TEMA 37: El Cariotipo Humano

Carlos Navarro Lpez

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TEMA 37

El Cariotipo Humano



37.1.-Introduccin.

A mediados del siglo pasado, gracias al avance de la biologa, de la gentica, y
de la citologa, surgi una nueva ciencia, la llamada citogentica, que tiene como
objetivo el estudio de los cromosomas y el de sus alteraciones, as como el estudio de la
relacin de estas alteraciones y la sintomatologa que presentan los pacientes. Es por
tanto una ciencia de gran aplicacin en biologa y medicina, ya que muchas
enfermedades tienen un origen citogentica, igual que muchos abortos espontneos, o
malformaciones fetales.
Desde mediados del siglo XIX hasta mediados del siglo XX no se supo el
nmero de cromosomas del ser humano. Por qu fue as? Porque entre otras cosas, no
se saba si el nmero de cromosomas era constante. El problema era que en la placa
metafsica los cromosomas estn muy juntos y es difcil verlos separados. En diversos
recuentos se obtuvieron nmeros muy dispares: 29, 80, 48 Hoy en da sabemos que el
nmero de cromosomas es caracterstico de cada especie y que adems, hay genotipos
muy variados-:
- Gusano Ascaris, que solo presenta un cromosoma.
- Mamferos: entre 40 y 50 cromosomas.
o Humanos: 46 cromosomas.
o Rata: 40 cromosomas.

Pero no fue hasta 1956, cuando fue establecido por lo sinvestigadores Levan y
Tjio, que la especie humana tena 46 cromosomas. Este descubrimiento fue posible
gracias a diversos avances tcnicos y metodologcos:
- Tcnicas de cultivo de tejidos. Primero se realizaron con clulas de pollo, y
posteriormente de mamfero. Con estas tcnicas, desarrolladas ya en 1930 y
1940, se permiti cultivar clulas vivas in vitro.
- La tcnica del choque hipotnico, que fue la ms importante. Esta tcnica
consiste en suspender las clulas en una suspensin hipotnica, con la que se
hinchan las clulas consiguiendo la separacin de los cromosomas.
Aprovecharon adems la colchicina para inhibir la polimerizacin de
microtbulos y por tanto, destruir el huso mittico.

Este trabajo se bas en la utilizacin de clulas embrionarias humanas obtenidas
de fetos cuyas madres haban abortado espontneamente. Este hecho propici las
crticas de la comunidad cientfica porque se pens que esas clulas podan presentar
anomalas cromosmicas.
En ese mismo ao (1956), Ford y Hamerton publicaron un trabajo realizado con
biopsias testiculares en el que explicaban que las espermatogonias tenan 46
cromosomas, y que los espermatocitos primarios tenan 23 cromosomas bivalentes. Con
este estudio se confirmo el nmero caracterstico de cromosomas de la especie humana,
que es 46 cromosomas, y adems, se estableci que haba dos gonosomas diferentes X
e Y.
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Una vez se supo el nmero de cromosomas de la especie humana, no se avanz
nada en los 3 aos siguientes.
El verdadero empuje de la citogentica ocurri en 1959, cuando tuvo lugar la
primera publicacin en que se demostr una anomala cromosmica como causa de una
enfermedad humana, gracias a las investigaciones de Lejeune. Se demostr que los
nios con Sndrome de Down tenan un cromosoma supernumerario (3 en lugar de 2), el
21, que adems era de pequeo tamao. Este investigador hasta la muerte intent buscar
un tratamiento para la trisoma del 21, nombre con el que se designa al sndrome que
descubri.
Desde esta poca muchos laboratorios han trabajado con la citogentica, pero
siempre con el mismo problema: se necesitaban clulas, y las de sangre perifrica no
servan ya que los linfocitos no se dividen una vez diferenciados. Por ello se intent
utilizar otras clulas:
- Mucosa bucal, pero no conseguan que se desarrollaran mucho (malvivan).
- Clulas de la raz del pelo.
- Clulas de la mdula sea, pero su extraccin duele.
- Clulas de biopsia testicular, pero no hay muchos donantes.

En 1960 Moorhead describi que los linfocitos se diferenciaban en la sangre
perifrica, pero que podan entrar en mitosis en condiciones in vitro. Con este
descubrimiento, se pudo realizar el cariotipo a partir de sangre perifrica, lo que tuvo
varias ventajas:
- Es un tejido fcil de obtener.
- Permite la obtencin de un gran nmero de clulas con lo que se obtienen
abundantes metafases.

Este tipo de anlisis citogentica es mucho ms comn, y se utiliza para conocer
las anomalas cromosmicas. Por estos motivos se utiliza la sangre perifrica para el
estudio del cariotipo humano, pero adems, se suele estudiar otros tejidos de forma
complementaria:
- Piel.
- Clulas testiculares, en el caso de que nos interese el estudio de la meiosis.
- Clulas del lquido amnitico o de las vellosidades coriales, si lo que
queremos es realizar un diagnstico prenatal.


