RESUMEN En trminos generales, para la adhesin bacteriana, influyen cuatro elementos: Material, Microorganismos, antimicrobianos y mecanismos de defensa.

La influencia del material es ms importante en los estadios iniciales de la adhesin, pudiendo influir el mismo material, su rugosidad o su energa superficial., si es que existe una influencia del material en la adhesin bacteriana, esta reside en las caracteristicas de la pelcula adquirida y en la especificidad de las proteinas adsorbidas salivares (receptores), que puedan ser condicionadas por la composicin del material o por las caractersticas de superficie de este.
Palabras clave: Adhesion bacteriana, biomateriales, mecanismos de adhesin.

En cualquier sistema de agua corriente, cualquier slido que est sumergido en l, tiene en su superficie una rica y variada actividad de microorganismos. La clave para que puedan mantener su actividad estos seres vivos es su capacidad de adhesin. De esta propiedad depende el que puedan fijarse a la superficie y desde esta situacin nutrirse y reproducirse, o que sean renovados. Por tanto, este dinamismo en su composicin hace que a estos sistemas ecolgicos se les denomine abiertos. En el organismo humano, la nica superficie dura natural sumergida en un fluido son los dientes. Sin embargo, en situaciones patolgicas las litiasis del sistema urinario o de la vescula biliar, participan de esta particularidad. Por definicin, estas superficies son colonizadas por bacterias que pueden ser responsables de infecciones de repeticin e incluso responsables de la pigmentacin de estos clculos (1). Tambin, en situaciones terapeticas cobra un especial inters la introduccin de catteres intravasculares y su posible colonizacin posterior por microorganismos. En nuestro mbito odontolgico al sustitucin del tejido dentario por un material restaurador o la colocacin de prtesis en la cavidad bucal establecen las condiciones para que estas superficies, al estar sumergidas en un fluido, sean colonizadas por microorganismos. La superficie del material y su composicin pueden influir en la capacidad de adhesin de los microorganismos y en la formacin ms o menos rpida de la placa bacteriana. Es nuestro objetivo aclarar cmo sucede la adhesin bacteriana y la influencia de los distintos biomateriales. En trminos generales, para la adhesin bacteriana, influyen cuatro elementos: Material, Microorganismos, antimicrobianos y mecanismos de defensa (2) . Nosotros nos vamos a centrar en relacin entre el material y el microorganismo, aunque estos cuatro factores estn totalmente interrelacionados. Incluso, en determinadas ocasiones uno de ellos puede enmascarar a los dems. En un estudio donde se meda la distinta capacidad adhesiva de varios microorganismos a materiales colocados en diferentes localizaciones de la cavidad bucal, se observ como independientemente de las distintas variables lo que destacaba era la mayor colonizacin de las superficies vestibulares que las linguales. Esto es debido a que los mecanismos de autolimpieza son ms eficaces por palatino ADHESIN BACTERIANA La adhesin bacteriana depende de unos Factores Inespecficos de ndole fsico-qumicos, elctricos, etc. Y otros Factores Especficos de carcter adhesina- receptor, fimbrias, etc. De todas formas, en primer lugar para que se produzca la adhesin es necesario que la bacteria se acerque a la superficie del material.

El transporte de la bacteria se produce por tres mecanismos: 1) difusin; 2) dinmica del fluido y 3) por actividad propia de la bacteria . No existe ninguna interacccin entre la superficie slida y el microorganismo hasta una distancia de 50 nm. Cuando la bacteria se acerca a esta distancia aparece una atraccin debido a las fuerzas de Van der Waals (Fa), que son debidas a un efecto dipolo entre tomos o molculas. A medida que se va acercando a la superficie y a una distancia ms corta que la interaccin por las Fuerzas de Van der Waals, aparece una fuerza de repulsin debida a la carga negativa de la bacteria y del material que suelen ser del mismo signo. A esta fuerza se le denomina "Z potencial" (Fe). De la interaccin de estas dos fuerzas es de lo que depende el mayor o menor acercamiento del microorganismo a la superficie del material (Figura 1) y es lo que se denomina Energa Gibbs, expresado en la siguiente frmula: Energa Gibbs = Fa Fe

El Z potencial depende de la carga inica de la bacteria y de la superficie del material, pero tambin tiene una influencia el medio inico en el que estn sumergidas estas superficies. Normalmente, alrededor de la bacteria y del material, ambos con carga negativa, se forma una concentracin de hidrogeniones del medio salivar para neutralizar la carga. Dependiendo de la ionizacin del medio se necesitar una capa mayor o menor para neutralizar la carga, obteniendo en las dos superficies una doble capa. As, en medios inicos altos la doble capa es muy delgada y permite un mayor acercamiento entre las dos superficies. Sin embargo, en medios inicos medios o bajos, la doble capa es de mayor grosor y la distancia de la bacteria a la superficie slida es mayor, ya que la bacteria se detiene cuando las dobles capas entran en contacto (Figura 2).

