UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE INGENIERIA INGENIERIA QUIMICA

Laboratorio de Anlisis Instrumental

ASIGNATURA: ANALISIS INSTRUMENTAL

Profesora: Aura Marina GONZALEZ MERIDA - VENEZUELA Septiembre 2005

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE INGENIERIA INGENIERIA QUIMICA 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. REGLAS GENERALES PARA EL LABORATORIO Es condicin indispensable para entrar en una prctica, vestir bata larga con mangas largas. Se exige puntualidad en la hora fijada para el comienzo de la prctica se realiza un exmen previo (quiz antes de la prctica). De no hacerlo no podr realizar la prctica. Los estudiantes cumplirn estrictamente con las normas de seguridad en el laboratorio (NO FUMAR, no comer etc) Procure leer cuidadosamente el contenido de la prctica y la bibliogragfa que corresponde antes de entrar en el Laboratorio. Est siempre seguro de lo que va a hacer. Todo alumno debe traer la gua de prctica, bolgrafo y un cuaderno de laboratorio, en algunas prcticas hojas de papel milimetrado, calculadora. Acostmbrese a seguir las instrucciones de la Gua de Prcticas. No pregunte a sus compaeros. Ante cualquier duda consulte al Profesor o al personal tcnico. En el transcurso de la prctica no se permitir la salida del laboratorio sino por motivos especiales, y previa autorizacin del profesor. No deje sobre la mesa del laboratorio las prendas personales y los libros. Ello quita espacio para trabajar y pueden estropearse con los reactivos. Slo deben estar sobre la mesa los materiales que se estn usando. Los reactivos sacados del frasco y que no se hayan usado, no deben verterse de nuevo en aquellos, puesto que todo el contenido puede contaminarse. Por consiguiente, las cantidades de reactivos que se saquen deben ser las necesarias para no malgastarlas.

9.

10. Lave el material y los aparatos de su equipo tan pronto termine de usarlos. En la mayora de los casos, el material puede limpiarse con mayor facilidad, inmediatamente despues de su uso. 11. No use nunca una sustancia sin estar seguro que es la indicada en la prctica, evite accidentes. 12. Las materias slidas inservibles, como fsforos, papel de filtro, etc., y los reactivos insolubles en agua, deben depositarse en un recipiente adecuado, y, en ningn caso, en el canal de desague. 13. No tire las toallas y fosfros usados al piso ni al canal de desague, use el basurero. 14. Cuando opere cons sustancias inflamables es necesario siempre, antes de abrir el frasco, de que no haya llamas prximas. Los mecheros que no se estn usando deben apagarse. En caso de heridas, quemaduras, etc., informe inmediatamente a su profesor. 16. Al terminar la prctica de laboratorio, la mesa debe quedar limpia, las llaves del agua y del gas deben dejarse cerradas.

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PRACTICA N 1 TITULACIONES POTENCIOMETRICAS DE NEUTRALIZACION En esta experiencia se va a titular: 1.Acido clorhdrico con Hidrxido de sodio 2.Acido actico con NaOH 0.1M 3.Acido fosfrico con NaOH 0.1M APARATOS Instrumento para la medicin del pH equipado con electrodos de vidrio y calomel. Motor para agitacin y barra magntica. Dos vasos de precipitado de 250 ml Bureta de 50 ml Pipeta de 25 ml Cilindros graduados de 100 o 50 ml. SOLUCIONES Solucin de NaOH 0.1M. Solucin tampn pH 4 7, soluciones problemas. PROCEDIMIENTO Encienda el aparato y djelo calentarse 15 minutos. Use la solucin tampn para calibrar el instrumento. Enjuague los electrodos con agua destilada. Tome una alcuota de 25 ml de la muestra problema de cido clorhdrico y diluya con agua destilada hasta 100 ml en un vaso de 250 ml. Introduzca los electrodos de tal forma que no toquen el fondo ni los lados del vaso, ni se rocen entre s. Coloque la barra magntica de agitacin en tal forma que no toque los electrodos. Agite la muestra y anote el pH de la solucin antes de aadir solucin de hidrxido de sodio. Las primeras adiciones de NaOH 0.1M pueden ser de 3 4 ml. Las lecturas se toman despus de cada adicin. Cuando el pH empieza a cambiar apreciablemente debe disminuirse el volumen aadido de NaOH 0.1M. En la proximidad de los puntos de equivalencia se deben hacer adiciones de no ms de una o dos gotas. Se debe continuar la titulacin hasta alcanzar un pH de 11. Si es necesario con el objeto de comprobar sus resultados repita la titulacin. Titule luego la solucin de cido actico. Haga un grfico de pH vs ml de hidrxido, aadidos determine el punto de equivalencia en cada caso y calcule la concentracin de HCl y cido actico. A partir de los datos obtenidos, calcule la constante de disociacin Ka para el cido actico. Titule luego la solucin de cido fosfrico 0.1M, haga el grfico de pH vs ml de NaOH. Calcule K1, K2 y K3. Comparar los valores encontrados con los valores que traen los libros y discuta las causas de cualquier discrepancia. NOTA: El estudiante debe conocer el rango de uso de los indicadores. EL estudiante debe traer papel milimetrado o una calculadora que grafique, as como papel carbon o fotocopiar los datos.

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PRACTICA N 2 CONDUCTIMETRIA APARATOS Conductmetro provisto de celda 2 vasos de precipitados de 250 ml 1 cilindro graduado de 25 ml SOLUCIONES NaOH 1N, AgNO3 0.1 N NaOH 0.1 N NH4OH 0.5 N MUESTRAS "HCl", "AcOH-1", "AcOH-2", "NaCl" en balones aforados. Ponga en funcionamiento el conductmetro colocando la celda en un vaso con agua destilada. A manera de prctica mida la conductancia del agua destilada y del agua del chorro. 1.TITULACION DE UN ACIDO FUERTE: Transfiera con pipeta volumtrica a un vaso de 250 ml, 25 ml de la muestra marcada "HCl" y diluya hasta 150 ml de agua destilada, introduzca la celda y mida la conductancia. Titule con NaOH 0.1 N en incrementos de 0.5 ml midiendo la conductancia despus de haber mezclado completamente la solucin para lo que es conveniente agitar con agitador magntico. Dibuje un grfico de L vs volumen gastado y calcule la normalidad de la solucin problema. 2.TITULACION DE UN ACIDO NO COMPLETAMENTE IONIZADO: Transfiera 25 ml de la muestra, con pipeta volumtrica, de la muestra marcada Ac-OH-1 (Acido actico) al vaso de 250 ml y diluya con agua hasta 150 ml mida la conductancia y titule con NaOH 1N. Dibuje un grfico de L vs volumen gastado de NaOH. Calcule la concentracin del cido actico en la muestra. Transfiera 25 ml de la muestra AcOH-2 y diluya a 150 ml con agua, titule con NaOH 0.1 N. Dibuje un grfico de L vs volumen de NaOH gastado y calcule la concentracin de la muestra. Tome nuevamente 25 ml de la muestra AcOH-2 diluya a 150 ml con H2O destilada y titule con NH4OH 0.5 N. Dibuje un grfico de L vs volumen de NH4OH gastado y calcule la concentracin de la muestra. Discuta el aspecto de los tres grficos y proponga cul es el mejor mtodo para titular el cido actico. Calcule el error por dilucin en cada una de las titulaciones anteriores cuando se han aadido 5 ml de solucin titulante. Dibuje la curva que usted esperara para la titulacin conductimtrica de una mezcla de cido actico y cido clorhdrico con amonaco. UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE INGENIERIA INGENIERIA QUIMICA

