S. M. Carrin 1 , D. E. Molina 2 , Y. Pieros 3* 1, 2 Estudiantes Ingeniera de Alimentos, Universidad de Bogota Jorge Tadeo Lozano, Bogot, Colombia. 3 Docente Ingeniera de Alimentos, Universidad de Bogot Jorge Tadeo Lozano, Bogot, Colombia. Direccin electrnica: yineth.pineros@utadeo.edu.co
1. RESUMEN
El objetivo del trabajo fue obtener etanol a partir de suero de leche mediante el cultivo de Saccharomyces cerevisiae. Primero se hidroliz la lactosa mediante la enzima -galactosidasa. Para lograr la hidrlisis y seleccionar el mejor sistema de inmovilizacin enzimtica se utiliz como soportes alginato de calcio, alginato de calcio con tierra de diatomceas y alginato de calcio con silica gel. Los porcentajes de hidrlisis de la lactosa fueron 49.57%, 75.21% y 72.65%, respectivamente, encontrndose superioridad del catalizador enzima-alginato de calcio-slica gel. Teniendo en cuenta los resultados, se utilizaron estos catalizadores biolgicos para la hidrlisis de la lactosa presente en el suero de leche y la posterior produccin de etanol.
2. INTRODUCCIN
Durante miles de aos el etanol ha sido producido para el consumo humano, especialmente para la obtencin de bebidas alcohlicas concentradas mediante destilacin. En la actualidad el alcohol ha retomado mayor importancia debido a su utilizacin como combustible (mezclado con gasolina) para automviles (Trevan, 1990).
El alcohol se puede producir por rutas qumicas (hidratacin cataltica del etileno) y por rutas biotecnolgicas (fermentacin). Mediante sta ltima se hace uso de la capacidad de los microorganismos para la produccin de etanol sobre sustratos baratos y disponibles, dentro de los cuales se encuentran lactosa, xilosa y almidn. A travs de procesos biotecnolgicos se busca producir etanol a partir de desechos orgnicos como el suero de leche (fuente de lactosa) el cual se genera como un residuo en procesos lcteos. La levadura Saccharomyces cerevisiae ha sido tradicionalmente usada para la produccin de etanol (Trevan,1990). Para la produccin de etanol a partir de suero de leche mediante el cultivo de S. cerevisiae, es necesario realizar la hidrlisis de la lactosa para obtener glucosa y galactosa como sustratos, reaccin mediada por la - galactosidasa.
2 La inmovilizacin de enzimas se ha convertido en el mecanismo de estabilizacin de las enzimas favoreciendo las condiciones de trabajo a gran escala (Madigan et al., 1998).
3. METODOLOGA
3.1. Inmovilizacin de la enzima -galactosidasa
Se inmoviliz la enzima - galactosidasa (Novazym, Novozymes) mediante alginato de calcio (alginato de sodio 1,5% en CaCl 2 0.05M), alginato de calcio ms silica gel 0.2% (Merck) y alginato de calcio mas tierra de diatomceas 0.2% (Merck). La concentracin de la enzima en los inmovilizados fue del 10%.
3.2. Medicin de la actividad de la -galactosidasa inmovilizada
Se utiliz una solucin de lactosa al 1% como sustrato. La hidrlisis enzimtica se llev a cabo a 30C durante 24 horas, en una columna de vidrio como soporte para los inmovilizados, con una relacin 4,5 mL de enzima/100 mL de solucin de lactosa. El contenido de lactosa se cuantific mediante el mtodo de Fheling modificado (AOAC 974.06, 1996).
3.3. Produccin de etanol
El suero de leche fue obtenido de una fbrica de quesos ubicada en Bogot. Se esteriliz a 121C durante 15 minutos. Posteriormente se tomaron 200 mL de sobrenadante; para la hidrlisis de la lactosa se utiliz -galactosidasa inmovilizada aspticamente (4.5 mL de enzima). Luego se adicionaron 0,1 g de levadura Saccharomyces cerevisae (Levapan) y se dej en fermentacin durante 4 das a 30C, sin agitacin. Posteriormente se realiz una destilacin simple a temperatura controlada de 75C. El porcentaje de etanol en el destilado se cuantific mediante ndice de refraccin (Refractmetro Fisher Scientific, rango 0-28).
4. RESULTADOS Y DISCUSIN
4.1. Inmovilizacin de -galactosidasa
Los resultados de los ensayos relacionados con la actividad de la -galactosidasa inmovilizada, se presentan en la Tabla 1. Se puede observar que la menor cantidad de lactosa presente luego de la hidrlisis se present con la enzima inmovilizada en alginato de calcio con silica gel. Con este catalizador 3 enzimtico se logr un porcentaje de hidrlisis de la lactosa de un 75,21%, es decir un 51.72% ms que con el inmovilizado realizado nicamente con alginato de calcio. Este comportamiento puede deberse a las propiedades de superficie de la silica gel, ya que permite el mejor desempeo de la enzima y adems favorece los procesos difusivos al interior del catalizador. Teniendo en cuenta este resultado, se utiliz -galactosidasa inmovilizada en alginato de calcio con slica gel para la hidrlisis de suero de leche, para producir etanol.
Tabla 1. Hidrlisis de lactosa mediante -galactosidasa inmovilizada.
Sistema de inmovilizacin Concentracin de lactosa luego de la hidrlisis (% p/V) % de hidrlisis Alginato 0.59% 49.57% Alginato + silicagel 0.29% 75.21% Alginato + tierra diatomea 0.32% 72.65%
4.2. Produccin de etanol
Luego del cultivo de Saccharomyces cerevisiae sobre el suero de leche hidrolizado, se destil para encontrar el rendimiento producto sustrato (Yps) en gramos de etanol/gramos de lactosa. Para cuantificar la concentracin de etanol en el destilado se realiz una curva de calibracin mediante ndice de refraccin utilizando etanol al 96%. Esta curva present un factor de correlacin lneal de 0.9849, correspondiente a IR (ndice de refraccin) = 26.89 * (Concentracin de etanol en mL etanol/mL solucin) 0.1494. La concentracin de etanol en el destilado fue de 0.027 ml/ml de destilado, por lo tanto el valor del rendimiento producto sustrato (Yps) es 2,722 x 10-3 g etanol/g lactosa.
El rendimiento obtenido presenta un valor bajo; por lo tanto se debe realizar un estudio ms profundo acerca de las condiciones de hidrlisis del suero de leche y del cultivo de Saccharomyces cerevisiae para la produccin de etanol. Lo mismo que establecer mecanismos que permitan hacer el seguimiento de las reacciones bioqumicas.
5. CONCLUSIONES
Se logr establecer un sistema de inmovilizacin de la -galactosidasa, que favorece la actividad enzimtica, conformado por alginato de calcio y slica gel. Por otro lado, se logr obtener etanol a partir de lactosa presente en el suero de 4 leche, mediante el cultivo de Saccharomyces cerevisiae. Este tipo de procesos favorece el aprovechamiento de desechos orgnicos de la industria lctea.
6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
A.O.A.C. 1996. Official Methods of Analysis of AOAC International. 16 th ed., AOAC International. Gaithersburg, M.D.
Doran, P. 1998. Principios de la Ingeniera de los Bioprocesos. Editorial Acribia S.A. Zaragoza, Espaa. 468p.
Madigan, M.; Martinko, J.; Parker, J. 1998. Brock Biologa de los Microorganismos. Editorial Prentice Hall. Madrid, Espaa. 986p.