Las clulas de Kupffer en graso enfermedad heptica no alcohlica: El punto de vista emergente

Gyrgy Baffy Acceso Abierto

,

Brigham y el Hospital de la Mujer y el VA System Boston Healthcare, Escuela de Medicina de Harvard, la Seccin de Gastroenterologa, 150 S. Huntington Ave., Boston, MA 02130, EE.UU.

Enfermedad del hgado graso no alcohlico (EHGNA) se ha convertido en la enfermedad heptica ms comn de nuestros tiempos. Esteatosis simple, una manifestacin aparentemente inocente de hgado graso no alcohlico, puede progresar a la esteatohepatitis y cirrosis, pero este proceso no es bien entendido. Desde NAFLD se asocia con la obesidad y la resistencia a la insulina, los mecanismos que vinculan el metabolismo lipdico de inflamacin ofrecen conocimientos sobre la patogenia. Un paralelismo importante entre la patologa relacionada con la obesidad de tejido adiposo y el hgado se refiere a la nueva funcin de los macrfagos y la evidencia creciente de que las clulas de Kupffer contribuir crticamente a la progresin del hgado graso no alcohlico. Los receptores tipo Toll, en particular, TLR4, representan un importante conducto para el reconocimiento peligro vinculado a la activacin de clulas de Kupffer y este proceso pueden ser perturbadas en mltiples pasos en la EHNA. La esteatosis puede interferir con la microcirculacin sinusoide y el aclaramiento hepatocelular de seales de peligro derivadas del husped microbiana y, mejorando la capacidad de respuesta de las clulas de Kupffer. Homeostasis de los lpidos alterados en la EHGNA puede afectar desfavorablemente receptor TLR4 complejo montaje y la clasificacin, interferir con la sealizacin de redistribucin de flujo, promover lazos de amplificacin, y deteriorar la regulacin negativa incluyendo la alternativa de activacin de las clulas de Kupffer. Estos eventos se promueven an ms la secrecin de adipoquinas alterada y la produccin de especies reactivas del oxgeno.Orientacin especfica de estas interacciones puede proporcionar estrategias ms eficaces en el tratamiento de la EHNA.

Palabras clave
Esteatohepatitis ; Los macrfagos ; Los receptores tipo Toll ; La adiponectina ; Disociacin de protenas

Abreviaturas
DAMP , patrn molecular asociado a daos ; LPS , lipopolisacrido ; LXR , receptor X del hgado ; NAFLD ,enfermedad del hgado graso no alcohlico ; NASH , esteatohepatitis no alcohlica ; PAMP , patrn molecular asociado a patgenos ; PPAR , receptor activado por el proliferador de peroxisomas ; ROS ,especies reactivas del oxgeno ; TLR , Toll-like receptor ; UCP2 , desacoplamiento de protenas-2

1. Introduccin
Enfermedad del hgado graso no alcohlico (EHGNA) se ha convertido en la enfermedad heptica ms comn en los Estados Unidos y otros pases desarrollados, afectando a ms de un tercio de la poblacin [1]. Este notable incremento en la prevalencia de NAFLD coincide con la epidemia de obesidad. NAFLD es un espectro de trastornos, desde la esteatosis simple que se considera sobre todo una condicin de inocente.Siendo tanto la fuente como el resultado de la resistencia a la insulina, sin embargo,

la esteatosis puede estar asociada con un mayor riesgo de morbilidad cardiovascular [2] . La esteatosis tambin puede alterar la historia natural de otras enfermedades del hgado, como la hepatitis viral crnica [3] . Lo ms importante, en aproximadamente el 15% de todos los casos de NAFLD esteatosis puede evolucionar a esteatohepatitis, un popurr de inflamacin, dao hepatocelular y fibrosis, resultando a menudo en la cirrosis e incluso cncer hepatocelular [4] . Aunque esta secuencia completa de la progresin es relativamente rara, la abrumadora prevalencia de NAFLD predice una importante carga asistencial. NAFLD se defini originalmente por Ludwig y sus colegas como una condicin indistinguible por la histologa de la esteatohepatitis alcohlica, aunque la mayora de los pacientes llevan el sello de la obesidad y el sndrome metablico [5] . Posteriormente, el trmino "hgado graso no alcohlico" se introdujo para denominar a todo el espectro de la enfermedad de hgado graso asociada a la obesidad [6] . La patogenia de la EHNA es a menudo interpretado por la hiptesis de la "doble golpe" [7] . En consecuencia, la acumulacin de lpidos hepatocelular presenta el "primer golpe", seguido de un 'segundo golpe' en el que los mediadores proinflamatorios y especies reactivas de oxgeno (ROS) inducen la inflamacin, dao hepatocelular y fibrosis [8] . Si bien este es un marco conceptual til, nuestra comprensin de los mecanismos celulares y moleculares que definen la EHNA y guan las aproximaciones teraputicas sigue siendo insuficiente.Enfermedad heptica a menudo se caracteriza por interacciones complejas entre residentes y clulas reclutadas que pueden determinar la forma y gravedad de los cambios patolgicos y este principio se aplica ciertamente a NAFLD. A medida que nuestro conocimiento se expande sobre el papel de los macrfagos en reconocimiento peligro, la tolerancia inmune, y la homeostasis de los lpidos, la importancia de estas vas celulares, ya que pertenecen a los macrfagos del hgado en hgado graso no alcohlico es cada vez ms apreciado. Esta revisin resume las pruebas y consideraciones para la participacin de las clulas de Kupffer en la patogenia de la EHNA, mientras que se remite al lector a la literatura actual sobre otros aspectos emergentes de la enfermedad. Desde el aislamiento, la cultura y la transfeccin de clulas de Kupffer es difcil, algunas conclusiones se originan a partir de observaciones en otras poblaciones de macrfagos. Por otra parte, las diferencias especficas de las especies requieren cuidado al extrapolar los resultados experimentales de la enfermedad humana. No obstante estas limitaciones, que crecen rpidamente conocimientos sobre este apasionante campo invitan a una revisin de los avances ms relevantes.