PRACTICA N 3 ESPECTRO DE ABSORCION Y MANEJO DE UN

ESPECTROFOTOMETRO SENCILLO EQUIPOS Espectrofotmetro JR III de Coleman, Spectrofotmetro (Spectronic 20). Analgico. Milton Roy Company. Spectrofotmetro (Spectronic 20D+). Digital. Milton Roy Company. Spectrofotmetro (Genesys 5). Digital. Milton Roy Company. MATERIAL: Cubetas: 2. 4 Frascos volumtricos de 25 ml y pipetas de 1, 2, 5, 10, 20 y 25 ml solucin patrn: Nitrato de Cromo (III), 0.0500M y solucin problema. Manejo de las Cubetas Se usan dos cubetas simultneamente, una para la solucin "blanco" y la otra para la "Muestra". Se debe siempre seguir el siguiente procedimiento. 1) 2) 3) 4) 5) No se deben tomar las cubetas por la parte inferior, o sea la parte que es atravesada por el rayo de luz. Las cubetas se deben enjuagar siempre varias veces con la solucin a medir antes de efectuar una solucin. Limpie cualquier humedad o suciedad en el exterior de la cubeta con un papel absorbente limpio, antes de colocar la cubeta en el instrumento. Observar que no haya burbujas en las paredes interiores de las cubetas. Cuando se coloque la cubeta en el instrumento evite rayarla Use una de las cubetas siempre para el "blanco" y la otra para las varias muestras que se vayan a medir. Mrquelas con B (blanco) y M (muestra).

Operacin y respuesta del Espectrofotmetro Esta explicacin esta diseada para el coleman Junior, Por favor si tiene otro equipo adaptese al mismo, utilizando el manual o atendiendo la s instrucciones del personal tcnico. Encienda el aparato. Ponga el botn selector en VIS. Ajuste el amplificador hasta que la aguja indique 0% T y deje que el instrumento se caliente 15 minutos. Entretanto prepare una solucin 0.02M de Cr (III) a partir de la solucin patrn. Luego que el instrumento se ha calentado pngalo a cero nuevamente si es necesario. Tape la parte superior del compartimiento de cubetas: para evitar errores en el ajuste. Ponga agua destilada en una de las cubetas: gire el botn de control de la luz hacia la izquierda para que disminuya la cantidad de luz que llega al fototubo. Coloque la cubeta llena de agua en el compartimiento de muestra. Grade la longitud de onda en 600 nm, gire el control de la luz hacia la derecha hasta que la aguja registre 90% T. (de 600 nm). Ajuste la luz hasta que la escala de %T lea 100, a esta longitud de onda. Entonces sin reajustar el botn del amplificador o el botn de control de la luz, recorra todo el espectro leyendo el %T a las siguientes longitudes de onda: 375, 400, 425, 450, 475, 500, 512, 525, 550, 575, 600, 612 y 625 nm. Esto nos dar la respuesta relativa del instrumento. Coloque ahora en el compartimiento de muestras, la cubeta con un pedazo de papel blanco, para observar los colores del espectro. Rote la cubeta hasta que el haz de luz incida sobre la superficie del papel. Observe y anote el color de la luz cada 50 nm. Ser necesario girar el control de la intensidad de luz y evite en lo posible que la aguja se salga de la escala. Espectro de Absorcin de una Solucin de Cr(NO)3 Determine el espectro de absorcin de la sal de cromo (III), con una concentracin de 0.02M en la forma siguiente: Ajuste la longitud de onda a 375 nm. Ajuste el instrumento para que lea 0% T cuando no hay cubetas y 100% T cuando la cubeta llena de agua est en el compartimiento de muestras. Llene la otra cubeta con la solucin de Cr(III). Lea el %T de la solucin. Vuelva a reajustar el 0% y 100% y vuelva a leer el %T de la muestra.

Antes de cambiar a otra longitud de onda, gire el botn del control de la luz hacia la izquierda. Ajuste la longitud de onda a 400 nm. Reajuste el 0% T y 100% T con el blanco (agua destilada). Coloque nuevamente la solucin de Cr(III) en el compartimiento de muestras y lea el %T. Repita hasta que est satisfecho con su medicin. Contine este procedimiento a 405, 415, 425, 440, 455, 470, 490, 500, 520, 530, 540, 550, 570, 575, 580, 600 625 nm vace y lave las cubetas con agua. SEGUNDA PARTE: LEY DE BEER Los grficos de absorbancia en funcin de la concentracin %T vs concentracin se conocen como grficos de la ley de Beer. Se preparan midiendo la luz absorbida por una solucin a diferente concentraciones. Se usa le misma celda y la misma longitud de onda. Si se obtiene una lnea recta el grfico puede ser usado para calcular la concentracin de una solucin desconocida. La ley de Beer se basa sobre la suposicin de que la luz es monocromtica pero este no se puede obtener con el aparato utilizado. Como en cualquier momento pasan varias longitudes de onda por la solucin, se observan desviaciones de la ley de Beer sobre una gran parte del espectro. En tales casos una lectura indica una concentracin diferente de la concentracin real. El objetivo de un estudio preliminar es determinar la banda ms adecuada, o sea donde la desviacin es mnima. Procedimiento Prepare soluciones 0.01, 0.02, 0.03, 0.04 y 0.05M de cromo (III) tomando como referencia el grfico de %T en funcin de la longitud de onda obtenido previamente con la solucin 0.02M, seleccione 6 longitudes de onda para estudiar la absorbancia en funcin de la concentracin. Incluir en la seleccin, dos longitudes en las cuales aparezca un mnimo, una longitud de onda donde la curva tiene un mximo, una longitud de onda donde la curva sube fuertemente, una longitud donde la curva desciende y a 625 nm. Realice las mediciones en la forma siguiente: Ajuste el dial de longitud de onda a una de las longitudes seleccionadas. Ajuste el instrumento para 0 y 100% T con agua destilada. Mida y registre el %T y absorbancia de la solucin 0.02M, a las longitudes de ondas seleccionadas. Se debe ajustar el instrumento a 0 y 100% T, cada vez que se cambia de longitud de onda. Deseche la muestra de concentracin 0.02M y enjuague la cubeta varias veces en solucin 0.01M. Mida la absorbancia y %T de la solucin 0.01M. Mida la absorbancia y %T de la solucin 0.01M en la misma forma que se acaba de describir a cada una de las seis longitudes de onda. Haga lo mismo para las otras tres soluciones.

