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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

Facultad de Qumica Laboratorio de Fisiologa

Prctica: Absorcin de Glucosa en el intestino delgado de rata


Fecha de realizacin: 16 DE ABRIL DE 2013 Grupo: 4 INTEGRANTES: Horario: Martes de 10:00 13:00hrs. Ciclo escolar: 2013-1

INTRODUCCIN El tracto gastrointestinal (GI), o tubo digestivo, es un tubo continuo que se extiende desde la boca gasta el ano. Entre los rganos se incluye la boca, la faringe, el esfago, el intestino delgado y el intestino grueso. La longitud del tracto GI medido de un cadver es aproximadamente de 9 metros. En el individuo vivo es mucho ms corto porque los msculos de las paredes de los rganos del tracto gastrointestinal tienen un tono basal permanente (contraccin sostenida).

Bsicamente, el aparato digestivo realiza seis procesos: 1. Ingestin. Este proceso implica la ingestin de los alimentos slidos y lquidos por la boca. 2. Secrecin. Cada da las clulas del tracto GI y los rganos digestivos secretan en total unos 7 litros de agua, cido, buffers (sustancias amortiguadoras) y enzimas hacia la luz (espacio interior) del tubo. 3. Mezcla y propulsin. Mediante la contraccin y la relajacin alternadas del musculo liso de las paredes del tracto GI, se mezclan el alimento y las secreciones y stos son propulsados hacia el ano. La capacidad del tracto GI de mezclar y transportar el material en toda su longitud se denomina motilidad. 4. Digestin. Procesos mecnicos y qumicos convierte a los alimentos ingeridos en molculas ms pequeas. En la digestin mecnica los dientes cortan y trituran los alimentos antes de la deglucin, y luego el msculo liso del estmago y el intestino delgado se encargan de mezclarlos. De manera, las molculas se disuelven y se mezclan completamente con las enzimas digestivas. En digestin qumica, grandes molculas de hidratos de carbono, lpidos, protenas y cidos nucledos de los alimentos se dividen en molculas ms pequeas por hidrlisis. Las enzimas digestivas producidas por las glndulas salivales, la lengua, el estomago, el pncreas y el intestino delgado catalizan esas reacciones catablicas. Pocas sustancias pueden absorberse sin digestin qumica. stas comprenden las vitaminas, iones colesterol y agua. 5. Absorcin. El ingreso de los lquidos secretados, los iones y los productos de la digestin en las clulas epiteliales que revisten la luz del tracto GI se llama absorcin. Estas sustancias absorbidas pasan a la circulacin sangunea o linftica y llegan a las clulas de todo el organismo. 6. Defecacin. Los residuos, las sustancias indigeribles, las bacterias, las clulas descamadas del revestimiento GI y los materiales digeridos pero no adsorbidos en su trayecto por el tubo digestivo abandonan el cuerpo a travs del ano ene le proceso de defecacin. El material eliminado constituye la materia fecal o heces. (Tortora, 2010). Capas del tubo digestivo. El tubo digestivo desde el esfago hasta el conducto anal est formado por cuatro capas, o tnicas. Las cuatro tnicas, de dentro a fuera, son: mucosa, submucosa, muscular y serosa. La mucosa, reviste la luz del tubo digestivo, es la capa de absorcin y la principal capa secretora. Consta de un epitelio cilndrico simple sustentado por la lmina propia, una capa fina de tejido conjuntivo areolar que contiene numerosos ndulos linfticos, importantes en la proteccin contra la enfermedad. Por fuera de la lmina propia existe una capa fina de msculo liso. Capa muscular responsable de los numerosos pliegues pequeos que tienen determinadas zonas del tubo digestivo. Estos pliegues aumentan la superficie de la absorcin. Existen clulas caliciformes especializadas que segregan moco a lo largo de la mayor parte del tubo digestivo. La submucosa relativamente gruesa es una capa de tejido conjuntivo muy vascularizada que sustenta la mucosa. Las molculas absorbidas que atraviesan las clulas de epitelio cilndrico de la mucosa penetran en los vasos sanguneos y linfticos de la submucosa. Adems de los vasos sanguneos, la submucosa contiene glndulas y plexos nerviosos. El plexo submucoso (plexo de Meissner) proporciona la inervacin autnoma de la muscular de la mucosa. La muscular es la responsable de las contracciones segmentarias y de los movimientos peristlticos a lo largo del tubo digestivo. La muscular posee una capa circular interna y una capa longitudinal externa de msculo liso. Las contracciones de estas capas desplazan el aliento a lo largo del tubo y pulverizan y mezclan fsicamente el alimento con las enzimas digestivas. El plexo mientrico situado entre las dos capas musculares, proporciona la principal inervacin del tubo digestivo. Comprende fibras y ganglios de las divisiones simpticas y parasimpticas del sistema nervioso autnomo.

