Presentacion Cromatografia Gases INSPECTORATE

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Contenido
1. Qu es cromatografa ? 2. Tipos de Cromatografa 3. Fundamentos de Cromatografa 4. Instrumentacin
4.1. Cromatgrafo de Gases 4.2. Suministro de Gases 4.3. Inyector 4.4. Horno 4.5. Columna 4.6. Detector 4.7. Registrador
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Contenido
5. Sistemas de Inyeccin
5.1. Tcnicas de Inyeccin
6. Preparacin de la Muestra 7. Aplicaciones Analticas 8. Bibliografa
1. Qu es Cromatografa
Proceso fsico-qumico de separacin de los componentes de una mezcla, el cual se basa en la diferencia de velocidades de migracin de cada componente, logrndose una distribucin diferencial entre dos fases: estacionaria y mvil.
Historia
M. TSWEET (1903): Separacin de mezclas de pigmentos vegetales en columnas rellenas con adsorbentes slidos y solventes variados. ter de petrleo
mezcla de pigmentos pigmentos separados
CaCO3
Cromatografia = kroma [color] + graph [grfica] (griego)

Historia
1940
CGS rudimentaria CGL propuesta (Martin e Synge) Separacin de cidos orgnicos por CGL: primer cromatgrafo (Martin e James)
1950
Primer equipo comercial (Griffin & George) Detector por Densidad de Gas (Martin e James) Detector por Ionizacin en llama (McWillian e Dewar) Detector por Captura de Electrones (Lovelock e Lipsky)
1960
Columnas Capilares (Golay)
Separacin por Columna

Disolvente puro (eluyente) AyB Banda Inicial con los solutos A y B A Empaquetado de la columna. Fase estacionaria suspendida en el disolvente (fase mvil)
Disco poroso B Disolvente saliendo de la columna (eluato) (a)

A Emerge (e)
Emerge (b) (c) (d)
2. Tipos de Cromatografa
(de acuerdo al procedimiento de separacin)
Cromatografa
2. Clasificacin Cromatografa de Gases
Mecanismos de Separacin
dsorcion Particin o reparto !ntercambio !nico "#clusion o filtracion molecular
Adsorcion
"quilibrios adsorcion ( desorcion $obre superficie activa de fase estacionaria y mvil.
"ficacia $eparacin
%ama&o y 'omogeneidad partculas
Particin o reparto
$olutos
Parcialmente solubles en la fase estacionaria y movil
)a separacin se da gracias a la solubilidad diferencial entre las dos fases equilibrios
, - Cs.Cm
Coeficiente Particin f*%+
Cs - Concentracin total soluto fase estacionaria Cm - Concentracin total soluto fase mvil
Intercambio Inico
/ecanismo competitivo entre la fase movil y la muestra ionizada,
$eparacion
por los sitios activos de la fase estacionaria *resina intercambiadora de iones+
Filtracin o Exclusin Molecular
0ase estacionaria
$eparacion de acuerdo tama&o y forma de

5eles con tama&o de poro definido "6. de#trano
las mol4culas de los compuestos, generalmente de P/.
0ase estacionaria contiene 123 o disolvente en espacios intersticiales

Mecanismos (1)
Cromatografa
dsorcion Cromatografa 7eparto
Mecanismos (2)
Cromatografa !ntercambio !nico

Cromatografa "#clusin /olecular
Fundamentos de Cromatografa
0actores que gobiernan la separacin de los constituyentes de una muestra:
Solubilidad Fase Estacionaria
Si es mayor este avanza mas lentamente por la columna
Volatilidad
A mayor presin de vapor ms rpidamente avanza por el sistema.
Caracteristicas de las Muestras para su Analisis Por GC
Voltiles o trmicamente vaporizables Estables a la temperatura de trabajo Compuestos de bajo peso molecular (< 300 D) Compuestos en sus formas no inicas Compuestos sin grupos que favorezcan la formacin de enlaces por puente de hidrgeno Compuestos derivatizables
Cromatograma
Lnea base, t retencin, ancho y alto de pico
Cuantificacin
%iempo de retencin Patrn
Comparar
%iempo de retencin Compuesto
Retencin K`
Cte. termodinmica que relaciona la interaccin del soluto con la fase mvil y estacionaria.
7etencin - ,8
,- 9:-9o. 9o
Selectividad ()
Es la relacin entre dos factores de capacidad de dos componentes
$electividad - ,2. ,: $electividad - 92-9o. 9:-9o

