TEXTO 1 GENTICA MOLECULAR

1.1. Introduo Ao se analisar um indivduo, seja uma planta, seja um animal, o que se v o conjunto de fatores que ao agirem, cada um a seu tempo, produzem o que se denomina fentipo. Esse conjunto composto pelos componentes celulares, sobretudo pelo ncleo, alm de um componente chamado ambiental. O ncleo o que age de forma decisiva na expresso do fentipo, ou aparncia do indivduo, pois ele contm o que se denomina a molcula da vida, ou DNA. Mas o que tem esse DNA que faz com que as ervilhas de Mendel sejam amarelas ou verdes, lisas ou rugosas? Que o feijo tenha flores roxas ou brancas e que suas sementes sejam pretas, marrons ou brancas? O que tem esse DNA que faz o animal engordar mais rpido num bom pasto, em relao a outros animais que no engordam tanto com a mesma forragem? Que estruturas moleculares contribuem para fazer com que esse fentipo se manifeste diferentemente em pocas especficas de desenvolvimento dos indivduos? O que faz que tecidos de crescimento vegetativo se transformem em reprodutivo e, por ltimo, como isso passa atravs das geraes? A Gentica Molecular consegue responder a essas questes, inclusive estabelecendo relaes com a Fisiologia Vegetal. Como se trabalha apenas com exemplos vegetais tentarse- us-los, em sua maioria, para explorar essas questes e evidenciar a importncia de se conhecer intimamente o DNA, sua composio e sua transmisso atravs das geraes. 1.2. O Gene e a enzima Ao se cruzar cultivares de feijo (Phaseolus vulgaris L.) que tm flores brancas, que sejam homozigotas, obtm-se a primeira gerao filial, a F1, com flores de cor prpura. Sabe-se que a gerao F1 , por excelncia, heterozigota, derivada do cruzamento entre paternais homozigotos, portanto possui em seu gentipo as duas formas allicas em todos seus genes. Ao se cruzar as plantas da F1 entre si obtm-se a gerao F2, onde se percebe que a proporo de flores prpuras para brancas de 9:7. Com essa proporo chega-se a concluir que so dois genes que esto agindo para a manifestao do fentipo e que o produto protico resultante possui uma interao do tipo Epistasia (Ver Texto 5). de conhecimento que na epistasia um alelo de um gene pode inibir o outro, ou que, quando os dois alelos ou apenas um de um gene no est presente no gentipo, o fentipo fica alterado. Para melhor se entender a proporo episttica mencionada citar-se- abaixo sua composio genotpica, usando simbologia aleatria.

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Quadro 1.1 Demonstrao do gentipo, fentipo e proporo episttica em F2 com dois genes interagindo entre si Nmero 9 3 3 1 Gentipo A- BA- bb aa Baabb Fentipo prpura branca branca branca Proporo Episttica 9 7

