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UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR FACULTAD DE QUIMICA Y FARMACIA

DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL 300 MILIGRAMOS APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE.

TRABAJO DE GRADUACIN PRESENTADO POR CLAUDIA MARA INS GARCA MATA

PARA OPTAR AL GRADO DE

LICENCIATURA EN QUMICA Y FARMACIA

MAYO DE 2012

SAN SALVADOR, EL SALVADOR, CENTROAMERICA.

UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

RECTOR ING. MARIO ROBERTO NIETO LOVO

SECRETARIA GENERAL DRA. ANA LETICIA ZAVALETA DE AMAYA

FACULTAD DE QUIMICA Y FARMACIA

DECANO LICDA. ANABEL DE LOURDES AYALA DE SORIANO

SECRETARIO LIC. FRANCISCO REMBERTO MIXCO

COMITE DE TRABAJO DE GRADUACION

COORDINADORA GENERAL Licda. Mara Concepcin Odette Rauda Acevedo

ASESORAS DE AREA DE CONTROL DE CALIDAD DE PRODUCTOS FARMACEUTICOS, COSMETICOS Y VETERINARIOS

Licda. Zenia Ivonne Arvalo de Mrquez MSc. Roco Ruano de Sandoval

DOCENTES DIRECTORES

MSc. Eliseo Ernesto Ayala Meja Ing. Sergio Armando Maravilla Licda. Brbara Lisseth Palacios Rodrguez

AGRADECIMIENTOS

A Dios todopoderoso y a la Santsima Virgen Mara por haberme dado la capacidad para poder finalizar mis estudios universitarios. A Lic. Alia Saca de Hasbun por haberme brindado el apoyo, la oportunidad y confianza en llevar a cabo este trabajo. A mi docente director MSc. Eliseo Ernesto Ayala Meja por su apoyo y colaboracin incondicional en el desarrollo de este trabajo. A mi querido compaero y amigo Lic. Remberto Cabrera por haberme brindado su tiempo, paciencia y apoyo incondicional en este trabajo. A mi familia por todo el cario, comprensin, esfuerzo y apoyo que me han brindado a lo largo de mi vida y formacin profesional. A la familia Melgar Hernndez por todo el apoyo y cario brindado. A los docentes y personal de la Facultad de Qumica y Farmacia de la Universidad de El Salvador, as como tambin a mis amigos por haber sido una parte fundamental dentro de mi formacin acadmica.

DEDICATORIA

A Dios Todopoderoso, por ser mi soporte, por responder a mis oraciones, por ser mi gua y no desampararme en las adversidades.

A mi querida madre Mara Adela, por tenerme en sus oraciones y brindarme todo el apoyo, cario y comprensin en los momentos ms difciles.

A mis queridos hermanos Alexander Fernando, Mara Adela, Cecilia Esmeralda y Jos Martn por todo lo que compartimos, por brindarme su cario.

A mi novio Marco Antonio por el cario, afecto y apoyo brindado para culminar este trabajo.

A mis amigos y amigas con los que compart penas y alegras y que me fortalecieron y apoyaron en los momentos ms difciles.

INDICE Pg.

Resumen Captulo I 1.0 Introduccin xiv

Captulo II 2.0 Objetivos

Captulo III 3.0 Marco terico 3.1 Generalidades de alopurinol 3.1.1 Aplicaciones teraputicas 3.1.2 Farmacocintica y metabolismo 3.2 Aspectos tericos de la validacin 3.2.1 Validacin 3.2.2 Mtodos que pueden ser validados 3.2.3 Tipos de validacin 3.3 Datos requeridos para la validacin de anlisis 3.4 Caractersticas de desempeo analtico 3.4.1 Exactitud 3.4.2 Precisin 3.4.3 Especificidad 3.4.4 Lmite de deteccin 3.4.5 Lmite de cuantificacin 3.4.6 Linealidad e Intervalo 3.4.7 Tolerancia 3.3.8 Robustez 19 19 21 22 23 23 23 24 25 26 26 27 28 28 29 30 32 33

3.5 Aspectos tericos de la prueba de disolucin 3.5.1 Aparato I 3.5.2 Aparato II 3.5.3 Aparato III 3.5.4 Aparato IV 3.5.5 Medio de disolucin 3.5.6 Volumen 3.5.7 Agitacin 3.5.8 Tiempo de muestreo 3.5.9 Tipos de muestreo 3.5.10 Filtros 3.5.11 Procedimiento 3.5.12 Interpretacin

34 36 37 38 39 40 42 42 42 43 44 44 45

Captulo IV 4.0 Diseo Metodolgico 4.1 Tipo de estudio 4.2 Investigacin bibliogrfica 4.3 Investigacin de campo 4.4 Parte experimental 4.4.1 Parte I 4.4.2 Parte II 47 47 47 48 49 49 53

Captulo V 5.0 Resultados 5.1 Parte III 59 65

Captulo VI 6.0 Conclusiones 77

Captulo VII 7.0 Recomendaciones Bibliografa Anexos 80

INDICE DE ANEXOS

Anexo

1. Datos requeridos para ensayos de validacin segn la farmacopea de los Estados Unidos. 2. Datos requeridos para ensayos de validacin segn ICH. 3. Criterios de aceptacin para prueba de disolucin. 4. Protocolo de determinacin de parmetros de desempeo del mtodo de disolucin de tabletas espectrofotometra ultravioleta visible. 5. Tablas de muestreo Militar estndar. 6. Resultados de prueba de disolucin. 7. Preparacin de soluciones estndar y soluciones placebo adicionado. 8. Preparacin de reactivos. 9. Monografa de tabletas de alopurinol. 10. Espectros de absorcin de alopurinol: prueba de disolucin. 11. Espectros de absorcin de alopurinol: linealidad del sistema. 12. Espectros de absorcin de alopurinol: linealidad del mtodo. 13. Espectros de absorcin de alopurinol: parmetro precisin. 14. Espectros de absorcin de alopurinol: parmetro exactitud. 15. Certificados de instalacin de equipos utilizados. de alopurinol aplicando

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INDICE DE FIGURAS

Figura

Pg.

1. Frmula estructural de alopurinol. 2. Espectro de absorcin ultravioleta de alopurinol. 3. Espectro de absorcin infrarrojo de alopurinol. 4. Aparato I de Canastilla. 5. Aparato II de Paleta. 6. Aparato III Cilindro oscilante. 7. Aparato IV Celda de flujo continuo. 8. Grfico para el parmetro de linealidad del sistema. 9. Grfico para el parmetro de linealidad del mtodo.

19 20 20 37 38 39 40 67 70

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INDICE DE TABLAS

Tabla

Pg.

1. Resultados para linealidad del sistema. 2. Resultados para linealidad del mtodo. 3. Resultados para precisin. 4. Resultados para exactitud. 5. Tabla resumen de resultados

65 68 70 72 74

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RESUMEN

En el presente trabajo se realiz la determinacin de parmetros de desempeo del mtodo de disolucin para tabletas de alopurinol 300 de miligramos, mediante espectrofotometra ultravioleta visible, utilizando adems un equipo disolutor y soluciones estndar de alopurinol de concentracin conocida y soluciones de placebo adicionado. Esta investigacin se desarroll en el rea de Control de Calidad de un Laboratorio Farmacutico Nacional. Debido a que se identific que actualmente no se cuenta con una herramienta que garantice la confiabilidad de los resultados en el laboratorio farmacutico nacional y adems de la gran importancia que este producto representa desde el punto de vista farmacolgico, se realiz la determinacin de parmetros de desempeo y se llev a cabo segn las exigencias de la Farmacopea de los Estados Unidos en su edicin 32 y la Conferencia Internacional Tripartita, aplicndose los clculos estadsticos para comprobar los parmetros de: linealidad del mtodo, linealidad del sistema, precisin y exactitud de la metodologa. As mismo, se elabor un protocolo para la determinacin de parmetros de desempeo de la metodologa, lo cual sirve como una gua para la realizacin de la misma, adems de proporcionar evidencia de que el mtodo funciona con todas las caractersticas para lo que se ha diseado. De acuerdo a los resultados obtenidos, se comprob que el mtodo de disolucin cumple con todas las especificaciones para los mtodos

espectrofotomtricos. Debido a que este mtodo es confiable en sus resultados, se recomienda que en futuras investigaciones se complemente el estudio para contar con una metodologa validada.

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CAPITULO I INTRODUCCION

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INTRODUCCIN

Los parmetros de desempeo analtico parmetros de mrito, son elementos requeridos para un ensayo de validacin, es decir, son caractersticas que necesitan ser evaluadas. Todo desarrollo de un mtodo analtico implica inversin de tiempo y recursos, pero es ventajoso en tanto, se ahorran recursos econmicos, ya que al realizar la determinacin de los parmetros de desempeo, el mtodo es ms confiable y se disminuye el nmero de fallas y la probabilidad de repetir los anlisis, proporcionando adems un alto grado de confianza y seguridad en el mtodo analtico y en la calidad de los resultados que se obtengan. Los parmetros analticos que pueden ser considerados de manera general en la determinacin de parmetros de desempeo de un mtodo de disolucin segn se expresa en la Farmacopea de los Estados Unidos (USP por sus siglas en ingls) son exactitud, precisin y linealidad. En el presente trabajo de investigacin, se abarca la determinacin de parmetros de desempeo del mtodo de disolucin de tabletas que rotulan 300 milgramos de alopurinol, mediante espectrofotometra ultravioleta visible. El alopurinol es un inhibidor de la produccin de cido rico y se emplea en el tratamiento de la gota, nefropata por cido rico, en la formacin de clculos de cido rico, clculos renales, entre otros, aliviando el dolor por la reduccin de los niveles sricos de cido rico. Los parmetros de desempeo evaluados en este trabajo de investigacin son: linealidad del mtodo, linealidad del sistema, precisin y exactitud, en un perodo comprendido entre mayo a noviembre del ao 2011, con lo que se pretende que la metodologa analtica de la prueba de disolucin de las tabletas de alopurinol, sea lo ms confiable, segura y por tanto, proporcione datos reales y que cumplan con las especificaciones farmacopeicas.

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xv

La determinacin de los parmetros de desempeo est apoyado en los apartados <711> Disolucin, <1225> Validacin de Mtodos Farmacopeicos pertenecientes a la Farmacopea de los Estados Unidos en su edicin nmero 32 y en el apartado <1092> Desarrollo y Validacin de la prueba de disolucin que aparece en el Foro Farmacopeico. Cuando los parmetros de desempeo analtico nos brindan resultados conforme a las especificaciones, se convierten en una herramienta muy valiosa, ya que nos permiten realizar y completar la validacin de los mtodos.

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CAPITULO II OBJETIVOS

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2.0 OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GENERAL Determinar los parmetros de desempeo del mtodo de disolucin de tabletas de alopurinol 300 milgramos, aplicando espectrofotometra ultravioleta visible.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS 2.2.1 Desarrollar el protocolo de evaluacin de los parmetros de desempeo del mtodo de disolucin de tabletas de alopurinol 300 milgramos, aplicando espectrofotometra ultravioleta visible.

2.2.2 Realizar la evaluacin de los parmetros de desempeo: linealidad del mtodo, linealidad del sistema, precisin y exactitud, del mtodo de disolucin de tabletas de alopurinol 300 milgramos, aplicando espectrofotometra ultravioleta visible.

2.2.3 Elaborar el informe de los resultados obtenidos de dichos parmetros de desempeo, tanto para proporcionar la evidencia documental necesaria, como para la obtencin de datos confiables y reproducibles.

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CAPITULO III MARCO TEORICO

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3.0 MARCO TEORICO

3.1 Generalidades de Alopurinol Caractersticas de Alopurinol (2,6) Alopurinol El Alopurinol es un anlogo de la hipoxantina, posee la formula estructural:

Figura 1 1-H-Pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ol;[4-hidroxipirazolo][3,4-d] pirimidina. Descripcin Polvo esponjoso o algodonoso blanco a blancuzco cristalino, de escaso olor e inspido, estable a la luz y al aire, funde con descomposicin por encima de 300 C.

Solubilidad Soluble en soluciones de hidrxidos alcalinos, muy ligeramente soluble en agua y en alcohol; prcticamente insoluble en cloroformo y ter.

Constante de disociacin pKa 9.4 Peso molecular 136,11 g/mol

Frmula molecular C5H4N4O

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Espectro Ultravioleta En cidos acuosos (preparados disolviendo en lcalis y diluyendo con cido) 250 (A11=563a); lcalis acuosos257 nm (A11=523a).

Figura 2 Espectro ultravioleta de alopurinol Espectro infrarrojo. Picos principales a las longitudes de onda de 1692, 1587, 916, 1224, 1235, 956 cm1 (disco de KBr).