Anlisis de Muestra Problema Cada alumno recibir una muestra problema que debe medir y calcular la concentracin. Determine el %T y A de esta solucin a cada una de las seis longitudes de onda escogidas. Lave las cubetas con agua destilada y apague el espectrofotmetro. Tratamiento de los Resultados El fototubo es una clula fotoemisiva de cesio-antimonio, la respuesta relativa del fototubo a un rayo de la luz monocromtica de intensidad constante es: LONGITUD DE ONDA en nm 375 400 425 450 475 500 512 RESPUESTA RELATIVA 98 100 98 91 81 68 61

525 550 575 600 612

53 37 21 10

Como se puede ver el fototubo es mucho ms sensible a 400 nm que a 600 nm. Esto significa que requerir un flujo de luz mucho mayor a 600 que a 400 nm para que se observe el mismo %T en el dial de colormetro. En una hoja de papel milimetrado grafique la respuesta del fototubo en funcin de la longitud de onda, colocando la longitud de onda en el eje de las X. Sobre el mismo papel grafique la respuesta de colormetro en funcin de la longitud de onda. En la parte superior escriba los colores observados. Se notar que las dos curvas no coinciden, mientras la respuesta del fototubo es mayor a 400 nm a esta longitud de onda, la respuesta general del instrumento es baja. El colormetro registra una respuesta mucho mayor a 600 nm aproximadamente, de lo que se podra esperar al considerar solamente la respuesta del fototubo. La diferencia radica principalmente en la fuente luminosa, la cual emite dbilmente a 400 nm. Esto hace que la respuesta general del colormetro sea pobre a 400 nm aunque el fototubo responda muy bien a esta longitud de onda. De las dos curvas anteriores calcule la intensidad relativa de la lmpara sobre todo el rango del espectro visible en la forma siguiente: a cada longitud de onda estudiada divida la respuesta del instrumento por la respuesta del fototubo. Esto producir una serie de nmeros que darn una idea de la intensidad de la lmpara. Los nmeros ms grandes estarn en la cercana, de 3(3). En otro papel milimetrado grafique el espectro de absorcin de la solucin de Cr (III) (%T vs. longitud de onda). Convierta las lecturas de transmitancia en absorbancia (A = 2-log %T). Segunda Parte Dibuje grficos de %T y A en funcin de la concentracin con los datos obtenidos con cada una de las seis longitudes de onda. Aunque se puede leer directamente la absorbancia, a menudo estas lecturas son errneas a causa de marcas defectuosas en el dial de medicin y conviene calcular A de las lecturas de %T. Dibuje una lnea horizontal a travs de sus grficos de Beer a 80% y 20% T. Las mediciones de transmitancia deben realizarse dentro de estos dos lmites fuera de los mismos, los errores son muy grandes.

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PRACTICA N 4 PROPIEDADES COLORIMETRICAS Y EFECTOS DEL pH, TEMPERATURA, TIEMPO Y EXCESO DE IONES SOBRE LA ABSORBANCIA

EQUIPOS Espectrofotmetro UV VIS (Spectronic 20 COLEMAN Junior) 2 Cubetas

Pipetas 1.5 y 10 ml 6 Matraces aforados de 100 ml 2 vasos de 100 ml 1 cilindro graduado de 100 ml 2 goteros. SOLUCIONES Cloruro frrico, 10-3M en cido clorhdrico 0.5M Acetato de sodio 2M 1-10 fenantrolina al 0.3% Hidrxido de sodio 4M Amonaco concentrado Hidrocloruro de hidroxilamina al 10% REACTIVOS Fluoruro de sodio, oxalato de sodio, tartrato de sodio (KH2PO4) indicador de pH. PROPIEDADES COLORIMETRICAS DESEABLES E INDESEABLES Las sales de cromo y cobalto son sustancias que poseen color propio y no se requiere la adicin de otros reactivos. Sin embargo, muchas sustancias no poseen color propio y en este caso es preciso convertirlas por reaccin con un reactivo adecuado en un compuesto coloreado que permita el anlisis directo. Esta reaccin puede ser ilustrada por la ecuacin siguiente: Muestra + Reactivo Cromognico = producto coloreado En este experimento se considerarn algunas propiedades que son deseables tanto en el reactivo cromognico como el producto coloreado. Sea que la muestra posea color propio o forme un complejo coloreado por adicin de un reactivo, la solucin que se va a medir debe poseer las siguientes propiedades: 1) 2) 3) 4) 5) Estabilidad que permita una medicin adecuada. La inestabilidad en el color puede ser resultado de la oxidacin por el aire, descomposicin fotoqumica, efectos de acidez, temperatura o de solvente. Color intenso, o sea una elevada absorbancia molar. Independencia de pequeas variaciones en el pH y temperatura. Solubilidad del producto coloreado. Que el complejo coloreado obedezca la ley de Beer.

El reactivo cromognico debe poseer la mayora de las propiedades siguientes: 1) 2) 3) 4) 5) 6) Estabilidad en solucin, o sea que una vez preparado no se descomponga en unas pocas horas. Que desarrolle rpidamente el color Que reaccione estequimtricamente con la sustancia que se quiere medir. Transparencia en la zona espectral donde se va a hacer la medicin. Estar libre de interferencias que podran conducir a una reaccin incompleta del complejo coloreado. Solubilidad adecuada.

EL SISTEMA HIERRO (II) ORTOFENANTROLINA A.Efecto del tiempo sobre la absorbancia Aada 1 ml de solucin de NH2OH.HCl al 10% en agua a 4 ml de solucin patrn en Fe (III) 10-3M en un frasco volumtrico de 100 ml. Agite el matraz por unos pocos segundos, djelo en reposo durante unos dos

minutos, mida entonces 2 ml de solucin de ortofenantrolina al 0.3%. Pruebe con un pedacito de papel indicador universal y aada acetato de sodio 2M hasta (color rojo sangre,ver el frasco volumtrico aprox. 3mL) o que el papel indique pH 5. El propsito de la hidroxilamina es reducir el hierro (III) a (II), el cual forma con la ortofenantrolina un complejo ms adecuado, el acetato de sodio ajusta el pH para que el color del complejo se desarrolle ms rpidamente. Diluya hasta 100 ml con agua destilada y mezcle bien. Mida la absorbancia de la solucin a 512 nm. Se puede usar agua destilada como "blanco". Repita la medicin cada veinte minutos hasta finalizar la prctica. Dibuje un grfico de absorbancia en funcin del tiempo (en minutos) con los resultados obtenidos. La solucin de hierro preparada en esta parte del experimento tambin ser utilizada en la parte "D". B.Efecto de un exceso de reactivo sobre la absorbancia Prepare siete soluciones iguales a la de la parte A, pero que contengan 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 1.0, 3.0 y 4.0 ml de solucin de ortofenantrolina al 0.3% pero sin el indicador. Mida la absorbancia de todas estas soluciones tambin a 512 nm, usando agua destilada como "blanco". Dibuje un grfico de absorbancia en funcin de ml de ortofenantrolina. Deben resultar dos lneas que se cortan. El punto de interseccin representa la cantidad exacta de ortofenantrolina para formar complejo con el hierro presente en la solucin. C.Efecto del pH sobre la absorbancia Lea la absorbancia a 512 nm de las 5 soluciones siguientes: pH = 1.7. Coloque 4.0 ml de solucin patrn de hierro y 1.0 ml de hidroxilamina en un baln aforado de 100 ml. Agite y deje en reposo dos minutos. Aada 2 ml de ortofenantrolina, diluya hasta 100 ml con agua destilada y mida la absorbancia enseguida. pH = 2. Repita como antes, pero antes de enrasar con agua destilada, aada unos dos ml de acetato de sodio 2M gota a gota hasta que el color rojo comience a formarse. pH = 5. Utilice la primera medicin de absorbancia obtenida en la parte "A". pH = 9. A 4.0 ml de solucin patrn de hierro en un baln de 100 ml aada 1.0 ml de hidroxilamina y 2.0 ml de ortofenantrolina. Aada luego amonaco concentrado gota a gota hasta que la solucin sea alcalina al papel litmus. Diluya hasta 100 ml con agua destilada, mezcle bien y mida la absorbancia. pH = 12. Lo mismo que anteriormente pero en lugar de amonaco aada 13 gotas de hidrxido de sodio 4M. Dibuje un grfico de absorbancia en funcin de pH. En qu rango es el sistema hierro (II) ortofenantrolina independiente del pH? D.Efecto de varios iones sobre la absorbancia Use la solucin preparada en la parte A, aada una pequea cantidad de fluoruro de sodio a la solucin en la cubeta, tape con el pulgar la boca de la cubeta y agite vigorosamente. Mida nuevamente la absorbancia de la solucin. Si no observa ningn efecto aada otra pequea cantidad de fluoruro de sodio. Lave la cubeta con agua y aada la solucin de la parte "A", nuevamente mida la absorbancia y luego aada un poco de oxalato de sodio. Agite como antes y anote cualquier cambio en la absorbancia. Repita el mismo procedimiento con el tartrato de sodio y el de potasio. Presente en el informe sus observaciones sobre el efecto de estas sales sobre la absorbancia. Interprete cualitativamente la forma de la curva de la absorbancia en funcin de ml de ortofenantrolina. Si el complejo hierro (II) - ortofenantrolina se ha disociado apreciablemente qu esperara usted que ocurra con la curva absorbancia vs ml?. Se conoce que el hierro (II) y la ortofenantrolina forma un complejo estable en la relacin 1:3. De este hecho y los datos obtenidos en la parte "B" calcule la concentracin en moles por litro de ortofenantrolina en la solucin original de ortofenantrolina usada.

