INTRODUCCIN

La Biotecnologa es la ciencia llamada a solucionar muchos problemas de ndole mundial en los campos de la medicina, la industria y el sector agropecuario. En pases como Colombia, donde la inversin en investigacin es muy precaria; los aportes e iniciativas de investigacin y desarrollo en el rea de la Biotecnologa Alimentaria, indudablemente, contribuirn en brindar alternativas de soluciones a la gran ola de hambruna ue tienen muchas poblaciones de este y otros pases del mundo. !entro de las herramientas ms valiosas y consistentes con ue cuenta el "ngeniero de Agroindustrial para suplir las necesidades de progreso cient#ico, tecnolgico y de "ngeniera, se encuentra la "nteraccin armnica de los di#erentes aspectos de la Biotecnologa Alimentaria; para ello es indispensable la #ormacin de pro#esionales capaces de aplicar y desarrollar conceptos de ingeniera en los procesos biotecnolgicos reali$ados en la industria de Agroalimentaria. El desarrollo de la biotecnologa industrial en Colombia es evidente y se mani#iesta en los di#erentes renglones de la economa nacional. Entre las industrias de alimentos ue generan o consumen productos biotecnolgicos se encuentran% las cerveceras y malteras, productos lcteos #ermentados, pani#icadoras, &ugos y n'ctares, industrias vincolas y licoreras, etc. La poltica nacional de ciencia y tecnologa, en uno de sus programas orientados a #ortalecer la competitividad del sector productivo y su insercin en el mercado mundial, reconoce ue los adelantos cient#icos en biologa molecular y biotecnologa han tenido gran impacto en los sistemas de produccin; y por ello es prioritario el #omento a las investigaciones y a la #ormacin de nuevos pro#esionales en estas reas. Este manual de laboratorio, dirigido a estudiantes de "ngeniera de Agroindustrial y otras "ngenieras o reas relacionadas con el sector de la industria agroalimentaria, #ue dise(ado con mucho esmero y dedicacin para complementar y demostrar en el laboratorio los re#erentes tericos discutidos previamente en el aula de clases. )urge, entonces como una herramienta pedaggica ue #ortalecer el proces de ense(an$a*

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aprendi$a&e en el desarrollo de programas acad'micos relacionados con la Biotecnologa Alimentaria.

BIOSEGURIDAD Y BUENAS PRCTICAS MICROBIOLGICAS EN EL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGA

!esde el primer momento en ue el estudiante entra a un laboratorio donde se traba&en procesos biolgicos microbianos, est e+puesto a recibir cual uier clase de in#eccin, dependiendo del microorganismo con el ue entre en contacto, ya sea directamente o por contaminacin cru$ada. ,ara prevenir este tipo de riesgos, el estudiante debe cumplir con las normas de bioseguridad dentro y #uera del laboratorio. Las normas de bioseguridad son una recopilacin de los procedimientos de laboratorio ms esenciales ue constituyen la base de t'cnicas microbiolgicas y biotecnolgicas apropiadas; 'stas son #undamentales para la seguridad en el laboratorio y no pueden sustituirse, en ning-n momento, con e uipos especiali$ados; ya ue estos no sern ms ue un complemento para #acilitar el traba&o y en algunos casos para disminuir la e+posicin a sustancias peligrosas. Las normas de seguridad ue se deben cumplir en un laboratorio donde se traba&e con material microbiolgico se clasi#ican en% !e orden personal, de orden del laboratorio y de orden del traba&o microbiolgico. a) DE ORDEN PERSONAL: .sar siempre la bata dentro del laboratorio; no se debe llevar puesta #uera del mismo. Las prendas contaminadas se deben esterili$ar antes de lavarlas. /o se deben colocar los bolsos, prendas de vestir, paraguas, carteras, etc. en los mesones de traba&o. !ebe e+istir un lugar destinado para ello. !entro del laboratorio no se permitir al personal comer, beber, #umar ni aplicar cosm'ticos. )e debern lavar las manos al iniciar y al terminar el traba&o; como tambi'n, despu's de haber manipulado material contaminado y0o in#eccioso. Agradecimientos a la Universidad de Crdoba por el uso de este manual, lo mismo que sus autores DEIVIS LUJ ! "#E!ALS $ JAI"% SALCED% &E!D%'A

