Curso: Engenharia Qumica Disciplina: Qumica Orgnica Experimental I Profa. Dra. Renata Carolina Zanetti ofrano!

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EXPERIMENTO 4: CROMATOGRAFIA
1. INTRODUO A cromatografia, provavelmente, a mais importante tcnica utili a!a para separar os componentes !e uma mistura" Ela envolve a !istri#ui$%o !os !iferentes compostos ou &ons na mistura entre !uas fases, uma !as 'uais estacion(ria, e a outra, em movimento" A cromatografia funciona, em gran!e parte, com #ase no mesmo princ&pio 'ue a e)tra$%o com solvente" Na e)tra$%o, os componentes !e uma mistura s%o !istri#u&!os entre !ois solventes, !e acor!o com as suas solu#ili!a!es relativas nos !ois solventes" O processo !e separa$%o na cromatografia !epen!e !as !iferen$as na for$a com 'ue os componentes !a mistura s%o a!sorvi!os na fase estacion(ria e 'uanto eles s%o sol*veis na fase m+vel" Essas !iferen$as !epen!em principalmente !as polari!a!es relativas !os componentes na mistura" E)istem muitos tipos !e tcnicas cromatogr(ficas, 'ue variam !e acor!o com a nature a !as !uas fases envolvi!as: cromatografia slido-lquido ,em colunas, em cama!a !elga!a e em papel-, lquido-lquido ,l&'ui!o !e alto !esempen.o- e gs-lquido ,na fase !e vapor-" Neste e)perimento ser( estu!a!a a tcnica !e cro !"ogr!#i! $ c! !d! d$lg!d! 'ue ser( ilustra!a pelas cromatografias em papel e em gi " %ri&c'ios d! cro !"ogr!#i! $ c! !d! d$lg!d!.

A cromatografia em ca!a !elga!a ,T/0, !o ingl1s t.in la2er cromotograp.2- uma tcnica muito importante para a separa$%o r(pi!a e a an(lise 'ualitativa !e pe'uenas 'uanti!a!es !e material" Ela perfeitamente a!e'ua!a para a an(lise !e mistura e pro!utos !e rea$%o, em e)perimentos em macro e microescala" Assim, como a cromatografia em colunas, a T/0 uma tcnica !e parti$%o s+li!o3l&'ui!o" 0ontu!o, a fase m+vel l&'ui!a n%o percola para #ai)o no a!sorvente4 ela sobe por uma fina cama!a !e a!sorvente 'ue reveste um suporte !e apoio" O tipo !e suporte mais comumente usa!o o pl(stico, mas outros materiais tam#m po!em ser utili a!os" 5ma cama!a fina !e a!sorvente espal.a!a so#re uma placa ,suporte- 'ue ent%o !ei)a!a secar" A placa revesti!a e seca c.ama!a !e placa !e cama!a ou l6mina !e cama!a !elga!a" Na T/0, a amostra aplica!a 7 placa antes 'ue o solvente possa su#ir pela cama!a !e a!sorvente" A amostra conten!o os solutos ,materiais a serem separa!os- s%o c.ama!os !e $lu!"os, geralmente aplica!a na forma !e uma pe'uena manc.a perto !a #ase !a placa4 essa tcnica normalmente c.ama!a !e !'lic!()o d$ !&c*!" Em segui!a, a placa !e cama!a !elga!a coloca!a na vertical em um recipiente 'ue cont1m uma cama!a rasa !e solvente, c.ama!o !e $lu$&"$, so#e pela cama!a !e a!sorvente na placa, por meio !e a$%o capilar" 8 me!i!a 'ue o solvente so#e pela placa ou $lui, a amostra particiona!a entre a fase l&'ui!a, m+vel, e a fase s+li!a, estacion(ria" 9urante esse processo, voc1 est( !esenvolven!o ou corren!o, a placa !e cama!a !elga!a, promoven!o assim a separa$%o !os v(rios componentes !a mistura" Ap+s o !esenvolvimento, a placa !elga!a removi!a !o tan'ue !e !esenvolvimento e !ei)a!a secar at a elimina$%o total !o solvente" :e a mistura 'ue foi originalmente aplica!a na placa tiver si!o separa!a, .aver( uma srie vertical !e manc.as na placa e ca!a uma !elas correspon!e a um componente ou composto separa!o !a mistura original" :e esses componentes forem colori!os, essas manc.as ser%o claramente vis&veis !epois !o !eslocamento" 0ontu!o, fre'uentemente, as ;manc.as; n%o s%o vis&veis por serem su#st6ncias incolores" :e n%o .ouver manc.as aparentes, elas po!er%o se tornar vis&veis somente se for usa!o um mto!o !e visuali a$%o usan!o3se um agente cromgeno ou revelador, 'ue um agente f&sico ,como lu ultravioleta ou ra!ioativi!a!e- ou 'u&mico