Figura 3 Espectro infrarrojo de alopurinol

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3.1.1 Aplicaciones teraputicas. (5)

Anlogo estructural de la hipoxantina que se emplea en el tratamiento de la gota, en la nefropata por cido rico primaria o secundaria, en la formacin de clculos de acido rico y para prevenir el depsito de uratos, clculos renales o nefropata por acido rico en pacientes con leucemias, linfomas y neoplasias malignas que reciben quimioterpicos anticancerosos, con el consiguiente efecto de aumentar los niveles sricos de acido rico. No es un analgsico en s, sino que el dolor se alivia por la reduccin de los niveles sricos de acido rico. El Alopurinol no es un uricosrico, si no que inhibe la produccin de acido rico bloqueando las reacciones bioqumicas que preceden inmediatamente a la formacin de este acido. Por lo tanto, inhibe a la xantina oxidasa, enzima responsable de la conversin de hipoxantina en xantina y de la xantina en acido rico. Alopurinol est contraindicado en nios (salvo en los que tienen hiperuricemia secundaria a neoplasia maligna) y en mujeres en lactacin; tambin est contraindicado en pacientes que adquieren una reaccin severa a la droga. No se debe administrar Alopurinol junto con sales de hierro porque los estudios de laboratorio sugieren que puede aumentar la concentracin heptica de hierro. El Alopurinol desencadena artritis gotosa al iniciar el tratamiento con mayor frecuencia que las drogas uricosricas. Esto puede reducirse a un mnimo administrando dosis de mantenimiento de colchicina y empezando el tratamiento con una dosis pequea que luego se aumenta en forma paulatina. Entre los efectos adversos figuran erupcin, por lo general macropopulosa y con menor frecuencia exfoliativa, urticariana o purpurica; la erupcin puede acompaarse de fiebre, leucopenia artralgias u otros sntomas de

hipersensibilidad.

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3.1.2 Farmacocintica y metabolismo.

El Alopurinol se absorbe con relativa rapidez despus de su ingestin y en trmino de 30 a 60 minutos se alcanzan concentraciones plasmticas mximas. En promedio, 20% se excreta en las heces en un lapso de 48 a72 horas, tal vez en la forma del medicamento no absorbido. El Alopurinol se elimina rpidamente del plasma con una vida media de dos a tres horas, ms bien por conversin a aloxantina. Por la orina se excreta sin cambios menos de 10% de una sola dosis o en promedio 30%, durante su consumo a largo plazo. La autoinhibicin del metabolismo de Alopurinol hasta dar aloxantina explica la eliminacin que depende de la dosis. El Alopurinol y su metabolito aloxantina se distribuyen en el agua tisular total, con excepcin del encfalo, en el cual su concentracin es 33% de la observada en otros tejidos. Ninguno de los dos compuestos se liga a protenas plasmticas; las concentraciones plasmticas de ambos no guardan correlacin neta con los efectos teraputicos o txicos.

Dosis La dosis oral, diaria y ms usual en adultos es de 100 a 800 mg. La dosis diaria oral, utilizada como antigotosa es de 100 a 200 mg. 2 a 3 veces por da y la dosis oral antiuroltica es de 200 mg. 1 a 4 veces por da. La dosis peditrica, para la hiperuricemia secundaria asociada con neoplasias malignas es en nios menores de 5 aos, oral 50 mg. 3 veces por da y para nios de 6 a 10 aos oral 100 mg 3 veces por da.

Formas de dosificacin Comprimidos de 100 miligramos y 300 miligramos.

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3.2 ASPECTOS TERICOS DE VALIDACIN (9) 3.2.1 Validacin Un parmetro de desempeo analtico o parmetros de mrito son elementos requeridos para un ensayo de validacin, es decir son caractersticas que necesitan ser evaluadas. La validacin de un mtodo analtico es el proceso que establece mediante estudios en laboratorio, que las caractersticas de desempeo del mtodo cumplen los requisitos para las aplicaciones analticas previstas. Las caractersticas habituales que deben considerarse en la validacin de los tipos de mtodos descritos ms adelante son: - Exactitud. - Precisin. - Especificidad. - Lmite de deteccin. - Lmite de cuantificacin. - Linealidad. - Intervalo.

3.2.2 Mtodos que pueden ser validados (9) - Ensayos de identificacin. - Ensayos para identificacin del analito de inters en: Materia prima o de una especialidad farmacutica. - Ensayos de lmite y cuantificacin de impurezas. - Ensayos microbiolgicos. - Ensayos para la determinacin de caractersticas frmaco-tcnicas inherentes. - Ensayos para la determinacin de analitos en fluidos biolgicos y en productos naturales.

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3.2.3 TIPOS DE VALIDACIN En la actualidad pueden considerarse cuatro tipos de validacin:

- Validacin retrospectiva Establece evidencia documentada de que un sistema o mtodo analtico hace lo que se pretende que deba hacer en base a la revisin y anlisis de informacin histrica a travs de datos analticos de productos ya comercializados.

- Validacin prospectiva Es el establecimiento de la evidencia documentada de que un proceso o mtodo analtico hace lo que se pretende que debe hacer en relacin a un protocolo previamente planeado, el cual comprende todos los criterios que demuestran el buen funcionamiento del mtodo, y se lleva a cabo antes de la comercializacin del producto.

- Validacin concurrente Es el tipo de validacin que se realiza a la misma vez que el proceso o mtodo analtico a validar. No es muy recomendable, ya que posiblemente se tengan que realizar ajustes posteriores y por lo tanto repetirse el proceso de validacin.

- Revalidacin Cuando en un mtodo analtico ya validado se efecta un cambio que es crtico para el buen funcionamiento de este mtodo, se podr exigir una nueva validacin, es decir una revalidacin ya sea total o parcial de dicho mtodo. La farmacopea establece que debe hacerse una revalidacin cuando: - Exista algn cambio en la formulacin de un producto farmacutico. - Se realiza un cambio en la sntesis de un principio activo. - Existan cambios en el procedimiento analtico. - Cuando haya cambio de equipo.

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3.3 DATOS REQUERIDOS PARA LA VALIDACIN DE LOS ANLISIS (7)

Los procedimientos de las determinaciones farmacopeicas varan desde valoraciones analticas muy rigurosas hasta evaluaciones de atributos subjetivos. Considerando esta amplia variedad de determinaciones, es lgico que diferentes mtodos de prueba requieran diferentes esquemas de validacin.

Categora I Mtodos analticos para la cuantificacin de los componentes principales de frmacos a granel o ingredientes activos (incluyendo

conservantes) en productos farmacuticos terminados.

Categora II Mtodos analticos para la determinacin de impurezas en frmacos a granel o productos de degradacin en productos farmacuticos terminados. Estos mtodos incluyen anlisis cuantitativos y pruebas de lmite.

Categora III Mtodos analticos para la determinacin de las caractersticas de desempeo (por ejemplo, disolucin, liberacin del frmaco).

Categora IV Pruebas de identificacin. Para cada categora de anlisis, se requiere diferente informacin analtica. En la Tabla 1 se indican los elementos de datos que normalmente se requieren para cada una de las categoras de anlisis segn USP (Ver anexo 1). En la Tabla 2 se presentan los parmetros de validacin requeridos segn la ICH (Ver anexo 2).

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3.4 CARACTERSTICAS DE DESEMPEO ANALTICO (9) 3.4.1 EXACTITUD Definicin La exactitud de un mtodo analtico es la proximidad entre los resultados de la prueba obtenidos mediante ese mtodo. La exactitud de un mtodo analtico debe establecerse en todo su intervalo.

Determinacin En la valoracin de un frmaco, la exactitud puede determinarse mediante la aplicacin del mtodo analtico con respecto a un analito de pureza conocida (por ejemplo, un Estndar de Referencia), o comparando los resultados del mtodo con los de un segundo mtodo bien caracterizado, cuya exactitud se haya comprobado o definido. La exactitud se calcula como el porcentaje de recuperacin de la cantidad valorada con respecto a la cantidad conocida de analito aadida a la muestra, o como la diferencia entre la media de la valoracin y el valor verdadero aceptado, considerando los intervalos de confianza. Los documentos ICH recomiendan que se evalu la exactitud analizando un mnimo de nueve determinaciones sobre un mnimo de tres niveles de concentracin, cubriendo el intervalo especificado (es decir, tres

concentraciones y tres determinaciones repetidas de cada concentracin). La evaluacin de la exactitud puede efectuarse de varias maneras, incluyendo la evaluacin de la recuperacin del analito (porcentaje de recuperacin) en todo el intervalo de la valoracin, o evaluando la linealidad de la relacin entre las concentraciones estimadas y las reales. El criterio estadstico de preferencia es que el intervalo de confianza para la pendiente est comprendido dentro de un intervalo alrededor de 1,0; o alternativamente, que el valor de la pendiente sea cercano a 1,0.

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3.4.2 PRECISIN Definicin La precisin de un mtodo analtico es el grado de concordancia entre los resultados de las pruebas individuales cuando se aplica el mtodo repetidamente a mltiples muestreos de una muestra homognea. La precisin de un mtodo analtico habitualmente se expresa como la desviacin estndar o la desviacin estndar relativa (coeficiente de variacin) de una serie de mediciones. La precisin puede ser una medida del grado de reproducibilidad o de repetibilidad del mtodo analtico en condiciones normales de operacin. En este contexto, la reproducibilidad se refiere al uso del procedimiento analtico en diferentes laboratorios. Una precisin intermedia expresa la variacin dentro de un laboratorio, por ejemplo en diferentes das, con diferentes analistas o con equipo diferente dentro del mismo laboratorio. La repetibilidad se refiere a la utilizacin del procedimiento analtico en un laboratorio durante un perodo de tiempo corto realizado por el mismo analista con el mismo equipo.

Determinacin La precisin de un mtodo analtico se determina mediante el anlisis de un nmero suficiente de alcuotas de una muestra homognea que permita calcular estadsticamente estimaciones vlidas de la desviacin estndar o la desviacin relativa estndar relativa (coeficiente de variacin). Los anlisis en este contexto son anlisis independientes de muestras que se han llevado a cabo mediante el procedimiento analtico completo, desde la preparacin de las muestras hasta el resultado final de las pruebas. Los documentos ICH recomiendan que se evale la repetibilidad utilizando un mnimo de nueve determinaciones que cubran el intervalo especificado para el procedimiento (es decir tres concentraciones y tres determinaciones repetidas

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de cada concentracin, o un mnimo de seis determinaciones al 100% de la concentracin de prueba).

3.4.3 ESPECIFICIDAD Definicin Los documentos de ICH definen especificidad como la capacidad de evaluar de manera inequvoca el analito en presencia de aquellos componentes cuya presencia resulta previsible, como impurezas, productos de degradacin y componentes de la matriz.

Determinacin - En una valoracin, la demostracin de especificidad requiere evidencia de que el procedimiento no resulta afectado por la presencia de impurezas o excipientes. En la prctica, esto puede hacerse agregando al frmaco o producto farmacutico una cantidad conocida de excipientes o de impurezas en concentraciones adecuadas, y demostrando que el resultado del anlisis no resulta afectado por la presencia de estos materiales extraos. Si no se dispone de estndares de impureza o de los productos de degradacin, puede demostrarse la especificidad comparando los resultados de las pruebas de muestras que contengan impurezas o productos de degradacin con los de un segundo procedimiento bien caracterizado (por ejemplo, un procedimiento farmacopeico u otro procedimiento validado). Estas comparaciones deberan incluir muestras sometidas a condiciones forzadas relevantes (por ejemplo, luz, calor, humedad, hidrlisis cida y alcalina, oxidacin).

3.4.4 LIMITE DE DETECCIN Definicin El lmite de deteccin es una caracterstica de las pruebas de lmite. Es la cantidad mnima de analito en una muestra que puede detectarse, aunque no necesariamente cuantificarse, en las condiciones experimentales indicadas. Las pruebas de lmite simplemente comprueban que la cantidad de analito se encuentra por encima o por debajo de un nivel determinado.

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El lmite de deteccin se expresa habitualmente en forma de concentracin de analito (por ejemplo, porcentaje, partes por milln) en la muestra.

Determinacin Para mtodos no instrumentales, el lmite de deteccin se determina generalmente mediante el anlisis de muestras con concentraciones conocidas de analito, estableciendo el nivel mnimo del analito que puede detectarse confiablemente. Para procedimientos instrumentales, se puede utilizar el mismo mtodo que para los no instrumentales. En el caso de mtodos presentados como candidatos a mtodos farmacopeicos oficiales, casi nunca es necesario determinar el lmite de deteccin real. Por el contrario, debe demostrarse que el lmite de deteccin es lo suficientemente bajo para el anlisis de muestras con concentraciones conocidas de analito superiores e inferiores al nivel de deteccin requerido. Por ejemplo, si se requiere detectar una impureza con una concentracin del 0,1% debera demostrarse que el procedimiento detectar de modo confiable la impureza a esa concentracin. Otros enfoques dependen de la determinacin de la pendiente de la curva de calibracin y la desviacin estndar de las respuestas. Independientemente del mtodo utilizado, el lmite de deteccin debera validarse posteriormente mediante el anlisis de un nmero adecuado de muestras preparadas al lmite de deteccin o que se sabe que estn cerca de dicho lmite.

3.4.5 LIMITE DE CUANTIFICACIN Definicin El lmite de cuantificacin es una caracterstica de las valoraciones cuantitativas de compuestos que se encuentran en baja concentracin en la matriz de una muestra, como por ejemplo: impurezas en frmacos a granel y productos de degradacin en productos farmacuticos terminados. Es la mnima cantidad de analito en una muestra que se puede determinar con precisin y exactitud aceptables en las condiciones experimentales indicadas.

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El lmite de cuantificacin se expresa habitualmente en forma de concentracin de analito (por ejemplo, porcentaje, partes por milln) en la muestra.