Portanto para a produo da cor prpura os dois alelos dominantes A e B devero estar nos mesmos indivduos. Na falta de um deles a cor passa a ser branca. O que tm ento esses dois alelos para produzirem a cor prpura? A cor das flores depende dos pigmentos que so produzidos e esses derivam de rotas metablicas especficas de transformaes de substratos. E a transformao dos substratos depende de enzimas. As enzimas so protenas com atividade cataltica constitudas de sequncias de aminocidos. Para que a seqncia de aminocidos funcione como uma enzima necessrio ter um informao prvia que dite onde se colocar a alanina ou a serina, se a metionina deve ou no ficar na sequncia. E quem determina isso tudo o DNA que constitudo de um conjunto ordenado de nucleotdeos, que so os precursores para a formao das cadeias de protenas. Na dcada de 50 a estrutura da molcula de DNA foi descoberta por Watson e Crick que estabeleceram um modelo de conformao dessa molcula que se encontra no ncleo das clulas dos vegetais e animais, nos seres humanos e procariontes (h vrus que tem o RNA como material gentico no lugar do DNA). O modelo da estrutura do DNA atualmente muito divulgado dada sua grande importncia em todas as reas relacionadas com a Biologia, como a Fsica, a Qumica, a Bioqumica e a Fisiologia Vegetal. Pode-se nesse momento dizer que genes e enzima estabelecem um par perfeito para o funcionamento celular pois um est em estreita relao com o outro. 1.3. Constituio do DNA O DNA constitudo pelo acar (desoxirribose), o fsforo (H3PO4) e bases nitrogenadas (Pricas - Adenina e Guanina e Pirimdicas - Citosina e Timina). O acar e o fsforo constituem o que se chama de corrimo e as bases nitrogenadas ligadas entre si, duas a duas, os degraus de uma escada imaginria enrolada de forma helicoidal. A molcula de DNA possui filamento duplo. 1.3.1. As ligaes no DNA As ligaes entre a molcula de fsforo e o acar do tipo fosfodister. O fsforo (PO4) liga-se ao carbono 5 do acar de um nucleotdeo e ao carbono 3 do nucleotdeo subseqente. Portanto, ao longo de um dos filamentos do DNA, a ligao 5>>> 3. Sendo o DNA uma molcula dupla o outro filamento possui a ligao, entre o fsforo e o acar, na seqncia 3 >>> 5. Diz-se ento que os filamentos so Antiparalelos.

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Para manter ambos os filamentos unidos os degraus da escada, que so as bases nitrogenadas, esto ligadas entre si por pontes de hidrognio. As bases nitrogenadas possuem uma ordenao especfica de ligao. A Adenina liga-se com 2 pontes de hidrognio a Timina e a Citosina com 3 pontes a Guanina. Esse pareamento constante, apenas as quantidades se alteram. Toda molcula de DNA, num organismo, encerra a informao para o desenvolvimento desse mesmo organismo. A cor do hipoctilo, a posio e a pigmentao das folhas, das flores, o tamanho das vagens ou das espigas, o peso das sementes, a produtividade so caracterstica determinadas pelos genes que esto no DNA. E, alm disso, possui tambm a informao para a produo de enzimas que iro desdobrar os substratos no interior das clulas, para que essas caractersticas possam se manifestar. Portanto a molcula de DNA tem o que se denomina de gene. Se o gene est presente a caracterstica que ele determina aparecer. Se a sua forma allica estiver presente no gentipo, outra caracterstica se manifestar, dependendo do tipo de interao que estiver envolvido esse gene. Ento para se responder como a cor prpura produzida deve-se levar em considerao que um alelo dominante de um gene A deve estar presente. Esse alelo, no DNA, possui a informao, codificada na sequncia e bases nucleotdicas, que produz uma enzima que transforma o substrato 1 em 2. Assim como, no outro gene B, o alelo dominante tambm deve estar presente para haver a transformao do substrato 2 em 3. O substrato 3 o que produz a cor prpura. Em resumo: alelo A EA alelo B EB

substrato 1 >>>>>>>>>substrato 2 >>>>>>>> substrato 3 (incolor) (branco) (prpura) Caso um desses alelos no esteja presente no indivduo a cor ser branca, porque haver bloqueio na rota metablica, conforme esquema abaixo: alelos aa alelos Balelos Aalelos bb

ou
Ea EB EA Eb

incolor >>>>> branco >>>>>branco (1)

(1) bloqueio da primeira etapa da rota metablica. (2) bloqueio na segunda etapa da rota metablica.

incolor >>>>> branco >>>>>>branco (2)

Se for considerada uma planta, em princpio, pode-se dizer que todas as suas clulas possuem o mesmo contedo gentico, portanto o mesmo nmero de

