por trs vezes (cerca de 3mL por rinsada). Sendo que, para cada vez que se transferiu a amostra para a coluna, deixou-se a fase mvel correr at o nvel da fase estacionria. Aps a ltima rinsada, adicionou-se o volume restante de solvente (figura 13). A vazo, tanto para rinsar a coluna, como para a eluio da amostras, de duas gotas por segundo.

Figura 13: Colunas cromatogrficas para o primeiro passo de purificao dos extratos das amostras. Ao final da corrida do solvente no primeiro passo da etapa de purificao do extrato da amostra, obteve-se um volume de aproximadamente 130 mL, que foram reduzidos para cerca de 0,2mL em rotaevaporador. Como o segundo passo da etapa de purificao se fez com a fase mvel mais polar que a fase estacionria (cromatografia de fase reversa), realizou-se a substituio do solvente NHexano:Diclorometano (1:1, V:V) para Acetonitrila (log kow -0,34). Isto permitiu que os contaminantes que se deseja quantificar sejam eludos atravs da coluna de slica gel modificada por grupos octadecil (C18 Solid Phase Extraction - SPE, CHROMABON). Por

60 outro lado, os interferentes menos polares ficaram adsorvidos nas longas cadeias de carbono da fase estacionria. A substituio de solventes foi feita sob fluxo de N2, onde adicionou cerca de 0,3 mL de Acetonitrila, reduzindo o volume para aproximadamente 0,1 mL. Para se preparar a coluna cromatogrfica, utilizaram-se cartuchos de vidro de 8 mL, onde se colocou um filtro de politetrafluoretileno, no fundo, e outro aps se adicionar um grama do sorbente (C18). Em sistema de vcuo (figura 14), a coluna rinsada com 5 mL de Acetonitrila, deixando o solvente correr at o nvel da fase estacionria.

Figura 14: Sistema de vcuo para o segundo passo de purificao do extrato das amostras.

Transferiu-se ento a amostra para a coluna com uma pipeta tipo Pasteur em vidro, rinsando o frasco de fundo redondo duas vezes com 0,2 mL de Acetonitrila. A cada vez que adicionou-se a amostra na coluna, fez-se correr o solvente at o nvel da fase estacionria. A velocidade de eluio, tanto para se rinsar, como para eluir a amostra, foi de duas gotas por segundo. Aplicou-se uma presso no sistema (<5 Bar) apenas quando o solvente parava de gotejar na presso ambiente, no intuito de retirar o volume remanescente na coluna . Aps obter os extratos purificados, o volume da amostra foi reduzido para cerca de 0,2 mL, sob fluxo de nitrognio, a 45C. Este procedimento foi feito com o equipamento Trockentemperier- System -TCS (Labor Technik Barkey), ilustrado na figura 15.

61

Figura 15: Sistema para reduo de volume da amostra sob fluxo de nitrognio, a 45C, no equipamento Trockentemperier- System -TCS.

Para se injetar as amostras no CGHR-HRMS, as amostras foram transferidas para os microvials, que tm o tamanho adequado para a bandeja do injetor automtico do equipamento. Assim, as amostras foram transferidas para os microvials com uma pipeta tipo Pasteur em vidro. Para garantir que no tenha ficado resqucios da amostra no frasco, este foi rinsado trs vezes com Diclorometano, transferindo para os microvials. Para cada vez que se transferiu a amostra para os microvials, reduziu-se o volume para cerca de 20L, antes de transferir novamente o volume rinsado. Esta etapa tambm se fez no TCS.

6.2.3. Determinao das concentraes de STP nos bivalves e controle de qualidade Os extratos purificados das amostras foram injetados no sistema HRGC-HRMS. Os detalhes dos parmetros de operao podem ser encontrados em publicaes de estudos realizados no mesmo laboratrio de Dioxinas, onde se realizou as anlises da presente tese (Wang et al., 2009; Okay et al., 2011). A tabela 7 resume os parmetros adotados para a quantificao de cada grupo de compostos.

Tabela 7: Resumo dos parmetros adotados para a determinao das concentraes no sistema de Cromatografia a Gs de Alta Resoluo acoplado a um Espectrmetro de Massa de Alta Resoluo (HRGC-HRMS). Descrio Parmetros PAH PCB OCP Modelo do Agilent 5890 Series II Agilent 5890 Series II Agilent 6890 HRGC Rtx-CLPesticides2, 30 m, 0.25 mm ID, 0.2 Rtx-CLPesticides2, 30 m, 0.25 mm Rtx-Dioxin2, 40 m, 0.18 mm ID, 0.18 Coluna m de espessura (Restek) ID, 0.2 m de espessura (Restek) m de espessura (Restek) -1 -1 Programa de 60 C, 1,5 min, 10 C min , 225 C, 5 C 100 C; 1,5 min; 3 C min ; 270 C; 60 C; 1,5 min; 25 C min-1; 140 C; 8 -1 -1 temperatura min , 290 C, 15 C min , 315 C, 20 min 15 C min-1; 300 C; 10 min C min-1; 300 C; 20 min Gs carreador Hlio; presso no cabeote 16 psi Hlio; presso no cabeote 16 psi Hlio; fluxo constante de 1,3 mL.min-1 Sistema de alimentao a frio (Cold Sistema de alimentao a frio (Cold Injetor Injector System ) CIS 3 - Gerstel Injector System ) CIS 4 - Gerstel Programa de 120 C; 12 C s-1; 280 C; 5 min 120 C; 12 C s-1; 280 C; 5 min 120 C; 12 C s-1; 280 C; 5 min temperatura do injetor Temp. da linha de 300 C 300 C 300 C transferncia Amostrador MPS2 (Gerstel) MPS2 (Gerstel) A200S (CTC) Volume de 0,5 L modo splitless 0,5 L modo splitless 0,5 L modo pulsed splitless injeo MS Modelo MAT 95 (Thermo) MAT 95 (Thermo) MAT 95S (Thermo) Modo de Impacto Eletrnico (Eletronic ImpactEI; 47 eV; 260 C EI; 50 eV; 260 C Ionizao EI); 47 eV; 260 C Resoluo >8000 >8000 >9000 Modo de Monitoramento seletivo ons Deteco SIM SIM (Selected Ion Monitoring mode - SIM) 62

63 A determinao das concentraes dos analitos nas amostras se iniciou com o preparo do chamado "arquivo resposta", obtido a partir de um cromatograma de uma soluo de calibrao. Este arquivo forneceu os fatores de resposta relativa (relative response factor RPF), que foram utilizados para calcular as concentraes dos analitos de interesse nas amostras. Em um sistema de HRGC-HRMS com resoluo de 10,000 m/e, injetou-se a soluo de calibrao contendo os compostos de OCP e PCB marcados com 13C ou 2H (Deutrio), e no marcados ("nativos"), diludos em solvente Nonano. As concentraes dos compostos no marcados foram de 1000 pg/L para OCP, e de 500 pg/L, para PCB. As concentraes nominais dos compostos marcados na soluo de calibrao no foram exatamente iguais, mas em valores prximos ao dos "nativos". Os compostos marcados de OCP foram: pentaclorobenzeno (PeCB) 13C6, -HCH 13C6, -HCH (lindano)
13

C6, -HCH
13

13

C6, -HCH
13

13

C6, pentacloroanisol (PeCA)

13

13

C6,

hexaclorobenzeno (HCB) Clordane

13 13

C6, heptacloro

C10, aldrin

C12, octacloroestireno

13

C6, oxi-

C10, cis-Heptacloro Epxido

13

13

C10, 2,4'-Dicloro-difenil-dicloroetileno (DDE)

13

C12, 4,4'-DDE

C12, trans-clordane

13

C12, endosulfan-I
13

C9, endosulfan-II

13

C9, 4,4'-

dicloro-difenil-dicloroetano (DDD) D8, dieldrin

C12, 2,4'- dicloro-difenil-tricloroetano

(DDT) 13C12, 4,4'-DDT 13C12, metoxicloro 13C12, mirex 13C10. Para os analitos da amostra que no apresentam os seus correspondentes marcados, compostos similares foram utilizados. Foram os casos do -HCH, que se usou a razo altura do pico sobre concentrao de -HCH
13

C6; o trasn-heptacloro epxi, que se usou o cis-

heptacloro epxido 13C10; e o cis-clordano, que se utilizou o trans-clordane 13C12. Os congneres de PCB analisados foram: 28, 52, 77, 81, 101, 105, 114, 118, 123, 126, 138, 153, 156, 157, 167, 169, 180, 189. Para todos os casos, foram utilizados os mesmos compostos marcados com 13C12 para gerar o fator de resposta.

64 Para a quantificao dos PAH, foram utilizados compostos marcados com 2H (D). Tambm neste caso, para cada composto quantificado, os respectivos compostos marcados foram utilizados: naftaleno-D8, acenaftileno-D8, acenaftaleno-D10, fluoreno-D10,

fenantreno-D10, antraceno-D10, fluoranteno-D10, pireno-D10, benzo(a)antraceno-D12, criseno-D12, benzo(b)fluoranteno-D12, benzo(k)fluoranteno-D12, benzo(a)pireno-D12,

indeno(1,2,3-c,d)pireno-D12, benzo(g,h,i)perileno-D12, dibenzo(a,h)antracen-D14. Na soluo de calibrao, ainda se adicionou os chamados "padres de recuperao", que para os OCP e PAHs, foram utilizados o pentaclorotuloeno, e o 1,2,3,7,8,9-HxCD. Para os PCB, foi utilizado o 13C-1,2,3,7,8,9-hexaclorodibenzo-p-dioxina. Para se estabelecer as concentraes exatas dos compostos marcados na soluo de calibrao, as alturas de pico dos compostos nativos no cromatograma foram comparadas com os compostos marcados. Os fatores de resposta relativos foram calculados a partir da razo entre as alturas de pico do padro de recuperao e cada um dos compostos marcados, sem nenhum efeito de matriz. No havendo a necessidade de se gerar "arquivos resposta" diariamente, os fatores de resposta relativos foram usados para uma sequncia de amostras injetadas no HRGC-MS, at que os tempos de sada dos picos de cada composto no estivessem mais estveis. O mtodo de quantificao utilizado baseou-se na adio de padro interno (surrogates). Antes de fechar a tampa das clulas de extrao do ASE, adicionou-se s amostras 10 L de cada soluo de padres internos de OCP (1000 pg.L-1) e PCB (500 pg.L-1) marcados com 13C e 1H. Os padres foram adicionados na parte superior as clulas de extrao do ASE, ficando a parte inferior da clula de extrao voltada para o frasco coletor do extrato. Desta maneira, os padres internos adicionados percorrem todas as etapas do procedimento de extrao e purificao dos contaminantes que esto presentes na matriz ambiental.

65 O clculo das concentraes dos analitos nas amostras se fez comparando-se as razes entre a altura de pico do analito na amostra, sobre a concentrao do analito da amostra (incgnita da equao), sobre a razo entre a altura de pico do respectivo composto marcado, sobre sua concentrao. Os fatores de resposta relativos foram utilizados apenas como controle de qualidade do processo, e no sendo aplicados para se corrigir as concentraes das amostras ambientais. Para o clculo dos fatores de resposta, as seguintes razes foram tomadas: 1) as alturas de pico no cromatograma dos compostos nos padres internos (surrogates), sobre as suas respectivas concentraes, dividido pela razo entre as alturas de pico dos compostos no padro de recuperao adicionado no microvial, e suas concentraes; 2) as alturas de pico dos compostos marcado na soluo de calibrao, sobre suas concentraes, dividido pela razo entre as alturas de pico dos compostos no padro de recuperao na soluo de calibrao, e suas concentraes. Desta forma, foi possvel estimar a eficincia de recuperao e a perda dos compostos ao longo dos processos de extrao e purificao. O software utilizado para integrar os picos dos cromatogramas foi Xcalibur 1.4 SR1 (Thermo Electron Corporation). O anexo 1 apresenta as massas selecionadas para se quantificar cada composto dos grupos dos OCP, PCB e PAHs. Somente foram consideradas as concentraes detectadas acima do limite de deteco (Limit of Detection - LOD). Para o clculo do LOD, adotou-se o mtodo da razo sinal-rudo (Sinal / Noise - S/N), observada nos brancos analticos. Sendo que, utilizou-se o valor mdio dos S/N observados em todos os brancos analticos, para se chegar a um LOD final. Os LOD utilizados para cada anlise nesta tese esto apresentados no anexo V. Valores de amostras abaixo do LOD no foram considerados nos testes estatsticos. Para cada conjunto de 10 amostras ambientais analisadas, um branco analtico era feito em paralelo. Utilizou-se a concentrao observada nos brancos analticos para se subtrair dos

66 valores das amostras ambientais, obtendo assim uma correo de interferentes analticos (vidraria, reagentes etc.) na concentrao final das amostras.

6.3. Resultados e discusso 6.3.1. Comparao entre amostras liofilizadas e no liofilizadas A tabela 8 apresenta os resultados comparativos entre as concentraes de PAHs de quatro das cinco rplicas dos tecidos moles de mexilho P. perna liofilizado. Para a extrao com o tecido mido, foram obtidos resultados de apenas quatro rplicas, pois ocorreu problema de recuperao dos padres na rplica L3.

Tabela 8: Comparativo entre as concentraes de PAHs (pg.g-1) nos tecidos moles de P. perna liofilizado (L), e na amostra mida (U). Tambm so apresentadas as diferenas entre estes resultados (D%), expressos em percentual com relao a U [(LR-LU)*100/LU]. Valores abaixo do Limite de Deteco (LOD) so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos. E ainda, o log dos valores de Presso de Vapor (Pv) em Pa, retirados de (Ma et al., 2010) Liofilizado mida log D1% D2% D3% D4% D5% Compostos Pv L1 L2 L3 L4 L5 U1 U2 U3 U4 U5 Naftaleno 18.338 18.308 16.148 15.754 38.785 36.734 48.941 54.059 48.011 -53 -50 -70 -67 1,58 Acenafitileno 1.443 1.732 1.901 1.488 3.135 2.712 4.190 3.961 3.157 -54 -36 -52 -53 0,38 Acenaftaleno 4.270 4.542 5.432 4.385 20.748 15.482 35.205 29.462 23.489 -79 -71 -82 -81 0,22 Fluoreno 9.202 9.946 10.174 8.419 30.356 22.653 49.255 43.030 28.343 -70 -56 -76 -70 -0,32 Fenantreno 51.741 47.062 50.291 44.342 77.133 52.895 91.608 74.851 52.471 -33 -11 -33 -15 -1,04 Antraceno 4.981 5.567 3.322 3.531 3.276 4.298 5.603 5.100 3.835 52 30 -35 -8 -1,3 Fluoranteno 19.099 16.132 24.380 15.701 24.192 24.278 38.383 31.792 23.271 -21 -34 -23 -33 -2,21 Pireno 35.751 28.290 41.056 29.929 53.622 51.683 71.921 63.548 50.639 -33 -45 -35 -41 -2,45 Benzo(a)antraceno 6.192 6.449 7.458 8.279 9.494 8.421 14.640 12.909 11.546 -35 -23 -42 -28 -3,46 Criseno 17.305 16.253 19.855 22.568 25.723 21.724 36.243 31.477 29.816 -33 -25 -37 -24 -3,95 Benzo(b)fluoranteno 3.419 3.343 3.811 4.064 4.409 3.722 6.371 5.603 5.267 -22 -10 -32 -23 -4,96 Benzo(k)fluoranteno 2.149 1.877 2.317 2.586 2.706 2.515 3.919 3.439 3.485 -21 -25 -33 -26 -5,13 Benzo(a)pireno 1.921 1.928 2.000 1.840 2.571 2.749 4.019 3.213 3.150 -25 -30 -38 -42 -4,85 Indeno(1,2,31.101 1.097 1.092 1.239 1.418 1.491 1.859 1.583 1.791 -22 -26 -31 -31 -5,97 c,d)pireno Benzo(g,h,i)perileno 2.958 2.102 3.628 3.992 4.427 5.201 4.547 4.918 -26 -53 -26 -6,21 Dibenzo(a,h)antraceno 655 673 599 651 811 825 997 916 892 -19 -18 -35 -27 recuperao no satisfatria

67

68 Todos os valores de D% em relao a U foram negativos, o que representa um forte indcio de que pode ocorrer volatilizao de PAH das amostras durante o processo de liofilizao. Ao comparar os valores de Pv com as D%, verificou-se que, de uma forma geral, os maiores percentuais de perda dos analitos em amostras liofilizadas (<D%) foram para os compostos com maior Pv, ou seja, compostos mais volteis. Porm, alguma inconsistncia observada para esta tendncia, como a discrepncia entre os valores de D% positivos e negativos para Antraceno. Esta variao entre as rplicas no foi observada para outros compostos, que apresentaram resultados coerentes, o que pode ser uma dificuldade na metodologia de quantificao para este composto especificamente. Os resultados da comparao entre as concentraes de OCP de tecidos moles de P. perna liofilizados e midos, esto apresentados na tabela 9.

Tabela 9: Comparativo entre as concentraes de OCP (pg.g-1) nos tecidos moles de P. perna liofilizado (L), e na amostra mida (U). Tambm so apresentadas as diferenas entre estes resultados (D%), expressos em percentual com relao ao U [(L-U)*100/U]. Valores abaixo do Limite de Deteco (LOD) so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos. E ainda, o log dos valores de Presso de Vapor (Pv) em Pa, retirados de a (Beyer et al., 2002); e b Liofilizado mida Compostos D1% D2% D3% D4% D5% log Pv L1 L2 L3 L4 L5 U1 U2 U3 U4 U5 -HCH 585 672 710 570 520 696 546 1.087 834 647 -16 23 -35 -32 -20 -0,82a -HCH 14.865 14.407 16.525 14.601 16.725 16.058 17.143 20.783 18.043 17.856 -7 -16 -20 -19 -6 -HCH 875 922 869 791 842 523 393 653 522 392 67 134 33 51 115 -1,48 a -HCH 683 722 885 746 784 918 843 1.285 1.149 984 -26 -14 -31 -35 -20 -HCH 541 596 706 499 551 594 657 675 <10 <10 -9 -9 5 Pentaclorobenzeno 560 527 482 446 437 688 707 893 855 848 -19 -25 -46 -48 -48 0,07 b Hexaclorobenzeno 279 284 212 188 199 254 233 283 267 287 10 22 -25 -30 -31 -0,85 b Pentacloroanisol 7.094 7.095 4.858 5.290 4.737 2.413 2.601 2.913 3.153 2.905 194 173 67 68 63 Octaclorostireno 6 6 <3 12 8 11 <3 <3 7 <3 -42 81 p,p' DDT 1.302 1.817 2.046 1.839 1.810 2.386 2.178 2.519 1.157 1.114 -45 -17 -19 59 63 -3,25 b o,p' DDT 789 783 872 855 893 851 660 865 590 720 -7 19 1 45 24 p,p' DDD 1.377 1.456 1.845 1.817 1.605 2.284 2.164 2.900 2.329 2.102 -40 -33 -36 -22 -24 -3,01 b o,p' DDD 1.192 1.082 1.988 1.650 1.776 2.099 2.160 2.627 2.277 2.841 -43 -50 -24 -28 -37 p,p' DDE 6.359 5.963 7.046 6.573 6.124 7.149 6.376 9.077 7.713 7.571 -11 -6 -22 -15 -19 -2,48 b o,p' DDE 490 447 560 469 491 540 546 691 583 641 -9 -18 -19 -19 -23 trans-Clordan 271 240 239 261 236 223 208 271 259 230 22 16 -12 0 2 -1,89 b cis-Clordan 127 155 112 113 110 121 145 144 136 219 5 6 -22 -17 -50 -2,1 b oxi-Clordan 50 47 <1 <1 47 50 44 47 38 60 2 9 -22 Heptacloro 213 207 119 198 185 35 25 38 32 39 508 732 212 520 378 -0,87 b cis-Heptacloro 65 73 70 86 63 108 97 120 111 84 -40 -25 -42 -22 -26 -1,88 b Epxido 69

Continuao da tabela 11: Compostos Liofilizado L2 L3 L4 mida U3 D1% 285 0 32 -35 -1 -72 20 D2% 192 50 114 -54 -47 -71 -16 D3% 226 -13 -33 -36 -16 -16 D4% D5% log Pv 171 -11 33 -24 -29 830 -13 225 -18 7 -43 -46 -11 -1,21 b -1,78 b -2,57 b -2,22 b -2,36 b -

L1

L5

U1

U2

U4

U5

Aldrin 649 561 679 593 778 Dieldrin 2.131 2.351 1.793 1.634 1.592 Endrin 280 298 188 218 158 Endosulfan-I 877 890 884 972 717 Endo sulfan-II 361 297 395 269 229 Metoxicloro 4 4 <1 74 9 Mirex 131 115 96 105 100

169 192 209 219 239 2.122 1.565 2.061 1.832 1.951 212 140 283 164 147 1.355 1.931 1.387 1.280 1.263 363 564 472 379 427 13 15 12 8 <1 109 137 115 120 112

70

71 Resultados contraditrios foram observados nesta comparao. O mais expressivo com relao ao Heptacloro e ao Aldrin, que apesar de terem uns dos maiores Pvs entre os OCP analisados, apresentaram os maiores D%s, o que se contrape com a premissa de perda dos compostos mais volteis na etapa de liofilizao das amostras. No caso do Heptacloro, o material liofilizado (L2) apresentou concentraes at quatro vezes maiores que a respectiva rplica mida (U2). Tal situao pode sugerir a existncia de mais variantes que influenciam na comparao Liofilizado x mido, do que a volatilidade dos analitos. A primeira questo que poderia surgir a que presena de gua no processo de extrao pudesse solvatar a matriz, impedindo a ao de extrao do solvente, levando a menores concentraes nas amostras com muita gua (cerca de 80% da massa do mexilho fresco de gua). Mas a pergunta natural que se segue, mas que fica em aberto, : por que este efeito observado somente em alguns analitos e em outros no? Comparativamente, as D% que se apresentaram negativas para os OCP, foram em nveis mais baixos que as observadas nos resultados de PAH (tabela 10), sugerindo que, mesmo que ocorra perda de OCP, essa parece no ser expressiva. Ao observar os resultados da comparao entre as concentraes de PCB das amostras liofilizadas e midas (tabela 10), verifica-se uma menor variabilidade dos valores entre as rplicas, quando comparados ao registrado para os PAHs e OCP.

Tabela 10: Comparativo entre as concentraes de PCB (pg.g-1) nos tecidos moles de P. perna liofilizado (L) e na amostra mida (U). Tambm so apresentadas as diferenas entre estes resultados (D%), expressos em percentual com relao ao U [(L-U)*100/U]. Valores abaixo do Limite de Deteco (LOD) so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos. E ainda, o log dos valores de Presso de Vapor (Pv) em Pa, retirados de (Beyer et al., 2002; Shen e Wania, 2005); Liofilizado mida log PCB D1% D2% D3% D4% D5% Pv L1 L2 L3 L4 L5 U1 U2 U3 U4 U5 -1,50 PCB28 13.581 11.194 12.423 11.904 11.712 14.680 13.970 18.404 23.390 15.289 -7 -20 -33 -49 -23 PCB52 11.461 10.996 10.495 10.178 10.015 9.939 8.864 11.370 9.243 8.079 15 24 -8 10 24 -1,80 PCB101 9.801 7.442 6.683 7.172 7.056 6.768 6.595 7.056 6.265 5.551 45 13 -5 14 27 -2,45 PCB138 5.362 5.815 5.762 5.746 5.654 6.177 6.125 7.433 6.541 5.810 -13 -5 -22 -12 -3 -3,29 -3,67 PCB153 11.399 10.027 8.822 9.673 9.518 9.769 10.125 11.329 10.131 8.932 17 -1 -22 -5 7 PCB180 4.055 3.272 3.282 3.556 3.499 3.487 3.580 4.164 3.609 3.059 16 -9 -21 -1 14 -3,88 PCB77 71 310 344 352 358 348 373 366 438 374 -80 -17 -6 -20 -4 -2,88 PCB81 <1 15 16 16 13 18 19 18 18 14 -19 -13 -9 -11 PCB126 16 26 33 34 30 32 34 33 36 32 -51 -24 -1 -7 -7 -3,31 PCB169 <1 6 5 5 <1 7 7 7 6 5 -20 -33 -27 PCB105 1.727 1.650 2.006 2.212 2.177 2.198 2.321 3.031 2.624 2.228 -21 -29 -34 -16 -2 -3,06 PCB114 180 150 180 181 178 202 201 245 220 195 -11 -26 -27 -18 -9 PCB118 8.525 6.706 7.352 6.997 6.884 7.687 7.601 9.217 8.065 7.000 11 -12 -20 -13 -2 -2,92 PCB123 174 132 134 119 117 135 156 167 150 125 29 -15 -20 -21 -7 PCB156 251 253 249 288 283 288 248 323 300 264 -13 2 -23 -4 7 PCB157 130 118 111 120 118 137 118 156 134 121 -5 0 -29 -10 -3 PCB167 545 401 421 448 441 458 479 527 493 413 19 -16 -20 -9 7 PCB189 24 26 34 40 40 32 25 37 34 28 -25 5 -8 17 40

72

73 Tambm foi possvel verificar que no caso dos PCB, apesar de as diferenas entre L e U serem na maioria negativos, estes nmeros so, tambm, inferiores quando comparados com os observados para PAH. Isto poderia apontar para uma menor influncia da liofilizao sobre as concentraes de PCB, quando se compara com o observado para os OCP e PAH. Porm, novamente registram-se resultados aparentemente contraditrios com relao aos valores de Pv, como observado na comparao entre PCB 28 e PCB 52. Apesar de estes compostos terem apresentado valores prximos de Pv, as diferenas entre Ls e Us do PCB 28 foram negativas, enquanto que quatro das cinco rplicas do PCB 52 ficaram positivas, e a negativa ficou bem prxima de zero. Em uma anlise geral dos resultados, verificou-se que, mesmo para compostos que apresentaram um baixo valor de Pv, como Benzo(g,h,i)perileno (-6,21 Pa), observaram-se concentraes de analitos menores nas amostras liofilizadas que nas amostras midas. Este quadro fica ainda mais difcil de se interpretar, considerando que para o Heptacloro, com um Pv de -0,87, obtiveram-se concentraes maiores na amostra liofilizada que na amostra mida.

6.3.2. Variabilidade das concentraes de STP entre rplicas de mexilho P. perna Os resultados do teste de variabilidade das concentraes de OCP entre as seis rplicas de mexilho P. perna est apresentado na tabela 11.

Tabela 11: Concentraes de OCP (pg.g-1) das seis rplicas de amostras compostas (5 indivduos por amostra) de tecido mole do mexilho P. perna. Aps os resultados das seis rplicas, apresenta-se a mdia aritmtica, o desvio padro (DP), e o coeficiente de variao percentual em relao mdia (CV%). Valores abaixo do Limite de Deteco (LOD) so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos. HCH DDT DDD DDE Pentacloro Hexacloro Pentacloro Octacloro Rplicas p,p' o,p' p,p' o,p' p,p' o,p' benzeno benzeno anisol stireno 1 77 492 128 54 15 77 142 569 <0,5 2903 1926 n.n. n.n. 1053 79 2 66 557 93 36 15 79 111 472 9 727 193 340 163 873 98 3 100 606 90 33 12 79 139 275 5 962 253 552 142 563 48 4 217 493 123 40 <0,9 82 104 629 <0,5 417 149 356 111 723 49 5 793 686 216 89 53 73 122 580 5 1330 446 507 160 1012 130 6 255 464 271 165 38 75 100 503 <0,5 973 324 732 346 952 53 Mdia 251 550 154 69 26 77 120 505 6 1219 549 497 184 863 76 DP 276 84 73 51 18 3 18 126 2 879 683 160 93 188 33 CV% 110 15 48 74 69 4 15 25 32 72 125 32 50 22 44 continuao da tabela 11 transcisoxicis-Heptacloro Endosul Endosul Rplicas Heptacloro Aldrin Dieldrin Endrin Metoxicloro Mirex Clordan Clordan Clordan Epxid fan-I fan-II 1 2 3 4 5 6 Mdia DP CV% <0,1 26 12 29 33 <0,1 25 9 38 <0,1 <0,1 14 10 17 <0,1 13 4 27 <0,2 <0,2 <0,2 <0,2 <0,2 <0,2 <0,1 12 16 23 18 <0,1 17 4 26 25 17 15 22 21 33 22 6 29 9 14 10 21 17 20 15 5 35 176 144 134 122 155 246 163 45 27 31 15 <0,4 30 45 <0,4 30 12 41 141 93 122 110 104 84 109 20 19 41 56 40 47 61 65 52 10 20 <0,2 55 4 12 13 48 26 23 88 97 76 72 70 79 80 79 10 12

74

75 Apesar de alguns compostos terem apresentado um coeficiente de variao percentual em relao mdia (CV%) em torno de 100%, como o -HCH e o,p' DDT, o que a princpio seria alto, pode-se considerar que a variabilidade entre as rplicas no foi expressiva. Para se analisar a variabilidade dos dados obtidos, deve-se considerar que as concentraes dos analitos foram baixas, e ainda, toda a complexidade do mtodo de preparo da amostra, at a quantificao em HRGC-MS. Desta forma, uma rplica apresentar o dobro de valor de outra pode no representar um problema. Ainda assim, observou-se que para oito analitos, o CV% ainda permaneceu abaixo de 25%, e para onze compostos o CV% ficou em at 50%. A tabela 12 resume os resultados para a variabilidade entre os PCB. Comparando com os resultados observados para OCP, a variabilidade das concentraes de PCB entre as rplicas de tecido mole de P. perna foi muito baixa.

Tabela 12: Concentraes de PCB (pg.g-1) das seis rplicas de amostras compostas (5 indivduos por amostra) de tecido mole do mexilho P. perna. Aps os resultados das seis rplicas, apresenta-se a mdia aritmtica, o desvio padro (DP), e o coeficiente de variao percentual em relao mdia (CV%). Valores abaixo do Limite de Deteco (LOD) so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos. Rplicas PCB28 PCB52 PCB101 PCB138 PCB153 PCB180 PCB77 PCB81 PCB126 1 380 479 742 698 1185 290 34 <0,2 <0,2 2 325 410 687 600 955 212 30 <0,2 <0,2 3 221 276 373 441 755 192 20 <0,2 <0,2 4 428 552 695 630 1038 243 34 <0,2 <0,2 5 394 400 548 555 1006 235 29 <0,2 6 6 579 665 676 512 956 246 31 <0,2 6 Mdia 388 464 620 573 983 236 30 6 DP 118 135 137 91 140 33 5 0 CV% 31 29 22 16 14 14 17 1

continuao da tabela 12 Rplicas PCB169 PCB105 PCB114 PCB118 PCB123 PCB156 PCB157 PCB167 PCB189 1 <0,1 273 22 661 19 59 30 62 <0,1 2 <0,1 205 16 566 <0,2 40 25 49 <0,1 3 <0,1 148 16 437 11 32 16 31 <0,1 4 <0,1 204 22 629 28 55 23 63 <0,1 5 <0,1 209 16 541 13 42 24 44 5 6 <0,1 165 14 499 13 37 17 39 7 Mdia 201 18 556 17 44 22 48 6 DP 43 3 83 7 11 5 13 1 CV% 22 19 15 42 24 23 26 16

76

77 Apenas quatro analitos apresentaram um CV% acima de 25%, porm nenhum destes ficou acima de 50%. Como j observado para o ensaio da perda de analitos por liofilizao, o mtodo de deteco dos congneres de PCB se mostrou mais estvel, possibilitando maior repetibilidade.

6.3.3. Comparao das concentraes de STP em amostras de SS coletadas em coletores de PET e de alumnio Na comparao entre as concentraes de OCP observadas no SS coletado com o amostrador de PET e de alumnio (tabela 13), os resultados obtidos por ambos os aparatos foram similares.

Tabela 13: Resultado comparativo das concentraes de OCP (pg.g-1) em slidos em suspenso (SS) coletados com amostradores feitos com Politereftalato de etila (PET) ou com alumnio. As concentraes dos compostos oxi-clordan, trans-heptacloro epxido e aldrin permaneceram abaixo do Limite de Deteco (LOD) (<0,6; <8,3 e <0,8, respectivamente). Valores abaixo do LOD so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos.
Compostos AUG PET ALUMNIO PR1 PR2 AR1 AR2 147 86 183 149 205 122 42 <9,8 94 55 335 <2,5 1.111 8.744 2.628 748 161 173 40 13 167 114 719 <2,5 1.595 7.551 2.272 755 132 1.374 58 <9,8 231 63 6.096 5 822 5.983 1.706 591 180 943 35 11 256 92 4.727 7 6.889 1.085 6.493 1.932 693 SEP PET ALUMNIO PR1 PR2 AR1 AR2 86 112 133 130 191 187 37 16 130 49 2.818 <2,5 9.451 1.907 8.136 2.532 733 166 243 46 20 139 51 1.523 <2,5 5.838 1.128 7.134 2.047 618 198 712 42 11 234 88 4.038 <2,5 5.065 1.305 6.950 2.374 641 175 686 36 13 219 63 3.553 5 5.212 1.023 9.557 3.492 625 Compostos AUG SEP PET ALUMNIO PET ALUMNIO PR1 PR2 AR1 AR2 PR1 PR2 AR1 AR2 82 97 150 154 88 77 94 124 32 <1,1 9 27 33 11 44 66 9 971 88 121 46 72 41 38 12 920 963 72 30 79 30 15 7 687 109 <4,0 30 170 28 16 12 621 129 49 <3,7 5 92 27 37 7 578 111 41 32 5 83 37 27 10 661 102 57 25 193 241

-HCH -HCH -HCH -HCH -HCH Pentaclorobenzeno Hexaclorobenzeno Pentacloroanisol Octaclorostireno p,p' DDT o,p' DDT p,p' DDD o,p' DDD p,p' DDE o,p' DDE

10.220 23.405 8.465

trans-Clordan cis-Clordan Heptacloro cis-Heptacloro Epxido Dieldrin Endrin Endosulfan-I Endo sulfan-II Metoxicloro Mirex

581 861 123 141 <4,0 27 46 25

<1,4 <1,4 <1,4 <1,4 <1,4 102 111

22.867 21.191 14.958 17.070 22.051 19.277 17.247 17.036

78

79 No entanto, no ms de agosto, as concentraes de -HCH e pentacloroanisol registradas no amostrador de alumnio foram de at uma ordem de grandeza acima das obtidas com o de PET. Este dado poderia representar um indicativo de interferncia do material do coletor nas concentraes de -HCH e pentacloroanisol detectadas no SS. Porm, nas amostras de setembro, as concentraes de -HCH obtidas com o amostrador de PET permaneceram constantes em relao ao ms anterior, mas as observadas no coletor de alumnio apresentaram tendncia de reduo. As concentraes de pentacloroanisol de setembro permaneceram constantes para o coletor de alumnio, e as obtidas com o de PET aumentam uma ordem de grandeza, atingindo concentraes comparveis, mesmo que ainda menores que as obtidas com o coletor de alumnio. Apesar de indicativos, a variabilidade dos dados no permite uma consistente avaliao da interferncia do material dos coletores nas concentraes de HCH e pentacloroanisol. Fazendo a comparao entre concentraes de PCB nas amostras de SS coletadas com os dois tipos de coletores utilizados, tambm se observa valores no mesmo nvel para ambos os casos (tabela 14). As concentraes do PCB 169 permaneceram abaixo do LOD (<7,2 pg.g1

).