Determinacin Para mtodos no instrumentales, el lmite de cuantificacin se determina habitualmente mediante el anlisis de muestras con concentraciones conocidas de analito, estableciendo el nivel mnimo del analito que se puede determinar con exactitud y precisin aceptables. Para procedimientos instrumentales, se puede utilizar el mismo mtodo que para los no instrumentales. En el caso de mtodos presentados como candidatos a mtodos farmacopeicos oficiales, casi nunca resulta necesario determinar el lmite de cuantificacin real. Por el contrario, debe mostrarse que el lmite de cuantificacin es lo suficientemente bajo mediante el anlisis de muestras con concentraciones conocidas de analito superiores e inferiores al nivel de cuantificacin requerido. Por ejemplo, si se requiere analizar un analito a una concentracin de 0,1 mg por tableta, debera demostrarse que el procedimiento cuantificar de modo confiable el analito a esa concentracin. Otros enfoques dependen de la determinacin de la pendiente de la curva de calibracin y la desviacin estndar de las respuestas. Independientemente del mtodo utilizado, el lmite de cuantificacin debera validarse posteriormente mediante el anlisis de un nmero adecuado de muestras que se sepa que estn cerca del lmite de cuantificacin o fueron preparadas a este lmite.

3.4.6 LINEALIDAD E INTERVALO Definicin de Linealidad La linealidad de un mtodo analtico es su capacidad para obtener resultados de prueba que sean proporcionales ya sea directamente o por medio de una transformacin matemtica bien definida, a la concentracin de analito en muestras en un intervalo dado.

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La linealidad se refiere a la linealidad de la relacin entre la concentracin y la medida de la valoracin.

Definicin de Intervalo El intervalo de un mtodo analtico es la amplitud entre las concentraciones inferior y superior de analito (incluyendo esos analitos) en la cual se puede determinar el analito con un nivel adecuado de precisin, exactitud y linealidad utilizando el mtodo segn se describe por escrito. El intervalo se expresa normalmente en las mismas unidades que los resultados de la prueba (por ejemplo, porcentaje, partes por milln) obtenidos mediante el mtodo analtico.

Determinacin de Linealidad e Intervalo - La linealidad debe establecerse en el intervalo completo del procedimiento analtico. Debera establecerse inicialmente mediante examen visual de un grfico de seales como funcin de concentracin de analito del contenido. Si parece existir una relacin lineal, los resultados de la prueba deberan establecerse mediante mtodos estadsticos adecuados (por ejemplo, mediante el clculo de una lnea de regresin por el mtodo de los cuadrados mnimos). En algunos casos, para obtener la linealidad entre la respuesta de un analito y su concentracin, puede que haya que someter los datos de la prueba a una transformacin matemtica. Los datos obtenidos a partir de la lnea de regresin pueden ser tiles para proporcionar estimaciones matemticas del grado de linealidad. Se deberan presentar el coeficiente de correlacin, la interseccin con el eje de ordenadas, la pendiente de la lnea de regresin y la suma de los cuadrados residuales. El intervalo del mtodo se valida verificando que el mtodo analtico proporciona precisin, exactitud y linealidad aceptables cuando se aplica a

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muestras que contienen el analito en los extremos del intervalo, al igual que dentro del intervalo. La ICH recomienda que, para establecer la linealidad, se utilicen normalmente un mnimo de cinco concentraciones.

- Para pruebas de disolucin: 20% por encima del intervalo especificado (por ejemplo, si las especificaciones de un producto de liberacin controlada cubren una regin que vara de 20% despus de 1 hora a 90% despus de 24 horas, el intervalo validado sera de 0% a 110% del valor especificado en la etiqueta).

3.4.7 TOLERANCIA (FORTALEZA O RESISTENCIA) Definicin- La tolerancia de un mtodo analtico es el grado de reproducibilidad de los resultados de las pruebas obtenidos mediante el anlisis de las mismas muestras en diversas condiciones, como por ejemplo en diferentes laboratorios, con diferentes analistas, instrumentos, lotes de reactivos, tiempo transcurrido durante la valoracin, temperaturas de valoracin o das. La tolerancia se expresa normalmente como la carencia de influencia de las variables operativas y ambientales del mtodo analtico sobre los resultados de las pruebas. La tolerancia es una medida de la reproducibilidad de los resultados de las pruebas sometidas a la variacin de condiciones que se esperaran normalmente entre distintos laboratorios o distintos analistas.

Determinacin La tolerancia de un mtodo analtico se determina mediante el anlisis de alcuotas de lotes homogneos en diferentes laboratorios, por diferentes analistas, utilizando condiciones operativas y ambientales que pueden ser diferentes pero que continan encontrndose dentro de los parmetros especificados del anlisis.

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Esta reproducibilidad se puede comparar a la precisin de la valoracin en condiciones normales para obtener una medida de la resistencia del mtodo analtico.

3.4.8 ROBUSTEZ Definicin La robustez de un mtodo analtico es una medida de su capacidad para no resultar afectado por pequeas pero deliberadas variaciones en los parmetros del mtodo y proporciona una indicacin de su confiabilidad durante su uso normal. La robustez puede determinarse durante la etapa de desarrollo del procedimiento analtico.

Determinacin- Se deben establecer aquellos factores instrumentales (como temperatura, velocidad) y factores no instrumentales (como pH, volumen) relacionados al mtodo, que se consideren crticos y se analizan en condicin normal y en otras condiciones de operacin. Se reportan los datos para la muestra a condicin normal de operacin y para la muestra con las otras condiciones que se establezcan. Si la influencia del parmetro se encuentra dentro de una tolerancia previamente especificada, se dice que el parmetro se encuentra dentro del rango de robustez del mtodo. La obtencin de estos datos nos ayuda a determinar si dicho mtodo necesita ser revalidado cuando se cambia uno ms parmetros. Los documentos ICH recomiendan la evaluacin de la robustez del mtodo durante la fase se desarrollo.

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3.5 ASPECTOS TERICOS DE LA PRUEBA DE DISOLUCIN (9) La disolucin es una prueba fsico qumica que determina la cantidad de frmaco que se disuelve por unidad de tiempo bajo condiciones estandarizadas de la interfase lquida/slida, la temperatura y la composicin del solvente. Esta prueba se realiza para determinar el cumplimiento de los requisitos de disolucin (si estuviera indicado en la monografa individual), de las formas farmacuticas administradas oralmente. El procedimiento de disolucin requiere un aparato, un medio de disolucin y condiciones de prueba que provean un mtodo suficientemente discriminatorio, tolerante, reproducible da a da y capaz de ser transferido entre laboratorios. El criterio de aceptacin debe estar representado por diferentes lotes con igual composicin nominal y proceso de manufactura; usualmente son lotes claves usados en estudios piloto y que son representativos de los estudios de estabilidad. Los resultados de disolucin pueden ser considerados altamente variables si la desviacin relativa estndar (RSD) es mayor del 20% a tiempos de muestreo de 10 minutos o menos y mayor de 10 % a tiempos mayores. Sin embargo, la mayora de resultados de disolucin exhiben menor variabilidad que sta. Se debe investigar la fuente de la variabilidad, las dos causas ms frecuentes son la formulacin propia (principio activo, excipientes procesos de manufactura) artefactos asociados con el procedimiento de la prueba (adherencia de la tableta a la pared del vaso a la canasta). Las observaciones visuales son a menudo de gran ayuda para entender la fuente de la variabilidad cuando la disolucin misma contribuya a la variabilidad. Cuando el contenido de la dosis no se disperse libremente a travs del vaso de manera uniforme se pueden obtener datos aberrantes. Dependiendo del problema los remedios usuales incluyen cambio en el tipo de aparato, velocidad de agitacin, eliminacin de dixido de carbono, consideracin y examinacin del tipo de humectador, composicin del medio.

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La modificacin del tipo de aparato puede ser de gran ayuda siempre y cuando se justifique y se valide. Algunas causas de variabilidad pueden ser encontradas en la formulacin y proceso de manufactura. Por ejemplo, pobre contenido en la uniformidad, inconsistencia en el proceso, reacciones que se llevan a cabo a lo largo de la disolucin, interacciones de excipientes e interferencias. Durante las pruebas de rutina del producto, se deben investigar variaciones de producto fuera del rango desde la perspectiva analtica, de formulacin y de proceso.

Aparatos de disolucin de la USP Aparato 1 - Canastilla Aparato 2 - Paleta Aparato 3 - Cilindro Oscilante Aparato 4 - Celda de Flujo Continuo Aparato 5 - Paleta sobre Disco Aparato 6 - Cilindro Aparato 7 - Soporte de Oscilacin Vertical

Los aparatos de disolucin ms empleados son el aparato 1 (mtodo de canastilla) y el aparato 2 (mtodo de paleta). Los mtodos de canastilla y paleta son simples, robustos, estndares, y se usan mundialmente. Estos mtodos son suficientemente flexibles para usarse en las pruebas de disolucin de una gran variedad de productos farmacuticos. Los otros aparatos de la USP o mtodos alternativos deben usarse si es necesario basados en la superioridad para un producto/ forma farmacutica en particular.

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3.5.1 APARATO 1 (Aparato con canastilla) El aparato consiste de: un vaso, con o sin tapa, de vidrio u otro material inerte y transparente; un motor, un eje propulsor metlico y una canastilla cilndrica. El vaso est parcialmente sumergido en un bao de agua adecuado de cualquier dimensin conveniente que recibe calor de un dispositivo adecuado, como por ejemplo una camisa de calentamiento. Durante el transcurso de la prueba, el bao de agua o el dispositivo de calentamiento mantienen la temperatura en el interior del vaso a 37 0,5 y garantizan que el fluido del bao se mantenga en movimiento suave y constante. Ninguna parte del equipo, ni el entorno en el cual est colocado, aumenta significativamente el movimiento, agitacin o vibracin, por encima de los producidos por el elemento de agitacin que gira con suavidad. Es preferible emplear un aparato que permita observar la muestra y el elemento de agitacin durante la prueba. El vaso es cilndrico y de fondo semiesfrico con las siguientes dimensiones y capacidades: para 1 L de capacidad nominal: altura entre 160 mm y 210 mm y dimetro interno entre 98 mm y 106 mm; para 2 L de capacidad nominal: altura entre 280 mm y 300 mm y dimetro interno entre 98 mm y 106 mm; y para 4 L de capacidad nominal: altura entre 280 mm y 300 mm y dimetro interno entre 145 mm y 155 mm. Las paredes del vaso cilndrico tienen un reborde en el extremo superior. Se puede utilizar una tapa si fuera necesario para minimizar la evaporacin. Colocar el eje propulsor de forma tal que su eje central guarde una distancia mxima de 2 mm con respecto a cualquier punto del eje vertical del vaso y rote suavemente sin fluctuaciones que pudieran afectar los resultados. Emplear un dispositivo para regular la velocidad con el objeto de seleccionar y mantener la velocidad de rotacin del eje propulsor a la velocidad especificada en la monografa individual con una aproximacin de 4%. Los componentes del eje y de la canastilla del elemento de agitacin son de acero inoxidable tipo 316 o de otro material inerte.

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Se puede emplear una canastilla con un bao de oro de aproximadamente 0,0001 pulgadas (2.5m) de espesor. La unidad de dosificacin se coloca en una canastilla seca al comienzo de cada prueba. La distancia entre el fondo interno del vaso y el fondo de la canastilla se mantiene a 25 mm durante la prueba.

Figura 4 Aparato I de canastilla 3.5.2 APARATO 2 (Aparato con paleta) La farmacopea de los Estados Unidos (USP) recomienda emplear el aparato 1 usando como elemento de agitacin una paleta compuesta por un aspa y un eje. Colocar el eje propulsor de forma tal, que su eje central guarde una distancia mxima de 2 mm con respecto a cualquier punto del eje vertical del vaso y rote suavemente sin fluctuaciones que pudieran afectar los resultados. La lnea central vertical del aspa est alineada con el eje propulsor de forma tal que el extremo inferior del aspa est nivelado con el nivel extremo inferior del eje propulsor.

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La distancia entre el fondo interno del vaso y el aspa se mantiene en 25 2 mm durante la prueba. El aspa metlica o de otro material inerte adecuado y el eje forman una unidad. En algunos casos, se puede usar un dispositivo desmontable de dos partes, y cuando las partes permanezcan firmemente ajustadas durante la prueba. El eje y el aspa de la paleta pueden estar abiertos recubiertos con un material inerte adecuado.

Figura 5 Aparato II de Paleta 3.5.3 APARATO 3 (Cilindro oscilante) El equipo se compone de un grupo de vasos cilndricos de fondo plano, un grupo de cilindros oscilantes de vidrio, accesorios de un material inerte (de acero inoxidable tipo 316 o de otro material adecuado) y mallas de un material adecuado no absorbente ni reactivo, que se fijan a la parte superior e inferior de los cilindros oscilantes; un motor y una transmisin que hacen oscilar los cilindros en sentido vertical dentro de los vasos y, de ser necesario, traslada los cilindros oscilantes en sentido horizontal hacia otra hilera de vasos.

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Los vasos estn parcialmente sumergidos en un bao de agua adecuado de un tamao conveniente que permita mantener la temperatura a 37 0,5 durante la prueba. Se usa un dispositivo que permite elegir la velocidad de oscilacin y mantenerla a la velocidad de inmersin. Los vasos cuentan con una tapa de evaporacin que permanece colocada durante la prueba.

