Manual de Tcnicas Analticas en el Laboratorio de Toxicologa

Captulo 16 Investigacin de Drogas de Abuso y Productos de Corte

Dr. Luis Alberto Ferrari Perito I del Cuerpo Qumico Forense. Profesor de Qumica Forense en la Universidad de Morn.

Esquema Analtico para la identificacin de cocana pura o adulterada

Introduccin
El esquema analtico que se utiliza para la identificacin de cocana pura o adulterada se ajusta a determinar la composicin cualitativa de una sustancia que, por su aspecto, puede ser clorhidrato de cocana pura o con otros componentes de uso comn que actan como adulterantes. Este esquema de identificacin sufre modificaciones peridicas para considerar la incorporacin de nuevas sustancias utilizadas como adulterantes. En la actualidad no se registra el agregado de sustitutos atpicos del clorhidrato de cocana como anestesina, novocana, cido brico. Se comprueba usualmente la presencia de xilocana (Lidocana). En la prctica, los sustitutos o adulterantes no deben aumentar el precio del producto destinado al consumo y lo frecuente es que sean mucho ms baratos. Entonces, por razones de competencia y a fin de retener o aumentar un grupo consumidor estable, se observa una tendencia a reducir el precio del producto reemplazando los clsicos anestsicos locales por azcares (glucosa, lactosa) y ocasionalmente, sacarosa, en proporciones variables. En nuestro medio los Profesores Guatelli, M y Garca Fernndez, JC han ofrecido un mtodo de anlisis tal como se consigna a continuacin.

Ensayos para la determinacin de cocana:

Ensayo de solubilidad Es importante que en este ensayo se disponga de una muestra homognea. Con frecuencia se observa un polvo blanco y fino, con grupo en nmero y tamao variable por la presencia de porciones hmedas. En estos casos debe pulverizarse la muestra, fraccionarla si es suficiente en un mortero comn de capacidad adecuada, separando con una esptula el material que se adhiere al mortero. El producto pulverizado se tamiza para separar las partculas ms gruesas que se reducen a polvo fino nuevamente mediante mortero. Una vez obtenida la pulverizacin de toda la muestra, se la ubica en un recipiente plstico de tapa a rosca y de boca ancha que se agita durante un tiempo segn el volumen de polvo, hasta disponer de un producto homogneo. Se realiza una observacin a simple vista y con magnificacin adecuada como una lupa comn y siempre que el producto sea homogneo en su aspecto, se obtiene una fraccin adecuada, la cual se coloca en un tubo de ensayo limpio y seco disolvindola en 1 o 2 ml de agua destilada. Se agita y se observa si la muestra se disuelve total o parcialmente, pudindose agregar un nuevo volumen de agua destilada para certificar la presencia de un agregado de baja solubilidad o insoluble. La solubilidad de la cocana base en agua destilada, segn Clarke (1969) es de 1:1300, mientras que la del clorhidrato de cocana en agua destilada es de 1:0,5. Reaccin de la solucin acuosa Del ensayo anterior se toman unas gotas del sobrenadante en un vidrio reloj y se registra la reaccin con papel de pH. Las soluciones de clorhidrato de cocana pura o en mezclas con adulterantes neutros son ligeramente cidas, mientras que el agregado de bicarbonato de sodio confiere una reaccin ligeramente alcalina (pH 8). Los preparados que contienen sulfato
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Manual de Tcnicas Analticas en el Laboratorio de Toxicologa de cocana, presentan un pH cido neto, de acuerdo con el grado de hidrlisis de la sal. La cocana base en agua destilada presenta un pH entre 8 y 8,5. Comentarios El ensayo de solubilidad y la reaccin de la solucin acuosa tienen importancia porque permiten inferir la probable existencia de ciertos compuestos, poco o relativamente solubles, que resultan de utilidad cuando se tratan de sustancias que se utilizan para purificar la cocana o agregarse a la misma para su desnaturalizacin. Por otra parte, la cocana salificada puede coexistir con ciertos adulterantes solubles que no inciden en el pH como azcares reductores y sacarosa. El cido brico que aparece asociado en ocasiones a otros adulterantes es un cido dbil y si bien el aspecto de los cristales (no del producto amorfo) es coincidente con el del la cocana por formar escamas blancas delgadas y de aspecto nacarado, no puede agregarse ms de cierta proporcin por su baja solubilidad en fro (4 % a 18 C) . Adems, sus efectos nocivos limitan su uso como sustituto del clorhidrato de cocana. En muchos pases el uso de cido brico est prohibido incluso como preservador de alimentos. Reactivo de Draggendorff: El ensayo se realiza agregando una o dos gotas de reactivo a 1 o 2 ml de la solucin a investigar. En presencia de alcaloides se obtiene un precipitado de color rojo a rojo naranja. Este reactivo por dilucin se altera y precipita an en ausencia de alcaloides, si la dilucin es mayor se separa triyoduro de bismuto de color negro. Este reactivo produce un precipitado con otros compuestos de estructura ms simple. Para asignarle valor en los ensayos genricos deben obtenerse respuestas positivas tambin con los restantes reactivos. Reactivo pcrico: Es una solucin saturada de cido pcrico. Es el menos sensible de los reactivos que integran el grupo. Soluciones diluidas de los alcaloides suelen dar respuestas negativas de tal manera que, mientras los tres restantes dan positivo, la solucin pcrica no responde al ensayo. Tiene aplicacin en microcristalografa ya que produce formas tpicas con ciertos alcaloides en soluciones puras o en presencia de sustancias no interferentes. Identificacin del in cloruro La mayora de los alcaloides se presentan en forma de clorhidrato, solubles en agua destilada fra. Este anin se identifica mediante el ensayo clsico con nitrato de plata en medio ntrico. Tcnica:En tubo de ensayo limpio colocar una pequea cantidad del producto y disolver en 2 o 3 ml de agua destilada, acidificar con unas gotas de ntrico puro y agregar gota a gota un exceso de solucin de nitrato de plata al 5 %, aparece precipitado blanco, caseoso. Si se quieren efectuar ensayos complementarios para