K2 = K1
V2 - V0 V1 - V0
Eficiencia de la Columna
La eficiencia esta relacionada con el numero de compuestos que pueden ser separados por la columna.
"ficiencia:
Capacidad de elucin con un mnimo de dispersin de analito.
Picos mas largos y menos intensos = menor detectabilidad
PLATOS N = 16
( )
t1 2 W1
Platos Tericos:
$ecciones iguales en la columna donde se establece un equilibrio entre el soluto y la fase estacionaria y la fase mvil.
;umero de platos
0*#+ - ) columna
"0!C!";C! <" ) C=)>/;

H - L/n
u - L/tm
Velocidad Lineal (u)
La velocidad lineal es la medida de rapidez con que el gas de arrastre o fase mvil pasa a travs de la columna, generalmente se expresa en cm/s.
Platos Tericos:
Ajuste del Caudal del gas portador

Velocidades lineales recomendadas para columnas de 30 m
Dimetro de la columna (mm) He 0.18 0.25 0.32 0.45 0.53
Velocidad Lineal (cm/s) H2 45-60 45-60 45-60 45-60 45-60
Caudal (ml/min) He 0.5-0.7 0.9-1.3 1.4-2.2 2.9-4.3 4.0-6.0 H2 0.7-0.9 1.3-1.8 2.2-2.9 4.3-5.7 6.0-7.9
30-45 30-45 30-45 30-45 30-45
Fuente: J&W Catalog, 96/97

Ecuacin de flujo AFC
Resolucin R
Mide el efecto combinado de la eficiencia de la columna y la eficiencia de la fase mvil.
V2 - V1 R=
(W2 + W1)
Resolucin Mnima
Factores que afectan la Resolucin
$electividad 0actor de separacin "ficiencia *;o. de platos tericos+ 0actor de Capacidad *7etencin+
a 1 k R = 1/ 4 N a 1+ k
( )
Fundamentos
Factores que Afectan las Separaciones en CG CG
Temperatura de la columna Velocidad del gas de arrastre Tipo de gas de arrastre Caractersticas columna Di metro interno Columna !spesor de pelcula "ase estacionaria Longitud de la Columna #aturale$a de las fases Cantidad muestra inyectada
HPLC
Modo de traba%o& "ase #'( "uer$a o poder de elucin Temperatura Caractersticas columna Longitud de la Columna Di metro interno Columna Tama)o de partcula #aturale$a de las fases Cantidad muestra inyectada
Fundamentos
Efecto de Temperatura de la columna (Horno)
Fundamentos
Efecto del Flujo de gas en la separacin cromatogrfica
di metro interno Columnas capilares
"lu%o recomendado
*.+, *..+ *.,. Columnas !mpacadas
-'+mL/min /'0mL/min -+'-,mL/min
.*mL/min
Fundamentos
Tipo de gas de arrastre
9elocidad )ineal optima
Fundamentos
Dimetro interno Vs. platos tericos
Entre menor sea el dimetro mayor la interaccin soluto-fase estacionaria Multiplicidad de caminos
Fundamentos
Espesor de la pelcula 0.25 um vs 0.32um
Fundamentos
Longitud de columna Vs. Resolucin
Entre mayor la longitud mayor interaccin del soluto con la fase estacionaria
4. Instrumentacin
4.1. Cromatgrafo de Gases 4.2. Suministro de Gases 4.3. Inyector 4.4. Horno 4.5. Columna 4.6. Detector 4.7. Registrador
4.1. Cromatgrafo de Gases
Componentes Bsicos de un Cromatgrafo de Gases

4.2. Suministro de Gases Gas Portador o de Arrastre:

!nerte lta Pureza "#ento de 1umedad =#geno 1idrocarburos
12, 1elio, ;2, /ezcla de gases * rgn-metano+ La eleccin depender de la naturaleza de la fase estacionaria, y de las caractersticas del detector utilizado
Gas Portador o Carrier:

"l sistema del gas portador, por lo general contiene uno o varios tamices con el ob6eto de eliminar 'umedad, 'idrocarburos y o#geno.
)os caudales utilizados en las columnas empacadas oscila entre 2? y @3 m).min y de : a 2 m).min en las capilares. Pureza
COSTO
%rampas
A = 99,995 % (4.5)
C B A
B = 99,999 % (5.0) C = 99,9999 % (6.0)
PUREZA
Gases Detector:
H2, Aire
Manoreductor
Medidor de Burbuja
4.3. Horno
Columna empacada
Columna Capilar
Resistencia elctrica, ventilador, sensor de temperatura
Isotermo Vs. Temperatura Programada
Isotermo
Temperatura Programada
Temperatura constante durante la separacin
Aumentar la temperatura de la columna durante la separacin Aumentar la presin de vapor de solutos, disminuyendo los tiempos de retencin
Mezcla alcanos lineales. Columna 6 m x 1,6 mm. Apiezon L
Isotermo 150C
Temperatura programada 50 - 250C a 8/min
Programa de Temperatura
Temperatura Programada
% columna
Compatible con la 0ase "stacionaria.
Aplicaciones: Petrleo, Aceites Esenciales, etc.: no analizables con T constante (T Isotrmica).
4.4. Columna
!nstrumento donde ocurre la separacin de la muestra en sus diferentes componentes.
Consiste de un espacio geom4trico o tubo el cual contiene la fase estacionaria inerte.
/ateriales "specficos
Caractersticas "speciales
Tipos de Columna
!mpa1uetada 2de relleno3
Fase estacionaria lquida, que forma una pelcula delgada sobre la superficie de un soporte slido inerte y finamente dividido (por ej. Chromosorb) Fase Estacionaria Slida, finamente particulada. Tubo: vidrio, metal (acero inoxidable), 2-4 m (L) x 2-4 mm ()
Columna Empacada Empacadas o rellenas
Soporte Slido - Caractersticas
Partculas porosas y uniformes *:3mm+, esf4ricas. )ibre de #idos catalticos *descomposicin parcial m.+ 0ase estable t4rmica y qumicamente. $uperficie especfica grande *: a 23 m2.g+. Auena resistencia mecnica 0acilidad mane6o para llenado.
Capilar (de tubo abierto)
Fase estacionaria es una pelcula de lquido que recubre el interior de un tubo capilar. Tubo: slice fundida cubierto de polimida 15-100 m (L) x 0.1-0.53 mm ()
Capilar (WCOT-PLOT)
W.C.O.T.
(Wall Coated Open Tubular)
P.L.O.T.
(Porous layer Open Tubular)
Capilar (SCOT-FSOT)
S.C.O.T. (Support
Coated Open Tubular)
Soporte slido dentro del cual esta un adsorbente Menor eficiencia
F.S.O.T. (Fused Silica Open Tubular)

Polmetro entrecruzado con la fase estacionaria pelcula liquida
Empacada Vs. Capilar
Capilares Vs. Empaquetadas
SKOOG,Douglas y LEARY,James. Anlisis Instrumental. 4 Edicin. McGraw-Hill. Espaa.1994

Comparacin Columnas Capilares Empaquetadas
Las columnas capilares tienen:

Mayor resolucin. Menor capacidad de muestra Mayor Sensibilidad Menor tiempo de anlisis
Factores que afectan la eficiencia de una columna

)ongitud de la Columna <imetro de la Columna %ama&o de las partculas del empaque ;aturaleza de las fases 5rosor de fase estacionaria %emperatura de la columna 9elocidad del gas portador Cantidad de muestra inyectada
Cuidados de las Columnas
Columnas nuevas
Requieren acondicionamiento con flujo de fase movil a cierta T y t determinado.
Columnas en uso
Requieren mantenimiento y limpieza constante. Almacenamiento
4.4.1. Fases Estacionarias
Slidas (adsorcin)
Slidas (Tamiz molecular)
Lquidas (Reparto)
Quirales
Caractersticas de las Fases Estacionarias para GC
1) Baja volatilidad (T de ebullicin 100C superior a la T de trabajo mximo de la columna) 2) Estabilidad trmica 3) Qumicamente inerte 4) Caractersticas de disolvente apropiado (Ky a)
Fases Estacionarias Slidas (adsorcin)
Almina (Oxido de Aluminio): Hidrocarburos ligeros, freones Carbn activado: Hidrocarburos, fenoles Gel de Slice (Oxido de Silicio): Anhdrido Carbnico Poliestireno Agua, amonaco, alcoholes
Caractersticas
$lidos con grandes reas superficiales *partculas finas, poros+ $olutos polares $lidos con grandes nBmero de sitios activos *'idro#ilos, pares de electrones...+
FE columna empacada (Cromosorb)
Cromosorb
%ierra de <iatomceas
secado calcinacin
Esqueletos fsiles (SiO2 + xidos metlicos) de algas microscpicas
fusin con soda lavado con cido silanizain
Chromosorb Anachrom Supelcoport
Fases Estacionarias Slidas (tamiz molecular)
Fases Estacionarias Lquidas (Reparto)
1) Polmeros Lquidos de Baja Volatilidad (T de ebullicin C T mxima de la columna) 2) Estabilidad Qumica 3) Qumicamente inertes 4) Propiedad de Solvente