Figura 6 Aparato 3 (Cilindro oscilante) 3.5.4 APARATO 4 (Celda de flujo) El equipo se compone de un depsito y una bomba para el medio de disolucin, una celda de flujo y un bao de agua que mantiene el medio de disolucin a 37 0,5. La bomba desplaza el medio de disolucin a travs de la celda de flujo en direccin ascendente y debe suministrar un flujo constante. La celda de flujo debe ser de un material transparente e inerte, est montada verticalmente con un sistema de filtro que impide que se escapen partculas no disueltas de la parte superior de la celda; el dimetro estndar de la celda se

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ubica ente 12 mm y 22,6 m; la base cnica de la celda est generalmente llena de pequeas perlas de vidrio de aproximadamente 1 mm de dimetro y una de esas perlas de aproximadamente 5 mm, est ubicada en el pice para proteger el tubo de entrada del fluido; se dispone de un portatabletas para colocar formas farmacuticas especiales, por ejemplo, tabletas estratificadas. La celda se sumerge en un bao de agua y se mantiene la temperatura a 37 0,5.

Figura 7 Aparato 4 (Celda de flujo) 3.5.5 MEDIO DE DISOLUCIN Antes de seleccionar el medio se recomienda tener datos fsicos y qumicos de la sustancia a ser analizada. Dos propiedades claves de la droga son la solubilidad y el estado de la estabilidad de la droga como funcin del pH. Se debe evaluar la influencia de las soluciones amortiguadoras, valor de pH y surfactantes en la solubilidad y estabilidad de la droga. Generalmente, cuando se busca un medio de disolucin la meta es tener una capacidad de humectacin adecuada la cual se define como el volumen de

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medio requerido por lo menos de tres veces al requerido para formar una solucin saturada de la droga. Un medio que falla en proveer condiciones de humectacin pueden ser aceptables si se demuestra que es discriminatorio bien si es debidamente justificado. Usar una mezcla de solventes acuoso-orgnico como medio de disolucin no es adecuado; sin embargo se acepta cuando se justifica apropiadamente. El agua purificada es usada a menudo como medio de disolucin pero no es el ideal por diferentes razones: - Primero, la calidad del agua puede variar dependiendo de la fuente del agua y no se controla el valor de pH del agua. - Segundo, el valor de pH puede variar de da a da y puede tambin cambiar a lo largo de la disolucin dependiendo del principio activo y los excipientes. Las caractersticas de disolucin de una formulacin oral deben evaluarse en el rango de pH fisiolgico (1.2-6.8), (1.2 a 7.5 en formulaciones de liberacin modificada).

Durante el desarrollo del mtodo puede ser til medir el pH antes y despus de la disolucin para encontrar algn cambio de pH durante la prueba. Cuando sea posible la seleccin de las condiciones ms apropiadas para la prueba de rutina es basada en la capacidad discriminatoria, tolerancia, estabilidad del analito en el medio de prueba y la relevancia del desempeo in vivo. Los medios tpicos para la disolucin son: cido clorhdrico diluido, soluciones amortiguadoras en el rango fisiolgico de pH (1.2-7.5), fluido gstrico simulado o fluido intestinal (con o sin enzimas), agua y surfactantes (con o sin cidos buffers), sales biliares. La molaridad de las soluciones amortiguadoras y cidos pueden influenciar el efecto de solubilizacin, por lo que este es un factor que puede ser evaluado. Para compuestos pobremente solubles se pueden utilizar medios acuosos lo cuales pueden tener cierto porcentaje de surfactante como sodio lauril sulfato,

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polisorbato, xido de laurildimetilamina los cuales son usados para mejorar la solubilidad de la droga o como agentes humectantes. El uso de surfactantes y su concentracin deben ser justificados demostrando perfiles de diferentes concentraciones. Los surfactantes pueden ser usados como agentes humectantes para solubilizar el principio activo.

3.5.6 VOLUMEN Normalmente el volumen es de 500 a 1000 mL, el volumen ms comn es de 900mL. Puede aumentarse hasta 2 4 litros usando vasos largos dependiendo de la concentracin de la droga y de su capacidad de humectacin.

3.5.7 AGITACIN Al usar el aparato 2 en cpsulas tabletas con una formulacin de liberacin inmediata se suele usar velocidades entre los 50 a 75 rpm. Otras velocidades son aceptables con una justificacin adecuada. Rangos fuera de las 25 y 150 rpm son usualmente inapropiados por la inconsistencia de la hidrodinmica debajo de las 25 rpm y por la turbulencia arriba de 150 rpm. Rangos de agitacin entre las 25 y 50 rpm son generalmente aceptables para las suspensiones. En formas de dosis que exhiben la formacin de una montaa bajo la paleta a 50 rpm esta puede ser reducida incrementando la velocidad de la paleta a 75 rpm. Se pueden usar las 100 rpm en productos de liberacin prolongada siempre que se justifique su uso.

3.5.8 TIEMPO DE MUESTREO Para las formas de dosificacin de liberacin inmediata la duracin del procedimiento es tpicamente entre 30 a 60 minutos. Conceptos regulatorios e industriales en la comparacin y desarrollo de los productos pueden requerir

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tiempos de muestreo adicionales los cuales pueden ser un requerimiento en el registro y aprobacin del producto. Un nmero suficiente de tiempos de muestreo debe ser seleccionado para caracterizar adecuadamente el aumento y las fases de mesetas en la curva de disolucin. De acuerdo a Biopharmaceutics Classification System con referencia a diferentes guas dadas por la FDA, los principios activos altamente solubles altamente permeables formulados con productos de fcil disolucin estn sujetos a perfiles de comparacin. Si demuestran liberar el 85% ms del principio activo en 15 minutos. Para este tipo de productos un punto de muestreo es suficiente. Sin embargo, la mayora de compuestos no cabe en esta categora. Sin embargo tiempos de muestreo en el rango de 15, 20, 30, 45 y 60 minutos son usuales para la mayora de productos de liberacin inmediata.

3.5.9 TIPOS DE MUESTREO - Muestreo manual Hacer uso de jeringas plsticas o de vidrio a las cuales se les puede colocar una cnula de acero inoxidable la cual es usualmente curva para permitir el muestreo adentro del vaso y un colocar un filtro al final de la cnula. - Automuestreo Es una alternativa til, especficamente si la prueba incluye diferentes puntos de muestreo. Algunos laboratorios desarrollan la prueba de disolucin usando el muestreo manual, por lo que el automuestreo requiere validarse con el muestreo manual. Existen diferentes marcas de automuestreadores incluyendo los sistemas semiautomticos y el sistema completamente automatizado. Se deben desarrollar chequeos de funcionamiento y mantenimiento como se describe en el procedimiento estndar de operacin as tambin los documentos de metrologa son tiles para confiar en la operacin de estos equipos.

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3.5.10 FILTROS Se hace necesaria la filtracin de las muestras de disolucin para prevenir que partculas sin disolverse entren a la muestra y luego se disuelvan. Adems, remueve excipientes sin solubilizarse que puedan causar turbidez. La humectacin previa de los filtros con el medio puede ser necesaria. Algunas veces se hace necesario humedecer el filtro con el medio con anterioridad a la toma de la muestra. Los filtros pueden estar en lnea al final de la sonda muestreadora o bien en ambos. El tamao del poro vara entre 0.45 a 70 m. Si la interferencia de los excipientes es alta, si el filtrado tiene una apariencia turbia si se tapa el filtro, se puede buscar una alternativa en el tipo de filtro o tamao de poro los cuales deben ser evaluados. As tambin se debe evaluar la absorcin de la droga en el filtro. Si ocurre esta absorcin, la cantidad de filtrado inicial descartado podra necesitar que sea elevado. Si contina el problema se debe buscar un filtro de material adecuado.

3.5.11 PROCEDIMIENTO Colocar el volumen del medio de disolucin indicado en el aparato, calentar y equilibrar el medio de disolucin a una temperatura de 370.5C. Colocar una tableta, cpsula o suspensin en el aparato sin provocar burbujas de aire, operar el aparato inmediatamente a la velocidad y tiempos indicados en la monografa del producto. En el caso de utilizar el Aparato 2 la muestra se deposita en el fondo del vaso antes de iniciar la rotacin de la paleta. Cuando transcurra el tiempo establecido, tomar la alcuota necesaria para la determinacin, en la zona intermedia entre la superficie del medio de disolucin y la parte superior de la canasta paleta y a no menos de 10 cm de la pared del vaso. Filtrar inmediatamente.

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3.5.12 INTERPRETACIN A menos que se especifique otra cosa en la monografa individual, el requerimiento es cumplido si la cantidad de principio activo disuelto para los ensayos unitarios resulta conforme a la tabla de aceptacin (Ver anexo 3) Continuar el ensayo a travs de tres fases a menos que el resultado sea cualquiera de dos S1 o S2. La cantidad Q, es el equivalente de disolver el principio activo especificado en la monografa individual, expresado como porcentaje de la cantidad indicada: 5, 15 y 25%.

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CAPITULO IV DISEO METODOLOGICO

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4.0 DISEO METODOLGICO 4.1 Tipo de Estudio - Experimental: se realiz en un Laboratorio Farmacutico Nacional donde se fabrican las tabletas. - Bibliogrfico: los fundamentos de la experimentacin se basaron en las investigaciones bibliogrficas realizadas y en la documentacin recolectada. - Retrospectivo: trabajos previos de investigacin realizados, servirn de referencia para efectuar algunas tcnicas experimentales que contribuyan con el progreso del trabajo ejecutado. - Prospectivo: el resultado del estudio servir de utilidad en subsiguientes indagaciones que apliquen la determinacin de parmetros de desempeo de otros mtodos de disolucin de tabletas de diferentes principios activos.

4.2 Investigacin Bibliogrfica Para el desarrollo del presente trabajo, la investigacin bibliogrfica se llev a cabo en: - Biblioteca Dr. Benjamn Orozco de la Facultad de Qumica y Farmacia de la Universidad de El Salvador (UES). - Biblioteca de la Universidad Salvadorea Alberto Masferrer (USAM). - Biblioteca del Laboratorio Nacional, donde se llevo a cabo la parte experimental. - Internet.

La Farmacopea de los Estados Unidos y la Conferencia Internacional Tripartita sobre Armonizacin clasifica a los mtodos en cuatro categoras I, II, III y IV (Ver anexos 1 y 2) El presente estudio, pertenece a la categora III denominada Mtodos analticos para la determinacin de las caractersticas de desempeo, en el cual por

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factores tcnicos, se han seleccionado la determinacin de los parmetros de linealidad del mtodo, linealidad del sistema, precisin y exactitud, con lo que se lograr proporcionar una mayor confiabilidad en los resultados del mtodo y una mayor seguridad en la utilizacin del producto. El Protocolo de Determinacin de parmetros de desempeo (Ver anexo 4) consiste en un plan escrito que indica cmo la evaluacin se condujo, incluyendo los parmetros de prueba, las caractersticas del producto, equipo de anlisis y puntos de decisin en lo que constituye un resultado de prueba aceptable (criterios de aceptacin). Una vez finalizado el estudio, el protocolo y los resultados se utilizaron para documentar que la metodologa se comporta segn lo previsto.

4.3 Investigacin de campo Universo: 3 Lotes de tabletas de alopurinol de 300 mg. LOTE No. 1 = 110402 LOTE No. 2 = 110403 LOTE No. 3 = 110516 Con un peso promedio de 817.62 mg por tableta con 300 mg. de alopurinol Muestra - Tabletas de Alopurinol de 300 miligramos pertenecientes a cada uno de los lotes, tomadas al azar con ayuda de un procedimiento de muestreo segn la Tabla Militar Estndar 105 E (Ver anexo 5) - Placebo adicionado (cantidad de placebo analtico + analito equivalente a 600 tabletas de alopurinol 300 mg.) Muestreo de Unidades discretas (comprimidos) Nivel de Inspeccin II Inspeccin normal

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Cada uno de los lotes estaba comprendido por 10,000 unidades, de las cuales segn la tabla Militar estndar (Ver anexo 5), corresponde con el nivel de inspeccin II, a la letra L, teniendo un tamao de muestra de 200 unidades por lote para realizar las pruebas.

4.4 Parte experimental 4.4.1 PARTE I - Realizacin de la prueba de disolucin de las tabletas de alopurinol de 300 miligramos, mediante espectrofotometra ultravioleta visible.

- Caractersticas de las tabletas de Alopurinol Las tabletas de Alopurinol contienen no menos de 93,0% y no ms de 107,0% de la cantidad declarada de Alopurinol (C5H4N4O). (9) Equipo - Balanza analtica Shimadzu modelo AX200 - Ultra sonido Ultrasonik Ney modelo 57H - Disolutor Electrolab modelo TDT-08L - Espectrofotmetro UV-1800 Shimadzu

Materiales Vasos de precipitado con capacidad de 50 mL Probeta de Nalgene de 1000 mL Balones volumtricos de 25.0 mL, 50.0 mL, 100.0 mL y 200.0 mL Pipetas volumtricas de 3.0 mL y 5.0 mL Micro esptula Embudo cnico Papel filtro Whatman # 1 Jeringas con capacidad de 10 mL

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Papel glassin Pipetas Volumtricas de 1.0 y 3.0 mL Balones volumtricos de 25.0 mL, 50.0 mL, 100.0 mL, 200.0 mL (todo material de vidrio lavado antes de cada uso con jabn alcalino, agua desmineralizada)

Reactivos (Ver anexo 9) Agua Desmineralizada Acido clorhdrico 0.01 N Hidrxido de Sodio 1.0 N

Estndares de Trabajo Alopurinol al 98.9% de pureza.