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cromossomos e genes. Esta informao vlida, porm vrias alteraes cromossmicas so passveis de acontecer. Por exemplo, as clulas dos vasos condutores no possuem mais ncleo e as clulas das folhas podem ter mais de 2 genomas, entretanto quando se refere s reprodutoras, a sim elas possuem o mesmo nmero cromossmico (so haplides), salvo algum problema provocado por mutagnicos. Mas como pode cada gerao possuir a mesma informao gentica contida no DNA? 1.4. A Duplicao do DNA As pesquisas sobre o comportamento do DNA foram elaboradas inicialmente em bactrias, principalmente em Echerichia coli, mas devido ao comportamento celular dos eucariontes ser semelhante, inferiu-se o modelo de conformao e de duplicao do DNA para todos os organismos. A prpria conformao da estrutura da molcula de DNA pressupe sua duplicao. Para entender como e porque o DNA se duplica necessrio dividir-se o ciclo de vida de uma clula em duas partes: a interfase e a diviso celular, conforme esquema abaixo:

interfase

diviso celular

na interfase que os genes se expressam, pois ocorre a diferenciao celular. O perodo de interfase pode ser subdividido em trs subperodos: G1, S e G2. Ambos subperodos, G1 e G2, derivam da primeira letra da palavra gap, que, em ingls significa parada. No perodo G1 so produzidas enzimas para o crescimento e diferenciao celular, e enzimas que atuaro sobre o DNA no subperodo seguinte. Neste estgio o DNA recebe o nome de cromatina. Ela est desespiralizada permitindo a expresso fenotpica do gene, atravs de uma outra macromolcula denominada RNA. No perodo S (Sntese) onde ocorre a duplicao de toda molcula do DNA. Enzimas especficas j produzidas agem sobre o DNA fazendo sua duplicao. Esse processo, como no poderia deixar de ser, de forma ordenada. Nas extremidades e ao longo do DNA, ao mesmo tempo, protenas comeam a agir desenrolando os filamentos, so as chamadas DNA-topoisomerases. A DNA-girase, que uma delas, provavelmente faa o DNA girar de forma contrria ao seu enrolamento natural, provocando o afrouxamento dos dois filamentos. A DNA-helicase provavelmente quebre as pontes de hidrognio no local de origem da duplicao. Com o afrouxamento dos fios de DNA a principal enzima de duplicao poderia agir. a DNA- polimerase. 1.4.1. A Duplicao do DNA semiconservativa A DNA polimerase coloca novos nucleotdeos apenas diante de um molde de DNA. Portanto um dos filamentos dos novos DNAs ser velho e outro ser novo, por isso a denominao semiconservativo.