Polmeros Lquidos de Baja Volatilidad, Estabilidad Qumica, Inertes, propiedad solvente, Teb > Tmax columna
Polidimetilsiloxano
Fase 1
Fase 5 Fase WAX
Eleccin de la Fase Estacionaria
Polaridad de Solutos
Ejemplos de Fases Estacionarias
SKOOG,Douglas y LEARY,James. Anlisis Instrumental. 4 Edicin. McGraw-Hill. Espaa.1994

Polaridad de Fases Estacionarias
Constantes de McReynolds: suma ndices de Kovats (1) de:
Benceno N - Butanol 2 - pentanona 1 - nitropropano Piridina
Indices de kovats
Fases Estacionarias Quirales
Separacin de Ismeros pticos
Fases Estacionarias Quirales

PRODUCTOS BIOLGICOS Distincin entre productos de Origen Sinttico y natural (natural = substancias opticamente puras; sinttico = mezclas racmicas). FRMACOS En muchos frmacos apenas algunos ismeros pticos tienen actividad farmacolgica.
Propiedades fsico-qumicas de ismeros pticos son MUY SIMILARES
FE convencionales no interactan diferencialmente con ismeros pticos
4plicacin $eparacin de %erpenos

1 - (+/-) -pineno 2 - sabineno 3 - (+/-) -pineno 4 - (+/-) limoneno
4.5. Detectores
Dispositivo a traves del cual circula la fase movil, a los cual responde el detector generando una senal electrica que varia cuando ocurre una variacion en la composicion de la fase movil.
DISEO
Medida de Propiedades Fisicoqumicas de los compuestos
Caractersticas Especiales
P7!/ 7! $: Respuesta Sensibilidad Cantidad Minima Detectable Linealidad Selectividad
Respuesta y Sensibilidad
7espuesta $ensibilidad
Cantidad Mnima Detectable

$ensibilidad y 7uido
Linealidad
(espuesta
Concentracin
Cada detector tiene una zona de linealidad diferente
Selectividad
Detectores Universales: Cualquier sustancia eluda Detectores Especificos: Sustancia con determinado elemento o grupo funcional Detectores Selectivos: Sustancias con determinada propiedad fisicoqumica
Caractersticas Especiales
$"C>;< 7! $: Simplicidad Costo Disponibilidad Durabilidad
4.5.1 Tipos de Detectores
Conductividad Termica Ionizacion de llama Captura electronica Ionizacion de llama alcalina Fotometrico de llama Emision atomica Espectrometro de masas
Detector de Conductividad Trmica (Katarometro) TCD TCD(Thermal Conductivity Detector)
Cambios en la composicion del gas modifica la eficacia con que el filamento disipa el calor, y por tanto su resistencia electrica
Detector de Conductividad Trmica

Circuito de puente de 56eatstone
)a se&al es la diferencia en resistencia $e&al - muestra - ref. lgunos picos son negativos *12+
A
Gas de muestra Registrador G
Gas de referencia
TCD
El calor se transfiere desde el filamento caliente cuando las molculas chocan con el filamento y rebotan con una mayor energa cintica. Ms colisiones llevan a una mayor prdida de calor por conduccin trmica. Mientras ms rpida sea molcula, ms colisiones habr. la
Filamento calentado
Mientras menor sea el peso molecular, ms rpida ser la molcula. La conductividad trmica disminuye con el aumento del peso molecular
TCD (Thermal Conductivity Detector)
Caractersticas
Universal Facil uso, durable Rango lineal amplio (105) No destructivo Identifica CO, CO2, N2 y H2O Poco sensible (400 pg/ml) Sensibilidad depende de: Tipo de gas portador Flujo de gas portador
Detector de Ionizacion a la Llama FID (Flame Ionization Detector)
Detector de Ionizacin en llama Electrodo Colector Ignicin de llama Voltaje Polarizante
Aire
Hidrgeno Columna
El Detector FID
Salida Gas al Exterior
La Formacin de Iones en la llama induce una intensidad de corriente elctrica
Ionizacin de Llama Ionizacion de llama - FID
- FID
Los atomos de carbono (excepto carbonilos y carboxilos) producen radicales CH, que + forman iones CHO
Caractersticas
Muchas aplicaciones (hidrocarburos) Rango lineal amplio (107) Destructivo Sensible (2 pg/ml) Usa fases moviles como He, Ar, N2 No es sensible a CO, CO2, N2 ni H2O Volumen pequeo de muestra (0.01 a 0.02 ul col. capilares)
Respuesta del FID La respuesta es proporcional al nm. de enlaces C-H

