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Escuela Normal Superior FEP

Organizacin molecular y celular de la vida


Prctica 2 Determinacin de azcares reductores por el mtodo de Lane - Eynon
Fundamento: Las muestras se someten a una hidrlisis cida fuerte para desdoblar los almidones y obtener glucosa, la que tiene la propiedad de reducir al cobre de las soluciones alcalinas, segn el mtodo volumtrico de Lane y Eynon.

Reactivos
Solucin A Solucin de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO45 H20): Se disuelven 3.463 g en agua, hasta completar un volumen de 50 mI y se filtra a travs de lana de vidrio o papel filtro. Solucin B Solucin alcalina de tartrato de sodio y potasio: 1. Se disuelven por separado 17.3 g de tartrato doble de sodio y potasio (Sal de Rochelle, K NaC4H406.4H20) y 5.0 g de hidrxido de sodio(NaOH) en agua 2. Se mezcla y se diluyen hasta completar un volumen de 50 ml, se deja reposar. 3. Filtrar a travs de papel filtro. Solucin patrn de sacarosa invertida al 1%. 1. Se pesa en balanza analtica 0.95 g de sacarosa, 2. Se aaden 0.5 mI de HC1 concentrado y se diluye con 10 ml de agua, se deja reposar 30 min a una temperatura entre 20 y 15 C. 3. Se afora con agua destilada a 100 mI. Esta solucin es estable por un perodo de 3 4 meses. 4. Se neutraliza una alcuota con NaOH 1N y se diluye a una concentracin conocida, inmediatamente antes de usarse. Solucin acuosa de azul de metileno al 0.2%. HCl concentrado Hidroxido de sodio, en escamas, 1:1 p/v y solucin 1N

Procedimiento
Titulacin de la solucin patron de sacarosa invertida 1. Se toman 10 ml. de la solucin de sacarosa invertida previamente neutralizada y se aforan a 100 ml. Se colocan en una bureta. 2. Se deja caer la solucin de sacarosa invertida a un matraz que contenga 5 ml de la solucin A, 5 ml de la solucin B y 50 ml. de agua en ebullicin. 3. Antes de la total reduccin del cobre Se aade 1 ml. de la solucin de azul de metileno al 0.2% y se termina la titulacin hasta la decoloracin del indicador 4. Si se gastan menos de 15 o ms de 50 ml de sacarosa se repite la operacin para que el gasto quede comprendido en estos limites. 5. Titulo: Multiplicar los mililitros gastados por mg/ml de la solucin a titular. Muestra: 6. Colocar 5 a 10 g de la muestra en un matraz Erlen Meyer de 500 ml. aadir 150 ml. de agua y 25 de HCl concentrado. 7. Calentar de 60 a 75 min. 8. Enfriar y neutralizar. 9. Colocar el hidrolizado en un matraz aforado de 250 ml. Aforar con agua y filtrar para colocar en una bureta. 10. Realizar la titulacin con este hidrolizado.

Expresin de resultados y reproducibilidad


La fcula o almidn contenido en la muestra se calcula con la siguiente frmula:

g de fcula o almidn en 100 g de muestra = (Ttulo de la solucin A+B) (250/ml de muestra)(100/g de muestra) (0.09) Donde: 0.09 = Factor de conversin de glucosa a almidn . La diferencia entre los valores de 3 determinaciones efectuadas inmediatamente una despus de otra, sobre la misma muestra, por el mismo analista y con los mismos reactivos y aparatos, no debe exceder en 0.1 mg. En caso contrario, debe repetirse la determinacin. El resultado final debe expresarse como el promedio de los 3 anlisis.