certificar la naturaleza del precipitado (AgCl), deber eliminarse el alcaloide porque de lo contrario interfiere (en caso de comprobar la solubilidad del AgCl con amonaco precipita el alcaloide en su forma bsica). En ocasiones se ha observado, al agregar el cido ntrico, un color azul que cambia de inmediato al rosado o violeta claro, imputable a la presencia de Dipirona. Identificacin del in sulfato A un pequeo volumen de la solucin del alcaloide agregar agregar 2-3 gotas de cido clorhdrico puro, calentar a ebullicin y agregar gota a gota, un ligero exceso de solucin acuosa de cloruro de bario al 10 %. Aparece precipitado blanco en presencia del in sulfato. Identificacin de derivados aril-amnicos En esta denominacin se incluyen los anestsicos locales (sustitutos de la cocana) con grupo amino libre (Novocana, Procana, Benzocana). La xilocana o clorhidrato de Lidocana no responde al ensayo por tener uno de los hidrgenos sustituidos (-NH- en lugar de NH2). El grupo amino libre se halla en posicin para con respecto a los otros sustituyentes del ncleo bencnico. El reactivo es una solucin de p-dimetilaminobenzaldehido 1 % (1 g de PABA en 100 ml de etanol 96, acidificada con 20 gotas de cido sulfrico). El reactivo es estable y se tolera hasta un dbil color amarillo. Debe tomarse en cuenta que el agregado de cido sulfrico
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Manual de Tcnicas Analticas en el Laboratorio de Toxicologa intensifica el color amarillo del reactivo de tratarse de droga adulterada. Con todo, el contraste es neto en presencia de un sustituto con grupo amino libre. Tcnica: En placa de toque colocar unos centigramos de la muestra y agregar una o dos gotas de reactivo. Aparece de inmediato un color amarillo intenso que adquiere color naranja segn la proporcin del sustituto. Como alternativa en lugar del reactivo indicado puede utilizarse una solucin acuosa reciente del cido 1,2 naftoquinon-4-sulfrico al 5 % con el cual se obtiene un color rojo. El reactivo es inestable por lo que debe prepararse en la cantidad necesaria para el momento de la prueba. Investigacin de azcares reductores El agregado de azcares reductores es una adulteracin frecuente. Se emplean con preferencia glucosa o lactosa. Tcnica: en un tubo de ensayo colocar una pequea fraccin de la muestra homognea y 4 a 5 ml del reactivo de Benedict (17,3 g de sulfato de cobre penta hidratado, 173 g de citrato de sodio, 100 g de carbonato de sodio anhidro completando a 1 Lt con agua destilada) calentar a ebullicin y mantener esa temperatura unos minutos. Una reaccin positiva pone en evidencia un color verde que de inmediato se transforma en color rojo ladrillo por precipitacin de xido de cobre (I). Comentarios: durante el calentamiento a ebullicin se puede observar la separacin de un lquido oleoso que se proyecta por las paredes del tubo y que vuelve al seno del lquido al suspender el tratamiento. Si se coloca una cantidad mayor de muestra, por enfriamiento se separa un producto slido blanco que generalmente se asienta sobre el reactivo. Dicho producto es la cocana separada por la alcalinidad del reactivo y el lquido oleoso que es la cocana base en estado lquido (t.f: 97-98 C). El clorhidrato de cocana no funde a una temperatura inferior a 197 C. En la adulteracin de la cocana con azcares reductores se realiza la identificacin con espectrofotometra infrarroja. Investigacin de zucar comn Se trata de un adulterante ocasional. El azcar comn cristalizado se observa a simple vista, finalmente pulverizado se adapta mejor como adulterante. Como la sacarosa no es reductora, se procede a una hidrlisis previa, para los ensayos del poder reductor de los azcares resultantes. Tcnica: en un tubo de ensayo limpio colocar una fraccin de la muestra junto con 5 ml de cido sulfrico al 5 %, calentar suavemente a ebullicin utilizando un broche de madera y concentrar el lquido cido hasta aproximadamente la mitad, dejar enfriar y agregar en pequeas fracciones carbonato de sodio en polvo hasta obtener un precipitado blanco por precipitacin o separacin de cocana base no degradada (de reaccin alcalina) e incorporar el reactivo de Benedict, procediendo como en la tcnica para identificar azcares reductores. Comentarios: la investigacin de azcar comn se ha realizado en muy contadas ocasiones, otorgndose preferencias a las hexosas (glucosa o lactosa) en la adulteracin de cocana con azucares que aparecen en nuestro medio. Investigacin de cido brico El cido brico cristalizado forma escamas incoloras de brillo perlado, solubles en agua