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Para a DNA-polimerase iniciar sua atividade necessita de uma extremidade livre 3OH, que gerada por ela mesma com a colocao de um primer (pequeno segmento de RNA ou de DNA, tambm chamado de disparador). Esse primer colocado na extremidade 3 da cadeia molde. A partir da a DNA-polimerase sintetiza novos nucleotdeos. Esse primer posteriormente retirado pelo processo enzimtico de correo, feito pela prpria DNA-polimerase. A DNA-polimerase s funciona diante de um molde, cuja polaridade 3>>>5. Se os fios do DNA so antiparalelos como agiria a DNA-polimerase no molde 5>>>3? Vrios modelos de duplicao foram propostos pelos pesquisadores moleculares. O modelo faca e o descontnuo foram os primeiros, entretanto o modelo descontnuo ganhou maiores evidncias (Gardner, 1975) . O modelo descontnuo prev que o filamento original da polaridade 3>>>5 seja duplicado continuamente (filamento leading) e o filamento 5>>>3 de forma descontnua (filamento leaging). Para isso a DNA-polimerase sintetiza um primer no local de origem da duplicao, junto ao filamento 5>>>3 e a partir da sintetiza o novo filamento dirigindo-se para o lado oposto da origem da duplicao. Esse modelo tem-se mantido at ento, desde que R. Okazaki o concebeu. Os fragmentos no fio leaging formados receberam o nome do descobridor Fragmentos de Okazaki. Alm dessa importante ao enzimtica sobre o DNA para sua duplicao, no perodo S da interfase, salienta-se que no final de todo o processo a quantidade de DNA fica duplicada. Portanto pode-se afirmar que as cromtides-irms, dos cromossomos homlogos so produzidas neste subperodo. Essas cromtides-irms dividir-se-o nas fases de anfase e anfase II, da mitose e meiose, respectivamente (ver Transmisso dos genes entre geraes), levando as geraes seguintes a mesma informao. Gerao essa que pode ser celular, no mesmo tecido, no mesmo indivduo, por exemplo, tecido meristemtico, como gerao populacional. 1.5. O Processo de Expresso Fenotpica O DNA pode ser copiado em novo DNA, como processo acima descrito, ou ser copiado para uma nova macromolcula chamada RNA (cido ribonucleico). Se se entender o genes como uma conta, o DNA pode ser entendido como um colar de contas. Os genes desta forma esto dispostos linearmente ao longo de todo DNA. Hoje se sabe que nem todos os genes se transformam em protenas para originarem fentipos. H genes nos eucariontes que no funcionam. Esses j funcionaram durante o processo de evoluo da espcie ou podero funcionar permitindo sua readaptao a ambientes modificados, como tem acontecido nos ltimos tempos. H no genoma sequncias de genes no repetidas e sequncias altamente repetitivas decorridas de processo de duplicao ao longo da evoluo. A maioria dos genes estruturais esto nas sequncias no repetitivas produzindo as protenas. Em ervilha cerca de 15% do DNA constitudo de cpias nicas ou com pouca repetio (Mantel et al, 1994). Esses autores citam que o DNA altamente repetitivo forma a heterocromatina nos centrmeros dos cromossomos. Ao longo do DNA existem genes que controlam genes. So chamados de controladores ou reguladores. Esses genes produzem protenas que se ligam ou se desligam do DNA permitindo a produo ou no de protenas pelos genes estruturais. Os genes estruturais so os que realmente produzem enzimas que entraro nas rotas metablicas para a transformao de substratos e, por consequncia, a caracterizao do fentipo. Por isso pode-se afirmar que esses so os genes que se transformam em

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fentipos. Entretanto, para a manifestao do fentipo, outras estruturas so necessrias. So os RNAs. Trs RNAs so os mais salientados para que os genes estruturais possam funcionar, o RNA mensageiro, o RNA ribossmico e o RNA transportador. Todos esses RNAs so copiados do DNA pelo processo enzimtico, entretanto cada um tem forma e funo especifica. Os RNAs ribossmicos (RNAr) so produzidos na regio organizadora do nuclolo e se constitui na maior quantidade de RNA celular. Originam os ribossomos atravs do enrolamento da fita de RNA e pode ser encontrado, a nvel celular, no retculo endoplasmtico formando o retculo endoplasmtico rugoso. Possuem a funo de reunir o RNAm e o RNAt e os aminocidos no processo de traduo. Os RNAs transportadores (RNAt) so estruturas mais simples de RNA e possuem a forma de trevo. Sua funo carregar os aminocidos livres no citoplasma para os ribossomos. O RNAt possui o que se denomina de anticdon. So trs bases ribonucleotdicas numa das extremidades da molcula que tem estreita relao com o aminocido que ser carregado numa das alas do trevo. O RNA mensageiro (RNAm) de forma linear e um transcrito de uma das fitas do DNA, ou mais especificamente, do(s) gene(s) estrutural(is). Por um processo semelhante o da duplicao do DNA o RNA produzido sendo mediado pela enzima RNA polimerase DNA dependente e esse processo chama-se transcrio. 1.5.1. A transcrio A transcrio o processo de copiar o DNA para o RNA. Isto um processo normal na clula, porque o RNA uma molcula pequena, em relao ao DNA, e, portanto, podese locomover atravs dos poros da carioteca, indo do ncleo para o citoplasma, mais especificamente, para o retculo endoplasmtico rugoso. Na transcrio pode-se dizer que os genes so escolhidos para serem transcritos, dependendo do rgo em que estiverem e do estgio de desenvolvimento do vegetal. Genes da raiz no se manifestaro nas folhas e vice-versa, dada a especificidade do tecido vegetal. No ponto onde o gene ou grupo de genes se encontram os filamentos do DNA se afrouxam e a RNA polimerase liga-se ao stio promotor. Esse stio permite a sntese, porm, quando o gene no deve ser transcrito o stio promotor no permitir a ao a RNA polimerase. Essas regies, ditas promotoras, possuem sequncias de bases constante em todos os organismos, apresentando somente pequenas variaes e so chamadas de TATA box porque so ricas em adenina e timina (TATAATG em bactrias e TATAAAT em eucariontes). Elas podem ser chamadas, respectivamente de Pribnow box e Hogness box, lembrando os pesquisadores que as encontraram. As regies promotoras encontram-se sempre antes do trecho que ser copiado do DNA para o RNAm, nesse local que a RNA polimerase se liga. O local dessa regio varivel; pode estar de 5 a 10 bases antes da regio codificante, para alguns autores. Outros citam, no caso da zena no milho, estar a regio promotora, cerca de 20 a 30 bases antes do gene estrutural (Mantell et al, 1994). Outra sequncia tambm conhecida que participa do controle da sntese de protenas a regio chamada CATA box. Est localizada, no caso da zena, no milho, cerca de 70 a 80 bases antes do local da sntese. A partir desse stio a RNA polimerase inicia o processo de transcrio da fita de DNA copiando-a de forma complementar, apenas com duas alteraes: uma nas bases, a

