INFORME DE PRUEBAS BIOQUMICAS

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

ENSAYOS MICROBIOLGICOS LABORATORIO DE MICROBIOLOGA IES A SARDIEIRA ANALISIS Y CONTROL DE CALIDAD Responsable: Isabel Marfany Medn Fecha: 21/01/2014

Cepa: Escherichia coli. Pruebas de Identificacin de Enterobactericeas (IMViC y otras pruebas).

PRUEBA Indol Rojo de metilo y Voges-Proskauer KLIGER Nitratos Citratos Catalasa Oxidasa Manitol movilidad

Resultados + +/Produccin de gas + + +

Isabel Marfany Laboratorio de anlisis y control de calidad 21/01/2014

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ENSAYO

Prueba del Indol Deteccin de la encima triptofanasa. Medio de cultivo: Agua de triptona. Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Kovacs (4 5 gotas). Resultados:

Agua de triptona inoculada.

Aadimos al cultivo el reactivo de Kovacs y se forma un anillo prpura en la superficie del medio. El microorganismo contiene la encima triptofanasa. Indol positivo.

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Prueba del Rojo de Metilo y Voges-Proskauer -Rojo de Metilo. Deteccin de la presencia de fermentacin acido-mixta. Medio de cultivo: caldo MRVP. Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Rojo de metilo (4 5 gotas). -Voges-Proskauer. No presenta fermentacin butanodioica. Medio de cultivo: caldo MRVP. Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Alfa-naftol y KOH (4 5 gotas de cada uno). Resultados:

Cultivo en caldo MRVP

Dividimos el cultivo en dos tubos diferentes y en uno aadimos el reactivo rojo de metilo (tubo derecho) y en el otro el reactivo alfa-naftol seguido de KOH (tubo izquierdo). Rojo de metilo: color rojo intenso (positivo). Voges-Proskauer: No se vuelve rojo (negativo).

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Prueba del KLIGER Deteccin de gas. Medio de cultivo: KIA (Slant) Tipo de siembra: transferencia asptica con asa recta. Picadura y estra. Incubacin: 16h-24h 37c Resultados:

Medio sin inocular (derecha) y medio inoculado (izquierda).

Medio inolulado. No se aaden reactivos. Produccin de cidos de la lactosa (y de la glucosa): En la superficie del medio las enterobacterias respiran utilizando la glucosa y luego la lactosa en condiciones aerbicas y anaerbicas. En el fondo producen una elevada cantidad de cidos y difunden hasta la superficie (todo el medio amarillo). El color del medio indica el PH cido (Baja el PH del medio de cultivo). *Produccin de gas cido-cido.

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Prueba de Nitratos Deteccin de nitritos. Medio de cultivo: Caldo nutritivo con campana de Durham (lleva como suplemento nitrato potsico). Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Reactivos A y B de Griess-Ilosvay. Polvo de Zinc. Resultados:

Medio inoculado (izquierda) y medio sin inocular (derecha).

Aadimos los reactivos A y B de GriessIlosvay. Al no cambiar el medio de color, aadiremos polvo de Zinc, ya que no podemos confirmar que sea negativo. Al aadir polvo de Zinc, el color sigue sin cambiar, y por lo tanto la prueba es positiva y hay presencia de nitritos.

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Prueba de citratos Medio de cultivo: Agar Citrato de Simmons (Slant). Tipo de siembra: transferencia asptica con asa recta. Estra. Incubacin: 24h 37c Resultados:

Medio de cultivo antes de inocular

Medio de cultivo despus de inocular. No es necesario aadir ningn reactivo. No se ha obtenido crecimiento y el agar no ha cambiado de color a azul, por tanto la prueba es negativa.

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Prueba de la catalasa Deteccin de catalasa. Medio de cultivo: Agar Nutritivo (Slant). Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Estra. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Agua Oxigenada. Resultados:

Medio de cultivo inoculado.

En un portaobjetos, colocamos una gota de agua oxigenada y depositamos con el asa curva (de plstico) una muestra de una colonia. El agua oxigenada se ha disociado en agua y oxgeno (se observa el burbujeo del oxgeno). La prueba es positiva (hay presencia de catalasa).

*Observaciones: Utilizar asa de siembra de plstico para evitar falsos positivos.

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Prueba de la oxidasa Deteccin de oxidasa. Medio de cultivo: Agar Nutritivo (Slant). Tipo de siembra: transferencia asptica con asa curva. Estra. Incubacin: 24h 37c Reactivos: Reactivo de la oxidasa/reactivo de Kovacs. Resultados:

Medio de cultivo inoculado.

En el papel de filtro depositamos una gota de reactivo de Kovacs. Con el asa curva (de plstico), restregamos una muestra de una colonia sobre la gota. No se ha obtenido coloracin prpura. No hay cambio de color y por tanto, hay ausencia de oxidasa. La prueba es negativa.

*Observaciones: Utilizar asa de siembra de plstico para evitar falsos positivos.

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Prueba de Manitol movilidad

Deteccin de fermentacin del manitol y determinacin de la movilidad de nuestro microorganismo gracias a ser un medio semislido.

Medio de cultivo: Manitol movilidad (agar recto, superficie lquida). Tipo de siembra: transferencia asptica con asa recta. Picadura. Incubacin: 24h 37c Resultados:

Medio de cultivo sin inocular.

Medio de cultivo antes (derecha) y despus (izquierda) de inocular. Tras la incubacin, el medio ha cambiado a color amarillo, lo cual indica que el resultado es positivo. El microorganismo es capaz de fermentar el manitol. Hay movilidad ya que el crecimiento va ms all de la picadura, tomando una direccin determinada.

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