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,como vapores !e io!o- 'ue tornam vis&veis essas su#st6ncias" Os mto!os f&sicos t1m a vantagem !e 'ue a su#st6ncia n%o sofre transforma$<es e po!e3se recuper(3la e estu!(3la mel.or" =eralmente, manc.as po!em ser vistas 'uan!o a placa !e T/0 for manti!a so# lu ultravioleta ,mto!o f&sico- ou so# vapor !e io!o ,mto!o 'u&mico-" Nesse *ltimo caso, a placa coloca!a em uma cama!a conten!o cristais !e io!o e !ei)a!a em repouso por um pe'ueno per&o!o" O io!o reage com v(rios compostos a!sorvi!os na placa, forman!o comple)os colori!os 'ue s%o vis&veis" 5ma ve 'ue o io!o reage com os compostos presentes na placa, os componentes isola!os !a mistura n%o po!em ser recupera!os 'uan!o esse mto!o !e visuali a$%o emprega!o" >( o mto!o f&sico t1m a vantagem !e 'ue a su#st6ncia n%o sofre transforma$<es e po!e3se recuper(3la posteriormente" A T/0 tem !iversos usos importantes na 'u&mica org6nica" Ela po!e ter as seguintes aplica$<es: ?" 9emonstrar 'ue !ois compostos s%o i!1nticos4 @" 9eterminar o n*mero !e componentes !e uma mistura4 A" 9eterminar o solvente apropria!o para uma separa$%o por cromatografia em coluna4 4" Monitorar uma separa$%o cromatogr(fica em coluna4 B" Cerificar a efetivi!a!e !e uma separa$%o em uma coluna, por cristali a$%o ou e)tra$%o4 D" Monitorar o progresso !e uma rea$%o" +ol,$&"$s $ !dsor,$&"$s Na ta#ela ? a#ai)o est%o relaciona!os alguns solventes cromatogr(ficos comuns, com sua capaci!a!e relativa !e !issolver compostos polares" Algumas ve es, po!e ser encontra!o um *nico solvente 'ue ir( separar to!os os componentes !e uma mistura" Outras ve es, po!e ser encontra!a uma mistura !e solventes 'ue atingir( a separa$%o" Em geral, compostos apolares percorrem mais rapi!amente a fase estacion(ria ,eluem primeiro-, e compostos polares percorrem mais lentamente ,eluem !epois-" 0ontu!o a massa molecular tam#m um fator !eterminante na or!em !e elui$%o" 5m composto apolar !e eleva!a massa molecular percorre mais lentamente 'ue um composto !e #ai)a massa molecular, e po!e at mesmo ser ultrapassa!o por alguns compostos polares"
Tabela 1. Relao dos principais solventes (eluentes) usados em cromatografia. Polari!a!e crescente e a ;capaci!a!e !o solvente; :olvente em rela$%o aos grupos funcionais polares Eter !e petr+leo 0icloe)ano Tetracloreto !e car#ono Tolueno 0lorof+rmio 0loreto !e metileno Eter !imet&lico Acetato !e etila Acetona Piri!ina Etanol Metanol Fgua Fci!o actico

