Prctica de Laboratorio: Fermentacin Alcohlica

INTRODUCCIN Todas las clulas vivas, necesitan energa para cumplir con sus funciones, tales como transportar molculas dentro o fuera de la clula o sintetizar molculas necesarias para el organismo. El ATP es una molcula especial, la cual provee de energa a la clula para cumplir con sus funciones. Cada clula puede utilizar la energa almacenada en las molculas orgnicas de los alimentos como los carbohidratos para fabricar ATP. Cuando el O2 est disponible, la mayora de las clulas efectan la respiracin celular aerobia para transferir la energa de las molculas orgnicas de los alimentos al ATP. Como se muestra en la figura 1, la respiracin celular aerobia es un proceso complejo que empieza con la gluclisis, seguida por el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria o transportadora de electrones. En este proceso se puede fabricar alrededor de 36 a 38 molculas de ATP por molcula de glucosa. La mayora de este ATP es producido por la cadena transportadora de electrones, la cual solo puede funcionar si el O2 est disponible.
Glucosa Gluclisis
Fermentacin sin O2 2 ATP Ciclo de Krebs

Piruvato

con O2

2 ATP

Lactato

Etanol y CO2

Cadena Respiratoria

34 ATP

Proceso anaerbico Figura 1

Proceso aerbico

Cuando el O2 no est disponible, algunas clulas pueden fabricar ATP mediante la gluclisis y la fermentacin. La gluclisis produce 2 molculas de ATP y la fermentacin restaura a las coenzimas NAD+ para que participen nuevamente en la gluclisis y pueda continuar. La gluclisis seguida de la fermentacin produce mucho menos ATP que la respiracin celular aerobia, sin embargo la fermentacin es conveniente para algunas clulas cuando el oxgeno no est disponible y pueden sobrevivir bajo esas condiciones. En la imagen 1, la fermentacin es descrita como un proceso anaerobio. Dos tipos principales de fermentacin son: Fermentacin Lctica que puede ser realizada por algunas bacterias y clulas del musculo animal Fermentacin Alcohlica que puede ser realizada por algunas bacterias y en hongos como la levadura

OBJETIVOS Cuantificar el grado de fermentacin alcohlica a travs de la produccin de CO2 en levaduras Demostrar la importancia de la concentracin de sustrato en la fermentacin alcohlica Comprender el efecto de la temperatura en la velocidad de la fermentacin alcohlica en levaduras

Experimento 1. Efecto de la concentracin de sacarosa (azcar de mesa) en la velocidad de la fermentacin alcohlica en levadura. Si quisieras hacer tu propio pan, puedes comprar la levadura en el supermercado. La levadura parecen pequeos granos cafs o una barra parecida a la mantequilla pero de color caf. Estos materiales parecieran no estar vivos, pero si los pones en agua con azcar, la levadura absorber el azcar y utilizar la energa almacenada en las molculas de azcar para fabricar ATP y mantenerse con vida. La levadura puede utilizar la sacarosa para obtener energa y fabricar ATP. En tu experimento, debes cultivar levadura con agua azucarada en una botella de plstico de 250 o 300 y tapar la botella con un preservativo. Para medir la velocidad de la fermentacin alcohlica en la levadura, puedes medir de forma cualitativa la cantidad de CO2 que produce la levadura. Par probar si la concentracin de sacarosa afecta la velocidad de la fermentacin alcohlica en la levadura, debers medir la produccin de CO2 para tres diferentes concentraciones. Completa la siguiente tabla para predecir cuanta produccin de CO2 esperas para cada caso. PREDICCIN Tabla 1 Concentracin de sacarosa Botella 1: solucin de sacarosa 5% Botella 2: solucin de sacarosa al 10% Botella 3: solucin de sacarosa de 20% Prediccin de la cantidad de CO2 producido

PROCEDIMIENTO Por equipo prepara las botellas de plstico de la siguiente manera:

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1. Coloca 300 ml de agua en un vaso de precipitado, pesa 30 gr de levadura y agrgala al vaso y disuelve perfectamente con la varilla de vidrio. 2. Utiliza la parrilla calienta la solucin hasta 37 oC, trata de mantener esta temperatura durante 5 min. 3. Botella 1: Solucin de sacarosa al 5%. En una botella limpia, agrega 95 ml de la solucin y rotlala con el nmero 1 4. Botella 2: Solucin de sacarosa al 10%. En otra botella limpia, agrega 90 ml de la solucin y rotlala con el nmero 2 5. Botella 3: Solucin de sacarosa al 20%. En otra botella limpia, agrega 80 ml de la solucin y rotlala con el nmero 2 6. Pesa 5 gr. de azcar y agrgala a la botella 1, disuelve y tapa perfectamente la botella utilizando un preservativo y una liga de hule. 7. Ahora pesa 10 gr. de azcar y agrgala a la botella 2, disuelve y tapa perfectamente la botella utilizando un preservativo y una liga de hule. 8. Finalmente pesa 20 gr de azcar y agrgala a la botella 3, disuelve y tapa perfectamente la botella utilizando un preservativo y una liga de hule. 9. Observa los preservativos tan pronto como las botellas estn listas y tapadas con los mismos preservativos, a los tiempos 0 min., 10 min. y 20 min. 10. Al finalizar cada uno de los tiempos indicados, registra tus observaciones en la Tabla 2 utilizando la siguiente escala cualitativa de medicin: Nada=1, Poco=2, Regular=3, Ms que todas=4 Tabla 2 Concentracin de Sacarosa Botella 1: solucin de sacarosa al 5% Botella 2: solucin de sacarosa de 10% Botella 3: solucin de sacarosa al 20% Caractersticas del preservativo por la produccin de CO2 0 minutos 10 minutos 20 minutos

1 1 1

2 4 3

4 4 3

Mientras esperas a que transcurra el tiempo para registrar tus datos, realiza el experimento 2 Experimento 2. Efecto de la temperatura en la velocidad de la fermentacin alcohlica en levadura. PROCEDIMIENTO Por equipo colocars un cultivo de levadura en una botella de plstico bajo las condiciones que te asigne el profesor.

Equipo 1: a) Coloca en la bandeja de plstico hielo y agua. b) En un vaso de precipitados coloca 100ml de agua corriente y agrega 10 gr de levadura disuelve perfectamente c) Coloca el vaso de precipitados con la levadura disuelta en la bandeja con hielo y agua y deja reposar 15 min. d) Despus del tiempo asignado mide la temperatura del interior del vaso de precipitado, es decir, del cultivo de levaduras y antala en la tabla 3. e) Vaca el medio del vaso de precipitados a la botella de plstico y agrega 20 gr de azcar, disuelve y tapa perfectamente la botella utilizando un preservativo y una liga de hule. f) Deja reposar la solucin durante 15 min. g) Al finalizar el tiempo indicado, registra tu observacin en la tabla 3 utilizando la siguiente escala cualitativa de medicin: Nada=1, Poco=2, Regular=3, Ms que todas=4 Equipo 2: a) En un vaso de precipitados coloca 100ml de agua corriente y agrega 10 gr de levadura disuelve perfectamente y deja reposar durante 15 min. b) Despus del tiempo asignado mide la temperatura del interior del vaso de precipitado, es decir, del cultivo de levaduras y antala en la tabla 3. c) Vaca el medio del vaso de precipitados a la botella de plstico y agrega 20 gr de azcar, disuelve y tapa perfectamente la botella utilizando un preservativo y una liga de hule. d) Deja reposar la solucin durante 15 min. e) Al finalizar el tiempo indicado, registra tu observacin en la tabla 3 utilizando la siguiente escala cualitativa de medicin: Nada=1, Poco=2, Regular=3, Ms que todas=4 Equipo 3: a) Coloca 110 ml de agua corriente en un vaso de precipitados y agrega 10 gr de levadura, disuelve perfectamente b) Coloca el cultivo de levaduras en bao Mara hasta alcanzar una temperatura de 40 oC, mantener el cultivo en esa temperatura durante 15 min. c) Despus de que haya transcurrido el tiempo asignado, vaca slo 100ml del medio del vaso de precipitados a la botella de plstico y agrega 20 gr de azcar, disuelve y tapa perfectamente la botella utilizando un preservativo y una liga de hule. d) Deja reposar la solucin durante 15 min. e) Al finalizar el tiempo indicado, registra tu observacin en la tabla 3 utilizando la siguiente escala cualitativa de medicin: Nada=1, Poco=2, Regular=3, Ms que todas=4 Equipo 4: a) Coloca 110 ml de agua corriente en un vaso de precipitados y agrega 10 gr de levadura, disuelve perfectamente