PRUEBA DE DISOLUCIN (9) Procedimiento - Preparacin de solucin estndar Se prepar la solucin madre transfiriendo 26.6 mg. de alopurinol pesados con exactitud a un baln volumtrico de 200.0 mL y llevar a volumen con el medio de disolucin. [0,2 mg/mL]. Luego se tom una alcuota de 1.0 mL y se transfiri a un baln volumtrico de 10.0 mL [13.15 g/ mL]

- Preparacin de la muestra Condiciones de la prueba Medio: HCl 0.01 N Cantidad: 900 mL Q = 80% Mtodo: II (Paleta) RPM: 75 Tiempo: 45 minutos Temperatura: 37 C 0.5 C

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Se prepar el medio de disolucin (HCl 0.01 N), como se explica en el anexo 8, luego se calent a una temperatura de 37C aproximadamente.

Se procedi armar el aparato (equipo disolutor) y establecer las condiciones de la prueba anteriormente mencionadas.

Una vez se alcanz la temperatura de 37C en el bao del aparato, se transfirieron 900 mililitros del medio previamente preparado a cada uno de los vasos. Se pesaron individualmente cada una de las tabletas y se coloc cada una en los vasos del equipo disolutor correspondientes. Transcurrido el tiempo de la disolucin, se procedi a tomar una alcuota de aproximadamente 10 mL de cada una de las soluciones muestras provenientes de cada uno de los seis vasos, para transferirlos a vasos de precipitado de 50 mL y se filtr con papel Whatman #1, luego se tom una alcuota de 1.0 mL de las soluciones filtradas y se transfirieron a un baln volumtrico de 25.0 mL, para aforar con acido clorhdrico 0.01N. [13.3 g/mL] La concentracin final obtenida con la concentracin de estndar difiere un poco debido a las cascadas de dilucin, que se llevaron a la cantidad que ms cerca posible. Las soluciones de estndar y muestras se leyeron en un espectrofotmetro ultravioleta visible, a una longitud de onda de 250 nm, utilizando como blanco acido clorhdrico 0.01 N. Los resultados pueden observarse en el anexo 6
HCl 0.01 N

1 Tableta 300 mg alopurinol

900.0 mL [0.33 mg/mL]

HCl 0.01 N

1.0 mL

25.0 mL [13.3 g/mL]

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Clculos

Donde: Abs. mx = Absorbancia de la muestra C st = Concentracin del estndar

Abs. st = Absorbancia del estndar FD = Factor de dilucin de la muestra (se obtiene de la divisin de los

volmenes realizados entre las alcuotas tomadas). La concentracin que se obtiene corresponde a los miligramos por tableta, luego, se calcul el porcentaje de lo rotulado de cada tableta individualmente, por regla de tres, asumiendo que los 300 mg. equivalen al 100% y que la cantidad individual ser X. Concentracin Muestra

Cmx1 = 315.10 mg. 300.0 mg Concentracin muestra obtenida X1 = 105.03 % X 100 %

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4.4.2 PARTE II Parmetros de desempeo - LINEALIDAD DEL SISTEMA Esquema de dilucin Se prepararon soluciones patrn, individuales de alopurinol por triplicado (Ver anexo 7)

50%

75%

100%

125%

150%

175%

Luego, se tomaron de cada solucin patrn alcuotas de 3.0 mL y se transfirieron a balones volumtricos de 50.0 mL

Cada solucin se ley en el espectrofotmetro ultravioleta visible a una longitud de onda de 250 nm y los resultados se agruparon y trabajaron con una hoja de clculo de Microsoft Excel, como se muestra en la Tabla No. 1 Cristalera grado A - Balones volumtricos de 50.0 mL - Pipetas volumtricas de 3.0 mL Equipo - Balanza analtica Shimadzu modelo AX200

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- Espectrofotmetro UV-1800 Shimadzu (Ver certificados en anexo 12) Medio de dilucin: HCl 0.01 N - LINEALIDAD DEL MTODO Esquema de dilucin Se prepararon pesadas independientes de solucin de placebo adicionado de tres niveles de concentracin por triplicado, como se explica en el anexo 7

75%

100%

125%

Cada una de las soluciones se coloc en el aparato disolutor y se ejecut la prueba de disolucin tal como que se detalla en la pgina 49. Transcurrido el tiempo de la prueba se tomaron alcuotas de 10 mL de cada una de las soluciones en los vasos, se filtraron y se transfirieron a buretas de 10.0 mL, de las cuales se colocaron 7.0 mL en balones volumtricos de 25.0 mL. Cada solucin se ley en el espectrofotmetro ultravioleta visible a una longitud de onda de 250 nm. y los resultados se agruparon y trabajaron con una hoja de clculo de Microsoft Excel, como se muestra en la Tabla 2

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Cristalera grado A - Balones volumtricos de 25.0 mL - Buretas de 10.0 mL Equipo - Balanza analtica Shimadzu modelo AX200 - Ultra sonido Ultrasonik Ney modelo 57H - Disolutor Electrolab modelo TDT-08L - Espectrofotmetro UV-1800 Shimadzu (Ver certificados en anexo 12)

- PRECISIN Se realiz la prueba de disolucin tal como se explica en la pgina 49, en dos diferentes das, con dos lotes diferentes, y los datos obtenidos se agruparon y trabajaron en una hoja de clculo en Microsoft Excel, tal como se muestra en la tabla 3

Equipo - Balanza analtica Shimadzu modelo AX200 - Ultra sonido Ultrasonik Ney modelo 57H - Disolutor Electrolab modelo TDT-08L - Espectrofotmetro UV-1800 Shimadzu (Ver certificados en anexo 12)

Cristalera grado A Vasos de precipitado con capacidad de 50 mL Probeta de 1000 mL Balones volumtricos de 25.0 mL, 50.0 mL, 100.0 mL y 200.0 mL Pipetas volumtricas de 3.0 mL y 5.0 mL

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Otros Micro esptula Embudo cnico Papel filtro Whatman # 1 Jeringas con capacidad de 10 mL Papel glassin Pipetas Volumtricas de 1.0 y 3.0 mL Balones volumtricos de 25.0 mL, 50.0 mL, 100.0 mL, 200.0 mL (todo el material de vidrio lavado previamente a su uso con jabn alcalino y agua desmineralizada) Reactivos - Agua Desmineralizada - Acido clorhdrico 0.01 N - Hidrxido de Sodio 1.0 N (Ver anexo 8)

Estndares de Trabajo - Alopurinol al 98.9% de pureza - EXACTITUD Se prepararon pesadas independientes de 6 concentraciones al 100% de solucin de placebo adicionado (como se explica en el anexo 7)

100%

100%

100%

100%

100%

100%

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Luego, se realiz la prueba de disolucin tal como se explica en la pgina 49, se analizaron las muestras y se leyeron en el espectrofotmetro UV-VIS a una longitud de onda de 250 nm. Los datos obtenidos se agruparon y trabajaron en una hoja de clculo en Excel, tal como se muestra en la Tabla 4

- Preparacin de reactivos (Ver anexo 8)

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CAPITULO V RESULTADOS

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5. RESULTADOS
- Resultados de la prueba de disolucin de las tabletas de alopurinol de 300 miligramos, mediante espectrofotometra ultravioleta visible.

Preparacin de solucin estndar Compensacin de pureza del estndar Pureza Alopurinol = 98.9% Peso prctico = 26.6 mg.

98.9 g x

100 g. 0.0266 g.
HCl 0.01 N

x = 26.31 mg. Alopurinol 200.0 mL [0.1315 mg/mL]

26.31 mg de estndar

HCl 0.01 N

1.0 mL - Preparacin de la muestra

HCl 0.01 N

10.0 mL [13.15 g/mL]

1 Tableta 300 mg alopurinol

900.0 mL [0.33 mg/mL]

HCl 0.01 N

1.0 mL Clculos

25.0 mL [13.3 g/mL]

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Donde: Abs. mx = Absorbancia de la muestra C st = Concentracin del estndar

Abs. st = Absorbancia del estndar FD = Factor de dilucin de la muestra (se obtiene de la divisin de los

volmenes realizados entre las alcuotas tomadas).

La concentracin que se obtiene corresponde a los miligramos por tableta, luego, se calcul el porcentaje de lo rotulado de cada tableta individualmente, por regla de tres, asumiendo que los 300 mg. equivalen al 100% y que la cantidad individual ser X.

Concentracin Muestra

Cmx1 = 327.98 mg. 300.0 mg Concentracin muestra obtenida X1 = 109.33 % Pruebas de Alopurinol (9) Identificacin y ensayo X 100 %

El espectro de absorcin de la muestra corresponde al espectro de absorcin del estndar presentando mxima absorcin cerca de 250 nm. Procedimiento Preparacin del estndar Se pesaron 40.4 mg de estndar de alopurinol, luego se transfirieron a un baln volumtrico de 200.0 mL, se agregaron 40 mL de cido clorhdrico 0.1 N y se coloc en el aparato ultrasonido durante 5 minutos aproximadamente. Transcurrido dicho tiempo se afor con HCl 0.1 N, se filtr la solucin resultante

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y se tom una alcuota de 5.0 mL, y se transfiri a un baln volumtrico de 100.0 mL, finalmente se afor con HCl 0.1 N. [10.1 g/mL]

Compensacin de pureza del estndar Pureza Alopurinol = 98.9% Peso terico Peso prctico = 40.0 mg. = 40.4 mg.

98.9 g x

100 g 0.0404 g
HCl 0.1 N

x = 39.95 mg. alopurinol

39.95 mg. alopurinol

200.0 mL

[0.199 mg/mL]
HCl 0.1 N

5.0 mL - Preparacin de la muestra

100.0 mL

[9.98 g/mL]

Se pesaron 20 tabletas de alopurinol juntas, se calcul el peso promedio de stas como se indica a continuacin y luego se trituraron con la ayuda de un mortero y un pistilo.
20

= 817.62 mg. es el peso promedio de las 20 tabletas juntas, cada tableta

rotula 300 mg. de alopurinol, sin embargo para llevar a cabo nuestra cascada de dilucin necesitamos conocer el peso del polvo que equivalga a 100 mg. de alopurinol, dato que conocemos por medio de una regla de tres:
20

c/tableta rotula 300.0 mg. 100.0 mg.

817.62 mg. X1

Peso muestra X1 = 272.54 mg. Posteriormente, se pes el equivalente a 100.0 mg de Alopurinol, luego se transfirieron a un baln volumtrico de 100.0 mL, se adicionaron 2.0 mL de

62

NaOH 1.0 N y 40 mL de HCl 0.1 N, se llev al aparato ultrasonido durante 5 minutos, posteriormente se diluy con HCl 0.1 N, se mezcl y se filtr. De esta solucin se tom una alcuota de 1.0 mL y se llev a un baln volumtrico de 100.0 mL, finalmente se afor con HCl 0.1 N y se mezcl. [10 g/mL].
HCl 0.1 N

20

100.0 mg

100.0 mL [1 mg/mL]
HCl 0.1 N

(Peso muestra) 1.0 mL

100.0 mL [10 g/mL]

Muestra 1 272.65 mg. 100.04 mg

HCl 0.1 N

100.0 mL [1 mg/mL]
HCl 0.1 N

1.0 mL Muestra 2 272.92 mg. 100.14 mg

100.0 mL [10 g/mL]

100.0 mL [1 mg/mL]
HCl 0.1 N

1.0 mL

100.0 mL [10.01 g/mL]

El mtodo aplicado se bas en la determinacin de la cantidad de luz monocromtica absorbida por las especies, partculas o molculas de la sustancia activa, a la longitud de onda de 250 nm, medidas en una celda de cuarzo de 1 cm. de espesor, utilizando como blanco, una solucin de HCl 0.1 N para ajustar a 0 unidades de absorbancia al instrumento.

63

Clculos

Donde: Abs. mx = Absorbancia de la muestra C st = Concentracin del estndar Abs. st = Absorbancia del estndar FD = Factor de dilucin de la muestra (se obtiene de la divisin de los volmenes realizados entre las alcuotas tomadas). Factor de dilucin = (Volmenes realizados) / Alcuotas tomadas = (100) (100) / (1) (1000) = 10

- Concentracin muestra 1

106.83 mg. en peso muestra - Concentracin muestra 2

102.06 mg. en peso muestra Luego, tenemos que: C mx1 272.65 mg. X1 817.62 mg. 300.00 mg. 320.36 mg. C mx2 X2 100.0 % % S/R 272.92 mg. 817.62 mg.

X1 = 320.36 mg/tableta

106.78%

X2 = 305.75 mg/tableta

64

300.00 mg. 305.75 mg.