Butanol Etanol Metanol
H H C OH H Metanol
H C C OH H H Etanol
H H H H H C C C C OH H H H H Butanol
Respuesta del FID (2)
Etano C2H6
Etileno C2H4
Acetileno C2H2
La respuesta depende tambin de los tipos de enlaces que deben romperse
Detector de Captura Electronica ECD (Electron Capture Detector)
El gas portador se ioniza por el impacto de las partculas B Molculas con tomos electronegativos (halgenos) captan electrones Disminuye Ionizacin gas Portador seal elctrica
Detector de Captura Electronica ECD (Electron Capture Detector)
Caractersticas:
Aplicaciones:
Compuestos halogenados Rango (104) Sensible (2 fg/s) Fcil contaminacin Requiere alta precaucin
Plaguicidas organoclorados Hidrocarburos halogenados (halometanos, freones, clorofenoles)
)os picos negativos se invierten electrnicamente para parecer positivos ;=% : )egislacion !ngeominas
Detector de Ionizacin de Llama Alcalina

NP-FID (Nitrogen Phosphorous Ionization Detector)
La presencia de la perla alcalina (vidrio con Rb2SO4) sensibiliza el detector a los compuestos con N y/o P en la molcula
Aplicaciones: Plaguicidas (organofosforados, triazinas) Hidrocarburos halogenados (halometanos, freones, clorofenoles)
Detector Fotomtrico de Llama

FPD (Flame Photometric Detector)
Los compuestos con S, P, Sn en la molcula emiten radiacin en la llama
Aplicaciones: Plaguicidas organofosforados Compuestos Azufrados Organoestnicos

<etector destructivo que mide el cambio de color de la muestra usando filtros especificos para cada compuesto medido.
Detector de Emisin Atmica . AED (Atomic Emission Detector)
Los elementos se excitan en el plasma y emiten radiacin

Aplicaciones:
Organometlicos, Organoclorados
Detector Espectrmetro de Masas (MS)
* Relacin masa-carga (m/z) de molculas ionizadas. E La operacin general del espectrmetro de masas es:
a) crea iones en fase gaseosa ) separa los iones en ase a su relacin (m/z). c) mide la cantidad de iones de cada relacin (m/z).
!na "ez ionizadas las molculas# estas pasan al analizador de iones el cual los transporta $acia el detector.
$ttp://%%%.c$em."t.edu/c$em-ed/ms/ms-intro.$tml
Fuente de Ionizacin: La molcula se fragmenta en iones que son acelerados hacia el analizador de masas
Analizador de Masas: Discrimina los fragmentos en funcin de su valor m/z

Ionizacin Qumica
Ionizacin en presencia de un gas reactivo (CH4) El gas se ioniza y o los iones formados ionizan la molcula
Obtencin de la Masa Molecular

Espectro de Masas
!dentificacion: datos de multiples picos
20
40
60
80 - CO
100
120
m/Z
m/Z = 80
m/Z = 118
- (CO + H)
m/Z = 79
m/Z = 90
Detectores para GC
Detector &'( 01( 4'( 0P( Lmite de deteccin g )*-+-)*-, )*-)2 )*-). )*-)Rango lineal )*--)*. )*,-)*3 )*2-)*)*2 Comentarios (etector uni"ersal (etector uni"ersal (etector selecti"o (etector 5electi"o 5#P (etector 5electi"o /#P (etector uni"ersal Tratamiento soluto /o destructi"o (estructi"o /o destructi"o (estructi"o
/P(
)*-6-)*-).
)*+-)*3
(estructi"o
75(
)*-)2
5eg8n tipo detector
(estructi"o
Amplificador de seal
ANALGICO
REGISTRO DE SEAL
Registradores XY
DIGITAL
Integradores Computadores
4.7. Inyector
1-5 L, empacadas
0.005 mL, capilares
5. Sistemas de Inyeccin
Introduccin de un volumen adecuado de muestra. Volmenes pequeos para evitar sobresaturacin
Evaporar la muestra
Calentar Tinyector > Peb del componente menos voltil de la muestra
Microjeringas para inyeccin
GASES LQUIDOS
Capacidades tpicas: 1 ml Capacidades tpicas: 1 L, 5 L e 10 L
Microjeringa de 10 L:
mbolo aguja
cuerpo (pirex)
Inyector para Columnas Capilares
Glass-liner o inserto de vidrio:

Tubo de cuarzo silanizado que evita el contacto de la muestra con las paredes calientes del inyector Lana de vidrio
Lana de vidrio silanizada:

Para evitar que componentes no voltiles de la muestra lleguen a la columna Inserto de Vidrio
5.1. Tcnicas de Inyeccin

!nyeccin $plit *con divisin+ !nyeccin $plit *$in divisin+ !nyeccin =n-column *=C!+ !nyeccin 1eadspaces *"spacio de cabeza+ Purga y trampa /uestreo con vlvulas para lquidos o gases !nyeccin de grandes volBmenes *)9!-P%9+
Inyeccin con Divisin (split)
Inyeccin con Divisin (split)
"l venteo de division se abre. >nicamente una parte de la muestra se introduce a la columna. $e usa para concentraciones altas de la muestra /enor sensibilidad *parte de la muestra es e#pulsada a la atmsfera+ <ivisin de muestra es raramente uniforme *purga una fraccin con los constituyentes menos voltiles+ 6uste de razn de divisin conduce a fuente de errores
Inyeccin sin Divisin (splitless)
"l venteo de division se cierra Casi toda la muestra se introduce a la columna. $e usa para muestras con ba6as concentraciones de la muestra
Inyeccin en Columna (on column)

T del inyector por debajo del Punto de ebullicin del solvente y luego se programa controladamente para vaporizar la muestra en la columna.
Inyeccin en Columna (on column)

Se utiliza bsicamente para aquellos solutos que son termolbiles y para compuestos con altos y bajos puntos de ebullicin. La inyeccin se hace directamente en la columna manteniendo la temperatura inferior al punto de ebullicin del disolvente. La zona de inyeccin se refrigera con aire. Aumento brusco de temperatura despus de la inyeccin
Inyeccin On column (OCI)
Pros
Aueno para compuestos labiles y fragiles Auena tecnica cuantitativa %oda la muestra y el solvente se inyectan en la columna y alcanzan el detector "limina <iscriminacion
Contras
/atrices ;o-volatiles quedan en la columna %odo el solvente llega al detector causando un pico muy anc'o en el cromatograma "#ceso de volumen de inyeccion causa ensanc'amiento de picos
Inyeccin de Altos Volumenes
Septa Guia de la aguja Gas de arrastre Purga de Septa Venteo de Split
Inserto de Vidrio / Cuarzo
Acople Frula de grafito Columna Capilar
La Inyeccin es en el inserto. Puerto de inyeccin a baja temperatura. El split se puede abrir para ventear el solvente.
Inyeccin (LVI-PTV)
Pros
/atriz con altos puntos de ebullicion se quedan en el inserto y no en la columna "l solvente es venteado, disminuyendo el frente del solvente en el detector /as muestra puede ser inyectada que en el =C!, split splitless /e6ora los lmites de deteccin
Contras
$olo funciona si las diferencias entre los puntos de ebullicion del solvente y los analitos sea grande $i se inyecta demasiada muestra se observa ensanc'amiento de picos :?3 l es el volumen ma#imo recomendado
Espacio de Cabeza (HS, Head Space)
4gitacin
"st basada en el principio del equilibrio que alcanza un solvente voltil entre las fases lquida y gaseosa en un sistema cerrado.
Head Space
Coeficiente de Particin ,- Cs.Cg
PASO 1 Equilibrio de la muestra
PASO 2 Presurizacion
PASO 3 Extraccion de la muestra
Sistema de Inyeccin Espacio de Cabeza
Ventajas: Elimina interferencias matriz Reduce pico disolvente Mejora Sensibilidad Simplifica la preparacin de la muestra
Aplicacin: Analitos voltiles en muestras poco voltiles
Ejemplos: Etanol en sangre; voltiles en cerveza
Inconvenientes: Solo para analitos voltiles
Purga y Trampa (P&T, Purge and Trap)
Cromatgrafo HP 5890 serie II
Purga y Trampa
)os compuestos volatiles de aguas o suelos, se purgan de la muestra y son colectados en una trampa, )uego son desorbidos termicamente por bacFflus' en la columna del 5C
Sistema de Inyeccin Purga y Trampa
Ventajas: Elimina interferencias matriz Reduce pico disolvente Purga todo el analito Pre-concentracin Extremadamente sensible Anlisis de VOCs
Metodologia bien conocida, recomendada por EPA Metodos (524.2, 624, 8260)
Aplicacin: Analitos de trazas de analitos voltiles en muestras poco voltiles Compuestos con alto rango de punto de ebullicin Inconvenientes: Solo para analitos voltiles Costo Elevado Control crtico parmetros de operacin
Automuestreadores HTA
Modo Lquido - Jeringa de 10 L Modo Headspace - Jeringa de 2.5 ml. - Horno - Agitador
Automuestreadores HTA
T789 (4#:9 V9L;M!# 3.: ( :.3ml 3.2? ( 2.?ml *std+ 3.? ( ?.3ml 3.:2 ( :.2l 3.? ( ?l Point $tyle !<T7L9 8;#T9 D! 4:;=4 Point $tyle no. ? *side'ole+
1eadspaces mode
:.3ml 2.?ml ?.3ml :.2l ?l :3l 2?l :33l 2?3l
: - :3l *std+ 2.? - 2?l :3 - :33l 2? - 2?3l ?3 - ?33l