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Os solventes usa!os em cromatografia !evem ser puros" Gre'uentemente, solventes comerciais cont1m pe'uenas 'uanti!a!es !e res&!uos, 'ue permanecem 'uan!o o solvente evapora!o" Para tra#al.o !e rotina e para separa$<es relativamente f(ceis, 'ue utili am somente pe'uenas 'uanti!a!es !e solvente, em geral o res&!uo acarreta poucos pro#lemas" Para tra#al.os em gran!e escala, o solvente a ser usa!o !eve ser re!estila!o antes !e seu uso" :%o enumera!os v(rios tipos !e a!sorventes ,fases s+li!as- utili a!os em cromatografia, tais como: papel, celulose, ami!o, a$*cares, alumina, sulfato !e c(lcio, silicato !e magnsio, (ci!o sil&cico, etc" A escol.a !o a!sorvente geralmente !epen!e !os tipos !e compostos a serem separa!os" 0elulose, ami!o e a$*cares s%o usa!os para materiais polifuncionais, !e origem vegetal e animal ,pro!utos naturais-, 'ue s%o muito sens&veis 7s intera$<es (ci!o3#ase" O silicato !e magnsio em geral utli a!o para separar a$*cares acetila!os, esteroi!es e +leos essenciais" A alumina o a!sorvente mais amplamente usa!o e o#ti!o nas formas (ci!a, #(sica ou neutra" Essa particularmente *til na separa$%o !e materiais (ci!os, como (ci!os car#o)&licos e amini(ci!os" A sua forma #(sica apresenta pH I ?J e *til na separa$%o !e aminas" >( sua forma neutra po!e ser utili a!a para separar !iversos materiais 'ue n%o s%o nem (ci!os e nem #(sicos" O ,!lor do F!"or d$ R$"$&()o -R#. As con!i$<es para a cromatografia em cama!a !elga!a incluem: ?" :istema !e solventes4 @" A!sorvente4 A" Espessura !a cama!a a!sorvente4 4" Kuanti!a!e relativa !e material aplica!o" A mistura !e su#st6ncias atravessa a fase s+li!a, finamente !ivi!i!a, sen!o 'ue ca!a componente !a mistura percorre uma !ist6ncia espec&fica, por ser menos ou mais reti!o na superf&cie !o s+li!o" A escol.a !a fase m+vel #aseia3se, em geral, no fato !e 'ue as su#st6ncias em 'uest%o po!em eluir3se #em com os mesmos solventes ou misturas !e solventes 'ue as !issolvem #em" Na elui$%o, a fase m+vel ,eluente- e os componentes !a mistura ,solutos- movem3se ao mesmo tempo, assim, poss&vel se e)pressar a rela$%o entre as !ist6ncias percorri!as para ca!a um !os compostos presentes na mistura original atravs !a f+rmula:

R# /

9ist6ncia percorri!a pelo soluto 9ist6ncia percorri!a pelo eluente

Este mto!o muito usa!o na cromatografia em papel, representa!a na Gigura ?"

Figura 1. Ilustrao de uma placa de TLC usada para demonstrar o c lculo do fator de reteno Rf.

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Cro !"ogr!#i! $

'!'$l

A cromatografia em papel geralmente relaciona!a com a cromatografia em cama!a !elga!a" As tcnicas e)perimentais s%o !e certo mo!o, similares 7s !e T/0, mas os princ&pios est%o mais estritamente relaciona!os aos !e uma e)tra$%o" A cromatografia em papel , na ver!a!e, uma tcnica !e particionamento l&'ui!o3l&'u!o, e n%o uma tcnica s+li!o3l&'ui!o" Para a cromatografia em papel, uma manc.a coloca!a pr+)imo !a parte inferior !e um pe!a$o !e papel !e filtro !e alta 'uali!a!e ,geralmente se usa o tipo L.atman nJ ?-" Ent%o, o papel coloca!o em uma c6mara !e !esenvolvimento" O solvente so#e pelo papel pela a$%o capilar e move para cima os componentes !a manc.a !a mistura com ta)as !iferentes" Apesar !e o papel consistir principalmente em celulose pura, a celulose em si n%o atua como fase estacion(ria" Em ve !isso, a celulose a#sorve (gua !a atmosfera, !e uma atmosfera satura!a com vapor !e (gua, A celulose po!e a#sorver at cerca !e @@M !e (gua" E essa (gua a!sorvi!a so#re a celulose 'ue atua como fase estacion(ria" Para garantir 'ue a celulose se mantm satura!a com (gua, muitos solventes !e !esenvolvimento utili a!os na cromatografia em papel cont1m (gua como componente" 8 me!i!a 'ue o solvente so#e pelo papel, os compostos s%o particiona!os entre a fase estacion(ria, a (gua, e a fase m+vel, o solvente" 5ma ve 'ue a fase a'uosa estacion(ria, os componentes em uma mistura 'ue s%o mais altamente sol*veis em (gua, ou os 'ue t1m a maior capaci!a!e !e liga$%o !e .i!rog1nio, s%o a'ueles 'ue ficam reti!os e se movem mais lentamente" A cromatografia em papel se aplica principalmente a compostos altamente polares ou compostos polifuncionais" O uso mais comum !a cromatografia em papel para a$*cares, amino(ci!os e pigmentos naturais" 0omo o papel !e filtro fa#rica!o !e maneira consistente, po!e3se geralmente confiar nos valores !e Rf na cromatografia em papel" 0ontu!o, os valores !e Rf costumam ser me!i!os a partir !a e)tremi!a!e superior ,topo- !a manc.a 3 n%o !e seu centro, como .a#itual na T/0"