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b) Coloca el cultivo de levaduras en bao Mara hasta alcanzar una temperatura de 50 oC, mantener el cultivo en esa temperatura durante 15 min. c) Despus de que haya transcurrido el tiempo asignado, vaca slo 100ml del medio del vaso de precipitados a la botella de plstico y agrega 20 gr de azcar, disuelve y tapa perfectamente la botella utilizando un preservativo y una liga de hule. d) Deja reposar la solucin durante 15 min. e) Al finalizar el tiempo indicado, registra tu observacin en la tabla 3 utilizando la siguiente escala cualitativa de medicin: Nada=1, Poco=2, Regular=3, Ms que todas=4 Equipo 5: a) Coloca 110 ml de agua corriente en un vaso de precipitados y agrega 10 gr de levadura, disuelve perfectamente b) Coloca el cultivo de levaduras en bao Mara hasta alcanzar una temperatura de 70 oC, mantener el cultivo en esa temperatura durante 15 min. c) Despus de que haya transcurrido el tiempo asignado, vaca slo 100ml del medio del vaso de precipitados a la botella de plstico y agrega 20 gr de azcar, disuelve y tapa perfectamente la botella utilizando un preservativo y una liga de hule. d) Deja reposar la solucin durante 15 min. e) Al finalizar el tiempo indicado, registra tu observacin en la tabla 3 utilizando la siguiente escala cualitativa de medicin: Nada=1, Poco=2, Regular=3, Ms que todas=4 Equipo 6: a) Coloca 110 ml de agua corriente en un vaso de precipitados y agrega 10 gr de levadura, disuelve perfectamente b) Coloca el cultivo de levaduras en bao Mara hasta alcanzar una temperatura de 80 oC, mantener el cultivo en esa temperatura durante 15 min. c) Despus de que haya transcurrido el tiempo asignado, vaca solo 100ml del medio del vaso de precipitados a la botella de plstico y agrega 20 gr de azcar, disuelve y tapa perfectamente la botella utilizando un preservativo y una liga de hule. d) Deja reposar la solucin durante 15 min. e) Al finalizar el tiempo indicado, registra tu observacin en la tabla 3 utilizando la siguiente escala cualitativa de medicin: Nada=1, Poco=2, Regular=3, Ms que todas=4 TABLA 3 Caractersticas del preservativo por la produccin de CO2 1 2

Equipo/Botella 1 2

Medio 100 ml de agua + 10 gr de levadura + 20 gr de azcar 100 ml de agua + 10 gr de levadura + 20 gr de azcar

Temperatura 11 oC 26 oC

3 4 5 6

100 ml de agua + 10 gr de levadura + 20 gr de azcar 100 ml de agua + 10 gr de levadura + 20 gr de azcar 100 ml de agua + 10 gr de levadura + 20 gr de azcar 100 ml de agua + 10 gr de levadura + 20 gr de azcar

50 oC 50 oC 70 oC 90 oC

3 1 1 1

Recolecta la informacin de la tabla 3 con el resto de los equipos. Grfica en Excel los resultados de la Tabla III. ANLISIS 1. Los humanos usamos la levadura todos los das para fabricar pan, vino y cerveza. Investiga qu es la levadura? Asi se le conoce a distintas especies de hongos unicelulares, estas sustancias hacen que se lleve a cabo la fermentacin con los cuerpos que se mezcla. 2. Para que ocurra la fermentacin primero se debe llevar a cabo la gluclisis, es decir, la oxidacin de la glucosa. Pero en la actividad experimental se utiliz sacarosa para que las levaduras realizaran la fermentacin. Explica por qu se utiliz a la sacarosa como medio para llevar a cabo la actividad experimental? 3. Que tipo de condiciones ambientales se crearon para el crecimiento de la levadura con el uso del preservativo? por qu fueron necesarias? Compara tus predicciones registradas en la Tabla I con tus resultados registrados en la Tabla II. 4. Las cantidades de CO2 producidos por las levaduras a los 0 min. fueron diferentes con respecto a tus predicciones? explica 5. Las cantidades de CO2 producidos por las levaduras a los 10 min. fueron diferentes con respecto a tus predicciones? explica 6. Las cantidades de CO2 producidos por las levaduras a los 20 min. fueron diferentes con respecto a tus predicciones? explica 7. De acuerdo a los resultados de la Tabla II y las respuestas ofrecidas a las anteriores preguntas qu conclusiones puedes formular acerca de la relacin entre la concentracin de sacarosa y la tasa de fermentacin alcohlica? 8. En el caso de los resultados de la Tabla III, existen diferencias en la cantidad de CO2 obtenido en las distintas condiciones de crecimiento a las que se expuso la levadura? Cmo influyeron cada una de las condiciones en el crecimiento? 9. Despus de graficar los resultados (temperatura/produccin de CO2) interpreta la grfica obtenida de los resultados de la Tabla III y explica su tendencia.

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10. Por qu en la fermentacin se produce menor cantidad de energa (2 ATP), que en la respiracin celular aerobia (38 ATP)? 11. Explica cul es la principal ventaja de la respiracin celular aerobia? y cul es la principal ventaja de la fermentacin? CONCLUSIN Elabora tus conclusiones con base a los siguientes aspectos 1. Cumplimiento o no de los objetivos de forma justificada 2. Comparacin de la teora contra la experiencia (resultados) obtenida en la prctica