en una proporcin del 4% a 15 18 C. La solucin acuosa presenta reaccin levemente cida. El cido brico cristalino se usa en la adulteracin del clorhidrato de cocana puro, cristalino, pero cuando el producto fraccionado se ofrece en forma pulverulenta, se adultera con cido brico amorfo. Existen varios procedimientos descriptos para la determinacin de cido brico. Un procedimiento prctico y simple se basa en la formacin del ster metil brico. Tcnica: en una cpsula de porcelana de 5 a 6 cm de dimetro, escrupulosamente limpia y seca, colocar una fraccin de la muestra y alrededor de 10 -15 ml de alcohol metlico p.a ligeramente con cido sulfrico. Colocar la cpsula en un ambiente oscuro e inflamarla. De inmediato se observa un color verde por formacin del borato de metilo que generalmente, prevalece sobre el color azul de la llama producida por la combustin del metanol. No se han registrado interferencias en este ensayo. Pequeas cantidades de cido brico originan un color ntidamente perceptible en la oscuridad.
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Ensayos de identificacin para cocana Se dispone de varios procedimientos para la identificacin de cocana. Se cuenta con el ensayo de color en fase orgnica, ensayo de olor por formacin de benzoato de metilo y cromatografa en capa delgada (TLC). Ensayo de color: El ensayo de Scott aprovecha la formacin de un complejo de color azulado con el tiocianato de cobalto. Son interferencias la xilocana, butacana, fenciclidina y metapireno. Si se agrega a la reaccin anterior gotas de HCl concentrado y luego cloroformo, la fase orgnica adquirir un intenso color azul, no reaccionando los interferentes. El mecanismo de la reaccin es desconocido. Ensayo de olor: Se basa en la hidrlisis de la cocana por tratamiento con hidrxido de potasio en medio metanlico. Aprovecha la formacin de benzoato de metilo de un olor caracterstico detectable a concentraciones bajas. Tiene una sensibilidad y especificidad muy superiores a muchos de los ensayos indicados para cocana. Cromatografa: La TLC es una tcnica analtica ampliamente utilizada en cualquier laboratorio de toxicologa analtica. A travs del tiempo se ha optimizado su utilizacin, destacndose su bajo costo, rapidez y confiabilidad. Se han propuesto diversos solventes para el desarrollo. Se ha propuesto un sistema que resuelve bien la lidocana. En los sistemas tradicionales esta no se separa convenientemente y adems, debido a la falta de reactividad de los anestsicos arilamnicos, puede interpretarse errneamente las manchas que se puedan visualizar. El solvente de corrida consiste en una mezcla de cloroformo: acetona: amonaco 40:60:III. Como revelador se utiliza una solucin de iodoplatinato de potasio (45 ml de ioduro de potasio al 5%, 5 ml de cloruro de platino 5 % y 100 ml de agua destilada). La Comisin de Expertos de las Naciones Unidas ha establecido que el criterio de identidad para las drogas de abuso es la eleccin mnima de dos parmetros analticos independientes y dice textualmente: En cualquier caso concreto, al seleccionar estos dos parmetros deber tenerse en cuenta la droga en cuestin y los recursos de laboratorio de que disponga el analista. Por ejemplo dos sistemas no correlacionados de TLC se contaran como dos parmetros. En este contexto, dos sistemas no correlacionados de TLC significan que los sistemas de solventes o la fase estacionaria son completamente distintas. La cromatografa gaseosa y la HPLC tambin son tcnicas que se adaptan bien al anlisis de una muestra de cocana. Aislamiento, purificacin e identificacin de cocana proveniente de materiales biolgicos (sangre, orina, vsceras y saliva) El aislamiento de cocana a partir de tejidos humanos pueden efectuarse mediante los mtodos tradicionales basados en la desecacin con sulfato de sodio anhidro de las vsceras previamente desmenuzadas y posterior extraccin etrea y clorofrmica; precipitacin proteica con sulfato de amonio, etc. Debe tenerse especial cuidado con la temperatura (mayores a 45 C) ya que la cocana es termolbil. Actualmente, estos mtodos de aislamiento estn siendo reemplazados por la extraccin en fase slida (SPE), que consiste en la retencin del analito de inters en un relleno basado en partculas de slica modificada dentro de una columna plstica. Son muy utilizadas las de C-2, C-4, C-8, C-18 o mezclas de rellenos no polares, medianamente polares o polares. La ventaja en el uso de esta metodologa radica en los altos porcentajes de recuperacin, obtencin de eluatos puros, disminucin del tiempo de trabajo y ahorro de reactivos.