El resultado de estas interacciones es el mayor o menor acercamiento de la bacteria a la superficie del material. Cuando la bacteria llega a una distancia de 2nm podemos predecir que la adhesin ser irreversible, sin embargo a una distancia de 10nm la situacin es crtica ya que la bacteria dependiendo de su tamao y otros factores puede adherirse reversible o irreversiblemente. A distancias mayores, la adhesin puede considerarse reversible. Estas fuerzas que hemos descrito son un modelo de cmo puede ocurrir la adhesin de las bacterias a la superficie dental o a los biomateriales. Se llaman fuerzas de gran alcance y estn sometidas a las leyes fisico-qumicas. Realmente no sabemos si todo ocurre de esta forma, porque no estn totalmente demostrados los mecanismos de la adhesin, pero este modelo segn diferentes autores (3) es el que se puede acercar ms a la realidad. Esta teora denominada DLVO debido a las iniciales de los autores que la describieron: Derjaguin, Landau, Verwey y Overbeek, es una hiptesis cualitativa, que describe la posibilidad o no de que la adhesin sea reversible o irreversible, pero en ningn modo nos cuantifica la adhesin. Una vez que la bacteria esta cerca de la superficie slida, entran en juego las fuerzas de corto alcance, donde la interaccin de fuerzas es sustituida por una serie de fuerzas adhesivas, que tienen un carcter de enlace primario, bien inico o covalente. Posteriormente, se produce la fijacin a la superficie del biomaterial o la superficie dura del diente. Cuando se fijan los microorganismos entran en ntimo contacto con la superficie slida, ya que la bacteria tiene la capacidad de absorber el medio hdrico que le rodea, debido a grupos hidrofbicos que ella posee o sus apndices.. A veces existe una separacin entre las dos superficies, pero es debido a los polisacaridos extracelulares fabricados por estos microorganismos. En la fijacin estn presenten una serie de mecanismos especficos. La superficie del biomaterial o del diente se reviste por una pelcula con componentes salivares que actan como receptores especficos. Estos receptores pueden ser sacridos para las adhesinas bacterianas, pero tambin pueden ser receptores proteinceos para algunas adhesinas como las PRPs ( proteinas salivares ricas en prolina) que solo reconoce el Actinomices Viscosus. Los polisacaridos extracelulares son fabricados por las bacterias debido a la enzima glucosiltransferasa libre o en el interior de la bacteria. Esta enzima tiene la capacidad de metabolizar la sacarosa de la dieta y descomponerla en glucosa y fructosa. A partir de la glucosa pueden establecerse uniones alfa 1-6 alfa 1-3, a estos ltimos se le denominan mutanos y debido a su carcter insoluble, son fundamentales en los mecanismos de adhesin bacteriana.

En algunas ocasiones, cuando la bacteria esta a una distancia aproximadamente de 10 nm, la bacteria puede unirse ntimamente a la superficie del material debido a sus prolongaciones, fimbrias o pilis, que pueden alcanzar al material o la superficie dentaria. Esto es debido a que las fuerzas de Van der Waals no son influenciadas por el radio del microorganismo, pero las fuerzas electrostticas s. Como la fimbria es de un radio muy pequeo las fuerzas de atraccin siguen existiendo, pero las electrostticas de repulsin se minimizan, por lo que la prolongacin bacteriana es capaz de alcanzar la superficie slida, aunque la bacteria no. Por tanto, estas prolongaciones juegan un importante papel en la adhesin bacteriana a distancias mayores de 2 nm. Una vez formada la pelicula adquirida salival sobre la superficie del diente o del biomaterial y la fijacin de la primera capa bacteriana, la posterior colonizacin y maduracin de la placa es un proceso comn que en nada se diferencia de la superficie colonizada. Es decir, la maduracin de la placa esta condicionada ms por factores de localizacin de la placa (p.e. supragingival o infragingival), que por las caractersticas de superficie. En otras palabras, si es que existe una influencia del material en la adhesin bacteriana, esta reside en las caracteristicas de la pelcula adquirida y en la especificidad de las proteinas adsorbidas salivares (receptores), que puedan ser condicionadas por la composicin del material o por las caractersticas de superficie de este. INFLUENCIA DEL BIOMATERIAL La controversia surge en la respuesta a una pregunta: Es capaz el material de transmitir sus caracteristicas a la pelicula adquirida?. Puede ocurrir que esta pelcula acte como amortiguador de las propiedades del material y enmascare sus caractersticas, producindose una adhesin muy similar en todos los materiales. Existen estudios que apoyan en ambos sentidos. Hay que decir que la capacidad adhesiva a distintos materiales puede depender de los microorganismos empleados, ya que podemos observar mayor adhesin a un material que a otro y no depender del material, sino del microorganismo. Tambin las condiciones adhesivas pueden variar en el momento de la medida, es un proceso dinmico que puede variar en el tiempo. Los estudios in vitro no reproducen todas las variables de las condiciones reales, con lo que pueden alterar lo que ocurre en la realidad. Para medir la adhesin bacteriana es importante que no se produzca la lisis celular, de ah la diferencia entre los estudios de inhibicin de crecimiento bacteriano y la adhesin bacteriana. Por esta razones y algunas otras es por lo que se justifica la disparidad en los estudios de adhesin bacteriana y la dificultad para dilucidar la verdadera influencia del material. De todas formas, y dentro de las CARACTERISTICAS DE SUPERFICIE, hemos de hablar de la influencia de la Energa Superficial. La influencia de la energa superficial del substrato puede ser despejada de la frmula: Gradiente de Adhesin = IFsb IFsl Ifbl IF= Interfase; s= substrato; l= lquido; b=bacteria Existen superficies como el acero inoxidable y el oro con una alta energa superficial y otras como las resinas con ms baja energa superficial, lo que podra modificar la adhesin bacteriana. Una alta energa superficial del substrato favorecera unas condiciones de hidroflia y una baja energa superficial la hidrofobia. Si la energa superficial de la bacteria es superior que la del medio, la adhesin se ve favorecida por la hidrofilia. Sin embargo, en condiciones de hidrofobia, la energa superficial de la bacteria debe ser menor que la del medio para favorecer la adhesin. En substratos inertes y en esmalte pulido la energa superficial baja y se ha comprobado que la adhesin para el S. Mitis se ve favorecida por las condiciones hidrofbicas. Por el contrario, el S, Mutans adhiere mejor en condiciones de hidrofilia. A la vista de estos resultados podemos pensar que existe una vinculacin cepa-dependiente para las distintas superficies (4).