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base nitrogenada que ir parear com a adenina ser a uracila e a outra no acar, que uma ribose. Dessa forma simples o RNA mensageiro vai se formando, at que a RNA polimerase encontre o ponto de trmino da transcrio. A direo dessa sntese da extremidade 5 >>>3 da molcula de DNA. Guilfoyle e Malcolm em 1980 (citado por Mantell et al, 1994) isolaram a enzima RNA polimerase em embries de soja, enquanto Jendrirak (1980), citado pelos mesmos autores, a isolou em trigo. Isto foi a confirmao da analogia do que ocorre entre os processos de transcrio em organismos diferentes, no caso a soja e o trigo. Deve-se aqui por uma ressalva: nos eucariontes o RNA produzido da forma acima descrita recebe, atualmente, o nome de pr-RNA, pois ele contm partes que iro se transformar em protenas e partes que no fazem parte das protenas, naquele momento. Aps a produo do pr-RNA algumas transformaes devem ocorrer para que ele possa atravessar a carioteca e ir at os ribossomos. Essas modificaes so necessrias porque grande parte dos genes eucariontes interrompida. Entretanto, a RNA polimerase copia todo segmento, indiscriminadamente, do DNA para formar o pr-RNA. As transformaes posteriores so para que passe somente cheguem ao citoplasma, partindo do ncleo, as informaes na forma de bases nucleotdicas que codificaro a protena. As estruturas no pr-RNA que se transformaro em protenas se chamam exons e segmentos que no so traduzidos que se denominam de introns. 1.5.2. Transformaes no pr-RNA Quatro etapas so importantes para a transformao do pr-RNA em RNAm: a) Retirada dos introns. Os introns no devero passar para o citoplasma, porque no iro ser traduzidos em protena. Isto o que se denomina de economia celular. b) Ligao dos exons. Os exons ligados originaro a sequncia correta de nucleotdeos que a informao para originar a cadeia polipeptdica. c) A adio do CAP. Uma molcula de 7-metil-guanosina adicionada na extremidade 5 do pr-RNA com a finalidade de direcionar o RNAm at os ribossomos. d) A adio da cauda de Poli A. Vrias sequncias de adenina so adicionadas na extremidade 3.