La frmula de la fenantrolina es: C12H8N2.H2O

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE INGENIERIA INGENIERIA QUIMICA PRACTICA N 5 DETERMINACION DEL PUNTO ISOSBESTICO O ISOABSORTIVO La variacin del espectro de absorcin de un indicador cido-base en funcin del pH proporciona un mtodo excelente para la determinacin del valor del pK del indicador. En la figura estn graficadas las curvas de absorcin del rojo de fenol para una serie de valores del pH, en donde se observa que al aumentar el pH la absorcin = 610 nm aumenta, mientras que la absorcin ms baja de = 430 disminuye. Ntese que las diferentes curvas ser cruzan en el punto en donde = 495; este punto se denomina punto isoabsortivo o punto isosbstico, y es caracterstico de un sistema que contiene dos cromforos interconvertibles, de manera que la absorcin total es constante. Si graficamos la absorbancia a = 615 contra el pH, se obtiene una curva en forma de S. La parte horizontal izquierda corresponde a la forma cida del indicador, mientras que la parte superior derecha corresponde a la conversin casi total hacia la forma bsica. Debido a que el pK se define como el valor del pH en el cual una mitad del indicador est en la forma bsica y la otra en la forma cida, dicho pK se determina por un punto intermedio localizado entre los segmentos horizontales de la izquierda y la derecha. Las constantes de disociacin de los compuestos que absorben ms en el ultravioleta que en el visible, se determinan frecuentemente por medio de un proceso similar. Algunos ejemplos son: teobromina ( = 240 nm), teofilina ( 240), y benzotriazol ( = 274). La existencia del punto isoabsortivo es la evidencia de que existe un equilibrio qumico entre dos especies. Si en vez de que desaparezca un pico de absorcin al aparecer otro (condicin para la existencia del punto isoabsortivo), la longitud de onda del mximo es gradualmente desplazada con el cambio del pH, la concentracin u otra variable, entonces se puede deducir que el cambio obedece a la interaccin fsica entre la sustancia absorbente y su medio ambiente o a la existencia de una serie de complejos de aproximadamente la misma estabilidad. PROCEDIMIENTO Preparar tres soluciones conteniendo cada una 0.5 ml del indicador verde de bromocresol azul de bromotimol rojo de fenol, agregndole a una: HCl 0.1M, a otra NaOH 0.1M y otra un buffer de pH 7 hasta completar 25 ml. Medir la absorbancia de cada solucin en el espectrofotmetro UV-VIS Perkin Elmer, haciendo un barrido de longitudes de onda entre 440 y 600 nm. NOTA: Comenzar cada corrida exactamente en el mismo punto del papel Se escogen seis longitudes de onda, tres de cada lado del punto isosbstico y se completa el siguiente cuadro: A2 A A1 A2-A A1-A Log pKind

pK = pH - log Error! A1 A A2 = = = cido neutro bsico

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PRACTICA N 6 ESPECTROFOTOMETRIA EN EL I.R. EQUIPOS: Espectrofotmetro infrarrojo Perkin Elmer, Film de Poliestireno, equipo para pulimento de ventanas de ClNa y BrK, equipo para la preparacin de comprimidos de BrK, ventanas de BrK, mortero de gata. SOLVENTES Y REACTIVOS Bromuro de potasio, aceite mineral Nujol, sustancias problemas. PARTE 1: CALIBRACION DEL INSTRUMENTO Los espectrofotmetros IR comerciales son capaces de buena reproducibilidad en la longitud de onda, sin embargo, es conveniente comprobar la exactitud de la calibracin. Esta se realiza utilizando sustancias patrn cuyo espectro ha sido estudiado a fondo como el poliestireno, el indeno y algunos gases como amonaco, cido clorhdrico y agua. El poliestireno es la sustancia corrientemente utilizada en el laboratorio. Mida el espectro de la pelcula de poliestireno y dibuje una curva de calibracin contrastando los valores obtenidos con los valores internacionalmente aceptados para los picos del poliestireno: 907, 1028, 1069, 1154, 1181, 1451, 1494, 1603, 1802, 1871, 1844, 2851, 2924, 3027 y 3055 cm-1. PARTE 2: MEDICION DEL ESPESOR DE LAS CELDAS PARA LIQUIDOS La separacin entre las ventanas de sal que forman las celdas de IR es muy pequea y es difcil medirla con exactitud, pero cuando las ventanas estn pulidas actan como un filtro de interferencia y es posible calcular la separacin midiendo la distancia promedio entre los picos que se observan en el espectro que se obtiene con la celda vaca. El clculo se realiza utilizando la ecuacin b = Error! (se puede consultar mtodos instrumentales de anlisis de Willard, Merrit y Dean). b = separacin entre las placas de la celda (en micras) n= Nde picos entre las longitudes de onda l1 y l2. Se medir el espectro de una celda vaca y se calcular la separacin entre las placas de ClNa de la celda. PARTE 3: PULIMENTO DE VENTANAS DE SAL El equipo de pulimento consiste de: dos bloques pulidos de vidrio, polvo de pulir grueso y fino, pao para acabado, botella con alcohol absoluto saturado con sal, esponja y dedos de caucho o guantes de cirujano. Las ventanas de sal son costosas y se empaan fcilmente, razn por la cual es necesario pulirlas antes y despus de usadas. No existe un mtodo "correcto" para pulir ventanas. Cada persona debe utilizar la tcnica que su experiencia le ha demostrado que da mejores resultados. Sin embargo, quien nunca lo haya hecho puede seguir la siguiente secuencia. Cuando la ventana ha sido usada se le debe lavar con un solvente adecuado para eliminar las ltimas trazas de sustancia. Solamente si se observan rayaduras o irregularidades en la ventana es preciso pulirla con polvo abrasivo, esto se realiza poniendo un poquito de abrasivo y mojndolo con alcohol que acta como lubricante. Se pule la ventana primero de un lado luego de otro con movimiento rotatorio, limpiando la superficie de vidrio con la esponja hmeda frecuentemente. Cuando se tiene una superficie lisa se limpia bien la superficie del vidrio con la esponja y se pone el pao sobre esta. Se moja la parte hmeda y con un movimiento rotatorio se desplaza la ventana hacia la parte seca del pao. Al realizar esta operacin dos o tres veces en cada lado se logra una ventana perfectamente transparente. En caso de no estar la ventana rayada es suficiente esta ltima etapa para ponerle en condiciones adecuadas de trabajo. PARTE 4: ANALISIS DE UNA MUESTRA LIQUIDA O SOLUCION

