Separaciones Qumicas Introduccin

Destilacin Extraccin con solventes Cromatografa

A. Martnez

Cromatografa
Un mtodo fsico de separacin Particin de componentes de una mezcla (soluto) entre dos fases: Fase estacionaria: No se mueve Fase mvil: Se mueve Los solutos se separan debido a las diferencias con que interactan con las dos fases.
A. Martnez 2

Clases de Cromatografa
De acuerdo con la fase mvil (CG, fase enlazada, etc.) Lquida (C. Adsorcin, C. Particin, C. Intercambio inico, C. Exclusin por tamao) Fludos supercrticos

A. Martnez

Breve historia
Tswett - 1903 Observacin inicial de separacin de extracto vegetal en barra de tiza Poco trabajo en los siguientes 28 aos Kuhn-Lederer -1931 Separacin CL de carotenoides
A. Martnez 4

Desarrollo de la Cromatografa
1903. Tswett describe los principios 1931. Lehderer y Kuhn - Aplicacin en CL 1936. Primer libro de cromatografa 1938. Uso de CCF e Intercambio inico 1939. Primeras resinas sintticas de intercambio inico 1941-1944. Primera C. Papel (CP) 1950. Se describe la CL fase reversa 1959. C. Permeacin en gel 1965. Instrumento HPLC
A. Martnez 5

Cromatografa Lquida
Primer mtodo cromatogrfico descrito (como un mtodo no-instrumental) Como la muestra no necesita vaporizarse, es potencialmente til para cualquier sustancia En desarrollo instrumental se rezag frente a la CG, debido a las dificultades para obtener un flujo estable de fase mvil
A. Martnez 6

Cromatografa Lquida
Hay varios tipos de interacciones que han sido utilizadas para separar solutos

Principales categoras
Adsorcin superficial Particin en solventes Intercambio inico Tamao molecular relativo
A. Martnez 7

Cromatografa de Adsorcin
La fase estacionaria es un slido. La separacin se produce por etapas sucesivas adsorcin/desorcin

A. Martnez

Cromatografa de Adsorcin
La slica gel y la almina son las fases estacionarias ms usadas Tanto el soluto como el solvente son atrados a los sitios polares de la FE Si los solutos tienen grados de atraccin diferentes por la FE, se produce la separacin
A. Martnez 9

Cromatografa de Particin
La separacin se d por la particin del soluto entre dos fases lquidas (solubilidad relativa)

A. Martnez

10

Cromatografa de Particin
Se aproxima mucho a la Cromatografa en Contracorriente Las sustancias ms retenidas tienen mayor afinidad (solubilidad) por la fase estacionaria, que por la fase mvil La separacin de las sustancias se d por diferencias en esta solubilidad relativa
A. Martnez 11

Cromatografa de Particin
Dos modos bsicos de operacin: Fase normal. FE polar, FM (eluente) no polar Fase reversa. FE no polar, FM polar La Fase Normal fue la primera descrita, pero la Fase Reversa es ms comn actualmente
A. Martnez 12

Cromatografa de Particin
El orden de elucin ser similar al de la fase reversa pero no igual, se deben considerar otros factores

A. Martnez

13

Cromatografa de Intercambio Inico

La FE tiene una superficie cargada inicamente, con cargas inicas opuestas a las de los eluentes

A. Martnez

14

Cromatografa de Exclusin por Tamao

La separacin se basa en el tamao molecular. La FE es un material de tamao de poro definido. Tambin llamada C. de Permeacin en Gel

A. Martnez

15

Seleccin del tipo de Fase Estacionaria (En general)

Si el soluto es no-polar, usar Fase Normal Si el soluto es polar, usar Fase Reversa

A. Martnez

16

Seleccin de la Fase Mvil (eluente), Factores a considerar

Fuerza del solvente: Determinada por la capacidad del lquido para arrastrar un soluto (polaridad). Existen escalas para la almina y la slica gel. Indice de polaridad: Un ndice relacionado principalmente para Fase Reversa.
A. Martnez 17

A. Martnez

18

Componentes del Sistema Cromatogrfico Fase estacionaria (sl., lq., polar, apolar, etc.) Fase mvil (sl., lq., gas., composicin, flujo) Soporte (CCF: Placa de vidrio, plstico, aluminio; CC: Tubo de vidrio; HPLC: Tubo de acero inoxidable) Inerte Revelador (Universal: CCF yodo, HPLC detector I. Refraccin; Especfico: CCF luz UV 254 nm, Dragendorff para alcaloides, Kedde para cardiotnicos, ninhidrina para aminocidos, etc.; HPLC: Detector UV-Vis var., fluormetro, E. De masas, etc.) A. Martnez 19

El valor Rf

A. Martnez

20

Problema propuesto 1
Al analizar por CCF (`Slica gel, n-Hexano/Acetato de etilo 3:2) una mezcla de las tres sustancias siguientes, se obtuvo los cromatogramas mostrados. Determinar a cul sustancia corresponde cada mancha. Cul est en mayor proporcin ?

HO OH NH2 HO OH OMe HO OMe

A. Martnez

21

Usos de CC y CCF
CC para fines preparativos (muestras al nivel de mg ms cantidad de soluto), la muestra se recupera. Tamao de partcula de la slica: 60100 nm CCF para fines analticos (muestras menores de 1 mg), la muestra se pierde, tamao de partcula de la slica 30-60 nm CCF preparativa (muestras entre 1 y 100 mg), la muestra se recupera
A. Martnez 22

Bibliografa
Stahl, E., Thin Layer Chromatography Wagner-Bladt-Zgainski, Plant Drug Analysis Journal of Chromatography A Journal of Chromatography B Journal of Chromatographic Science Chromatographia http://macweb.acs.usm.maine.edu/tanes/TLC.html http://genchem.chem.wisc.edu/labdocs/modules/tlchrom/thinlayr.htm http://www-saps.plantsci.cam.ac.uk/worksheets/project3.htm (pigmentos vegetales) http://www.chrom.com/forum/wwwboard.html (foro interactivo) http://chemscape.santafe.cc.fl.us/chemscape/catofp/chromato/tlc/page.htm (instrucciones bsicas, videos, fotografas, etc.)

A. Martnez

23

USO GENERAL DE CCF Y CC

CCF Cualitat. 1) Identif. con Se pierde la Se requiere estndares muestra menos de 1 2) Criterio de mg de muestra pureza Sepn. de sust. para estudios post. Se recupera toda la muestra Se requiere ms de 50 mg de muestra
24

CC

Preparat.

A. Martnez

A. Martnez

25

Recomendaciones para CCF y CC

Todos los materiales, includa la muestra deben estar completamente secos. Los solventes a utilizar como Fase Mvil deben ser qumicamente puros. Utilizar en CCF preferiblemente placas comerciales con indicador de fluorescencia para 254 nm. Existen procedimientos qumicos para reutilizar la slica de CC. En lo posible, una vez utilizada, almacenarla en recipientes secos y bien tapados. No tocar la slica con los dedos, la grasa aparecera como parte de la muestra. Las fases mviles que contienen solventes voltiles, cambian su composicin por evaporacin, prepare slo la cantidad que necesite y utilcela el mismo da.
A. Martnez 26

A. Martnez

27

A. Martnez

28

A. Martnez

29

A. Martnez

30

A. Martnez

31

A. Martnez

32

A. Martnez

33