2. Las clulas de Kupffer en la salud y la enfermedad: consideraciones generales

Las clulas de Kupffer constituyen el componente ms importante del sistema retculo endotelial, lo que representa un 80-90% del total de los macrfagos del tejido en el cuerpo [9] . Central a la inmunidad innata, las clulas de Kupffer son responsables de rpida contencin y limpieza de partculas exgenas y material inmunoreactivo que se percibe como extraas y dainas [10] . Similar a otros macrfagos, las clulas de Kupffer tambin detectan seales moleculares endgenos que pueden resultar de la homeostasis perturbada del host. Las clulas de Kupffer reconocen rpidamente el peligro potencial de ambas fuentes y se someten a la activacin. A travs de una serie de eventos celulares coordinados, las clulas de Kupffer activadas estn habilitadas para (1) lanzar un ataque bioqumico e iniciar interacciones con los hepatocitos y otras clulas hepticas mediante la liberacin de diversos mediadores biolgicamente activos, incluyendo citoquinas, quimioquinas, eicosanoides, enzimas proteolticas, ROS , y xido ntrico; (2) reclutar y retener a los jugadores celulares no residentes en el hgado, como los neutrfilos, clulas asesinas naturales (NK) linfocitos T, clulas NK, y la sangre derivados de los monocitos macrfagos por la expresin de molculas de adhesin y quimiocinas que segregan, (3 ) engullir, ingerir, y eliminar las partculas slidas, incluyendo microorganismos, clulas apoptticas, y restos de clulas, y (4) procesar y presentar antgenos a atraer a las clulas citotxicas y T reguladoras y por lo tanto contribuir tambin a la inmunidad adaptativa [10] , [11] ,[12] , [13] , [14] y [15] . Estas funciones de las clulas de Kupffer necesitan un control riguroso para evitar una escalada de la respuesta inflamatoria. El dao heptico puede o bien ser el resultado de la incapacidad de las clulas de Kupffer reconocer correctamente y eliminar las molculas de peligro o de la movilizacin excesiva de los mecanismos citotxicos y el fracaso para detener la inflamacin. En consecuencia, las clulas de Kupffer estn predispuestos para modular la patognesis de hgado graso no alcohlico de muchas maneras.

3. Heterogeneidad topolgico y funcional de las clulas de Kupffer

Las clulas de Kupffer representan alrededor del 10% de la poblacin celular total del hgado de reposo y estn ubicados estratgicamente en los sinusoides hepticos, que proporcionan la estructura anatmica de confluencia a nivel capilar de la vena porta y la arteria heptica afluentes [10] y [12] . Por lo tanto, las

clulas de Kupffer entran en contacto con una variedad de sustancias moleculares, tales como nutrientes, los microorganismos, los restos celulares, complejos inmunes, y agentes txicos transportados por la circulacin heptica. Si bien inicialmente descrita como "macrfagos tisulares fijos ', las clulas de Kupffer migran entre los sinusoides y el espacio de Disse [16] y orquestan una estrecha relacin entre los diversos residentes y clulas reclutadas del hgado. Especfica a su posicin dentro del acino heptico, las clulas de Kupffer difieren en su densidad de poblacin, caractersticas morfolgicas, y las funciones fisiolgicas [17] y [18] . Esta distribucin se correlaciona con el gradiente de concentracin acinares de sustratos inmunorreactivas y factores reguladores. Clulas de Kupffer grandes estn situados en la zona periportal con la exposicin a seales moleculares entrantes. En consecuencia, las grandes clulas de Kupffer muestran una mayor fagocitosis, la actividad de la proteasa lisosomal, y la produccin de mediadores biolgicamente activos que las clulas ms pequeas de Kupffer en reas mediados de zonales y perivenosos [17] y [18] . Clulas de Kupffer grandes pueden ser identificados por expresin en la superficie celular de la CD163 receptor scavenger, tambin descrito como antgeno ED2 en la rata [19] . Por el contrario, la protena transmembrana glicosilada CD68 (ED1) se encuentra en los lisosomas y se puede detectar en todas las clulas de Kupffer independientemente de su localizacin acinar [20] . Mientras que el cambio de la abundancia y distribucin de las clulas de Kupffer puede reflejar la ganancia o prdida de la funcin anmala, la importancia de la heterogeneidad zonal queda por ver en la EHGNA.Aumento de la presencia de las clulas de Kupffer CD68-positivo se correlaciona con la gravedad histolgica de hgado graso no alcohlico humana [21] . Por otra parte, los agregados de clulas de Kupffer ampliadas estn presentes en regiones de perivenulares el hgado de pacientes NASH en comparacin con la distribucin difusa visto en la esteatosis simple [22] . El agotamiento selectivo de grandes clulas de Kupffer por la administracin de cloruro de gadolinio (GdCl 3 ), presumiblemente como resultado de una mayor absorcin y aumento de la toxicidad del compuesto de metal de tierras raras en estas clulas [23] y [24] , atena notablemente la lesin heptica inducida por tioacetamida [25] , tetracloruro de carbono [26] , alcohol [27] y la isquemia / reperfusin [28] , lo que indica que las clulas de Kupffer ED2-positivos contribuyen crticamente a dao heptico en estas condiciones. Del mismo modo, la administracin de bisfosfonato encapsulado en liposomas diclorometileno (clodronato), que elimina el 90% de las grandes clulas de Kupffer y 50% de las pequeas clulas de Kupffer [29] , reduce la hepatotoxicidad en respuesta a la concanavalina [30] , alcohol [31] , y el acetaminofeno [ 32] . En la EHGNA experimental inducida por metionina / dieta deficiente de colina, clodronato embota efectivamente toda la evidencia histolgica de la esteatohepatitis [33] . Estas observaciones indican que la activacin de las clulas de Kupffer colocados en la 'primera lnea' es un elemento esencial en la patogenia de la EHNA similar a otros tipos de lesin heptica. Una piscina cada vez mayor de los macrfagos es caracterstica para muchas condiciones patolgicas del hgado incluyendo esteatohepatitis [22] . Contribucin de los macrfagos derivados de los monocitos de sangre para este grupo y la heterogeneidad de las clulas de Kupffer en la esteatohepatitis no est clara ya que actualmente no existe un marcador fiable para distinguir los macrfagos residentes de los macrfagos reclutados en el hgado. El hallazgo de que los macrfagos residentes en el tejido adiposo magra se originan a partir de un CCR2 - CX3CR1 hi piscina monocitos mientras que los macrfagos del tejido adiposo reclutado originan a partir de un grupo de CCR2 + CX3CR1 bajo monocitos circulantes [34] puede ser de gran ayuda en este esfuerzo. Debilitado o las clulas de Kupffer ausentes tambin pueden asociarse con efectos deletreos. Por lo tanto, alteracin en la depuracin de LPS y otras molculas de peligro por las clulas de Kupffer puede resultar en dao heptico acelerado y este mecanismo debe tenerse en cuenta en la EHGNA. En apoyo de este concepto, los estudios de imgenes por ecografa con contraste [35] o el xido de superparamagntico hierro (SPIO)-resonancia magntica [36] sugieren alteracin de la funcin fagoctica de las clulas de Kupffer en hgado graso no alcohlico. Adems, el agotamiento de las clulas de Kupffer por GdCl 3 o clodronato puede cambiar la distribucin acinares de la fagocitosis, alterar el equilibrio entre los pro-y anti-inflamatorias citocinas, e interferir con la regeneracin del hgado, lo que refleja la complejidad funcional y la plasticidad fenotpica de las clulas de Kupffer [37] , [38] y [39] .