 /o se deber pasar la lengua por las eti uetas; los materiales no se colocarn en la boca /o se llevar cal$ado sin puntera o ue no sea cerrado. /o se debe hacer uso de pa(uelos o bata de laboratorio para limpiar ob&etos o instrumentos de traba&o. /o se debe participar del traba&o si se tiene alguna herida, uemadura o rasgu(o en las manos o antebra$os; estas deben ser tratadas inmediatamente. )e debe comunicar inmediatamente cual uier sospecha de haber contrado alguna en#ermedad como consecuencia del traba&o. Cuando sea necesario, se deben proteger los o&os y la cara de salpicaduras o impactos; se utili$aran ga#as de seguridad, viseras o pantallas #aciales. /o se deber pipetear con la boca; se deben usar pipetas automticas, pera de goma o au+iliar de pipeteo. b) DE ORDEN DEL LABORATORIO: 1antener cerradas las puertas del laboratorio; abrirlas slo en caso de emergencia. /o permitir la entrada de ni(os a las $onas de traba&o /o debe haber material ue no tenga relacin con el traba&o !ebe haber un programa de lucha contra insectos y roedores Las super#icies de traba&o se limpiarn y desin#ectarn al menos una ve$ al da y en caso de derramamiento #ortuito de sustancias potencialmente peligrosas. /o olvidar cerrar la vlvula del gas al terminar cada &ornada de traba&o. La se(al internacional de riesgo biolgico debe colocarse en las puertas de los locales en donde se manipulen microorganismos del grupo de riesgo 2. c) DE ORDEN DEL TRABAJO MICROBIOLGICO Estudiar, con anterioridad, las t'cnicas y protocolos de las prcticas y e+perimentos de laboratorio; esto evitar con#usiones y dinami$ar el traba&o. 3raba&ar, siempre, de manera ordenada, tran uila, constante y metdica; evitando movimientos y gasto de energa innecesarios. Llevar, siempre, un registro ordenado de los resultados y modi#icaciones. Esto evitar contratiempos desagradables por la p'rdida de datos importantes.

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 El material de traba&o 4Caldos de #ermentacin, cepas, medios, etc5 deben ser tocados, -nicamente, con instrumentos est'riles; nunca con material contaminado y mucho menos con las manos. Limpiar y desin#ectar las super#icies de traba&o antes y despu's de cada &ornada. Cada ve$ ue se derrame material in#eccioso, se debe cubrir la $ona con papel absorbente impregnado de desin#ectante y de&arlo por un periodo de 67 minutos. Las pipetas de vidrio, deben tener en su abertura superior un algodn ue sirva como #iltro para proteger a la muestra y al manipulador. Colocar todo material contaminado, tales como% ,orta ob&etos, laminillas, esptulas, pin$as, pipetas, etc. en recipientes adecuados con soluciones desin#ectantes. El resto de material contaminado se debe colocar en recipientes especiales para su posterior esterili$acin. Al depositar l uidos, vi'rtalos por las paredes. 8ecuerde ue siempre se debe adicionar cidos al agua y nunca agua a los cidos, por ue ocasiona salpicaduras peligrosas. /o retire cultivos celulares del laboratorio sin previa autori$acin Las asas deben esterili$arse antes y despu's de usarse #lamendolas en la llama del mechero hasta ponerlas al ro&o vivo en toda su e+tensin y luego de&arla en#riar por espacio de 29 segundos cerca de la llama. )i se va a repicar de un cultivo a otro, termine por en#riar el asa en este -ltimo :lamee la boca de tubos, balones, Erlenmeyers, etc. antes y despu's ue introdu$ca asas o pipetas /unca hable, tosa, estornude o respire #uerte cuando abra un cultivo o est' sembrando 3raba&e lo ms cerca posible al mechero.