La serosa externa completa externa completa la pared del tubo digestivo. Se trata de una capa de unin y proteccin que consta de tejido conjuntivo areolar revestido de una capa simple de epitelio escamoso. El nervio vago es la fuente de la actividad parasimptica del esfago, estmago, pncreas, vescula biliar, intestino delgado, y parte superior del intestino grueso. El plexo submucoso y el plexo mientrico son los lugares donde hacen sinapsis las fibras preganglionares parasimpticas con neuronas posglanglionares que inervan el msculo liso del tubo digestivo. La regulacin autnoma, que es intrnseca al tubo digestivo, se superpone a formas de regulacin intrnsecas. El tubo digestivo contiene neuronas sensitivas intrnsecas que tienen sus cuerpos celulares en la pared del tubo y que no forman parte del sistema nervioso autnomo. La regulacin por el sistema nervioso entrico complementa a la regulacin paracrina mediante molculas que actan de forma local sobre los tejidos del tubo digestivo, as como la regulacin hormonal que llevan a cabo hormonas secretadas por la mucosa. (Fox, 2008) El paso de estos nutrientes digeridos desde el tubo digestivo hacia la sangre o la linfa se denomina absorcin. La absorcin de los materiales se produce por difusin, difusin facilitada, osmosis y transporte activo. Alrededor de 90% de toda la absorcin de nutrientes se cumple en el intestino delgado; el 10% restante tiene lugar en el estmago y el intestino grueso. El material no digerido o no absorbido pasa al intestino grueso. Absorcin de monosacridos. Todos los hidratos de carbono se absorben como monosacridos. La capacidad del intestino delgado de absorber monosacridos es enorme: se estima en 120 gramos por hora. Como resultado, todos los hidratos de carbono de la dieta digeridos normalmente se absorben, excepto la clula indigerible y las fibras en las heces. Los monosacridos pasan la luz del intestino a travs de la membrana apical por difusin facilitada o transporte activo. La fructosa, un monosacrido que se encuentra en las frutas, es transportada por difusin facilitada; la glucosa y la galactosa pasan a travs de las clulas absortivas de las vellosidades por transporte activo secundario que est acoplado al transporte activo de Na+. El transportador tiene sitios de unin para una molcula de glucosa y dos iones sodio; a menos que los tres espacios estn ocupados, ninguna sustancia se transporta. Los monosacridos se movilizan luego hacia afuera de la clula absortiva a travs de la superficie basolateral por difusin facilitada y entran los capilares de la vellosidad (fig. 1). (Tortora, 2010).

Fig 1. Absorcin de los nutrientes digeridos en el intestino delgado.

OBJETIVOS Verificar el transporte de glucosa a travs de intestino delgado de la rata. Demostrar de qu manera influyen la oxigenacin y la temperatura en la absorcin intestinal de la glucosa Determinar el efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorcin intestinal de glucosa.

METODOLOGA Se sacrific a una rata por medio de administracin de pentobarbital seguida de una traseccin de la mdula espinal. Se abri el abdomen mediante una incisin en la lnea media abdominal. Una vez localizado el intestino delgado, se extrajo desde su primera porcin cortando sus uniones, ploro duodenal e leo-cecal, y se coloc en una caja Petri que contena una solucin de tyroide fra y aeracin. Masa de la rata; 273g Dosis mxima permitida 32 mg/kg Concentracin del pentobarbital 6.3g/100mL 1 32 1 100 = 0.138 1000 1000 6.3