De forma general, mientras las bacterias tengan mayor energa superficial existir mayor adhesin, dado que la saliva tiene baja energa superficial. Tambin, las bacterias con mayor energa superficial tendrn mayor afinidad por substratos con mayor energa superficial y viceversa. As, la baja energa superficial de los biomateriales reduce la adhesin y retarda por tanto la maduracin de la placa. No obstante, cuando el substrato es revestido por el film proteico, este tiene la cualidad de bajar la energa superficial de aquellos substrato que la tienen alta y subir la de los que la tienen baja. Es decir, tiene un efecto amortiguador que puede enmascarar los efectos del material. El efecto de la pelcula en general es bajar el nmero de bacterias, independientemente del substrato. La aproximacin fisico-qumica permanece, pero baja. Otros estudios, confirman que slo pequeas diferencias en la pelcula, pero importantes, son cepadependiente. Por ejemplo una rica capa de mucinas, favorece la adhesin del S, mutans y baja la adhesin del S. Sanguis (5). Es decir, estas observaciones pueden confirmar que las propiedades fisico-qumicas del substrato pueden ser transferidas a su superficie y alterar la composicin, la densidad y la configuracin de la pelcula adquirida en cuanto al tipo de proteinas; y por tanto, transferirlas a su vez a la interfase proteinas- clulas y en consecuencia tener una influencia en la fase inicial de la adhesin. En general falta comprender la importancia real de estos mecanismos. En cuanto La Rugosidad, como segunda caracterstica de superficie, aquellas superficies ms rugosas tienen la capacidad de retener mayor cantidad de placa. Normalmente la acumulacin bacteriana empieza por estas reas debido a que se protegen mejor de los mecanismos naturales de defensa de autolimpieza . Adems, al aumentar la rugosidad, aumenta el rea de superficie con lo cual se favorece la adhesin. El pulido de los materiales en este sentido es esencial para disminuir la adherencia bacteriana. No obstante, debemos tener cuidado con el exceso de pulido en amalgamas, acrlico, etc. Ya que puede aumentar su rugosidad. En general, la mayora de los estudios resaltan como los materiales pulidos disminuyen la adhesin bacteriana. Las porcelanas glaseadas y las resinas son las que menor adhesividad manifiestan. Sin embargo, existen materiales como el oro que al pulirlos no es tan manifiesta la disminucin de la adhesividad bacteriana. (6) En estudios realizados (7) para medir la importancia de la energa superficial respecto de la rugosidad, se demuestra que la rugosidad de un material tiene mayor relevancia respecto de la adhesividad bacteriana que la energa superficial. IOMEROS DE VIDRIO En cuanto a los ionmeros de vidrio podemos encontrar estudios, como por ejemplo el de SHAHAL (8), que estudia la adhesividad bacteriana entre los composites y los ionmeros de vidrio. Al revestirlos con saliva fresca de partida no encuentra diferencias entre ellos. En este caso, la pelcula enmascara las posibles diferencias del material. Sin embargo en otros estudios, KAWAI (6), encuentra que aunque los ionmeros no bajan la adherencia significativamente al principio, si lo hacan a las 24 horas y en un grado mayor que los compmeros y siempre mayor que los composites. En general, los ionmeros de vidrio bajan la adhesividad bacteriana debido a su concentracin de flor. In vitro reducan la adherencia para el S. Mutans, S. Mitis, S. Sanguis y Actinomices viscosus en un 80% y estaba relacionado con la capacidad de liberacin de flor. Puede influir en no