Investigacin en bebidas analcohlicas:

Tcnica: En cpsula de porcelana colocar 50 a 100 ml de la bebida en estudio, calentar a bao Mara con agitacin peridica para eliminar el CO2, enfriar y trasvasar a una ampolla de
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Manual de Tcnicas Analticas en el Laboratorio de Toxicologa decantacin controlando la reaccin que debe ser cida (incorporar HCl si fuera necesario). A continuacin, extraer con cloroformo (20 ml) agitando enrgicamente unos minutos, dejar separar las fases, decantar y proseguir con la fase acuosa cida. Tratar dicha fase con cantidad suficiente de NH3 puro hasta reaccin alcalina y luego extraer la cocana base con 15 ml de cloroformo. Dejar separar las fases, filtrar la fase clorofrmica por sulfato se sodio anhidro y concentrar a menos de 45 C. Utilizar este extracto redisuelto en cloroformo para su anlisis cromatogrfico o en HCl al 1 % para reacciones de precipitacin. Estudios en sangre y orina: La sangre, orina y saliva pueden ser procesadas por los mtodos SPE de fase unida o bien columnas con rellenos hidroflicos del tipo Extrelut (Merck). La tcnica es sumamente sencilla y los resultados satisfactorios. En el caso de orina existen en la actualidad placas o tiras reactivas comerciales basadas en mtodos inmunolgicos y que no requieren del aislamiento del analito. Este mtodo es rpido, requiere de poco muestra y posee muy buena sensibilidad. Sin embargo est sujeto a reacciones cruzadas y los resultados positivos deben ser confirmados mediante un mtodo analtico instrumental de ptima sensibilidad para detectar niveles bajos de la droga madre y sus metabolitos. Algunos estudios que se han efectuado en humanos indican que si una muestra de orina es recolectada luego de un lapso superior a 12 hs desde el momento de consumo, muy poca cantidad o nada de cocana ser detectada. Es decir, si la cocana es detectada en orina, se admite que su administracin se produjo hasta 12 hs antes de la recoleccin de la muestra. Este perodo se toma slo como referencia ya que depende de numerosos factores, muchos de ellos individuales. La benzoilecgonina principal metabolito puede ser detectada hasta 36 hs despus de la administracin de cocana y permanece en concentraciones muy bajas hasta las 60 hs. En orina, se puede encontrar entre el 1-9 % como cocana sin metabolizar y entre 35 al 54 % como benzoilecgonina. En cuanto a la sangre, se debe considerar la accin de enzimas sobre la cocana que la degradan y la ventana corta de deteccin de solo algunas horas en muchos casos. La preservacin de la muestra es importante ya que se ha informado que cocana intacta en muestras hemticas deficientemente resguardadas pueden transformarse in situ en compuestos como los producidos por biotransformacin endgena, tal como ecgoninametilester o benzoilecgonina. La preservacin de la muestra a baja temperatura, pH 5 y agregado de 2% de fluoruro de sodio estabiliza la cocana en sangre pudiendo permanecer hasta 200 das sin transformacin qumica dentro del reservorio (Insenschmid, 2004). Cromatografa gaseosa (GC-FID) (Tcnica utilizada para el entrenamiento de Naciones Unidas, 1989) Tcnica: Columna 2m, d.i. 2 4 mm, SE 30, OV 17. Gas portador nitrgeno 30 ml / minuto. Detector FID (detector de ionizacin por llama) Hidrgeno a 30 ml/min, aire 450 ml/min. Condiciones de trabajo Temperatura del inyector: 220 C. Temperatura del horno: 220 C. Temperatura del detector: 300 C. Patrn interno: n- tetracosano o tetrafeniletileno. Agente derivatizante: N-O bis- trimetilsililacetamida o N-metil-N-trimetilsililtrifluoroacetamida (MSTFA). Cromatografa lquida de alta presin (HPLC): Tcnica: Columna: 160 mm, d-i: 5 mm. Material de relleno: Octadecil-Si, dimetro de partcula 5 m. Fase mvil
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Manual de Tcnicas Analticas en el Laboratorio de Toxicologa Eluyente A: Metanol (300 ml), agua (700ml), 1 % cido fosfrico (v/v), n-hexilamina (10,71 g/ 14 ml pH 2,5). Eluyente B: Metanol (1000ml), 1 % cido fosfrico (v/v) n-hexilamina (10,71 g/ 14 ml pH 2,8). Detector UV 230 nm.