Tabela 14: Resultado comparativo das concentraes de PCB (pg.g-1) em slidos em suspenso (SS) coletados com amostradores feitos com Politereftalato de etila (PET) ou com alumnio. Valores abaixo do LOD so apresentados como "<LOD" dos respectivos analitos.
AUG SEP Compostos PET ALUMNIO PET ALUM PR1 PR2 AR1 AR2 PR1 PR2 AR1 AR2 PCB28 1.772 2.051 3.004 3.125 1.746 1.926 2.331 2.620 PCB52 PCB101 PCB138 PCB153 PCB180 PCB77 PCB81 PCB126 PCB105 PCB114 PCB118 PCB123 PCB156 PCB157 PCB167 PCB189 1.652 2.056 5.826 5.324 1.879 2.158 3.303 3.902 2.607 3.461 4.786 5.111 3.174 3.171 3.616 4.038 2.754 3.188 2.501 3.009 3.326 3.122 3.006 3.276 4.053 4.519 3.485 4.458 4.687 4.522 4.213 4.449 1.557 1.529 1.123 1.412 1.668 1.649 1.408 1.639 165 <0,6 13 974 54 <0,6 295 79 169 32 178 6 13 1.091 69 284 319 95 173 36 143 <0,6 7 808 50 <0,6 238 48 134 26 164 <0,6 11 994 67 45 293 71 169 26 169 9 15 66 295 328 99 188 38 158 6 17 64 271 316 79 175 35 151 <0,6 12 62 251 297 72 170 32 145 39 13 61 286 336 86 180 35

1.100 1.097 1.044 1.078

2.352 2.560 2.013 2.467 2.650 2.545 2.319 2.565

80

81 Porm, no ms de agosto, as concentraes do PCB 52 observadas com o coletor de alumnio foram trs vezes superiores s observadas com o coletor de PET. Mas esta diferena no se mantm para o ms seguinte de amostragem, caindo para cerca de uma vez e meia. Assim como no caso dos OCP, dados inconsistentes no permitem afirmar sobre a interferncia do material do coletor sobre as concentraes de PCB no SS.

6.4. Consideraes gerais Os ensaios metodolgicos apresentados neste captulo balizaram as decises tomadas para as estratgias de coleta, processamento e anlise das amostras. Com base nestes ensaios, decidiu-se por no determinar as concentraes de PAH no material liofilizado, considerando uma possvel perda de PAH durante o processo de liofilizao, evitando uma subestimao do resultado final. Tambm se optou por trabalhar com triplicatas de amostras compostas, ao invs de seis rplicas, otimizando o trabalho no laboratrio e evitando gastos com anlises no HRGCHRMS (cerca de 200 Euros por amostra). Por ltimo, foi afastada a possibilidade de interferncia dos amostradores elaborados com as garrafas de PET sobre as concentraes de OCP e PCB, no SS coletados com estes aparatos. Isto possibilitou uma expressiva economia de capital que seria necessrio investir para se construir aparatos de teflon ou ao inox.

82 7. Captulo III: Perfis de bioacumulao diferenciados de pesticidas e de compostos relacionados com dioxinas em moluscos bivalves cultivados em baas tropicais poludas e no poludas: risco de consumo e efeito sazonal

7.1. Introduo Pesquisando na base de dados Webofscience com as entradas "Brazil" e "Mariculture", foram encontradas apenas duas ocorrncias de estudos relacionados a bivalves, e ambos a respeito de bioacumulao de metais. Tal carncia de informao preocupante, uma vez que se discute sobre os benefcios nutricionais destes alimentos, quando eles tambm so uma possvel fonte de contaminantes para o consumidor (Sioen et al., 2008). O registro de valores extremamente elevados de DDT e PCB, em mamferos marinhos da Baa de Guanabara, alcanando, respectivamente, 8.000 e 3.500 ng.g-1 na base de lipdeo, (Lailson-Brito et al., 2010), justifica uma avaliao do risco toxicolgico no consumo humano de bivalves que so cultivados nesta rea. E ainda, dados sobre a bioacumulao de OCP e PCB em bivalves filtradores da BG so teis para auxiliar no entendimento da dinmica destes contaminantes nas cadeias trficas dos ecossistemas. O efeito da variao sazonal, relacionado com as mudanas do contedo lipdico nos tecidos dos bivalves, tem sido sugerido como fator importante para se determinar a variabilidade das concentraes de compostos lipoflicos, como OCP e PCB, em bivalves (Lee et al., 1996). No entanto, dados mais recentes mostram que a quantidade de lipdeo no tecido de Mytilus edulis exerce um papel menor na variabilidade das concentraes de OCP e PCB (Carro et al., 2004). Em ambientes temperados, a gametognese acompanha os ciclos sazonais. Porm, o mesmo no observado em zonas tropicais, onde se tem registrado desovas mltiplas ao longo do ano (Fearman e Moltschaniwskyj, 2010). Desta forma, essencial estimar at que

83 ponto as variaes sazonais influenciam na contaminao dos produtos de maricultura das reas tropicais, em termos de concentraes das STP. Neste ponto, deve-se ressaltar que os frutos do mar so, provavelmente, a principal fonte de exposio humana aos compostos semelhantes s Dioxina (Pompa et al., 2003). Este captulo dedicou-se a uma anlise da bioacumulao de OCP e PCB por bivalves provenientes de cultivo comercial, analisando o potencial toxicolgico para o consumo humano. Como as reas de estudo apresentam atividades socioeconmicas caractersticas para cada uma das bacias de drenagem, tambm se discutiu o uso dos perfis de bioacumulao destes contaminantes, para a diferenciao dos seus respectivos locais de origem. E ainda, se realizou uma anlise comparativa entre a bioacumulao de OCP e PCB de P. perna e de N. nodosus e suas consequncias para o risco toxicolgico do consumo humano.

7.2. Material e mtodos 7.2.1 Desenho amostral e processamento dos tecidos A bioacumulao de STP em coquilles e em mexilhes foi estudada em quatro pontos de amostragem: Arraial do Cabo (AC), Baa de Guanabara (BG), Baa de Sepetiba (BS) e Baa de Ilha Grande (BIG). O cultivo de coquilles ocorre apenas em AC e em BIG. Para se estimar a variao sazonal das concentraes de contaminantes nos bivalves cultivados, as amostragens foram realizadas no final do vero (maro) e no final do inverno (setembro) de 2009. Quinze animais com tamanho comercial foram coletados em cada rea de estudo (comprimento total da concha dos mexilhes de 6-8 cm e coquilles de 12 a 15 cm). No esforo de se minimizar a variao inter-individual das concentraes de STP bioacumuladas nos tecidos dos bivalves, agruparam-se cinco organismos para se fazer uma amostra

84 composta. Desta forma, trs amostras foram obtidas de cada local de coleta, para cada ms de amostragem. Os animais foram mantidos em caixas trmicas resfriadas com Gelox, at a chegada em laboratrio, onde foram congelados (-20C) at o momento do processamento. Os animais foram descongelados a temperatura ambiente, antes de serem dissecados. Os tecidos moles foram obtidos cortando-se o msculo adutor em sua insero nas valvas. Cada organismo foi vigorosamente lavado com gua destilada antes de ser colocado com os demais, no esforo de se retirar o que no estivesse de fato incorporado ao tecido do animal. Cinco indivduos eram agrupados em recipientes de vidro previamente pesados (figura 16). Antes de se congelar as amostras a -80C por 24h, foi retirado o mximo de gua do pote que continha os tecidos moles da amostra composta.

Figura 16: Obteno da massa mida do tecido mole de P. perna. Preparo das amostras compostas, com cinco indivduos para cada uma.

Com as amostras congeladas, iniciou-se a secagem a frio (liofilizao). As massas das amostras foram determinadas antes e depois da liofilizao, calculando-se o percentual de gua do tecido. Aps a secagem, os tecidos foram triturados em moinho com lmina de ao

85 inox e copo em alumnio (MA345 - Marconi), estocando o material em recipientes de vidro com tampa de rosca.

7.2.2. Extrao das STP dos bivalves O mtodo empregado para extrao, purificao e quantificao dos OCP e PCB nos bivalves est descrito na sesso 6.2.2..

7.2.3. Estimativa de risco toxicolgico do consumo humano de bivalves Para se estimar o risco toxicolgico do consumo humano de bivalves, as maiores concentraes detectadas de cada composto nos bivalves foram consideradas, de forma a se trabalhar no pior cenrio encontrado. Como uma primeira abordagem de risco toxicolgico, foi empregada a metodologia do menor nvel de risco (Minimal Risk Levels - MRL). Os MRL estabelecidos pela Agncia para Substncias Txicas e Registro de Doenas (Agency for Toxic Substances and Disease Registry), para exposio oral, e preferencialmente para exposio aguda, de cada composto de interesse, foi considerado nesta anlise (ATSDR, 2010). Como no h estatsticas oficiais disponveis sobre o consumo humano de bivalves no Brasil, foi calculado o nmero de mexilhes e coquilles necessrios de se ingerir, para que o MRL recomendado de cada composto fosse atingido. A segunda abordagem para se estimar o risco toxicolgico associado ao consumo de bivalves cultivados na costa do Estado do Rio de Janeiro foi a utilizao do Resduo Mximo aceitvel (Maximum Residue - MR). Para isto, utilizou-se a Base de Dados de Pesticidas da Unio Europia (European Union EU)

(http://ec.europa.eu/sanco_pesticides/public/index.cfm?event=substance.selection), que tem como referncia o regulamento n 396 de 2005 (UE, 2005). Os valores para este estudo foram

86 os estabelecidos para o produto "carne", uma vez que a natureza deste produto foi a mais prxima dos bivalves, e tambm o item mais presente nas listas de compostos. Calculou-se ento o percentual relativo da concentrao de cada contaminante encontrado nas amostras, em relao aos respectivos MR. Para o somatrio dos congneres de PCB e os metablitos de DDT, os MR das legislaes Brasileira e Americana foram utilizados. A agncia Americana estipula valores de MRs de 2.000 e 5.000 ng.g-1, para PCB e DDT, respectivamente (FDA, 2011). Os Limites de Referncia para Tomada de Ao Regulatria tambm foram adotados, conforme descrito na Instruo Normativa n24 de 2011 do Ministrio de Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA, 2011). Como os valores de referncia para DDT e PCB especficos para bivalves de cultivo no esto disponveis nesta legislao, utilizou-se os descritos para os produtos pecurios (carne bovina, equina, suna e de aves). O terceiro mtodo adotado foi o da Ingesto Diria Aceitvel (Acceptable Daily Intake - ADI). Para o clculo da ADI, assumiu-se uma refeio contendo 12 indivduos de mexilhes, ou 12 de coquilles, considerando a massa corprea de uma criana com 30 kg. Alguns valores de ADI utilizados para os OCP foram retirados do Inventrio do Programa Internacional de Segurana Qumica (International Programme on Chemical Safety - IPCS), realizado pela Reunio Conjunta sobre Resduos de Pesticidas (Joint Meeting on Pesticide Residues - JMPR) (WHO, 2011). Os Fatores de Equivalncia Toxicolgica (Toxic Equivalent Factors - TEF) foram utilizados para estimar o risco toxicolgico aos PCB, pelo consumo de bivalves. Os valores revisados de TEF fornecidos pela WHO para cada composto relacionado com Dioxina (Berg et al., 2006) foram adotados para o clculo dos Equivalentes Toxicolgicos (Toxic Equivalent - TEQ) de cada amostra. Os valores de TEQ foram estimados na base da massa mida das

87 amostras, e o valor limite de segurana considerado foi o fornecido pela WHO, que fica na faixa de 1 a 4 pg Total-TEQ/kg de massa corprea (WHO, 1998).

7.2.4. Tratamento dos dados Realizou-se o teste de Mann-Whitney para verificar a existncia de diferena significativa entre o contedo de lipdeos nos bivalves coletados nos meses de maro e setembro, para cada local de estudo. Considerou-se o nvel de significncia de 5%. Na tentativa de se identificar grupos distintos entre os locais de coleta e os meses amostrais, aplicou-se uma Anlise Discriminante (AD), utilizando-se como variveis, as concentraes das STP obtidas. Os compostos foram selecionados gradativamente (um por um) para se realizar o teste, verificando se as premissas do teste no eram violadas. Uma vez que as condies eram aceitas, outro composto era selecionado. Os casos ausentes de cada varivel, foram substitudos pela mdia dos respectivos conjuntos. O programa Statistica (verso7, Statisoft) foi utilizado para a realizao destes testes.

7.3. Resultados e discusso A presente tese apresentou resultados de OCP e PCB no coquille N. nodosus, o que no se encontrou em outros trabalhos da literatura. Porm, h dados disponveis para espcies de outros gneros de coquilles, que foram utilizados na discusso dos dados. Com relao aos compostos quantificados no mexilho P. perna encontraram-se apenas dois trabalhos que estudaram estes animais de guas brasileiras. Os compostos HCB, lindano, aldrin, dieldrin, endrin, alm dos grupos DDT, DDD e DDE (no especificado se p,p' ou o,p', que foram quantificados em mexilhes da BG por Xavier de Brito e colaboradores (2002), tambm foram quantificados na presente tese.

88 O segundo trabalho que reporta dados de pesticidas em P. perna foi conduzido na costa do Estado de So Paulo (Gorni e Weber, 2004) e apresenta dados de HCH total ( + + + HCH), DDT total (o,p' DDD + p,p' DDD + o,p' DDT + p,p' DDT + p,p' DDE), cis- e trans clordano, aldrin + dieldrin, heptacloro, heptacloro epxido e mirex. Os PCB quantificados foram 118, 153, 138, 187, 128, 180 e 170. Para estes organismos da costa de So Paulo, nenhum destes compostos apresentou concentrao maior que os respectivos LOD daquele estudo. Outro trabalho que quantificou OCP e PCB em P. perna foi realizado na costa de Gana (Otchere, 2005). Porm, este trabalho no descreveu de que forma se identificou e se quantificou os compostos (total DDT, total clordano, total HCH e PCB 28, 52, 101, 118, 153, 138, 180). Alm disso, no foi informado o LOD, nem o uso de brancos analticos ou de material de referncia certificado. Desta forma, optou-se por no citar os dados deste trabalho, uma vez que a validade destes no foi bem demonstrada. Portanto, com relao aos PCB, a presente tese apresentou dados inditos de PCB 77, 81, 126, 105, 114, 123, 156, 157, 167 e 169 em P. perna. Enquanto que para os OCP, foram apresentados dados originais de -HCH, pentaclorobenzeno, pentacloroanisol,

octacloroestireno, oxi-clordano, o,p' DDE, endosulfan I e II, e metoxicloro, quantificados em P. perna. Estes dados sero analisados sob trs aspectos. Na primeira abordagem, fez-se uma anlise sobre as diferenas espaciais, temporais e entre as espcies de bivalves estudadas, buscando caracterizar os locais e meses de coleta, segundo as concentraes de OCP e PCB obtidas neste estudo. Em um segundo momento, as concentraes obtidas no presente estudo foram comparadas com os dados disponveis na literatura, no sentido de oferecer um parmetro do

89 nvel de contaminao dos animais estudados. Os dados sobre o coquille N. nodosus foram discutidos separadamente, devido aos poucos estudos disponveis para tal. O terceiro e ltimo aspecto foi sobre o risco de intoxicao humana pelos compostos estudados, atravs do consumo dos bivalves analisados, utilizando-se diferentes parmetros de avaliao toxicolgica. A massa mida mdia dos mexilhes foi de 9,5 g (1,9), e dos coquilles (apenas o msculo adutor e as gnadas) 14,0 g (1,5). O contedo de lipdeo expresso em percentual de massa mida variou de 1,2 a 3,2% nos mexilhes, e de 0,6 a 1,4% nos coquilles. No se detectou diferena significativa na comparao entre os contedos de lipdeo observados nos indivduos coletados no ms de maro e de setembro, de um mesmo local de estudo. Os bivalves analisados neste estudo so comercializados em sua maioria por restaurantes instalados prximos aos locais de cultivo, podendo o produto estar com, ou sem a concha, que retirada colocando-se os indivduos em gua doce fervente. O presente estudo analisou animais retirados diretamente do mar, sem qualquer modificao, no sentido de se evitar fontes de variabilidade (perda ou contaminao) para a concentrao bioacumulada do analito no tecido dos bivalves. Os locais de estudo escolhidos so reas de cultivo comercial de bivalves. Acredita-se que pode haver distintos perfis de bioacumulao dos OCP e PCB entre bivalves que cresceram em diferentes localidades da BG, devido s diferenas ambientais, como tempo de residncia das guas. O mesmo pode ser esperado para as demais baas estudadas nesta tese. Assumindo-se isto, optou-se por selecionar as reas de coleta onde a maricultura comercial tem sido desenvolvida mais consistentemente ao longo da ltima dcada. Desta forma, os dados aqui apresentados so representativos de cada baa estudada em termos da estimativa do risco para o consumo humano.

90 Um dos desafios para se comparar os dados produzidos nesta tese foi identificar estudos que tivessem uma metodologia analtica bem descrita. Foram selecionados os dados confiveis da literatura, evitando referncias que no discriminaram os congneres considerados para o valor informado de PCB, ou os metablitos quantificados para o resultado de DDT, o que tornaria a comparao dos dados imprecisa. Baseando-se no contedo de gua observado nos tecidos de bivalves desta tese (82%), um fator de 5,6 foi usado para converter os dados de outros estudos que expressaram seus resultados na base de massa seca, para valores na base de massa mida.

7.3.1. Distribuio espacial e temporal dos contaminantes Como uma primeira abordagem sobre a carga de contaminantes nos bivalves provenientes de reas de cultivo da costa do Estado do Rio de Janeiro, foi feito o somatrio de todos os OCP e PCB quantificados no tecido comestvel dos coquilles e nos mexilhes. Os resultados foram plotados por rea de amostragem por ms e por espcie. Valores de Octacloroestireno (OCS) e trans-heptacloro epxido permaneceram abaixo do LOD em todas as amostras (0,5 e 0,8 pg.g-1, respectivamente). Poucos estudos foram encontrados que reportam concentraes de trans-heptacloro epxido, separadas do somatrio de heptaclor ou de clordanos. Em um estudo sobre a presena de pesticidas no pescado comercial holands (salmo, truta, tilpia e camaro), o trans-heptacloro epxido tambm permaneceu abaixo do LOD (van Leeuwen et al., 2009) OCS no um produto comercial e apresenta estrutura molecular parecida com o HCB. Sua emisso est associada a processos industriais que envolvem altas temperaturas, com a presena de cloro. No continente europeu, o OCS foi detectado em diferentes organismos aquticos continentais e marinhos, incluindo 70% das amostras de mexilho (Chu et al., 2003). A no deteco de OCS nas amostras de bivalves no presente estudo pode estar

91 relacionada a uma baixa emisso deste composto nos arredores das reas de origem das amostras, e/ou uma provvel metabolizao deste composto por bivalves (Bauer et al., 1989). Coquilles da BIG e de AC, bem como os mexilhes de AC coletados no ltimo ms do vero (maro), mostram as menores concentraes (<1.000 pg.g-1) para o OCP, quando comparados com as verificadas nas outras amostras (figura 17).

Figura 17: Soma de OCP medidos em todo o tecido mole dos mexilhes (Mex) P. perna e no msculo adutor e gnada do coquille (Coq) N. nodosus, expresso em pg.g-1 de massa mida, em maro (caixas preenchidas) e setembro (caixas vazias), coletados em: Baa de Guanabara (BG), Baa de Sepetiba (BS), Baa de Ilha Grande (BIG) e Arraial do Cabo (AC). Coquilles foram coletados apenas em BIG e AC. As caixas representam a variao das trs rplicas analisadas. Cada rplica uma amostra composta por cinco indivduos. Os OCP medidos foram: -, -, -, -, -HCH; Pentaclorobenzeno; Hexaclorobenzeno; Pentacloroanisol; p,p e o,p DDT; p,p e o,p DDD; p,p e o,p DDE; trans-, cis-, oxyClordano; Heptacloro; cis-Heptacloro Epxido; Aldrin; Dieldrin; Endrin; Endosulfan-I e II; Metoxicloro; e Mirex.

Mexilhes da BS e da BIG, coletados em maro e setembro, e tambm mexilhes da BG coletados em maro, mostraram concentraes intermedirias para a bioacumulao de

92 OCP (variao entre 1.250 e 2.250 pg.g-1). Os valores mais elevados foram detectados nas amostras da BG e AC coletadas em setembro, com os valores variando entre 5.000 e 8.000 pg.g-1. Com relao soma de PCB, os mexilhes da BG coletados no inverno, novamente apresentaram os valores mais elevados em relao s outras amostras, variando de 7.500 a 11.000 pg.g-1. Mexilhes da BS e da BIG coletados em setembro mostraram concentraes mais baixas (entre 4.500 e 6.000 pg.g-1). As menores concentraes do PCB foram observadas nos mexilhes coletados em AC, e nos coquilles coletados na BIG, ambos no ms de maro, com valores inferiores a 1.000 pg.g-1. As demais amostras ficaram agrupadas em uma faixa de concentrao entre 1.250 e 3.000 pg.g-1 para o somatrio de PCB (figura 18).

Figura 18: Soma dos PCB medidos em todo o tecido mole dos mexilhes (Mex) P. perna e no msculo adutor e gnada do coquille (Coq) N. nodosus, expresso em pg.g-1 de massa mida, em maro (caixas preenchidas) e setembro (caixas vazias), coletados em: Baa de Guanabara (BG), Baa de Sepetiba (BS), Baa de Ilha Grande (BIG) e Arraial do Cabo (AC). Coquilles foram coletados apenas em BIG e AC. As caixas representam a variao das trs rplicas analisadas. Cada rplica uma amostra composta por cinco indivduos. Os PCB medidos foram: PCB 28; 52; 101; 138; 153; 180; 77; 81; 126; 169; 105; 114; 118; 123; 156; 157; 167; 189.

93 Este cenrio confirmou o que se esperava: maiores concentraes de contaminantes foram encontradas na BG. Porm, surpreendentemente, concentraes de OCP nos mexilhes de AC coletados em setembro foram comparveis com a BG. E isto principalmente em relao ao expressivo aumento de Pentacloroanisol (PeCA) de maro para setembro, que ser discutido mais a frente. Tais diferenas espaciais e temporais com relao s concentraes de OCP e PCB em mexilhes e coquilles se tornam mais evidentes observando-se o resultado da AD, plotada sobre os eixos cannicos. Entre os OCP, os nicos compostos no includos na anlise foram: endosulfan-II, metoxicloro e mirex. Isto por que, ao serem selecionados na anlise, as premissas do teste foram violadas. A AD mostra que possvel distinguir cada local de estudo pelos perfis de bioacumulao de OCP observados nos bivalves. Grupos bem definidos so formados por local de estudo e ms amostral (figura 19).

94

Figura 19: Grfico de disperso categorizado da Anlise Discriminante (AD) para os OCP. A primeira e a segunda funo (Root 1 e 2) da AD so representadas nos eixos X e Y respectivamente, mostrando os valores das funes calculados. Cada smbolo representa um grupo de anlises. Cada grupo possui trs rplicas, que so trs amostras compostas (cinco indivduos por amostras). Os grupos so descritos por local e pela matriz da amostra: Mex para mexilhes e Coq para coquilles; por local de coleta: BG - Baa de Guanabara, BS - Baa de Sepetiba, BIG - Baa de Ilha Grande, e AC - Arraial do Cabo. Os smbolos para cada grupo esto especificados na figura. As variveis consideradas nesta anlise foram: -, -, -, -, -Hexaclorociclohexano (HCH); Pentaclorobenzeno; Hexaclorobenzeno; Pentacloroanisol; p,p e o,p DDT; p,p e o,p DDD; p,p e o,p DDE; trans-, cis-, oxy-Clordano; Heptacloro; cis-Heptacloro Epxi; Aldrin; Dieldrin; Endrin e Endosulfan-I.

Deve-se registrar a expressiva distncia no eixo cannico entre o grupo dos coquilles e dos mexilhes, o que chamou a ateno para a boa separao entre os perfis de bioacumulao de OCP das duas espcies de bivalves. Analisando os coquilles de AC, verificou-se certa diferenciao entre os meses de maro e setembro, enquanto se observou uma sobreposio dos grupos de coquilles provenientes da BIG. Com relao aos mexilhes, grupos distintos foram formados, de acordo com a rea, e com o ms de coleta. A exceo para esta tendncia foi observada para os mexilhes da BG e da BIG coletados em maro, que ficaram sobrepostos no plano do grfico. Este resultado foi

95 inesperado, uma vez que estudos prvios observam concentraes de OCP em cetceos mais elevadas na BG, quando comparadas com as registradas em amostras da BIG e da BS (Lailson-Brito et al., 2010). As concentraes comparveis de OCP em mexilhes de uma baa historicamente impactada (BG) e uma relativamente preservada (BIG) podem estar relacionadas a fatores ambientais. Alteraes na coluna d'gua, como o aumento da concentrao de slidos em suspenso, podem promover a reduo da biodisponibilidade de OCP na BG, como j reportado para outras reas (Yang et al., 2006). Realizando separadamente a AD com as concentraes de PCB, no se obteve uma diferenciao to clara entre os grupos de amostras, mas ainda possvel identificar uma separao (figura 20).

96

Figura 20: Grfico de disperso categorizado da Anlise Discriminante (AD) para os PCB. A primeira e a segunda funo (Root 1 e 2) da AD so representadas nos eixos X e Y, respectivamente, mostrando os valores das funes calculados. Cada smbolo representa um grupo de anlises. Cada grupo possui trs rplicas, que so trs amostras compostas (cinco indivduos por amostras). Os grupos so descritos por local e pela matriz da amostra: Mex para mexilhes e Coq para coquilles; por local de coleta: BG - Baa de Guanabara, BS - Baa de Sepetiba, BIG - Baa de Ilha Grande e AC - Arraial do Cabo. Os smbolos para cada grupo esto especificados na figura. As variveis consideradas nesta anlise foram: PCB 28; 52; 101; 138; 153; 180; 77; 81; 126; 169; 105; 114; 118; 123; 156; 157; 167; 189.

Um grupo bem distante das demais amostras foi formado por mexilhes da BG, devido s elevadas concentraes de PCB bioacumulados por estes animais em setembro. Da mesma forma, as altas concentraes de PCB bioacumulados pelos coquilles de AC, em setembro fez com que estas amostras ficassem posicionadas prximo ao grupo dos mexilhes da BG e da BS coletados em maro. As concentraes de PCB mais elevadas nos coquilles da BIG e de AC, coletados em setembro, foram similares s mais baixas observadas para os mexilhes da BG, BS e BIG amostrados em maro. No se observou distanciamento entre as amostras dos meses de maro

97 e setembro, para os mexilhes coletados em AC. O mesmo tambm se verificou para os coquilles da BIG. Os resultados da AD para OCP e PCB corroboraram para a confirmao da hiptese levantada nesta tese, de que as baas estudadas apresentam um perfil de contaminao diferenciado, como indicado no estudo de bioacumulao destes contaminantes em Sotalia guianensis, que comparou a BG com o sistema BS-BIG (Lailson-Brito et al., 2010). Foi possvel identificar tambm uma tendncia geral de se observar uma separao das amostras referentes aos meses de maro das de setembro. As amostras que no seguiram esta tendncia foram os coquilles coletados na BIG, tanto para OCP como para PCB e os mexilhes de AC, com relao ao PCB. Estes resultados sugerem uma influncia sazonal sobre as concentraes de PCB e OCP boacumuladas pelos mexilhes e coquiles. Como ser apresentado nas tabelas 15 e 16, as concentraes de STP tendem a ser mais elevadas para as amostras do ms de setembro, quando comparadas com os resultados de maro. Este quadro est de acordo com os resultados j reportados para BG da concentrao de alguns OCP no tecido mole de P. perna (Xavier de Brito et al., 2002). A variabilidade sazonal na bioacumulao de OCP e PCB por bivalves no est bem estabelecida na literatura. Em contraposio com os resultados da presente tese, um estudo realizado em um clima subtropical detectou maiores concentraes de PCB em ostras coletadas de reas sob influncia de rios na estao chuvosa. Estes resultados foram relacionados com a contribuio do run-off continental para o sistema estuarino (Fang et al., 2006). Entretanto, o mesmo estudo tambm sugere que uma temperatura d'gua do mar relativamente constante, pode minimizar possveis variaes sazonais nas concentraes de PCB. Isto porque, os autores no observaram uma tendncia sazonal para as concentraes de PCB nos bivalves coletados em reas fora da influncia fluvial. A estabilidade na temperatura

98 da gua permitiria que a atividade de desova se desse ao longo de todo ano e, consequentemente, menor efeito sobre as perdas de contaminantes lipoflicos (Fang et al., 2006). No entanto, a relevncia do papel da temperatura sobe as concentraes de contaminantes nos tecidos moles de bivalves no foi observada em estudo realizado na sia. Apesar da expressiva amplitude de temperatura registrada ao longo do perodo amostrado, que variou de 17 a 29C, no se detectou diferena significativa entre a carga de PCB bioacumulados na estao chuvosa e seca (Fang et al., 2010). Dados a respeito da atividade de desova do mexilho P. perna na costa do Estado de So Paulo mostram um estado gonadal relativamente constante em uma baixa variao de temperatura (Marques et al., 2008). A ausncia de diferena significativa entre os contedos lipdicos nos tecidos dos bivalves dos meses de maro e setembro, para as quatro reas de estudo desta tese, sugere que ao longo da costa do Rio de Janeiro, os animais podem estar continuamente em atividade de desova durante todo o ano. Ou ainda, que as variaes lipdicas decorrentes de desovas podem exercer um papel menor nas perdas de OCP e PCB, como j reportado (Carro et al., 2004). Portanto, as diferenas entre os meses de maro e setembro, com relao s concentraes de OCP e PCB nos tecidos dos bivalves, estariam mais provavelmente relacionadas a razes ambientais, do que a fatores biolgicos dos organismos sentinelas. Neste sentido, o lanamento eventual destes contaminantes, ou o uso peridico (intermitente) destes contaminantes nas atividades industriais/agrrias, poderiam contribuir para a variao das concentraes de OCP e PCB observadas nos tecidos dos bivalves analisados.

99 7.3.2. Perfil de contaminao A tabela 15 mostra a amplitude de variao dos OCP quantificados nos mexilhes e nos coquilles coletados nas reas estudadas desta tese.

Tabela 15: Amplitude das concentraes dos OCP expressas em massa mida do tecido mole do mexilho P. perna e do msculo e da gnada do coquille N. nodosus cultivados na costa do Estado do Rio de Janeiro: Arraial do Cabo (AC); Baa de Guanabara (BG); Baa de Sepetiba (BS); e Baa de Ilha Grande (BIG). Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. Quando todas as triplicatas apresentam o mesmo valor, apenas um resultado apresentado. AC BG BS BIG Contaminantes Mexilho Coquille Mexilho Mexilho Mexilho Coquille Mar Set Mar Set Mar Set Mar Set Mar Set Mar Set -HCH 12-14 157-191 3-4 1-14 55-74 45-54 68-83 25-60 <0,9-8 24-39 9-13 <0,9- 3 -HCH 89-173 586-815 <0,9-2 6-9 297-778 143-486 158-372 106-116 280-317 51-91 <0,9-9 <0,9-2 -HCH 13-16 279-387 4 <0,9-21 19-32 39-45 24-38 62-115 <0,9-11 94-111 2-8 <0,9-7 -HCH <0,9 22-40 <0,9 <0,9 8-10 4-11 1-4 <0,9- 9 <0,9 <0,9 <0,9 <0,9 -HCH <0,9 <0,9 <0,9 <0,9 <0,9-20 2-12 1-2 <0,9 <0,9 <0,9 <0,9 <0,9 Pentaclorobenzeno 19-28 180-332 16-18 8-31 31-48 62-75 18-28 40-57 34-48 48-88 16-22 15-18 Hexaclorobenzeno 4-8 132-140 <1,3-2 <1,3-5 6-16 4-19 <1,3-6 <1,3-4 16-24 3-5 <1,3 <1,3-3 Pentacloroanisol 271-284 3.529-3.883 215-225 367-560 209-299 403-427 149-378 532-592 192-370 576-767 200-286 236-428 p,p' DDT 19-62 144-191 1,9-5 27-34 210-454 331-462 76-64 140-266 261-320 167-264 <1,9-33 <1,9-17 o,p' DDT <0,4 71-271 <0,4 <0,4 96-137 114-196 28-34 <0,4-28 41-51 9-59 <0,4 <0,4 p,p' DDD 22-31 90-103 <1,6-2 3-7 126-130 869-1.353 82-112 69-76 165-201 78-92 7-12 11-19 o,p' DDD 8-15 58-67 <0,1 <0,1 49-92 247-326 28-37 15-16 119-145 20-24 <0,1 <0,1 p,p' DDE 79-146 490-578 24-25 29-42 184-229 2,521-4,206 166-195 82-114 220-275 125-151 43-62 90-156 o,p' DDE 4-7 28-46 0 <0,2-1 27-43 140-210 13-15 4-6 22-29 11-14 <0,2-1 0-2 DDT 132-254 900-1.084 24-33 59-84 792-942 4.303-6.715 384-454 346-471 846-1.022 474-553 53-84 101-193 trans-Clordan 2-4 22-39 <0,1 <0,1-1 3-6 17-54 4-5 4-5 32-35 9-18 <0,1 <0,1-2 cis-Clordan 1-2 9-19 <0,1 <0,1 2-4 12-18 2-7 1-2 3-5 <0,1 <0,1 <0,1 oxy-Clordan <0,2 <0,2 <0,2 <0,2 0-1 2-3 <0,2-1 <0,2 1 <0,2 <0,1 <0,1 Heptacloro <0,1-3 52-78 <0,1 <0,1-14 2-4 6 2-6 6-8 1-4 11-13 3-7 <0,1-5 Heptacloro Epxid 1-2 14-15 1-2 1-2 2-4 4 3-6 1 3-4 1-2 3-4 4-5 Aldrin 29-39 127-133 34 4-15 28-77 11-14 12-31 10-20 6-33 25-30 78-246 16-30 Dieldrin 28-35 234-347 19-23 19-34 57-73 101-221 60-71 27-29 53-71 34-54 28-37 36-46 Endrin 4-9 29-77 2-4 1-3 6-7 9-23 5 2-3 3-5 2-8 3-4 2-4 Endosulfan-I 96-109 58-69 6-10 <0,7-4 54-49 <0,6-20 56-86 2-7 124-159 8-16 9-12 13-16 Endosulfan-II 10-28 <0,6 <0,6 <0,6 11-14 1-3 5-19 <0,6 26-35 2-6 1-3 <0,6-3 MetoxIcloro <0,2 2-3 <0,2 <0,2 <0,2-1 20-31 <0,2 0 <0,2 0-1 <0,2 <0,2 Mirex 7-9 41-54 2 1-2 20-26 16- 24 26-29 15-20 51-74 17-18 2 3-6 100

101 Quando se calculou o percentual do DDT em relao ao OCP, DDT mostrou uma menor contribuio no montante de OCP nos bivalves coletados em AC (14-23%), o que estaria de acordo com a inexpressiva atividade agrria no entorno da rea. BG apresentou os maiores percentuais de DDT (40-82%), o que poderia ser relacionado a presena de reas produtoras de hortalias na bacia de drenagem da BG. Mesmo com esta possvel fonte de DDT para o sistema aqutico da BG, as concentraes de DDT observadas nos mexilhes coletados em Jurujuba foram relativamente baixas. Isto porque, mesmo considerando a maior concentrao detectada em setembro (cerca de 4.500 pg.g-1), esta ainda ficou duas ordens de grandeza abaixo do valor de 173.000 pg.g-1, encontrado no bivalve Sinonovacula constricta coletado em uma rea poluda na costa da China (Wang et al., 2007). As concentraes de DDT nos mexilhes da BG ainda parecem baixas quando comparadas com dados de um estudo conduzido na costa sul da ndia com Perna viridis (Ramesh et al., 1990). Neste estudo, o maior somatrio de DDT reportado pelos autores foi de 39.000 pg.g-1. Entretanto, em outra avaliao feita em regio mais ao norte da ndia, com coletas de 20 anos mais recentes, os autores registram concentraes compatveis com a do presente estudo, com o DDT mximo de 6.880 pg.g-1 (Sundar et al., 2010). Entre os metablitos do DDT, os DDEs foram os mais presentes, com percentuais de p,p' DDE variando entre 25 e 60% do DDT. Este quadro foi bem diferente da formulao tcnica do DDT, que composta aproximadamente de 77% de p,p DDT, 15% de o,p DDD, e 4% de p,p DDE (ATSDR, 2002). Estudos anteriores sugerem que o processo de declorinao do DDT para DDE, atravs do metabolismo em mexilhes, no ocorre de forma expressiva (Kwong et al., 2009). Sendo assim, a fonte ambiental deste composto seria a mais importante para as concentraes de p,p' DDE verificadas no tecido mole dos bivalves analisados.