reconocer la actividad del flor, el hecho de que en distintos estudios se lavan las muestras para eliminar las bacterias no adheridas lo que supone tambin eliminar del medio el flor (9). Por otra lado, es su rugosidad de superficie lo que puede aumentar la adhesividad bacteriana, cuando no estn bien pulidos o con grietas debido a la dificultad de mantener su equilibrio hdrico. RESINAS COMPUESTAS Los composites no tienen debido a su composicin tanta capacidad de inhibicin de la adhesin bacteriana como los inomeros de vidrio. Existen estudios donde al aadir substancias a su composicin pueden inhibir la adherencia. Por ejemplo el triclosan aadido a su composicin inhibe la adherencia tanto en muestras revestidas, como no revestidas de saliva. (10). En cuanto al pulido del composite, una resina compuesta rugosa aumenta la adhesin bacteriana , pero cuando se pule el efecto es mayor en las resinas compuestas que en los ionmeros de vidrio, en cuanto a la disminucin de la adhesin. (11). Hay grmenes, como el S. Oralis, que a diferentes grados de rugosidad no variaba su grado de adhesin, ya que esta se producia especificamente a las partculas de relleno. (12). El efecto de agentes blanqueadores sobre la superficie de los composites, implica un aumento para la adhesin de S. Mutans y sobrinus, tanto con peroxido de carbamida como con peroxido de hidrogeno. Sin embargo, bajaban la adhesividad de A. Viscosus. (13). AMALGAMA Y ORO El acumulo de placa bacteriana es menor para la amalgama, en la mayora de los estudios que para las resinas compuestas, aunque una resina compuesta muy pulida retiene menos placa que la amalgama. En cuanto a su composicin, existen estudios (14) donde amalgamas de alto contenido en cobre pueden inhibir la adherencia de ciertas bacterias como el S. Mitis. Los blanqueamientos pueden alterar la superficie de la amalgama y de las restauraciones metlicas, porque baja la capa de proteinas adsorbidas. Sin embargo, en tratamientos cortos clnicamente no tiene importancia. El oro retiene menos placa que las amalgamas y que los composites. Sin embargo, al pulir todos los materiales, el oro retena comparativamente mayor placa que la amalgama de plata, resinas compuestas y porcelanas, aunque en general disminua la adhesin bacteriana para todos los materiales (6). Por tanto, el oro como material presenta menor adherencia bacteriana. Sin embargo, en condiciones optimas de pulido, quizs debido a su alta energa superficial, puede aumentar su adherencia en trminos relativos. PORCELANAS Estos materiales son los que menos placa acumulan (15). Estudios entre porcelanas (6), comparando las nuevas porcelanas con las convencionales, no demuestran diferencias estadsticamente significativas en cuanto a su adhesin bacteriana. Sin embargo, cuando estas porcelanas se tallaban algo con una fresa, la porcelana Dicor presentaba menor adhesin que las porcelnas feldespticas (Celay), debido a su estructura lineal que minimizaba las rugosidades. Como conclusin, los mecanismos de la adhesin bacteriana son todava desconocidos, aunque disponemos de un modelo que se puede acercar bastante a la realidad. Existen muchas variables que en determinadas ocasiones pueden igualar la adhesin bacteriana a materiales con distinta composicin o caractersticas de superficie. La influencia del material es ms importante en los estadios iniciales de la adhesin, pudiendo influir el mismo material, su rugosidad o su energa superficial.

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Las pruebas de toxicologa

Nuestros servicios de toxicologa se han agrupado en categoras, una descripcin general de cada categora tiene a continuacin descripciones de pruebas especficas de abajo.
Pruebas de dispositivos biomaterial / Medical La pruebas de biocompatibilidad de los materiales utilizados en dispositivos mdicos individuales o de mltiples componentes para uso humano depende en gran medida de la naturaleza de la aplicacin de uso final. Directrices para la evaluacin de la seguridad de los materiales utilizados en dispositivos mdicos estn disponibles en varias fuentes, incluyendo la FDA Modificado ISO Matrix (Libro Azul Memorando # G95-1, Anexo A), USP, AdvaMed, la Sociedad Americana para Pruebas y Materiales (ASTM vol. 13.01 , Prctica F748-83) y las normas AAMI y mtodos recomendados (Volumen 4). El proceso de desarrollo de dispositivos mdicos es de carcter multidisciplinario, desde la eleccin de un material candidato, a travs de la caracterizacin del producto acabado. Las pruebas deben llevarse a cabo en varios puntos lgicos en el desarrollo de nuevos materiales y dispositivos. Aunque la seleccin y el momento de una prueba en particular diferirn de un dispositivo a otro, el procedimiento de evaluacin se divide en cuatro fases: 1. 2. 3. 4. La evaluacin preliminar de las materias primas, es decir, citotoxicidad, hemlisis Ensayos de biocompatibilidad de los componentes del dispositivo, por la FDA Modificado ISO Matrix Evaluacin final del producto Lanzamiento y las pruebas de auditora, por ejemplo, pruebas de endotoxinas bacterianas

