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a esterilizacin es el proceso mediante el

cual se destruye o elimina cualquier tipo de vida microbiana de los objetos o sustancias, por la aplicacin de un agente qumico o fsico. Factores que afectan la eficacia de los procesos de esterilizacin son: Nmero de microorganismos. Factor fundamental ya que es uno de los factores que miden la efectividad de los diferentes procesos de esterilizacin. Tiempo. Es otro factor por medio del cual evala la funcin de los mtodos esterilizacin. Es utilizado como valor referencia en la evaluacin de los mtodos esterilizacin. se de de de

Temperatura. Al aumentar la temperatura durante el proceso especifico se esterilizacin, su efectividad aumenta pues cuando sta es superior a la temperatura ptima de crecimiento de un microorganismo generalmente provoca la muerte del mismo. Humedad relativa. Se define como la fraccin de presin de vapor de agua en un sistema con respecto a otro sistema con la mxima presin (saturado 100%) y a la misma temperatura. A mayor humedad relativa, mayor contenido de agua en las clulas o esporas y mejor resultado final de esterilizacin. Resistencia de los microorganismos. La susceptibilidad de los microorganismos a los procesos de inactivacin est en funcin de los factores ya mencionados. Sin embargo, los microorganismos tienen una resistencia intrnseca o innata frente a los procesos de esterilizacin, cuya naturaleza reside, en la composicin de la pared celular que regula la penetrabilidad de los agentes desinfectantes y esterilizantes.

Mtodos Fsicos CALOR HUMEDO La utilizacin del calor y su eficacia depende de dos factores: El tiempo de exposicin y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos. El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas por dos razones: 1) El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas (DNA, RNA, protenas, etc) son producidas por reacciones que eliminan agua y por lo tanto, reacciones inversas podran daar a la clula a causa de la produccin de productos txicos. 2) El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Por lo que, los materiales hmedos conducen el calor mucho ms rpidamente que los materiales secos debido a la energa liberada durante la condensacin. Parmetros de operacin: Temperatura : 121C Presin de vapor: 15 lbs. Tiempo : 15 minutos Condiciones de operacin para calor hmedo Temperatura (C) Tiempo (min) Presin (lb/pulg2) 121 126 134 140 15 10 3 0.67 15 20 30 38

Ventajas: Es de rpido calentamiento y penetracin Se destruye las bacterias y esporas en corto tiempo No deja residuos txicos Hay un bajo deterioro del material expuesto

Desventajas: No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.

VAPOR A PRESIN (AUTOCLAVE): Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de Chamberland. Esteriliza a 121C a una atmsfera de presin, estas condiciones pueden variar y se deja el material de 15 a 30 minutos. El vapor a presin proporciona temperaturas altas con penetracin y humedad en abundancia que facilitan la coagulacin de las protenas.

CALOR SECO El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusin de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra ms lentamente que el vapor de agua en materiales porosos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es baja. Esto se debe a que las protenas se estabilizan mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que son ms difciles de romper por el calor seco. Entre los mtodos que utilizan el calor seco como medio de esterilizacin tenemos: a) Flameado: Exposicin directa del instrumento a una flama b) Incineracin: Consiste en someter el material contaminado a altas temperaturas en hornos especiales prcticamente hasta reducirlo a cenizas. Su fin es evitar el vertido de material de alto riesgo en la basura. Se utiliza para destruir material descartable contaminado.

La accin directa de la llama elimina a los microorganismos cuando se lleva al rojo el material de metal como asas, lancetas, agujas de diseccin. c) Aire caliente: El aire caliente es uno de los mtodos de esterilizacin por calor seco ms utilizado. Se lleva a cabo en hornos especiales que permiten la distribucin uniforme del calor en su interior donde el material se expone a temperaturas de 170C durante dos horas. El tiempo de esterilizacin se debe determinar para cada material por ejemplo en el caso de materiales muy resistentes al calor se pueden usar temperaturas ms altas por tiempos ms cortos. La estufa de esterilizacin es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave.

La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras que a 170C se requieren al menos 1 horas de exposicin. Sirve para esterilizar material de vidrio es necesario que los materiales estn cubiertos con papel y algodn. Se emplea para la esterilizacin de: Instrumental, material de vidrio, polvos, materiales que soporten temperaturas superiores a 140C. Requiere un precalentamiento de 1-2 h dependiendo del equipo, una vez que se ha introducido el material. Ventajas: No es corrosivo para materiales e instrumentos Permite la esterilizacin de sustancias no acuosas y en polvo, y tambin sustancias viscosas no voltiles.

Desventajas: Requiere mayor tiempo de esterilizacin respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin de calor RADIACIONES Su accin depende de: Tipo de radiacin Tiempo de exposicin Dosis Ionizantes Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos. Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos. No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los componentes. Ultravioletas Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos debido a que forman dmeros de pirimidinas adyacentes que inducen errores en la duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las clulas. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies. Ejemplo de la cantidad necesaria en Mrads para eliminar los microorganismos (o reducir la poblacin inicial un log.) Microorganismo Endosporas Clostridium botulinum tipo E Enterobacter aerogenes Mycobacterium tuberculosis Streptococcus faecalis Poliovirus Micrococcus radiodurans Mrads 0.3 0.4 1.5 0.16 0.14 0.38 3.8 6

FILTRACION Las membranas filtrantes nos proporcionan una forma til de esterilizar materiales como vacunas, vitaminas, enzimas, antibiticos, sueros, carbohidratos, aminocidos que pueden daarse o pueden desnaturalizarse por la temperatura o agentes qumicos. Los microorganismos son retenidos en la malla del filtro.

Existen pequeos cartuchos de plstico que se pueden esterilizar despus de la insercin de un filtro de membrana; con estos dispositivos la filtracin se hace utilizando una jeringa que permite forzar el lquido a filtrar a travs del filtro hasta un recipiente estril.

Aplicaciones Filtracin esterilizante de aditivos y nutrientes para cultivo celular Filtracin de soluciones tamponadas o emulsiones Filtracin de soluciones biolgicas y diluciones Clarificacin de mezcla vegetal Retencin de carga vricas o bacteriana Filtracin de soluciones farmacuticas y quimioteraputicas Filtracin de soluciones para el diagnstico o anastsico Otras aplicaciones de filtracin mdica Ensayos de filtrabilidad

Tipos de membranas Membrana Esteres mezclados de celulosa Polietersulfona Polivinilideno de difluorido Acetato de celulosa Fibra de vdrio Poro (m) 0.2, 0.45 0.2, 0.45 0.2, 0.45 0.2, 0.45 0.4, 0.7, 1.0 * Dimetro (mm) 15, 28, 33 15, 28, 33 15, 28, 33 15, 28, 33 15, 28, 33

CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. Describa como esterilizo el asa de vidrio. Dibuje la autoclave con sus partes, que ha utilizado en la prctica. Qu tipo de esterilizacin se emplea para una asa de siembre. Dibujar Como prepara una pipeta para ser esterilizada. Como acta el calor seco en la esterilizacin de las bacterias

REFERENCIA BIBLIOGRFICA