RECUERDE SIEMPRE! Las improvisaciones son el primer paso para un accidente En todo momento est' consciente de lo ue hace En caso de un accidente, act-e rpidamente sin perder la calma ,regunte al pro#esor si no est seguro de lo ue va a hacer 3enga mucho sentido com-n

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EXPERIMENTO N 1 T CNICAS PARA MEDICIN DE BIOMASA

1! INTRODUCCIN: El crecimiento microbiano se pude considerar como el aumento ordenado de todos los constituyentes umicos de un organismo, lo cual, para los organismos unicelulares, conduce a un aumento del n-mero de individuos en la poblacin. )e puede considerar el crecimiento al nivel de individuos dentro de una poblacin 4ciclo celular5 o el crecimiento de poblaciones celulares 4ciclo de crecimiento5. El crecimiento de las poblaciones celulares se puede subdividir en "#"$%&a" c%''a()", como el cultivo intermitente y en "#"$%&a" ab#%'$)", como el cultivo alimentado por lotes y el cultivo continuo. ,ara determinar el n-mero total de c'lulas de un cultivo, el m'todo de eleccin es el recuento microscpico directo. ,ara c'lulas de levadura, puede emplearse un hemocitmetro. Es necesaria una ampliacin de 699; a <99; para visuali$ar la cmara de recuento y las c'lulas en suspensin. ,ara c'lulas bacterianas se usa #recuentemente una cmara de ,etroo#*=auser o una de /eubauer y una ampliacin de 6999; a causa del pe ue(o tama(o de las bacterias. El recuento microscpico directo tiene la venta&a de Agradecimientos a la Universidad de Crdoba por el uso de este manual, lo mismo que sus autores DEIVIS LUJ ! "#E!ALS $ JAI"% SALCED% &E!D%'A

ue permite observar directamente la mor#ologa de las c'lulas estudiadas. Las mor#ologas aberrantes o atpicas podran indicar unas condiciones subptimas de crecimiento o la presencia de un genotipo o #enotipo alterados. El m'todo ms usado para medir el crecimiento microbiano es secar vol-menes conocidos de cultivo celular lentamente hasta obtener un peso constante. Cuando se trata de c'lulas ue sedimentan rpidamente, como las levaduras, esto usualmente implica centri#ugacin de muestras del cultivo en tubos de centr#uga prepesados. ,ara c'lulas bacterianas di#ciles de concentrar por centri#ugacin, las muestras de cultivo se #iltran a trav's de membranas hidro#licas con un tama(o de poro de 9,2 m. >tro m'todo muy utili$ado es el de determinacin de biomasa por densidad ptica. )e aprovecha la proporcionalidad de la densidad ptica a la masa celular, cuando no se tienen en el medio de #ermentacin otros slidos en suspensin. Este m'todo se basa en la Ley de Beer y Lamberty; en este caso, se asume ue la absorcin del rayo incidente es proporcional a la concentracin de c'lulas presentes. *! OBJETI+O: !esarrollar la habilidad para medicin la biomasa microbiana ue interviene en los bioprocesos a trav's del conocimiento de las t'cnicas ms utili$adas para este #in.

,! MATERIALES Y REACTI+OS: a) Ma$%'#a-%" Cmaras de /eubauer 1icroscopios Estu#a !esecador Balan$a analtica 4? ci#ras decimales5 Espectro#otmetro Centr#uga ,ipetas graduadas ,ipetas automticas

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 b)

Au+iliar de pipeteo Bea@ers Erlenmeyers 3ubos para centr#uga ,in$as R%ac$#.)" Cultivo de Levadura Agua destilada )olucin salina isotnica est'ril 49,A7B5

/! PROCEDIMIENTO:

/!1! P'%0a'ac#12 (%- c3-$#.) &a('%: !isolver apro+imadamente 9,7 gr. de levadura seca comercial 4)accharomyces cerevisiae5 en un erlenmeyer ue contenga 299ml de agua destilada est'ril. /!*! P'%0a'ac#12 (% -a" ")-3c#)2%" 0')b-%&a: En tubos de 29*27 ml, previamente secos en estu#a, preparar ? diluciones de levadura a partir del cultivo madre, as% TUBO &- (% a63a &- (% c3-$#.) 1 * 69 A 9 2 , ? < / < ? 4 5 2 9 A 69