Se puede utilizar una celda para lquidos o medir el espectro entre dos ventanas de ClNa o de BrK cuando el lquido tiene suficiente viscosidad. En este ltimo caso se coloca una gota sobre una ventana y luego se superpone la otra ventana en un extremo y se le va deslizando sobre la ventana inferior en tal forma que no queden burbujas. Se montan las dos ventanas en un soporte y se mide el espectro. En caso de que el espectro no tenga la suficiente intensidad, se coloca entre ambas ventanas un espaciador (0.1 a 0.025 mm). Cada grupo deber medir e interpretar el espectro de una muestra lquida. PARTE 5: ANALISIS DE UNA MUESTRA SOLIDA UTILIZANDO ACEITE DE PARAFINA (NUJOL) Cuando una sustancia slida tiene poca solubilidad en CCl4 se toman unos 5 mg y se dispersa la sustancia en aceite de parafina (1 2 gotas) sobre un mortero de gata moliendo hasta tener una pasta uniforme. Se toma luego la suspensin con una esptula y se le coloca sobre una ventana de sal procedindose como en el caso anterior. Cada grupo deber medir e interpretar un espectro.

PARTE 6: ANALISIS DE UNA MUESTRA SOLIDA COMO COMPRIMIDO DE BrK Se coloca 1 a 2 mg de sustancia sobre el mortero de gata y se aade unos 100 mg de BrK y se muele finamente hasta polvo impalpable. Se coloca la mezcla en la prensa y se aplica una presin de 10-14 Tn. (NO SE DEBE SOBREPASAR LAS 15 Tn). Se coloca la muestra en el aparato y se mide el espectro. Si el espectro resulta muy diludo aadir ms muestra y moler nuevamente el comprimido. En caso contrario diluir con KBr. Cada grupo analizar una muestra. Para la interpretacin de los espectros consultar Bibliografia recomendada por el profesor.

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PRACTICA N 7 ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA Esta es una tcnica muy til para la determinacin de muchos elementos en el rango de concentracin de mg ml-1. El mtodo se basa en la absorcin de la luz de longitud de onda caracterstica por tomos en el estado fundamental. Los tomos se obtienen aspirando una solucin del elemento en cuestin y pasndola por una llama (celda atmica), donde la solucin se evapora rpidamente y las partculas residuales se descomponen en sus correspondientes tomos. Las partculas se pueden descomponer trmicamente o por reduccin qumica debido a las especies reductoras en la llama, (reaccin con las especies de Carbono). Habr interferencia en la medida analtica cuando las sustancias presentes en la solucin formen compuestos que no estn completamente disociados en la llama, cuando se exitan tomos que no estn en el estado fundamental o cuando hay ionizacin. El siguiente experimento est diseado para ilustrar alguno de estos fenmenos. EXPERIMENTO La seal de absorcin atmica para casi todos los elementos vara con la composicin de la llama, su estequiometra y la altura del mechero a la cual se hacen las medidas. Las dos ltimas estn muy relacionadas y para este experimento se ha escogido una llama de aire-acetileno a una altura de 1 cm usando un mechero de una sola ranura y de 10 cm de longitud. Para los elementos Ca, Cr, Fe y Mg; las soluciones se prepararn en medio clorhdrico con anticipacin. Las condiciones de operacin se buscarn en el manual, tales como: lmpara, longitud de onda a usar y su correspondiente valor para el control de la misma, la corriente de la lmpara, el ancho de banda y la concentracin de la solucin que se va a usar. Prepare previamente soluciones para Fe+2 y Ca+2 segn el rango de trabajo. Ver manual del equipo. Ajuste los parmetros de longitud de onda, abertura de rendija, altura de mechero, etc. Mida la absorcin de la muestra desconocida y determine la cantidad del elemento usando el grfico de calibracin. (recuerde las diluciones hechas) Lave con agua destilada despus de cada lectura. En un slo grfico trace la seal para cada elemento, determine la regresin lineal de la recta, y la concentracin de la muestra problema. Compare los resultados, por observacin visual de la llama, comente las posibles razones de las diferencias observadas. MANEJO DEL SPECTROFOTOMETRO ABSORCION ATOMICA (Buck Scientific) 1. 2. 3. 4. Se enciende el equipo, con el botn POWER SWITCH (24), calentar por unos 15 minutos Verificar que todos los botones de mando (16, 17, 18, 19) estn en su tope (cero), sentido contrario manecillas del reloj. Los botones: (20), (21), (22) y (23) estn hacia fuera. Dependiendo del elemento a analizar, buscar lmpara y colocar en el conector escogido (Este equipo tiene tres conectores). El tcnico le indicar cual usar y como debe colocarse. De acuerdo al conector escogido: por ejemplo, si conect en el nmero 1, en el panel principal del aparato, encontrar el botn SELECTOR DE FUNCIONES (15), ste deber colocarlo en LAMPARA 1 (si es su caso), siga la flecha y lo llevar al botn CONTROL LAMPARA 1 (18), es aqu donde poco a poco se ir colocando hasta el 80% de corriente permitido por la lmpara. Al ir aumentando el valor de la