4. Vas especficas de enfermedad de reconocimiento de patrones moleculares en la EHGNA

Las seales moleculares recibidas por las clulas de Kupffer, tales como motivos estructurales de protenas, lpidos y cidos nucleicos que se originan a partir de la invasin de microorganismos se les conoce comnmente como patrones moleculares asociados a patgenos (PAMP) [14] y [40] . Las clulas de Kupffer tambin detectan componentes liberados de clulas husped que estn lesionados, a morir o sufrir una transformacin maligna. Estos ligandos de protenas endgenas y no proteicos pertenecen a

patrones moleculares asociados a daos (apaga) y se denominan alternativamente alarmins [41] . Fuentes endgenas de DAMPS incluyen protenas de choque de calor, caja de alta movilidad grupo 1 de protenas, productos de degradacin de la matriz extracelular (por ejemplo, cido hialurnico, fibringeno y fibronectina), y sustratos no proteicos (por ejemplo, cido rico) [41] . DAMPS exgenos y endgenos se identifican por una gran variedad de receptores de reconocimiento de patrones (PRPs) [14] , [40] y [41] . Los receptores tipo Toll (TLRs) comprenden una familia de PRP altamente conservados que reconocen componentes bacterianos, virales, y de hongos [40] y [42] . De stos, TLR4 tiene un papel central en la activacin de las clulas de Kupffer. TLR4 responde a lipopolisacrido (LPS) o la endotoxina, el PAMP prototpico situado en la pared externa de las bacterias Gram-negativas [40] y [43] . Reconocimiento de LPS inicia el montaje de la membrana plasmtica anclada TLR4 complejo de sealizacin [41] . Downstream objetivos de la sealizacin de TLR4 se determinan mediante la contratacin selectiva de citoslica de clasificacin y sealizacin de las protenas del adaptador a travs de interacciones entre Toll-IL-1 receptor (TIR) dominios [44] , [45] y [46] . Por lo tanto, la activacin de TLR4 puede participar factor de diferenciacin mieloide 88 (MyD88) y adaptador de protenas que contiene el dominio TIR o MyD88 adaptador similar (TIRAP / Mal), dando lugar a la activacin del factor nuclear (NF)-kB y AP-1 factores de transcripcin [ 40] , [41] y [43] . Por el contrario, TLR4 puede ser seal a travs del adaptador que contiene el dominio TIR inducir interfern- (TRIF) y molcula adaptadora relacionada con TRIF (TRAM), principalmente para activar el interfern factor regulador 3 (IRF3) y promover la transcripcin de interfern- [40] , [41] y [43] . Hay evidencia sustancial de que los eventos celulares mediadas por TLR4 aumentan la lesin heptica en la esteatosis [40] y [43] . Estudios recientes indican que TLR4 especificidad de clasificacin puede reflejar la etiologa de la enfermedad de hgado graso. Por lo tanto, el efecto protector de la deficiencia de TLR4 contra la lesin heptica inducida por el alcohol se replica en IRF3-/ - ratones, pero no en MyD88-/ - ratones [47] y [48] . Preferencial TLR4 de clasificacin a la cascada IRF3 Tambin se ha informado en hgados de los ratones despus del calentamiento lesin de isquemia / reperfusin heptica [49] . Por el contrario, la sealizacin MyD88 alterado puede asociarse con hgado graso no alcohlico. Por lo tanto, la C558T de un solo nucletido polimorfismo del gen variante TIRAP afecta la sealizacin TLR MyD88 mediada y se correlaciona con la falta de la fibrosis heptica en una cohorte de pacientes con EHNA comprobada por biopsia, mientras que confiere ninguna proteccin contra el dao heptico inducido por el alcohol [50] . Estas observaciones preliminares sugieren que el TRAM / respuestas interfern TRIF dependientes son el objetivo principal de alcohol en el hgado, mientras que la activacin alterada de vas TIRAP/Myd88-dependent puede dominar la progresin del hgado graso no alcohlico. En particular, el equilibrio adecuado entre la produccin de citoquinas TIRAP/Myd88-mediated y TRAM / respuestas interfern TRIF mediada puede ser necesario para evitar la inmunopatologa. En apoyo de este concepto, in silico de simulacin predice sealizacin redistribucin del flujo entre Myd88 alternativa y la activacin TRAM y este concepto ha sido validado en macrfagos de ratn [51] . Debido a la presencia ubicua en lugar de TLR4 entre los diversos tipos de clulas del hgado, el papel especfico de las clulas de Kupffer en la activacin diferencial de las vas de TLR4 est por verse. Tambin debe tenerse en cuenta que los ligandos endgenos tales como ciertos cidos grasos y otros alarmins tambin pueden estar vinculados a TLR4 especificidad de clasificacin, una pregunta particularmente relevante para la EHGNA.