Cada dilucin de levadura ser medida con las siguientes t'cnicas%

/!,! M%(#c#12 (% -a b#)&a"a &#c')b#a2a 0)' c)2$%) (#'%c$) %2 c7&a'a (% N%3ba3%': Agradecimientos a la Universidad de Crdoba por el uso de este manual, lo mismo que sus autores DEIVIS LUJ ! "#E!ALS $ JAI"% SALCED% &E!D%'A

Agitar muy bien el cultivo de levadura. 3omar un volumen pe ue(o 49,6 C 9,D mL5 con la pipeta automtica. !epositar una alcuota en la super#icie pulida de la cmara de /eubauer cerca del e+tremo del cubreob&etos; la suspensin entrar en la cmara por capilaridad. .na cmara llenada adecuadamente contiene c'lulas slo en el espacio contenido entre el cubre y la cmara de recuento. /o debera sobrar #luido ue se deposite en los surcos. ,osteriormente se coloca en la platina de un microscopio compuesto y se en#oca el enre&ado con los ob&etivos de menos aumento 4<; y <9;5. ,ara contar las levaduras se utili$a el cuadro central 4Eer #igura 65. El cuadro central est se(alado con un crculo y contiene 27 cuadros, cada uno rodeado por un borde de tres lneas. Cada uno de los 27 cuadros a su ve$ contiene 6? cuadritos. )e debe a&ustar la intensidad de la lu$ de modo ue se hagan visibles tanto las lneas como las c'lulas. )e deben contar las c'lulas ue se encuentren dentro de los 7 cuadros marcados 4los cuatro de las es uinas y el del centro5. El cuadro central 4marcado con el crculo5 tiene un rea de 6 mm 2 y una pro#undidad de 9.6 mm. 3enga en cuenta los )iguientes aspectos% ,ara a uellas c'lulas ue est'n tocando las lneas de los bordes, slo cuente a uellas ue est'n en dos de los cuatro bordes 4superior e i$ uierdo5; esto evitar ue se repita el conteo. )i cuenta ms de 79 o menos de 29 c'lulas por cuadro, repita la toma de muestra o ca&b#% -a (#-3c#12 83% %"$9 3"a2()! Limpie la cmara con agua destilada est'ril y s' uela con gasa o algodn despu's de cada lectura.
( mm

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Figura 1. Cmara de Neubauer

/!/! M%(#c#12 (% -a b#)&a"a &#c')b#a2a 0)' (%2"#(a( 10$#ca: 3omar 6 ml de cada muestra problema y preparar en tubos tapa C rosca una dilucin de cada una de ellas de tal #orma ue la concentracin #inal de solutos no sobrepase las 6999 ppm. 4m+ima concentracin de slidos ledas por el espectro#otmetro5 Agitar muy bien. 8eali$ar la lectura de absorbancia en el espectro#otmetro a 7<9 nm. /!4! M%(#c#12 (% -a b#)&a"a &#c')b#a2a 0)' 0%") "%c) c%-3-a': Centri#ugue los tubos, previamente pesados, ue contienen las soluciones originales de levadura 4volumen restante conocido5 a <999 rpm durante 67 minutos. Con ayuda de una pipeta %.ac3% c3#(a()"a&%2$% el sobrenadante. ,osteriormente someta a evaporacin en estu#a el agua restante a una temperatura de F9GC durante 29 horas. ,ese los tubos y vuelva a evaporar hasta ue haya alcan$ado un peso constante.

4!