37.2.- Metodologa.

Para comenzar, se realiza una extraccin de sangre perifrica en condiciones de
mxima esterilidad, que posteriormente se someter a cultivo durante 72 horas.
A esa sangre se le aade heparina para evitar que coagule. La sangre se
introduce en un medio de cultivo RPMI, al que se aade un extracto embrionario (suero
bovino fetal), y antibiticos para prevenir la contaminacin. Adems, se aade
fitohemaglutinina, que es una lecitina que se une a la membrana plasmtica de los
linfocitos y hace que estos se conviertan en linfoblastos, es decir, se desdiferencian.
Esto se consigue en 24 horas.
Posteriormente los linfoblastos se dividen y se estimulan segregando
interleuquina 2. Se mantendr el cultivo 48 horas ms con el objetivo de tener para
estudiar ms mitosis.
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A las 72 horas de cultivo procederemos a la extraccin de las clulas en
metafase, llamada sacrificio. Este proceso se inicia con colchicina, que hace que el huso
acromtico desaparezca, es decir, no tendr lugar la anafase. Posteriormente, las clulas
se someten a la tcnica del choque hipotnico con KCl cloruro potsico, para que
aumente el volumen celular y los cromosomas se separen. A continuacin fijamos los
cromosomas con fijador de Carnoy, y realizaremos las extensiones. Con esta tcnica se
obtienen un gran nmero de metafases.
A continuacin, contamos el nmero de cromosomas, los ordenamos
actualmente tenemos programas informticos que lo hacen, y obtenemos el cariotipo,
que es la imagen que se obtiene cuando los cromosomas en metafase se ordenan por
parejas de homlogos. Actualmente se ha llegado a un acuerdo mundial para ordenarlos
de determinada manera y siempre igual. Los parmetros utilizados son:
- Tamao: de mayor tamao a menor tamao.
- Posicin del centrmero: primero los metacntricos, luego los
submetacntricos, y posteriormente los acrocntricos.
- Presencia o no, de constricciones secundarias.


37.3.- Clasificacin de los cromosomas.

En el cariotipo humano se han establecido los siguientes grupos de cromosomas:
A, B, C, D, E, F y G.

Cromosomas del grupo A:
En este grupo aparecen los cromosomas ms grandes del cariotipo
humano. Pertenecen a l los pares de cromosomas 1, 2 y 3.
o Cromosoma 1: es el ms grande de todos y es metacntrico.
o Cromosoma 2: es submetacntrico.
o Cromosoma 3: es metacntrico.

Cromosomas del grupo B:
En este grupo incluimos los pares de cromosomas 4 y 5. Son
cromosomas muy submetacntricos y de tamao muy similar. Alteraciones en
estos cromosomas se ha demostrado que provocan grandes sndromes
citogenticas.

Cromosomas del grupo C:
A este grupo pertenecen los cromosomas 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 y el
gonosoma X. Es el grupo ms complejo de todos. La mayora de los
cromosomas son bastante submetacntricos:
o Cromosoma 6: submetacntrico.
o Cromosoma 7: menos submetacntrico.
o Cromosoma 8: muy submetacntrico.
o Cromosoma 9: menos submetacntrico.
o Cromosoma 10: muy submetacntrico.
o Cromosoma 11: menos submetacntrico.
o Cromosoma 12: muy submetacntrico.
o Cromosoma X: es submetacntrico y tiene un tamao medio entre el
cromosoma 6 y el 7.

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Cromosomas del grupo D:
Este grupo est compuesto por los cromosomas 13, 14 y 15. Son
cromosomas acrocntricos. Adems, presentan constricciones secundarias, que
dan lugar a pequeos satlites poco visibles a microscopa electrnica donde se
encuentran los genes nucleolares.

Cromosomas del grupo E:
En este grupo incluimos a los cromosomas 16, 17 y 18. Los 3 presentan
un tamao similar:
o Cromosoma 16: metacntrico prcticamente.
o Cromosoma 17: submetacntrico.
o Cromosoma 18: muy submetacntrico.

Cromosomas del grupo F:
Este grupo est formado por los cromosomas 19 y 20. Entre ellos no se
diferencian prcticamente. Por su tamao, y por el hecho de que son
metacntricos se les denomina pequeas cruces.