102 Concentraes expressivas de PeCA foram observadas em todas as amostras, mas principalmente nos mexilhes coletados no ms de Setembro em AC (3.883 pg.g-1), que atingiu um valor mais alto que o pior caso registrado na costa dos Estados Unidos da Amrica, na dcada de 90 (Wade et al., 1998). Os nveis de PeCA em coquilles foram comparveis com os verificados nos mexilhes. A presena de PeCA no meio ambiente pode estar relacionada a degradao do Pentaclorofenol, que foi proibido na atividade agrria no Brasil desde 1985 (ANVISA, 1985), mas ainda usado como fungicida para preservao de madeira. As concentraes relativamente altas que foram detectadas na presente tese podem estar relacionadas a aplicaes recentes deste composto no entorno da rea de cultivo dos bivalves. Como no caso da Enseada do Forno em AC, que est prximo do principal estaleiro dos pescadores de AC. O ismero do grupo HCH mais presente nas amostras de bivalves analisadas foi o HCH, que mostrou uma participao percentual variando entre 39 e 94%, considerando os mexilhes de todos os locais e meses de coleta. Este resultado estaria de acordo com os dados da literatura, que indica o -HCH como o ismero de HCH que apresenta maior bioacumulao na teia alimentar (ATSDR, 2005). Mexilhes de AC coletados em setembro e os mexilhes da BG apresentaram as concentraes mais altas (mximo de 800 pg.g-1) de -HCH. Este valor representa cinco vezes o nvel mais elevado registrado em Mytilus galloprovincialis, coletados no Canal de Istambul (Okay et al., 2011). Em avaliao feita na costa da Tailndia com P. viridis (Boonyatumanond et al., 2002), os autores registraram concentraes de -HCH abaixo do limite de deteco (no informado). Isto pode ser outra indicao de que os valores de -HCH encontrados no mexilho da BG foram altos.

103 A China um local com histrico de uso de HCH em larga escala. Em 1952, o montante utilizado foi de 4.500 kt, chegando a 270 kt em 1984. E em uma avaliao com amostras de trs espcies de bivalves (Crassostrea gigas, Mytilus edulis e Chlamys farreri), obtidas do mercado da China, obteve-se uma valor de mediana para -HCH (2.030 pg.g-1) (Jia et al., 2010) que representa mais que o dobro do observado no presente estudo, para P. perna. E ainda, o valores mais altos observados para -HCH nos mexilhes da BG (mxima de 815 pg.g-1) so comparveis com os registrados para Mytilus edulis coletados no Mar Bltico (de 160 a 750 pg.g-1), costa da Alemanha (Lee et al., 1996), descrita como uma rea contaminada. Portanto, foi possvel classificar os mexilhes da BG em uma situao intermediria, no que se refere s concentraes de -HCH. Uma antiga fbrica produtora da formulao tcnica de HCH ("p-de-broca"), localizada no entorno da BG (Cidade dos Meninos - Duque de Caxias), pode ser uma fonte pontual de contaminao para este ecossistema (Asmus et al., 2008), o que explicaria as altas concentraes observadas deste contaminante nos mexilhes da BG. Como os dados sobre a presena de HCH em mexilhes produzidos em AC so inditos, as altas concentraes de -HCH medidas nestes animais merecem um monitoramento em estudos futuros. Os coquilles apresentaram apenas nveis residuais de HCH em seu tecido comestvel. Os outros OCP medidos neste estudo apresentam baixas concentraes e so menos importantes para o entendimento do perfil de contaminao das baas estudadas. Em estudo da contaminao de Mytilus galloprovincialis por OCP, realizada em uma rea severamente impactada por atividade agrria no Mar Negro, foram observados valores expressivamente altos para Dieldrin (780 pg.g-1), Heptacloro (1.600 pg.g-1) e

Hexaclorobenzeno (270 pg.g-1) (Kurt e Boke Ozkoc, 2004). Estes valores esto acima dos

104 resultados do presente estudo, que ficaram na faixa de 20-347 pg.g-1, <0,1-78 pg.g-1 e <1,3140 pg.g-1, respectivamente. Entre os PCB (tabela 16), em todos os casos os PCB indicadores (28, 52, 101, 118, 138, 153, 180) representaram cerca de 50% do total de PCB bioacumulados nos tecidos analisados de mexilho e coquilles. Como descrito para os resultados de OCP, as concentraes de PCB detectados em mexilhes e em coquilles podem ser consideradas baixas.

Tabela 16: Amplitude das concentraes dos PCB expressas em massa mida do tecido mole do mexilho P. perna e do msculo e da gnada do coquille N. nodosus cultivados na costa do Estado do Rio de Janeiro: Arraial do Cabo (AC); Baa de Guanabara (BG); Baa de Sepetiba (BS); e Baa de Ilha Grande (BIG). Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. Quando todas as triplicatas apresentam o mesmo valor, apenas um resultado apresentado. AC BG BS BIG ContamiMexilho Coquille Mexilho Mexilho Mexilho Coquille nantes Mar Set Mar Set Mar Set Mar Set Mar Set Mar Set PCB28 140-212 91-173 56-145 33-105 143-251 801-2.327 164-262 639-1,665 104-150 164-259 37-56 89-94 50-95 53-151 37-54 92-102 PCB52 94-132 102-182 130-171 869-2.800 151-206 715-1,952 145-188 213-309 34-48 44-81 <0.2 40-46 PCB101 81-101 63-103 146-168 994-1.650 230-257 563-847 163-181 158-232 <0.2 <0.2 <0.2 <0.2 PCB138 75-105 57-78 361-504 961-1.299 292-340 172-820 254-365 156-163 <0.2 <0.2-68 <0.2 <0.2 PCB153 130-190 113-140 520-762 1.233-1.762 378-472 331-1,251 345-504 228-259 <0.1 <0.1 <0.1 <0.1 PCB180 56-71 45-56 165-242 346-486 91-108 69-339 57-86 33-47 2 2 1 2-3 PCB77 4-6 3-4 8-13 17-57 12-15 <0,3-15 16-22 8-9 <0.2 <0.2 <0.2 <0.2 PCB81 <0,2 <0,2 <0,2-1 <0,2 <0,2 <0,2-6 <0,2 <0,2 <0.2 <0.2-0.4 <0.2 <0.2 PCB126 <0,2 <0,2-1 <0,2-2 <0,2-3 2-3 <0,2-1 <0,2-3 <0,2-2 <0.1 <0.1-0.4 <0.1 <0.1 PCB169 1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0.2 <0.2 <0.2 <0.2 PCB105 19-30 15-18 61-82 339-501 42-47 53-161 <0,2-67 33-41 1 1 <0.2-1 1 PCB114 2-3 2-3 6-10 15-22 <0,2-4 <0,2-8 <0,2-4 <0,2-3 <0.2 <0.2 <0.2 <0.2 PCB118 56-80 41-56 251-406 941-1.270 183-195 196-359 176-252 103-116 0.5-1 0.5-1 <0.2-1 <0.2-1 PCB123 2-3 1-2 37-55 150-211 29-32 <0,2-63 38-52 <0,2-26 1-2 1 1 1-2 PCB156 3-5 4-5 8-12 58-75 10-11 7-21 9-12 7-8 0.4-1 1 <0.2 <0.2-1 PCB157 3-4 2-3 7-11 <0,2-39 6 4-18 <0,2 <0,2 1 1 <0.2-1 1 PCB167 8-11 6-9 29-43 60-87 15-18 13-53 <0,2-23 <0,2 <0.1 <0.1 <0.1 <0.1 PCB189 1 1 <0,1-2 <0,1 1 <0,1-21 <0,1 <0,1 56-145 33-105 1.920-2.576 7.334-10.931 1.668-1.959 4.085-5.815 1.418-1.901 1.362-1.436 37-56 89-94 PCB 687-959 550-785

105

106 Considerando apenas a soma dos PCB indicadores, as concentraes mais baixas verificadas na presente tese, principalmente os dados de BIG e de AC, foram comparveis com as observadas em Mytilus edulis na Groelndia (110-1.400 pg.g-1) (Cleemann et al., 2000). As concentraes dos PCB indicadores observadas em Mitylus galloprovincialis (9.800 pg.g-1), coletados em uma regio contaminada na costa da Itlia, parte central do Mar Adritico (Perugini et al., 2004), tenderam a ser mais elevadas que os valores verificados na presente tese. Um estudo conduzido com Perna viridis provenientes de um cultivo comercial de Hong Kong (So et al., 2005), os autores quantificaram alguns congneres de PCB, que no foram contemplados no presente estudo. Para os congneres que se teve resultado na presente tese, os valores foram comparveis, com exceo para o congnere 138. Na BG, o PCB 138 apresentou concentraes at duas ordens de grandeza acima das encontradas nos mexilhes de Hong Kong. Tambm foram observados resultados similares para o PCB encontrados no presente estudo e os descritos para M. galloprovincialis (de 1.200 a 3.300 pg.g-1) coletados no Mar Adritico, ao longo de seis locais na costa da Crocia (Koul et al., 2009). Essa comparao se fez considerando apenas os congneres que tambm foram quantificados nesta tese, e incluiu os PCB que mais contriburam para o total calculado (101, 114, 118, 123, 138, 153, 156, 157, 167, 180, 189, 28 e 52). Ainda com relao ao estudo realizado na Crocia (Koul et al., 2009), os congneres de PCB que apresentaram maiores concentraes foram os PCB 52, 153, 138 e 28. Analisando os resultados do presente estudo, os congneres que atingiram maiores valores foram os PCB 153, 52, 101 e 138. Em estudo feito com M. galloprovincialis no Canal de Istambul, o PCB 153 tambm foi o mais bioacumulado (Okay et al., 2009).

107 Uma avaliao nos nveis de PCB em peixes comestveis capturados na BG mostrou resultados similares ao observado no presente estudo, com exceo para os peixes carnvoros, que apresentaram maiores concentraes (da Silva et al., 2003). Considerando os congneres de PCB determinados nos peixes da BG (28, 52, 101, 138, 153, 180), novamente o PCB 153 foi um dos mais bioacumulados, seguido dos PCB 138, 101 e 28. O congnere 138 tambm foi um dos mais bioacumulados nos golfinhos-tucuxi (Sotalia fluviatilis) do esturio do Rio Paraba do Sul (Quinete et al., 2011). Os resultados do congnere mais bioacumulado nesta tese (PCB 153) corroboram com o indicado pela literatura, como sendo um dos congneres com maior tendncia a se acumular na biota (PCB 138, 153 e 118) (ATSDR, 2000). Compostos mais clorados, e sem tomos de hidrognio adjacentes aos de cloro nas molculas de PCB, tm sido apontados como sendo os de maior potencial bioacumulativo na teia trfica, devido maior resistncia ao metabolismo dos organismos (Kwon et al., 2006). Com relao s amostras de coquilles, duas referncias foram encontradas na literatura, mas no foram utilizadas na discusso com os dados desta tese. Um estudo que quantificou PCB em C. islandica coletados na Groelndia, no descreve quais congneres foram determinados, informando apenas o somatrio total de PCB (Kjlholt e Hansen, 1986). O outro, conduzido ao norte da China com Chlamys farreri, as concentraes de pesticidas foram determinadas em todo o tecido mole dos espcimes (Liu et al., 2008), o que novamente diverge do mtodo adotado no presente estudo, que utilizou apenas gnada e msculo adutor de N. nodosus. Espcimes de Chlamys islandica foram coletados no arquiplago rtico de Svalbard e as concentraes de alguns OCP e PCB determinadas na base de lipdeos (Vieweg et al., 2012). Para possibilitar a comparao com os dados do presente estudo, as amostras onde se observaram as maiores concentraes de OCP e PCB foram calculadas na base de lipdeo.

108 Outro ponto a ser considerado que todo o tecido mole dos espcimes de C. islandica foi utilizado para a extrao das STP. Uma vez que o presente estudo utilizou apenas o msculo adutor e a gnada de N. nodosus, a contribuio de outros rgos para a carga total de STP nos organismos pode resultar em uma maior concentrao dos compostos. Nos animais de Svalbard, as concentraes de HCB permaneceram abaixo do LOD (Vieweg et al., 2012), enquanto que as nos coquilles da BIG e de AC, as concentraes variaram de 500 a 2.500 pg.g-1 de lipdeos. Por outro lado, enquanto as concentraes de HCH no presente estudo no ultrapassam 1.500 pg.g-1 de lipdeos, verificou-se uma variao de 2.500 a 4.600 pg.g-1 de lipdeos nos espcimes de C. islandica do arquiplago polar. Observaram-se ainda nos animais de Svalbard concentraes mdias dos metablitos de Chlordano (oxy-, trans-, e cis-) prximas a 1.500 pg.g-1 de lipdeos (Vieweg et al., 2012). A maioria das amostras analisadas neste estudo permaneceram abaixo do LOD para estes compostos e no ultrapassaram os 500 pg.g-1 de lipdeos. Como os congneres PCB 28 e PCB 52 no foram quantificados em C. islandica de Svalvard (Vieweg et al., 2012), a comparao do total de PCB fica comprometida, uma vez que estes compostos tiveram expressiva presena nos animais da presente tese. Sendo assim, fez-se a comparao por congneres de PCB. Os congneres que apresentaram maiores concentraes em C. islandica de Svalvard foram os PCB 118 e 138, que alcanaram valores de 25.000 e 34.000 pg.g-1 de lipdeos (Vieweg et al., 2012). Enquanto que para N. nodosus da BIG e de AC, os congneres com maior participao foram os PCB 28 e 52 (que no foram medidos em C. islandica), com concentrao mxima de 7.500 pg.g-1 de lipdeos para ambos os compostos. Dados de pesticidas acumulados em gnada de indivduos machos e fmeas de Mizuhopecten yessoensis, coletados no Mar do Japo, sugeriram uma tendncia para maior bioacumulao em gnodas de fmeas dos ismeros de HCH (266.000 pg.g-1), e metablitos

109 de DDT (16.000 pg.g-1) (Syasina, 2003). Este estudo tambm mostrou uma tendncia para a ocorrncia de maiores concentraes dos compostos analisados na glndula digestiva de M. yessoensis, quando se comparou com as observadas nas gnadas. As concentraes de OCP em M. yessoensis do Mar do Japo (Syasina, 2003) que se mostraram at cinco ordens de grandeza acima das verificadas em N. nodosus na presente tese, devem ser analisadas considerando-se dois aspectos. Primeiro que os dados da presente tese se referem ao msculo e gnada (os dois tecidos usualmente comestveis) de N. nodosus. As reservas energticas, presentes nas clulas reprodutivas da gnada, resulta em um maior contedo lipdico neste tecido, quando comparado com o observado no msculo. Esta condio poderia favorecer o maior acmulo de STP na gnada, como j reportado na literatura (A. Fernandes et al., 2008). Assim, como as concentraes de STP nas amostras de coquilles da presente tese, se referem aos tecidos de msculo adutor e gnada juntos, espera-se um efeito de diluio. Isto resultaria em menores concentraes se comparadas uma anlise da gnada em separado, como a feita para M. yessoensis do Mar do Japo (Syasina, 2003). O segundo aspecto que os indivduos de M. yessoensis do Mar do Japo foram coletados com 2-3 anos de idade (Syasina, 2003), enquanto que indivduos utilizados no presente estudo, no apresentavam mais que 1 ano de idade. Este quadro tambm favorece maiores concentraes de STP em M. yessoensis, devido ao maior tempo de bioacumulao destes compostos pelos organismos, como j sugerido em outro estudo (Colombo et al., 1995). Mesmos os compostos que apresentaram menor concentrao em C. farreri do norte da China (Liu et al., 2008), como o -HCH (80 pg.g-1), apresentaram concentraes uma ordem de grandeza acima das observadas para N. nodosus na maioria dos casos. O composto que se observou a maior concentrao em C. farreri foi o p,p' DDT, com valores

110 ultrapassando 5.000 pg.g-1, enquanto que a mxima registrada para N. nodosus foi de 34 pg.g1

, em espcimes de AC. Com base nos dados discutidos, as concentraes de OCP e PCB, obtidas nos

coquilles de AC e BIG no presente estudo, podem ser classificadas como baixas.

7.3.3. Estimativa de toxicidade Poucos dados cientficos sobre a presena de OCP e PCB na biota da BG esto disponveis na literatura, apesar de se tratar de um dos centros econmicos mais importantes da Amrica Latina, bem como um dos mais impactados tambm. Encontrou-se apenas duas publicaes cientficas que focam a presena de STP no pescado marinho da BG, sendo uma tratando de peixes (da Silva et al., 2003) e outra sobre mexilho (Xavier de Brito et al., 2002). Ambas reportam dados referentes h dez anos. At onde se sabe, no h estudos sobre a ocorrncia de OCP e PCB em pescados comestveis provenientes de AC, BIG ou BS. Portanto, o presente estudo ganha um expressivo valor, no apenas por oferecer uma estimativa do risco toxicolgico para o consumo de bivalves cultivados nas reas estudadas, mas tambm por contribuir para o entendimento da dinmica ambiental dos compostos aqui quantificados em condies tropicais. E ainda, como as amostragens foram realizadas entre dezembro de 2008 e setembro de 2009, os dados aqui apresentados referem-se s condies anteriores ao incio da construo, ou da ampliao de portos instalados nas proximidades das reas estudadas nesta tese. Portanto, os resultados aqui apresentados so tambm importantes para subsidiar futuros monitoramentos ambientais que podem seguir tais empreendimentos, em especial avaliaes da alterao da biodisponibilidade de OCP e PCB nos ecossistemas, devido

111 atividade de dragagem, como j reportado na literatura para outras reas (Cornelissen et al., 2008). Realizando as trs abordagens de avaliao do risco toxicolgico propostas nesta tese, pode-se afirmar contundentemente que, considerando os contaminantes de interesse da presente tese, o consumo humano de mexilhes e coquilles cultivados nas reas estudadas seguro. No clculo de quantos organismos so necessrios para se alcanar o MRL dos compostos quantificados, o menor nmero foi verificado para mexilhes de setembro da BG. Neste caso, necessrio se consumir 342 mexilhes para se atingir o limite sugerido para p,p' DDT, considerando uma situao onde a nica fonte de p,p DDT para a pessoa o consumo de mexilho. Quando se calculou o percentual que as concentraes dos contaminantes quantificados representam em relao os seus respectivos MRs, novamente os mexilhes da BG foram os que representam maior risco toxicolgico. Ainda assim, a concentrao mais alta verificada, representou baixos percentuais em relao s diferentes legislaes usadas como referncia, alcanando apenas, 0,1%, 0,7% e 7%, do estipulado para DDT das legislaes Americana (FDA, 2011), Brasileira (MAPA, 2011) e da EU (UE, 2005), respectivamente. Em estudo recente, onde se avaliou o risco toxicolgico de produtos do pescado no mercado Chins, incluindo bivalves, o DDT tambm representou o contaminante de maior risco (Liu et al., 2008). Estes resultados reiteraram a persistncia destes compostos no ambiente, bem como sua ampla presena geogrfica. Com relao ao PCB, novamente mexilhes da BG de setembro foram os maiores valores, representando 5,5% e 0,5% dos limites recomendados pelas legislaes Brasileira (MAPA, 2011) e Americana (FDA, 2011), respectivamente.

112 Quando uma criana com massa corprea de 30 kg ingere uma refeio com 12 mexilhes, novamente o DDT o grupo de compostos que oferece maior risco sade humana, entre os OCP estudados nesta tese. Mesmo assim, o DDT atingiu apenas 3% de seu ADI recomendado (WHO, 2011). Estes nmeros foram o pior cenrio para a exposio de OCP. Portanto os demais OCP aqui estudados esto em uma faixa de segurana ainda maior. A amplitude do TEQ calculado de 0,0 a 0,4 em pg.g-1 na base de peso mido, o que representa tambm um consumo humano seguro destes bivalves. Apenas um estudo foi encontrado na literatura que apresentasse valores de TEQ para PCB em coquilles. Espcimes de Pecten maximus foram coletados na costa da Esccia, sendo o msculo adutor e a gnada analisados separadamente. O maior valor de Total-TEQ / kg de peso corpreo encontrado foi de 0,2 na gnada e de 0,01 no msculo (A. Fernandes et al., 2008). Estes valores esto abaixo do verificado para o TEQ dos coquilles de AC, que variou entre 0,2 e 0,3 Total-TEQ / kg de peso corpreo. Considerando a soma dos valores de TEQ obtidos para gnada e msculo em P. maximus, os valores encontrados por Fernandes e colaboradores (2008) so comparveis com os encontrados na presente tese.

7.4. Consideraes finais Tem-se estabelecido que 53% do estoque de peixes marinhos esto completamente explotados (FAO, 2010), o que tem promovido a atividade de maricultura em todo o mundo, no esforo de repor esta importante fonte primria de protena para os humanos. As guas costeiras so geralmente utilizadas para abrigar fazendas de maricultura, devido ao fcil acesso a estas reas e a sua produtividade primria mais elevada que as reas ocenicas, o que especialmente interessante para o cultivo de bivalves. E ainda, por razes econmicas, interessante que as reas de maricultura sejam instaladas prximas aos centros urbanos, reduzindo o custo de logstica. Por outro lado, as

113 baas costeiras so reas de concentrao de lanamento pontuais e difusos de substncias txicas, uma vez que a densidade populacional nas zonas costeiras (112 pessoas/ km2) quase o triplo da densidade mdia global (44 pessoas/ km2) (Nicholls e Small, 2002). A cincia pode contribuir neste cenrio, oferecendo modelos que sejam capazes de predizer as reas mais propcias para o desenvolvimento da maricultura, considerando-se a dinmica de contaminantes nos ecossistemas. Neste contexto, o presente estudo contribui neste processo, fornecendo dados sobre a ocorrncia de 46 compostos, em dois produtos da maricultura nacional. Ao mostrar que, mesmo em locais com histrico de contaminao, os bivalves cultivados apresentam nveis seguros para o consumo humano no que diz respeito aos contaminantes aqui estudados, pode-se esperar que os resultados desta tese ajude a promover a produo de bivalves na costa brasileira, at ento sub-aproveitada para este fim. Os resultados apresentados nesta sesso esto publicados no peridico Food Chemistry e o artigo est no anexo VI.

114 8. Captulo IV - Avaliao do mexilho P. perna como organismo sentinela para monitorao ambiental de Substncias Txicas Persistentes. 8.1. Introduo Ao se adotar uma espcie como modelo biolgico para se estudar a dinmica de contaminantes no ambiente, fundamental se estabelecer os alcances e as limitaes da ferramenta escolhida. De uma forma geral, a informao sobre a biodisponibilidade do composto/elemento em foco, obtida com a quantificao do analito no tecido da espcie analisada, o primeiro passo para que se possa discutir a potencial aplicao do organismo como modelo para monitorao ambiental. Moluscos bivalves filtradores bioacumulam contaminantes em seus tecidos, geralmente em nveis superiores ao encontrado nas fontes ambientais. Esta incorporao se d principalmente atravs das brnquias, quando os contaminantes se encontram dissolvidos na gua. Mas tambm podem ser incorporados atravs das partculas filtradas que so tratadas como alimento, como revisado em (Galvo et al., 2009). Uma vez que se estabelece a frao biodisponvel (concentrao encontrada no tecido da espcie sentinela) do contaminante no ambiente, o passo a seguir estabelecer relaes numricas entre esta medida e as observadas nas fontes de contaminantes (frao solvel na coluna d'gua, slidos em suspenso ou sedimento). Este passo fornece uma boa avaliao sobre a resposta obtida atravs do sentinela, com relao ao nvel de contaminao ambiental. Com isto, pode-se obter um maior entendimento sobre a dinmica do contaminante nos ecossistemas. Neste sentido, encontram-se trabalhos que tm utilizado o fator de bioacumulao biota-sedimento (Biota-sediment accumulation factor - BSAF) para se fazer inferncias sobre a distribuio de contaminantes no ambiente.

115 O BSAF definido como sendo a razo entre a concentrao do contaminante encontrada no organismo, normalizada pelo contedo de lipdeo e a concentrao no sedimento, normalizada pelo contedo de carbono orgnico (Burkhard et al., 2005). Este ndice pode ser estimado via modelagem, baseado nas caractersticas fsicoqumicas do composto. Porm, para espcies que no estejam em contato direto com o sedimento, somente atravs da quantificao do composto nos compartimentos ambientais, que se pode chegar a um termo conclusivo de BSAF (Burkhard et al., 2005). Para que o BSAF seja preditivo das concentraes do analito no tecido do organismo, necessrio que a amostra de sedimento reflita uma exposio recente do animal ao composto em foco (Burkhard et al., 2005). Com relao ao acmulo das STP nos bivalves e no sedimento, um estudo feito em um esturio no sul da China aponta uma significativa correlao entre as concentraes de PCB encontradas no sedimento e as observadas no mexilho Perna viridis (Fang, 2004). Porm no geral, o autor reportou concentraes de PCB nos mexilhes uma ordem de grandeza acima das encontradas no sedimento. O sedimento apontado como um compartimento abitico que integra as variaes dos contaminantes no ambiente (Fstner e Wittmann, 1979), principalmente porque nele se concentram os slidos que antes estavam em suspenso. Os slidos em suspenso (SS) servem de stio para adsoro de STP (Leadprathom et al., 2009), o que explica as maiores concentraes de pesticidas observadas no SS, que as verificadas na frao dissolvida da gua (Bergamaschi et al., 2001). Em ambientes estuarinos, a composio dos SS varia com o regime de mar, correnteza incidente, pluviosidade, ventos e eroso. Desta forma, pode-se hipotetizar que as concentraes de contaminantes no SS no corresponde ao observado no sedimento coletado no mesmo local, em um dado momento.

116 Estabelecer uma relao entre a frao de contaminante biodisponvel (bioconcentrada no tecido do sentinela) e as concentraes verificadas nas fontes ambientais, pode ser interessante para a maricultura. Em especial, quando se deseja avaliar se um local apropriado ao cultivo de mexilhes, mas a espcie de interesse no ocorre na rea. Nestas circunstncias, surgiria a questo de qual seria a melhor forma de se avaliar os nveis de contaminantes que a espcie iria bioacumular se fosse cultivada no local considerado. Como os contaminantes na gua so encontrados em concentraes menores que o observado para a biota e o sedimento, por exemplo, necessrio uma maior capacidade analtica para se determinar a concentrao na gua. E ainda, a amostragem de gua envolve a necessidade de coletas sucessivas, de forma a abranger as variaes de mars, e/ou de pluviosidade (entrada de contaminantes por run-off). Ao se considerar esta dificuldade, optase para trabalhar com outras matrizes ambientais: o sedimento ou o SS. Para a amostragem do sedimento, h menos variantes envolvidas que devam ser observadas, quando comparadas com uma amostragem de gua, uma vez que o sedimento est menos sujeito a variaes de curto prazo. Porm, para se ter uma amostra do SS, h a opo e se filtrar (<0,45 m), ou centrifugar um determinado volume d gua, obtendo-se a amostra de SS nos filtros utilizados (Bilotta e Brazier, 2008). Outra abordagem para a amostragem de SS o uso dos coletores de sedimento (sediment traps) (Zajczkowski, 2002). O uso dos coletores de sedimento, tambm chamados de armadilhas de sedimento (sediment trap), busca integrar as variaes da composio do SS na coluna d'gua em um intervalo de tempo. Este mtodo tem como vantagem, sobre a coleta instantnea de gua (seja para a anlise da frao dissolvida ou da total ou do SS), o fato do amostrador ficar exposto s variaes do sistema por um intervalo de tempo definido. Poucos estudos na literatura dedicaram-se variao das concentraes de STP no SS e que adotaram os coletores de sedimento. Portanto, ainda no se tem bem estabelecido na

117 literatura a relao entre as concentraes de STP bioacumuladas por bivalves e as observadas em SS obtidos com os coletores. A partir das concentraes observadas nas matrizes abiticas (sedimento e SS, por exemplo) coletadas em um local, busca-se estabelecer uma relao destas com a frao bioacumulada pela biota local. Caso seja possvel identificar com clareza a relao entre a variabilidade nas concentraes de um determinado contaminante em uma espcie e dos compartimentos abiticos, o organismo em queto poderia ser classificado como bom sentinela para o composto analisado. Uma abordagem que auxilia na qualificao de um organismo como sentinela a conduo dos chamados experimentos transplante. Organismos so deslocados de uma rea para outra, onde permanecem por determinado tempo, podendo retornar ao local de origem, ou no. Ao se determinar as concentraes bioacumuladas pelos espcimes, antes do deslocamento e aps certo perodo do transplante, obtm-se informaes sobre a toxicocintica dos contaminantes. Desta forma, pode-se estimar a absoro e depurao de compostos pela espcie em estudo. A partir de dados gerados por experimentos de transplante, pode-se avaliar a potencial aplicabilidade da espcie em estudo, para uma avaliao de impacto ambiental. Como por exemplo, manejando-se animais em gaiolas de regies preservadas, para reas que tenham sido afetadas por uma entrada pontual de contaminantes. No contexto da maricultura, caso animais cultivados em reas contaminadas tenham bioacumulado contaminantes em concentraes de risco para o consumo humano, pode-se propor o manejo destes organismos para um local com menor contaminao ambiental. Assim, os indivduos permaneceriam um perodo de depurao, visando que as concentraes dos contaminantes possam chegar a valores seguros para o consumo.

118 8.2. Material e mtodos Para responder as questes levantadas neste captulo, trs reas de estudo foram adotadas: Baa de Guanabara (BG); Baa de Sepetiba (BS) e Baa de Ilha Grande (BIG). De cada local de estudo, foram coletados mexilhes P. perna, sedimento superficial de fundo e SS. As coletas foram realizadas nos meses de dezembro de 2008 e fevereiro de 2009.

8.2.1. Coleta das amostras As amostras de mexilhes foram coletadas e processadas como descrito no captulo II desta tese. As amostras de sedimento foram coletadas com draga de Eckman, sendo apenas a camada superficial retirada (<10cm), com auxlio de uma colher de ao (figura 21).

Figura 21: Coleta de Sedimento superficial de fundo utilizando uma draga de "Eckman", retirando-se a camada superficial (<10cm). Em cada rea de estudo, foram feitas trs amostragens com a draga, ao longo dos espinhis de cultivo do mexilho. Para cada lanamento, foi obtida uma rplica, que era armazenada em potes de vidro com tampas de rosca (isoladas com papel alumnio), resultando em trs rplicas por local.

119 No laboratrio, as amostras foram congeladas a -80C e liofilizadas. As amostras secas foram peneiradas, separando-se a frao menor que 74m com peneira de ao, e agitador. Armazenou-se o sedimento em potes de vidro com tampa de rosca. O procedimento de amostragem dos SS utilizado para este captulo foi o sistema de coletores feitos de PET, como descrito no captulo II desta tese. Estes tambm permaneceram por 15 dias nos locais de cultivo de mexilho, em cada rea de estudo. Ao final deste perodo, as amostras de SS, sedimento e mexilhes foram coletadas no mesmo momento. Os aparatos coletores de slidos em suspenso foram instalados a cerca de 1,5 m e 2,0 m de profundidade, estando no mesmo nvel que as cordas mexilhoneiras dos sistemas de cultivo. O desenho amostral foi elaborado visando estimar a exposio dos mexilhes aos slidos em suspenso dos locais estudados. O SS coletado tambm foi peneirado em uma malha de 74m, assim como as amostras de sedimento. Como o SS pode ser constitudo por organismos vivos (plncton), matria orgnica morta (detrito orgnico) ou partcula inorgnica, procurou-se separar a frao mais fina, onde se tem a maior relao superfcie por volume. Esta condio seria a mais propcia para a soro de partculas hidrofbicas, nos stios de interao das partculas suspensas formados pelas cadeias de carbono. Esta interao entre o contedo orgnico das partculas com as STP j est bem descrita na literatura, sendo esta maior quanto maior o Kow (mais hidrofbico) do composto em questo (Persson et al., 2005). Portanto, ao se optar por separar a frao < 74m do material obtido, fez-se uma avaliao de uma condio mais representativa dos contaminantes mais lbeis, do que quando comparada com a anlise de fraes do sedimento/slidos suspensos maiores.