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Figura 1.1 Formas de produo de RNAm a partir de diferentes exons que ocorre em diferentes tecidos vegetais (Alternative splicing) (Fonte: http://pandasthumb.org/images/altsplice.jpg) Aps essas transformaes, que ocorrem ainda dentro do ncleo, o RNAm est pronto para ir at o retculo endoplasmtico e iniciar o processo de traduo. Nem todos os organismos tm como material gentico, o DNA de filamento duplo. H vrus que possui molculas de RNA como material gentico. Um exemplo o TMV, vrus do mosaico do tomate, que um retrovrus. Antes desse vrus infectar a planta ocorre a produo do DNA a partir do seu RNA usando a enzima chamada transcriptase reversa. A partir da fixa-se sobre a folha e injeta seu DNA no interior da clula hospedeira, que possui DNA normal de filamento duplo e aps a clula passa a trabalhar com as informaes genticas injetadas pelo vrus. 1.5.3. A traduo O processo de traduo o de transformar a informao que o RNAm tem em protena. Para isso os trs elementos, RNAm, RNAt e RNAr se encontram formando um s conjunto. O RNAr j fixado no retculo endoplasmtico possui dois stios: o sitio A, tambm chamado de anterior ou amino-acil e o stio P, posterior ou peptidil. A entrada do RNAm se d no stio A, que reconhecido pelo CAP na extremidade 5. Nesse stio o RNAm expe o seu primeiro cdon (conjunto de trs nucleotdeos). Neste instante o RNAt, livre no citoplasma, e que possui o anticdon, ativado para encontrar o aminocido correspondente a informao do cdon. A ativao do aminocido especfico se d atravs da enzima aminoacil tRNA sintetase e demanda uma reao com ATP. O resultado um aminocido adenilado com energia para fixarse ao RNAt. Quando essa reao ocorre h liberao de energia e o RNAt est carregado com o aminocido. Esse levado at o ribossomo. H ento o pareamento do cdon com o anticdon no stio A. A partir de agora a fita do RNAm anda dentro do ribossomo. Com esse movimento o par cdon-anticdon passa do stio A para o stio P e novo cdon exposto no stio A para que outro RNAt seja ativado e traga outro aminocido. Quando ambos os stios, A e P, esto ocupados com as duplas cdons-anticdons ocorre ligao entre os resduos de aminocidos. Com o deslocamento, mais uma vez, ocorre a liberao do RNAt do stio P e o do stio A passa para o P. Dois resduos de aminocidos j esto ligados entre si. Com a ativao de protenas de elongao, chamadas fatores e elongao (EF), a cadeia de protena vai se formando, pois os

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aminocidos vo sendo colocados conforme a informao ditada pelo cdon exposto no stio A do ribossomo. O processo continua seqencialmente at encontrar o ponto final. O ponto final caracterizado por trs cdons. So eles: UAA, UAG e UGA. Esses cdons vm na poro 3, antes da cauda de Poli A e determina o desligamento do RNAm do RNAr. O que permanece a protena formada com sua seqncia primria de aminocidos e j com suas outras estruturas, secundria, terciria e quaternria, definidas. Essa correlao existente entre cdons no RNAm e aminocidos na protena, permitiram o estabelecimento de um cdigo gentico. 1.6. O Cdigo gentico Depois das descobertas que: (1) o DNA o material gentico; (2) que o RNAm uma cpia do DNA e o intermedirio entre a informao gentica e a protena e (3) que a estrutura primria da protena est em acordo com a informao constante no DNA, ficou estabelecido um cdigo, com pequenas variaes entre os organismos e que resume todo o processo de traduo. Os itens a seguir demonstram o cdigo gentico: 1. H colinearidade entre genes e protenas O RNAm entra nos ribossomos na forma de seqncia de cdons - 3 bases ribonucleotdicas juntas - que determinam a ativao enzimtica do RNAt respectivo e do aminocido especfico. Se h, por exemplo, 250 cdons existiro 250 aminocidos na cadeia polipeptdica. 2. O cdigo em trincas Com a explicao do item anterior percebe-se que cada trs bases ribonucleotdicas no RNAm corresponde a um cdon e que nenhuma dessas bases ser aproveitada para outro cdon, anterior ou posterior. 3. O cdigo degenerado Ao se verificar a tabela de cdons percebe-se que vrios aminocidos so codificados por mais de um cdon, por exemplo, glicina codificada por GGG, GGC, GGA e GGU. Exceo a esta propriedade tem a metionina que codificada apenas por AUG e triptofano por UGG, somente. 4. O cdigo dito no ambguo Em condies naturais cada cdon sintetiza sempre o mesmo resduo de aminocido seja qual for a protena. A ambigidade pode ser encontrada em sistemas de cultivo de clulas. Por exemplo, uma linhagem de E. coli sensvel ao antibitico estreptomicina, ir codificar isoleucina, leucina ou serina diante do antibitico para a seqncia UUU. Normalmente ela codifica para fenilalanina (Burns e Bottino, 1989). 5. O cdigo tem ponto inicial O cdon de incio das cadeias o AUG que codifica metionina e est sempre na poro 5 do RNAm. Parece que a metionina est presente em todas as snteses, sempre aps um ponto final ou no incio da cadeia. Se esse aminocido no tiver funo fisiolgica na cadeia polipeptdica retirado enzimaticamente.