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corriente, lo ver en la PANTALLA DIGITAL (8) del equipo, hasta llegar al valor deseado y observar como va encendindose la lmpara, luego dejar calentar por unos 10-12 minutos aprox. La Alineacin del quemador y la lmpara ya est hecha por el tcnico, (si fuese el caso de cambiar el quemador ) Con el botn CONTROL LONGITUD DE ONDA (25), colocar el valor para el elemento a analizar. Coloque el valor de abertura de rendija en el NIVEL CONTROL (28), segn sea su elemento a estudiar. Despus de calentada la lmpara, se lleva el SELECTOR DE FUNCIONES (15) a PMTvolts, el cual nos indica segn manual, el voltaje que est recibiendo el foto multiplicador, y se ajusta con botn ABSORBANCIA/ZERO (14), hasta 350 voltios en la pantalla digital (8). Ahora se optimiza la longitud de onda, si Ud observa en el MEDIDOR DEL NIVEL DE ENERGIA (12) notar, que la aguja est fuera del 100%. Aumentar con el botn CONTROL LONGITUD DE ONDA (25) hasta que el nivel caiga a cero, luego retrocedemos botn para buscar dentro de la escala un 80% aproximadamente, es decir, la aguja da una sensibilidad mxima. Tambin observar que en la PANTALLA DIGITAL (8) disminuye el valor de 350 voltios, vuelva a ajustarlo. Asegrese que la manguera de drenaje tenga el lazo de seguridad lleno de agua, (trampa), aqu caern gotas grandes, las pequeas irn hacia la llama. El envase de desecho debe estar vaco. Ir hacia la bombona del acetileno y abrir llave, observar que los manmetros le indican: uno, la presin en psi del gas en la bombona y el otro en el equipo donde indica el flujo que debe pasar al equipo (debe estar entre 5-8). (Ver 2 y 3) Coloque ahora el botn SELECTOR DE FUNCIONES (15), en ABSORBANCIA/ZERO. ENCENDIDO DE LAS LLAMAS: Colocar botn del Aire (4) en ON, notar que el flujo llega a 6 aproximadamente, en el rotmetro (2), si no llega a este nmero, con el botn VALVULA DE CONTROL DE FLUJO DEL OXIDANTE (5), puede hacerlo. Este valor de 6 es para ciertos metales Prender la llama con la mano derecha, meterla debajo del protector de llamas y que toque la ranura del quemador, sincronizando encender llama y con la mano izquierda, abrir VALVULA DEL ACETILENO (1), al levantarla, queda en sentido horizontal (hacia usted), esta vlvula es de seguridad, que en caso de una llama gigante, solo tiene que tirar de ella hacia abajo. (Hacerlo con seguridad, ya que este equipo acta, semejante a una cocina de gas). Notar que el flujo del gas llega tambin a 6 en el rotmetro (3), si no llegara a 6, con botn VALVULA DE CONTROL DE FLUJO DEL ACETILENO (6), puede ajustarlo. Inmediatamente despus del encendido, debe colocarse la manguera del asperjador, dentro del envase del agua (en esta prctica el agua ser su blanco) y nunca debe quedar seco, mientras las llamas estn encendidas. Desde aqu va la muestra al NEBULIZADOR (32) para su posterior anlisis. Ahora aspirando su blanco, debe colocar la absorbancia en cero, en la PANTALLA DIGITAL (8). El equipo presenta un botn digital llamado SWITCH/ZERO (9), lo puede utilizar para mantener el cero en pantalla, antes de medir las muestras. Comience a medir sus muestras en sentido ascendente, es decir, de menor a mayor concentracin. Las absorbancias no deben ser mayor de 1, pues no se cumplira la Ley de BEER. Si es su caso, busque inmediatamente una solucin al problema. La lectura a tomar es el valor ms alto observado. Al terminar de medir, apague el flujo del acetileno (1), luego el botn del aire (4) es llevado a OFF, dirijase al SELECTOR DE FUNCIONES (15) y colquelo en lmpara 1, siga la flecha hasta llegar al botn Lamp 1 (18), poco a poco vaya bajando la corriente, girar el botn en contra de las manecillas del reloj, hasta llegar a cero (para enfriarla lentamente). Saque la lmpara, desconecte y guardela. Apague el equipo (24). Cierre la bombona y estando todo apagado, abra vlvula del gas acetileno (1) en el equipo, esto es para vaciar la tubera, observe en el rotmetro (3), como el flujo cae a cero. Deje enfriar y tape el equipo. Asegrese que todo quede apagado, hasta el compresor del aire.

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PRACTICA N 8 FOTOMETRIA DE LLAMA PROPOSITO Demostrar usos analticos de la fotometra de llama y comparar el contenido en sodio y potasio en el agua de un ro utilizando dos mtodos: 1) 2) Comparacin directa con curvas de calibracin preparadas de soluciones patrones de sodio y potasio en agua destilada. Mediante el mtodo de la adicin patrn.

APARATOS Y MATERIALES Fotmetro de filtros o espectrofotmetro 12 matraces aforados de 50 ml Pipetas volumtricas de 5, 10 y 25 ml 1 vaso de precipitado de 250 ml y 4 de 100 ml 1 embudo de filtracin. SOLUCIONES QUE SE ENCONTRARAN YA PREPARADAS 100 ml de solucin problema (agua de ro) Solucin madre de sodio 0.1 mg de Na/ml). 0.254 g NaCl/litro (100 mg/L) Solucin madre de potasio (0.1 mg de K/ml). 0.190 g de KCl/litro (100 mg/L) ALGUNAS CONSIDERACIONES SOBRE LOS METODOS Y LIMITACIONES DE LA FOTOMETRIA DE LLAMA La fotometra de llama es un mtodo sumamente til por su simplicidad para los anlisis rutinarios. Los metales alcalinos que poseen bajas energas de excitacin son determinados fcilmente por este mtodo. Sin embargo, existen muchas desventajas, una de las principales es que la llama vara en su temperatura segn el flujo de los gases. La velocidad con la cual fluye la muestra en la llama es tambin un elemento de error. Existen adems muchas fuentes de interferencia tales como el fondo de la llama, la autoabsorcin, emisin de otros iones en la misma zona espectral, lo que es particularmente grave cuando se trabaja con aparatos provistos de filtros, y efectos positivos o negativos sobre la emisin por la presencia de otros cationes o aniones. El mtodo ms fcil para evaluar una muestra es simplemente preparar una curva patrn. Se hacen soluciones de diferentes concentraciones de un in se mide la emisin de cada una de estas soluciones. Se hace luego un grfico colocando las concentraciones en el eje de las abscisas y las lecturas en el aparato sobre el de las ordenadas. Cuando se presentan interferencias se pueden preparar soluciones patrn que contengan los principales constituyentes que se sospechan en la muestra a analizar. Se puede tambin utilizar el mtodo de la adicin patrn. En este mtodo se utiliza la misma muestra como matriz. Se pueden ensayar dos muestras: a la primera se la aade un volumen de agua destilada y a la segunda el mismo volumen pero de solucin patrn que contenga una cantidad conocida del elemento que se est analizando. Se calcula luego la concentracin corregida en la forma siguiente: 1.- Puede calcularse realizando la nueva grfica con las adiciones de patron y aplicando la ley de Beer hacer el clculo o proceder segn la formula indicada a continuacin o procedimiento 2

Concentracin de la muestra Error! = Concentracin real (segn curva patrn) de la muestra La concentracin de la muestra segn la curva patrn se encuentra, llevando la lectura de emisin obtenida a la curva previamente elaborada para el elemento en cuestin. Cantidad de elemento patrn aadida son los miligramos por mililitro del elemento patrn que se aadi a la muestra. Cantidad de elemento patrn hallada, se calcula restando a la emisin de la muestra + patrn la emisin de la muestra diluda con un volumen igual de agua y llevando esto a la curva patrn. PROCEDIMIENTO 1.El aparato se debe dejar encendido unos 15 minutos para que se establezca un equilibrio trmico. Leer las instrucciones de manejo del instrumento y limpiar el atomizador con agua destilada. 2.Segn la sensibilidad del aparato prepare soluciones patrn que contengan 2, 5, 10, 15 y 20 mg/L de sodio y potasio (a partir de las soluciones madres). Utilice los balones aforados de 50 ml. 3.Construya curva de calibracin para el sodio a 590 nm y en las condiciones que especifiquen las instrucciones del aparato. 4.Mida la solucin problema y calcule el contenido de sodio o potasio. 5.En un baln aforado de 50 ml, coloque 40 ml de solucin problema y aada 10 ml de agua destilada. mida la emisin y calcule el contenido en sodio con ayuda de la curva patrn. 6.En otro baln de 50 ml, coloque 40 ml de solucin problema y 10 ml de solucin que contiene una cantidad conocida de sodio. Mida la emisin, rstele la emisin de la solucin preparada en el pargrafo 5 y calcule la cantidad de sodio aadida. 7.Compare los valores obtenidos en ambos mtodos. 8.Haga lo mismo para el potasio. 9.Para enfatizar la importancia de la limpieza mida: a) la emisin de 20 ml de agua destilada, luego de meter los dedos durante unos momentos. b) mida el contenido de sodio del agua del chorro. 10.- Determine el efecto de la composicin y viscosidad de una solucin, midiendo bajo condiciones idnticas cuatro soluciones que contienen 15 mg/L de sodio pero que contienen 10 y 50% de etanol y 50% de glicerina y solamente agua destilada. MANEJO DEL FOTOMETRO DE LLAMA (Buck Scientific) (Se usa equipo utilizado en AA) 1. Aqu no se usan lmparas. 2. Oprimir botn de encendido POWER (24), calentar por 15 minutos 3. Oprimir botn EMISION (10), (el equipo ahora funcionar modo Emisin de Llama 4. Revisar botones (16),(17),(18) y (19) que estn en cero (posicin en contra agujas del reloj), botn CURVE (17), tope (cero) 5. Colocar botn SELECTOR DE FUNCIONES (15) en absorbancia/Zero 6. Con el botn CONTROL LONGITUD DE ONDA (25), colocar el para el elemento en cuestin. 7. Coloque el valor de abertura de rendija en el NIVEL CONTROL (28), segn sea su elemento a estudiar. 8. Asegrese que la manguera de drenaje tenga el lazo de seguridad lleno de agua, (trampa), aqu caern gotas grandes, las pequeas irn hacia la llama. El envase de desecho que est vaco (no tenga agua). 9. ENCENDIDO DE LAS LLAMAS: Colocar botn del Aire (4) en ON, notar que el flujo llega a 6 aprox., en el rotmetro (2), si no llega a este nmero, con el botn VALVULA DE CONTROL DE FLUJO DEL OXIDANTE (5), puede hacerlo. 10. Prender la llama con mano derecha, meterla debajo del protector de llamas y que toque ranura del quemador, sincronizando encender llama y con la mano izquierda, abrir VALVULA DEL ACETILENO (1), al levantarla, queda en sentido horizontal (hacia usted), esta vlvula es de seguridad, que en caso de una llama gigante, solo tiene que tirar de ella hacia abajo. (Hacerlo con seguridad, ya que este equipo acta, como cuando