5. La amplificacin de las seales de peligro en el hgado graso no alcohlico

LPS se considera una molcula exgena peligro fundamental en la patognesis de la enfermedad de hgado graso. Los niveles circulantes de LPS son elevados y el hgado exhibe notable sensibilidad a LPS en los modelos ms experimentales del hgado graso no alcohlico [52] , [53] y [54] . Considerando que la translocacin de LPS desde el lumen intestinal a la circulacin portal en la lesin heptica alcohlica puede ser consecuencia de la toxicidad directa con alcohol al interrumpir la funcin de barrera del epitelio intestinal[55] , el aumento de la exposicin a LPS intestinales Tambin se ha considerado en la patognesis del hgado graso no alcohlico. Por lo tanto, los factores dietticos (por ejemplo, aumento de la ingestin de fructosa) pueden contribuir a la alteracin de la motilidad intestinal, sobrecrecimiento bacteriano, y aumento de la permeabilidad epitelial en tanto experimental y humana EHGNA [54] y [56] . Mejora de la enfermedad heptica mediante la administracin de probiticos en estas condiciones proporciona apoyo indirecto a este concepto [57] y [58] . Depuracin heptica Disturbed es un mecanismo importante que puede contribuir a un aumento de los niveles de LPS en la EHGNA, en particular cuando se enfrentan a cargas superiores a travs de la circulacin portal. Receptores scavenger son protenas transmembrana localizados en los dominios de balsa de lpidos (caveolae), que se unen lipoprotenas y son capaces de eliminar y desintoxicar sustancias extraas incluyendo LPS [59] . Las clulas de Kupffer expresan altos niveles de clase A los receptores

scavenger (SR-A), que tienen afinidad con modificacin (por ejemplo, oxidado, acetilado o glucosilada) de lipoprotenas de baja densidad (LDL), pero no se unen lipoprotenas nativas [59] . Adems, los receptores de AR-A son capaces de LPS absorcin [60] . Es importante destacar que, la unin de la LDL modificada y LPS a SR-A puede desencadenar una respuesta inflamatoria por las clulas de Kupffer. Desde SR-A promueve la adhesin celular, sino que tambin puede contribuir al reclutamiento y la retencin de diversas clulas en el sitio de la inflamacin [59] . Por el contrario, los hepatocitos expresan receptores scavenger clase B como SR-B1, que se une ambas lipoprotenas nativos y modificados, adems de mediar la captacin de LPS [61] .Estudios recientes sobre SR-B1-nula ratones indican que la actividad hepatocelular SR-B1 puede reducir considerablemente la carga LPS [62] . Otros encontraron que 2-integrina (CD11b/CD18) y TIRAP tambin median LPS hepatocelulares absorcin [63] . Como resultado, la actividad fisiolgica hepatocelular puede 'limpiar' LPS y frustrar cascadas de sealizacin inflamatorias en las clulas de Kupffer [62] . Este concepto puede extenderse a la LDL modificada y otras seales de peligro y es razonable especular que la alteracin en la depuracin de molculas DAMP por los hepatocitos grasos puede potenciar la activacin de las clulas de Kupffer y contribuir a la patognesis de hgado graso no alcohlico. Insuficiente control del reconocimiento peligro tambin puede conducir a un aumento de la sensibilidad LPS.Desde TLR4 es el conducto principal para efectos celulares de LPS, la regulacin estricta de sealizacin TLR4 es esencial para evitar la excesiva respuesta inflamatoria [64] . Tolerancia LPS, o una respuesta menor a la exposicin repetida LPS es una consecuencia de estos circuitos de retroalimentacin antiinflamatorios [65] y [66] . Respuestas TLR4 mediada se controlan en mltiples niveles, la mayor parte proximal por la inhibicin del complejo de sealizacin TLR4 va homotpicas interacciones TIRTIR [44] ,[67] y [68] . Tirosina fosfatasas todava proporcionan otra forma de regulacin inhibitoria. Protena tirosina fosfatasa-1B (PTP1B), SH2 que contiene la protena tirosina fosfatasa 1 (SHP1), y la especificidad dual (tirosina / treonina) de MAPK fosfatasa MKP-1 parece esencial en el equilibrio de las respuestas mediadas por TLR [69] , [70] y [71] . Por ltimo, supresor de citocinas de sealizacin SOCS-1 de protena es un inhibidor verstil inducida por elevados niveles de citoquinas y la orientacin de varios pasos de vas Myd88 dependiente [72] . SOCS-1 pueden interactuar directamente con fosforilada TIRAP / Mal e iniciar la degradacin proteasomal [73] . Cmo estos mecanismos se refieren especficamente a la funcin de las clulas de Kupffer necesitar mayor aclaracin.