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6. O cdigo tem ponto final Na posio 3 o RNAm traz cdons que permitem o desligamento do RNAm do ribossomo e da protena formada, tudo isso enzimaticamente. Esses cdons no possuem transportadores especficos e so constitudos pelas seguintes seqncias de ribonucleotdeos: UAA, UAG e UGA. O final da cadeia no tem apenas um desses cdons e sim vrios, para fornecer ao ribossomo a informao para que as cadeias possam se desligar. 1.7. A Protena Depois de formada via processos de transcrio e traduo, derivadas de um ou mais genes, a protena tem a funo de: catlise enzimtica, sustentao mecnica, controle do crescimento e diferenciao celular. A catlise enzimtica a expresso fenotpica indireta do gene na qual a protena formada possui o destino de transformar substratos, aumentar a velocidade das reaes quando necessrio. Pode-se neste caso citar como exemplo a enzima fosfofrutocinase que catalisa a transformao da frutose 6-fosfato em frutose 1,6-bifosfato, na rota metablica da gliclise. A ao de sustentao mecnica, devida as protenas est na presena do colgeno, uma protena fibrosa presente na pele e ossos dos animais. No controle de crescimento e diferenciao celular a expresso do gene se manifesta pelo controle da informao gentica que permite a multiplicao das clulas no processo de mitose e na diferenciao dessas clulas para que elas assumam o papel destinado, no local onde se encontram. Exemplos dessas protenas so os hormnios vegetais, tais como, giberelina, auxina, citocinina. A expresso fenotpica direta pode-se citar os genes Z1; Z2 e Z3 que controlam a produo de isozimas lipoxigenases responsveis pela associao de compostos carbonlicos de cadeia curta s protenas. Os compostos carbonlicos so responsveis pelo sabor desagradvel no gro de soja e seus derivados. A sntese de protenas de reserva das sementes tem sido estudada extensivamente em muitas plantas cultivadas com o objetivo de melhorar o valor nutricional atravs de tcnicas de manipulao gentica. Nas leguminosas as protenas esto nos cotildones e nas gramneas no endosperma. Entre as protenas de reserva das sementes as prolaminas e glutelinas esto nos cereais e em gramneas selvagens, enquanto que as globulinas e as albuminas so encontradas em dicotiledneas. Quando as sementes esto em formao as protenas de reserva so produzidas ao nvel de retculo endoplasmtico, sendo posteriormente transportadas para os locais de reserva que so os vacolos, chamados como corpos proticos. 1.8. Regulao da produo de enzimas Viu-se no incio deste captulo que a produo de determinado fentipo, cor prpura das flores de feijo, dependente exclusivo de dois genes de interao episttica. A cor branca evidencia a falta de um alelo dominante. Os fentipos, como resultantes finais de todo processo molecular, so dependentes dos genes, das interaes entre si e deles com o meio ambiente. Sob esse aspecto e do ponto de vista que todos os cromossomos, e, portanto todos os genes, esto em todas as clulas, como que ocorre a regulao metablica desses genes? Quando se analisa uma cenoura, por exemplo, pode-se perceber que no colo a cor verde aparece quando ela fica a descoberta do solo. A luz, portanto a indutora para que genes responsveis pela produo de clorofila fiquem ligados e o fentipo verde aparea. No pice da cenoura a cor