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A. EXPERIMENTO CONTROL Se coloc el saco intestinal en la cmara y se llen con una solucin Tyrode a 37C, con una cnula acoplada en una jeringa o pipeta Pasteur, se observ que el saco no present fugas y se sumergi en la solucin Tyrode con glucosa al 2% a 37C. Tanto la solucin interior como la exterior no sobrepasaron el borde superior del saco atado al tubo y se conect el sistema de aeracin. Para llevar a cabo la inmersin de los segmentos intestinales se at el extremo del intestino y se impuls el extremo obstruido hacia el extremo que estaba abierto, deslizndolo por el tubo, se at el extremo que sobro con un hilo de manera que quedo obstruido completamente, la mucosa del intestino qued por fuera y los cabos del hilo de los extremos atados quedaron por dentro. Se realiz lo mismo con los otros 2 trozos de intestino. B. EFECTO DE LA OXIGENACIN EN EL PASO DE LA GLUCOSA A TRAVS DE LA MUCOSA INTESTINAL Se coloc el saco intestinal en la cmara y se llen con una solucin Tyrode sin glucosa a 37C, se observar que el saco no present fugas y se sumergi en la solucin Tyrode con glucosa al 2% a 37C, se tap el conducto de aeracin y se repiti lo efectuado en la toma de muestra. Toma de muestra Se tom una muestra del tiempo cero tanto en la solucin exterior como en la del interior del saco, para esto se utiliz una cnula con una jeringa o una pipeta Pasteur. Con las tiras reactivas se determin la concentracin de la glucosa en las muestras, cada 15min se midi la concentracin de la glucosa pero solo en el interior del saco, hasta que se lograron 4 mediciones, en la ltima medicin, tambin se midi la concentracin del exterior del saco. C. EFECTO DEL 2-4 DINITROFENOL EN LA ABSORCIN INTESTINAL DE LA GLUCOSA Se coloc el saco intestinal en la cmara de rganos y se llen con una solucin Tyrode sin glucosa a 37C, se observ que el saco no present fugas y se sumergi en la solucin Tyrode con glucosa al 2% y con 2-4 dinitrofenol, se midi la concentracin de glucosa en el tiempo cero dentro y fuera del saco igual que los experimentos realizados anteriormente, 4 mediciones cada 15 minutos y se verific que la aeracin y temperatura se mantuvieran constantes. RESULTADOS Muestra: A. Experimento Control. B. Ausencia de oxgeno. C. Con 2,4-dinitrofenol.

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Concentracin de glucosa vs tiempo


1 1 1 0.5 1 0.25 0.1 0.25 15 30 0.5 0.5 0.5 45 1 60 75 2 2 2 C B A

Concentracin %

4 3 2 1 0 0 0

Tiempo (min)
Grfica 1. Concentracin vs. Medicin (tiempo)

ANLISIS DE RESULTADOS En las mediciones al tiempo cero y al tiempo setenta y cinco sealadas en la tabla 1se tom la concentracin dentro y fuera del saco intestinal; en los tres tiempos restantes, nicamente se midi la concentracin al interior del saco. Se tom como referencia dos unidades de medicin una en % y otra en mg/dl. En la grfica 1 se observa la concentracin en funcin del nmero de medicin, al interior del saco, de acuerdo a la tabla anterior (tabla 2) para cada una de las tres muestras.

DISCUSIN DE RESULTADOS. Experimento control: como se observa en la tabla la concentracin inicial del exterior del saco es de 2% y en el interior del 0%, conforme se van tomando las muestras del interior se observ un aumento de la concentracin al interior del saco y esto se debe a que una vez volteado el saco queda expuesta la luz del intestino y por lo tanto los enterocitos de la rata, estos presentan