Prueba de Pirgenos (USP <151>) sustancias pirognicas (que producen fiebre) son o bien endotoxinas derivadas de bacterias gram-negativas o son de origen qumico. El propsito de la prueba es determinar si el material o dispositivo es no pirognica. Pruebas de pirgenos debe ser considerado en la evaluacin de los dispositivos y los materiales como se describe en la norma ISO 10993-11. Prueba de endotoxina bacteriana (USP 85) El lisado de amebocitos de ensayo de Limulus (LAL) se basa en la observacin de que las endotoxinas bacterianas reaccionan con un lisado derivado de las clulas circulantes asociados con el mecanismo de coagulacin de la sangre del cangrejo de herradura, Limulus polyphemus. Se recomienda la prueba del LAL para la evaluacin de los dispositivos mdicos. Tenga en cuenta que la prueba del LAL slo detecta endotoxinas bacterianas, pirgenos no qumicos. Se requiere un programa de validacin para satisfacer requisitos de la FDA para el uso de la prueba de LAL.

La endotoxina bacteriana de pruebas de validacin (USP 85) Cada muestra analizada por el mtodo BET primero debe ser validado. Tres porciones de extracto de los materiales o el dispositivo se prueban usando una curva de inhibicin y mejora. Si los resultados de la eluato producto enriquecida con endotoxina imitan la curva estndar, el extracto de material o dispositivo se considera validado para su uso. , Seguridad, general (USP <85>) Esta prueba evala la toxicidad sistmica de transfusin y extractos de montaje de infusin. Para otros productos no biolgicos, las variaciones de la dosis de ensayo y la va de administracin son producto

especfico. Las muestras de ensayo se inyectan en ratones-ratones son observados durante un perodo de 48 horas para la supervivencia y toxicidad manifiesta. , Seguridad, Productos Biolgicos (USP <88>) La prueba de seguridad para productos biolgicos (o productos biolgicos) es parte de la batera de pruebas que exige el Reglamento de Alimentos y Medicamentos (21 CFR partes 600-680) para la validacin de gran cantidad de productos biolgicos autorizados. Al menos dos ratones y dos cobayas se inyectan por va intraperitoneal con una dosis de prueba del producto, y los animales se observaron durante siete das. Los requisitos de prueba se cumplen si los animales sobreviven el perodo de prueba, no presentan respuestas txicas y no muestran la prdida de peso. Prueba de inyeccin sistmica (USP 88/ISO 10993-11) La prueba de toxicidad aguda est diseado para proporcionar una evaluacin directa de los efectos sistmicos adversos. Hasta 4 extractos diferentes (solucin salina, 5% de alcohol / solucin salina, polietilenglicol 400 y aceite vegetal) del material de ensayo y se preparan los espacios en blanco correspondientes. Grupos de cinco ratones se inyectan por va intravenosa o por va intraperitoneal con cada prueba o extracto de control negativo. Los ratones se observaron durante tres das. anormal Toxicidad La toxicidad anormal es un estndar de la Farmacopea Europea para la evaluacin de los productos biolgicos. El material de ensayo se administr a ratones y cobayas, que entonces se evalan en busca de signos de toxicidad.

Prueba de reactividad intracutnea (USP 88/ISO 10993-10) Este ensayo de toxicidad aguda se utiliza para determinar el efecto irritante de sustancias lixiviables txicos presentes en los extractos de materiales de prueba.Hasta 4 Los extractos se preparan (solucin salina, 5% de alcohol / solucin salina, polietilenglicol 400 y aceite vegetal) de la muestra de ensayo y espacios en blanco correspondientes. Para el mtodo de ensayo USP, grupos de dos conejos se inyectaron por va subcutnea cada extracto de prueba (diez pginas) o el espacio en blanco correspondiente (cinco sitios). El procedimiento ISO requiere de 3 animales por extracto. Los animales se obtuvo al da durante tres das post-tratamiento.

Prueba de implantacin - 1, 4, 12, 26, 52 semanas (USP 88/ISO 10993-6) implantacin intramuscular de materiales de ensayo en conejos proporciona una evaluacin directa de la respuesta tisular aguda oa largo plazo a los efectos txicos de las sustancias lixiviables de biomateriales candidatos. La duracin del perodo de implante se determina por el uso final del material. El procedimiento de la USP requiere que los dos conejos se implantaron con un mnimo de cuatro tiras de material de ensayo y dos tiras de plstico de control negativo a travs de un trocar en los msculos paravertebrales. Tres conejos se utilizan para el procedimiento de la norma ISO de ensayo con 4 y 4 implantes de control. Evaluacin macroscpica de la respuesta de los tejidos a los implantes del material de ensayo se comparan con los sitios de control negativos correspondientes. Cuando el material de prueba no se puede moldear en las dimensiones que permitan la implantacin de trocar, el material de ensayo se implanta utilizando mtodos quirrgicos. La implantacin subcutnea tambin est disponible. Histologa de sitios de implante (ISO 10993-6) Los sitios de implante se evalu microscpicamente por un patlogo veterinario. Las secciones de tejido se puntan para la inflamacin, necrosis, fibrosis y otros indicadores de una interaccin txica entre el tejido muscular y el material de ensayo.Se ha informado de una calificacin toxicidad global del material de ensayo en comparacin con un control negativo.