Cromosomas del grupo G:
Los cromosomas 21 y 22, as como el gonosoma Y forman este grupo de
cromosomas. Son los cromosomas ms pequeos del cariotipo.
o Cromosomas 21 y 22: son acrocntricos y tienen satlites con genes
nucleolares.
El cromosoma 21 es realmente el cromosoma ms pequeo
del cariotipo, pero est colocado de esta manera por acuerdo
internacional, ya que histricamente se coloco en esa
posicin, es el responsable de sndrome de Down, ayud al
despegue de la citogentica, etc.
o Cromosoma Y: es submetacntrico y presenta un tamao variable.
Sus dos cromtidas se sitan muy paralelas y no divergentes.
Adems, est formado por heterocromatina constitutiva porque no
tiene genes.

La imagen del cariotipo la tenemos desde 1956, 1959 adems, hay que decir
que mediante microscopa electrnica la diferenciacin de cromosomas es muy difcil,
por lo que se van a llevar a cabo una serie de tcnicas para identificarlos ms fcilmente
y sin equivocaciones.

Cariotipo masculino -XY- Cariotipo femenino -XX-


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37.4.- Tcnicas de bandeado.

A partir de 1970 se comenzaron a realizar una serie de tratamientos y tinciones a
los cromosomas para identificarlos mejor, que fueron las tcnicas de bandeado, que las
hay de dos tipos:
- Bandas de todo el cromosoma.
- Bandas que tien solo determinados puntos del cromosoma.

Bandas de todo el cromosoma:
Este tipo de bandas se ha de realizar siempre que vayamos a hacer un
cariotipo. El resultado de la tcnica nos dar unos cromosomas con bandas
alternantes (oscuras y claras) y adems, una configuracin o un patrn
caracterstico y estable de cada cromosoma. Estas bandas permiten:
o La identificacin de los cromosomas, gracias a su patrn
caracterstico.
o La caracterizacin del cromosoma por regiones.
o Nos permite trazar o establecer relaciones ms exactas entre las
enfermedades y las anomalas cromosmicas.

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La obtencin de este tipo de bandas se realiza en cromosomas
metafsicos, aunque tambin se puede realizar en cromosomas prometafsicos, o
incluso en profsicos. El cromosoma metafsico est condensado y el cariotipo
humano en haploide presenta unas 400 bandas, mientras que en prometafase
podemos ver hasta 2.000 bandas porque es un cromosoma ms largo.
Se trabaja con cromosomas metafsicos por comodidad, pero en caso de
aparecer dudas, se realiza el cariotipo con cromosomas prometafsicos.
Qu diferentes bandas encontramos que tien o cubren todo el
cromosoma?
o Bandas Q, de quinacrina:
Con esta tincin se obtienen unas bandas alternantes ms o
menos fluorescentes. Para verlas necesitas un microscopio
de luz ultravioleta (microscopio de fluorescencia).
VENTAJA: es un mtodo rpido.
DESVENTAJA: en un minuto se pierde el brillo.
o Bandas G, de Giemsa:
Se obtienen tratando los cromosomas con una solucin
proteoltica de tripsina, y posteriormente tiendo con Giemsa.
Se obtiene un patrn de bandas que permite individualizar los
cromosomas y reconocerlos. Las regiones oscuras son zonas
de replicacin tarda, por lo que ese ADN es rico en Adenina
y Timina.
o Bandas R (muy utilizadas en Francia):
Tratan los cromosomas con una solucin salina y
posteriormente tien con Giemsa. El bandeado que se obtiene
es al revs: las zonas claras antes eran oscuras, y las oscuras,
antes eran claras, esto quiere decir, que las que ms se tien
son las zonas de replicacin temprana, es decir, que son ricas
en Guanina y Citosina.

Los cromosomas prometafsicos se bandean con bandas prometafsicas
de tipo G o R, pero en cromosomas ms largos.
Con estos tipos de bandas podemos reconocer fcilmente la falta de una
regin, algo til para localizar anomalas cromosmicas y diagnosticarlas
relacionarlas con una patologa.

Bandas que tien solo determinados puntos del cromosoma:
o Bandas C: solo tien la heterocromatina:
Centrmeros.
Zonas heterocromatnicas de los cromosomas 1, 9, 16, de los
brazos cortos de los cromosomas acrocntricos (13, 14, 15, 21
y 22), as como del gonosoma Y.
o Bandas NOR, que tien los satlites de los cromosomas
acrocntricos.
o Bandas T, que marcan los telmeros para ver si falta alguno.

Actualmente se utiliza mucho la tcnica de FISH, que se utiliza para la
localizacin de regiones concretas y de genes determinados.


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37.5.- Nomenclatura.

La nomenclatura es un aspecto que todos los laboratorios tienen que hacer de la
misma forma. Pero cmo se nombra el cariotipo? Se escribe el nmero de
cromosomas totales, se pone una coma, y se escribe el genotipo sexual (XX, XY).
- MUJER: 46,XX.
- HOMBRE: 46,XY



Para ms informacin acerca de la nomenclatura del cariotipo, y de las anomalas, etc. revisar PRCTICA 9: CITOGENTICA.