120 8.2.2. Experimento de transplante Para avaliar a cintica de depurao das STP estudadas nesta tese, no mexilho P. perna, dois experimentos de transplantes foram realizados, um iniciando em dezembro, outro em junho, sendo que ambos com durao de um ms. Nos dois experimentos, mexilhes cultivados na BG foram levados para locais onde se sups que os organismos ficariam expostos a menores concentraes ambientais (BS e BIG). E ainda, outra corda mexilhoneira foi mantida no local de origem do transplante (BG). Em dezembro de 2008, retirou-se 15 indivduos da corda que permaneceu na BG, que representaram a condio inicial do experimento, o tempo zero (T0). A outra corda foi levada para a BS, e fixada no sistema de cultivo da Praia Grande da Ilha de Itacuru, na BS. Aps 30 dias do incio do experimento, outros 15 animais foram coletados da corda que permaneceu na BG. E ainda, mais 15 mexilhes foram retirados da corda que foi levada para BS. De cada conjunto de 15 indivduos coletados, trs amostras compostas foram feitas, assim como descrito no captulo II desta tese. Este procedimento foi repetido em junho de 2009. Porm, desta vez os mexilhes foram trasnplantado para BIG. A opo em deixar uma corda mexilhoneira no local de origem do transplante (BG), se justifica pela necessidade de se comparar as concentraes de STP verificadas nos mexilhes que permaneceram em BG, com as observadas nos animais levados para baas com menor exposio ambiental. Desta forma, a amostragem de animais feita no local de origem do transplante, 30 dias aps o T0, funcionou como um controle para a variabilidade mensal das concentraes de STP bioacumuladas pelo mexilho P. perna, em um mesmo local.

8.2.3. Clculo do fator de bioacumulao biota-sedimento (BSAF) O clculo do BSAF se fez pela equao:

121 BSAF = concentrao do contaminante no organismo por grama de lipdeo concentrao do contaminante no sedimento por grama de carbono orgnico

A estimativa do contedo de carbono orgnico (CO) iniciou-se com o mtodo de perda por ignio. Em triplicata, alquotas de aproximadamente 1,5 g de cada amostra, foram colocadas em cadinhos de porcelana. Aps 16h a 100C, deixou-se o material resfriar em dessecador, obtendo-se a massa livre de umidade. Em seguida, aqueceu-se o material a 375C, por 2h, para se calcinar a matria orgnica (MO), minimizando a perda de outros compostos volteis (Giani et al., 1994; EPA, 2002). A partir da diferena entre a massa do sedimento aps a queima a 375C e a massa livre de umidade, obteve-se a estimativa de gramas de MO por grama de amostra. Este resultado foi aplicado para a massa de cada amostra utilizada nas extraes de STP, obtendose uma aproximao de gramas de MO, por extrato de amostra de sedimento que se quantificou as STP. Sobre a estimativa do contedo de MO nos sedimentos, aplicou-se o fator de converso para carbono orgnico na amostra. O fator adotado foi de 2, conforme recomendado em reviso recente, que sugeriu um percentual de aproximadamente 50% de carbono orgnico, do total de matria orgnica na amostra (Douglas, 2010).

8.2.4. Quantificao das STP e tratamento dos dados A determinao das concentraes da STP nas amostras seguiu o mesmo procedimento descrito no captulo II desta tese. Toda a vidraria utilizada foi previamente descontaminada, permanecendo 24h em banho de soluo de detergente neutro (tipo Extran) a 5%, seguido de enxgue com gua destilada, secagem a 100C e rinsadas com N-Hexano e Acetona.

122 Duas abordagens foram adotadas para o tratamento dos dados deste captulo. Primeiro, se considerou os valores de mexilho, sedimento e SS de todas as baas. Desta forma, os resultados de cada baa foram tomados como rplicas independentes para cada compartimento ambiental. Assim, caso houvesse diferenas realmente relevantes entre as concentraes observadas em mexilhes, sedimento e SS, esta seria detectada, independentemente das variabilidades ambientais que cada baa adiciona nos respectivos dados. Da mesma maneira, se houvesse uma relao significativa entre as variaes destes trs compartimentos, as peculiaridades ambientais de cada baa no iriam interferir na resposta. Sem querer inferir relaes de causa-efeito, mas para fins exploratrios dos dados, no sentido de abrir frentes de investigao, realizou-se o teste de regresso mltipla. Assumiu-se como premissa que as concentraes de STP no sedimento e nos SS so representativas para a frao bioacumulada pelo mexilho. Desta forma, as concentraes de STP nos mexilhes foram adotadas como variveis dependentes e as concentraes de STP no sedimento e SS como variveis independentes. Com isso, testou-se qual dos dois compartimentos abiticos estudados apresentou concentraes de STP mais relacionadas com as variaes de STP encontradas nos mexilhes, independentemente do local e ms de coleta. Neste teste, somente os pares vlidos foram considerados. Para avaliar a influncia da variao das concentraes de OCP e PCB no sedimento e no SS sobre as concentraes observadas no mexilho, avaliou-se o coeficiente de regresso global ajustado (R2) e os respectivos nveis de significncia, pelo teste F. E ainda, as contribuies relativas de cada varivel independente sobre a independente foram avaliadas pelos respectivos valores dos coeficientes parciais (Beta), padronizados pelo nmero de variveis. Os nveis de significncia de Beta foram testados pelo teste t-Student.

123 A segunda abordagem que se fez com os dados foi uma anlise das diferenas entre as baas estudas, onde se comparou diretamente os valores obtidos em cada compartimento ambiental, de cada uma das baas estudas. Esta comparao balizou a discusso dos resultados do experimento de transplante. Esta etapa foi feita verificando a existncia de diferenas entre as concentraes de STP observadas no mexilho, sedimento e no SS, do local de origem do transplante (BG) e o local de destino do experimento (BS e BIG). Caso as concentraes encontradas na BG fossem mais altas que as observadas na BS e na BIG, poderia se esperar uma reduo das concentraes (depurao) de STP nos animais transplantados. Para comparar as mdias das concentraes de STP nas matrizes ambientais de cada rea de estudo, realizou-se a Anlise de Varincia (Analysis of Variance - ANOVA). Para tal, testou-se a normalidade da distribuio dos dados com o teste de Kolmogorov-Smirnov. Em caso de diferena significativa entre as varincias dos dados, aplicou-se o teste a posteriori de Tukey, para se realizar as comparaes mltiplas entre as baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. No caso onde uma das reas de estudos apresentou concentraes de contaminante abaixo do LOD, aplicou-se o teste de comparao de mdias de t-Student. Estes testes foram feitos no pacote estatstico Graphpad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc.). Para visualizar a relao entre as concentraes de mexilho, sedimento e SS, de cada uma das baas estudadas, realizou-se a Anlise Discriminante (Discriminant Analysis - DA), plotando os resultados das funes discriminantes em um grfico do tipo "scaterplot". Para isso, os binmios Local de Coleta - Matriz Ambiental foram adotados como variveis agrupantes e as respectivas concentraes dos contaminantes foram tomadas como variveis independentes, desconsiderando-se os meses de coleta.

124 Para a DA, e para a regresso mltipla, utilizou-se o programa STATISTICA 7.0 (StatSoft). O nvel de significncia adotado para todos os testes foi de 5%. Da mesma forma que o realizado no captulo II desta tese, neste captulo tambm se adotou um fator de 5,6 para converter concentraes de STP em mexilhes de outros trabalhos que foram expressos em massa mida, transformando-os para a base de massa seca.

8.3. Resultados e discusso Diferentemente do captulo anterior, as concentraes de STP apresentadas neste captulo esto expressas em massa seca da amostra. A nica ressalva para o clculo do BSAF, que foi feito a partir da concentrao das STP em funo do contedo de lipdeo para os bivalves e do CO estimado para sedimento. Devido a quantidade de dados produzidos neste captulo, apresenta-se inicialmente um roteiro de como os resultados foram expostos, visando facilitar a completa compreenso das questes aqui levantadas. Primeiramente, se fez uma apresentao geral das concentraes de STP obtidas nas trs matrizes ambientais estudas, confrontando os dados com a literatura disponvel, e classificando as reas de estudos quanto ao seu grau de contaminao. Em seguida, analisou-se a relao entre as trs matrizes ambientais estudadas, com base nas concentraes de STP quantificadas no presente estudo. Para tal, as concentraes obtidas de STP nas trs reas estudadas foram analisadas conjuntamente, para cada matriz ambiental. A terceira etapa dedicou-se mais dinmica ambiental das STP, onde se analisou o BSAF calculado a partir dos mexilhes e sedimento. Neste ponto, a base da discusso se fez com os coeficientes de partio octanol-gua (kow) de cada composto, confrontando-os com os respectivos valores de BSAF obtidos neste estudo. Para avaliar a influncia das condies

125 ambientais, sobre o BSAF, a anlise Kow-BSAF foi feita separadamente para cada baa estudada nesta tese. Finalizando, fez-se uma comparao direta entre as concentraes de STP nos mexilhes, sedimentos e nos SS, de cada baa estudada. Com isso, buscou-se caracterizar as diferenas entre as concentraes de OCP e PCB da BG - local de origem dos animais nos dois transplantes realizados - e as da BS - destino do primeiro transplante. Da mesma forma, foram testadas as diferenas entre as concentraes de STP da BG e as da BIG - destino do segundo transplante. Com os resultados do experimento de transplante, se avaliou a hiptese de depurao destes compostos pelos mexilhes, aps um ms de transplante. Dados sobre a presena e distribuio de STP nestas reas de estudo so limitados e escassos. Com relao s mesmas matrizes ambientais estudadas nesta tese, encontrou-se na literatura dados sobre a ocorrncia de pesticidas organoclorados em mexilhes (Xavier de Brito et al., 2002) e sedimento na BG (Japenga et al., 1988; Souza et al., 2008). Para a BS, encontrou-se apenas um estudo sobre sedimento (Japenga et al., 1988). At onde se sabe, no h dados disponveis sobre a presena de STP no sedimento, no SS ou em bivalves para a regio da BIG. Esta situao restringe a possibilidade de discusso, porm reala a relevncia deste estudo.

8.3.1. Concentraes de STP nos mexilhes P. perna Em todas as amostras de mexilho, os pesticidas trans-heptacloro epxido e octacloroestireno ficaram abaixo do LOD (2 e 2,4 pg.g-1, respectivamente). As concentraes de OCP encontradas em P. perna esto apresentadas na tabela 17. Os compostos aldrin, dieldrin e eldrin formam o grupo chamado "DRINS".

Tabela 17: Concentraes de OCP (pg.g-1) expressas em massa seca, nos mexilhes P. perna coletados em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. Contaminantes -HCH -HCH -HCH -HCH -HCH HCH Pentaclorobenzeno Hexaclorobenzeno Pentacloroanisol p,p' DDT o,p' DDT p,p' DDD o,p' DDD p,p' DDE o,p' DDE DDT Mexilho - Baa de Guanabara mediana amplitude 286 - 584 398 3.922 - 12.039 10.078 249 - 378 279 144 - 1.252 465 178 - 282 203 4.977 - 13.798 11.488 109 - 389 340 <6 - 60 51 2.130 - 3.175 2.444 126 - 2.919 1.153 1.563 - 1.817 1.728 2.820 - 6.511 4.396 2.849 - 4.396 3.481 4.284 - 14.594 7.951 1.234 - 1.693 1.509 13.887 - 29.524 20.076 Mexilho - Baa de Ilha Grande mediana amplitude <6 - 445 253 431 - 1.183 683 104 - 449 234 <4 - 33 32 <4 - 12 11 790 - 1.870 1.192 38 - 102 82 <6 - <6 <6 1.771 - 2.605 2.154 880 - 3.686 1.884 152 - 521 344 433 - 1.334 719 149 - 967 302 740 - 1.903 1.037 67 - 141 80 2.680 - 6.763 5.079 Mexilho - Baa de Sepetiba mediana amplitude 62 - 492 251 710 - 1.578 1.246 83 - 308 168 <4 - 77 66 <4 - 19 10 909 - 2.201 1.729 25 - 111 72 <6 - <6 <6 931 - 2.086 1.608 21 - 792 305 184 - 398 243 263 - 574 393 98 - 167 132 551 - 1.005 772 52 - 89 67 1.487 - 2.716 2.016

126

Continuao Tabela 17: Mexilho - Baa de Guanabara mediana amplitude 201 - 293 285 88 - 195 161 17 - 56 48 334 - 532 507 17 - 50 23 85 161 1.748 258 2.206 554 179 22 136 51 - 92 103 1.514 104 1.721 55 9 17 104 317 2.850 298 3.465 576 520 <1 158 Mexilho - Baa de Ilha Grande mediana amplitude 90 - 217 182 <0,3 - 31 23 <1 - 8 5 90 - 252 212 27 - 46 32 14 143 323 37 514 332 80 <1 172 8 - 19 109 270 21 422 97 43 <1 121 184 409 42 575 760 201 <1 292 Mexilho - Baa de Sepetiba mediana amplitude 32 - 54 37 15 - 32 21 <0,9 - 13 12 54 - 90 68 14 - 47 28 31 118 441 33 665 975 247 5 129 24 - 33 58 300 24 446 786 90 <1 79 282 600 46 814 1.513 419 7 251

trans-Clordano cis-Clordano oxi-Clordano Clordano Heptacloro cis-Heptacloro Epxido Aldrin Dieldrin Endrin DRINs Endosulfan-I Endosulfan-II Metoxicloro Mirex

127

128 Os pesticidas com concentraes mais expressivas foram o -HCH, pentacloroanisol (PeCA), DDTs e seus metablitos. Este padro j foi discutido no captulo anterior (sesso 7.3.2.). Para estes compostos, as concentraes nos mexilhes coletados na BG tendem a ser maiores em uma ordem de grandeza, quando comparadas com os valores observados para BS e BIG. A exceo para o PeCA, que na BG a mediana de aproximadamente o dobro da observada na BS, onde encontram-se as segundas maiores concentraes. O pesticida dieldrin nos mexilhes da BG tambm apresentou concentraes com uma ordem de grandeza superior aos resultados verificados nas outras baas estudadas, com 2.850 pg.g-1. Este valor comparvel maior concentrao verificada em Perna viridis, coletado no Golfo da Tailndia (2.900 pg.g-1) (Boonyatumanond et al., 2002). Em uma rea da costa de Hong Kong, descrita como sendo receptora de expressiva carga poluidora (Richardson et al., 2001), as concentraes encontradas de dieldrin (3.800 pg.g-1) em espcimes de P. viridisi tambm so comparveis s encontradas em P. perna na BG, no presente estudo. Quando se toma como base de comparao o nico trabalho realizado na BG com P. perna (Xavier de Brito et al., 2002) at o momento, verifica-se que as concentraes de dieldrin permaneceram no mesmo nvel, desde 1996. Apesar de Xavier de Brito e colaboradores (2002) registrarem uma concentrao mxima de 14.900 pg.g-1, a maioria dos demais dados registrados por estes autores variaram entre 2 e 3 mil pg.g-1. As concentraes do DDT em mexilhes da BG do presente estudo (mediana de 20.076 pg.g-1) tambm tendem a uma estabilidade, quando comparadas com os resultados obtidos no trabalho de Xavier de Brito e colaboradores (2002) (entre 10 e 30 mil pg.g-1). Por outro lado, as concentraes dos pesticidas aldrin, endrin, lindano (-HCH) e HCB, verificadas por Xavier de Brito e colaboradores (1996), foram de uma a duas ordens de grandeza acima das observadas no presente estudo.

129 A partir de 1985, atravs da portaria n329 do Ministrio da Agricultura, o uso dos DRINS e do HCB foi restringido, diminuindo as novas entradas destes compostos no ambiente. Assim, os dados sugerem que o DDT e o dieldrin apresentam maior persistncia ambiental em relao ao aldrin, endrin e HCB. Deve-se fazer apenas uma ressalva com relao ao DDT, que como ser discutido na sesso seguinte (8.3.2.), h indcios de outras fontes deste composto no ambiente. Os valores de PCB em mexilhes da BG tambm tendem a ser maiores que os observados na BS e BIG. Esta situao tambm j foi discutida no captulo anterior (sesso 7.3.2.). O PCB calculado para BG foi de uma ordem de grandeza acima das obtidas para as demais baas estudadas (tabela 18).

Tabela 18: Concentraes de PCB (pg.g-1), expressas em massa seca nos mexilhes P. perna coletados em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. Mexilho - Baa de Ilha Mexilho - Baa de Ilha Mexilho - Baa de Guanabara Contaminantes mediana amplitude mediana amplitude mediana amplitude PCB28 7.680 - 12.652 319 - 506 826 - 2.122 11.751 380 1.323 PCB52 6.558 - 10.919 467 - 862 744 - 1.687 9.759 669 1.117 PCB101 3.856 - 5.634 490 - 1.411 679 - 1.221 4.358 785 924 PCB138 5.645 - 8.139 266 - 859 917 - 1.435 7.750 473 1.170 PCB153 8.698 - 10.610 421 - 1.037 1.386 - 2.269 10.027 611 1.810 PCB180 2.733 - 3.143 76 - 192 287 - 509 2.824 125 414 PCB77 123 - 376 37 - 43 49 - 73 340 39 56 PCB81 <1 - 4 <1 - <1 <1 3 <1 PCB126 <1 - 39 <0,5 - 2 <1 - 5 38 2 5 PCB169 <0,5 - 8 8 <0,6 <0,5 PCB105 2.181 - 2.371 124 - 308 150 - 347 2.336 190 193 PCB114 133 - 155 7 - 19 <1 - 21 144 13 19 PCB118 6.743 - 7.901 281 - 734 648 - 983 7.398 444 865 PCB123 139 - 1.098 <0,7 - 14 115 - 171 1.015 9 135 PCB156 235 - 392 37 - 100 33 - 81 298 72 40 PCB157 137 - 174 10 - 26 21 - 40 157 16 30 PCB167 428 - 525 15 - 43 57 - 93 469 30 71 PCB189 30 - 38 <0,4 - 7 <0,4 - 7 37 5 7 PCB 47.797 - 60.719 2.569 - 6.030 6.906 - 9.332 60.447 3.880 8.294

130

131 Apesar das diferenas nas concentraes de PCB nos mexilhes das reas estudadas, quando se calculou as participaes relativas dos congneres agrupados pelo nmero de tomos de cloro nas molculas (de 3 a 7 cloros), os percentuais observados para as baas estudadas, foram prximos entre si. Os percentuais obtidos para o grupo dos congneres indicadores tambm foram similar entre as reas estudadas (figura 22). 70 60 50 40
%

BG BIG BS

30 20 10 0 Tri Tetra Penta Hexa Hepta Indic.

Figura 22: Percentuais dos grupos de congneres de PCB em mexilho, formados pelo nmero de cloro nas molculas. Triclorados (Tri): PCB 28; Tetraclorados (Tetra): PCB 52, 101 e 138; Pentaclorados (Penta): PCB 153, 180, 77, 81, 126 e 169; Hexaclorados (Hexa): PCB 105, 114, 118, 123, 156 e 157; Heptaclorados (Hepta): PCB 167 e 189; e ainda o grupo dos chamados congneres Indicadores (Indic.), formado pelos PCB 28; 52; 101; 118; 138; 153; 180. Baa de Guanabara (BG); Baa de Ilha Grande (BIG) e Baa de Sepetiba (BS).

Os PCB indicadores representam cerca de 50% do somatrio das concentraes dos congneres quantificados nos mexilhes analisados no presente estudo. O segundo grupo com maior participao para o somatrio total de PCB o dos PCB tetraclorados. Os demais grupos variaram entre percentuais prximos, com exceo dos congneres com maior nmero de cloro na molcula (Hepta), que apresentaram apenas percentuais residuais. Dados experimentais indicam um baixo potencial de metabolizao

(biotransformao) de PCB com 2, 3 e 4 cloros na molcula (Kwon et al., 2006). De certa

132 forma, os dados da presente tese corroboram para esta indicao, pois estes PCB foram os que apresentaram maior participao nas amostras analisadas na presente tese. A semelhana verificada para os percentuais dos grupos de PCB obtidos em cada uma das baas estudadas nesta tese (figura 22) de certa forma surpreendente. Isto porque, considerando a ocupao diferenciada do entorno e das bacias de drenagens de cada baa estudada (vide sesso 4.), poderia se esperar uma diferena mais acentuada entre os perfis de PCB bioacumulados pelos mexilhes de cada baa. Por outro lado, entre as diferentes formulaes de PCB que eram comercializadas, uma marca chamada de leo Ascarel praticamente dominou o mercado no Brasil. Esta pode ser a melhor forma de interpretar a similaridade entre os percentuais observados para cada grupo de PCB (figura 22), para as trs baas estudadas. Quando analisados individualmente, os congneres que apresentaram maiores concentraes foram os PCB 28 e 153. Estes aspectos tambm j foram discutidos no captulo anterior (sesso 7.3.2.).

8.3.2. Concentraes de STP no sedimento superficial de fundo O analito trans-Heptacloro Epxido e o Octacloroestireno ficaram abaixo de seus LOD (0,5 pg.g-1) para todas as amostras de sedimento quantificadas. Assim como observado para as concentraes de STP bioacumuladas pelos mexilhes, tambm foi verificado uma tendncia de se registrar as maiores concentraes de OCP nos sedimentos coletados na BG (tabela 19).

Tabela 19: Concentraes de OCP (pg.g-1) expressas em massa seca, no sedimento coletado em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. Sedimento - Baa de Guanabara Sedimento - Baa de Ilha Grande Sedimento - Baa de Sepetiba Contaminantes mediana amplitude mediana amplitude mediana amplitude -HCH -HCH -HCH -HCH -HCH HCH Pentaclorobenzeno Hexaclorobenzeno Pentacloroanisol p,p' DDT o,p' DDT p,p' DDD o,p' DDD p,p' DDE o,p' DDE DDT 208 230 172 52 16 664 143 93 852 11.332 1.341 12.365 3.616 22.732 996 51.941 180 165 129 35 8 582 116 72 355 4.599 1.139 10.153 2.937 18.712 863 43.596 299 269 615 257 43 1.464 210 171 1.127 43.871 1.887 15.814 5.045 31.620 1.131 86.666 42 48 86 13 <2 157 54 17 780 405 52 133 35 312 19 899 29 <2 68 5 <2 111 36 <1 688 232 <4 <2 <2 148 18 620 43 67 114 25 <2 285 96 21 1.158 683 68 140 38 434 29 1.012 35 41 47 10 5 97 35 21 602 611 30 74 25 148 12 711 10 <1 31 <2 <3 85 25 <1 347 119 <3 <2 <2 <0,3 9 375 <1 49 64 13 9 117 59 22 675 832 147 77 27 187 25 999

133

Continuao Tabela 19 Contaminantes trans-Clordano cis-Clordano oxi-Clordano Heptacloro cis-Heptacloro Epxido Aldrin Dieldrin Endrin DRINs Endosulfan-I Endosulfan-II Mirex Sedimento - Baa de Guanabara Sedimento - Baa de Ilha Grande Sedimento - Baa de Sepetiba mediana amplitude mediana amplitude mediana amplitude 98 - 144 <0,2 - 38 <0,1 - <0,1 117 16 <0,1 31 - 47 <0,3 - 3 9 - 21 39 3 12 <0,4 - 10 <0,4 - <0,4 <0,4 - <0,4 9 <0,4 <0,4 <0,2 - 8 <0,2 - 25 <0,2 - <0,2 7 6 <0,2 5.922 800 689 124 1.791 8 19 93 <0,2 - 11.506 317 449 77 911 <1 <1 81 2.239 889 406 3.007 9 33 123 2 28 125 8 149 3 6 22 <0,2 - 2 <0,2 87 <1 117 <1 <1 16 32 304 15 304 11 8 55 2 12 95 18 110 7 11 17 <0,2 - 2 <0,2 64 <1 98 <1 <1 14 18 229 31 112 9 13 33

134

135 O grupo de pesticidas que apresentaram as maiores concentraes foi o DDT. Neste caso, todos os metablitos de DDT quantificados no sedimento da BG apresentaram concentraes de uma a duas ordens de grandeza acima dos valores obtidos nas amostras da BS e BIG. Os somatrios de DDT obtidos para BS e BIG foram similares (tabela 19). O metablito p,p' DDE foi o que registrou a maior mediana, com concentrao de 22.732 pg.g-1. No entanto, a maior concentrao registrada para os metablitos de DDT foi para o p,p' DDT, de 43.871 pg.g-1. Na BIG, as concentraes de p,p' DDE permaneceram abaixo de 500 pg.g-1 e abaixo de 200 na pg.g-1 na BS (tabela 19). O trabalho de Japenga e colaboradores (1988) relata apenas a soma dos ismeros p,p' e o,p' de DDT, DDD e DDE. E tambm, reporta somente a soma dos "DRINS". Estes mesmos autores tambm fizeram uma normalizao das concentraes de contaminantes encontrados no sedimento, considerando um contedo de matria orgnica de 10%. Como ser mostrado na sesso 8.3.5., o contedo de matria orgnica das amostras de sedimento da BG, BS e BIG, ficaram na faixa de 10% tambm, o que permite a comparao direta dos valores. Japenga e colaboradores (1988) verificaram maiores concentraes do DDT na BS, em torno de 80.000 pg.g-1 e menores na BG, com valores abaixo de 15.000 pg.g-1. Situao bem diferente da observada no presente estudo, onde o inverso foi constatado. Concentraes de at 80.000 pg.g-1 foram registradas na BG e valores abaixo de 1.000 pg.g-1 na BS. Os resultados de DDT encontrados no sedimento da BG do presente trabalho foram concentraes superiores aos reportados no trabalho de Souza e colaboradores (2008). Sedimentos de reas de manguezal sob influncia da refinaria de petrleo de Duque de Caxias apresentaram um somatrio mximo de DDT de 35.000 pg.g-1 (Souza et al., 2008). Quando se analisou a participao de cada metablito, tambm se encontrou um quadro diferente do observado por Souza e colaboradores (2008), que registrou o p,p' DDD

136 como metablito com maior participao para a carga total de DDT, com concentrao mxima de 16.000 pg.g-1. Desde que a produo, o uso e a comercializao do DDT foi restringida para o controle de vetores de doenas por parte de rgos pblicos, poderia se esperar quedas nas concentraes ambientais deste contaminante. Porm, tem-se demonstrado que ainda pode haver outras fontes de DDT para o ambiente. Estudos recentes demonstram que o pesticida Dicofol contm elevados percentuais de o,p' DDE e p,p' DDT, presentes como impurezas neste produto (Turgut et al., 2009). O Dicofol tem sido utilizado em culturas de ctricos no Brasil, entrando na mistura de defensivos contra a praga de Brevipalpus phoenicis (caro conhecido como Geijskes) (Alves et al., 2000). Outros estudos recentes apontam as tintas anti-incrustantes como importantes fontes de DDT para os sedimentos superficiais de fundo de reas que abrigam portos de pesca na China (Lin et al., 2009). Estas fontes adicionais de DDT e metablitos para os ambientes auxiliam a interpretar as altas concentraes destes compostos no sedimento da BG, onde o maior valor de DDT encontrado foi de 86.666 pg.g-1. Este valor de uma a duas ordens de grandeza superior que as maiores concentraes observadas em baas impactadas da China (1.600 pg.g-1) (Zhong et al., 2011), da Espanha (900 pg.g-1) (Gomez et al., 2011) e na costa da Korea (5.600 pg.g-1) (Choi et al., 2011). Outro resultado que chama a ateno so as concentraes observadas na BG para cisheptacloro epxido, um produto da oxidao do pesticida heptacloro. Enquanto na BS e na BIG, o cis-heptacloro epxido alcanou concentraes mximas de 2 pg.g-1, na BG a mxima registrada foi de 11.506 pg.g-1.

137 O cis-heptacloro epxido no um analito estudado com frequncia em estimativas de contaminao ambiental. Este composto ficou abaixo do LOD de sedimentos marinhos coletados na costa da Turquia (Mar Negro) (Bakan e Ariman, 2004) e em rea pantanosa (saltmarsh) da Baa de Newport (USA) (Masters e Inman, 2000). Em uma avaliao feita nos arredores da ilha de Cingapura (Wurl e Obbard, 2005), os autores classificaram a rea como moderadamente contaminada e registraram uma concentrao mxima para heptacloro epxido (cis- + trans-) de 6.800 pg.g-1. Neste caso, as concentraes de heptracloro ficaram na mesma ordem de grandeza que a observada para heptacloro epxido. Porm na BG, a diferena entre as concentraes observadas para cisheptacloro epxido foram at quatro ordens de grandeza acima da verificada para heptacloro. Considerando estes dados, a BG tambm pode ser classificada como moderadamente contaminada com relao a este composto. Desde 2002 a ANVISA, atravs da Resoluo n135, de 17 de maio, baniu completamente a produo e comercializao do heptacloro, permitindo apenas o uso dos produtos j em estoques, para o tratamento de madeira. As baixas concentraes de heptacloro no sedimento da BG, tornam difcil a interpretao das elevadas concentraes de cisheptacloro epxido. Com relao ao grupo dos "DRINS", observou-se uma tendncia de reduo nos valores verificados atualmente no sedimento, quando se comparou com os verificados no estudo de Japenga e colaboradores (1988). Valores da soma dos "DRINS" registrados no sedimento da BG pelo presente estudo (3.000 pg.g-1) foram similares ao observado no estudo de Japenga e colaboradores (1988), que reportaram concentraes prximas a 5.000 pg.g-1 para a amostra da BG. Por outro lado, as concentraes das amostras de sedimento da BS e da BIG permaneceram abaixo de 300 pg.g-

138
1

, enquanto que Japenga e colaboradores (1988) verificaram valores entre mil e cinco mil

pg.g-1 para a BS. Entre os DRINS, o dieldrin foi o composto mais frequentemente detectado nas amostras, com concentraes mximas de 889 pg.g-1 na BG e menores que 300 na BS e BIG. Mas foi o aldrin que apresentou maiores valores, alcanando 2.230 pg.g-1 na BG. Comparando novamente com o estudo feito em Cingapura por Wurl e colaboradores (2005), os valores reportados para dieldrin (de 1.600 a 4.400 pg.g-1) tendem a ser superiores aos obtidos na BG pelo presente estudo. Mas os resultados observados para aldrin apresentaram-se similares s do presente estudo, pois foram de uma amplitude de < 300 pg.g-1 a 1.400 pg.g-1. As concentraes de aldrin e dieldrin, observadas no estudo feito na costa da Espanha (Atlntico Norte) por Gomz e colaboradores (2011), mostraram-se no mesmo patamar dos valores do presente estudo obtidos para BIG e BS. Analisando os resultados obtidos de PCB no sedimento superficial de fundo das trs baas estudadas, para todos os congneres analisados, as concentraes na BG foram uma ordem de grandeza acima das observadas para BS e BIG. Enquanto a mediana do PCB para a BG foi de 24.709 pg.g-1, os valores observados para BIG e BS foram de 3.880 e 1.547 pg.g-1, respecivamente (tabela 20).

Tabela 20: Concentraes de PCB (pg.g-1) expressas em massa seca, no sedimento coletado em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. Contaminante Sedimento - Baa de Guanabara Sedimento - Baa de Ilha Grande Sedimento - Baa de Sepetiba mediana amplitude mediana amplitude mediana amplitude PCB28 2.087 - 2.839 319 - 506 194 - 331 2.189 380 262 PCB52 1.805 - 3.815 467 - 862 319 - 678 2.327 669 393 PCB101 3.252 - 4.548 490 - 1.411 291 - 604 3.521 785 369 PCB138 3.463 - 4.455 266 - 859 93 - 204 4.059 473 132 PCB153 4.809 - 5.887 421 - 1.037 143 - 355 5.229 611 192 PCB180 1.619 - 2.734 76 - 192 41 - 73 2.010 125 51 PCB77 <1,3 - 197 37 - 43 8 - 16 173 39 12 PCB81 <1 - 36 <1 - 4 <1 7 3 <1 PCB126 <0,5 - 17 <0,5 - 2 <0,5 19 2 <0,5 PCB169 <0,6 - 6 4 <0,6 <0,6 PCB105 1.220 - 1.366 124 - 308 29 - 70 1.327 190 36 PCB114 65 - 80 7 - 19 <0,6 - 6 74 13 4 PCB118 2.648 - 3.498 281 - 734 76 - 174 3.043 444 108 PCB123 <0,7 - 341 <0,7 - 14 <0,7 335 9 <0,7 PCB156 330 - 450 37 - 100 6 - 21 399 72 14 PCB157 92 - 112 10 - 26 <0,5 - 4 105 16 4 PCB167 208 - 248 15 - 43 5 - 13 233 30 8 PCB189 51 - 81 <0,4 - 7 <0,4 - 3 55 5 3 PCB 22.709 - 29.484 2.569 - 6.030 1.312 - 2.487 24.709 3.880 1.547

139

140 Os congneres que registraram as maiores concentraes nos sedimentos das trs baias estudadas foram: 28, 52, 101, 138, 153, 180, 105 e 118. O trabalho de Souza e colaboradores (2008) quantificou as concentraes dos PCB indicadores (28, 52, 101, 118, 138, 153, 180) em sedimentos de rea de manguezal da BG, prximo refinaria de petrleo. Assim como o verificado na presente tese, os congneres que apresentaram maiores concentraes foram os PCB 118, 153, 138 e 180. O maior valor de soma dos PCB registrado por Souza e colaboradores (2008) foi de 184.160 pg.g-1. Este valor uma ordem de grandeza superior que o maior resultado da soma dos PCB indicadores encontrado na presente tese para os sedimentos da BG (14.010 pg.g-1). As concentraes mais elevadas de PCB descritas por Souza e colaboradores (2008), devem ser analisadas considerando-se duas caractersticas do ponto de coleta adotado pelos autores: a proximidade de uma fonte pontual de contaminantes (refinaria de Duque de Caxias) e a distncia do canal central de entrada da BG, que por estar no fundo da baa, resulta em menor troca de gua com as correntes ocenicas, quando comparada com a do ponto de coleta da presente tese (Praia de Jurujuba) As mais altas concentraes descritas por Wurl e colaboradores (2005), para o PCB no sedimento da costa de Cingapura ficaram entre 468.990 e 4.279.740 pg.g-1, considerando apenas os mesmo congneres de PCB quantificados na presente tese. Estas concentraes ficaram duas ordens de grandeza acima dos maiores valores registrados na BG. Por outro lado, em estudo na costa sudeste da China, descrita como receptora de diferentes fontes de contaminao (Li et al., 2011), observaram-se concentraes similares s do presente estudo. As concentraes registradas para o PCB variaram de 1.360 a 5.690 pg.g-1 na Baa de Xiamen, considerando apenas os mesmos congneres de PCB quantificados nesta tese.