CLCULOS Y CONSULTAS:

Calcule y reporte la concentracin de cada una de las diluciones problemas 4c'lulas0ml, Absorbancia y gr de c'lula0L5 . Elabore una gr#ica de /o C'lulas0ml vs Absorbancia. Calcule el valor de 82 Elabore una gr#ica de gr de c'lulas0L vs Absorbancia. Calcule el valor de 8 2 Consulte y e+pli ue otros m'todos utili$ados para la medicin de la biomasa microbiana. Agradecimientos a la Universidad de Crdoba por el uso de este manual, lo mismo que sus autores DEIVIS LUJ ! "#E!ALS $ JAI"% SALCED% &E!D%'A

 Consulte las venta&as y desventa&as de cada uno de las t'cnicas utili$adas en el e+perimento. HIu' son los colorantes supravitales y para u' se usanJ

EXPERIMENTO N * DETERMINACIN DE A:;CARES REDUCTORES POR EL M TODO DNS <c#() ,=4 > (#2#$')"a-#c?-#c))

1! INTRODUCCIN: Este m'todo nos ayuda a determinar la presencia de grupos carbonilos libres 4CK>5 en los tambi'n llamados a$-cares reductores. Esto involucra la o+idacin del aldehdo presente en el grupo #uncional. )imultneamente, en presencia de calor el cido D,7* dinitrosaliclico 4!/)5 se reduce a cido D*amino,7*nitrosaliclico ba&o las condiciones alcalinas, desarrollndose un color amarillo ca#'% o+idacin grupo aldehdo grupo carbo+ilo

reduccin !/) cido D*amino,7*nitrosaliclico

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)e adiciona sul#ito 4no necesario para la reaccin del cambio de color5 en el reactivo para absorber el o+geno disuelto, ya ue 'ste puede inter#erir con la o+idacin de la glucosa. En la reaccin se muestra ue una mol de a$-car reaccionar con una mol de !/). )in embargo, no cabe duda ue se dan muchas otras reacciones, y la este uiometra de la reaccin es mucho ms complicada ue lo previamente descrito. El tipo de reaccin lateral depende de la naturale$a e+acta del a$-car reductor. !i#erentes a$-cares reductores arro&an distintas intensidades de color ; as, se hace necesario calibrar para cada a$-car. Adems de la o+idacin de los grupos carbonilos en el a$-car, otras reacciones laterales como la descomposicin de a$-car tambi'n compiten para la disponibilidad del cido D,7*dinitrosaliclico. Como consecuencia, la carbo+ymetil celulosa puede a#ectar la curva de calibracin alterando la intensidad del color desarrollado. Este es un m'todo conveniente y relativamente barato, aun ue su especi#icidad es relativamente ba&a. Cuando los e#ectos de compuestos e+tra(os no son conocidos, uno puede incluir e#ectivamente el llamado control interno para el desarrollo del color en muestras desconocidas; entonces, una cantidad conocida de a$-car se adiciona a esta muestra. El aumento en la absorbancia en el segundo desarrollo de color es e uivalente a la cantidad incrementada de a$-car. Altas concentraciones de protena inter#ieren en la determinacin de los a$-cares reductores. >tra de las venta&as de este m'todo es ue el color #inal desarrollado es estable hasta 2< horas, es sencillo y rpido. *! OBJETI+O: Aplicar una t'cnica sencilla, rpida y e#ica$ para determinar a$-cares reductores en caldos y medios de #ermentacin ue permitan conocer los rendimientos en sustrato y0o productos. ,! MATERIALES Y REACTI+OS: a) Ma$%'#a-%" 3ubos de ensayo tapa rosca ,ipetas de 6, 7 y 69 ml ,ipeteador automtico Au+iliar de pipeteo

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1atra$ a#orado de 6999 ml :rasco color mbar Espectro#otmetro Eorte+

b) R%ac$#.)" )olucin del cido D,7 dinitrosaliclico, 6B %

o o o o o

!/)% 69 g :enol% 2 g )ul#ito de sodio anhidro% 9.7 g =idr+ido de sodio% 69 g A#orar a 6 litro con Agua destilada

Conservar re#rigerado dentro del #rasco color mbar. )olucin estndar de glucosa % !isolver 6 gr. de glucosa anhidra en 6999 ml de agua destilada, conservar en re#rigeracin hasta el momento de usarla.

