Tcnica de tincin May Grunwald y Giemsa

El primer paso de la tcnica, es la fijacin con metanol: Proceso fisicoquimico que altera las propiedades qumicas de las protenas que forman las clulas, para que luego resistan el proceso de ten.ido preservando la estructura que tenan cuando estn in vivo.
Tincion con:

Solucin May Grunwald

Contiene eosina (colorante anionico), afinidad por los componentes celulares de naturaleza catinica (hemoglobina y protenas contenidas en las granulaciones) y azul de metileno (colorante catinico), afinidad por los componentes celulares de naturaleza anionica (ADN, ARN, mitocondrias).

Comportamiento Tincin:

Ortocromtico, porque conserva la coloracin, cuando se fija el componente celular.

Resultados:

Tie los elementos acidofilos y las granulaciones neutrfilas de los leucocitos.

Las diluciones de las soluciones de la tincin y los lavados, se deben hacer con solucin tamponada a pH 7,2.

Para no perturbar las afinidades de tincin de los constituyentes celulares.

Objetivo:

Los colorantes se encuentran en estado no ionizado mientras se mantienen en solucin de alcohol metlico, pero al aadir solucin tamponada se ionizan y se unen selectivamente a los constituyentes celulares precipitando como sales insolubles.

Solucin Giemsa

Contiene eosina (colorante anionico), azul de metileno (colorante bsico) y productos de oxidacin de este segundo compuesto, tales como: el azur A, B y C.

Comportamiento de la tincin es:

Metacromtico, la tincin cambia de color una vez unido al componente celular. Es lo que ocurre con los derivados del azul de metileno, los azur A y B originalmente de intenso color azul se convierten en prpuras cuando se unen a los componentes celulares azurfilos.

Se obtiene una:

es Protocolo de Tincin diferencial, decir, una tincin que es capaz de discriminar entre las distintas estructuras celulares segn se tian stas con el colorante cido, con el bsico o con la mezcla de ambos.

Resultado:

Tincin del citoplasma de los monocitos, linfocitos y la cromatina de los ncleos.

4. ABP:

Logran simplificar la generacin de clulas madre a partir de clulas adultas

Un equipo de investigadores del Centro de Medicina Regenerativa de Barcelona, liderados por el cientfico Juan Carlos Izpisa, es el responsable del hallazgo

Juan Carlos Izpisa, director del Centro de Medicina Regenerativa de Barcelona (CMRB). Un equipo de investigadores del Centro de Medicina Regenerativa de Barcelona (CMRB), liderados por el cientfico Juan Carlos Izpisa, ha conseguido simplificar el proceso para generar clulas madre a partir de clulas adultas humanas. La investigacin, que allana el camino para obtener clulas madre humanas a travs de clulas del propio paciente mediante el uso de compuestos qumicos, ampla los trabajos realizados por el equipo del premio Nobel japons Shinya Yamanka. Las clulas madre son un elemento clave para que la medicina regenerativa se convierta en una realidad en los hospitales ya que son capaces de transformarse en cualquier tipo de clula en el organismo, capacidad que los cientficos llaman pluripotencia. Segn ha explicado este jueves el CMRB, existen dos tipos de clulas pluripotentes: las clulas madre embrionarias, que son clulas inmaduras que nunca se han diferenciado a un tipo celular especfico, y las clulas madre de pluripotencia inducida (IPS en sus siglas en ingls). Estas ltimas son clulas adultas a las que se les ha reprogramado su reloj biolgico para volver a un estado indiferenciado, con lo que se pueden crear a partir de clulas

del mismo paciente, evitando as el rechazo inmunolgico, y no implican la destruccin de embriones sobrantes de tratamientos de fecundacin in vitro. Hasta ahora, segn el CMRB, se crea que slo se podan producir clulas IPS usando una frmula muy estricta que no permita ninguna variacin, limitando as su potencial para la aplicacin teraputica. La investigacin del equipo de Izpisa, que ha publicado la revista especializada Cell Stem Cell, demuestra que la receta para obtener clulas IPS "es mucho ms verstil de lo que se crea", ha informado el CMRB, un centro que dirige el doctor Aizpisa. Por primera vez, han reemplazado un gen que se crea imposible de sustituir, lo que facilitar el proceso de obtencin de clulas madre por mtodos ms seguros que potencialmente se podrn trasladar a la prctica clnica. En el ao 2006, el equipo investigador del premio Nobel Shinya Yamanaka descubri un mtodo para obtener clulas madre pluripotentes a partir de clulas diferenciadas adultas de ratn y en 2007 utiliz el mismo mtodo para hacerlo con clulas humanas, investigacin que le vali el premio Nobel. El mtodo de grupo japons consiste en introducir en las clulas cuatro factores de transcripcin que se han conocido desde entonces como factores Yamanaka o factores de pluripotencia, con lo que se transforman en el laboratorio clulas procedentes de la sangre, de la piel o de otros tejidos en clulas pluripotentes que pueden dar lugar a clulas de cualquier rgano del cuerpo. Ahora, Izpisa, en colaboracin con el Laboratorio de Expresin Gnica de Salk Institute (EE.UU.), ha dado un enfoque totalmente nuevo a esta lnea de investigacin y ha descubierto que se puede lograr la pluripotencia mediante un fino balance de genes necesarios para la diferenciacin celular, es decir, genes que instruyen a las clulas para especializarse en lneas particulares, como pueden ser clulas de la piel o de la sangre. As, los investigadores han visto que los cuatro factores Yamanaka no son necesarios, ya que la pluripotencia se puede lograr alterando el balance de genes presentes en las clulas adultas y que intervienen en la especificacin del linaje celular. "En nuestro trabajo hemos identificado nuevos genes, no descritos anteriormente como inductores de la reprogramacin ni tpicos de clulas madre, que permiten reprogramar las clulas somticas a un estado de pluripotencia", ha explicado Izpisa. "Este hallazgo -ha detallado el cientfico- podra conducir al diseo de protocolos de reprogramacin ms seguros y podra reducir el riesgo de transformacin oncognica". Izpisa es el director del Centro de Medicina Regenerativa de Barcelona, creado en 2006 y que se ha convertido en un centro de referencia mundial tras seis aos de investigacin en clulas madre inducidas con el objetivo de aplicar estas clulas a enfermedades degenerativas.

