PROTOCOLO PARA COELHOS

O Biotrio no possui produo de coelhos, estes devem ser adquiridos em granjas e/ou criadouros. Os coelhos recm-chegados passam por quarentena, que pode ser de 2 a 4 semanas, durante a quarentena o animal permanece em observao para possveis doenas;

pesquisador

dever

preencher

previamente

protocolo

da

experimentao, que est em anexo. As coletas de sangue so na veia auricular; As inoculaes so subcutneas, devendo-se utilizar 3 a 4 pontos do dorso do animal. A idade ideal para a produo de anticorpos policlonais em coelhos de 03 meses.

ANTGENOS Deve ser o mais purificado possvel contendo apenas os eptopos desejados, para produzir anticorpos de maior especificidade. Deve ser livre de toxicidade para o animal (lipopolissacardeos e resduos qumicos) Possuir ph fisiolgico, estar estril Estar nas concentraes adequadas, para coelhos a concentrao correta de 50-1000ug.

ADJUVANTES O adjuvante completo de Freund, composto por uma emulso de gua em leo adicionada de Mycobacterium SP, deve ser evitado. Caso seja necessrio deve ser utilizado apenas na primeira imunizao e o adjuvante incompleto de Freund (AIF) nas imunizaes subseqentes. Para limitar a severidade da inflamao, aps o uso de adjuvante de freund, aconselhvel: - Limitar a concentrao de Mycobacterium para 0,05 a 0,1mg/ml.

- Adicionar antgeno concentrado ao adjuvante e deste modo reduzir o volume de emulso a ser inoculada. - manter a esterilidade da soluo antignica. Os melhores adjuvantes so suspenses de leo em gua, e utiliza leos metabolizveis na sua composio, alm de algum sufactante no inico que ativa o sistema complemento, se ligando a seus componentes facilitando assim o contato do antgeno com as clulas dendrtica foliculares, ex. TiterMax. Outros so misturas de leos metabolizveis, detergentes e imunoestimuladores, utilizam-se produtos bacterianos modificados que minimizam a reao inflamatria, ex. Adjuvante de Ribi.

COLETA DE SANGUE NA VEIA AURICULAR

Com o animal imobilizado na caixa de conteno, realiza-se a dilatao do vaso com uma luz infravermelha. Aps a dilatao fazer assepsia com lcool 70% e introduzir a agulha no vaso central ou no vaso marginal.

Para o pr-imune e as coletas somente para verificao das quantidades de anticorpos, so coletados de 3 a 5ml. Para a coleta final onde o coelho ser eutanasiado, so coletados de 30 a 40ml.

PROCEDIMENTO PARA A INOCULAO

Para a inoculao o animal apoiado em uma mesa, onde um funcionrio o segura apenas para evitar que ele se mova durante a inoculao, enquanto o outro funcionrio realiza uma aplicao subcutnea do inculo, utilizando 4 a 5 pontos do dorso do animal, dependendo da quantidade inoculada.

Aps o trmino do experimento os animais sofrero eutansia.

EUTANSIA PARA COELHOS Ketamina- (22 a 50mg/Kg i/m ou s/c ) pode ser usado para imobilizar o coelho associada a xilazina ( 5mg/Kg) produz anestesia por 35 min. Para a eutansia administrado dose anestsica, devendo-se esperar o animal entrar em anestesia profunda (verificada atravs das digitais e globo ocular) e logo aps administrado o dobro da dose anestsica. Ao final o animal colocado na cmara de CO2 somente para certificao.

Todas as recomendaes acima so baseadas nas referncias e bibliografias citadas no site.