141 Da mesma forma, as concentraes dos mesmos congneres de PCB quantificados no presente estudo apresentaram a mesma amplitude observada em estudo realizado na costa norte da Espanha (Gomez-Lavin et al., 2011). Nesta regio, as concentraes do PCB variaram de 566,7 a 4.656,1 pg.g-1. Portanto, com relao aos congneres de PCB quantificados nesta tese, os sedimentos das reas estudadas podem ser classificados como moderadamente contaminados na BG e no contaminados na BIG. O grfico dos percentuais da participao dos grupos de congneres de PCB, formados pelo nmero de cloro em cada molcula (figura 23), reflete a similaridade entre os perfis de contaminao por PCB dos sedimentos das trs baas estudadas. 70 60 50 40 30 20 10 0 Tri Tetra Penta Hexa Hepta Indic.

BG BIG BS

Figura 23: Percentuais dos grupos de congneres de PCB em sedimento, formados pelo nmero de cloro nas molculas. Triclorados (Tri): PCB 28; Tetraclorados (Tetra): PCB 52, 101 e 138; Pentaclorados (Penta): PCB 153, 180, 77, 81, 126 e 169; Hexaclorados (Hexa): PCB 105, 114, 118, 123, 156 e 157; Heptaclorados (Hepta): PCB 167 e 189; e ainda o grupo dos chamados congneres Indicadores (Indic.), formado pelos PCB 28; 52; 101; 118; 138; 153; 180. Baa de Guanabara (BG); Baa de Ilha Grande (BIG) e Baa de Sepetiba (BS).

Os PCB Indicadores e os Tetraclorados apresentaram participaes similares no PCB dos sedimentos das trs reas estudadas, com valores entre 40 e 60%. Tambm se observou percentuais prximos para os PCB Penta e Hexaclorados, variando em torno de 20%. Os

142 Triclorados tiveram percentuais em torno de 10%, e assim como para os mexilhes, observaram-se apenas resduos dos Heptaclorados. Um quadro diferente do observado na presente tese foi verificado em estudo realizado na Baa de Masan, na Coreia, onde a distribuio dos congneres de PCB foi analisada em sedimentos coletados em locais dentro e fora da baa (Hong et al., 2003). Os autores observaram que os congneres menos clorados (di-, tri-, e tetraclorados), que apresentam menores valores de Kow, estiveram mais presentes nas amostras de fora da baa. Enquanto que os coletados dentro da baa apresentaram maior participao dos congneres com mais cloro em suas molculas (penta-, hexa-, e heptaclorados). Por outro lado, assim como o presente estudo, sedimentos de rios coletados em locais prximos ao porto de Tolo, em Hong Kong (Zhou et al., 1999), tambm apresentaram uma maior participao dos congneres de PCB com quatro cloros (18 a 40%). Portanto, considerando que os pontos de coletas nas trs baas estudadas da presente tese tm descargas fluviais em suas proximidades, os resultados encontrados neste estudo podem estar refletindo a influncia continental sobre o ecossistema estuarino das baas.

8.3.3. Concentraes de STP nos slidos em suspenso (SS) Encontrou-se apenas um estudo na literatura que apresenta dados de STP em SS obtidos por coletores (sediment trap) (Koelmans et al., 1997), que cobriram um tempo de amostragem comparvel com o do presente estudo (15 dias). Porm, apesar da rea de estudo j ter sido um sistema estuarino, os autores descreveram o lago de Volkerak (Holanda) como um sistema de gua doce, devido ao represamento da regio. Outro ponto que limita o uso dos resultados de STP obtidos para o lago de Volkerak (Koelmans et al., 1997), que as concentraes apresentadas pelos autores foram normalizadas pelo contedo de carbono orgnico (CO) das mesmas. Porm, os respectivos

143 percentuais no foram informados, o que dificulta a comparao com os resultados da presente tese, expressos na base de massa seca. Apesar de terem sido encontradas publicaes que adotaram o mtodo de armadilha de sedimento (sediment trap) para o estudo da dinmica de STP em ambiente marinho, o tempo de coleta variou de trs meses a dois anos. Nestes casos, para se evitar a degradao dos compostos, foram adicionados reagentes (Clorofrmio ou Formaldedo) no aparato coletor do SS (Dachs et al., 1996; Strandberg et al., 1998). Porm, tambm encontrou-se um estudo onde as armadilhas permaneceram por dois anos, mas que no houve adio de fixadores (Osterroht e Smetacek, 1980; Koelmans et al., 1997) . Com frequncia, os estudos encontrados na literatura que se dedicaram a quantificar as concentraes de STP em SS, tambm chamado de particulado em suspenso (suspended matter), obtiveram essas amostras por meio de filtrao de determinado volume de gua. Estes trabalhos no foram utilizados na discusso da presente tese, pois se trata de uma abordagem distinta da metodologia adotada na presente tese. Para ilustrar essa diferena de abordagem entre a coleta de SS por filtrao e por coletores, pode-se citar o estudo feito no lago de Volkerak (Koelmans et al., 1997). Os autores compararam as concentraes de STP verificadas nos SS coletados por armadilhas de sedimento e por centrifugao. Os resultados mostraram que as concentraes dos OCP e PCB quantificadas no SS foram de 36 (para -HCH) a 112 (para PCB 138) vezes maior que as observadas nas amostras obtidas por centrifugao (Koelmans et al., 1997). As armadilhas de sedimento utilizadas para a obteno do SS coletado no presente estudo permaneceram por 15 dias no mar. Ao longo deste perodo, os aparatos coletores ficaram expostos a diferentes aportes continentais (fluvial e pluvial) e distintas correntes martimas.

144 Ao longo do perodo amostral das armadilhas de SS, a chegada de STP nos ecossistemas pode ser varivel, alm das alteraes dos parmetros ambientais que determinam as condies de sedimentao, os coeficientes de partio, entre outros parmetros. A amostragem instantnea de determinado volume de gua, em um dado local, no integra tais variaes, enquanto que a metodologia empregada nesta tese, sim. Caso estivessem disponveis na literatura dados sobre STP no SS dos locais estudados no presente estudo, obtidos por meio de filtrao, estes poderiam entrar na discusso dos dados, a ttulo de um referencial para as regies. Porm, estas informaes no foram encontradas e optou-se por no citar dados relativos ao SS obtidos por filtrao, referentes a outros locais. O trans-heptacloro epxido permaneceu abaixo do LOD (< 1 pg.g-1) em amostras de SS. Como o observado para o sedimento e o mexilho, observou-se que as concentraes de OCP no SS da BG tenderam a apresentar valores de uma a duas ordens de grandeza acima dos obtidos na BIG e na BS (tabela 21).

Tabela 21 Concentraes de OCP (pg.g-1) expressas em massa seca, nos slidos em suspenso coletados em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. Slidos em Suspenso - Baa de Guanabara Slidos em Suspenso - Baa de Ilha Grande Slidos em Suspenso - Baa de Sepetiba Contaminantes mediana amplitude mediana amplitude mediana amplitude -HCH 79 - 175 22 - 131 25 - 400 156 43 167 -HCH 134 - 162 19 - 57 20 - 52 154 29 32 -HCH 133 - 307 72 - 684 75 - <1 268 169 274 -HCH <2 - 28 <2 - 12 4 - <2 27 7 10 -HCH <3 - 13 <3 - 7 11 <3 7 414 - 68 0 113 - 723 137 - 1.154 605 247 435 HCH Pentaclorobenzeno 82 - 245 22 - 92 29 - 167 191 37 80 Hexaclorobenzeno 53 - 119 12 - 40 12 - 78 96 16 48 Pentacloroanisol <1 - 3.142 274 - 5.371 517 - 7.589 1.878 1.049 2.151 Octacloroestireno 3 - 7 3 p,p' DDT <3 - 13.165 293 - 1.028 <3 - 1.076 12.184 402 515 o,p' DDT 749 - 1.873 83 - 498 108 - 399 1.335 100 175 p,p' DDD 5.052 - 7.490 137 - 532 <2 - 257 5.869 243 151 o,p' DDD 1.500 - 2.130 45 - 187 24 - 68 1.836 101 49 p,p' DDE <0,3 - 20.122 291 - 926 293 - 556 17.507 497 371 o,p' DDE <0,2 - 733 16 - 68 15 - 41 708 27 25 11.324 - 43.022 887 - 2.816 787 - 2.200 30.030 1.531 1.027 DDT

145

Continuao Tabela 21 Contaminantes trans-Clordano cis-Clordano oxi-Clordano Heptacloro cis-Heptacloro Epxido Aldrin Dieldrin Endrin DRINs Endosulfan-I Endosulfan-II Metoxicloro Mirex Slidos em Suspenso - Baa de Guanabara mediana amplitude 101 34 <0,4 15 6 275 618 92 808 41 26 <0,3 81 72 - 90 11 - 35 5 - 9 <0,2 424 62 704 33 18 345 860 124 975 67 31 <0,2 3 56 190 21 324 74 33 1 67 68 - 119 22 - 45 Slidos em Suspenso - Baa de Ilha Grande mediana amplitude 30 9 <0,4 7 - 64 0 - 8 148 13 208 41 19 1 35 204 910 85 995 158 79 1 84 46 2 26 370 39 409 56 25 <0,3 20 15 - 83 19 - 113 5 - 31 Slidos em Suspenso - Baa de Sepetiba mediana amplitude 36 10 <0,4 9 - 90 1 - 5 <0,2 107 12 145 35 13 31 771 58 829 108 46 20 - 87 <0,2 - 24

146

147 Tambm foi possvel observar uma tendncia para as concentraes na BIG e BS apresentarem valores similares. O grupo de OCP que apresentou maiores concentraes foi o DDT e metablitos, assim como o observado para mexilhes e sedimentos. Na BG, o DDTs no SS variou entre 11.324 a 43.022 pg.g-1, enquanto que a amplitude na BS e BIG foi de 787 a 2.816 pg.g-1 (tabela 21). Os metablitos p,p' DDT e p,p' DDE foram os metablitos de DDT que mais contriburam para os somatrios de DDT no SS, em todas as reas estudadas. Enquanto na BG a concentrao mxima registrada para p,p' DDT foi de 13.165 pg.g-1, na BIG e na BS esses valores ficaram prximos a 1.000 pg.g-1 (tabela 21). A maior concentrao observada entre os metablitos de DDT no SS, foi para o p,p' DDE, na BG (20.122 pg.g-1). Apesar disto, verificou-se uma expressiva variao das concentraes de p,p' DDE no SS da BG, com rplicas apresentando valores abaixo do LOD (<0,3 pg.g-1) . Os valores de p,p' DDE na BIG e na BS ficaram em uma ordem de grandeza abaixo do p,p' DDT observado no SS destas baas. Mesmo assim, verificou-se uma tendncia para os valores de p,p' DDE ficarem acima dos outros metablitos de DDT (tabela 21). Outro analito que tambm apresentou concentraes elevadas foi o pentacloroanisol. Porm, observaram-se concentraes medianas similares deste composto entre as reas estudadas, variando de 1.049 pg.g-1, na BIG, a 2.151 pg.g-1, na BS (tabela 21). Com relao aos PCB, novamente a BG apresentou as maiores concentraes, quando comparadas com a BIG e BS, como demonstrado na tabela 22. O PCB para a BG (24.709 pg.g-1) ficou uma ordem de grandeza acima do observado para a BIG (3.880 pg.g-1) e BS (1.547 pg.g-1).

Tabela 22: Concentraes de PCB (pg.g-1) expressas em massa seca, nos slidos em suspenso coletados em dezembro de 2008 (DEZ) e fevereiro de 2009 (FEV), nas baas de Guanabara, Sepetiba e Ilha Grande. Valores abaixo do limite de deteco (LOD) so indicados como "<LOD" de cada composto. Slidos em Suspenso - Baa de Guanabara Slidos em Suspenso - Baa de Ilha Grande Slidos em Suspenso - Baa de Contaminante mediana amplitude mediana amplitude mediana amplitude PCB28 2.087 - 2.839 319 - 506 194 - 331 2.189 380 262 PCB52 1.805 - 3.815 467 - 862 319 - 678 2.327 669 393 PCB101 3.252 - 4.548 490 - 1.411 291 - 604 3.521 785 369 PCB138 3.463 - 4.455 266 - 859 93 - 204 4.059 473 132 PCB153 4.809 - 5.887 421 - 1.037 143 - 355 5.229 611 192 PCB180 1.619 - 2.734 76 - 192 41 - 73 2.010 125 51 PCB77 <1,3 - 197 37 - 43 8 - 16 173 39 12 PCB81 <1 - 36 <1 - 4 <1 7 3 <1 PCB126 <0,5 - 17 <0,5 - 2 <0,5 19 2 <0,5 PCB169 <0,6 - 6 4 <0,6 <0,6 PCB105 1.220 - 1.366 124 - 308 29 - 70 1.327 190 36 PCB114 65 - 80 7 - 19 <0,6 - 6 74 13 4 PCB118 2.648 - 3.498 281 - 734 76 - 174 3.043 444 108 PCB123 <0,7 - 341 <0,7 - 14 <0,7 335 9 <0,7 PCB156 330 - 450 37 - 100 6 - 21 399 72 14 PCB157 92 - 112 10 - 26 <0,5 - 4 105 16 4 PCB167 208 - 248 15 - 43 5 - 13 233 30 8 PCB189 51 - 81 <0,4 - 7 <0,4 - 3 55 5 3 PCB 22.709 - 29.484 2.569 - 6.030 1.312 - 2.487 24.709 3.880 1.547

148

149 Observou-se tambm que os congneres 25, 52, 101, 138, 153, 180, 105 e 118 foram os PCB que apresentaram as maiores concentraes. Os valores obtidos para estes congneres ficaram prximos entre si, para as trs baas estudadas nesta tese. Na BG, as medianas variaram de 1.327 pg.g-1 a 5.229 pg.g-1. Na BIG e na BS, os congneres com maiores concentraes medianas variaram de 36 a 785 pg.g-1. Observou-se que os PCB indicadores e os tetraclorados apresentaram participaes similares ao PCB (entre 40 e 60%), como demonstrado na figura 24. 70 60 50
%

40 30 20 10 0 Tri Tetra Penta Hexa Hepta Indic.

BG BIG BS

Figura 24: Percentuais dos grupos de congneres de PCB no slido em suspenso (SS), formados pelo nmero de cloros nas molculas. Triclorados (Tri): PCB 28; Tetraclorados (Tetra): PCB 52, 101 e 138; Pentaclorados (Penta): PCB 153, 180, 77, 81, 126 e 169; Hexaclorados (Hexa): PCB 105, 114, 118, 123, 156 e 157; Heptaclorados (Hepta): PCB 167 e 189; e ainda o grupo dos chamados congneres Indicadores (Indic.), formado pelos PCB 28; 52; 101; 118; 138; 153; 180. Baa de Guanabara (BG); Baa de Ilha Grande (BIG) e Baa de Sepetiba (BS).

Os heptaclorados apresentaram apenas concentraes residuais e os tri-, penta-, e hexaclorados apresentaram contribuies similares para o total de PCB, com percentuais entre 10 e 25%, assim como observado para as amostras de sedimento.

150 8.3.4. Comparao entre as concentraes de STP no sedimento, no SS e nos mexilhes P. perna Para se comparar os perfis das concentraes obtidas de cada analito, para cada matriz ambiental, considerando todos os locais e meses de coleta, foram feitos histogramas, e apresentados em forma de barras, com seus respectivos desvios (95% do intervalo de confiana). Atravs do histograma obtido para os OCP quantificados no sedimento, SS e mexilho (figura 25), observou-se que as concentraes de OCP encontradas no SS ficaram no mesmo patamar, ou at superiores, do que foi observado nas amostras de sedimento.

Figura 25: Histograma com todas as concentraes em pg.g-1 de massa seca de cada OCP quantificado para cada matriz ambiental. Os compostos marcados com (E) apresentam a escala no eixo y da esquerda e os marcados com (D), no eixo y da direita. As barras indicam o valor mediano e as medidas de disperso (intervalo de confiana de 95% dos dados). 151

152 Esperava-se observar concentraes de OCP nos SS menores que as verificadas no sedimento, uma vez que este ltimo tenderia a agregar maior quantidade de matria orgnica, servindo de stio de soro para os compostos hidrofbicos (Hung et al., 2007). De uma forma geral, as concentraes de OCP em mexilhes tendem a ser mais elevadas, quando comparadas s observadas no sedimento e nos SS. Os compostos que mostraram esta tendncia com maior evidncia foram os ismeros de HCH (-, -,-, - e -), e os Endosulfans -I e -II. Porm, quando se observa o grupo de OCP que registrou as maiores concentraes, verificou-se uma tendncia para valores de p,p' DDD e o,'p DDD ficarem mais elevados no sedimento do que no mexilho. No caso do p,p' DDE, isto tambm foi verificado nos SS, com relao ao mexilho (figura 25). Situao similar foi observada na comparao das concentraes de DDT no sedimento da costa da Frana, em comparao com os valores quantificados no mexilho Mytilus edulis (Thompson et al., 1999). Neste estudo, os metablitos p,p' e o,p' DDT apresentaram uma tendncia para maiores valores no sedimento (30 e 10 mil pg.g-1, respectivamente), em relao ao quantificado nos mexilhes (<5 e <10 mil pg.g-1). Porm, em estudo conduzido na Groelndia, as concentraes de p,p' DDE, p,p' DDD e p,p' DDT ficaram abaixo do LOD, enquanto que no mexilho M. edulis, verificou-se valores entre 25 e 810 pg.g-1 (Cleemann et al., 2000). Portanto, pode-se sugerir que as condies ambientais, como a quantidade e a qualidade de matria orgnica presente no ambiente, temperatura e hidrodinamismo sejam importantes na distribuio destes compostos entre os compartimentos biticos e abiticos. Outro ponto a se destacar a partir da anlise do histograma dos OCP, que no se detectou Metoxicloro no sedimento, enquanto que se observaram apenas sinais deste composto nos SS e no mexilho.

153 Diferente do observado na presente tese, no estudo conduzido no Estreito de Istambul (Okay et al., 2011), as concentraes mais baixas de metoxicloro verificadas no mexilho Mytilus galloprovincialis (0,81 pg.g-1) foram similares s observadas no sedimento (0,58 pg.g1

). Com relao ao SS, foram observados valores altos isolados para dois analitos que se

apresentaram com baixas concentraes em todas as amostras, o octacloroestireno e o oxiclordano. Da mesma forma, obteve-se uma disperso alta nas concentraes de cis-heptacloro epxido para as amostras de sedimento. Devido baixa frequncia em que se observa estes picos de concentraes, estes dados tm menor importncia. Com relao ao histograma com a distribuio dos congneres de PCB entre as matrizes ambientais (figura 26) analisadas nesta tese, observou-se uma similaridade entre os perfis encontrados.

Figura 26 Histograma com todas as concentraes em pg.g-1 de massa seca de cada PCB quantificado para cada matriz ambiental. Os compostos marcados com (E) apresentam a escala no eixo y da esquerda e os marcados com (D), no eixo y da direita. As barras indicam o valor mediano e as medidas de disperso (intervalo de confiana de 95% dos dados). 154

155 As concentraes de PCB nos mexilhes, apesar de apresentarem medianas prximas s encontradas no SS e no sedimento, foram as que tenderam a apresentar os maiores valores dos congneres. Tendncia oposta verificada na presente tese foi observada em estudo no Estreito de Istambul, onde os maiores valores do PCB observados no sedimento (mx. de 97 mil pg.g-1) ficaram uma ordem de grandeza acima dos apresentados no mexilho M. galloprovincialis (mx. de 5.400 pg.g-1). Por outro lado, em estudo conduzido na costa da Frana, o mexilho M. edulis apresentou um PCB de 32.920 pg.g-1, enquanto que o valor observado no sedimento ficou duas ordens de grandeza abaixo desta concentrao (660 pg.g-1). A distribuio de OCP entre os compartimentos ambientais analisados nesta tese (mexilho, sedimento e SS), tambm foi analisada aplicando-se a Anlise Discriminante (DA). A figura 27 mostra graficamente o resultado desta anlise estatstica, onde se pode observar a separao dos grupos de amostras, pela distncia nos eixos cannicos (ROO_1 e ROOT_2).

156

Figura 27: Grfico de disperso categorizado da Anlise Discriminante (AD) para os OCP. A primeira e a segunda funo (Root 1 e 2) da AD so representadas nos eixos X e Y respectivamente, mostrando os valores das funes calculados. Cada smbolo representa um grupo de anlises. Cada grupo possui de 5 a 8 rplicas, conforme as tabelas 17, 19 e 21. Os grupos so descritos por local, e pela matriz da amostra: Mex - mexilhes; SED - sedimento; SS - slidos em suspenso; BG - Baa de Guanabara; BIG - Baa de Ilha Grande; BS - Baa de Sepetiba. Os smbolos para cada grupo esto especificados na figura. As variveis consideradas nesta anlise foram: -, -, -, -, -HCH; Pentaclorobenzeno; HCB; PeCA; p,p e o,p DDT; p,p e o,p DDD; p,p e o,p DDE; Clordano trans-, cis-, oxy-; Heptacloro; cis-Heptacloro Epxido; Aldrin; Dieldrin; Endrin, Endosulfan I e II, Mirex e Metoxicloro.

Verificou-se que as amostras de mexilho, sedimento e SS referentes a BG foram posicionadas na rea do grfico mais distante das demais. Provavelmente, isto se deveu s maiores concentraes de OCP observadas nestas amostras, em relao s demais baas. Dois outros grupos de amostras apresentaram uma tendncia para se diferenciarem das demais, apesar de estarem prximas de um conjunto de amostras que ficaram sobrepostas no grfico: os sedimentos e mexilhes da BS (separadamente). As amostras de mexilho, sedimento e SS da BIG apresentam uma sobreposio no grfico, indicando que seus perfis e concentraes de OCP foram similares.

157 Considerando que as amostras da BIG foram as que apresentaram as menores concentraes de OCP, possvel que devido ao grau de contaminao ambiental desta baa, o processo de acmulo diferenciado destes compostos, nos diferentes compartimentos, no pde ser percebido. Por outro lado, a ntida separao dos outros conjuntos de amostras indicou que os perfis dos histogramas das concentraes de OCP acumuladas no sedimento e no SS, puderam ser diferenciados. Isto deve ser considerado no momento de decidir sobre qual destes compartimentos deve ser amostrado de um determinado local, caso se deseje avaliar o potencial de bioacumulao destes contaminantes, atravs dos mexilhes cultivados na mesma rea. A tabela 23 apresenta o resultado da anlise de regresso mltipla para as concentraes de OCP nos mexilhes (varivel dependente), no sedimento e no SS (varivel independente).

158 Tabela 23: Resumo do resultado da anlise de regresso mltipla entre as concentraes de OCP quantificadas em Mexilho P. perna, slidos em suspenso (SS) e Sedimento (SED). Os nveis de significncia (p) dos coeficientes de regresso global ajustado (R2), obtidos por teste F, e dos coeficientes parciais padronizados (Beta), testados pelo teste t-Student, menores que 0,05, foram marcados com "*". Coeficiente global Mexilho X SS Mexilho X SED Contaminantes R2 p Beta p Beta p -HCH 0,148 0,140 -0,404 0,114 0,327 0,193 -HCH 0,276 0,095 0,409 0,239 0,301 0,378 -HCH 0,026 0,844 0,028 0,921 0,159 0,572 -HCH 0,117 0,269 0,556 0,150 0,007 0,983 -HCH "n" insuficiente Pentaclorobenzeno 0,458 0,005* 0,185 0,443 0,585 0,024* Hexaclorobenzeno "n" insuficiente Pentacloroanisol 0,194 0,087 -0,238 0,313 0,530 0,036* p,p' DDT 0,004 0,977 -0,063 0,907 0,004 0,994 o,p' DDT 0,802 0,00* 0,710 0,017 0,225 0,392 p,p' DDD 0,533 0,013* 0,100 0,890 0,690 0,352 o,p' DDD 0,646 0,004* 0,392 0,474 0,463 0,401 p,p' DDE 0,629 0,001* 1,290 0,065 -0,490 0,456 o,p' DDE 0,791 0,000* 0,484 0,129 0,437 0,168 trans-Clordano 0,096 0,669 0,153 0,737 0,187 0,683 cis-Clordano 0,461 0,035 0,522 0,257 0,261 0,558 oxi-Clordano Heptacloro 0,011 0,969 -0,119 0,809 -0,059 0,904 cis-Heptacloro Epxido 0,374 0,104 0,125 0,675 0,740 0,041* Aldrin 0,062 0,853 -0,248 0,592 -0,006 0,990 Dieldrin 0,617 0,001* 0,144 0,546 0,702 0,009* Endrin 0,129 0,502 0,366 0,301 -0,015 0,965 Endosulfan-I 0,096 0,312 -0,126 0,720 -0,548 0,155 Endosulfan-II 0,352 0,414 -0,583 0,244 0,039 0,931 Metoxicloro Sed < LOD Mirex 0,233 0,062 -0,548 0,056 -0,044 0,871

De uma forma geral, foram verificados baixos valores de coeficiente global, assim como para os coeficientes de regresso parciais (Beta), tanto para a relao mexilho sedimento, quanto para mexilho - SS. Em primeira anlise, as concentraes de OCP no sedimento e nos SS teriam pouca influncia sobre as variaes observadas nas concentraes destes compostos nos mexilhes. O grupo dos DDT apresentou os maiores coeficientes globais entre os OCP estudados nesta tese. Entre os metablitos de DDT, o p,p' DDT foi o nico que mostrou um R2 com

159 valor baixo e sem relevncia significativa (p>0,05). Todos os demais metablitos tiveram seus R2 variando entre 0,533 e 0,802, com p<0,05. Os valores dos coeficientes de regresso parciais para os metablitos de DDT apresentaram-se similares entre sedimento e SS. Para nenhum deles se verificou uma relevncia significativa (p>0,05). Apesar disto, o maior valor de Beta registrado para todos os OCP quantificados na presente tese foi observado para o p,p' DDE, em relao ao SS (1,129). Estes resultados indicam que a variabilidade nas concentraes de DDT nos SS apresenta certa capacidade de predio das concentraes encontradas nos mexilhes P. perna. Com relao ao grupo dos PCB, a DA diferenciou menos grupos de amostras, que os observados para os OCP, como apresentado na figura 28.

Figura 28: Grfico de disperso categorizado da Anlise Discriminante (AD) para os PCB. A primeira e a segunda funo (Root 1 e 2) da AD so representadas nos eixos X e Y respectivamente, mostrando os valores das funes calculados. Cada smbolo representa um grupo de anlises. Cada grupo possui de 5 a 8 rplicas, conforme as tabelas 18, 20 e 22. Os grupos so descritos por local e pela matriz da amostra: Mex mexilhes; SED - sedimento; SS - Slidos em Suspenso; BG - Baa de Guanabara; BS Baa de Sepetiba; BIG - Baa de Ilha Grande. Os smbolos para cada grupo esto especificados na figura. As variveis consideradas nesta anlise foram: PCB 28; 52; 101; 138; 153; 180; 77; 81; 126; 169; 105; 114; 118; 123; 156; 157; 167; 189.

160 Ainda assim, as amostras da BG formaram grupos separados das demais, possivelmente tambm por conta das altas concentraes de PCB registradas nas amostras desta baa. As demais amostras da BS e BIG ficaram posicionadas prximas umas das outras em uma mesma regio do grfico, indicando similaridade das concentraes e dos perfis de acmulo nas trs matrizes ambientais analisadas. Quando se analisa a contribuio das variabilidades das concentraes de PCB no sedimento e no SS, sobre as observadas nos mexilhes, verificou-se um quadro bem diferente do encontrado para os OCP. Neste caso, apenas o PCB 126 apresenta um coeficiente de regresso global (R2) no significativo, mas ainda assim, com um valor (0,482), mais elevado que a maioria dos observados para os OCP (tabela 24). Tabela 24: Resumo do resultado da anlise de regresso mltipla entre as concentraes de PCB quantificadas em mexilho P. perna, slidos em suspenso (SS) e Sedimento (Sed). Os nveis de significncia (p) dos coeficientes de regresso global ajustados (R2), obtidos por teste F, e dos coeficientes parciais padronizados (Beta), testados pelo teste t-Student, menores que 0,05, foram marcados com "*". Coeficiente Mexilho X SS Mexilho X Sed global Contaminantes R2 p Beta p Beta p PCB28 0,692 0,000* 0,063 0,680 0,829 0,000* PCB52 0,543 0,003* 0,048 0,796 0,761 0,001* PCB101 0,833 0,000* 0,690 0,640 0,873 0,000* PCB138 0,706 0,000* 0,080 0,787 0,790 0,016 PCB153 0,746 0,000* -0,018 0,941 0,897 0,002* PCB180 0,729 0,000* 0,835 0,002* 0,047 0,835 PCB77 0,775 0,000* 0,106 0,632 0,808 0,003* PCB81 Mexilho < LOD PCB126 0,482 0,260 0,696 0,658 0,170 0,912 PCB169 SS < LOD PCB105 0,757 0,000* 0,435 0,149 0,475 0,117 PCB114 0,720 0,002* 0,620 0,089 0,283 0,408 PCB118 0,679 0,000* 0,165 0,581 0,703 0,031 PCB123 SS com "n" insuficiente PCB156 0,660 0,000* 0,033 0,912 0,809 0,016* PCB157 0,578 0,009* 0,056 0,877 0,762 0,059 PCB167 0,731 0,000* 0,057 0,821 0,827 0,006* PCB189 0,564 0,035* 0,418 0,314 0,449 0,284

161 Observando os coeficientes de regresso parcial para os PCB, os valores mostraram-se superiores aos obtidos com os OCP. E ainda, para sete congneres de PCB, o sedimento apresentou valores de Beta com significncia. Apenas para o PCB 180, que se registrou um valor de Beta dos SS com uma influncia significativa sobre a varivel dependente (mexilho). Estes dados mostram uma tendncia diferente da observada para os OCP, indicando que o sedimento teria maior capacidade de predio sobre a variabilidade das concentraes de PCB no mexilho P. perna. Pode-se dizer que, de certa forma, o grfico obtido com a DA antecipou o obtido pelo teste de regresso mltipla. Isto porque, por no ter separado as amostras em grupos distintos, a DA indicou uma similaridade entre as concentraes observadas nos mexilhes, no sedimento e no SS. Da mesma forma, observando a DA para os OCP, tambm poderia se esperar que o teste de regresso mltipla revelasse baixos valores de Beta para o sedimento e os SS. Uma vez que possvel visualizar uma separao dos conjuntos de amostras nos eixos cannicos da DA, entende-se que no h muita similaridade entre os grupos de amostras. Esta mesma tendncia foi possvel se obter, observando os baixos valores de B registrados na anlise de regresso mltipla dos OCP. A questo que se segue a partir destes dados quanto diferena encontrada nos padres observados para OCP e PCB. Com relao aos PCB, os resultados das DA e regresso mltipla indicam que o sedimento pode ser utilizado para predizer a variabilidade das concentraes de PCB em P. perna. Por outro lado, estas anlises feitas para OCP apontam para uma ausncia de relaes entre as concentraes de OCP verificadas no sedimento e no SS, com as encontradas nos mexilhes.

162 Supostamente outra via de exposio ambiental aos OCP poderia explicar as variaes de OCP nos mexilhes. Talvez os OCP na fase solvel da coluna d'gua fosse a fonte mais apropriada para se examinar a exposio ambiental dos mexilhes aos OCP. Neste caso, as propriedades fsico-qumicas dos OCP, interagindo com as condies ambientais, favoreceriam a permanncia dos OCP na fase solvel, enquanto que os PCB tenderiam a ser adsorvidos pelas partculas suspensas e precipitariam. Porm, se tem estabelecido que o contedo bioacumulado de STP, por bivalves filtradores, reflete uma condio mais complexa que o perfil verificado na frao solvel destes contaminantes na coluna d'gua (Peven et al., 1996; Richardson et al., 2001). Desta forma, seria pouco provvel de se observar uma relao significativa entre as concentraes de OCP na frao aquosa das baas estudas e as quantificadas nos mexilhes. A metabolizao dos OCP pelos bivalves seria uma alternativa de se entender o desaclopamento entre as concentraes de STP bioacumuladas nos mexilhes e o verificado no ambiente. Estudos indicaram que os bivalves no apresentam uma atividade enzimtica expressiva (Stegeman e Lech, 1991; Kwong et al., 2009). Porm, alguns estudos indicam a biotransformao de pesticidas por bivalves, como a degradao do HCB, a Pentaclorotianisol (Bauer et al., 1989) e do octacloroestireno a metiltioheptacloroestireno (Bauer et al., 1989). No foram encontrados estudos que avaliassem a biotransformao de PCB por bivalves. Comparando os valores de Kow dos OCP e PCB (tabela 25 sesso 8.3.5.), observa-se que os PCB apresentam maiores valores (de 5,67 a 7,71), comparando com os verificados para OCP (de 3,84 a 6,69). Isto poderia indicar que os PCB, por serem mais hidrofbicos que os OCP, no seriam to suscetveis remobilizao do sedimento para a coluna d'gua, atravs de processos de bioturbao ou revolvimento fsico (ondas ou correntes).

163 Desta maneira os PCB formariam complexos mais estveis no sedimento, enquanto que os OCP tenderiam a apresentar maior mobilidade entre os compartimentos, o que explicaria a fraca relao estatstica entre as concentraes de OCP encontradas no mexilho, nos SS e no sedimento.

8.3.5. Fator de bioconcentrao biota-sedimento (BSAF) Utilizado como uma ferramenta para predio do potencial bioacumulativo de compostos lipoflicos, onde valores maiores que 1 para o BSAF indicam que a concentrao encontrada no organismo superou a da fonte (sedimento) (Ozkoc et al., 2007). Os valores de log Kow dos contaminantes, que esto apresentados na tabela 25, foram interplotados com os respectivos BASF calculados para cada baa e ms de coleta (valores de BSAF no anexo VII). Como a forma de clculo do Kow pode ser feita por diferentes metodologias, optou-se por adotar valores de uma mesma fonte ou fontes que informassem as variveis de medio, evitando comparaes imprprias dos valores.