0. %ROC1DIM1NTO 12%1RIM1NTA3 Cro !"ogr!#i! $ gi4

Em uma #arra !e gi escolar #ranco ,sulfato !e c(lcio N 0a:O4-, s%o tra$a!as com caneta .i!rocor listras, 'ue circun!em a #arra, a cerca !e ?,B cm !a #ase" 0omo eluente, em um #ecOer, coloca3se (gua !estila!a, at ? cm !a #ase" Ap+s alguns minutos, o gi posto !entro !o #ecOer, com cui!a!o para 'ue o eluente n%o to'ue a listra pinta!a, e co#erto com uma tampa !e vi!ro ,vi!ro !e rel+gio-" O gi !eve ficar na posi$%o vertical" Esse mesmo e)perimento ser( repeti!o usan!o3se ao invs !e (gua !estila!a etanol comercial" 8 me!i!a 'ue o eluente a!sorvi!o, po!e ser o#serva!a a separa$%o !a cor inicial em outras cores, !ispostas em fai)as circulares no !ecorrer !a #arra !e gi " E interessante reali ar o e)perimento com canetas !e v(rias cores" Por e)emplo, um gi pinta!o com a cor ver!e, po!e3se visuali ar !uas fai)as, amarela e a ul" A cor preta fornece um resulta!o e)celente, com a separa$%o em !iversas cores" Cro !"ogr!#i! $ '!'$l

A Gigura @ a#ai)o ilustra a montagem e)perimental a ser reali a!a" E importante 'ue o tra$o feito com a caneta no papel fi'ue acima !o n&vel !o solvente no #ecOer" A su#i!a !o l&'ui!o no papel !eve ser o#serva!a at 'ue sePa atingi!a a altura !e AQ4 !o total e tal forma 'ue o solvente atravesse o papel na .ori ontal" Kuan!o o l&'ui!o atingir essa altura, o papel !ever( ser retira!o e e)posto ao ar para secagem" :er%o estu!a!os como eluentes a (gua !estila!a e o etanol comercial" Os resulta!os !os grupos ,ap+s

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secagem- po!em ser e)postos" 0om #ase na o#serva$%o !e to!os os cromatogramas o#ti!os pelos alunos, po!em ser propostas respostas para as perguntas: a- e)iste algum pigmento comum para as !iferentes cores4 #- os pigmentos s%o iguais nas !iferentes marcas4 etc"" E importante 'ue sePam o#serva!os os seguintes aspectos: Tintas !e cores !iferentes !e canetas !e mesmo tipo ,esferogr(ficas ou .i!rogr(ficas- e mesma marca !e caneta !evem ser su#meti!as a ca!a um !os solventes ,(gua e (lcool-" Assim, a tinta !e uma caneta esferogr(fica a ul !a marca X !eve ser estu!a!a com o (lcool e com a (gua" Tintas !e mesma cor !o mesmo tipo !e caneta, mas !e marcas !iferentes !evem ser su#meti!as a ca!a um !os solventes" Assim, uma caneta esferogr(fica a ul !a marca X e uma a ul !a marca R !evem ser compara!as utili an!o (lcool e (gua"

Figura 2. Ilustrao da montagem do sistema de cromatografia em papel.