La irritacin primaria de la piel (ISO 10993-10) El material de ensayo se aplica como un parche sobre la piel intacta y / o erosionada.Despus de un perodo de tiempo definido por el promotor, los sitios de aplicacin se evalan para la irritacin.

Sensibilizacin de la piel, Mtodo Maximizacin (ISO 10993-10) El ensayo de maximizacin del conejillo de Indias (GPMT) consiste en un procedimiento de induccin de dos etapas ms de tres semanas usando inyeccin intradrmica del adyuvante completo de Freund (FCA) seguido por una sola aplicacin (parche tpico) de la sustancia de ensayo o el extracto de la piel. Catorce das despus de la fase tpica, los animales son desafiados. Los sitios de prueba se evalan para la sensibilizacin a las 24, 48, y 72 horas. Sensibilizacin de la piel, Cerrado Patch prueba (ISO 10993-10) Este mtodo es una aplicacin tpica repetida (induccin y la provocacin) usando parches oclusivos. El material de ensayo se aplica directamente a la piel. Despus de varias exposiciones, los sitios tienen el reto de determinar la sensibilizacin de contacto retardada. Las pruebas de reactividad biolgica, in vivo (USP) {Pruebas de plsticos Clase} Estas pruebas USP estn diseados para evaluar la respuesta biolgica a los plsticos para uso en dispositivos mdicos, implantes, contenedores y materiales de base. La eleccin de una batera de pruebas en particular depende del uso final del material de prueba. Las pruebas incluyen: Inyeccin sistmica; Reactividad intracutnea, e Implantacin del msculo. Volver al inicio Clase I X X Clase II X X X X Clase III X X X X X Clase IV X X X X Clase V X X X X X X X X X X Aguda Irritacin Ocular Lentes expuestos a un rgimen de objetivo especificado patrocinador o solucin de prueba se insertan / infundieron en los ojos de conejos. Cada ojo de conejo se punta hasta dos veces al da utilizando el mtodo de Draize para determinar hinchazn, enrojecimiento o dao de la crnea. Oftalmoscopio y lmpara de hendidura exmenes se realizan antes y al final de un perodo de estudio de cinco das. X X Clase VI X X X X X X X X X Extraer S S AS (1:20) AS (1:20) PEG-400 PEG-400 VO VO Implantacin Modelo animal Ratn Conejo Ratn Conejo Ratn Conejo Ratn Conejo Conejo Dosis 50 ml / kg-IV 0,2 ml / Rabbit-ID 50 ml / kg-IV 0,2 ml / Rabbit-ID 10 g / kg-IP 0,2 ml / Rabbit-ID 50 ml / kg IP0,2 ml / Rabbit-ID 4 tiras / conejo