/! PROCEDIMIENTO:

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 Establecer una escala estndar de 9 a 6999 ppm. !entro de una serie de tubos de ensayo, previamente lavados y sumergidos en solucin de cido sul#-rico al 7B durante una noche, introducir% 9; 9.2; 9.<; 9.?; 9.A; y 6 ml de solucin estndar y completar a 6 ml con agua destilada. Elabore la siguiente tabla al momento de registrar los datos%
T3b) 6 2 D < 7 ? &-! (% "@2 %"$72(a' 9.9 9.2 9.< 9.? 9.A 6.9 &-! (% a63a (%"$#-a(a 6.9 9.A 9.? 9.< 9.2 9.9 C)2c%2$'ac#12 A#2a- <00&) 9 299 <99 ?99 A99 6999 Ab")'ba2c#a <4B4 2&) * * * * * *

La determinacin de a$-cares reductores es e#ectuada sobre 6 ml de la muestra convenientemente diluida. La curva estndar y las muestras su#ren las siguientes operaciones% Adicionar 6 ml del reactivo !/) Agitar #uertemente en un vorte+ ,oner a ebullicin durante 7 minutos En#riar rpidamente 4ba(o de hielo5 Adicionar A ml de agua destilada dentro de cada tubo Agitar #uertemente en un vorte+ Leer absorbancia a 7L7 nm.

4! CLCULOS Y CONSULTAS:

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 Mra#i ue la curva de calibracin 4Concentracin vs Absorbancia5 para la determinacin de a$-cares reductores con el m'todo del !/). 1uestre todos los resultados obtenidos. Calcule el valor de 82. Calcule la concentracin en a$-cares reductores 4Mlucosa5 de la muestra problema. Consulte otros m'todos utili$ados para la determinacin de a$-cares reductores y glucosa. HIu' venta&as y desventa&as presentan para su uso en biotecnologaJ AD+ERTENCIA! El reactivo !/) es altamente t+ico, cancergeno y abortivo. 1ucho cuidado al manipularlo. .sar siempre guantes de lte+.

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UNI+ERSIDAD DE ATLANTICO PROGRAMA DE INGENIERA DE AGROINDUSTRIAL BIOTECNOLOGA ALIMENTARIA EXPERIMENTO N , DETERMINACIN DE ETANOL POR EL M TODO DE CINNICD

1! INTRODUCCIN: La determinacin de la cantidad de etanol en los productos obtenidos a partir de la #ermentacin alcohlica es una de las principales preocupaciones del biotecnlogo; ya ue 'ste es un anlisis ue re uiere de una dotacin adecuada de e uipos de medicin o, por otro lado, de una cantidad considerable de volumen de muestra, como en el caso del m'todo de destilacin. El m'todo de Ninnic@ permite determinar ba&as concentraciones de alcohol etlico a trav's de la accin o+idante de la solucin 9.< / de dicromato de potasio en cido sul#-rico 69/, posterior valoracin con 3iosul#ato de sodio. )e diluye la muestra de #orma ue la cantidad de dicromato utili$ada sea su#iciente para o+idar todo el etanol, #ormando acetaldehdo; de otra manera debe repetirse la prueba usando una mayor dilucin de la muestra. El e+ceso de dicromato se elimina con yoduro de potasio, el volumen de 3iosul#ato de sodio gastado en titulacin se emplea para determinar el porcenta&e de etanol en la muestra teniendo en cuenta la respectiva dilucin. Las reacciones ue se mani#iestan en el proceso son%

2O2Cr2>L P A=2)>< P DC=?>

2Cr24)><5D P 2O2)>< P DC2=<>2 P 66=2>

O2Cr2>L P ?O" P L=2)><

Cr24)><5D P <O2)>< P L=2> P ?"

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2/a2)2>D P 2" *! OBJETI+O:

/a2)<>? P 2/a"

Aplicar una t'cnica rpida y sencilla para la determinacin de alcohol etlico en caldos de #ermentacin alcohlica ue pueda ser usado en determinaciones de velocidad de reaccin.