*standard+
)iquid mode
?33l
6. Preparacin de la Muestra
Extraccin - Lquido-Lquido - Extraccin en fase slida (SPE) - Supercrtica (FSC)
Limpieza (Clean-up) Concentracin Derivatizacin
Preparacin de la Muestra Extraccin Lquido - Lquido
Extraccin Lquido - Lquido
<isolucin acuosa *fase acuosa+ y otro disolvente inmiscible con el agua *fase orgnica+ con la ayuda de un embudo de decantacin. )a posicin relativa de ambas fases *arriba o aba6o+ depende de la relacin de densidades.
Los disolventes clorados como& G Cloroformo G Cloruro de metileno G Tetracloruro de carbono
Disolventes como& ter etlico Acetato de etilo Tolueno Benceno Hexano quedan siempre en la
capa superior.
quedan siempre en la
capa inferior.
Preparacin de la Muestra
Extraccin en Fase Slida (SPE)
Extraccin Con Fluido Supercrtico (FSC)
Extraccin Con Fluido Supercrtico
Propano, Autano, acetato de butilo, acetato de etilo, etanol, di#ido de carbono, acetona, prot#ido de nitrgeno,
Propiedades de <isolventes:
lta capacidad disolvente adems de selectiva ;o inflamable "levada pureza Aa6o precio Aa6a to#icidad ;o agresivo con el medio ambiente ;o ser corrosivo Condiciones crticas moderadas 5as en condiciones ambientales normales
Preparacin de la Muestra Limpieza (Clean Up)
El extracto se pasa por una columna rellena de: Florisil (silicato de magnesio) Gel de slice Almina
Se separan componentes de la muestra que dan interferencias
Picos en el cromatograma que solapan con los del analito
Preparacin de la Muestra Concentracin
Despus de la extraccin y limpieza la muestra suele quedar diluida El disolvente se elimina por evaporacin en vaco o mediante el paso de una corriente de nitrgeno
Rotavapor
Kudema - danish
Preparacin de la Muestra Derivatizacin
Modificar la molcula de los analitos mediante una reaccin qumica para facilitar el anlisis por cromatografa Compuesto
Acido carboxlico Alcohol Amina Carbonilo
Derivado
ster Metilsilil Metilsilil Oxima
En cromatografa de gases se forman derivados para aumentar volatilidad
Derivatizacin (1)
Derivatizacin (2)
7. Aplicaciones Analticas
ALIMENTOS
PETROQUMICA
TOXICOLGICO
Y FORENSE
FARMACOLGICO
MEDIO
AMBIENTE
ESENCIAS Y
PERFUMES
Aplicaciones APLICACIONES (1) ANALTICAS
Alimentos
Componentes voltiles de bebidas alcohlicas: cerveza, vinos, destilados
Aplicaciones APLICACIONES ANALTICAS
Alimentos
Anlisis de aceites vegetales (oliva, girasol, soja, almendra)
Aplicaciones APLICACIONES ANALTICAS
Alimentos
Anlisis de aceites vegetales (oliva, girasol, soja, almendra)
Aplicaciones (2)
Medio Ambiente
Anlisis de aguas, suelo, atmsfera, disolventes residuales
Aplicaciones (3)
Petroqumica
Anlisis de gasolinas, gasleos, gases de bombona, suelos, Hidrocarburos