6. Funciones de las clulas de Kupffer en la homeostasis de lpidos alterado

Acumulacin hepatocelular de lpidos es una caracterstica morfolgica clave de hgado graso no alcohlico.Anlisis Lipidomic de tejido heptico humano es un nuevo enfoque prometedor para asociar composicin de la grasa anormal con varias etapas de hgado graso no alcohlico. Por lo tanto, el total de fosfolpidos y daadas son ms abundantes en la esteatosis simple a expensas de triglicridos [74] , mientras que el aumento de la relacin esterico a cido araquidnico en la EHNA puede correlacionar con la fibrosis [75] .Abundancia y composicin de los lpidos de tejidos de hgado alteradas pueden modular la actividad biolgica de las clulas de Kupffer en el hgado graso no alcohlico a travs de un nmero de mecanismos.En primer lugar, el efecto ocupante de espacio de los hepatocitos cargados de grasa puede conducir a la perfusin sinusoidal deterioro [76] . Los leucocitos atrapados en sinusoides estrechadas pueden participar cada vez ms clulas de Kupffer en la respuesta inflamatoria microvascular [76] . En segundo lugar, la exposicin excesiva de las clulas de Kupffer a los cidos grasos puede modular las vas de la inflamacin y la resistencia a la insulina mediante la interaccin con receptores de la superficie celular y los mediadores intracelulares [77] . En tercer lugar, la deposicin anmala de los lpidos en la membrana plasmtica puede alterar la estructura de dominios de balsa de lpidos e interferir con la agrupacin y la funcin de los receptores de la superficie celular [78] . Composicin lipdica Altered tambin puede afectar el buen funcionamiento de las membranas intracelulares como se ha visto con el colesterol libre de la carga de la mitocondria [79] . Por ltimo, los lpidos abundantes o anormales pueden confundir el reconocimiento de los hepatocitos grasos como peligrosas y promover interacciones adversas con las clulas de Kupffer [15] . Sin embargo, la existencia de un alarmin quintaesencia de lpidos derivados expresado o puesto en libertad por los hepatocitos esteatsicos sigue siendo especulativa. Hallazgos recientes indican que el reconocimiento mediada por TLR de restos de cidos grasos es un mecanismo importante por el cual los lpidos regulan las vas de la inflamacin y la inmunidad innata [78] .Dependiendo de la composicin de cidos grasos, el resultado de este efecto puede ser muy variable. Los cidos grasos saturados, implicados en el desarrollo de enfermedades crnicas tales como la aterosclerosis, se han demostrado para activar la sealizacin de TLR4 en adipocitos y macrfagos a travs de ambas vas dependiente de MyD88 y TRIF dependiente de [80] y [81] . Por el contrario, los cidos grasos poliinsaturados inhiben estos eventos en varios tipos de clulas incluyendo los

macrfagos [81] . En consecuencia, TLR4 es un sensor de niveles de cidos grasos endgenos y composicin, y las clulas de Kupffer ms probable beneficio de esta capacidad. Nuevas pruebas indican que el metabolismo del colesterol alterada tambin puede contribuir a la patognesis de hgado graso no alcohlico. Las ratas alimentadas con deficiente en colina (pero-metionina suficiente) dieta suplementada con cantidades altas (2%) de colesterol desarrollar la funcin mitocondrial alterada, que se caracteriza por la acumulacin de colesterol libre, el agotamiento de glutatin, y aumento de la susceptibilidad a TNF- y la lesin heptica mediada por Fas [79] . Por otra parte, el metabolismo del colesterol puede afectar directamente la funcin de las clulas de Kupffer. Por lo tanto, la dieta alta en grasa alimentadas a los ratones deficientes en el receptor de LDL da como resultado rpidamente en la inflamacin heptica significativa, pero slo si la dieta contiene colesterol [82] . La presencia de clulas de Kupffer "espumosas" sugiere que la compactacin de las lipoprotenas modificadas puede inducir esta respuesta inflamatoria temprana [82] . Mientras que estos hallazgos deben ser extrapolados a NAFLD humana con cautela, apuntan a la importancia del metabolismo del colesterol alterado. Adems, algunas de estas observaciones cuestionan el concepto de "segundo golpe-'desde la esteatosis no es necesariamente un precursor de la inflamacin heptica ya que estos eventos pueden desarrollarse simultneamente [82] y [83] .

7. Activacin de los macrfagos Alternativa en NAFLD

Alternativamente macrfagos activados (tambin denominados M2 en oposicin a la M1 clsica o fenotipo pro-inflamatoria) representan otra va crtica para la resolucin de la respuesta inflamatoria [84] . El programa coordinado de la activacin alternativa es estimulada principalmente por citoquinas Th2 IL-4 e IL-13, y se caracteriza por la expresin de la superficie celular de la firma M2 genes tales como el receptor de manosa, arginasa-1, y dectin-1 [84] . Hay pruebas de que la esteatosis promueve la polarizacin Th1 del equilibrio de citoquinas favoreciendo la activacin innata o clsico de los macrfagos en la EHGNA. Por lo tanto, en experimental y humana por igual EHGNA, la piscina de las clulas NKT hepticas se reduce y el nivel de tejido heptico de citoquinas Th1, tales como TNF-, IL-12, IL-18, y el interfern-, se eleva [85] , [86] , [87] y [88] . Los receptores activados por proliferadores de peroxisomas PPAR, PPAR y PPAR y el hgado X de receptores LXR- y LXR- son miembros de la superfamilia de receptores hormonales nucleares de factores de transcripcin que coordinan programas genticos complejos del metabolismo [89] y [90] . El uso teraputico de los ligandos sintticos para orientar estos receptores y explotar sus funciones biolgicas va en aumento. Efectos beneficiosos de PPAR en la homeostasis lipdica hepatocelular han impulsado grandes ensayos clnicos para evaluar el impacto en la EHGNA y estos esfuerzos han sido recientemente examinado en otro lugar [91] . Sin embargo, el reconocimiento de que los receptores de hormonas nucleares enlazan metabolismo de los lpidos a la activacin alternativa de macrfagos aade una nueva dimensin a su uso potencial en el tratamiento de la EHNA [84] y [92] . Mientras PPAR promueve la activacin alternativa de los macrfagos que contribuyen a los cambios metablicos de valor tales como la mejora de la sensibilidad a la insulina [93] y [94] , la investigacin reciente indica que PPAR se requiere especficamente para un programa similar en las clulas de Kupffer[95] y [96] . Por lo tanto, la firma de la expresin gnica de las clulas de Kupffer PPARdeficientes se reduce en gran medida en los hgados de ratones obesos y en respuesta a IL-4 estimulacin [95] y [96] .Adems, PPAR resultados de ablacin en la esteatosis grave y resistencia a la insulina [95] y [96] . En particular, el efecto de PPAR en clulas de Kupffer es modulada por cidos grasos [95] y puede fallar debido a la homeostasis de lpidos alterado y microambiente heptica en hgado graso no alcohlico. Por lo tanto, los hepatocitos como una fuente previamente insospechada de citocinas Th2 estimulan la expresin del gen M2 en las clulas de Kupffer y este circuito regulador importante pueden ser alterados en esteatosis [96] .Estos resultados plantean la intrigante posibilidad de que la orientacin especfica de PPAR en clulas de Kupffer para inducir la activacin alternativa puede mejorar tanto la inflamacin y esteatosis en hgado graso no alcohlico. Una advertencia importante es que el fenotipo M2 incluye la estimulacin de la matriz extracelular que puede contribuir a la fibrosis heptica [97] .