Cannabis y sus componentes

Anlisis fsico de los productos de Cannabis. Los caractersticas microscpicas de Cannabis sp., permiten reconocer por tcnicas microgrficas el material que puede estar finamente particulado o en grandes trozos. Los abundantes tricomas presentes en los distintos componentes de la planta (hoka, subunidades floridas y frutos) son los elementos histolgicos ms importantes para distinguir la Cannabis sativa. Se reconocen tambin pelos cistolticos unicelulares y tricomas o pelos glandulares. Los pelos glandulares pueden observarse como glndulas ssiles, pequeos tricomas glandulares pluricelulares (con pie y cabezuela). Ensayos presuntivos Se trata de reacciones presuntivas adecuadas para realizarse en terreno, de manera de poder descartar a priori el estar en presencia de material proveniente de Cannabis. Reaccin con Fast Blue: La reaccin se fundamenta en la reaccin de copulacin de los canabinoides con Fast Blue B formando un compuesto de color prpura intenso. Se utilizan dos papeles de filtro de manera de retener en el primero compuestos fenlicos que se encuentran en Cannabis y que interfieren con la reaccin produciendo falsos positivos. Con dos papeles de filtro se forma un embudo realizando cuatro dobleces en forma adecuada. Se coloca una pequea cantidad pulverizada de la planta o resina en el centro del papel. Se aaden dos gotas de ter de petrleo de modo que penetren en el papel de filtro inferior, dejando secar el papel de filtro inferior. Se deposita una pequea cantidad de Fast Blue B slido en el centro del papel inferior. Se aaden dos gotas de agua al reactivo y se extiende la mezcla sobre el papel con una esptula. Si aparece un color prpura, se est en presencia de canabinoides. Se recomienda no usar el reactivo en exceso para evitar el amarronamiento de la mancha. Ensayo de Duquenois-Levine: La prueba puede realizarse sobre material pulverizado o sobre su extracto. Este se obtiene de la siguiente forma: 100 mg de muestra se extraen con ter de petrleo. Filtrar y evaporar en cpsula hasta sequedad. Se coloca una pequea cantidad del material sospechoso o su extracto. Se agregan 2 ml del reactivo preparado con acetaldehdo y vainillina en etanol al 95 % agitando 1 minuto. Se aaden luego 2 ml de HCl conc por los bordes del tubo, dejando en reposo durante 10 minutos. En presencia de cannabinoides aparece en la interfase una gama de colores: verde, azul y violeta. Puede extraerse en fase clorofrmica observndose color violeta. Cromatografa en capa delgada Tiene por objeto poner de manifiesto los componentes canabinoides ms importantes: CBD, THC y CBN. La siembra se hace a partir de un extracto obtenido con el contacto de una hora del material con acetato de etilo que luego se concentra por calentamiento en bao mara. Como fase estacionaria se utiliza Slica Gel G con indicador de fluorescencia a 254 nm. Respecto a la fase mvil se han propuesto muchas mezclas de las cuales dos que ofrecen resultados satisfactorios son ter de petrleo: ter etlico 80:20 y benceno: n-hexano: dietilamina (75:30:5). Como fase mvil se utilizar una mezcla acetato de etilo: metanol: amonaco 90:10:II. El agente revelador es Fast Blue B en agua destilada al 1 % y posterior exposicin a vapores de amonaco. Este revelador tiene un lmite de deteccin de aproximadamente 0,5 g.
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Deteccin de productos canbicos en sangre Algunos investigadores han informado la dificultad de obtener muestras de sangre de sujetos fumadores ya que los mismos evitan ser identificados. En los casos en que esto es posible se procede de la siguiente manera: Tcnica: A 5,0 ml de sangre total se adiciona 1,0 ml de cido tricloroactico al 10 % luego se agrega 10 ml de n-hexano y despus de agitacin durante varios minutos se calienta a reflujo durante 30 minutos. Dejar enfriar, centrifugar, separar y reservar la capa orgnica. Con el resto se realiza una segunda extraccin utilizando el mismo volumen de solvente. Las dos fracciones orgnicas reunidas se lavan con 10 ml de solucin acuosa saturada de NaCl, se secan con sulfato de sodio anhidro, se concentran a presin reducida hasta obtener un volumen aproximado de 0,5 ml. La concentracin debe realizarse a temperatura ambiente para reducir la prdida de compuestos voltiles. Sobre el extracto final se efectan ensayos cromatogrficos en capa delgada o CGL. Cromatografa gaseosa (CG-FID) Es utilizada fundamentalmente con fines cuantitativos. Las condiciones de trabajo pueden resumirse a continuacin: Detector FID (ionizacin de llama) H2: 30 ml/min, aire 300 450 ml/min Columna 2 m, d.i. (2 4) m Relleno 3 % OV 17, SE 30, OV 1 Gas portador N2 a 30 ml/min. Condiciones de trabajo: Temperatura inyector: 270 C Temp. Horno: isotrmica 240 260 C Patrn interno: n-tetradecano, tetracosano. Canabinoides en saliva Hasta hoy no se ha encontrado una correlacin entre la concentracin plasmtica de THC en sangre y saliva. Pese a ello, se han observado niveles similares o superiores de THC en saliva respecto al plasma de individuos fumadores de marihuana. Se sugiere que las concentraciones de THC informadas en saliva provienen de un alojamiento o secuestro de la misma en la cavidad bucal durante el fumado. El resultado positivo en este fluido permite detectar la droga psicoactiva por un tiempo ms prolongado que en sangre. Si bien no se tiene gran informacin acerca de los metabolitos de canabinoides en saliva, se estima que el derivado carboxilado puede provenir del mismo acto de fumado o bien del metabolismo bucal. Por otra parte, se ha observado que la ingestin de alimentos y bebidas comunes no interfieren en la deteccin de canabinoides en saliva. Canabinoides en orina Es el medio que permite detectar estos compuestos por un tiempo ms prolongado (5 a 20 dias) dependiendo de la dosis y frecuencia de uso. Como resultado de la biotransformacin operada en el hgado, el THC es convertido, a travs de varios intermediarios, en 11-nor- 9- THC carboxlico en orina. Actualmente se utilizan tiras reactivas o placas comerciales basadas en tcnica inmunolgica. El resultado positivo debe ser confirmado mediante un mtodo analtico independiente. Debe tenerse en cuenta que los valores de corte para estas estructuras se hallan en el orden de los nanogramos, por lo que se deben extremar los cuidados en la fase de aislamiento cuando se debe confirmar el resultado obtenido por la va del ensayo preliminar. Tcnica: colocar 5,0 ml de orina en tubo de centrfuga de 15 ml. Adicionar 0,5 ml de solucin de HONa 1 N. Incubar en bao de agua a 50 60 C durante 15 minutos. Enfriar y acidificar con HCl 1N. Agregar 5 ml de n-hexano agitando suavemente durante 20 minutos. Centrifugar a 1000 g durante 5 minutos. Transferir la fase orgnica con la ayuda de una pipeta Pasteur a otro tubo y evaporar a temperatura ambiente mediante corriente de aire seco.
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Manual de Tcnicas Analticas en el Laboratorio de Toxicologa Resuspender el residuo con 3-4 gotas de una mezcla de cloroformo-metanol (3:1) y sembrar en placas cromatogrficas de alta resolucin (HPTLC) conjuntamente con los respectivos patrones. Desarrollar con el sistema n-heptano:n-butanol: cido actico glacial 90:9:1 en una cuba saturada durante 15 minutos. O bien el sistema Eter Etlico: eter de petroleo (2:8) Secar la placa a temperatura ambiente y revelar rociando con dietilamina seguido del reactivo Fast Blue BB al 0,1 % en agua-metanol (9:1). Esperar 10 minutos, observar y rociar nuevamente con dietilamina.