No se puede mostrar la imagen en este momento.
Aplicaciones (4)
Esencias y Perfumes
No se puede mostrar la imagen en este momento.
Anlisis de colonias, perfumes, cosmticos
Aplicaciones APLICACIONES (5) ANALTICAS
Toxicolgico y Forense
Drogas de abuso, Dopantes, Determinacin de alcohol en sangre
Aplicaciones (6)
Anlisis de principios activos Estudios de perfil metablico Farmacolgico Monitorizacin de medicamentos para determinacin de dosis Anlisis de Impurezas Orgnicas Voltiles VOIs
Anlisis de Gasolina sin Plomo
Anlisis de 18 alcoholes por GC
Anlisis de Gases Inorgnicos
Anlisis de FAMEs
Anlisis de Narcticos
Anlisis de Hidrocarburos Halogenados I
Anlisis de Compuestos Voltiles de Azufre
Anlisis de Azufre en Propileno
Anlisis de Pesticidas Organoclorados I
Anlisis de n-parafina
Anlisis de Gas de Refineria I
Anlisis de Fragancias
Anlisis de n-parafina
8. Bibliografa
http://www.chem.vt.edu/chem-ed/ms/ms-intro.html http://www.uga.edu/srel/AACES/GCtutorial/page1.html http://www.shsu.edu/-chm tgc/sounds/sound.html http://en.wikipedia.org/wiki/Chromatography

Presentacion Cromatografia Gases INSPECTORATE

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6. Preparacin de la Muestra 7. Aplicaciones Analticas 8. Bibliografa

mezcla de pigmentos pigmentos separados

Cromatografia = kroma [color] + graph [grfica] (griego)

Columnas Capilares (Golay)

Separacin por Columna

Disco poroso B Disolvente saliendo de la columna (eluato) (a)

Emerge (b) (c) (d)

2. Clasificacin Cromatografa de Gases

dsorcion Particin o reparto !ntercambio !nico "#clusion o filtracion molecular

"quilibrios adsorcion ( desorcion $obre superficie activa de fase estacionaria y mvil.

%ama&o y 'omogeneidad partculas

Parcialmente solubles en la fase estacionaria y movil

)a separacin se da gracias a la solubilidad diferencial entre las dos fases equilibrios

Coeficiente Particin f*%+

/ecanismo competitivo entre la fase movil y la muestra ionizada,

por los sitios activos de la fase estacionaria *resina intercambiadora de iones+

Filtracin o Exclusin Molecular

$eparacion de acuerdo tama&o y forma de

las mol4culas de los compuestos, generalmente de P/.

0ase estacionaria contiene 123 o disolvente en espacios intersticiales

dsorcion Cromatografa 7eparto

Cromatografa !ntercambio !nico

Cromatografa "#clusin /olecular

Solubilidad Fase Estacionaria

Si es mayor este avanza mas lentamente por la columna

A mayor presin de vapor ms rpidamente avanza por el sistema.

Caracteristicas de las Muestras para su Analisis Por GC

Lnea base, t retencin, ancho y alto de pico

%iempo de retencin Patrn

%iempo de retencin Compuesto

$electividad - ,2. ,: $electividad - 92-9o. 9:-9o

Capacidad de elucin con un mnimo de dispersin de analito.

Picos mas largos y menos intensos = menor detectabilidad

"0!C!";C! <" ) C=)>/;

Velocidad Lineal (u)

Ajuste del Caudal del gas portador

Dimetro de la columna (mm) He 0.18 0.25 0.32 0.45 0.53

Velocidad Lineal (cm/s) H2 45-60 45-60 45-60 45-60 45-60

30-45 30-45 30-45 30-45 30-45

Fuente: J&W Catalog, 96/97

Ecuacin de flujo AFC

Factores que afectan la Resolucin

di metro interno Columnas capilares

*.+, *..+ *.,. Columnas !mpacadas

-'+mL/min /'0mL/min -+'-,mL/min

9elocidad )ineal optima

4.1. Cromatgrafo de Gases

Componentes Bsicos de un Cromatgrafo de Gases

4.2. Suministro de Gases Gas Portador o de Arrastre:

Gas Portador o Carrier:

B = 99,999 % (5.0) C = 99,9999 % (6.0)

Resistencia elctrica, ventilador, sensor de temperatura

Isotermo Vs. Temperatura Programada

Temperatura constante durante la separacin

Mezcla alcanos lineales. Columna 6 m x 1,6 mm. Apiezon L

Temperatura programada 50 - 250C a 8/min

Compatible con la 0ase "stacionaria.

Aplicaciones: Petrleo, Aceites Esenciales, etc.: no analizables con T constante (T Isotrmica).

Consiste de un espacio geom4trico o tubo el cual contiene la fase estacionaria inerte.

Columna Empacada Empacadas o rellenas

Soporte Slido - Caractersticas

Capilar (de tubo abierto)

(Wall Coated Open Tubular)

.+, ..+ *.,. Columnas !mpacadas