,! MATERIALES Y REACTI+OS: a) Ma$%'#a-%": 1icroburetas )oporte universal Erlenmeyers de 79 ml Balones a#orados de 279 y 799 ml ,ipetas de 6, 7 y 69 ml Balan$a Bea@ers Earillas de agitacin

b) R%ac$#.)": Qcido )ul#-rico 69 / !icromato de potasio 9.</ en =2)>< 69/ )olucin de Roduro de potasio D/ 4O"5 )olucin reactivo de almidn soluble 3iosul#ato de sodio 9.6 /P

/! PROCEDIMIENTO:

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a) P'%0a'ac#12 (% R%ac$#.)": QC"!> ).L:S8"C> 69/%

!isolver 6DA.F ml de = 2)>< 4densidad 6,A< gr0ml y F?B de pure$a5 con agua destilada hasta a#orar a 799 ml. A!EE83E/C"A T % )e presenta una reaccin altamente e+ot'rmica; por lo ue se debe baln sumergido en ba(o de agua con hielo. Al en#riarse la solucin, se produce una contraccin de volumen ue se debe corregir adicionando ms agua destilada hasta alcan$ar el volumen #inal. !"C8>1A3> !E ,>3A)"> 9.< / E/ =2)>< 69 /%

a(#c#)2a' -%2$a&%2$% %- 7c#() a- a63a 4nunca lo contrario5. =acer esto con el

,esar 6F.?6< gr. de !icromato de potasio previamente seco a 699GC durante <*? horas y disolverlo en el =2)>< 69 / hasta completar un volumen de 6999ml. )>L.C"U/ !E R>!.8> !E ,>3A)"> D /%

!isolver <F.A gr. !e yoduro de potasio 4O"5 en su#iciente agua destilada y a#orar en un baln de 699 ml. )>L.C"U/ 8EAC3"E> !E AL1"!U/ )>L.BLE%

,esar 6 gr. de almidn soluble. Eerter lentamente con agitacin constante en 299 ml de agua destilada hirviente. =ervir hasta obtener un l uido ligero y transl-cido. !e&ar decantar y usar -nicamente el l uido sobrenadante. En un recipiente limpio y bien tapado, esta solucin puede durar hasta dos meses. El reactivo es propenso a contaminarse con hongos. 3">).L:A3> !E )>!"> 9.6 /%

,reparar a partir de un stoc@ comercial para 6 L de solucin. Agradecimientos a la Universidad de Crdoba por el uso de este manual, lo mismo que sus autores DEIVIS LUJ ! "#E!ALS $ JAI"% SALCED% &E!D%'A

b) D%$%'&#2ac#12: 8eali$ar una curva patrn en tubos de ensayo con tapa ue contengan 7 ml. de las siguientes concentraciones% 9, 2, <, ?, A, 69, 62, 6<B de etanol. A 'stas diluciones y a la muestra se someten al siguiente proceso% 8eali$ar una dilucin 6%F 4muestra% agua5 para cada tubo. Adicionar e+actamente 6 ml de solucin de !icromato de potasio 9.< / en = 2)>< 69 / dentro de un erlenmeyer pe ue(o 429*79 ml5. Adicionar 2 ml de la solucin a estudiar !e&ar en reposo durante 7 minutos 3ranscurrido el tiempo, adicionar 6 ml de solucin de yoduro de potasio D/ y me$clar. Adicionar 2 gotas de solucin de reactivo de almidn soluble. 3itular con solucin volum'trica de 3iosul#ato de sodio 9.6 / con agitacin cuidadosa hasta obtener un cambio ntido hacia un color a$ul marino. 8estar el volumen de 3iosul#ato gastado por el blanco al momento de construir la curva de calibracin.

4! CLCULOS Y CONSULTAS: Mra#i ue la curva de calibracin para las diluciones de alcohol reali$adas. Calcule el valor 82 y muestre la ecuacin ue e+pli ue la curva. Calcule el porcenta&e de alcohol de la muestra problema utili$ando la curva de calibracin. Agradecimientos a la Universidad de Crdoba por el uso de este manual, lo mismo que sus autores DEIVIS LUJ ! "#E!ALS $ JAI"% SALCED% &E!D%'A

 Consulte otros m'todos para determinar alcohol etlico. E+pli ue las venta&as y desventa&as para su uso.

5! REEERENCIAS:

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