En los ltimos aos, los cientficos del CMRB han conseguido generar clulas madre IPS a partir de fibroblastos, queratinocitos, clulas de cordn umbilical y clulas de la sangre humana, entre otros tipos celulares. Fundamento de la eleccin:

Es un nuevo camino para crear clulas madre El equipo de investigadores del CMRB y del Laboratorio de Expresin Gnica del Salk Institute, ha dado un enfoque totalmente nuevo a esta lnea de investigacin y ha descubierto que se puede lograr la pluripotencia mediante un fino balance de genes necesarios para la diferenciacin celular, es decir, genes que instruyen a las clulas para especializarse en lneas particulares, como pueden ser clulas de la piel o de la sangre. Antes de estos experimentos, la mayora de investigadores en este campo intentaba sustituir los factores clsicos de reprogramacin por otros que se presentaran de manera natural en las clulas madre embrionarias. El equipo del Dr. Izpisa se aproxim al problema de una manera innovadora. La pluripotencia parece que no representa una identidad celular particular, sino un estado funcional mantenido por un balance de fuerzas diferenciadoras opuestas, explica el Dr. Izpisa, quien dirige el CMRB. Los investigadores se dieron cuenta de que los cuatro factores Yamanaka no eran necesarios, ya que la pluripotencia se poda lograr alterando el balance de genes presentes en las clulas adultas y que intervienen en la especificacin del linaje celular. En el trabajo han identificado nuevos genes, no descritos anteriormente como inductores de la reprogramacin ni tpicos de clulas madre, que permiten reprogramar las clulas somticas a un estado de pluripotencia. Este hallazgo podra conducir al diseo de protocolos de reprogramacin ms seguros y podra reducir el riesgo de transformacin oncognica. El grupo del Dr. Izpisa ha demostrado que ms de siete genes adicionales son capaces de participar en el proceso de reprogramacin de fibroblastos humanos a clulas iPS, y lo ms importante: han demostrado por primera vez que todos los factores Yamanaka pueden ser sustituidos. Hasta la fecha se haba pensado que el factor de transcripcin OCT4 era indispensable para poder transformar clulas adultas humanas en clulas iPS. El hecho de que un factor como OCT4, previamente considerado caracterstico de clulas madre, pueda ser sustituido conlleva la posibilidad de que las clulas madre generadas de esta manera sean fundamentalmente distintas a las obtenidas por otras metodologas, lo que podra traducirse en un mejor comportamiento en trminos de seguridad y/o funcionalidad.

Aunque an lejos de conseguir que la reprogramacin de clulas madre pueda ser utilizada para reemplazar las clulas perdidas en el transcurso de una enfermedad degenerativa en humanos, los cientficos del CMRB y del Salk Institute han descubierto un sistema de generacin de clulas madre con implicaciones prcticas: por un lado las clulas madre generadas con los factores descubiertos por el equipo investigador, podran presentar mejor funcionalidad y menor riesgo; por otro lado, el descubrimiento de que factores tpicos de clulas diferenciadas permiten la reprogramacin a clulas madre pluripotentes permitir en el futuro la identificacin de molculas qumicas para la sustitucin de factores de reprogramacin. Estos hallazgos ofrecen la posibilidad de identificar en un futuro inmediato pequeas molculas (frmacos) capaces de reemplazar OCT4 en el proceso de la reprogramacin celular. De esta manera se podra evitar el uso de metodologas empleadas hasta la fecha, tales como retrovirus, lentivirus o plsmidos, que dificultan el uso de las clulas reprogramadas en terapias de sustitucin celular. As pues, el uso de frmacos podra suponer la generacin de clulas iPS mediante estrategias seguras aptas para su traslacin a la clnica.