164 Tabela 25: Valores de partio octanol-gua (log Kow), a 25C, pelo mtodo LDV, para compostos de OCP e PCB Compostos log Kow Compostos log Kow -HCH* 3,98 PCB28 5,67 -HCH** 3,84 PCB52 5,84 -HCH* 3,95 PCB101 6,38 Pentaclorobenzeno* 4,92 PCB138 6,83 Hexaclorobenzeno* 5,48 PCB153 6,92 p,p' DDT*** 6,28 PCB180 7,36 p,p' DDD*** 6,22 PCB77 6,36 trans-Clordan*** 6,23 PCB81 6,36 cis-Clordan*** 6,1 PCB126 6,89 p,p' DDE*** 6,69 PCB169 7,42 Heptacloro*** 6,1 PCB105 6,65 Cis-Heptacloro*** 5,4 PCB114 6,65 Epxido Aldrin*** 6,5 PCB118 6,74 Dieldrin*** 5,4 PCB123 6,74 Endrin*** 5,2 PCB156 7,18 Endosulfan-I*** 4,74 PCB157 7,18 Endo sulfan-II*** 4,78 PCB167 7,27 PCB189 7,71 * valores de log Kow retirados de (Beyer et al., 2002) ** valores de log Kow retirados de (Xiao et al., 2004) *** valores de log Kow retirados de (Shen e Wania, 2005) Os valores de log Kow para os PCB foram retirados de (EPA, 2003) No foi possvel listar os Kow para todos os OCP quantificados no presente estudo, pois no foram encontrados na literatura os seus valores de Kow comparveis com os demais (mtodo utilizado e temperatura de medio). Contudo, o nmero de compostos contemplados foi suficiente para se obter uma resposta representativa. A figura 29 apresenta os resultados de BSAF obtidos para os OCP plotados com seus respectivos valores de Kow, para cada local de estudo.

165

Figura 29: Interpolao entre os valores de BSAF de OCP, com seus respectivos valores de Kow, para cada baa estudada: Baa de Guanabara (BG), Baa de Sepetiba (BS) e Baa de Ilha Grande (BIG). Verificou-se uma ampla variabilidade entre os valores de BSAF de um mesmo composto. Em todas as baas, os compostos com maior variao, foram os com menores valores de Kow. A amplitude dos resultados foi de cerca de 1 at prximo a 25 (maiores valores de BSAF registrados).

166 Os menores valores de BSAF (< 1) foram observados para os compostos com maior log Kow, sendo que, para estes compostos, no se verificou a mesma variao nos valores de BSAF, como a observada para os OCP com menores Kow. No se observaram diferenas entre os valores de BSAF das trs baas estudadas (figura 29 e anexo VII). Em avaliao feita com Mytilus galloprovincialis na costa da Turquia (Mar Negro) (Ozkoc et al., 2007), o maior valor de BSAF reportado, foi para DDT e seus metablitos (2,9), o que foi comparvel com o presente estudo (aproximadamente < 2,5). Os maiores valores de BSAF obtidos para os PCB (6), foram at quatro vezes inferiores aos observados para os OCP (figura 30).

167

Figura 30: Interpolao entre os valores de BSAF de PCB, com seus respectivos valores de Kow, para cada baa estudada: Baa de Guanabara (BG), Baa de Sepetiba (BS) e Baa de Ilha Grande (BIG).

Ao contrrio do padro seguido para os valores de BSAF para OCP nas trs baas, os valores de BSAF para os PCB quantificados mostraram certa diferenciao entre os locais de estudo.

168 A BIG foi a rea onde se obtiveram os maiores valores de BSAF. Porm, da mesma forma que o observado para os OCP, verificou-se uma expressiva amplitude dos valores de BSAF (de 0,5 a 6). Os congneres de PCB com menores Kow apresentaram os menores valores de BSAF, com baixa variao (menores que 1). Uma tendncia de relao parablica entre os valores de BSAF calculados para concentraes de PCB em sedimentos e mexilhes foi observada em estudo com Modiolus modiolus (famlia Mytilidae), conduzido na costa da Ilha de Vancouver (deBruyn et al., 2009). Os autores observaram um declnio nos valores de BSAF para congneres de PCB com valores de log Kow menores que 6, e maiores que 8, o que de certa forma tambm se verificou no presente estudo, com exeo de valores de BSAF prximos a 2 na BG. Para os mexilhes de Vancouver, o maior valor de BSAF registrado foi de 30, para um log de Kow de aproximadamente 7, o que representou cinco vezes o valor mximo verificado no presente estudo (prximo a 6). deBruyn e colaboradores (2009) discutiram seus dados com base na variao espacial observada para os valores de BSAF encontrados nos locais de coleta, que apresentavam dinmicas ambientais distintas. Em um dos pontos estudados pelos autores, verificou-se um desaclopamento entre as concentraes encontradas no tecido dos bivalves e as do sedimento. Os autores apontaram um maior hidrodinamismo registrado neste ponto de coleta, o que promoveria uma maior relao entre as concentraes de PCB nos bivalves e os SS da coluna d'gua. A variao espacial dos valores de BSAF observada na presente tese, tambm pode estar relacionada a caractersticas dos locais de coleta. Uma das caractersticas pode ser o contedo de CO associado ao sedimento. Os valores mdios de MO por grama de amostra foram 0,21, 0,12 e 0,10 para BG, BIG e BS, respectivamente. Isto representou um percentual de MO por amostra de sedimento entre 6 a 10%.

169 Portanto, aparentemente, apesar das maiores concentraes ambientais de PCB terem sido registradas na BG, o baixo contedo de MO no sedimento da BIG, permitiria uma maior mobilizao dos compostos para a coluna d'gua, favorecendo a bioacumulao pelos bivalves. Adicionalmente, a tendncia de se obter menores valores de BSAF para compostos com maiores Kow, observada tanto para os OCP, como para PCB, contradiz o que se props inicialmente nesta tese: maiores BSAF para compostos mais hidrofbicos. Estes dados podem sugerir que, compostos menos hidrofbicos sejam mais facilmente remobilizados do sedimento para a coluna d'gua, o que possibilitaria a maior bioacumulao destes pelos bivalves filtradores.

8.3.6. Comparao entre as concentraes de STP das trs reas de estudo Na grande maioria dos conjuntos de dados, verificou-se uma distribuio normal, mas em alguns casos a distribuio dos dados apresentou distribuio no-paramtrica. Mesmo violando a premissa do teste de ANOVA, de que os dados devem apresentar distribuio normal, realizou-se o teste de ANOVA em todos os casos, assumindo-se uma decorrente pequena perda de poder do teste. Esta perda ainda minimizada para os casos onde o n amostral no to grande (<30), como no presente estudo (Zar, 1999). Como o esperado, na comparao direta entre as rplicas obtidas na BG, BS e BIG, a BG apresentou concentraes significativamente maiores para a grande maioria dos casos dos OCP (tabela 26) e para todos os casos de PCB (tabela 27). Na comparao dos OCP, no se observaram casos onde as concentraes ambientais da BG fossem significativamente menores que as da BS ou da BIG. E ainda, alguns casos foram observados onde as concentraes de OCP da BG ficaram acima do LOD, enquanto as das outras baas ficaram abaixo deste limite.

170 Tabela 26: Resumo do resultado da ANOVA e teste t-Student (marcados com *), comparando as concentraes de OCP quantificados nos mexilhes (Mex), sedimento (SED) e slidos em suspenso (SS), coletados nas baas de Guanabara (BG), Sepetiba (BS) e Ilha Grande (BIG), nos meses de dezembro de 2009 e fevereiro de 2010. As comparaes entre os conjuntos de dados que no apresentaram diferena significativa (p<0,05) so sinalizadas com "NO". Onde se detectou diferenas significativas, o resultado apresentado apontando qual local de estudo que se obteve a maior mdia. Para casos onde se tem dois ou menos valores, o que impossibilitou a realizao dos testes, indicou-se com "n" 2. BG x BS BG x BIG ContamiMex SED SS Mex SED SS nantes -HCH NO BG > BS BG < BS NO BG > BIG NO -HCH BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG -HCH NO BG > BS NO NO BG > BIG NO -HCH NO NO BS < LOD NO NO "n" 2 -HCH BG > BS NO* "n" 2 BG > BIG BIG < LOD BIG < LOD Pentacloro- BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG benzeno HexacloroBS < BG > BS NO BIG < LOD BG > BIG NO benzeno LOD Pentacloro- BG > BS NO NO NO NO NO anisol p,p' DDT NO BG > BS BG > BS NO BG > BIG BG > BIG o,p' DDT BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG p,p' DDD BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG o,p' DDD BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG p,p' DDE BG > BS BG > BS BG > BS NO BG > BIG BG > BIG o,p' DDE BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG transBG > BS BS < LOD BG > BS BG > BIG BG > BIG* BG > BIG Clordano cisBG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG Clordano oxiBG > BS < LOD < LOD BG > BIG < LOD < LOD Clordano Heptaclor NO BS < LOD NO NO BG > BIG* NO cisBG > BS BG > BS NO BG > BIG BG > BIG NO Heptaclor Aldrin NO NO BG > BS NO NO BG > BIG Dieldrin BG > BS BG > BS NO BG > BIG BG > BIG NO Endrin BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG NO BG > BIG EndosulBG > BS NO NO NO NO NO fan-I EndosulNO NO NO NO BG > BIG NO fan-II Metoxi"n" 2 < LOD < LOD BIG < LOD < LOD < LOD cloro Mirex NO BG > BIG BG > BS NO BG > BIG NO

171 Tabela 27: Resumo do resultado da ANOVA e teste t-Student (marcados com *), comparando as concentraes de PCB quantificados nos mexilhes (Mex), sedimento (SED) e slidos em suspenso (SS), coletados nas baas de Guanabara (BG), Sepetiba (BS) e Ilha Grande (BIG), nos meses de dezembro de 2009 e Fevereiro de 2010. As comparaes entre os conjuntos de dados que no apresentaram diferena significativa (p<0,05) so sinalizadas com "NO". Onde se detectou diferenas significativas, o resultado apresentado apontando qual local de estudo que se obteve a maior mdia. Para casos onde se tem dois ou menos valores, o que impossibilitou a realizao dos testes, indicou-se com "n" 2. BG x BS BG x BIG ContamiMex SED SS Mex SED SS nantes PCB28 BG > BS BG > BS NO BG > BIG BG > BIG NO PCB52 BG > BS BG > BS NO BG > BIG BG > BIG NO PCB101 BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG PCB138 BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG PCB153 BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG PCB180 BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG PCB77 BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG PCB81 < LOD BS < LOD "n" insuf. < LOD "n" insuf. NO PCB126 BG > BS BS < LOD BG > BS BG > BIG "n" insuf. NO PCB169 NO* BS < LOD BS < LOD BIG < LOD BIG < LOD BG < LOD PCB105 BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG PCB114 BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG PCB118 BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG PCB123 BG > BS BS < LOD BS < LOD BG > BIG "n" insuf. BG < LOD PCB156 BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG PCB157 BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG PCB167 BG > BS BG > BS BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG PCB189 BG > BS "n" insuf. BG > BS BG > BIG BG > BIG BG > BIG

Como exposto na sesso quatro desta tese, a BG a que apresenta maior histrico de impacto ambiental. Este quadro favorece uma tendncia para queda nas concentraes de OCP e PCB bioacumulados pelos mexilhes cultivados na BG, quando transplantados para a BS, e para a BIG.

8.3.7. Experimento Transplante A partir do exposto na sesso anterior, se avaliou a dinmica de depurao das STP com os experimentos de transplantes dos mexilhes P. perna. Para tal, as concentraes de STP verificadas nas amostras de mexilhes foram plotadas em grficos do tipo "Box plot". Apenas foram avaliadas as tendncias para a alterao das concentraes bioacumuladas pelos

172 mexilhes da BG no T0, em relao ao observado nos animais que permaneceram na BG (funcionaram como um controle do experimento) e os que foram levados para a BS e para a BIG. A figura 31 apresenta o resultado das concentraes de OCP, para o experimento realizado nos meses de dezembro de 2008 e janeiro de 2009, com animais transplantados para a BS. A figura 32 mostra os dados de OCP referentes ao transplante conduzido em junho e julho de 2009, quando se levou os animais da BG para a BIG. Somente se considerou uma tendncia de reduo ou aumento das concentraes de STP bioacumuladas nos mexilhes retirados da BG, quando no se observou sobreposio entre as amplitudes de concentraes registradas para os trs conjuntos de amostra: T0 e T1 da BG com o T1 da BS e da BIG.

173

Figura 31: Concentraes em pg.g-1 de OCP em mexilhes do experimento de transplante conduzido em dezembro de 2008, coletando animais da Baa de Guanabara (condio inicial so as barras vazias) e tranplantando organismos para a Baa de Sepetiba, onde permaneceram por 30 dias antes da coleta (barras preenchidas com cinza). As barras preenchidas com preto representam os animais que permaneceram na Guanabara e foram coletados aps 30 dias da primeira coleta. Cada barra representa os valores das trs rplicas, e o trao no meio a mediana. Na abscissa, esto os compostos acompanhados da indicao de qual ordenada seus respectivos valores esto plotados ("D" - eixo y da direita, "E" - eixo y da esquerda).

174

Figura 32: Concentraes em pg.g-1 de massa seca de OCP em mexilhes do experimento de transplante conduzido em junho de 2009, coletando animais da Baa de Guanabara (condio inicial so as barras vazias) e transplantando organismos para a Baa de Ilha Grande, onde permaneceram por 30 dias antes da coleta (barras preenchidas com cinza). As barras preenchidas com preto so animais que permaneceram na Guanabara e foram coletados aps 30 dias da primeira coleta. Cada barra representa os valores das trs rplicas e o trao no meio a mediana. Na abscissa, esto os compostos acompanhados da indicao em qual ordenada seus respectivos valores esto plotados ("D" - eixo y da direita, "E" - eixo y da esquerda).

175 Os pesticidas p,p' DDD e p,p' DDE apresentaram uma clara tendncia de reduo das concentraes bioacumuladas no mexilho, que se repetiram no experimento de dezembro (BG para BS) e de junho (BG para BIG). A tendncia oposta observada com relao a metoxicloro, onde se verificou um aumento das concentraes deste composto nos animais levados para BS, em ambos os experimentos. Outras tendncias de mudana nas concentraes de OCP tambm foram observadas, porm s foram registradas em um dos experimentos. o caso das redues das concentraes de dieldrin e cis-heptacloro epxido nos mexilhes levados para BIG. E ainda, observou-se uma tendncia de aumento das concentraes nos animais transplantados da BG para a BS, para os pesticidas heptacloro e pentacloroanisol. No experimento de transplante para BIG, h uma tendncia de aumento das concentraes para HCH. Apesar das comparaes entre as concentraes de OCP nos mexilhes, sedimento e SS apontarem a BG como um local com maior exposio ambiental, aparentemente, um ms no foi suficiente para que essa diferena fosse refletida com clareza para todos os OCP quantificados nos mexilhes. A maioria dos estudos que se encontraram disponveis na literatura, que envolvessem o uso de bivalves em experimento de transplante, focava na cintica de acmulo de contaminantes pelo organismo. Ou seja, no foram encontrados muitos trabalhos que tivessem transplantado organismos de um local contaminado, para locais com menores exposies ambientais a contaminantes, como no presente estudo. Em um experimento de campo, mexilhes (Perna viridis) foram retirados de um local de baixa exposio ambiental a OCP, para regies de moderada e alta exposio (Siu et al., 2008). Os autores acompanharam a bioincorporao de pesticidas do grupo dos DDT,

176 "DRINS" e HCH. O mais marcante do experimento foi a alta nos valores de concentrao dos OCP no 16 dia, seguida por queda ao 30 dia. Estes dados evidenciam a complexidade de se interpretar dados de experimento de campo. No mesmo sentido, espcimes de P. viridis de reas menos impactadas da costa de Hong Kong, aps passarem cinco dias em aclimatao no laboratrio, foram levados para reas mais impactadas, onde permaneceram por 30 dias. Neste experimento, no se observou o aumento das concentraes de OCP nos animais transplantados, que permaneceram no mesmo nvel do observado para os organismos do local de referncia (Richardson et al., 2001). Um estudo de bioincorporao em Mytilus galloprovincialis e Perna viridis nas baas de Tquio e Aburatsubo, no Japo, aponta para uma equiparao das concentraes de OCP entre animais transplantados de reas menos impactadas para reas mais contaminadas, em apenas duas semanas 1 (Ueno et al., 1999). Espcimes de Mytilus edulis foram levados de uma baa impactada, para outra com baixas concentraes de contaminantes. Aps 24 dias, as concentraes do somatrio dos metablitos p,p' e o,p' de DDT, DDD e DDE, atingiram valores comparveis ao observado na populao residente no local destino do experimento de transplante (Peven et al., 1996). Este estudo no avaliou outros pesticidas, mas pode confirmar o indicativo do potencial de depurao de p,p' DDD e o,p' DDE levantado no presente estudo. Por outro lado, em condies controladas de laboratrio, em dez dias de experimento de depurao, no se observou uma reduo nas concentraes de p,p' DDT em P. viridis, mas sim nas de -HCH e Aldrin (Richardson et al., 2005). No mesmo estudo, Dieldrin tambm apresenta uma reduo nas concentraes iniciais do experimento, assim como o observado na presente tese no experimento de junho.
1

Este trabalho est publicado em Japons. Esta afirmativa foi baseada apenas no resumo, que est escrito em

Ingls, e na observao das figuras, que tambm dispem de legendas em Ingls.

177 As figuras 33 e 34 mostram os resultados dos experimentos de transplantes, para as concentraes de PCB.

Figura 33: Concentraes em pg.g-1 de massa seca de PCB em mexilhes do experimento de transplante conduzido em dezembro de 2008, coletando animais da Baa de Guanabara (condio inicial so as barras vazias) e transplantando organismos para a Baa de Sepetiba, onde permaneceram por 30 dias antes da coleta (barras preenchidas com cinza). As barras preenchidas com preto so animais que permaneceram na Guanabara e foram coletados aps 30 dias da primeira coleta. Cada barra representa os valores das trs rplicas e o trao no meio a mediana. Na abscissa, esto os compostos acompanhados da indicao em qual ordenada seus respectivos valores esto plotados ("D" - eixo y da direita, "E" - eixo y da esquerda).

178

Figura 34: Concentraes em pg.g-1 de PCB em mexilhes do experimento de transplante conduzido em junho de 2009, coletando animais da Baa de Guanabara (condio inicial so as barras vazias) e transplantando organismos para a Baa de Ilha Grande, onde permaneceram por 30 dias antes da coleta (barras preenchidas com cinza). As barras preenchidas com preto so animais que permaneceram na Guanabara, e foram coletados aps 30 dias da primeira coleta. Cada barra representa os valores das trs rplicas e o trao no meio a mediana. Na abscissa, esto os compostos acompanhados da indicao de qual ordenada seus respectivos valores esto plotados ("D" - eixo y da direita, "E" - eixo y da esquerda). O primeiro registro a ser feito com relao a variabilidade nas concentraes obtidas nos animais transplantados para a BIG. Os menores valores destas amostras apresentaram valores at trs ordens de grandeza abaixo dos observados para os organismos do T0 do experimento, como o caso do congnere PCB 28.

179 Porm, como tambm se verificou valores de PCB 28 at superiores aos quantificados no T0 do experimento, no possvel identificar com clareza a tendncia de depurao de PCB pelos organismos transplantados. Buscou-se trabalhar com amostras compostas (cinco animais por amostra), justamente para minimizar a variabilidade interindividual. Porm, pode-se supor que em uma rplica, os organismos tenham de fato realizado uma total depurao de PCB, enquanto que em outra, os espcimes depuraram apenas parcialmente. Esta condio levaria variabilidade observada nas concentraes de PCB, entre as rplicas dos mexilhes transplantados da BG para a BIG. Ainda assim, pode-se apontar uma tendncia de depurao do PCB 156 nos animais transplantados para BS. E ainda, os PCB 101 e 189 foram detectados nos animais da BG, mas ficaram abaixo do seu LOD nos mexilhes levados para BIG, o que tambm representaria uma depurao. Assim como para os OCP, tambm registrou-se uma tendncia de aumento nas concentraes de PCB 123, tanto nos organismos transplantados para BS, como nos levados para a BIG. Contraditoriamente, considerando as amostras feitas em janeiro e fevereiro, os maiores valores registrados deste PCB foram para os mexilhes da BG, em relao aos animais da BS e BIG. Com relao s amostras abiticas, as concentraes do congnere 123 permaneceram abaixo de seus LOD nas amostras de sedimento e SS da BG e da BS. Por outro lado, foram detectadas concentraes do PCB 123 prximas a 700 pg.g-1 no SS da BIG, o que poderia justificar o aumento da concentrao de PCB 123 bioacumulado nos mexilhes transplantados da BG para a BIG. Com base nos resultados do experimento de detoxificao conduzido com o bivalve Tapes philippinarum, na Lagoa de Veneza (Raccanelli et al., 2008), os autores propuseram uma meia vida para os PCB 114, 167, 157 e 189 de 6,5, 6,2, 5,4 e 6,4 dias, respectivamente (6

180 dias aproximadamente). Estes dados foram obtidos por extrapolao dos resultados obtidos com o transplante de animais de um local contaminado, para um limpo, coletando os organismos aps 60 e 120 dias do incio do experimento. Um fator importante a ser considerado para se comparar os resultados de um experimento de transplante a diferena entre as exposies ambientais s quais os organismos foram submetidos. No estudo realizado na Lagoa de Veneza (Raccanelli et al., 2008), os autores utilizaram o sedimento superficial de fundo para inferir sobre a exposio ambiental dos locais estudados. Os percentuais que as concentraes dos congneres de PCB 114, 167, 157 e 189 encontradas no local de destino do transplante representaram para as do local de origem foram de 2,7, 1,5, 3,4 e 3,2%, respectivamente (Raccanelli et al., 2008). Ou seja, usando o sedimento de fundo como parmetro para avaliar a exposio ambiental que T. philippinarum estaria submetido aos PCB, o local de destino do transplante representa cerca de 3% da exposio do local de origem do transplante. No presente estudo, as concentraes medianas de PCB obtidas para os sedimentos coletados em dezembro 2008 e fevereiro de 2009 foram consideradas para o clculo dos percentuais de concentrao ([local de destino do transplante] / [local de origem] *100). Os resultados dos PCB 114, 167, 157 e 189 para a BS foram 5,4, 3,4, 3,8 e 2,9%, respectivamente. Enquanto que para BIG, na mesma sequncia, foram 17,6, 12,9, 15,2 e 9,1%. Apesar das fraes percentuais obtidas na BS terem sido superiores aos observados no estudo da Lagoa de Veneza, as diferenas de percentuais no chegam a uma ordem de grandeza, o que permite a comparao entre os resultados das duas reas. Desta maneira, assumiu-se uma meia vida mdia de seis dias para os congneres de PCB em questo.

181 Partindo-se deste ponto, poderia se esperar uma reduo das concentraes de PCB nos mexilhes que permaneceram 30 dias na BS, de 1/5 da concentrao inicial. Contraditoriamente, as redues mais expressivas nas concentraes de PCB nos bivalves transplantados foram observadas no experimento que levou mexilhes da BG para a BIG. Como as concentraes de PCB no sedimento da BIG, tiveram maior percentual em relao ao local de origem (BG), poderia se esperar que os animais levados para a BIG apresentassem maiores redues das concentraes de PCB acumuladas em seus tecidos moles. Porm, apesar das redues at maiores que 1/5 (baseando-se na meia vida mdia de 6 dias), em relao condio inicial (T0) dos animais levados para a BIG, tambm foram registradas concentraes maiores que as do T0. Tambm se deve considerar as possveis diferenas fisiolgicas entre P. perna e a espcie utilizada no estudo da Lagoa de Veneza (Tapes philippinarum), uma vez que estas pertencem a ordens separadas (Mytiloida e Veneroida, respectivamente). Em outro estudo em que se avaliou a cintica de depurao de PCB em bivalves, indivduos de M. edulis coletados de um ambiente no contaminado foram expostos suspenso de sedimento coletado de uma rea contaminada. Aps 40 dias de exposio, os animais foram colocados em outro aqurio com gua limpa, para mais 40 dias de depurao (Pruell et al., 1986). Observou-se que o congnere 128, retornou s concentraes iniciais da exposio. Com base nestes resultados, os autores propuseram uma meia vida para o PCB 128 de 36,5 dias (Pruell et al., 1986). Ao comparar este resultado com o sugerido para o bivalve Tapes philippinarum, na Lagoa de Veneza (Raccanelli et al., 2008), obtm-se uma diferena de trinta dias entre as meia vidas propostas para os congneres de PCB obtidas por ensaios laboratoriais e de campo, o que ressalta a complexidade das interaes que ocorrem no sistema organismo-contaminante-meio.

182 Um parmetro importante para determinar o equilbrio deste sistema a partio guabiota, segundo avaliao feita por modelagem da depurao de PCB pelo mexilho Perna viridis (Xu et al., 2009). Outros autores apontam tambm para o papel da qualidade da matria orgnica associada aos SS e ao sedimento, como um fator determinante nos processos de partio com as STP (Cornelissen e Gustafsson, 2005). Portanto, os resultados obtidos com a presente tese indicam que determinar as concentraes das STP no sedimento, SS e mexilhes no suficiente para se predizer as tendncias de acmulo ou depurao, em experimentos transplantes com P. perna.

8.4. Consideraes finais O esforo amostral empreendido neste captulo teve como foco principal a avaliao do potencial uso de P. perna como organismo sentinela para monitorao ambiental de STP. O estabelecimento do potencial e limitaes de P. perna como ferramenta para rastrear a presena e distribuio de STP no ambiente primordial para que este organismo seja utilizado para aferir o cumprimento das metas estabelecidas na Conveno de Estocolmo. Entre os compromissos firmados pelo Brasil na Conveno de Estocolmo, destaca-se a reduo ou eliminao de STP consideradas prioritrias. Para isso, necessrio calibrar os biomonitores que se pretende utilizar. O uso do mexilho P. perna para monitorar as concentraes de STP no ambiente desperta interesse principalmente porque os bivalves so utilizados mundialmente neste intuito, o que facilita a intercomparao dos resultados disponveis. Outro ponto a se destacar neste captulo que se buscou propor uma rotina de avaliao das potenciais reas para o cultivo de mexilhes, no que diz respeito s concentraes das STP ambientais.

183 Como discutido na sesso 1.2. desta tese, as estatsticas mostram o quanto o ramo da maricultura tem se desenvolvido. No entanto, o potencial para expanso disponvel tambm evidente. Antes de se investir no sistema de cultivo em uma determinada localidade, importante se avaliar a potencial transferncia de contaminantes que estejam presentes no ambiente para os produtos da maricultura. Atravs das coletas de amostras de sedimento e SS, utilizou-se a regresso mltipla para buscar relaes entre as variabilidades das concentraes de STP nestas matrizes e as observadas nos mexilhes, verificando o poder preditivo que as amostras abiticas teriam sobre as variaes observadas nos mexilhes. Com relao aos PCB, o sedimento mostrou boa relao estatstica com os mexilhes, o que poderia sugerir que uma amostra deste compartimento poderia informar sobre a variabilidade da frao bioacumulada pelo mexilho. Porm, os baixos coeficientes de correlao encontrados entre os OCP nos mexilhes, no sedimento e nos SS sugerem que a incorporao destes contaminates pelos mexilhes pode estar sendo feita atravs de outras fontes. A caracterstica hidrofbica dos OCP no possibilitaria que estes compostos permanecessem na fase solvel da coluna d'gua. Levantase aqui a possibilidade de que estes compostos sejam preferencialmente adsorvidos pelo fitoplncton do que pelo sedimento ou pelos SS. Neste caso, os aparatos de coleta dos SS utilizados neste estudo, no seriam apropiados para representar a variao fitoplantnica das reas estudadas. Portanto, sugere-se para os prximos estudos que se verifique a variao das concentraes de STP no fitoplanctn e nos mexilhes, visando obter um outro compartimento ambiental que apresente melhores relaes estatsticas com estes bivalves. Outro aspecto a ser considerado a influncia da presena dos cultivos de bivalves nas concentraes de STP ambientais. Isto porque, h dados na literatura que apontam para um acrscimo de contaminantes em reas de cultivo de bivalves, devido ao dos chamados

184 biodepsitos, que so as pseudo-fezes dos bivalves, que se acumulam no sedimento das reas de cultivo. Em estudo feito na costa da Sucia (Bjrk et al., 2000), os autores demonstraram que os biodepsitos servem como stios de soro para os contaminantes da coluna d'gua, aumentando em 50% a sedimentao bruta de PCB. Desta forma, eleva-se a biodisponibilidade destes contaminantes para os organismos depositvoros que vivem abaixo, ou nas proximidades destas reas de cultivo. Portanto, esta mais uma motivao para se dar continuidade ao estudo das STP em sistemas de cultivo de mexilho na costa brasileira, uma vez que os dados originais apresentados nesta tese abrem mais questes a se responder. E ainda, apesar de no haver nenhum estudo que avalie a influncia do cultivo de mexilhes, nas concentraes de STP no sedimento ou nos SS de ecossistemas tropicais, este fator deve ser considerado em caso de se tomar os dados da presente tese para comparaes com outros estudos. Isto porque, os sedimentos coletados para o presente estudo estavam sob influncia direta dos biodepsitos das reas de cultivo.

185 9. Concluses gerais As concluses para as hipteses levantadas inicialmente foram: 1 - H uma tendncia de se ter um maior potencial de produtividade do mexilho P. perna na BS, considerando-se que dos nove mtodos para o clculo do IC, dois foram capazes de distinguir os resultados obtidos para a Baa de Guanabara e Baa de Sepetiba. A Baa de Sepetiba seguida pela Baa de Guanabara e pela Baa de Ilha Grande, quanto ao potencial de produtividade de P. perna; 2 - Os maiores valores de ndice de Condio dos mexilhes P. perna do incio do vero, indicam tendncia de um efeito sazonal, sendo este o perodo mais propcio para a despesca; 3 - No que se refere ao gradiente de contaminao, possvel agrupar os locais estudados em dois conjuntos. Um formado por Arraial do Cabo, Baa de Sepetiba e Ilha Grande. E outro apenas pela BG, que apresenta concentraes de STP maiores que o primeiro grupo; 4 - Perna perna e Nodipecten nodosus mostraram-se capazes de refletir as diferenas entre as exposies ambientais s STP de cada local de estudo, sugerindo que so bons organismos sentinelas para estes contaminantes; 5 - Considerando os contaminantes estudados, a carga txica da parte comestvel de N. nodosus (msculo e gnada) menor que a carga txica do tecido comestvel de P. perna (todo o tecido mole); 6 - Mesmo os mexilhes cultivados no local mais contaminado entre os estudados, o consumo humano destes bivalves no representaram riscos toxicolgicos, no que diz respeito aos contaminantes quantificados; 7 As maiores concentraes de OCP e PCB bioacumulados pelos mexilhes e coquilles das reas estudadas so encontradas no final da estao chuvosa, indicando uma possvel variao sazonal na bioacumulao de STP pelos bivalves;

186 8 - Um ms de depurao no foi suficiente para se observar a depurao das STP pelo P. perna, quando transplantados da Baa de Guanabara para a Baa de Sepetiba e para a Baa de Ilha Grande; 9 - As concentraes das STP estudadas tendem a ser maiores no mexilho Perna perna, quando comparadas com as observadas no sedimento e nos slidos em suspenso; 10 - As variaes das concentraes de PCB em P. perna refletem a variabilidade das concentraes de PCB observadas no sedimento coletado na mesma rea; 11 - Os maiores fatores de bioacmulao sedimento-biota (BSAF) calculados para P. perna so para os compostos menos lipoflicos, possivelmente relacionados ao maior potencial de remobilizao do sedimento, sendo disponibilizados novamente para a coluna d'gua.