8. Adipocinas y la respuesta inflamatoria del hgado

El tejido adiposo produce una gran variedad de factores humorales, denominados colectivamente adipoquinas, que incluyen citoquinas pro-inflamatorias, por ejemplo, TNF- y la IL-6, y hormonas de polipptidos, por ejemplo, leptina, resistina, visfatina, y adiponectina [98] y [ 99] . Estas sustancias tienen importantes funciones reguladoras en los procesos celulares y bioqumicos que definen la patognesis de la obesidad y las enfermedades crnicas asociadas, incluida la EHNA [100] . La leptina, la

adipokine arquetpico, acta principalmente mediante la supresin de la ingesta de alimentos y promover el gasto de energa [101] . Adems, la leptina ha marcado efectos sobre la respuesta inmune innata mediante la promocin de la activacin y la fagocitosis de los macrfagos, presumiblemente a travs de JAK / STAT de sealizacin [102] . Efectos pro-inflamatorios y pro-fibrognicos de leptina tambin se han observado en las clulas de Kupffer y las clulas estrelladas [98] , [103] y [104] . En consecuencia, hiperleptinemia asociado con la obesidad puede contribuir a la progresin de la EHGNA, aunque esta cuestin sigue siendo controvertida [105] . Estudios recientes indican que la resistina puede causar la acumulacin de lpidos en los macrfagos por hasta la regulacin de la SR-Un receptor scavenger [106] . Visfatina, la adipocina caracterstica de tejido adiposo mesentrico, tambin tiene propiedades pro-inflamatorias mediante la induccin de TNF- e IL-6 en los monocitos [107] . Se necesitan ms estudios para comprender plenamente el efecto de estas nuevas adipoquinas en las clulas de Kupffer. Mientras que muchos adipoquinas estn asociados con funciones biolgicas adversas, adiponectina, la hormona ms abundante derivadas de tejido adiposo, parece tener un efecto protector en la EHGNA.Adiponectina de cuerpo entero (Acrp30) y su derivado la escisin, la adiponectina globular (gAcrp), se han acreditado con propiedades antidiabticas, anti-inflamatorias y antiaterognicas [108] . En consecuencia, la adiponectina y sus receptores, el omnipresente AdipoR1 y el predominantemente hepatocelular AdipoR2, se expresan en niveles reducidos en los pacientes con obesidad, resistencia a la insulina, diabetes tipo 2, y la EHNA [109] y [110] . Por otra parte, los niveles sricos de adiponectina caen ms en la EHNA en comparacin con esteatosis no complicada [111] , lo que sugiere que la adiponectina puede prevenir eventos 'segundo afectadas "en la patogenia de la EHNA. La adiponectina estimula la oxidacin heptica de cidos grasos y la cetognesis, mientras que inhibe la sntesis de triglicridos y de colesterol [108] . Considerando que estas actividades metablicas se producen principalmente en los hepatocitos, la adiponectina tiene efectos antiinflamatorios potentes en los macrfagos. Por lo tanto, la adiponectina es capaz de suprimir los efectos de LPS en macrfagos, incluyendo la activacin de NF-kappa B y ERK1 / 2 [112] , [113] y [114] . Del mismo modo, la adiponectina impide la sealizacin inflamatoria mediada por LPS en clulas de Kupffer [115] . Estos efectos anti-inflamatorios de la adiponectina pueden implicar la IL-10 vas de sealizacin [116] . Curiosamente, la NADPH oxidasa es un objetivo importante de IL-10 en diversos sistemas de clulas, incluyendo macrfagos[117] . Por otra parte, la adiponectina controla los niveles de ROS hepticas a travs de la inhibicin de NADPH oxidasa en la lesin heptica inducida por el alcohol experimental (Laura E. Nagy, comunicacin personal). Estos hallazgos sugieren que los efectos beneficiosos de la adiponectina en la EHGNA tambin pueden producirse mediante el control de la produccin de ROS intracelular y la activacin de las clulas de Kupffer.