GHB (Gamma hidroxi butirato)

Es un eficaz agente depresor del sistema nervioso central e hipntico, no obstante su baja potencia. A pesar de su escasa aplicacin en terapetica, se lo est utilizando en la actualidad como droga objeto de uso indebido. Como droga de abuso es asequible en forma slida o lquida. A principio de 2000 la comunidad cientfica comenz a prestar atencin en esta droga, que se ha popularizado rpidamente, principalmente en Europa y Estados Unidos. Hasta hoy en nuestro pas su consumo ha sido escaso. El GHB es usado por fsico-culturistas como alternativa a los esteroides anablicos con el objeto de aumentar la masa muscular. Otros lo utilizan en circunstancias recreacionales por los comprobados efectos de euforia, deshinibicin y sedacin. El mecanismo de accin no ha sido dilucidado completamente hasta hoy, si embargo se sabe que atraviesa rpidamente la barrera hematoenceflica. Algunos investigadores se encuentran estudiando en la actualidad su posible accin neurotransmisora y/o neuromoduladora. Se acepta que altera la actividad dopaminrgica, dependiendo de la dosis incorporada. La toxicidad del GHB se caracteriza por nauseas, vmitos, sudoracin profusa, incontinencia, disturbios visuales, ataxia, bradicardia, hipotensin; respondiendo as a los clsicos efectos colinrgicos. La depresin respiratoria puede ser severa al igual que el grado de inconciencia; esto dependera de la respuesta particular del individuo. Las respuestas deletereas varan segn la susceptibilidad del individuo. Hay quienes con dosis de 10 mg/Kg presentan amnesia e hipotona; otros requieren mayores dosis. En general la euforia se adquiere con dosis aproximadas a los 25 mg/Kg. Se ha informado que la incorporacin de 60 mg/Kg o ms ha provocado coma e inconciencia permanente que aparece a los 30-40 minutos de incorporada la droga. Los efectos del GHB aparecen en general a los 10 minutos y el pico mximo en plasma aparaece entre 20-45 minutos. Los efectos duran entre 2-5 horas aunque dependen de la dosis. Incorporacin de concentraciones altas pueden llevar el efecto a 6 horas de duracin. Generalmente provocan tolerancia con el uso consuetudinario. Eliminacin de GHB Luego de una dosis intravenosa el GHB sigue una eliminacin de orden 0, por lo que no tiene en realidad una vida media y por tanto el tiempo requerido para eliminar la mitad de una dosis se incrementa con la dosis consumida. Generalmente se eleimina rpidamente, haciendose indetectable en plasma a las 8 horas y en orina a las 12 horas (Hoes et al, 1980). A continuacin pueden observarse los resultados hallados por Kintz, 2005. Aqu notamos que el autor detecta hasta las 6 horas GHB en sangre, mientras que en orina encuentra valores considerables hasta las tres horas y prcticamente indetectable a partir de las 6 horas.

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Excrecin de GHB en sangre (Kintz, 2005)

Excrecin de GHB en orina (Kintz, 2005) Analtica toxicolgica El GHB es una molcula polar de muy difcil aislamiento desde los tejidos o humores. Algunos autores prefieren extraerla como butirolactona (GBL) ajustando el pH y posteriormente derivatizndola para el anlisis mediante GC-FID o GC-MS. El mtodo que exponemos a continuacin no requiere la conversin a GBL y se derivatiza qumicamente por sililacin. Extraccin de GHB en orina mediante tcnica SPE (Telepchak et al, 2004) 1. Se toman 200 l de orina, agregando el estndar interno (GHB-d6) y 100 l de buffer fosfato 0.1 M; pH 6.0. Mezclar y aplicar en Vortex. 2. Utilizar columna SPE con sorbente CLEAN SCREEN ZSGHB020, conteniendo 200 mg de partculas de slica de fase unida. 3. A continuacin se aplica 3 ml de metanol p.a, seguido de 3 ml de agua deionizada y o.5 ml de buffer fosfato. 4. Introducir la muestra en el cartucho plstico del sorbente y comenzar la aspiracin bajo el sistema de cmara de presin. Tomar la muestra filtrada en tubos adecuados dentro de la cmara. 5. Lavar la columna con una mezcla de metanol-amonaco(99:1) 6. Evaporar a 60C o con corriente de nitrgeno.
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Manual de Tcnicas Analticas en el Laboratorio de Toxicologa 7. Agregar 200 l de dimetilformamida y 1 ml de hexano saturado con dimetilformamida, mezclar por inversin durante 5 min. Centrifugar a 3000 rpm Transferir la capa inferior de dimetilformamida a un tubo limpio. 8. Evaporar a 50C utilizando corriente de aire o nitrgeno. 9. Agregar 100 l de acetato de etilo + 100 l de BSTFA (con 1% TMCS). Mezclar o agitar en vortex. No se requiere calor. 10. Inyectar 1-2 l de muestra en el instrumental GC. Iones monitoreados GHB-diTMS 233, 234, 235 GHB-D6-diTMS: 239, 240, 241 Couper & Marinetti, 2002, consignan otras metodologas mediante cromatografa lquida de alta presin (HPLC), adems de otras tcnicas en cromatografa gaseosa. Interpretacin de resultados: Debe tenerse gran precaucin en la interpretacin de los hallazgos de laboratorio, ya que este es producido en forma endgena postmortem; ms an si existi sobrevida luego de la ingesta de GHB que pueden arrojar concentraciones similares a las producidas luego del bito. En este caso la diversidad de matrices biolgicas recolectadas puede ayudar a la interpretacin (por ejemplo: humor vtreo, lquido cefalorraquideo y orina). Datos aportados por investigadores sobre niveles de GHB en organos o humores de individuos no expuestos a GHB pueden facilitar la interpretacin (ejemplo: en humor vtreo se ha informado niveles de 1-6 mg/L en ocho casos postmortem). Por ltimo hacemos hincapi en la preservacin del espcimen a temperaturas menores a los 0C y el envo urgente del material al laboratorio en caso de sospecha de consumo de GHB. DETERMINACIN DE ANFETAMINAS Y DERIVADOS ANFETAMINICOS DE ANILLO SUSTITUDO En nuestro medio los compuestos anfetamnicos no constituyen las drogas de abuso de mayor consumo. Sin embargo se ha informado un incremento de volumenes incautados a partir de los aos 90. Dentro de los diversos compuestos de la familia, los derivados anfetamnicos de anillo sustitudo son los que ms se utilizan, por ejemplo el xtasis (metilendioximetanfetamina). Dada la entrada en vigencia de la ley de desfederalizacin de drogas hacia fines de 2005, es presumible que los laboratorios o gabinetes policiales y/o judiciales de las provincias que adhirieron a la ley se vean exigidos a imponer una metodologa de rastreo para este tipo de sustancias. La siguiente tcnica ha sido ensayada con xito por los autores. Cromatografa en placa delgada (TLC) Muestras: sangre, orina y tejidos Mtodo de aislamiento: Extraccin en fase slida (SPE) con slica de fase unida C-18 o copolimricas mix o extraccin con columnas rellenas de tipo Extrelut. Fase estacionaria: Silicagel G con indicador de fluorescencia F 254. Fase Mvil: Acetato de etilo-metanol-amonaco (85:10:5) Estndares: de diversos anfetamnicos en concentraciones de 5 ug/uL Revelado: Secuencial del siguiente modo: a) Fast Black K ( 10 mg/100ml, disuelto en agua destilada) b) Solucin de cido clorhdrico al 30%(v/v). c) Iodoplatinato de potasio acidificado Asperjar con la solucin a) observando la coloracin de las mculas. Luego calientese la placa en estufa a 80C unos 5 minutos. A continuacin se asperja con solucin de HCl al 30%. Observar el cambio de coloracin y/o desaparicin de la mcula.Colocar la placa en estufa o plancha calefactora a 80C por 5 minutos. Finalmente se roca con solucin de Iodoplatinato de potasio, observando la coloracin de las mculas. El resultado se resume en la siguiente tabla:

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Manual de Tcnicas Analticas en el Laboratorio de Toxicologa Droga de abuso Anfetamina Metanfetamina Mescalina Metilfenidato MDMA (xtasis) Fenmetracina Rf 0.52 0.46 0.30 0.77 0.40 0.55 Fast Black K Rojo Naranja Rojo Naranja Prpura Naranja HCl 30% Naranja Desaparece color Naranja Desaparece color Atenuado Desaparece color Iodoplat.de potasio Rojizo s/fondo azul Gris s/ fondo azul Gris azulado Gris Gris Sin color

Bibliografa
Ferrari, Luis A, Informe sobre Identificacin y anlisis de drogas de uso indebido, Divisin Narcticos, Naciones Unidas, pp. 10-354, 1989. Forensic and clinical applications of solid phase extraction. M.Telepchak, T.F.August and G Chaney (Eds.) Humana press, pp.91-97, 2004. Kintz, P. Testing for a nightmare or GHB. Proceedings First Southamerican Regional TIAFT meeting. La Plata, Argentina, 2005. Spinelli E., Silva O. A., Rev. Brasileira de Toxicologa 8 (2), 21-28, 1995. Clarkes analysis of drugs and poisons. Widdop, Moffat, Osselton Eds. The Pharmaceutical Press, 2004. Scheurer, C. et al, SPE of Drugs from biological tissues. A Review. J. Anal. Toxicology, 1993. Cardona P.S, Chaturvedi A.K, Soper J.W and Canfield, D.V Simultaneous analyses of cocaine, cocaethylene and their possible metabolic and pyrolytic products. Forensic Sci. Int. 157 (1) 46-56, 2006 Kuzmack, J. The use of copolimeric phases to enhance recovery and selectivity in SPE. World Wide Monitoring, 1998. SPE Choosing the best sorbents. The separation Times. Vol. 3 N 3, 1987. Extrelut, Nuevo procedimiento para la extraccin de sustancias lipfilas. Diagnstica Merck.1992 Couper, F.J & Marinetti, L.J. Gamma Hydroxybutirate- Effects on human performance and behaviour. Forensic Sci. Rev. 14, 101-119, 2002 Baselt, R. Disposition of toxic drugs and chemicals in man. 6 Th. Ed. Biomed. Publish, Foster City, 2002.

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