Practica 5

La LDH abunda en hgado, msculo esqueltico y eritrocitos; tambin se encuentra en menor cantidad en corazn, rin y an menos en pncreas y pulmn. Existen dos genes que codifican dos polipptidos diferentes: M (Muscle, msculo) y H (Heart, corazn)

En determinadas condiciones de concentraciones y tiempo la cantidad de piruvato transformado en lactato es directamente proporcional a la actividad de LDH. La enzima no tiene especificidad estricta por el sustrato pues puede actuar sobre otros -ceto o -hidroxicidos estructuralmente similares al pirvico (por ejemplo sobre el -cetobutrico). Tampoco es estricta su especificidad por la coenzima, pues puede utilizar tambin el NADPH, aunque las velocidades de reaccin son mucho menores. A pH 7,3 - 7,8 el equilibrio de la reaccin est desplazado hacia el lactato, pero a pH ms alcalino (pH 8,5 - 10,0) el equilibrio se desplaza hacia el piruvato; entonces, la reaccin puede ocurrir en cualquiera de los dos sentidos, dependiendo del pH y de la concentracin de los sustratos que se encuentren presentes Como las isoenzimas LDH1 y LDH5 tienen una conformacin proteica diferente, cada una presenta propiedades distintas. Tienen diferente estabilidad a la desnaturalizacin por temperatura (LDH1 es estable a 65oC por 30 min y LDH5 es lbil al calor y al fro) y diferente resistencia a varios agentes qumicos inhibidores. Tambin difieren en su movilidad electrofortica: LDH1 es de migracin rpida y LDH5 es la ms lenta, mientras que LDH2, LDH3 y LDH4 tienen migraciones intermedias,

Las isoenzimas de la LDH tienen diferente afinidad por los sustratos (especialmente por el piruvato) y coenzimas. Por ejemplo la LDH1 tiene un Km elevado para el piruvato, la Vmax a la cual lo reduce es baja y adems resulta inhibida por un exceso de ste, mientras que LDH5 tiene un Km muy bajo para el mismo sustrato y la Vmax a la cual lo reduce es elevada. Las otras isoenzimas tienen propiedades intermedias entre las LDH1 y LDH5 y se parecern ms a una o a otra dependiendo de que tengan mayor proporcin de monmero H o M.

Estas caractersticas cinticas son muy importantes pues se relacionan con la funcin metablica que estas isoenzimas cumplen en los diferentes tejidos

Durante una actividad fsica intensa, el cerebro consume aproximadamente la misma cantidad de glucosa y oxgeno que en estado de reposo mientras que el requerimiento energtico del msculo esqueltico y el corazn aumenta considerablemente. En los dos primeros minutos de esta actividad el miocardio obtiene esa energa a partir de glucosa tanto sangunea como de sus propias reservas de glucgeno, y aunque el consumo de oxgeno aumenta unas cuatro veces, un 50% del piruvato formado se convierte en lactato (participacin de la LDH1 y LDH2), Este cambio metablico temporal le permite al corazn obtener la energa necesaria hasta que adapte su metabolismo para lograr un incremento en el consumo de cidos grasos. El msculo esqueltico utiliza (en los primeros segundos) la energa almacenada como creatinafosfato hasta que se activa la degradacin del glucgeno muscular para aportar glucosa como fuente de energa. Aunque en este tejido durante una actividad intensa el consumo de oxgeno aumenta unas veinte veces, gran parte del piruvato formado se convierte en lactato (participacin de la LDH5 y LDH4). Este cambio metablico le permite a este rgano obtener energa extra utilizando la gluclisis anaerbica. El pasaje de piruvato a lactato es una va de recuperacin de NAD + para que la gluclisis contine. La mayor parte del lactato formado en esta etapa es recuperado lentamente y reconvertido a glucosa en el hgado mediante un proceso que requiere el aporte de energa (ver Figura 2). Aqu la oxidacin de lactato a piruvato (participacin de la LDH5 y LDH4) es favorecida por la baja relacin NADH/NAD+ y la casi inexistencia de piruvato intracelular. El corazn tambin puede consumir parte del lactato producido por el msculo esqueltico, favorecido por la cintica de sus isoenzimas. La LDH se localiza en el citoplasma de las clulas de los distintos rganos y por lo tanto cuando se produce un dao celular es fcilmente liberada al medio, desde donde pasa al plasma, alterando la cantidad y relacin de las isoenzimas de LDH presentes en la sangre. La mayor parte de la LDH del suero normal proviene de la degradacin fisiolgica de los eritrocitos y plaquetas.

Las determinaciones de las isoenzimas de LDH ayudan al diagnstico y pronstico de algunas patologas. As por ejemplo, analizando las isoenzimas por electroforesis es posible diferenciar una hepatopata de un infarto de miocardio, cosa que no puede hacerse midiendo LDH total por su inespecificidad diagnstica. En un suero normal hay una relacin: LDH1 (25%) 0,5 LDH2 (50%) mientras que en un infarto de miocardio, en las primeras 24 horas, la relacin LDH1/LDH2 se va acercando a la unidad por aumento de la LDH1, sin que la actividad de LDH total aumente significativamente. Luego, cuando el enfermo evoluciona satisfactoriamente, esta relacin tiende a volver a la normalidad. Un aumento en el valor de esa relacin durante la convalecencia, indica un reinfarto. La aparicin o el aumento de LDH5 en el suero est indicando un compromiso heptico, o un dao en el msculo esqueltico. En los infartos pulmonares est elevada la LDH3 dando valores similares a la LDH2, con disminucin de LDH1.

Las altas concentraciones de lactato deshidrogenasa son clnicamente importantes y pueden encontrarse en estados patolgicos que causan dao celular. Los infartos del miocardio, enfermedades hepticas y renales, anemias megaloblsticas, distrofia muscular progresiv a y algunas neoplasias producen altos valores de lactato deshidrogenasa en el suero (1).

Wacker y col. (2) publicaron un mtodo para medir la lactato deshidrogenasa (LDH) utilizando lactato como substrato y dinucletido de nicotinamida adenina (NAD ) como coenzima indicadora. Wroblewski y LaDue (3) describieron el uso de la reaccin inversa, de piruvato

a lactato (LDH-P). Amador y col. (4) afirman que el mtodo de lactato a piruvato (LDH-L) es el mtodo de eleccin debido a que amplia la linealidad de la reaccin y mejora la estabilidad de los reacti vos utilizados. Gay y col. (5) estudiar on posteriormente la reaccin LDH-L y delinearon las condiciones ptimas de la misma.

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