9. ROS biologa de las clulas de Kupffer

Especies de oxgeno reactivas celulares (ROS) son subproductos del metabolismo aerbico normal, [118] y [119] . ROS pueden causar toxicidad macromolecular, lo que exige un sistema de defensa antioxidante elaborado. Los efectos txicos de ROS, sin embargo, tambin proteger al husped de la invasin de microorganismos como se observa en los eventos celulares de la inmunidad innata [120] y [121] . Por otra parte, ROS regular las cascadas de sealizacin en una gran variedad de respuestas celulares fisiolgicas incluyendo las vas de reconocimiento peligro [122] . Esta funcin biolgica dual de ROS se ha denominado pleiotropa antagnica [123] . En consecuencia, ROS contribuye a la funcin de las clulas de Kupffer y otros macrfagos en mltiples niveles. Una fuente fundamental de ROS en las clulas inflamatorias es la oxidasa NADPH o NOX [124] . La liberacin rpida de ROS en respuesta a LPS y otros estmulos microbianos en las clulas de Kupffer y otros macrfagos se produce a travs de la fagocito gp91phox oxidasa especializada o NOX2 [121] . NOX2 Activado produce superxido, una forma importante de ROS que ayuda a matar microbios y seales targets para redox-sensibles tales como la tiorredoxina, la protena quinasa C, miembros de la familia ERK y NF-kB[120] y [125] . Lesin oxidativa en los hgados de los ratones deficientes-Nox2 tratados con alcohol [126] o con la dietilnitrosamina carcingeno genotxico [127] se reduce en gran medida, lo que indica que NOX2 es esencial para la patognesis. Por el contrario, la hepatotoxicidad inducida por acetaminofeno-todava se produce en gp91phox-/ - ratones, junto con el aumento de los niveles de glutatin oxidado mitocondrial en la misma medida como en ratones de tipo salvaje, lo que sugiere que NOX2 no es la fuente de ROS en esta configuracin [128] . Del mismo modo, NOX2 parece irrelevante en metionina / inducida por la dieta experimental de hgado graso no alcohlicocolina deficiente, ya que la deficiencia NOX2 no tiene ningn efecto sobre el tejido de la peroxidacin de lpidos del hgado, esteatosis, y fibrosis [129] .

ROS tambin se producen en otros sitios intracelulares (por ejemplo, las mitocondrias, los peroxisomas, del sistema del citocromo P450 microsomal) que pueden afectar a las vas efectoras sensibles a redox en las clulas de Kupffer. Las mitocondrias son la fuente ms grande de derivados metablicamente ROS [130] y [131] . La oxidacin de sustratos por mitocondrias que respiran genera un gradiente de protones que mantiene el potencial electroqumico (delta Psi m ) a travs de la membrana interna mitocondrial [132] . La energa del delta Psi m se puede utilizar tanto para la sntesis de ATP (fosforilacin oxidativa) o disipa en forma de calor a travs de la fuga de protones en un proceso denominado desacoplamiento [132] . La cadena respiratoria tambin produce superxido debido a la escisin de electrones y la reduccin incompleta del oxgeno molecular, que es ms probable que se produzca en mayor delta Psi m [130] y [133] . Por lo tanto, la regulacin del delta Psi m puede controlar mitocondrial de ROS, una funcin recientemente asociada con las protenas de desacoplamiento [134] y [135] . De todas las protenas desacoplantes, UCP2 tiene la distribucin tisular ms amplia con abundancia en las clulas del sistema inmune [134] y [136] . Como se discute ms adelante, la UCP2 sobreexpresin suprime la produccin de ROS y la activacin de las clulas de Kupffer y otros macrfagos [137] , [138] y [139] , mientras que la inhibicin de UCP2 o resultados de ablacin en aumento de ROS, la liberacin de citoquinas pro-inflamatorias, y persistente la activacin de NFkB [140] , [141] y [142] . Poco se sabe sobre la interaccin de la mitocondria y los sistemas de generacin de ROS no mitocondriales, aunque estas funciones se pueden solapar. Por lo tanto, la capacidad de presentacin de antgenos de las clulas de Kupffer se deteriora a grado similar cuando la produccin de ROS se inhibe en diferentes sitios intracelulares tales como la NADPH oxidasa, mitocondrias, o citoslica xantina oxidasa[143] . Adems, la actividad anti-microbiana y pro-inflamatorias es aumentada en gran medida en UCP2-/ - macrfagos como resultado de la produccin de ROS mitocondrial incontrolada [141] . Plausiblemente, ROS desde cualquier fuente celular puede afectar de manera similar de defensa antioxidante y vas de sealizacin redox-sensibles en las clulas de Kupffer. En particular, las clulas de Kupffer tienen menor capacidad antioxidante de los hepatocitos, asumiendo, por tanto, un mayor impacto de los mecanismos de regulacin mediada por ROS [144] .