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enciende una cocina de gas). Notar que el flujo del gas llega tambin a 6 en el rotmetro (3), si no llegara a 6, con botn VALVULA DE CONTROL DE FLUJO DEL ACETILENO (6), puede ajustarlo, recuerde que el nivel de 6 es para ciertos elementos. Inmediatamente despus del encendido, debe colocarse la manguerita del asperjador, dentro del envase del agua (este ser su blanco) y nunca, debe quedar seco mientras las llamas estn encendidas. Desde aqu va la muestra al NEBULIZADOR (32) para su posterior anlisis. Despus de encendida la llama, la manguerita del asperjador debe estar en el agua destilada (ste es su blanco), ahora lleve a cero con botn CURVE (17). Como usted tiene una cantidad de balones preparados, se debe tomar el baln intermedio, (es decir, la concentracin intermedia), se coloca en la manguerita y con botn absorbancia/Zero (14), se debe forzar hasta aproximadamente 0.500 de absorbancia, ver en pantalla digital (8) (as aseguramos que todas las lecturas entren dentro de la curva de calibracin). Vuelva a repetir puntos 12 y 13, para asegurar sus medidas futuras. Al volver la manguerita al blanco, el equipo debe reportar el cero absorbancia. Comience ahora a medir sus muestras de menor a mayor, (curva patrn), luego mida todo lo dems. Si tiene alguna duda, repita su medicin. Si cada vez que coloca blanco, el cero se mueve, ajustelo con botn CURVE (17), o con botn Cero Automtico (9). La lectura a tomar es el valor ms alto observado en la pantalla digital. Al terminar de medir, apague el flujo del acetileno (1), luego el botn del aire (4) es llevado a OFF. Apague el equipo (24). Cierre la bombona y estando todo apagado, abra vlvula del gas acetileno (1) en el equipo, esto es para vaciar la tubera, observe en el rotmetro (3), como flujo cae a cero. Deje enfriar y tape el equipo. Asegurse que todo quede apagado, hasta el compresor del aire.

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PRACTICA N 9 CROMATOGRAFIA LIQUIDA (HPLC)

Procedimiento: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Preparar la fase mvil, filtrarla y desgasificarla Purgar el sistema de bombeo Llenar las tuberas asegurndose de que no existan burbujas Estabilizar el equipo Ajustar los parmetros del detector, registrador y flujo Inyectar la muestra Obtener el cromatograma para los patrones Proceder similarmente para la muestra

Calcular: Nmero de platos tericos, , R Si conoce la composicin de los patrones, determine la composicin para la muestra, usando el mtodo de normalizacin por reas.

MANEJO DEL CROMATOGRAFO DE LIQUIDOS (HPLC) MODO ISOCRATICO. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Preparar la fase mvil segn indicaciones a seguir o a convenir en la prctica. Introducir el FILTRO PARA SOLVENTES, tapar muy bien Colocar este filtro en el equipo de gas inerte a utilizar: puede ser Helio o Argn Abrir vlvula del gas y desgasificar por 1-2 minutos Llevar esta fase, al sonificador por unos segundos Colocar la fase mvil en el recipiente y conectar a la bomba a utilizar (1 2) Encender BOMBA (1 2) y revisar que los flujos estn en cero. Primero hay que hacer purgado de la bomba, pues no se tiene un llenado automtico. Con la INYECTADORA PARA PURGA, introducirla en la parte frontal de la bomba (PB), girar botn hacia la derecha es decir, abrir vlvula y succionar. (Se observar como la manguera se va llenando de fase mvil y sta va pasando a la bomba). Extraer suficiente fase mvil y observar que en la manguera plstica no queden burbujas. Cierre vlvula poco a poco y observe que no quede goteo. Saque la inyectadora.