Prueba de irritacin ocular aguda (21 das) (FDA) Este ensayo est diseado para determinar la irritacin ocular y toxicidad de las lentes de contacto, asociado lente del rgimen del cuidado (s) y soluciones de ms de 21 das en ojos de los conejos. En general, de 8 a 12 conejos con ojos clnicamente normales se utilizan en el estudio. El patrocinador debe especificar el rgimen de cuidado de las lentes que se emplear. Ojos de los conejos se examinan diariamente y anot mediante el sistema de Draize. Antes del tratamiento y a los 7, 14 y 21 das, los ojos de cada conejo tambin se examinan con un oftalmoscopio y anot para la irritacin ocular usando el mtodo de McDonald-Shadduck (con lmpara de hendidura y tincin con fluorescena). A la terminacin del estudio, los ojos son removidos para la evaluacin de la histopatologa y la determinacin metabolismo del cido lctico crnea, (si es apropiado). ___________________________________________________________ Volver al inicio Pruebas de citotoxicidad Sistemas de cultivo de tejidos de mamferos se utilizan actualmente para evaluar la biocompatibilidad y toxicidad de los materiales para su uso en dispositivos mdicos y productos asociados. Mtodos de ensayo de cultivo de clulas han demostrado una buena correlacin con los ensayos de animales y son con frecuencia ms sensibles a materiales txicos. Varios de estos procedimientos de ensayo de citotoxicidad son ampliamente aceptados en el cribado biomaterial, control de calidad y programas de auditora. En general, estos in vitro tcnicas utilizan una variedad de tipos de clulas que difieren en la sensibilidad relativa y el tiempo requerido para llevar a cabo el ensayo. Los resultados obtenidos con los mtodos de cultivo de clulas deben ser evaluados en relacin con el apoyo o asocian in vivo en los estudios y con el uso final del producto. Contacto (ISO 10993-5) Directo Los cultivos de clulas se hacen crecer hasta una monocapa estndar. El material de ensayo se coloca en contacto directo con la capa de clulas durante 24 horas.Posteriormente, las monocapas se examinan al microscopio para detectar la presencia de cambios morfolgicos, la reduccin en la densidad celular o lisis inducida por el material de ensayo. Un procedimiento de la USP tambin est disponible. Difusin en agar - Contacto directo o extracto de Saline (ISO 10993-5) La monocapa celular se cubri de agar y se tien antes del tratamiento con el material de ensayo o de sus extractos. Despus de 24 horas, las clulas se puntan microscpicamente para la decoloracin y la lisis. Un procedimiento de USP est disponible tambin. La elucin MEM - Prueba en Extractos (ISO 10993-5) El material de ensayo se extrajo durante 24 horas en medio mnimo esencial (MEM).Un extracto se prepara a partir del material de ensayo que se coloca luego sobre monocapas de clulas. Las clulas se examinan los cambios morfolgicos y de citolisis para determinar una puntuacin de toxicidad. La elucin MEM - punto final de titulacin Los extractos de los materiales de ensayo se muestran a ser txico en el ensayo de elucin MEM se diluyen en serie para determinar la dilucin ms alta para el que no hay ninguna respuesta txica. La inhibicin del crecimiento celular extractos o soluciones son evaluados para la inhibicin del crecimiento celular (ICG) mediante la determinacin del contenido de protena de las monocapas en el tiempo cero y 72 horas despus de la incubacin. Este procedimiento se puede utilizar para la evaluacin de los plsticos de dispositivos mdicos o lentes intra-oculares.

Prueba de eficacia virucida lentes de contacto de prueba se inocularon primero con el suelo orgnico y Herpes simplex virus (HSV), luego se trat con un patrocinador cuidado de la lente especificada y el rgimen de desinfeccin, y, finalmente, transfieren a monocapas de clulas VERO para la absorcin de sobrevivir a las partculas del virus. Soluciones asociadas tambin se neutralizan y se exponen a monocapas VERO. Las monocapas VERO se supervisan cada dos das durante un periodo de diez das para determinar especfica para el virus efecto citoptico (CPE) y / o citotoxicidad inducida por la lente de prueba o la solucin de limpieza / desinfeccin neutralizado (s). Este examen es requerido por las normas de la FDA para lentes de contacto y soluciones de clase III. Virus adicionales / lneas celulares disponibles. Determinacin del valor D (desinfectantes): Herpes simplex virus (HSV suspensiones) se tratan con un patrocinador especifique-rgimen de desinfeccin (s) y las alcuotas se retiran a travs del tiempo para determinar la presencia o ausencia de virus especficos de efecto citoptico en monocapas de clulas Vero. El valor D se calcula a partir de la determinacin de la Dosis de Cultivo de Tejidos La infectividad (DICT) 50 de HSV en cada tiempo de muestreo. El tiempo necesario para reducir la concentracin de HSV (infectividad) en un 90% se presenta como el valor D. Otros virus, como la polio y adenovirus estn disponibles para pruebas. Pruebas de provocacin virucida Germicida / esterilizante: El material de ensayo se enfrenta con el VHS y / o virus de la polio. Existen varios mtodos de prueba diferentes estn disponibles y pueden ser adaptados a las necesidades especficas del cliente. ___________________________________________________________ Volver arriba

Pruebas Hemocompatibilidad: (ISO 10993-4) Prueba de hemlisis - Contacto Directo La muestra de ensayo se pone en contacto directo con una alcuota del conejo de los glbulos rojos que contienen solucin salina. El porcentaje de hemlisis inducida por la incompatibilidad biomaterial se determina mediante medicin espectrofotomtrica del contenido de hemoglobina. Prueba de hemlisis - Extraer La muestra se extrae con solucin salina durante 30 minutos. Una porcin del extracto de solucin salina se elimina y se aade a una alcuota de estndar de clulas de la sangre de conejo diluidos y los dos se mezclan suavemente. El porcentaje de hemlisis inducida por sustancias lixiviables biomaterial se determina mediante medicin espectrofotomtrica de la liberacin de hemoglobina. ___________________________________________________________ Mutagenicidad prueba (ISO 10993-4) Hay una relacin reconocida entre la mutagenicidad y carcinogenicidad de los agentes qumicos, lo que indica que una evaluacin de la mutagenicidad potencial de componentes lixiviables es til en la evaluacin de candidatos biomateriales y dispositivos mdicos. Mutagenicidad Ames de prueba El objetivo del procedimiento de ensayo en el Ames Salmonella ensayo de placa es evaluar el extracto de artculo de ensayo (solucin salina o DMSO) para la actividad mutagnica en cualquiera de las cinco cepas de ensayo dependientes de histidina deSalmonella typhimurium con y sin activacin con microsomas de mamferos ( Arochlor inducida de hgado de rata fraccin S9). Control negativo en paralelo (medio de extraccin) y control positivo (conocido mutgeno) placas estn incluidos. En general, los artculos de prueba

que producen una relacin dosis-respuesta positiva en tres concentraciones, con el mayor incremento equivalente a tres veces el valor de control de disolvente, se consideran mutagnico. NOTA: Otras pruebas de mutagnesis estn disponibles bajo peticin. ___________________________________________________________ Volver al inicio