10. El desacoplamiento de activacin de las clulas de Kupffer protena-2 y

UCP2 se ha considerado en la patogenia de la EHGNA desde su identificacin [145] . Aunque UCP2 heptica reside principalmente en las clulas de Kupffer y su presencia en los hepatocitos es insignificante en condiciones normales [146] , UCP2 convierte notablemente abundante en hepatocitos de genticamente obesos ( ob / ob ) los ratones y siguiendo dieta alta en grasas [147] y [148] , mientras que las clulas de Kupffer y otros macrfagos han disminuido UCP2 en estas condiciones [148] y [149] . La importancia clnica de las alteraciones de clulas especficas de la expresin de UCP2 en NAFLD experimental no se entiende por completo. Dado que una gran cantidad de UCP2 interferir con la sntesis de ATP [147] , los hepatocitos grasos con hasta reguladas UCP2 puede tener una desventaja energtica como se ha demostrado durante los desafos agudos por hepatotoxicidad mediada por Fas [149] y la lesin por isquemia / reperfusin [150] y [151] . Por el contrario, la baja regulacin de UCP2 puede aumentar la capacidad de respuesta de las clulas de Kupffer en el hgado graso, en consonancia con el aumento de la actividad de los macrfagos en la que UCP2 se inhibe o realiz ablacin [139] , [140] y [141] . LPS es un potente inhibidor de la expresin de UCP2 en macrfagos [139] , [141] y [148] , lo que sugiere que la sealizacin mediada por TLR4 puede utilizar mitocondrial de ROS en la amplificacin de circuitos.De hecho, un bucle de retroalimentacin positiva se ha identificado recientemente en la sealizacin de TLR4 mediada por LPS que implica la activacin aumentada de JNK y p38 por ROS mitocondrial en los macrfagos peritoneales de UCP2-/ - ratones [152] . Estos hallazgos indican que la UCP2 puede actuar como un descanso fisiolgica a los componentes de ROS-sensibles de TLR4 de sealizacin tales como JNK, p38, y NF-kB. Aumento de la susceptibilidad a incluso pequeas cantidades de LPS se ha considerado en la patogenia de la EHGNA [85] y [153] y la amplificacin mediada por ROS de la sealizacin de TLR4 puede contribuir a este fenmeno como un resultado de la accin de UCP2 insuficiente en las clulas de Kupffer. Recientemente, Zhou y colaboradores sugirieron un mecanismo interesante que puede aclarar an ms el papel de la UCP2 en EHGNA [154] . Estos autores describen profundas anormalidades estructurales y la actividad respiratoria deteriorada de las mitocondrias del hgado en ratones deficientes adiponectina con esteatosis preexistente [154] . Proteccin de una lesin hepatocelular inducida por LPS por reposicin mediada por adenovirus de adiponectina se suprime si estos ratones tambin se hacen-UCP2 deficiente, lo que indica que en este modelo la UCP2 es crtica a los efectos beneficiosos de la adiponectina. En ausencia de estudios especficos de las clulas del hgado, sin embargo, no queda claro si la deficiencia de

UCP2 evita principalmente la adiponectina de la regulacin del metabolismo lipdico hepatocelular o interfiere con los efectos antiinflamatorios de la adiponectina en las clulas de Kupffer. Sin embargo, hay ms evidencia de que la desregulacin de la UCP2 altera el equilibrio de los mecanismos pro-y antiinflamatorias y EHGNA puede beneficiarse de la restauracin del control ROS mitocondrial en las clulas de Kupffer. Basado en consideraciones anteriores, el uso de antioxidantes para prevenir y tratar la EHGNA avanzada parece justificado. Curiosamente, sin embargo, muchos ensayos no han demostrado beneficios significativos de la terapia antioxidante en la EHGNA tal como fue revisado por ltima vez por Younossi [91]. Antioxidantes mitocondria especficas pueden representar una nueva estrategia para limitar la patologa mediada por ROS en la EHNA. Por lo tanto, MitoQ, un anlogo sinttico de la coenzima Q10 (ubiquinol / ubiquinona), se acumula selectivamente en la matriz mitocondrial y elimina de ROS por ciclo redox continua[155] , mientras que el SS-31 es un pptido catinico-aromtico-permeable a las clulas objetivo a la interior membrana mitocondrial, donde acta como un potente antioxidante local de [156] y [157] . Estos compuestos han demostrado ser tiles en los primeros ensayos para los trastornos neurodegenerativos asociados con la disfuncin mitocondrial [158] . Adems, MitoQ protege contra el dao de rganos en un modelo LPS de peptidoglicano de la sepsis [159] . Ser interesante ver el impacto de este enfoque en el control de las respuestas ROS dependientes de clulas de Kupffer en hgado graso no alcohlico.

11. Observaciones finales

Uno de los retos insatisfechas de hgado graso no alcohlico es predecir satisfactoriamente su progresin desde la esteatosis simple a la esteatohepatitis. Esta transicin representa un hito en la historia natural con una probabilidad considerable de desarrollar enfermedad heptica terminal. Por lo tanto, La elucidacin de los eventos moleculares y celulares que pueden conducir a este resultado es de importancia crtica.Afortunadamente, en los ltimos aos se han producido notables avances en nuestra comprensin de la patognesis de la EHNA, a menudo, por extensin, de la investigacin en la biologa del tejido adiposo, la obesidad y la resistencia a la insulina. Estos esfuerzos apuntan a la intrincada relacin de sistema inmune innato y la homeostasis de lpidos en el hgado graso no alcohlico con un papel prominente para las clulas de Kupffer y un nmero de mecanismos bioqumicos y celulares implicados ( . Fig. 1 ). La niebla sigue clara y ahora es el momento para tomar ventaja de lo que ya sabemos y desarrollar nuevas formas de predecir, prevenir y tratar el hgado graso no alcohlico avanzado.

La figura. 1. Esquema para la activacin de las clulas de Kupffer disfuncional en la EHNA. Los receptores de reconocimiento de patrones de las clulas de Kupffer como TLR4 pueden estar expuestos cada vez ms a las seales exgenas y endgenas de peligro (por ejemplo, LPS, cidos grasos en exceso, lipoprotenas modificadas) a travs de la circulacin portal, reforzada por la falta de espacio libre

hepatocelular. Vas de reconocimiento de patrones pueden intensificarse debido a la clasificacin alterada y sealizacin, circuitos inhibitorios deteriorados, o la amplificacin de los bucles de sealizacin redox-sensibles. Desequilibrio adipokine puede contribuir a estos eventos, como niveles bajos de adiponectina que no pueden suprimir la generacin de ROS intracelular. Hepatocitos-Fat cargados pueden comprometer la microcirculacin sinusoide que lleva al atrapamiento de clulas inflamatorias. Por ltimo, la esteatosis puede alejarse clulas de Kupffer de la activacin alternativa. Por favor, vea los detalles en el texto. Las lneas continuas, efectos proinflamatorios, lneas de puntos, los mecanismos anti-inflamatorios. Mal funcionamiento en uno o ms pasos puede promover respuestas 'segundo hit', mientras que la orientacin celular de estos puestos de control tiene el potencial para la identificacin de nuevas estrategias de tratamiento de la EHNA.