10. Dirjase al INYECTOR (3) y coloque vlvula en sentido vertical (7) (aqu no hay presin) y asegurando que lo que se enve de fase mvil va a salir al tubo de desecho o ventilacin (6), se va colocando poco a poco flujo de 1.0 en 1.0 mL. Este tubito de desecho debe llenarse aproximadamente hasta la mitad para asegurar que la bomba ahora est llena o purgada con la nueva fase mvil que vamos a utilizar. Puede llevar el flujo hasta 5 6 mL/min. hasta sacar cantidad de fase mvil deseada, baje poco a poco el flujo hasta cero. 11. Lleve ahora la vlvula de la posicin vertical hacia la izquierda (casi ngulo de 90) en el INYECTOR (3). (Esto indica que ests presurizando y todo lo que enve va para la Pre columna (12) y luego a la COLUMNA (5) 12. Vaya hacia botones del flujo (4) y lo va aumentando de 0.1 en 0.1 hasta 0.3 mL/min (Como hay presin, el flujo debe ser muy lento para que atraviese el lecho cromatogrfico de una manera uniforme y no haya cambios bruscos que puedan daar la columna). Dejar este flujo por espacio de 10-15 minutos hasta observar la salida del lquido hacia el nuevo desecho. 13. Al cabo de este tiempo, observar que no hayan burbujas en la tubera plstica, para empezar poco a poco, a subir el flujo hasta el deseado. 14. Una forma de ver si el equipo est estabilizado, es observar el DETECTOR (8), ya que tiene una opcin en pantalla indicando que est detectando (en este caso, es un ULTRAVIOLETA). Si el detector reporta 0.000 me est indicando que ya est listo para una inyeccin, en caso contrario debe dejarle pasar ms fase mvil para que termine de limpiar. Como todo detector, ste presenta ciertas condiciones que deben ser respetadas en el momento de cualquier anlisis. (Lo ver en la prctica). 15. Si ya est estabilizado, procedemos a inyectar. Con la MICRO-JERINGA se decide que volumen se va a inyectar de la muestra escogida. 16. Esta muestra escogida debe presentar las siguientes condiciones: a) Debe estar solubilizada en la fase mvil b) Debe estar previamente filtrada por su respectivo FILTRO PARA MUESTRAS c) Debe estar preparada dentro del porcentaje de concentracin aceptado por la columna. (Cada columna tiene una historia de vida) 17. Inyeccin de la muestra escogida. Escogido el volumen a inyectar procedemos de la siguiente manera: En el INYECTOR (3) observar: que estando presurizado, se coloca ahora el botn de la parte superior (9) en zona de LOAD o ZONA DE CARGA, se despresuriza, es decir, se coloca botn inferior en posicin vertical (no hay presin), se hala el botn de seguridad para encontrar orifico donde va introducida la inyectadora de muestra. Se hace la inyeccin de una manera firme y segura, notar un excedente o una gota que indica que el inyector tom lo necesario para el anlisis. Saque la inyectadora, coloque el tapn de seguridad, presurice (botn hacia la izquierda) 18. Notar que hemos cargado, pero no hemos inyectado la muestra. Asegrese primero de colocar la inyectadora en sitio seguro, ya que necesitar ambas manos para la inyeccin. 19. Con una mano tome el botn de zona de LOAD y con la otra colquela en botn del REGISTRADOR TERMICO (10) en INJECT, cuando llegue el botn del Inyector a zona de Inject debe soltar el botn de Inject del registrador para sincronizar registrador con inyeccin. Empezar a salir una lnea de base indicando solo paso del solvente Fase mvil , antes de que llegue la muestra al dectector para su posterior anlisis reportado en un cromatograma. Antes de hacer una inyeccin debe asegurarse: que en el REGISTRADOR TERMICO (10) se tengan las condiciones acopladas al anlisis que se desee, es decir, una velocidad de carta, una atenuacin definida, una lnea de base. Nada se coloca al azar, stas deben ser condiciones ya optimizadas. MODO GRADIENTE (11) Programador de Fases: El respectivo profesor le hablar en clase de este modo, en la prctica se le indicar como deber usarse el gradiente a manera demostrativa.

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PRACTICA N 10 CROMATOGRAFIA DE GASES SUSTANCIAS: SERIE NORMAL DE ALCOHOLES

OPTIMIZACION DEL EQUIPO Inyectar en una columna 1 m 1 de uno de los alcoholes a utilizar en el anlisis de mezcla de alcoholes con un poco de aire (para qu?). Operar la columna a una temperatura de acuerdo con el alcohol. (Buscar en las tablas). Ajustar el flujo de gas a 120 ml/min inyectar otra muestra y esperar a que la curva de elucin aparezca. Repetir para velocidades de flujo de 100, 80, 60 y 40 ml/min. Calcular el nmero de placas tericas para cada una de las velocidades de flujo. De la longitud de la columna calcule el HEPT para cada velocidad de flujo. Graficar HEPT vs velocidad de flujo del gas transportador. Estimar la velocidad ptima del gas y del correspondiente HEPT. Preparar una mezcla de alcoholes normales con cantidades conocidas de cada uno de ellos. (Entre 0.5 a 1 mL). Se inyecta y se obtiene el cromatograma. Si inyecta 1 mL de cada uno de los alcoholes por separado, se mide el Tr se compara con el cromatograma anterior para identificarlos.

PRACTICA N 9 CROMATOGRAFA LQUIDA (HPLC)

Procedimiento 1. Preparar la fase mvil, filtrarla y desgasificarla 2. Llenar las tuberas con la inyectadora, asegurndose que no queden burbujas de aire atrapadas en las mismas. 3. Purgar el sistema de bombeo. 4. Colocar el flujo de la fase mvil y Estabilizar el equipo 5. Ajustar los parmetros del detector y registrador. 6. Inyectar la muestra 7. Obtener el cromatograma para los patrones. 8. Proceder similarmente para la muestra.

Calcular: Nmero de platos tericos (N), , R Si conoce la composicin de los patrones, determine la composicin de la muestra.

MANEJO DEL CROMATOGRAFO DE LQUIDOS (HPLC) Cromatografa Fase Reversa 1. Preparar la fase mvil Fase mvil: Metanol : Agua (80:20) Mezclar 800 ml de metanol y 200 ml de agua, desgasificar por ultrasonido durante 5 minutos. Cuando se utiliza una bomba cuaternaria o binaria se colocan los solventes filtrados en envases separados y se programa la bomba para que haga la mezcla de solventes. 2. Colocar la fase mvil en el envase e introducir la tubera en el mismo. 3. Encender la computadora. 4. Encender los mdulos del cromatgrafo, comenzando por el desgasificador, luego la bomba y por ultimo el detector. 5. Abrir el software que controla los mdulos del cromatgrafo.

6. Purgar la bomba, girando la vlvula de purga hacia la izquierda y colocar un flujo de 5 ml/min durante 5 minutos (se purgan todos los canales), al finalizar bajar el flujo a cero y cerrar la vlvula de purga, girndola hacia la derecha. 7. Poner a funcionar la bomba con el flujo del mtodo (1 ml/min). El flujo se incrementa en porciones de 0,2 ml/min hasta llegar a 1 ml/min. 8. Encender la lmpara del detector y colocarle la longitud de onda a la cual se van a tomar los cromatogramas (254 nm). 9. Esperar hasta que estabilice el sistema de 15 a 20 minutos (en la pantalla 10. Preparar estndares y muestras necesarias para el anlisis. 11. Preparacin de estndares 11.1 Pesar aproximadamente 0,6500 g de Tolueno y 0,0625 g de Cafena disolver con Etanol en un baln aforado de 50 ml y diluir a volumen. Tomar un volumen de 2 ml de la solucin anterior en un baln aforado de 25 ml y diluir a volumen con fase mvil. 12. Preparacin de muestras 12.1 Diluir 2 ml de la muestra a 25 ml en un baln aforado y diluir con fase mvil. 12.2 Diluir 1 ml de la muestra a 25 ml en un baln aforado y diluir con fase mvil. 13. Filtrar los estndares y las muestras por filtros de 0,45 m colocndolos en una jeringa plstica desechable. 14. Inyectar el estndar volumen de inyeccin 20 l. Curar la inyectadora varias veces. Llenar la inyectadora con el estndar verificar que no queden burbujas de aire, colocar el inyector en la posicin de carga (LOAD) girando la palanca hacia arriba, introducir la aguja de la inyectadora en el inyector e inyectar el estndar presionando el embolo de la inyectadora, luego gire la palanca del inyector hacia abajo a la posicin inyeccin (INJECT) y posteriormente retire la inyectadora. 15. En la ventana del software se visualizara el inicio de la corrida con una lnea roja, espere que se observen los picos correspondientes a los estndares y pare la corrida. 16. Imprimir el cromatograma.

REFERENCIAS 1) Willard, Merrit y Dean. Mtodos Instrumentales de Anlisis. Compaa Editorial Continental S.A. 2) Ewing. Instrumental Methods. McGraw Hill,,. 3) Harley y Wiberley. Wiley & Sons Inc..

4) Skoog Leary Anlisis Instrumental D.A. Skoog y D. M. West Anlisis Instrumental Ewin G. W. Mtodos instrumentales de Anlisis Qumicos H. A Strobel. Instrumentacin Qumica A. I. Vogel Qumica Analtica volumen II