100.0 % % S/R

101.92 %

Promedio de % S/R = 104.35 %

Friabilidad Se realiz la prueba de friabilidad de las tabletas de alopurinol, tomando 10 unidades de cada lote y utilizando el equipo friabilizador, luego se utiliz la siguiente frmula: Friabilidad = Donde: Pi = peso inicial de las 10 tabletas Pf = peso final de las 10 tabletas

x100

Friabilidad = Friabilidad = 0.43 %

x 100

65

5.1 PARTE III Tratamiento estadstico de los resultados experimentales obtenidos.

Tabla 1 Resultados para linealidad del sistema Absorbancias obtenidas

Concentracin 6 6 6 9 9 9 12 12 12 15 15 15 18 18 18 21 21 21 Alopurinol 0.348 0.349 0.349 0.521 0.522 0.522 0.690 0.690 0.691 0.849 0.853 0.853 1.000 1.005 1.010 1.191 1.193 1.193 Factor de respuesta 0.058 0.058 0.058 0.058 0.058 0.058 0.058 0.058 0.058 0.057 0.057 0.057 0.056 0.056 0.056 0.057 0.057 0.057 Conc. Real 5.930 5.948 5.948 9.046 9.064 9.064 12.090 12.090 12.108 14.954 15.026 15.026 17.674 17.764 17.854 21.114 21.150 21.150 % recuperado 98.837 99.138 99.138 100.513 100.713 100.713 100.751 100.751 100.901 99.693 100.173 100.173 98.187 98.687 99.187 100.542 100.713 100.713

Lote de tabletas nmero 110516

66

- Calcular el valor de la pendiente

Donde: b= pendiente. n = nmero de eventos. x = Concentracin en g/mL. y= Absorbancia de la muestra a 250 nm. = sumatoria.

- Intercepto

Donde: a= intercepto n = nmero de eventos x = Concentracin en g/mL y= Absorbancia de la muestra a 250 nm = sumatoria

- Coeficiente de Correlacin

67

- Coeficiente de determinacin

- Coeficiente de variacin

Con las absorbancias presentadas en la tabla No. 1 se obtuvieron los resultados siguientes: b = 0.055, a = 0.02577, r = 0.99712, r2 = 0.999424 y un CV = 1.30%, con los cuales podemos concluir que el parmetro de linealidad del sistema, se encuentra dentro de los criterios de aceptacin, los cuales son: r2 > 0.98, CV 3.0%.

Figura 8 Grfico para el parmetro de linealidad del sistema.

68

Tabla 2 Resultados para linealidad del mtodo Absorbancias obtenidas

LINEALIDAD DEL MTODO Concentracin (g/mL) 9 9 9 12 12 12 15 15 15 Porcentaje % 75 75 75 100 100 100 125 125 125 Absorbancias 0.5220 0.5153 0.4937 0.6900 0.6873 0.6613 0.8520 0.8373 0.8420 Conc. real 9.2272 9.1075 9.1200 12.2292 12.1809 12.1219 14.9452 14.8612 14.9452 % Recuperado 102.5250 101.1948 101.3337 101.9096 101.5076 101.0162 99.6344 99.0745 99.6344

Lote de tabletas nmero 110516

- Pendiente

- Intercepto

69

- Coeficiente de correlacin

- Coeficiente de determinacin

- Coeficiente de variacin

Con las absorbancias presentadas en la tabla No. 2 se obtuvieron los resultados siguientes: b = 0.05597, a = 0.0055, r = 0.9995549, r2 = 0.9991100 y un CV = 2.625%, con los cuales podemos concluir que el parmetro de linealidad del mtodo, se encuentra dentro de los criterios de aceptacin, los cuales son: r2 > 0.98, CV 3.0%.

70

Figura 9 Grfico para el parmetro de linealidad del Mtodo.

Tabla 3 Resultados para precisin

PARMETRO PRESICIN Prueba de disolucin Da 1 No. 1 2 3 4 5 6 St Peso (mg.) 841.3 840.9 841.7 840.1 841.3 840.5 26.2 Peso (mg.) 842.1 841.9 840.7 841.5 842.0 841.6 25.9 mg/tab. 304.5935 299.9550 290.6781 301.1147 292.2242 286.4261 Prueba de disolucin Da 2 No. 1 2 3 4 5 6 St mg/tab. 304.9406 300.3027 291.0270 301.0757 293.7324 286.0026 Lote: 110402 Absorbancia 0.7880 0.7760 0.7520 0.7790 0.7560 0.7410 0.760 Lote: 110403 Absorbancia 0.7890 0.7770 0.7530 0.7790 0.7600 0.7400 0.766 Porcentaje % 101.65 100.10 97.01 100.36 97.91 95.33 Porcentaje % 101.53 99.98 96.90 100.37 97.41 95.48 -

71

CLCULOS DA 1 - Media aritmtica

- Desviacin estndar

- Coeficiente de variacin

CLCULOS DA 2 - Media aritmtica

- Desviacin estndar

72

- Coeficiente de variacin

Con los datos presentados en la tabla 3 se obtuvieron los resultados siguientes: CV da 1 = 2.40%, CV da 2 = 2.41%, con los cuales podemos concluir que el parmetro de precisin, se encuentra dentro del criterio de aceptacin CV 3.0%, es decir, el mtodo es preciso.

Tabla 4 Resultados para Exactitud

PARMETRO EXACTITUD No. 1 2 3 4 5 6 St Absorbancias 0.788 0.776 0.780 0.779 0.756 0.760 26.1 mg mg dis/tab 304.5935 299.9550 301.5012 301.1147 292.2242 293.7704 Lote: 110403 % Recuperacin 101.531 99.985 100.500 100.372 97.408 97.923 -

- Media aritmtica

- Desviacin estndar

73

- Coeficiente de variacin

- Intervalo de confianza

Con los datos presentados en la tabla 4, se obtuvieron los resultados siguientes: CV = 1.62%, IC = [97.93 101.31], con los cuales podemos concluir que el parmetro de exactitud, se encuentra dentro del criterio de aceptacin CV 3.0% y un IC que debe incluir el 100%, es decir, el mtodo es exacto.

74

Los resultados obtenidos en cumplimiento a los objetivos planteados en la investigacin se agruparon en la siguiente tabla: TABLA 5 RESUMEN DE RESULTADOS Criterios Parmetro Resultados
(9)

r 0.99 Linealidad del sistema Lote utilizado:110516 r2 0.98 CV 3%

Coeficiente de correlacin = 0.999712 Coeficiente de determinacin = 0.999424 Coeficiente de Variacin = 1.30%

r 0.99 Linealidad del Mtodo Lote utilizado:110516 r2 0.98 CV 3%

Coeficiente de correlacin = 0.99955 Coeficiente de determinacin = 0.99911 Coeficiente de Variacin = 2.625%

Precisin Lotes utilizados: 110402 y 110403

CV 3%

Coeficiente de Variacin Da 1 = 2.40% Coeficiente de Variacin da 2 = 2.41%

CV 3% El intervalo Exactitud Lote utilizado:110403 de confianza debe incluir el 100% Coeficiente de Variacin = 1.62% Intervalo de confianza IC = [97.93 101.31]

75

La ecuacin de la recta del rango de concentraciones estudiadas para la linealidad del sistema se expresa segn y = 0.055 X + 0.02577 con un coeficiente de determinacin lineal de 0.999424 que puede observarse en la figura 8 de la pgina 67, que corresponde a la grfica de Linealidad del sistema, en donde se demuestra que el mtodo analtico cumple con el parmetro de linealidad del sistema. Por otra parte, la ecuacin de la recta del rango de concentraciones estudiadas para la linealidad del mtodo se expresa segn y = 0.056 X + 0.0055 con un coeficiente de determinacin lineal de 0.99911 que puede observarse en la figura 9 de la pgina 70, que corresponde a la grfica de Linealidad del mtodo, en donde se demuestra que el mtodo analtico cumple con el parmetro de linealidad del mtodo. Para el estudio de la precisin, se obtuvo un coeficiente de variacin de 2.40% lo que indica que el mtodo presenta una buena precisin para el anlisis del producto terminado alopurinol, ya que para mtodos qumicos y

espectrofotomtricos debe presentarse un CV 3%. El rango seleccionado en el estudio de la exactitud, donde los valores de porcentaje de recobro estuvieron dentro de los lmites establecidos para los mtodos qumicos y espectrofotomtricos que deben de estar en un rango del 97.0% - 103.0% y el valor del coeficiente de variacin tambin fue menor al 3% indican que el mtodo presenta una exactitud adecuada. Segn la farmacopea de los Estados Unidos en su edicin 32 se clasifican en cuatro categoras I, II, III y IV (Ver anexo 1) El presente estudio, pertenece a la categora III denominada Mtodos analticos para la determinacin de las caractersticas de desempeo, la cual se muestra nicamente el parmetro de precisin y los dems pueden requerirse, dependiendo de la naturaleza de la prueba, razn por la cual se complet este estudio con la linealidad del mtodo, linealidad del sistema y exactitud, garantizando que se cumple con las exigencias de la misma.
(9),

los mtodos

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CAPITULO VI CONCLUSIONES

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6. CONCLUSIONES

1. La determinacin de parmetros de desempeo es parte importante y fundamental en el desarrollo de una tcnica analtica, ya que permite verificar si la metodologa en estudio, cumple con los propsitos previamente establecidos, adems de ser una herramienta para completar la validacin de los mtodos.

2. En las determinaciones de la linealidad del sistema y linealidad del mtodo, los resultados obtenidos comprueban que los datos son directamente proporcionales, por lo que se concluye que la metodologa es satisfactoria.

3. La precisin del mtodo de disolucin se cumple obtenindose valores conforme a los criterios de aceptacin, lo que indica que el mtodo es preciso.

4. En el estudio de la exactitud, los resultados obtenidos indican valores que cumplen conforme a los criterios de aceptacin, garantizando que la metodologa es exacta.

5. Para el estudio de la prueba de disolucin de tabletas de alopurinol 300 miligramos, se comprob que los parmetros de desempeo determinados espectrofotomtricamente cumplen con las especificaciones establecidas, concluyendo que dicho mtodo satisface los requerimientos para la aplicacin analtica deseada, es decir es un mtodo seguro y confiable.

78

6. El protocolo de determinacin de parmetros de desempeo del mtodo analtico se utiliza para evidenciar y garantizar documentalmente que el mtodo de anlisis aplicado es confiable y seguro.

7. Para esta investigacin se utiliz la farmacopea de los Estados Unidos en su edicin 32 debido a que es con la que se cuenta en la biblioteca del laboratorio farmacutico nacional.

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CAPITULO VII RECOMENDACIONES

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7. RECOMENDACIONES

1. Realizar la determinacin de parmetros de desempeo del mtodo de disolucin de tabletas de alopurinol 300 miligramos, cada tres aos y de ser posible, debe completarse para que posteriormente sea validada totalmente.

2. Que la ejecucin del protocolo de determinacin de parmetros de desempeo debe realizarse por el personal capacitado que aporte la destreza, habilidad y facilidad en la adecuada interpretacin de los resultados adems de la aplicacin adecuada de los procedimientos, para garantizar que los resultados sean confiables.

3. Que los futuros farmacuticos conozcamos y nos perfeccionemos en el tema, ya que es de suma importancia para un ptimo desempeo en esta rea.

4. Comparar el mtodo analtico evaluado en el laboratorio farmacutico nacional con el mtodo oficial de la farmacopea de los Estados Unidos en su edicin 34, ya que actualmente solo se cuenta con la edicin 32.

5. Utilizar este trabajo de investigacin como gua para la determinacin de parmetros de desempeo de otros mtodos de disolucin.

81

BIBLIOGRAFA

82

BIBLIOGRAFIA

1. Alabi Mndez, S. M. Validacin de un Mtodo Analtico por HPLC para la evaluacin del contenido de Sertralina en tabletas. Tesis para optar al grado de Licenciatura en Qumica y Farmacia-Biologa. Universidad Alberto Masferrer, San Salvador, El Salvador. 2005. p. 41-50.

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3. Del Valle M. L., Tenorio Lpez F. A., Pastelin H. G. Validacin de un mtodo analtico espectrofotomtrico para la cuantificacin de aminofilina en solucin inyectable. Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, 2005. v.36:004.

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8. Rivas, M. E., Rodrguez R., S. A. Validacin del Mtodo Analtico por Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC) de un jarabe multivitamnico con ciproheptadina. Tesis para optar al grado de Licenciatura en Qumica y Farmacia. San Salvador, El Salvador. 2007. p. 25-27, 49-55.

9. The

United

States

Pharmacopeial

Convention,

Inc.

United

States

Pharmacopeia of the United States of America, (USP) 32a. ed. 2006, Twinbrook, Parkway, Roekville. p.1909-2091, 3895-3898.

10. Vasquez Sosa, M. Validacin de un mtodo para evaluar el comportamiento de disolucin de diclofenaco suspensin. Tesis para optar al grado de Licenciatura en Qumica y Farmacia. San Salvador, El Salvador. 2007. p.3547.