protenas llamadas SGLT1 las cuales transportan la glucosa de la luz del intestino al interior del enterocito mediante un transporte acoplado de Na+-Glucosa denominado simport , esta protena aprovecha el ingreso de sodio a favor del gradiente electroqumico (el cual depende de las concentraciones de sodio fuera del enterocito y de la diferencia de cargas), entre el exterior y el interior de la clula, para transportar la glucosa en contra de un gradiente qumico aumentando la concentracin del interior del enterocito sin importar que la concentracin de glucosa sean mayor dentro del enterocito que fuera de l, es por ello que este tipo de transporte es considerado como activo. Una vez dentro del enterocito la glucosa sale con ayuda de la protena GLUT2 (localizada en la membrana basolateral), la cual no es acoplada ni presenta un transporte activo sino uno pasivo de difusin facilitada impulsado por el gradiente de concentracin, como la concentracin dentro de la enterocito es mayor se dirige al exterior celular; como la concentracin de sodio al interior del enterocito tambin aumenta se encuentran bombas sodio-potasio (protenas integrales) sobre la membrana basolateral las cuales son impulsadas por la hidrolisis de ATP para transportar iones sodio que al ser liberado permiten que se acoplen dos iones potasio los cuales viajan al interior, todo ello contribuye a mantener el potencial de membrana y evitar un desequilibrio osmtico. (Alberts, 2006) Tanto el sodio y el potasio se encontraban en la solucin Tyrode ya que estaban disociados en disolucin acuosa. Efecto de la ausencia de Oxgeno, se observ que aumenta la concentracin pero de manera muy lenta y solo al 1% de glucosa; tericamente el 90% de ATP total creado con el metabolismo de la glucosa se forma durante la posterior oxidacin de tomos de hidrogeno liberados durante la glucolisis aerobia, durante la secuencia de reacciones oxidativas se liberan enormes cantidades de energa para formar ATP, esta sntesis recibe el nombre de fosforilacin oxidativa y se produce en la mitocondria; en ocasiones no se dispone de oxigeno o es insuficiente para la fosforilacin oxidativa. Sin embargo, aun en estas condiciones, todava se libera una pequea cantidad de energa a la clula mediante glucolisis anaerobia, porque las reacciones qumicas que descomponen glucosa en acido pirvico no necesitan de oxigeno. En este proceso se derrocha mucha glucosa, pues se utilizan 24 000 caloras para la sntesis de ATP por molcula de glucosa metabolizada, esta liberacin glucoltica para las clulas, se llama energa anaerbica y puede salvar la vida de la clula por unos minutos si no se dispone de oxigeno; es por esta razn que hay un aumento de la concentracin de glucosa al interior del saco intestinal pues se obtiene ATP del acido pirvico pero solo por un intervalo de tiempo hasta que la clula muere. (Guyton, 2006) Como se observa en la tabla el tercer frasco en presencia del 2,4 dinitrofenol present cambio en la concentracin mantenindose en 0.25% de glucosa en el interior del saco, durante todo el experimento; ello tiene dos explicaciones: 1) Que tal vez hubo uno fuga que permitiera el paso de glucosa al interior y 2) Que se transport glucosa por diferencia de concentracin (difusin simple) al interior del saco y se mantuvo constante ya que el 2,4 dinitrofenol actu. Esto se menciona ya que tericamente no debi haber cambio debido al efecto del 2,4 dinitrofenol que se basa en un aumento en la conduccin de electrones a lo largo de la cadena respiratoria pero sin incremento en la sntesis de ATP, esto es producido porque esta sustancia perfora la membrana interna de la mitocondria por lo que el gradiente de protones se anula, al no haber gradiente de protones, no se fosforila ATP; este mecanismo rompe la relacin entre la cadena respiratoria y la fosforilacin oxidativa lo cual disminuye el gradiente elctrico y tambin el qumico del medio intracelular evitando que el sistema se establezca.(Jaime Fornaguera, 2004) Como no se produce ATP existen dos razones que pueden justificar que la concentracin dentro del saco se haya mantenido constante:

Que al no haber ATP la protena SGLT1, el cual es un transporte secundario que necesita de la energa liberada de la hidrolisis de ATP, no tenga la suficiente energa para transportar la glucosa an con el apoyo del gradiente de Na+ hacia el interior del enterocito. Que como el gradiente elctrico en la mitocondria ha disminuido por la fuga de protones no se lleve a cabo la fosforilacin oxidativo an en presencia de oxigeno y junto con el bajo gradiente qumico que pudiese existir de sodio (concentracin) en el interior del enterocito eviten la entrada de glucosa y por lo tanto su salida hacia el saco intestinal.

CONCLUSIN Se analizaron tres segmentos de intestino delgado de una rata expuestos a distintas condiciones a una temperatura constante en los tres casos, con esto podemos concluir que la absorcin de glucosa se ve afectada por la exposicin de oxigeno ya que la absorcin se lleva a cabo de manera correcta gracias al Na+ y las protenas SGLT1 Y GLUT2; por la privacin de oxgeno debido a que disminuye el transporte de glucosa por disminucin en la sntesis de ATP hasta que la clula muere y por el 2-4 dinitrofenol que provoca una inhibicin en la produccin de ATP y por lo tanto cese en el transporte activo. De manera general podemos decir que el transporte de glucosa depende de manera directa del ATP, de la presencia de Sodio/Potasio y de las protenas SGLT1 Y GLUT2. BIBLIOGRAFA Fox, Stuart. Fisiologa Humana, Editorial Mcgraw- Hill, Espaa 1a edicin 2003, pp.140
Thomas J. Sernka, Eugene D. Jacobson. Fundamentos de Fisiologa Gastrointestinal editorial reverte. pp.116-120, Alberts Bruce, Alexander Jonhson, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts y James D. Watson. Molecular Biology of the Cell, Editorial Garland Science, 5Ed 2008, pp 612-613. Guyton, Arthur C. y John E. Hall. Tratado de Fisiologa Mdica. Ed. Elsevier. 11edicin. 2006, pp 833836 Fornaguera Jaime, Gmez Georgina, Bioqumica, Editorial Universidad Estatal a distancia, 1Ed, 2004, pp 25 Nelson L. David, Cox M. Michael, LEHNINGER PRINCIPLES OF BIOCHEMISTRY, Editorial W.H. Freema and Company, 5 Ed, 2008, pp 403-404