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206

ANEXO I - Massas utilizadas para quantificar os Pesticidas Organoclorados (OCP) na tcnica de espectrometria de massas. Composto PCT Pentaclorobenzeno 13C6 STD Pentachlorobenzene -HCH 13C6 STD -HCH 13C6 STD -HCH 13C6 STD -HCH 13C6 STD -HCH -HCH -HCH -HCH -HCH Pentacloroanisol 13C6 STD Pentachloroanisol Hexaclorobenzeno 13C6 STD Hexachlorobenzeno Heptacloro 13C10 STD Heptacloro Aldrin 13C12 STD Aldrin Octacloroestireno 13C6 STD Octacloroestireno oxi-Clordano 13C10 STD oxi-Chlordano Massa Quantificada 265.8619 +/- 50.0 mmu 255.8693 +/- 50.0 mmu 249.8492 +/- 50.0 mmu 222.9347 +/- 50.0 mmu 222.9347 +/- 50.0 mmu 222.9347 +/- 50.0 mmu 222.9347 +/- 50.0 mmu 216.9145 +/- 50.0 mmu 216.9145 +/- 50.0 mmu 216.9145 +/- 50.0 mmu 216.9145 +/- 50.0 mmu 216.9145 +/- 50.0 mmu 272.8534 +/- 50.0 mmu 266.8333 +/- 50.0 mmu 291.8273 +/- 50.0 mmu 285.8072 +/- 50.0 mmu 276.8269 +/- 50.0 mmu 271.8102 +/- 50.0 mmu 269.8805 +/- 50.0 mmu 262.8570 +/- 50.0 mmu 350.8059 +/- 50.0 mmu 342.7790 +/- 50.0 mmu 396.8388 +/- 50.0 mmu 386.8053 +/- 50.0 mmu Razo da Massa 1 263.8648 +/- 50.0 mmu 257.8663 +/- 50.0 mmu 251.8462 +/- 50.0 mmu 226.9288 +/- 50.0 mmu 226.9288 +/- 50.0 mmu 226.9288 +/- 50.0 mmu 226.9288 +/- 50.0 mmu 220.9087 +/- 50.0 mmu 220.9087 +/- 50.0 mmu 220.9087 +/- 50.0 mmu 220.9087 +/- 50.0 mmu 220.9087 +/- 50.0 mmu 270.8564 +/- 50.0 mmu 264.8363 +/- 50.0 mmu 289.8303 +/- 50.0 mmu 283.8102 +/- 50.0 mmu 278.8240 +/- 50.0 mmu 273.8072 +/- 50.0 mmu 271.8775 +/- 50.0 mmu 264.8541 +/- 50.0 mmu 352.8029 +/- 50.0 mmu 344.7761 +/- 50.0 mmu 398.8359 +/- 50.0 mmu 388.8024 +/- 50.0 mmu RM1 Tempo limite 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 Razo limite 1.3090 - 1.7710 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 1.3950 - 1.7050 1.3950 - 1.7050 1.0625 - 1.4375 1.0625 - 1.4375 0.6800 - 0.9200 0.6800 - 0.9200 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.8245 - 1.1155 0.8245 - 1.1155 0.8245 - 1.1155 0.8245 - 1.1155

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Continuao ANEXO I Composto Heptacloro epxido 13C10 STD cis-Heptacloro epxido trans-Heptacloro epxido 2,4'-DDE 13C12 STD 4,4'-DDE 13C12 STD 2,4'-DDE 4,4'-DDE trans-Clordano 13C12 STD cis-Clordano trans-Clordano Endosulfan-I 13C9 STD Endosulfan-II 13C9 STD Endosulfan-I Endosulfan-II 4,4'-DDD D8 STD 2,4'-DDD 4,4'-DDD Dieldrin 13C12 STD Dieldrin 2,4'-DDT 13C12 STD 4,4'-DDT 13C12 STD 2,4'-DDT 4,4'-DDT Metoxicloro 13C12 STD Metoxicloro Massa Quantificada 362.8778 +/- 50.0 mmu 352.8442 +/- 50.0 mmu 352.8442 +/- 50.0 mmu 258.0406 +/- 50.0 mmu 258.0406 +/- 50.0 mmu 246.0003 +/- 50.0 mmu 246.0003 +/- 50.0 mmu 382.8595 +/- 50.0 mmu 372.8260 +/- 50.0 mmu 372.8260 +/- 50.0 mmu 241.8581 +/- 50.0 mmu 241.8581 +/- 50.0 mmu 236.8413 +/- 50.0 mmu 236.8413 +/- 50.0 mmu 243.0583 +/- 50.0 mmu 235.0081 +/- 50.0 mmu 235.0081 +/- 50.0 mmu 269.8805 +/- 50.0 mmu 262.8570 +/- 50.0 mmu 247.0484 +/- 50.0 mmu 247.0484 +/- 50.0 mmu 235.0081 +/- 50.0 mmu 235.0081 +/- 50.0 mmu 239.1475 +/- 50.0 mmu 227.1072 +/- 50.0 mmu Razo da Massa 1 364.8748 +/- 50.0 mmu 354.8413 +/- 50.0 mmu 354.8413 +/- 50.0 mmu 260.0376 +/- 50.0 mmu 260.0376 +/- 50.0 mmu 247.9975 +/- 50.0 mmu 247.9975 +/- 50.0 mmu 384.8566 +/- 50.0 mmu 374.8231 +/- 50.0 mmu 374.8231 +/- 50.0 mmu 243.8551 +/- 50.0 mmu 243.8551 +/- 50.0 mmu 238.8384 +/- 50.0 mmu 238.8384 +/- 50.0 mmu 245.0555 +/- 50.0 mmu 237.0053 +/- 50.0 mmu 237.0053 +/- 50.0 mmu 271.8775 +/- 50.0 mmu 264.8541 +/- 50.0 mmu 249.0454 +/- 50.0 mmu 249.0454 +/- 50.0 mmu 237.0053 +/- 50.0 mmu 237.0053 +/- 50.0 mmu 241.1519 +/- 50.0 mmu 229.1133 +/- 50.0 mmu RM1 Tempo limite 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 Razo limite 0.6800 - 0.9200 0.6800 - 0.9200 0.6800 - 0.9200 0.5525 - 0.7475 0.5525 - 0.7475 0.5525 - 0.7475 0.5525 - 0.7475 0.8160 - 1.1040 0.8160 - 1.1040 0.8160 - 1.1040 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5376 - 0.7424 0.5525 - 0.7475 0.5525 - 0.7475 0.5525 - 0.7475 0.5440 - 0.7360 0.5440 - 0.7360 0.5525 - 0.7475 0.5525 - 0.7475 0.5525 - 0.7475 0.5525 - 0.7475 0.0000 - 0.0600 0.0000 - 0.0600

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Continuao ANEXO I Composto Mirex 13C10 STD Mirex 4,4'-DDT 13C12 DEG 2,4'-DDT 13C12 DEG Endrin 1,2,3,7,8,9-HxCDD 13C12 Endrin 13C12 STD Massa Quantificada 276.8269 +/- 50.0 mmu 271.8102 +/- 50.0 mmu 247.0484 +/- 50.0 mmu 247.0484 +/- 50.0 mmu 262.8570 +/- 50.0 mmu 401.8559 +/- 50.0 mmu 269.8805 +/- 50.0 mmu Razo da Massa 1 278.8240 +/- 50.0 mmu 273.8072 +/- 50.0 mmu 249.0454 +/- 50.0 mmu 249.0454 +/- 50.0 mmu 264.8541 +/- 50.0 mmu 403.8530 +/- 50.0 mmu 271.8775 +/- 50.0 mmu RM1 Tempo limite 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 Razo limite 0.6800 - 0.9200 0.6800 - 0.9200 0.5525 - 0.7475 0.5525 - 0.7475 0.5440 - 0.7360 0.6944 - 0.9396 0.5440 - 0.7360

208

209 ANEXO II Massas utilizadas para quantificar os Pesticidas Organoclorados (PCB) na tcnica de espectrometria de massas. Composto 1234-TCDD 13C12 PCB #28 13C12 STD PCB #28 PCB #52 13C12 STD PCB #81 13C12 STD PCB #77 13C12 STD PCB #52 PCB #81 PCB #77 PCB #101 13C12 STD PCB #123 13C12 STD PCB #118 13C12 STD PCB #114 13C12 STD PCB #105 13C12 STD PCB #126 13C12 STD PCB #101 PCB #123 PCB #118 PCB #114 PCB #105 PCB #126 PCB #153 13C12 STD PCB #138 13C12 STD PCB #167 13C12 STD Massa Quantificada 333.9338 +/- 50.0 268.0016 +/- 50.0 255.9613 +/- 50.0 303.9597 +/- 50.0 303.9597 +/- 50.0 303.9597 +/- 50.0 291.9195 +/- 50.0 291.9195 +/- 50.0 291.9195 +/- 50.0 337.9207 +/- 50.0 337.9207 +/- 50.0 337.9207 +/- 50.0 337.9207 +/- 50.0 337.9207 +/- 50.0 337.9207 +/- 50.0 325.8805 +/- 50.0 325.8805 +/- 50.0 325.8805 +/- 50.0 325.8805 +/- 50.0 325.8805 +/- 50.0 325.8805 +/- 50.0 371.8817 +/- 50.0 371.8817 +/- 50.0 371.8817 +/- 50.0 Razo da Massa 1 331.9368 +/- 50.0 269.9986 +/- 50.0 257.9585 +/- 50.0 301.9626 +/- 50.0 301.9626 +/- 50.0 301.9626 +/- 50.0 289.9224 +/- 50.0 289.9224 +/- 50.0 289.9224 +/- 50.0 339.9177 +/- 50.0 339.9177 +/- 50.0 339.9177 +/- 50.0 339.9177 +/- 50.0 339.9177 +/- 50.0 339.9177 +/- 50.0 327.8775 +/- 50.0 327.8775 +/- 50.0 327.8775 +/- 50.0 327.8775 +/- 50.0 327.8775 +/- 50.0 327.8775 +/- 50.0 373.8788 +/- 50.0 373.8788 +/- 50.0 373.8788 +/- 50.0 RM1 Tempo limite 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 Razo limite 0.6545 - 0.8855 0.8245 - 1.1155 0.8245 - 1.1155 0.6545 - 0.8855 0.6545 - 0.8855 0.6545 - 0.8855 0.6545 - 0.8855 0.6545 - 0.8855 0.6545 - 0.8855 0.5610 - 0.7590 0.5610 - 0.7590 0.5610 - 0.7590 0.5610 - 0.7590 0.5610 - 0.7590 0.5610 - 0.7590 0.5610 - 0.7590 0.5610 - 0.7590 0.5610 - 0.7590 0.5610 - 0.7590 0.5610 - 0.7590 0.5610 - 0.7590 0.6885 - 0.9315 0.6885 - 0.9315 0.6885 - 0.9315

209

210 Continuao ANEXO II Composto PCB #156 13C12 STD PCB #157 13C12 STD PCB #169 13C12 STD PCB #153 PCB #138 PCB #167 PCB #156 PCB #157 PCB #169 PCB #180 13C12 STD PCB #189 13C12 STD PCB #180 PCB #189 Massa Quantificada 371.8817 +/- 50.0 371.8817 +/- 50.0 371.8817 +/- 50.0 359.8415 +/- 50.0 359.8415 +/- 50.0 359.8415 +/- 50.0 359.8415 +/- 50.0 359.8415 +/- 50.0 359.8415 +/- 50.0 405.8428 +/- 50.0 405.8428 +/- 50.0 393.8025 +/- 50.0 393.8025 +/- 50.0 Razo da Massa 1 373.8788 +/- 50.0 373.8788 +/- 50.0 373.8788 +/- 50.0 361.8386 +/- 50.0 361.8386 +/- 50.0 361.8385 +/- 50.0 361.8385 +/- 50.0 361.8385 +/- 50.0 361.8385 +/- 50.0 407.8398 +/- 50.0 407.8398 +/- 50.0 395.7996 +/- 50.0 395.7995 +/- 50.0 RM1 Tempo limite 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 5.00 5.00 Razo limite 0.6885 - 0.9315 0.6885 - 0.9315 0.6885 - 0.9315 0.6885 - 0.9315 0.6885 - 0.9315 0.6885 - 0.9315 0.6885 - 0.9315 0.6885 - 0.9315 0.6885 - 0.9315 0.8245 - 1.1155 0.8245 - 1.1155 0.8245 - 1.1155 0.8245 - 1.1155

210

211 ANEXO III -Massas utilizadas para quantificar os Pesticidas Organoclorados (PCB) na tcnica de espectrometria de massas. Composto Pentachlortoluol Naftaleno Naftaleno-D8 Acenafitileno Acenaftaleno Acenaftaleno-D10 Fluoreno Fenantreno Antraceno Fenantreno-D10 Fluoranteno Pireno Pireno-D10 Benzo(a)antraceno Crseno Criseno-D12 Benzo(b)fluoranteno Benzo(k)fluoranteno Benzo(a)pireno Benzo(a)pireno-D12 Indeno(1,2,3-cd)pireno Benzo(g,h,i)perileno Dibenzo(a,h)antraceno Massa Quantificada 263.8648 +/- 50.0 mmu 128.0626 +/- 50.0 mmu 136.1128 +/- 50.0 mmu 152.0626 +/- 50.0 mmu 154.0783 +/- 50.0 mmu 164.1410 +/- 50.0 mmu 166.0783 +/- 50.0 mmu 178.0783 +/- 50.0 mmu 178.0783 +/- 50.0 mmu 188.1410 +/- 50.0 mmu 202.0783 +/- 50.0 mmu 202.0783 +/- 50.0 mmu 212.1410 +/- 50.0 mmu 228.0939 +/- 50.0 mmu 228.0939 +/- 50.0 mmu 240.1692 +/- 50.0 mmu 252.0939 +/- 50.0 mmu 252.0939 +/- 50.0 mmu 252.0939 +/- 50.0 mmu 264.1692 +/- 50.0 mmu 276.0939 +/- 50.0 mmu 276.0939 +/- 50.0 mmu 278.1096 +/- 50.0 mmu Razo da Massa 1 265.8619 +/- 50.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu RM1 Tempo limite 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 Razo limite 0.5610 - 0.7590 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000

211

212 Continuao ANEXO III Composto Benzo(g,h,i)perileno-D12 Fluoreno-D10 Acenafitaleno-D8 Antraceno-D10 Fluoranteno-D10 Benzo(a)antraceno-D12 Benzo(b)fluoranteno-D12 Benzo(k)fluoranteno-D12 Indeno(1,2,3-c,d)pireno-D12 Dibenzo(a,h)antraceno-D14 1,2,3,7,8,9-HxCDD Massa Quantificada 288.1690 +/- 50.0 mmu 176.1410 +/- 50.0 mmu 160.1128 +/- 50.0 mmu 188.1410 +/- 50.0 mmu 212.1410 +/- 50.0 mmu 240.1692 +/- 50.0 mmu 264.1692 +/- 50.0 mmu 264.1692 +/- 50.0 mmu 288.1692 +/- 50.0 mmu 292.1974 +/- 50.0 mmu 401.8559 +/- 50.0 mmu Razo da Massa 1 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 0.0000 +/- 0.0 mmu 403.8530 +/- 50.0 mmu RM1 Tempo limite 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 Razo limite 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.0000 - 0.0000 0.6970 - 0.9430

212

213 ANEXO IV - Estimavivas toxicolgicas do consumo de bivalves N de animais para alcanar o ADI Resduo Mximo (g/kg) Pior caso g.kg-1 peso midoMRL g.kg-1.dia-1 (Oral) Compostos % Baa Ms (g/kg bw) MRL MR (%) N Mexillho 0,2 - AC SET 131.967 -HCH 8,0 Crnica Coquille 0,01 2.183.177 Mexillho 0,8 - AC SET 193.639 -HCH 50,0 Aguda Coquille 0,08 AC SET 18.084 Mexillho 0,4 - AC SET 24.470 2 0,03 -HCH 3,0 Aguda 20 5,0 Coquille 0,004 BIG SET 2.109.641 0,02 0,003 Mexillho 0,1 - AC SET 180.375 0,07 0,31 Hexaclorobenzeno 8,0 Aguda 200 0,17 Coquille 0,005 AC -SET 7.442.876 0,003 0,01 Mexillho 4,6 - BG SET 342 6,7 2,55 DDT DDT p,p' DDT 0,5 Aguda 0,06 1000 10 Coquille 0,15 BIG SET 10.384 0,15 Mexillho 0,07 - BG SET 42.367 0,15 0,06 trans-cis-oxi1,0 Aguda 50 0,5 Chlordan Coquille 0,002 BIG SET 1.978.329 0,003 0,001 Mexillho 0,08 - AC SET 24.366 Heptacloro 0,6 Aguda Coquille 0,03 BIG MAR 60.307 Heptacloro+cis- Mexillho 0,09 - AC SET 0,05 0,35 200 0,1 trans-Heptaclor Coquille 0,03 BIG MAR 0,02 0,13 Mexillho 0,13 - AC SET 47.341 Aldrin 2,0 Aguda 0,24 1,82 Coquille 0,10 BIG MAR 64.406 200 0,1 Mexillho 0,35 - AC SET 911 Dieldrin 0,1 Intermediria 0,05 0,39 Coquille 0,13 BIG SET 8.435 Mexillho 0,08 - AC SEP 81.707 0,15 0,15 Endrin 2,0 Intermediria 50 0,2 Coquille 0,004 BIG MAR 1.718.953 0,007 0,007

213

214 Continuao ANEXO IV Compostos Endosulfan-I+ Endosulfan-II Metoxiclor Mirex PCB Pior caso g.kg-1 peso midoBaa Ms Mexillho Coquille Mexillho Coquille Mexillho Coquille Mexillho Coquille 0,19 - BIG MAR 0,02 BIG SET 0,03 - BG SET <LOD 0,07 BIG MAR 0,004 BIG SET 0,4 BG SET 0,3 AC SET N de animais para alcanar o MRL g.kg-1.dia-1 (Oral) MRL N 81.429 5,0 Intermediria 819.542 516.758 5,0 Intermediria 343.535 8,0 Crnica. 343.535 Resduo Mximo ADI (g/kg) % (g/kg bw) MR (%) 0,39 0,01 50* 6,0* 0,04 0,001 0,31 0,0001 10 100 0,02 1-4 TEQ -1 pg.kg bw 0,01 -

Minimum Risk Levels (MRL) obtidos de ASTDR (2010) para exposio oral foram preferencialmente selecionados para a exposio aguda (1-14 dias), mas quando no estava disponvel, trabalhou-se com a exposio intermediria (14 - 364 dias), ou crnica (365 dias ou mais). Maximum Residue (MR) retirados do portal da Unio Europia (http://ec.europa.eu/sanco_pesticides/public/index.cfm?event=substance.selection), so mostrados os percentuais que as concentraes mais elevadas registradas para mexilhes e coquilles, representam para seus respectivos MRs. Acceptable Daily Intake (ADI) sugerido pela WHO (2009), seguido do percentual que representa o consumo de 12 indivduos de mexilhes ou coquilles, por uma criana de 30 kg.de massa corprea (body weight bw), para os respectivos ADI de cada composto. Toxic Equivalent (TEQ) estipulado pela WHO (1998).

214

215 ANEXO V - Valores de LOD para osPesticas e PCBs quantificados. Contaminantes Sed massa seca SS massa seca Mex massa seca Mex & Coq massa mida -HCH 2,43 3,00 6,11 0,92 -HCH 3,27 4,95 3,16 0,92 -HCH 2,89 2,55 5,40 0,92 -HCH 2,53 4,05 3,65 0,87 -HCH 3,89 6,35 3,93 0,90 Pentaclorobenzeno 0,17 0,15 10,65 0,10 Hexaclorobenzeno 1,42 1,20 6,19 1,27 Pentacloroanisol 3,60 2,25 12,12 2,14 Octacloroestirol 0,96 1,26 2,42 0,54 p,p' DDT 7,86 5,10 1,50 1,94 o,p' DDT 7,03 5,40 1,37 0,42 p,p' DDD 4,67 3,95 0,72 1,58 o,p' DDD 4,76 3,95 1,04 0,12 p,p' DDE 0,71 0,51 0,82 0,18 o,p' DDE 0,55 0,45 0,68 0,17 trans-Clordano 0,50 0,42 0,28 0,07 cis-Clordano 0,52 0,47 0,35 0,09 oxi-Clordano 0,87 0,64 0,94 0,24 Heptacloro 0,45 0,41 0,43 0,13 cis-Heptacloro Epxido 0,45 0,37 0,55 0,14 trans-Heptacloro 2,98 2,35 3,25 0,81 Aldrin 0,33 0,34 0,78 0,10 Dieldrin 0,96 0,82 0,84 0,22 Endrin 1,45 1,45 1,38 0,41 Endosulfan-I 1,96 1,75 2,84 0,71 Endosulfan-II 2,34 2,20 2,09 0,64 Metoxicloro 0,66 0,65 0,93 0,23 Mirex 0,08 0,08 0,08 0,02 215

216 Continuao ANEXO V Sed massa seca SS massa seca Mex massa seca MEX & COQ massa mida 2,29 4,50 1,67 0,98 1,46 2,26 1,25 0,36 0,79 1,44 0,78 0,24 0,59 1,20 0,55 0,17 0,60 1,20 0,60 0,18 0,54 1,29 0,61 0,14 1,11 2,56 1,03 0,30 0,82 1,96 0,84 0,23 0,62 0,98 0,45 0,16 0,46 1,15 0,71 0,14 0,65 1,23 0,50 0,19 0,59 1,17 0,48 0,18 0,52 1,27 0,65 0,20 0,55 1,33 0,65 0,22 0,49 0,96 0,57 0,15 0,52 0,99 0,60 0,15 0,56 0,87 0,57 0,16 0,41 0,86 0,31 0,11

Contaminantes PCB 28 PCB52 PCB101 PCB138 PCB153 PCB180 PCB77 PCB81 PCB126 PCB169 PCB105 PCB114 PCB118 PCB123 PCB156 PCB157 PCB167 PCB189

216

217 ANEXO VI
Food Chemistry xxx (2012) xxxxxx

Contents lists available at SciVerse ScienceDirect

Food Chemistry
journal homepage: www.elsevier.com/locate/foodchem

Distinct bioaccumulation prole of pesticides and dioxin-like compounds by unpolluted tropical bays: mollusk bivalves reared in polluted and Consumption risk and seasonal effect
Petrus Galvao a,b,c,, Bernhard Henkelmann b, Renan Longo c, Jos Lailson-Brito d, Joo Paulo Machado Torres c, Karl-Werner Schramm b,e, Olaf Malm c
a

Programa de Biofsica Ambiental, Universidade Federal do Rio de Janeiro, 21941-900 Rio de Janeiro, RJ, Brazil Helmholtz Zentrum Mnchen, German Research Center for Environmental Health, Institute of Ecological Chemistry, Ingolstdter Landstrasse 1, 85764 Neuherberg, Germany Laboratrio de Radioistopos Eduardo Penna-Franca, Universidade Federal do Rio de Janeiro, 21941-900 Rio de Janeiro, RJ, Brazil d Laboratrio de Mamferos Aquticos e Bioindicadores Profa. Izabel Gurgel (MAQUA), Faculdade de Oceanograa, Universidade do Estado do Rio de Janeiro (UERJ), 20530-013 Rio de Janeiro, RJ, Brazil e Technische Universitt Mnchen, Wissenschaftszentrum Weihenstephan fr Ernhrung und Landnutzung, Department fr Biowissenschaften, Weihenstephaner Steig 23, 85350 Freising, Germany
b c

a r t i c l e

i n f o

a b s t r a c t
Mariculture activity has increased its production along the Atlantic Coast of Brazil over the last years. This protein source for human consumption may also represent risks due to the exposure to bioaccumulated contaminants in the tissues of organisms reared in polluted shallow waters. This study evaluated the bioaccumulation of pesticides and dioxin-like compounds in two commercial marine bivalve species reared at different sites along the Rio de Janeiro State coast (SE-Brazil). We observed distinct contamination proles in bivalve tissues reared at each sampling site, which may be related to human activities historically developed in those areas. A pronounced tendency for higher contamination levels in animals sampled in the last month of winter (September) is discussed as being likely due to environmental issues, rather than biological factors. Based on Minimal Risk Level, Maximum Residue, Acceptable Daily Intake and Toxic Equivalent, bivalves are classied as safe for human consumption. 2012 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Article history: Received 15 November 2011 Received in revised form 27 February 2012 Accepted 2 April 2012 Available online xxxx Keywords: Seafood Persistent organic pollutants Persistent toxic substances Environmental monitoring Contamination

1. Introduction Along the 7367 km of the Atlantic Coast of Brazil, the mussel Perna perna (Linnaeus, 1758) has the largest commercial marine bivalve production, estimated at 12,000 tons for 2007 (IBAMA, 2007). The tropical marine bivalve Lions Scallop Nodipecten nodosus (Linnae, 1758), also called Coquille de Saint-Jacques or Vieira, shows an inferior total volume commercialized in Brazil, but presents higher market value, and is well appreciated and consumed as seafood. The last ofcial estimate of this scallop production in Brazil is 14.5 tones (IBAMA, 2007). The same rhythm of expansion observed in mariculture production is not evident in terms of scientic data regarding contaminant bioaccumulation in the reared animals.

Corresponding author. Address: Programa de Biofsica Ambiental, Instituto de

Biofsica Carlos Chagas Filho, Centro de Cincias da Sade, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Cidade Universitria, 21941-902 Rio de Janeiro, RJ, Brazil. Tel.: +55 21 2561 5339; fax: +55 21 2280 8193. e-mail addresses: mgpetrus@yahoo.com.br (P. Galvao), henkelmann@helmholt z-muenchen.de (B. Henkelmann), renan89_lp@hotmail.com (R. Longo), lailson@uerj.br (J. Lailson-Brito), jptorres@biof.ufrj.br (J.P.M. Torres), schramm@helholtz-muench en.de (K.-W. Schramm), olaf@biof.ufrj.br (O. Malm). 0308-8146/$ - see front matter 2012 Elsevier Ltd. All rights reserved. http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.04.006

A search conducted at the Webofscience database with the keywords Brazil and Mariculture, only returned two studies pertaining to contaminants in bivalves, and both concerning metal bioaccumulation. Such lack of information is especially worrying, since an ongoing discussion exists about how effective are the nutritional benets of such food when it is also a source of contaminants for the consumers. Among the contaminants, organochlorine pesticides (OCPs) and polychlorinated biphenyls (PCBs) deserve a special attention, due their high persistence in the environment and their hydrophobicity, which promotes their entry into the food web. Such compounds are also volatile, so atmospheric transfer can transport them across political and geographical frontiers, increasing the attention required for their global monitoring. PCBs were largely used in electric devices due to their high thermal and chemical stability. The main commercial formulation available in the Brazilian market was Ascarel, and this compounds production and commercialization has been banned by a Brazilian federal law since 1981. An additional norm was published to regulate its use and stock. Today, stockpiles of Ascarel in Brazil still remain, and leakages to the environment are not discarded, mainly near electric facilities and big smelters.

Please cite this article in press as: Galvao, P., et al. Distinct bioaccumulation prole of pesticides and dioxin-like compounds by mollusk bivalves reared in polluted and unpolluted tropical bays: Consumption risk and seasonal effect. Food Chemistry (2012), http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.04.006

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Another class of contaminant that must be monitored in Brazils aquatic ecosystems includes organochlorine pesticides (OCPs). Brazil is the largest pesticide market in the world. After Brazil entered the Stockholm Convention, regulations concerning OCPs became more restrict, and some compounds largely employed in the past are not permitted anymore. Some of these prohibited compounds are illegally dumped in landlls, which can represent a potential contamination source to watersheds and, nally, to costal waters. Dichlorodiphenyltrichloroethane, known as DDT, was widely used for agricultural purposes, but also in combating tropical diseases vectors, such as Malaria-carrying mosquitoes, and has been banned since 1991, when the Brazilian government bought 3000 tons of DDT to control the mosquito Anopheles darlingi in the Amazon area. Gamma-hexachlorocyclohexane and dieldrin (both banned by the Stockholm Convention) are also chlorinated compounds that were largely used during the 50s to control the vector of Chagas disease. The extremely high values of DDT and PCBs (7953 and 3.4810 ng g-1 in lipid base, respectively) detected in marine mammals from Guanabara Bay, a polluted estuary in the Rio de Janeiro State (Lailson-Brito et al., 2010) is the base of concerns regarding toxicological risk assessment on shellsh reared in this area. Additionally, the information concerning OCPs and PCBs bioaccumulated by a lter feeder from Guanabara Bay is very useful in order to understand the dynamics of such contaminants in a food web of a tropical marine ecosystem. Previous studies have already suggested that a seasonal effect plays an important role in the concentration of lipophylic compounds, such as OCPs and PCBs, due to the variation of lipid content in bivalve tissues (Lee, Kruse, & Wassermann, 1996). Controversially, more recent data showed that the lipid amount in Mytilus eduliss tissue plays a minor role on the determination of such uctuations (Carro, Garcia, Ignacio, & Mouteira, 2004). In fact, since gametogenesis follows a seasonal cycle in temperate climates, and this is not that notable in tropical zones where there are multiple spawnings throughout the year (Fearman & Moltschaniwskyj, 2010), it is essential to evaluate how far the seasonal variation inuences the safety of mariculture products of tropical areas in terms of contaminant concentrations. Considering that seafood is probably the main source of human exposure to dioxin-like compounds (Pompa, Caloni, & Fracchiolla, 2003), and that coastal waters are the receptors of particles carried by rivers to the marine environment, our aim is to discuss the contaminants bioaccumulated by bivalves reared in commercial marine farms, and their potential toxicity to the nal human consumers. Since the four studied areas are surrounded by different human activities, we also used bivalve bioaccumulation proles to distinguish the sites. In addition, a specic species difference is analyzed among the two studied bivalves, regarding their toxicological risk to human consumption. 2. Materials and methods 2.1. Sampling area Fig. 1 shows the four major bivalves production areas along the Rio de Janeiro State coast. Two of them are historically polluted: Guanabara Bay (GB) and Sepetiba Bay (SB). The others two are not surrounded by large urban areas and show no expressive contamination sources in the area when compared to the rst two sites: the Cabo Frio Embayment, specically the city of Arraial do Cabo (AC) and Ilha Grande Bay (IGB). Although the mussel P. perna is reared in each of these sites, the scallop N. nodosus is susceptible to warm water and is reared only in AC and IGB. Briey, GB has been impacted by the urban waste from a total of approximately 11 million people inhabitants living in this area. It is estimated that only 25% of the sewage thrown in the GB goes through secondary

treatment. About 12,000 industries are installed around the GB and the two oil reneries, two navy bases and a shipyard are very potential sources of contamination to this water body. Mussel production in GB takes place at Jurujuba Beach (22550 5900 S; 046060 4000 O), where an association of marine farmers develops a commercial production. To the best of our knowledge, there is no other systematic mussel production at GB. The second polluted area receives an expressive amount of persistent organic contaminants from the continent through the Guandu river contribution. We sampled mussels reared in an experimental marine farm (22570 0400 S; 043540 2800 O) at about 10 km away from this rivers discharge, where there are other commercial mussels farms. In contrast to these two historically polluted bays (GB and SB), we also collected mussels at IGB, since this site has been deemed pristine in previous environmental studies. At this site we sampled scallops from a farm that belongs to a mariculture laboratory, and we also collected mussels naturally attached to the long-line structures of one farm belonging to this laboratory at Biscaia Inlet (23010 3800 S; 044140 1400 O). The last sampling site, AC, is located at a distance of about 160 km from Rio de Janeiro city, with approximately 27,000 inhabitants. This is a tourist area and has only nonexpressive ship trafc as a potential contaminant source to the marine environment. The upwelling phenomenon takes place in this area as a consequence of intense North-East winds that show a higher incidence during the summer (from December to March). A bivalve marine farm is located at the Forno Beach (22570 5000 S; 042000 4500 ), where we had access to mussels naturally attached to the long-line structures used to farm scallops. 2.2. Sampling design To evaluate the seasonal inuence on contaminant concentrations in the reared marine bivalves, samplings were taken by the end of the summer (March) and by the end of winter (September). We sampled 15 commercial sized animals from each study site (mussels 68 cm and scallops 1215 cm). In order to minimize inter-individual variations of the bioaccumulated contaminants, to conduct the analyses we pooled ve organisms. 2.3. Tissue processing Organisms were kept in thermal boxes with Gelox until arriving at the laboratory, where they were frozen (-20 C) prior to the analyses. Before dissection animals were thawed at room temperature and soft tissues were obtained by cutting the adductor muscle. Each individual organism was vigorously washed with distilled water prior to pooling. The water from the pools was drained from the glass pot as much as possible and frozen at -80 C for 24 h, prior to the lyophilization process. The animals were weighed before freezing and after freeze-drying. The dry tissues were homogenated by using a blade mill (stainless steel blades and aluminium coup). Samples were stored in glass pots with screw caps. 2.4. Extracting the contaminants from the tissues An Accelerated Solvent Extractor (ASE 200, Dionex GmbH) was applied to extract the target contaminants from the tissues. About 1 g of freeze-dried sample was mixed with Hydromatrix (1:1) (VARIAN) in the extractions cells and spiked with 13C-labelled PCB and OCP mixtures as internal standards. The mixtures included every compound listed in Table 1 as a labelled analogue (except eHCH, o,p0 -DDD, trans-heptachloroepoxide, cis-chlordane) and the standards were purchased from LGC Standards (Wesel, Germany) or Campro Scientic (Berlin, Germany). Two 10 min static cycles with n-hexane:acetone (75:25, V:V) at 120 C and 120 bar were

Please citecite this article in press as: as: Galvao, P., et Distinct bioaccumulation pro leof and dioxin-like compounds by by mollusk bivalves reared in in Please this article in press Galvao, P., al. et al. Distinct bioaccumulation pro le pesticides of pesticides and dioxin-like compounds mollusk bivalves reared polluted and unpolluted tropical bays: Consumption riskrisk and seasonal effect. Food Chemistry (2012), http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.04.006 polluted and unpolluted tropical bays: Consumption and seasonal effect. Food Chemistry (2012), http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.04.006

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Fig. 1. Study areas at the Rio de Janeiro State coast (SE-Brazil). The four main poles of marine bivalve production are indicated by arrows: Arraial do Cabo (AC); Guanabara Bay (GB); Sepetiba Bay (SB); Ilha Grande Bay (IGB).

adopted as the extraction phase. The obtained extract was then transferred to a pre-weighed round-bottom ask, and evaporated to dryness under nitrogen stream to determine the lipid content gravimetrically. 2.5. Extract clean up The rst clean-up step of the extract was conducted in a glass chromatography column lled with 10 g of preheated (550 C for 12 h) silica gel 60, 5 g of alumina B (deactivated with 3% H2O) and 3 g of NaSO4 from bottom to top (all adsorbents were purchased from LGC Standards, Germany). As mobile phase, a mixture of n-hexane:dichloromethane (1:1, V:V) was used, and the packed column was rst washed with 60 ml of it. After loading the re-dissolved sample extract on top of the column it was eluted with 100 ml of mobile phase and the eluate was collected in a roundbottom ask. The volume was reduced to about 3 ml in a rotary evaporation (1200 rpm) system at 50 C, and pressure varying from 500 to 350 mbar. Further reduction of the volume to 0.5 ml and solvent exchange to acetonitrile was performed under a stream of nitrogen. This concentrate was applied to a solid phase extraction cartridge lled with 1 g of C18-modied silica gel (Macherey & Nagel, Germany). Additional 4.5 ml acetonitrile were used to rinse the sample through the cartridge. The eluate was reduced by a stream of nitrogen (at 45 C) and transferred to an autosampler vial with a limited volume insert containing a recovery standard mixture (13C-1,2,3,4-tetrachlorodibenzo-p-dioxin, 13C1,2,3,7,8,9-hexachlorodibenzo-p-dioxin, pentachlorotoluene). The nal sample volume was 20 ll. 2.6. Chromatography conditions and quality control Samples were analyzed in a laboratory which is accredited according to DIN EN ISO/IEC 17025 for the type of analyses performed in this study. The samples were injected in a high resolution gas chromatograph coupled to a high resolution mass spectrometer (HRGC HRMS) system (Thermo Finnigan MAT95 or MAT95S, Bremen, Germany). The instrumental conditions were reported in a previous publication (Wang, Bi, Pster, Henkelmann, Zhu, & Schramm, 2009). For every set of ten samples, one analytical blank was included in the analytical batch, and the results of these blanks were subtracted from the environmental samples. The recovery of the labelled internal standards were calculated to monitor the efciency of the sample pretreatment procedure. The Limit of Quantication (LOQ) was assumed to be equal to the limit of detection