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sempre constante. Neste ponto os genes responsveis pela produo de clorofila esto desligados, mesmo estando presentes nos cromossomos e, portanto nas clulas. Outro processo indutivo de regulao gnica pode ser observado quando sementes colocadas no solo comeam o processo de germinao. Nesse caso necessrio que molculas de gua penetrem pelo tegumento atingindo o embrio. Entretanto para que o embrio seja nutrido, a giberelina, um hormnio vegetal, ativado e, a partir dele, enzimas so produzidas para a degradao do endosperma. A primeira enzima produzida pela induo da giberelina a alfa-amilase, tornando-se, portanto, a principal hidrolase na germinao das sementes. uma endoenzima que hidroliza das ligaes -(1,4) ao longo dos polmeros de amilose e amilopectina. A giberelina, que produzida nas clulas do eixo embrionrio, difunde-se at o escutelo e a camada de aleurona, onde atua como um ativador primrio na cascata de sinais, que culmina com a induo de um fator de transcrio (o GAMyb) e a expresso gnica das enzimas hidrolticas (Ueguchi-Tanaka, et al., 2000). Alm disso, esse hormnio promove o alongamento do caule das plantas. Em ervilhas altas foi identificado o gene Le(le) que promove o alongamento do caule. O alelo Le codifica uma enzima que hidrolisa o GA20 para produzir GA1. O alelo recessivo le codifica uma enzima defectiva que tem funo diminuda na proporo de 1/20 da normal, deixando as plantas ans por possurem menos GA1. A giberelina tambm atua sobre as protenas que regulam a diviso celular (CDKs) protenas quinases dependentes de ciclina em plantas de arroz submersas. Nessas plantas a giberelina ativa o ciclo celular primeiro na transio da fase G1 para a fase S, provocando aumento da atividade mittica. Os genes CDKs so ento ativados nas fases anteriores da mitose e quando atingem essa fase disparam a diviso celular no meristema intercalar do caule, aumentando o nmero de clulas e tambm possibilitando seu alongamento.

Gentica molecular 1.9. Referncias bibliogrficas

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BURNS, G. W. e BOTTINO, P. J. Gentica. 6.ed. Guanabara-Koogan. Rio de Janeiro.1991. 381p. DE ROBERTIS, E. D. P. e DE ROBERTIS Jr., E. M. F. Bases da biologia celular e molecular. 2.ed. Guanabara-Koogan. Rio de Janeiro. 1993. 307p. GARDNER, E. J. Gentica. 5.ed. Interamericana. Rio de Janeiro. p.41-79. 1977. GARDNER, E. J.; SNUSTAD, D. P. Gentica. 7.ed. Interamericana. Rio de Janeiro. 1986. 497p. MANTEL, S.H.; MATHEWS, J. A.; McKEE, R. A. Princpios de Biotecnologia em Plantas. Ribeiro Preto. Sociedade Brasileira de Gentica. 1994. 344p. RAMALHO, M.; SANTOS, J. B.; PINTO, C. B. Gentica na agropecuria. 2.ed. Editora Globo. So Paulo. p. 19-59.1989. SUZUKI, D. T.; GRIFFITHS, A.J.F.; MILLER, J. H.; LEWONTIN, R. C. Introduo Gentica. 4.ed. Guanabara-Koogan. Rio de Janeiro. 1992. 633p. UEGUCHI-TANAKA, M.; FUJISAWA,Y.;KOBAYASHI, M. et al. Rice dwarf mutant d1 which is defective in the alpha subunit of the heteromeric G protein, affects gibberellin signal transduction. Procedings Natural Academic Science. USA, v. 97, p. 11638-11643, 2000,