Pruebas de irritacin de la mucosa: (ISO 10993-10) Irritacin Primaria oculares solucin salina y extractos de aceite vegetal se hacen del biomaterial. Los extractos se tpicamente instilan en un ojo de cada uno de seis conejos. El ojo contralateral recibe el control negativo (blanco) de extracto. Las soluciones de ensayo pueden ser inculcados directamente (despus apropiada seleccin in vitro). Cada ojo de conejo se punta hasta dos veces al da durante tres das para determinar la inflamacin conjuntival, tanto enrojecimiento o dao de crnea. Oftalmoscopio y lmpara de hendidura exmenes se realizan antes y tres das despus de la administracin de extracto. Prueba de irritacin vaginal El material de ensayo se introduce en la vagina de cada uno de tres conejos. Despus patrocinador especifica el tiempo, cada conejo se sacrific. El tejido vaginal se retira y se evala por un histopatlogo veterinario. Hamster bolsa Cheek El material de ensayo se sutura dentro de la bolsa de la mejilla del hmster. Despus patrocinador tiempo especificado, cada hmster se sacrificaron y el tejido removido para evaluacin histopatolgica. ___________________________________________________________ Los estudios de toxicologa general Las siguientes pruebas se utilizan para evaluar una variedad de productos qumicos y biomateriales. El diseo del estudio especfico para ensayos de toxicidad aguda o subcrnica se elige para cumplir con los requisitos reglamentarios y el uso final propuesto del material. Toxicidad aguda es definida por la Organizacin para la Cooperacin y el Desarrollo Econmico (OCDE), como los efectos adversos que ocurren dentro de un corto tiempo de la administracin de una dosis nica de una sustancia o de dosis mltiples dadas dentro de las 24 horas. Los objetivos de las pruebas de toxicidad aguda son definir la toxicidad intrnseca de la qumica, para determinar los rganos de las especies sensibles, para seleccionar las dosis utilizadas en los estudios subcrnicos, y proporcionar informacin para la evaluacin de riesgos despus de la exposicin aguda. Toxicidad subcrnica se define por la OCDE como los efectos adversos que ocurren como resultado de la dosificacin diaria repetida de producto qumico a animales experimentales para la parte (no superior a 10%) de la duracin de la vida. Diseado correctamente, los estudios subcrnicos dan informacin sobre la toxicidad acumulativa de una sustancia, los rganos diana y la tolerancia fisiolgica y metablica de un compuesto a baja exposicin prolongada de dosis. Implantes sub-crnicos estn disponibles tambin. Toxicidad cutnea aguda diez cobayas se tratan con la sustancia de ensayo sobre la piel intacta y / o erosionada para tiempos de exposicin de cualquiera de 4 horas (OCDE) o 24 horas (EPA). Los animales se observaron para detectar signos de toxicidad y letalidad durante un mximo de 14 das.

Toxicidad oral aguda Diez ratas se les da una dosis oral del material de ensayo por sonda en un volumen constante del vehculo disolvente apropiado. Los signos clnicos de la toxicidad, la morbilidad o la mortalidad se observan hasta 14 das posteriores al tratamiento. Toxicidad aguda (ensayo lmite) Toxicidad aguda (ensayo biolgico, Up-Down) Toxicidad subaguda (5 Das) Toxicidad subcrnica (90 das) Aguda, subaguda, subcrnica, y pruebas de toxicidad crnica, se realizan de acuerdo a las especificaciones del patrocinador. ___________________________________________________________ Servicios especializados Evaluaciones Farmacuticos pruebas tales como la toxicidad sistmica, la toxicidad aguda por va oral, las pruebas de pirgenos estn disponibles. Produccin de Anticuerpos Moog se experimenta en la produccin de anticuerpos policlonales y monoclonales en conejos, ratas y ratones utilizando protocolos especificados cliente. Estamos familiarizados con todas las rutas principales para la entrega de material antignico (subcutnea, intramuscular, intraperitoneal, intratraqueal, intravenosa, rectal, oral, nasal y aerosol) a animales experimentales, as como las tcnicas de toma de muestras de sangre (vena de la cola, orbital, vena de la oreja, vena cava puncin cardaca) y la cosecha de tejidos (clulas de hibridoma, lquido asctico, el bazo). Las instalaciones estn disponibles tanto para los estudios de produccin de anticuerpos a largo plazo y corto. Tenemos experiencia en el manejo de agentes biolgicos peligrosos en los niveles de bioseguridad 1 y 2.