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12. http://www.fda.gov/cder/audiences/iact/1713bp1.htm

13. http://www.conacyt.gob.sv/

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ANEXOS

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ANEXO N 1

CUADRO N 1 DATOS REQUERIDOS PARA ENSAYOS DE VALIDACIN SEGN LA FARMACOPEA DE LOS ESTADOS UNIDOS (9)
CARACTERSTICAS DE DESEMPEO ANALTICO EXACTITUD PRESICIN ESPECIFICIDAD LIMITE DE DETECCIN LIMITE DE CUANTIFICACIN LINEALIDAD INTERVALO ENSAYO CATEGORIA I SI SI SI NO NO SI SI ENSAYO CATEGORIA II
CUANTITATIVO CUALITATIVO

ENSAYO CATEGORIA III

ENSAYO CATEGORIA IV NO NO SI NO NO NO NO

SI SI SI NO SI SI SI

* NO SI SI NO NO *

* SI * * * * *

* PUEDEN REQUERIRSE, DEPENDIENDO DE LA NATURALEZA DE LA PRUEBA ESPECFICA

87

ANEXO N 2

CUADRO N 2 DATOS REQUERIDOS PARA ENSAYOS DE VALIDACIN SEGN ICH (9)

TIPO DE PROCEDIMIENTO ANALTICO CARACTERSTICAS EXACTITUD PRESICIN REPETIBILIDAD PRESICIN INTERMEDIA ESPECIFICIDAD (2) LIMITE DE DETECCIN LIMITE DE CUANTIFICACION LINEALIDAD INTERVALO + PRUEBA DE IMPUREZAS IDENTIFICACIN CUANTITATIVA + + + + (1) + - (3) + + + LMITES + + + + + + (1) + + + ENSAYO (DISOLUCIN, CONTENIDO/POTENCIA)

- SIGNIFICA QUE ESTA CARACTERSTICA NO SE EVALA NORMALMENTE. + SIGNIFICA QUE ESTA CARACTERSITICA SE EVALA NORMALMENTE. (1) EN CASOS DONDE LA REPRODUCIBILIDAD (PRESICIN ENTRE LABORATORIOS SEGN LA ICH), SE HA LLEVADO A CABO, POR LO QUE LA PRESICIN INTERMEDIA NO ES NECESARIA. (2) DEFICIENCIA DE ESPECIFICIDAD DE UN PROCEDIMIENTO ANALTICO EL CUAL PODRA SER COMPENSADO MEDIANTE OTRO Y OTROS PROCEDIMIENTOS ANALTICOS. (3) PUEDE NECESITARSE EN ALGUNOS CASOS.

88

ANEXO N 3

CUADRO N 3 CRITERIOS DE ACEPTACIN PARA LA PRUEBA DE DISOLUCIN (9)

Etapa S1 Cantidad aprobada 6 Criterio de aceptacin Ninguna unidad es menor que Q + 5% El promedio de 12 unidades S2 6 (S1 + S2) es igual o mayor que Q, y ninguna unidad es menor que Q 15% El promedio de 24 unidades (S1 + S2 + S3) es igual o S3 12 mayor que Q, no ms de 2 unidades son menores que Q 15% y ninguna unidad es menor que Q 25 %

89

ANEXO N 4 PROTOCOLO DE DETERMINACIN DE PARMETROS DE DESEMPEO DEL MTODO DE DISOLUCIN DE TABLETAS DE ALOPURINOL 300 MILIGRAMOS.

90

ANEXO N 4 Protocolo de determinacin de parmetros de desempeo del mtodo. DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27. Cdigo: Pg.: 1 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

1. Objetivo: Garantizar y demostrar la eficacia del mtodo de disolucin de tabletas de alopurinol aplicando espectrofotometra ultravioleta visible.

2. Alcance: Mtodo de disolucin de tabletas de alopurinol aplicando espectrofotometra ultravioleta visible. 3. Responsabilidades: - Es responsabilidad del departamento de Buenas Prcticas de Manufactura la autorizacin del protocolo para su ejecucin. - Es responsabilidad del Jefe del Departamento de Control de calidad revisar y velar por el cumplimiento del protocolo de determinacin de parmetros de desempeo. - Cada analista realizar los pasos establecidos en este protocolo, deber

reportar los datos obtenidos por medio de un anlisis estadstico y garantizar que las condiciones de operacin utilizarlo. 4. Parmetros a estudiar a) Linealidad del sistema b) Linealidad del mtodo c) Precisin d) Exactitud del equipo sean adecuadas antes de

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DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27. 5. Muestras - Tabletas de alopurinol - Estndar de alopurinol 98.9% de pureza - Placebo de alopurinol 6.0 Equipo Balanza analtica Shimadzu modelo AX200 Ultra sonido Ultrasonik Ney modelo 57H Disolutor Electrolab modelo TDT-08L Espectrofotmetro UV-1800 Shimadzu

Cdigo: Pg.: 2 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

Materiales Vasos de precipitado con capacidad de 50 mL Probeta de Nalgene de 1000 mL Balones volumtricos de 25.0 mL, 50.0 mL, 100.0 mL y 200.0 mL Pipetas volumtricas de 3.0 mL y 5.0 mL Micro esptula Embudo cnico Papel filtro Whatman # 1 Jeringas con capacidad de 10 mL Papel glassin Pipetas Volumtricas de 1.0 y 3.0 mL

92

DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27. -

Cdigo: Pg.: 3 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

Balones volumtricos de 25.0 mL, 50.0 mL, 100.0 mL, 200.0 mL (todo material de vidrio lavado antes de cada uso con jabn alcalino, agua desmineralizada)

Reactivos Agua Desmineralizada Acido clorhdrico 0.01 N Hidrxido de Sodio 1.0 N

Estndares de Trabajo Alopurinol 98.9% de pureza 7. Determinacin de parmetros de desempeo El mtodo aplicado se basa en la determinacin de la cantidad de luz monocromtica absorbida por las especies, partculas o molculas de la sustancia activa, a la longitud de onda de 250 nm, medidas en una celda de cuarzo de 1 cm. De espesor, utilizando como blanco, una solucin de HCl 0.1 N para ajustar a 0 unidades de absorbancia al instrumento.

93

DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27.

Cdigo: Pg.: 4 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

7.1 Preparacin de soluciones estndares de alopurinol - Solucin estndar al 50% de alopurinol Pesar exactamente 20.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, ajustar para obtener 100% de pureza, transferir a un baln volumtrico de 200.0 mL, adicionar 40 mL de HCl 0.01 N y agitar durante 5 minutos hasta disolucin, aforar con HCl 0.01 N, homogenizar. Tomar con una pipeta volumtrica, 3.0 mL de esta solucin y transferir a un baln volumtrico de 50.0 mL, aforar con HCl 0.01 N (Concentracin 6 g/mL). - Solucin estndar al 75% de alopurinol) Pesar exactamente 30.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, ajustar para obtener 100% de pureza, transferir a un baln volumtrico de 200.0 mL, adicionar 40 mL de HCl 0.01 N y agitar durante 5 minutos hasta disolucin, aforar con HCl 0.01 N, homogenizar. Tomar 3.0 mL de esta solucin y transferir a un baln volumtrico de 50.0 mL, aforar con HCl 0.01 N (Concentracin 9 g/mL) - Solucin estndar al 100% de alopurinol) Pesar exactamente 40.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, ajustar para obtener 100% de pureza, transferir a un baln volumtrico de 200.0 mL, adicionar 40 mL de HCl 0.01 N y agitar durante 5 minutos hasta disolucin, aforar con HCl 0.01 N, homogenizar. Tomar 3.0 mL de esta solucin y transferir a un baln volumtrico de 50.0 mL, aforar con HCl 0.01 N (Concentracin 12 g/mL)

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DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27. - Solucin estndar al 125% de alopurinol)

Cdigo: Pg.: 5 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

Pesar exactamente 50.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, ajustar para obtener 100% de pureza, transferir a un baln volumtrico de 200.0 mL, adicionar 40 mL de HCl 0.01 N y agitar durante 5 minutos hasta disolucin, aforar con HCl 0.01 N, homogenizar. Tomar 3.0 mL de esta solucin y transferir a un baln volumtrico de 50.0 mL, aforar con HCl 0.01 N (Concentracin 15 g/mL) - Solucin estndar al 150% de alopurinol) Pesar exactamente 60.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, ajustar para obtener 100% de pureza, transferir a un baln volumtrico de 200.0 mL, adicionar 40 mL de HCl 0.01 N y agitar durante 5 minutos hasta disolucin, aforar con HCl 0.01 N, homogenizar. Tomar 3.0 mL de esta solucin y transferir a un baln volumtrico de 50.0 mL, aforar con HCl 0.01 N (Concentracin 18 g/mL) - Solucin estndar al 175% de alopurinol) Pesar exactamente 70.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, ajustar para obtener 100% de pureza, transferir a un baln volumtrico de 200.0 mL, adicionar 40 mL de HCl 0.01 N y agitar durante 5 minutos hasta disolucin, aforar con HCl 0.01 N, homogenizar. Tomar 3.0 mL de esta solucin y transferir a un baln volumtrico de 50.0 mL, aforar con HCl 0.01 N (Concentracin 21 g/mL)

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DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27.

Cdigo: Pg.: 6 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

7.2 Preparacin de soluciones placebo adicionado de alopurinol

- Solucin placebo adicionado al 75% de alopurinol Pesar exactamente 30.0 mg de alopurinol en una balanza analtica, ajustar para obtener 100% de pureza, adicionar 810 mg de placebo analtico y transferir al vaso del aparato disolutor con 900 mL de HCl 0.01 N. Operar con las condiciones de la prueba y transcurrido el tiempo de disolucin, tomar una alcuota de 10 mL y transferirla a una bureta de 10.0 mL, de la cual se toman 7.0 mL y colocar en un baln volumtrico de 25.0 mL, aforar con HCl 0.01 N (Concentracin 9.33 g/mL)

- Solucin placebo adicionado al 100% de alopurinol Pesar exactamente 40.0 mg de alopurinol en una balanza analtica, ajustar para obtener 100% de pureza, adicionar 800 mg de placebo analtico y transferir al vaso del aparato disolutor con 900 mL de HCl 0.01 N. Operar con las condiciones de la prueba y transcurrido el tiempo de disolucin, tomar una alcuota de 10 mL y transferirla a una bureta de 10.0 mL, de la cual se toman 7.0 mL y colocar en un baln volumtrico de 25.0 mL, aforar con HCl 0.01 N (Concentracin 12.4 g/mL)

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DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27.

Cdigo: Pg.: 7 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

- Solucin placebo adicionado al 125% de alopurinol Pesar exactamente 50.0 mg de alopurinol en una balanza analtica, ajustar para obtener 100% de pureza, adicionar 790 mg de placebo analtico y transferir al vaso del aparato disolutor con 900 mL de HCl 0.01 N. Operar con las condiciones de la prueba y transcurrido el tiempo de disolucin, tomar una alcuota de 10 mL y transferirla a una bureta de 10.0 mL, de la cual se toman 7.0 mL y colocar en un baln volumtrico de 25.0 mL, aforar con HCl 0.01 N (Concentracin 15.5 g/mL)

7.3 Parmetro: linealidad del sistema - Procedimiento Preparar seis soluciones patrn de alopurinol de concentraciones 6, 9, 12, 15, 18 y 21 g/mL, cada una por triplicado, correspondientes a porcentaje de principio activo de 50%, 75%, 100%, 125%, 150% y 175% respectivamente, de la concentracin de lectura, leer cada una de las soluciones preparadas en el espectrofotmetro y agrupar los datos obtenidos, luego calcular el valor de la pendiente (b), la ordenada en el origen (a), el coeficiente de correlacin (r), el coeficiente de determinacin (r2) y el coeficiente de variacin. Los clculos se realizarn en un programa de Excel empleando las siguientes frmulas:

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DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27. - Pendiente.

Cdigo: Pg.: 8 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

Donde: b= pendiente. n = nmero de eventos. x = Concentracin en g/mL. y= Absorbancia de la muestra a 250 nm. = sumatoria.

- Intercepto.

Donde: a= intercepto n = nmero de eventos x = Concentracin en g/mL y= Absorbancia de la muestra a 250 nm = sumatoria

- Coeficiente de Correlacin.

- Coeficiente de determinacin

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DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27. - Coeficiente de variacin

Cdigo: Pg.: 9 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

Criterios de aceptacin Cantidad adicionada vs. cantidad recuperada r 0.99 r2 0.98 CV 3 %

7.4 Parmetro: linealidad del mtodo - Procedimiento Preparar tres pesadas independientes de solucin de placebo adicionado de tres niveles de concentracin, 75%, 100% y 125%, luego colocar en el aparato disolutor y ejecutar la prueba como sigue a continuacin: Condiciones de la prueba Medio: HCl 0.01 N Cantidad: 900 mL Q = 80% Mtodo: II (Paleta) RPM: 75 Tiempo: 45 minutos Temperatura: 37 C 0.5 C

Preparar el medio de disolucin HCl 0.01 N, luego calentar a una temperatura de 37C aproximadamente.

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DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27.

Cdigo: Pg.: 10 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

Proceder a armar el aparato disolutor y establecer las condiciones de la prueba anteriormente mencionadas. Una vez se alcanzada la temperatura de 37C en el bao del aparato, transferir 900 mL del medio previamente preparado a cada uno de los vasos. Colocar las pesadas de placebo adicionado mencionadas en los vasos del aparato disolutor correspondientes y poner en marcha el equipo. Transcurrido el tiempo de la prueba tomar alcuotas de 10 mL de cada una de las soluciones en los vasos, filtrar y transferir a buretas de 10.0 mL, luego tomar alcuotas de 7.0 mL en balones volumtricos de 25.0 mL y aforar con cido clorhdrico 0.01N. [13.3 g/mL]. Leer en un espectrofotmetro ultravioleta visible, a una longitud de onda de 250 nm, utilizando como blanco acido clorhdrico 0.01 N. Calcular el valor de la pendiente (b), la ordenada en el origen (a), el coeficiente de correlacin (r), el coeficiente de determinacin (r2) y el coeficiente de variacin con las siguientes frmulas: - Pendiente.