(LOD), estimated as three times the signal-to-noise ratio (S/N) from the analytical blanks, since for many compounds no blank value was obtained. Values below the LOD were not considered. Target OCPs were: hexachlorocyclohexane (HCH) a-, b-, c-, d-, e-; pentachlorobenzene; hexachlorobenzene; pentachloroanisole; dichlorodiphenyl-trichloroethane (DDT) p,p0 and o,p0 ; dichloro-diphenyldichloroethane (DDD) p,p0 and o,p0 ; dichloro-diphenyl-dichloroethylene p,p0 and o,p0 (DDE); chlordan trans-, cis-, oxy-; heptachlor; cis-heptachloroepoxide; aldrin; dieldrin; endrin; endosulfan-I and II; methoxychlor; and mirex. Target PCBs were: PCB28; 52; 101; 138; 153; 180; 77; 81; 126; 169; 105; 114; 118; 123; 156; 157; 167; 189. 2.7. Human risk assessment of consumption We evaluated bivalve consumption toxic risks considering the higher concentrations detected for each compound, screening for a worst-case scenario. The Minimal Risk Levels (MRL) for oral exposure of each compound, based on the Agency for Toxic Substance and Disease Registry (ATSDR, 2010) were used as a rst assessment. As there are no ofcial statistics regarding bivalve human consumption in Brazil, we calculated how many mussels and scallop individuals must be ingested to reach the MRL, considering an oral dose and preferentially acute exposure. The second toxicological approach was conducted considering the Maximum Residue (MR) level accepted for each target compound, according to the European Union Pesticides Database (http://ec.europa.eu/sanco_pesticides/public/ index.cfm?event=substance.selection), in which values regarding meat (the related product that is most present in all lists) were adopted. The respective percentages of each contaminant in relation to their MRs were calculated. For the third approach we assumed a meal containing 12 mussel or 12 scallop individuals, in order to estimate the representative levels of these amounts as the Acceptable Daily Intake (ADI) in terms of the percentage of each target compound for a child of 30 kg body weight. The ADI values for OCPs were taken from the Inventory of IPCS and other WHO pesticide evaluations and summary of toxicological evaluations performed by the Joint Meeting on Pesticide Residues (JMPR) through 2009 (WHO, 2011). Toxic Equivalent Factors (TEF) were used to access the PCBs toxicological risk for the consumption of the bivalves. The reviewed TEF values provided by World Health Organization (WHO) (Berg et al., 2006) for every dioxin-like compound were considered in the calculation of the Toxic Equivalent (TEQ) of each sample. The TEQ-values for the samples are provided in wet weight basis, and

Please cite this article in press as: Galvao, P., et al. Distinct bioaccumulation prole of pesticides and dioxin-like compounds by mollusk bivalves reared in polluted and unpolluted tropical bays: Consumption risk and seasonal effect. Food Chemistry (2012), http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.04.006

Table 1 Organochlorine pesticides (OCPs) concentration range (pg g-1 wet weight) in mussels and scallops from each studied area at the Rio de Janeiro coast (SE-Brazil): Arraial do Cabo (AC); Guanabara Bay (GB); Sepetiba Bay (SB); Ilha Grande Bay (IGB). Values below the limit of detection (LOD) are indicated as <LOD for each compound. When all triplicates showed the same value, only one result is shown. Target compounds AC Mussel March September 157191 586815 279387 2240 <0.9 180332 132140 35293883 144191 71271 90103 5867 490578 2846 2239 919 <0.2 5278 1415 127133 234347 2977 5869 <0.6 23 4154 Scallop March 34 <0.92 4 <0.9 <0.9 1618 <1.32 215225 1.95 <0.4 <1.62 <0.1 2425 0 <0.1 <0.1 <0.2 <0.1 12 34 1923 24 610 <0.6 <0.2 2 September 114 69 <0.921 <0.9 <0.9 831 <1.35 367560 2734 <0.4 37 <0.1 2942 <0.21 <0.11 <0.1 <0.2 <0.114 12 415 1934 13 <0.74 <0.6 <0.2 12 GB Mussel March 5574 297778 1932 810 <0.920 3148 616 209299 210454 96137 126130 4992 184229 2743 36 24 01 24 24 2877 5773 67 5449 1114 <0.21 2026 September 4554 143486 3945 411 212 6275 419 403427 331462 114196 8691353 247326 25214206 140210 1754 1218 23 6 4 1114 101221 923 <0.620 13 2031 1624 SB Mussel March 6883 158372 2438 14 12 1828 <1.36 149378 7664 2834 82112 2837 166195 1315 45 27 <0.21 26 36 1231 6071 5 5686 519 <0.2 2629 September 2560 106116 62115 <0.99 <0.9 4057 <1.34 532592 140266 <0.428 6976 1516 82114 46 45 12 <0.2 68 1 1020 2729 23 27 <0.6 0 1520 IGB Mussel March <0.98 280317 <0.911 <0.9 <0.9 3448 1624 192370 261320 4151 165201 119145 220275 2229 3235 35 1 14 34 633 5371 35 124159 2635 <0.2 5174 September 2439 5191 94111 <0.9 <0.9 4888 35 576767 167264 959 7892 2024 125151 1114 918 <0.1 <0.2 1113 12 2530 3454 28 816 26 01 1718 Scallop March 913 <0.99 28 <0.9 <0.9 1622 <1.3 200286 <1.933 <0.4 712 <0.1 4362 <0.21 <0.1 <0.1 <0.1 37 34 78246 2837 34 912 13 <0.2 2 September <0.93 <0.92 <0.97 <0.9 <0.9 1518 <1.33 236428 <1.917 <0.4 1119 <0.1 90156 02 <0.12 <0.1 <0.1 <0.15 45 1630 3646 24 1316 <0.63 <0.2 36

a-HCH
b-HCH c-HCH d-HCH e-HCH Pentachlorobenzene Hexachlorobenzene Pentachloroanisole p,p0 DDT o,p0 DDT p,p0 DDD o,p0 DDD p,p0 DDE o,p0 DDE trans-Chlordan cis-Chlordan oxy-Chlordan Heptachlor cis-Heptachloroepoxid Aldrin Dieldrin Endrin Endosulfan-I Endosulfan-II Methoxychlor Mirex

1214 89173 1316 <0.9 <0.9 1928 48 271284 1962 <0.4 2231 815 79146 47 24 12 <0.2 <0.13 12 2939 2835 49 96109 1028 <0.2 79

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the safety limit was taken in accordance to the WHO, ranging from 14 pg TEQ/kg body weight (WHO, 1998). 2.8. Data treatment The MannWhitney test was performed to verify signicant differences (p < 0.05) between lipid content of animals collected at the same site in March and September. In the attempt to identify distinguishable groups among sampling sites and sampling months, a discriminant analysis (DA) was applied using the measured compound concentrations as variables. We gradually selected the compounds (one by one) to run the test, to verify that the test premises were not violated. Once the test conditions were acceptable, another compound was selected. The Statistica software package (version 7, Statisoft) was used to run the statistical analysis. 3. Results and discussion Animals from the four main bivalve producer poles in the Rio de Janeiro State (SE-Brazil) were sampled, all of them reared by the long-line system and submerged full-time. The median meat fresh weight was 9.5 g (1.9) for mussels, and 14.0 g (1.5) for scallops (only adductor muscle and gonad). The lipid content expressed in percentage of wet weight basis varied from 1.2% to 3.2% for mussels, and from 0.6% to 1.4% for scallops. No statistically signicant difference is observed when comparing the lipid content from March and September at each sampling site (p > 0.05). These animals are bought mainly by local restaurants and the mussel yield is sold with its shell, or only the meat (soft tissue). To remove the soft tissue from the shell, the farmers boil the P. perna mussel in freshwater. We analyzed them just as they were removed from the boiler, with no modication, in an attempt to reduce contaminant source/loss variability. Sampling sites were chosen from each of the areas studied that are commercial mariculture productions. So, despite a possible distinct bioaccumulation prole of OCPs and PCBs can be veried in animals from other specic sites in each of studied bays, data are representative of each bay in terms of a toxicological risk assessment to human consumption, as the sampling areas are sites of consistently commercial mariculture. Only studies that have a well-dened methodology with regards to the analyzed target compounds were referenced, avoiding imprecise direct data comparisons. Also, based the mean sample water content (82%), a 5.6 factor was used to convert reported data from other studies expressed in dry weight to wet weight basis. By measuring the target compounds by HRGCHRMS, it was veried for the rst time, the occurrence of some pesticide metabolites in P. perna, so our data discussion can be quite limited in this sense, since no other reports of these results exist. 3.1. Spatial and temporal contaminant distribution As a rst approach regarding the contaminant burden in the reared bivalves from the main mariculture areas from the Rio de Janeiro State, the sum of all OCPs and PCBs quantied in edible tissue of both mussel and scallop individuals was considered. These results were plotted by sampling area, month, and species. Scallops from IGB and AC, as well as mussels from AC harvested in the last month of the summer (March), show a lower range (<1000 pg g-1) of the sum of OCPs (Fig. 2A) when compared to the other animals. Mussels from SB and IGB from both sampling months, and also mussels harvested in March at GB (range between 1250 and 2250 pg g-1), show intermediate levels of bioaccumulated OCPs. The highest values were determined in animals from BG and AC

harvested in the last month of winter (September) (values ranging from 5000 to 8000 pg g-1). Regarding the sum of PCBs (Fig. 2B), mussels from GB harvested in the winter month again presented the highest values in relation to the others animals (from 7500 to 11,000 pg g-1). Mussels from SB and IGB from September showed comparable PCBs concentrations, varying from 4500 to 6000 pg g-1. The lowest values are observed in the mussels from AC and all the scallops sampled in AC and IGB (values bellow 1000 pg g-1). The remaining animals are grouped ranging from 1250 to 3000 pg g-1. This scenario conrms what was expected: the higher contaminant values were observed at GB. Surprisingly, we observed comparable OCPs concentrations between mussels

Fig. 2. Sum of the measured organochlorine pesticides (OCPs) (A) and sum of the measured polychlorinated biphenyls (PCBs) (B) in whole soft tissue of mussels (Mus) and the edible part (adductor muscle and gonads) of scallops (Scp), expressed in pg g-1 wet weight, in March (lled boxes) and September (empty boxes) sampled at: Guanabara Bay (GB); Sepetiba Bay (SB); Ilha Grande Bay (IGB); Arraial do Cabo (AC). Scallops were sampled only at IGB and AC. Boxes represent the range of three replicas. Each replica is one composite sample of ve pooled animals. Measured OCPs: hexachlorocyclohexane a-, b-, c-, d-, e-; pentachlorobenzene; hexachlorobenzene; pentachloroanisole; dichloro-diphenyl-trichloroethane (DDT) p,p0 and o,p0 ; dichloro-diphenyl-dichloroethane (DDD) p,p0 and o,p0 ; dichloro-diphenyldichloroethylene p,p0 and o,p0 (DDE); chlordan trans-, cis-, oxy-; heptachlor; cisheptachloroepoxid; aldrin; dieldrin; endrin; endosulfan-I and II; methoxychlor; Mirex. Measured PCBs congeners: PCB28; 52; 101; 138; 153; 180; 77; 81; 126; 169; 105; 114; 118; 123; 156; 157; 167; 189.

Please cite this article in press as: Galvao, P., et al. Distinct bioaccumulation prole of pesticides and dioxin-like compounds by mollusk bivalves reared in polluted and unpolluted tropical bays: Consumption risk and seasonal effect. Food Chemistry (2012), http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.04.006

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from GB and those from AC sampled in September, mainly related to the expressive increase of pentachloroanisol (PeCA) from March samples in comparison to September, which will be further discussed ahead. Such spatial and temporal differences among the OCPs and PCB concentrations from mussels and scallops sampled in the studied areas become clearer by plotting the canonical axis of the DA for OCPs values (Fig. 3). The compounds not included in the DA were endosulfan-II, methoxychlor and mirex, since DA assumptions were violated and the test is interrupted when such contaminants are selected. The DA showed that it is possible to distinguish each studied site by the bioaccumulation prole observed in the bivalves. Well dened groups are formed and values from each site and from each sampling month are joined. The great distance in the canonical DA axis between the scallop and mussel groups is also remarkable, highlighting the completely different contaminant burden and prole between the edible tissues of these two species. For scallops, no seasonal effect seems to takes place at IGB, while this effect occurs with some strength at AC. Regarding the mussels, distinct groups were formed in accordance to the sampling area and sampling month. The exceptions were the results from GB and IGB sampled in March, which were grouped together. This is an unexpected result, since previous studies observed higher concentrations in cetaceans from GB when compared to those sampled at SB and IGB (Lailson-Brito et al., 2010). The comparable OCPs concentrations between mussels from a historically impacted bay (BG) and a relative pristine area (IGB) are likely related to an environmental factor that promoted a reduction in the OCPs bioavailability, such as an increase in the concentration of suspended solids in the water column. Running PCBs values separately in a DA lead to a not so sharp grouping arrangement for mussels (Fig. 4), but a pronounced separation strength is still observed. The congeners 28 and 101 were not considered in this analysis by the same reason of assumptions violation. A quite distant group is formed by the mussels from GB sampled in September, due the high PCBs values observed in these animals. Mussel from SB also showed expressive distance between the animals sampled in March and September, what is observed with less strength to mussels from IGB. Similar PCB bioaccumulation by scallops from AC and IGB placed these samples is other distant group. Mussels

from AC are grouped together, which may suggest no seasonal effect in the PCB bioaccumulation in mussels at AC. The same can be suggested for the scallops. The present study corroborates previous hypotheses that the studied bays have specic contamination proles, as reported for GB and SB-IGB, considering the OCPs and PCBs tissue burden in Sotalia guianensis (Lailson-Brito et al., 2010). Furthermore, a general tendency is observed that higher contaminant concentrations are detected by the end of the dry season (September), when compared to the results from March. This is in agreement with the results already reported for GB for some OCPs concentrations in P. perna tissue (Xavier de Brito, De Andrade Bruning, & Moreira, 2002). Seasonal effects on the bioaccumulation of OCPs and PCBs are not well established in the literature. In contrast with our ndings, a study performed in subtropical weather detected higher PCBs levels in oysters collected from areas under the inuence of rivers in the wet season, which could be related to the ush-out during the rain-fall. However, the same study also suggested that the non-observance of seasonal variance in PCBs concentrations is due the relatively constant sea water temperature, allowing year-round spawning activity and, consequently, less effects on the losses of lipophylic contaminants (Fang, Fang, Lee, Ko, & Baker, 2006). This temperature relevance was not observed in other studies conducted in the Asian area, and, in spite of an expressive sea water temperature range (1729 C) along the sampling period, no signicant difference is reported with regard to the PCBs burden from dry to wet season (Fang, Wu, Zheng, Lam, & Shin, 2010). Data concerning P. perna spawning in SE-Brazilian coast show relatively constant gonadal state in a low temperature variation (Marques, Ferreira, Grelli, Moraes, Nalesso, & Marenzi, 2008). The absence of a non-signicant difference of the observed lipid content between the two sampling months for the four studied sites in the present report may suggest that, along the Rio de Janeiro coast, the animals may be in a year-round spawning activity, or even that losses of OCPs and PCBs by spawning play a minor role in the lipid variation, as already reported in a previous study (Carro et al., 2004). Therefore, such differences observed in animal tissues concentrations are likely to be the result of environmental reasons, rather than biological/individual factors. Additionally, a periodic use of such contaminants or their eventual release to the environ-

Fig. 3. Categorized scatter plot of the discriminant analysis for organochlorine pesticides (OCPs). The rst and second function (Root 1 and 2) of the discriminant analysis, are represented in the X and Y axes, respectively, showing their calculated function values. Each symbol represents a group of analyses. Every group class has three replicas, which are three pools of ve animals each. Groups are described by their matrix origin: Mus for mussels and Scp for scallops; by their sampling site: GB Guanabara Bay, SB Sepetiba Bay, IGB Ilha Grande Bay; and AC Arraial do Cabo. Symbols for each group are specied in the gure. The variables considered in this analysis were: hexachlorocyclohexane a-, b-, c-, d-, e-; pentachlorobenzene; hexachlorobenzene; pentachloroanisole; dichloro-diphenyl-trichloroethane (DDT) p,p0 and o,p0 ; dichlorodiphenyl-dichloroethane (DDD) p,p0 and o,p0 ; dichloro-diphenyl-dichloroethylene p,p0 and o,p0 (DDE); chlordan trans-, cis-, oxy-; heptachlor; cis-heptachloroepoxid; aldrin; dieldrin; endrin; endosulfan-I.

Please cite this article in press as: Galvao, P., et al. Distinct bioaccumulation prole of pesticides and dioxin-like compounds by mollusk bivalves reared in polluted and unpolluted tropical bays: Consumption risk and seasonal effect. Food Chemistry (2012), http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.04.006

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Fig. 4. Categorized scatter plot of the discriminant analysis for polychlorinated biphenyls (PCB). The rst and second function (Root 1 and 2) of the discriminant analysis, are represented in the X and Y axes, respectively, showing their calculated function values. Each symbol represents a group of analyses. Every group class has three replicas, which are three pools of ve animals each. Groups are described by their matrix origin: Mus for mussels and Scp for scallops; by their sampling site: GB Guanabara Bay, SB Sepetiba Bay, IGB Ilha Grande Bay; and AC Arraial do Cabo. Symbols for each group are specied in the gure. The variables considered in this analysis were: PCB52; 138; 153; 180; 77; 81; 126; 169; 105; 114; 118; 123; 156; 157; 167; 189.

ment may also contribute to the observed seasonal effect in the bioaccumulation of contaminants in bivalve tissues. 3.2. Contaminant proles Tables 1 and 2 show the range of concentrations for each target compound from the studied areas. Values of octachlorostyrene and trans-heptachloroepoxid for all samples were below the LOD (0.5 and 0.8 pg g-1, respectively). When we compute the percentage P P of DDT in relation to the OCPs, DDT shows a minor contribution at AC (1423%), in accordance to the absence of agricultural activiP ties in the surrounding areas. GB showed the highest DDT percentages (4082%), which may be related to vegetable cultivation in the areas draining basin. Even with this possible source, P relatively low DDT concentrations are observed, even taking into account the highest concentrations detected at GB in September (about 4500 pg g-1), when compared to the observed 173,000 pg g-1 from other highly polluted area (Wang, Yang, & Jiang, 2007). Among the DDT metabolites, DDEs are the most ubiquitous. When the relative amount of each metabolite is compared

with the DDT technical formulation (77% p,p0 DDT; 15% o,p0 DDD; 4% p,p0 DDE) (ATSDR, 2002), a quite different pattern is observed, P and the p,p0 DDE ranges from 25% to 60% of the DDT. Previous studies suggest that no expressive dehydrochlorination process from DDT to DDE takes place in mussel metabolism, so the environmental source of such compounds to mussel tissue is the most important (Kwong, Yu, Lam, & Wang, 2009). Only residual levels of DDT and its metabolites were detected in the analyzed scallops. The PeCA was present in expressive levels in all samples, but mainly in mussels sampled in September at AC (3883 pg g-1), which is higher than the worst case reported by the Mussel Watch Program in a survey performed in the 90s along the US coast (Wade, Sericano, Gardinali, Wolff, & Chambers, 1998). PeCA levels in scallops are present in comparable levels with those obtained in mussels. The presence of PeCA in the environment may be related to the degradation of the pentachlorophenol, which has been prohibited in the Brazilian agriculture since 1985, but it is still in use as a fungicide for wood preservation. The relatively high values detected in such samples can be due to a recent treatment event applied in the marine farms surroundings, since the main shipyard for the lo-

Table 2 Polychlorinated biphenyls (PCBs) concentration range (pg g-1 wet weight) in mussels and scallops from each studied area at the Rio de Janeiro coast (SE-Brazil): Arraial do Cabo (AC); Guanabara Bay (GB); Sepetiba Bay (SB); Ilha Grande Bay (IGB). Values below the limit of detection (LOD) are indicated as <LOD for each compound. When all triplicates showed the same value, only one result is shown. Target compounds AC Mussel March PCB28 PCB52 PCB101 PCB138 PCB153 PCB180 PCB77 PCB81 PCB126 PCB169 PCB105 PCB114 PCB118 PCB123 PCB156 PCB157 PCB167 PCB189 140212 94132 81101 75105 130190 5671 46 <0.2 <0.2 1 1930 23 5680 23 35 34 811 1 September 91173 102182 63103 5778 113140 4556 34 <0.2 <0.21 <0.1 1518 23 4156 12 45 23 69 1 Scallop March 56145 5095 3448 <0.2 <0.2 <0.1 2 <0.2 <0.2 <0.1 <0.2 1 <0.2 0.51 12 0.41 1 <0.1 September 33105 53151 4481 <0.2 <0.268 <0.1 2 <0.2 <0.20.4 <0.10.4 <0.2 1 <0.2 0.51 1 1 1 <0.1 BG Mussel March 143251 130171 146168 361504 520762 165242 813 <0.21 <0.22 <0.1 6182 610 251406 3755 812 711 2943 <0.12 September 8012327 8692800 9941650 9611299 12331762 346486 1757 <0.2 <0.23 <0.1 339501 1522 9411270 150211 5875 <0.239 6087 <0.1 BS Mussel March 164262 151206 230257 292340 378472 91108 1215 <0.2 23 <0.1 4247 <0.24 183195 2932 1011 6 1518 1 September 6391665 7151952 563847 172820 3311251 69339 <0.315 <0.26 <0.21 <0.1 53161 <0.28 196359 <0.263 721 418 1353 <0.121 BIG Mussel March 104150 145188 163181 254365 345504 5786 1622 <0.2 <0.23 <0.1 <0.267 <0.24 176252 3852 912 <0.2 <0.223 <0.1 September 164259 213309 158232 156163 228259 3347 89 <0.2 <0.22 <0.1 3341 <0.23 103116 <0.226 78 <0.2 <0.2 <0.1 Scallop March 3756 3754 <0.2 <0.2 <0.2 <0.1 1 <0.2 <0.2 <0.1 <0.2 <0.21 <0.2 <0.21 1 <0.2 <0.21 <0.1 September 8994 92102 4046 <0.2 <0.2 <0.1 23 <0.2 <0.2 <0.1 <0.2 1 <0.2 <0.21 12 <0.21 1 <0.1

Please cite this article in press as: Galvao, P., et al. Distinct bioaccumulation prole of pesticides and dioxin-like compounds by mollusk bivalves reared in polluted and unpolluted tropical bays: Consumption risk and seasonal effect. Food Chemistry (2012), http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.04.006

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cal sherman has no collection system for avoiding the release of scrapped paint debris or new paints residues to marine water. The isomer most present among the hexachlorocyclohexane (HCH) group was b-HCH, which showed relative amounts in the range of 3994% considering mussels from all sampling sites, in agreement with the statement that this is the HCH isomer which shows the highest bioaccumulation in food webs (ATSDR, 2005). Mussels from AC sampled in September and mussels from GB showed the highest b-HCH concentrations (max. 800 pg g-1), about ve times higher than the worst scenario detected in a polluted site at Istanbul Strait (Okay, Karacik, Henkelmann, & Schramm, 2011). A former technical-HCH plant located near the GB margin is a punctual source of such contaminants to the GB so this may explain the high concentrations observed at GB. As we are providing data for the rst time regarding animals reared at AC, the high b-HCH values measured in these animals deserves a closer look in future studies. Scallops show a residual level of HCH in their tissues. The remaining OCPs are at low levels and play a minor role in the understanding of the contamination proles at the studies sites. A survey on pesticide contamination conducted in a heavily impacted area in the Black sea by agricultural activities (Kurt & Boke Ozkoc, 2004), showed levels of dieldrin (780 pg g-1), heptachlor (1600 pg g-1) and hexachlorobenzene (270 pg g-1) expressively higher than those observed in the present study, of 20347, <0.178 and <1.3 140 pg g-1. Among PCBs, in all cases the indicator PCBs (PCB28; 52; 101; 138; 153; 180) represent about 50% of the total bioaccumulated PCBs in mussels and scallops. As described for OCPs, PCBs levels of mussels and scallops may be considered low. Taking into account only the sum of indicator PCB, the lowest concentrations observed in the present study (mainly from IGB and AC) are comparable with those described for Greenland (Cleemann, Riget, Paulsen, Klungsoyr, & Dietz, 2000), but lower than the 9800 pg g-1 reported for mussels sampled at an Italian coast, in the Central Adriatic Sea (Perugini, Cavaliere, Giammarino, Mazzone, Olivieri, & Amorena, 2004), which is on the same level as the worst case reported for Hong Kong mariculture zones (So et al., 2005). An assessment of the PCBs levels in edible sh caught in GB showed similar levels with those observed in the present study, with the exception of carnivorous species, which presented higher concentrations (da Silva, Lemes, Barretto, Oliveira, de Alleluia, & Paumgartten, 2003). Considering all the analyzed congeners, the predominant compound was PCB153, followed by PCB52, PCB101 and PCB138. PCB153 was also the most bioaccumulated congener by the mussels from the Strait of Istanbul (Okay, Karacik, Basak, Henkelmann, Bernhoft, & Schramm, 2009). In contrast, the study conducted in GB regarding PCBs in edible sh, PCB138 and 180 played an expressive role, which was also observed in the liver of tucuxi dolphins from Southeastern Brazil (Quinete, Lavandier, Dias, Taniguchi, Montone, & Moreira, 2011). High chlorinated congeners with no adjacent H atoms such as PCB153 has been reported as the most bioaccumulative in food web, due its resistance to metabolism (Kwon, Fisher, Kim, Hwang, & Kim, 2006). 3.3. Toxicity assessment Very few scientic data concerning the dynamics of OCPs and PCBs in the GB are available in spite of this being one of the most economic important coastal water bodies in South America, as well as one of the most impacted. There are only two publications focusing on marine seafood produced in GB, one dealing with sh (da Silva et al., 2003) and the other with mussels (Xavier de Brito et al., 2002), and both report data from about 10 years ago. To the best of our knowledge there is no scientic data available for edible seafood concerning OCPs and PCB from the other studied areas. Therefore, the present study has a great relevance, not only

in the assessment of the potential toxicological risk to the consumers of the bivalves reared in such areas, but also to contribute to the understanding of the environmental dynamics of the target contaminants in this study in tropical conditions. Nevertheless, as the sampling was done in 2009, we are reporting data from just before the beginning of the construction and/or enlargement of the huge harbors at the studied area, or their surroundings. Thus, our data is also valuable to support an environmental monitoring that can probably follow such enterprises, especially studies aiming at the bioavailability changes of OCPs and PCBs due to dredging activity. Performing the three proposed toxicological risk assessment described in Section 2, there is absolutely no risk in the consumption of the mussels and scallops reared in the studied areas regarding the target compounds of this study. The p,p0 DDT require a smaller number of animals (the expressive amount of 797 mussels) to be P ingested to reach the MRL, and the DDT represented the higher percentage of MR (7%). When a meal of 12 animals is considered, P again DDT is the OCP which posed the major risks, with 3% of the ADI for children. These numbers were the worst-case scenario for OCPs exposition, therefore these bivalves are completely safe for human consumption. The remaining OCPs were present at much safer levels. The calculated TEQs ranged from 0.0 to 0.4 in wet weight basis, which also represent safe human consumption of these bivalves. It is stated that 53% of the commercial marine sh stock is fully exploited (FAO, 2010) which has been an important motive to promote the mariculture activity all over the world, in an attempt to replace this important primary source of protein to human beings. Shallow water is usually used to host aquaculture farms, due to easy access and higher primary productivity of the coastal ecosystems, which is primordial in bivalve culture. Because of economic reasons it is also interesting that the farms be installed as near as possible to cities, in the sense of reducing logistic costs. However, due to the historical strategic access to the sea, urban centres have been developing in the surroundings of harbors and shipyards facilities. In this sense, high population densities are nowadays observed around the coastal bays that are good shipping berths. These water-bodies have been also used as a nal receptor for the liquid (sewage) and solid waste produced by the cities installed in their drainage basin. Therefore, coastal bays can be the targets of local and/or diffuse sources of contamination, especially in countries where environmental laws are not strict enough and/or scalization is precarious. This frame is in counterpoint of the food production in such aquatic ecosystems, which creates the discussion regarding the risk and benets of the seafood consumption, regarding the presence of contaminants in these basic protein sources. So, environmental science must contribute to this scenario by providing models able to predict the feasible areas able to develop mariculture regarding seafood safety. With this in mind, the present study contributes to the great potential of seafood production that is underused in Brazil, so far. Future studies must be conducted in the sense of reaching a better understanding of the relationship between OCPs and PCBs that are bioaccumulated by marine bivalves reared in impacted bays and their presence in the water column (suspended solids and dissolved fraction) and in the supercial bottom sediment. Such studies are also important in providing tools for the decision-makers to select adequate areas for the development of mariculture activities. Acknowledgements The authors are pleased to thank the local shell-sherman from Guanabara Bay, Mr. Glauco, for providing all the logistic support in the eld work. We also thank the Castelo Branco University for col-

Please cite this article in press as: Galvao, P., et al. Distinct bioaccumulation prole of pesticides and dioxin-like compounds by mollusk bivalves reared in polluted and unpolluted tropical bays: Consumption risk and seasonal effect. Food Chemistry (2012), http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.04.006

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laboration and use of their experimental mussel farm at Sepetiba Bay. The Instituto de Ecodesenvolvimento da Baa de Ilha Grande (POMAR Project) made the sampling feasible at Ilha Grande Bay, so we are deeply grateful for their association in this work. Dr. Tor- res (CNPq Researcher Level 2) is Advance Fellow at the Mount Sinai School of Medicine and is funded in part by Grant 1D43TW0640 from Fogarty International Center of the NIH. This study was funded by CAPES/PROBRAL (270/07) and CNPq/MAPA/SDA (577906/20089). References
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in

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L.

from

the

south

west

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Compostos -HCH -HCH -HCH Pentaclorobenzeno Hexaclorobenzeno p,p' DDT p,p' DDD p,p' DDE transClordano cis-Clordano Heptacloro CisHeptacloro Epxido Aldrin Dieldrin Endrin Endosulfan-I Endo sulfan-II

ANEXO VII - Valores de BSAF dos composto de cada local e ms de coleta BG BG DEZ DEZ DEZ DEZ DEZ DEZ BG BG BG FEB FEB FEB log Kow DEZ DEZ BS BS BS BIG BIG BIG FEB FEB FEB BS BS BS 4,0 3,8 4,0 4,9 5,5 6,3 6,2 6,7 6,2 6,1 6,1 5,4 6,5 5,4 5,2 4,7 4,8 3,9 0,1 0,9 0,7 8,3 0,5 0,6 0,6 0,0 0,1 0,1 0,7 1,2 4,2 0,0 0,9 0,4 5,0 5,5 6,4 4,8 3,3 3,9 0,2 0,4 0,3 3,0 3,1 1,0 0,8 2,5 1,6 1,1 1,0 0,9 9,5 10,3 2,6 12,3 10,0 14,7 14,6 24,4 10,7 12,3 10,1 4,9 6,5 6,0 4,1 4,1 6,3 0,3 0,5 0,4 0,0 0,1 0,1 1,8 4,4 0,5 0,7 0,5 0,6 0,9 0,5 2,6 10,6 0,8 0,8 0,7 0,6 1,2 0,5 0,8 3,8 0,6 1,1 4,9 0,5 0,6 0,5 0,6 1,3 0,3 1,0 5,5 1,3 1,1 1,3 3,6 1,3 0,7 0,8 3,7 0,8 0,8 0,8 1,2 1,9 0,6 0,8 4,0 1,0 0,6 0,9 0,8 1,4 0,5 1,0 1,1 1,0 18,5 24,1 19,1 0,6 0,9 0,9 1,2 0,7 0,3 0,2 0,3 1,0 0,9 1,5 0,5 1,7 0,3 0,3 1,1 1,7 1,1 0,2 0,2 0,2 1,2 0,6 4,7 0,5 0,7 0,4 0,2 1,2 1,1 0,8 0,4 1,1 22,1 19,1 0,4 0,5 0,9 0,4 1,9 0,9 1,0 0,7 0,6 0,4 5,9 1,8 1,2 0,8

FEB BIG 2,6 12,2 0,7 1,0 0,9 1,3 2,9 1,1

FEB BIG 3,3 12,0 0,8 1,0 0,7 2,1 1,8 1,0 3,4

FEB BIG 0,5 3,2 0,6 1,3 0,9 2,9 2,6 1,1

1,2

1,9

0,6

0,6 3,5

0,3 2,6

1,0

0,4 0,7

0,5

3,4 1,9 1,0 20,7 7,1

2,7 1,0 1,0 0,4 20,5 4,3

3,2 1,4 1,1 1,9 11,3 4,1

227

continuao ANEXO VII log BG BG Compostos Kow DEZ DEZ 5,7 1,4 1,5 PCB28 5,8 0,9 1,2 PCB52 6,4 0,5 0,6 PCB101 6,8 0,7 0,5 PCB138 6,9 0,8 0,7 PCB153 7,4 0,7 0,5 PCB180 6,4 0,3 0,8 PCB77 6,4 1,0 PCB81 6,9 0,7 PCB126 7,4 PCB169 6,7 0,8 0,7 PCB105 6,7 1,0 0,9 PCB114 6,7 1,1 0,9 PCB118 6,7 0,2 PCB123 7,2 0,4 0,4 PCB156 7,2 0,7 0,6 PCB157 7,3 0,9 0,7 PCB167 7,7 0,3 0,3 PCB189

DEZ DEZ DEZ DEZ DEZ DEZ BG BG BG BS BS BS BIG BIG BIG FEB FEB FEB 0,9 1,1 0,9 1,9 1,5 1,3 2,0 2,2 2,7 0,4 0,5 0,4 1,2 0,7 0,8 2,0 2,1 2,3 0,2 0,3 0,3 0,8 0,5 0,6 0,6 0,5 0,5 0,7 0,8 0,6 0,9 0,6 0,8 0,9 0,8 0,9 0,8 0,8 0,6 1,0 0,7 0,9 0,8 0,8 1,0 0,9 0,7 0,6 1,0 0,7 0,8 0,7 0,4 0,7 0,8 0,7 0,5 1,2 0,9 1,0 0,8 0,9 0,9 0,8 0,7 0,7 0,8 1,1 8,1 0,3 0,7 0,9 0,2 0,7 0,5 0,7 0,8 1,2 0,3 0,7 0,9 0,2 1,0 0,8 0,8 1,2 0,3 0,7 1,0 0,2

FEB FEB FEB FEB FEB FEB BS BS BS BIG BIG BIG 0,9 0,7 0,4 0,4 0,5 0,4 0,6 0,4 0,3 0,5 0,8 0,6 0,6 0,5 0,5 0,8 1,2 0,8 2,3 2,0 2,1 1,2 1,4 0,9 2,3 1,8 2,0 0,9 1,1 0,8 1,9 1,1 1,6 0,8 1,1 0,7 0,8 1,1 0,9 0,4 0,5 0,4

0,5 0,4 0,7 0,3 1,1

0,5 0,7 0,4 0,8 0,9

0,3 0,6 0,4

0,6 0,5 0,7 0,3 0,7 0,9 0,4

0,4 0,0 0,5 3,7 0,2 0,5 0,8 0,3

0,6 0,5 0,7 5,4 0,3 0,8 0,7 0,6

1,1 0,0 1,9 0,5 1,4 2,0

0,9 0,0 1,7 11,6 0,5 1,3 1,7

1,3 0,0 1,6 1,6 1,4 2,5

1,0 1,1 1,1 1,2 1,1 1,2 0,9

1,1 0,9 1,1 0,9 1,1 1,1 1,1 1,1

0,6 1,0 0,7 0,5 0,8 0,7 0,9

228