- Intercepto.

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DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27. - Coeficiente de Correlacin.

Cdigo: Pg.: 11 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

- Coeficiente de determinacin

- Coeficiente de variacin

Criterios de aceptacin: Cantidad adicionada vs. Cantidad recuperada r 0.99 r2 0.98 CV 3%

7.5 Parmetro: precisin Llevar a cabo con dos pruebas de disolucin en dos das diferentes con dos diferentes lotes, agrupar los datos y realizar los clculos correspondientes, mediante las frmulas:

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DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27. CLCULOS DA 1 - Media aritmtica

Cdigo: Pg.: 12 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

- Desviacin estndar

- Coeficiente de variacin

CLCULOS DA 2 - Media aritmtica

- Desviacin estndar

- Coeficiente de variacin

Criterio CV 3 %

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DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27.

Cdigo: Pg.: 13 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

7.6 Parmetro: Exactitud Preparar pesadas independientes de 6 concentraciones al 100% de solucin de placebo adicionado. Luego, realizar la prueba de disolucin y transcurrido el tiempo de disolucin, leer las muestras en el espectrofotmetro UV-VIS a una longitud de onda de 250 nm agrupar los datos y realizar los clculos mediante las frmulas: - Media aritmtica

- Desviacin estndar

- Coeficiente de variacin

- Intervalo de confianza

Criterio de aceptacin CV 3 %

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DETERMINACION DE PARAMETROS DE DESEMPEO DEL METODO DE DISOLUCION DE TABLETAS DE ALOPURINOL APLICANDO ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA VISIBLE. Referencia Bibliogrfica: USP 32-NF 27. 8. Resultados Conforme a los establecidos.

Cdigo: Pg.: 14 de 14 PVFQ20110701 Depto.: Control de Calidad Fecha: Julio 2011

9. Conclusin De acuerdo con los resultados analticos obtenidos de los ensayos realizados y lo establecido en la Farmacopea de los Estados Unidos USP-32, documentos ICH Q2B, al aplicar el mtodo de anlisis para verificar los parmetros de desempeo de la prueba de disolucin en tabletas de Alopurinol, cumplen con todos los requerimientos establecidos en los libros oficiales, y los parmetros de linealidad del sistema, linealidad del mtodo, precisin y exactitud.

Elaborado por: Ins Garca F. ________________ Julio 2011

Revisado por: Lic. Brbara Palacios F. ________________ Julio 2011

Autorizado por: Lic. Claudia de Alas F. ________________ Julio 2011

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ANEXO N 5 TABLA MILITARY STANDAR

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ANEXO N 6

CUADRO N 5 RESULTADOS DE LA PRUEBA DE DISOLUCIN

No. 1 2 3 4 5 6 Peso de Estndar (mg) LOTE: 110402 Peso de tabletas (mg) 842.6 851.8 838.4 842.0 831.3 857.2 39.76 Fecha Fab: 04/11 Absorbancias 0.721 0.746 0.746 0.754 0.738 0.723 0.677 Fecha Vence: 04/13 mg/tab disueltos 315.10 mg 326.03 mg 326.03 mg 329.53 mg 322.53 mg 315.98 mg Porcentaje sobre lo rotulado 105.03 % 108.67 % 108.67 % 109.84 % 107.51 % 105.33 % -

Observaciones: APROBADO con criterio S1 (Ver anexo N 3)

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ANEXO N 7

PREPARACIN DE SOLUCIONES ESTNDAR Y PLACEBO ADICIONADO

Preparacin de soluciones estndar - Solucin estndar al 50% de alopurinol Se pesaron 20.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, se ajust para obtener 100% de pureza, luego se transfiri a un baln volumtrico de 200.0 mL y se adicion 40 mL de HCl 0.01 N. Se agit durante 5 minutos hasta disolucin y se afor con HCl 0.01 N, luego se homogeniz la solucin. Posteriormente se tom con una pipeta volumtrica, 3.0 mL de esta solucin y se transfirieron a un baln volumtrico de 50.0 mL, luego se afor con HCl 0.01 N (Concentracin 6 g/mL)

- Solucin estndar al 75% de alopurinol Se pesaron 30.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, se ajust para obtener 100% de pureza, luego se transfiri a un baln volumtrico de 200.0 mL y se adicion 40 mL de HCl 0.01 N. Se agit durante 5 minutos hasta disolucin y se afor con HCl 0.01 N, luego se homogeniz la solucin. Posteriormente se tom con una pipeta volumtrica, 3.0 mL de esta solucin y se transfirieron a un baln volumtrico de 50.0 mL, luego se afor con HCl 0.01 N (Concentracin 9 g/mL)

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- Solucin estndar al 100% de alopurinol Se pesaron 40.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, se ajust para obtener 100% de pureza, luego se transfiri a un baln volumtrico de 200.0 mL y se adicion 40 mL de HCl 0.01 N. Se agit durante 5 minutos hasta disolucin y se afor con HCl 0.01 N, luego se homogeniz la solucin. Posteriormente se tom con una pipeta volumtrica, 3.0 mL de esta solucin y se transfirieron a un baln volumtrico de 50.0 mL, luego se afor con HCl 0.01 N (Concentracin 12 g/mL)

- Solucin estndar al 125% de alopurinol Se pesaron 50.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, se ajust para obtener 100% de pureza, luego se transfiri a un baln volumtrico de 200.0 mL y se adicion 40 mL de HCl 0.01 N. Se agit durante 5 minutos hasta disolucin y se afor con HCl 0.01 N, luego se homogeniz la solucin. Posteriormente se tom con una pipeta volumtrica, 3.0 mL de esta solucin y se transfirieron a un baln volumtrico de 50.0 mL, luego se afor con HCl 0.01 N (Concentracin 15 g/mL)

- Solucin estndar al 150% de alopurinol Se pesaron 60.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, se ajust para obtener 100% de pureza, luego se transfiri a un baln volumtrico de 200.0 mL y se adicion 40 mL de HCl 0.01 N. Se agit durante 5 minutos hasta disolucin y se afor con HCl 0.01 N, luego se homogeniz la solucin. Posteriormente se tom con una pipeta volumtrica, 3.0 mL de esta solucin y se transfirieron a un baln volumtrico de 50.0 mL, luego se afor con HCl 0.01 N (Concentracin 18 g/mL)

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- Solucin estndar al 175% de alopurinol Pesar exactamente 70.0 mg de Alopurinol en una balanza analtica, ajustar para obtener 100% de pureza, transferir a un baln volumtrico de 200.0 mL, adicionar 40 mL de HCl 0.01 N y agitar durante 5 minutos hasta disolucin, aforar con HCl 0.01 N, homogenizar. Tomar 3.0 mL de esta solucin y transferir a un baln volumtrico de 50.0 mL, aforar con HCl 0.01 N (Concentracin 21 g/mL)

Preparacin de soluciones de placebo adicionado de alopurinol

- Solucin placebo adicionado al 75% de alopurinol Se pesaron exactamente 30.0 mg de alopurinol en una balanza analtica, se realiz el ajuste para obtener 100% de pureza, luego se adicion 810 mg de placebo analtico y se transfirieron al vaso del aparato disolutor con 900 mL de HCl 0.01 N. Luego se oper con las condiciones de la prueba y transcurrido el tiempo de disolucin, se tom una alcuota de 10 mL y se transfiri a una bureta de 10.0 mL, de la cual se tomaron 7.0 mL y se colocaron en un baln volumtrico de 25.0 mL y se afor con HCl 0.01 N (Concentracin 9.33 g/mL)

- Solucin placebo adicionado al 100% de alopurinol Se pesaron exactamente 40.0 mg de alopurinol en una balanza analtica, se realiz el ajuste para obtener 100% de pureza, luego se adicion 800 mg de placebo analtico y se transfirieron al vaso del aparato disolutor con 900 mL de HCl 0.01 N. Luego se oper con las condiciones de la prueba y transcurrido el tiempo de disolucin, se tom una alcuota de 10 mL y se transfiri a una bureta de 10.0 mL, de la cual se tomaron 7.0 mL y se colocaron en un baln volumtrico de 25.0 mL y se afor con HCl 0.01 N (Concentracin 12.4 g/mL)

111

- Solucin placebo adicionado al 125% de alopurinol Se pesaron exactamente 50.0 mg de alopurinol en una balanza analtica, se realiz el ajuste para obtener 100% de pureza, luego se adicion 790 mg de placebo analtico y se transfirieron al vaso del aparato disolutor con 900 mL de HCl 0.01 N. Luego se oper con las condiciones de la prueba y transcurrido el tiempo de disolucin, se tom una alcuota de 10 mL y se transfiri a una bureta de 10.0 mL, de la cual se tomaron 7.0 mL y se colocaron en un baln volumtrico de 25.0 mL y se afor con HCl 0.01 N (Concentracin 15.5 g/mL)

112

ANEXO N 8 PREPARACION DE REACTIVOS (9)

- cido clorhdrico 1 N (HCl 1.0 N) Tomar cuidadosamente 85 mL de cido clorhdrico concentrado y transferirlo a un baln volumtrico de 1000.0 mL que contenga previamente 300 mL de agua desmineralizada, llevar a volumen con agua desmineralizada y homogenizar. Rotular la solucin.

Acido clorhdrico 0.1 N (HCl 0.1 N) Tomar cuidadosamente 8.5 mL de cido clorhdrico concentrado y transferirlo a un baln volumtrico de 1000.0 mL que contenga previamente 300 mL de agua desmineralizada, llevar a volumen con agua desmineralizada y homogenizar. Rotular la solucin.

113

Acido clorhdrico 0.01 N (HCl 0.01 N) Tomar cuidadosamente 0.85 mL de cido clorhdrico concentrado y transferirlo a un baln volumtrico de 1000.0 mL que contenga previamente 200 mL de agua desmineralizada, llevar a volumen con agua desmineralizada y homogenizar. Rotular la solucin.

- HIDRXIDO DE SODIO 1 N (NaOH 1.0 N) Disolver 162 g de hidrxido de sodio previamente pesados en una balanza analtica, en 150 mL. de agua exenta de dixido de carbono, enfriar la solucin a temperatura ambiente y filtrar a travs de papel filtro endurecido. Transferir 54,5 mL. del filtrado transparente a un envase de poliolefina hermtico y diluir con agua exenta de dixido de carbono a 1000 mL.

- AGUA EXENTA DE DIXIDO DE CARBONO Es agua purificada que se ha calentado a ebullicin vigorosamente durante 5 minutos o ms y se ha dejado enfriar protegindola de la absorcin de dixido de carbono de la atmsfera, o bien agua purificada que tiene una resistividad no menor de 18 Mohm-cm.

114

ANEXO No. 9 MONOGRAFA DE TABLETAS DE ALOPURINOL (9)

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ANEXO N 10 ESPECTROS DE ABSORCIN DE ALOPURINOL PRUEBA DE DISOLUCIN

117

Figura N 1 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin Solucin estndar Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

Nota: Se anexan todos los espectros y absorbancias obtenidas en el equipo espectrofotmetro ultravioleta visible, para evidenciar los datos recolectados en el trabajo de investigacin.

118

Figura No. 2 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin Solucin disolucin 1 Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

119

Figura N 3 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin Solucin disolucin 2 Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

120

Figura N 4 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin Solucin disolucin 3 Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

121

Figura N 5 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin Solucin disolucin 4 Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

122

Figura N 6 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin Solucin disolucin 5 Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

123

Figura N 7 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin Solucin disolucin 6 Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

124

ANEXO N 11 ESPECTROS DE ABSORCIN DE ALOPURINOL LINEALIDAD DEL SISTEMA

Figura N 8 Espectro de absorcin ultravioleta de parmetro linealidad del sistema Lote de tabletas: 110516 F.F.: 05/2011 F.V.: 05/2013

125

ANEXO N 12 ESPECTROS DE ABSORCIN DE ALOPURINOL LINEALIDAD DEL MTODO

Figura No. 9 Espectros de absorcin ultravioleta de parmetro linealidad del mtodo Lote de tabletas: 110516 F.F.: 05/2011 F.V.: 05/2013

126

ANEXO N 13 ESPECTROS DE ABSORCIN DE ALOPURINOL PARMETRO PRECISIN

127

Figura No. 10 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro precisin Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

128

Figura No. 11 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro precisin Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

129

Figura No. 12 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro precisin Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

130

Figura No. 13 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro precisin Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

131

Figura No. 14 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro precisin Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

132

Figura No. 15 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro precisin Lote de tabletas: 110402 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

133

ANEXO N 14 ESPECTROS DE ABSORCIN DE ALOPURINOL PARMETRO EXACTITUD

134

Figura No. 16 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro exactitud Lote de tabletas: 110403 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

135

Figura No. 17 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro exactitud Lote de tabletas: 110403 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

136

Figura No. 18 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro exactitud Lote de tabletas: 110403 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

137

Figura No. 19 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro exactitud Lote de tabletas: 110403 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

138

Figura No. 20 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro exactitud Lote de tabletas: 110403 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

139

Figura No. 21 Espectro de absorcin ultravioleta de prueba de disolucin para el parmetro exactitud Lote de tabletas: 110403 F.F.: 04/2011 F.V.: 04/2013

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ANEXO No.15 CERTIFICADOS DE INSTALACIN DE LOS EQUIPOS UTILIZADOS

141

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144