:er%o forneci!as pelo professor outras misturas para serem estu!a!as usan!o3se am#as as tcnicas !escritas anteriormente"

5. G3O++6RIO Dissolvente: su#st6ncia ou mistura !e su#st6ncias 'ue constituem a fase m+vel na cromatografia" Em geral, empregam3se l&'ui!os com alta press%o !e vapor" Rf (fator de reteno): rela$%o ou 'uociente !as !ist6ncias percorri!as simultaneamente !es!e a origem at o centro !a manc.a !e uma su#st6ncia e at o m()imo percorri!o pelo !issolvente" Origem: ona on!e se aplica a amostra como c&rculo ou l&nea na !issolu$%o !a mescla 'ue vai se separar" Adsoro: 0oncentra$%o na superf&cie !e um s+li!o !as part&culas !e uma su#st6ncia em !issolu$%o" Eluente: !issolvente polar usa!o em cromatografia para e)trair as su#st6ncias separa!as"

7. 121RC8CIO+ ?" Por 'ue as tintas !e esferogr(ficas e !e .i!rogr(ficas t1m comportamentos !iferentes conforme o solvente emprega!oS @" Por 'ue !iferentes cores s%o o#serva!as em posi$<es !iferentes !o papelS A" O tipo !e papel3filtro emprega!o !eve influir nos resulta!osS 4" Por 'ue a (gua so#e mais lentamente !o 'ue o (lcool no papel3filtroS B" H( !ois corantes artificiais amarelos cuPo uso permiti!o em gelatinas e p+s para refrescos: amarelo crep*sculo e tartra ina" A cromatografia em papel po!eria servir para sa#er se o corante amarelo usa!o em gelatina um !esses !ois ou outroS >ustifi'ue"

"

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T" 0alcule os valores !e Rf para ca!a uma !as su#st6ncias separa!as para to!as as misturas estu!a!as nos !ois mto!os emprega!os" U" 0alcule o valor !e Rf !e uma manc.a 'ue percorre B,T cm, com uma frente !e solvente 'ue percorre ?A cm" V" 0a!a um !os solventes !a!os !evem, efetivamente, separar uma !as seguintes misturas por meio !e T/0" Ga$a a correspon!1ncia entre o solvente apropria!o e a mistura 'ue voc1 espera separar #em como esse solvente" Escol.a seu solvente entre os 'ue se seguem: .e)ano, cloreto !e metileno ou acetona" a" @3feniletanol e acetofenona #" Wromo#en eno e p3)ileno c" Fci!o #en oico, (ci!o @,43!initro#en +ico e (ci!o @,4,D3trinitro#en +ico"

9. :I:3IOGRAFIA ?" 0ON:TANTINO, M", 9A :I/CA, =" C" e 9ONATE, P" M"4 Fundamentos de Qumica Experimental" :%o Paulo: E!itora !a 5niversi!a!e !e :%o Paulo, @JJ4" @" WA00AN, N", 9E AN9RA9E, >" 0", =O9INHO, O" E" :", WARONE, >" :", Qumica Analtica Quantitativa Elementar" Aae!i$%o, :%o Paulo: E!itora E!gar! WlXc.er /t!a, @JJ?" A" G5RNI::, W" :" et all", Vogels Textbook of Practical rganic !"emistr#" BY e!i$%o, E!itora Prentice Hall, ?VUV" 4" :I/CA, R" R"4 WO00HI, N"4 RO0HA3GI/HO, R" 0", $ntrodu%&o ' Qumica Experimental" :%o Paulo: E!itora Mc=raZ3Hill, ?VVJ" B" =ON[A/CE\, 9", et all, Qumica rg(nica Experimental) ?a e!i$%o, :%o Paulo: E!itora Mc=raZ3Hill, ?VUU" D" McM5RRR, >", Qumica rg(nica" 4a e!i$%o, Rio !e >aneiro: E!itora /ivros Tcnicos e 0ient&ficos, ?VVT" T" AMWRO=I, A" e /I:WOA, >"0"G" Misturas e su#st6ncias N rea$<es 'u&micas" :%o Paulo: E!itora Ham#urg, ?VUA" U" TONIN, /"G" 0romatografia" Revista !e Ensino !e 0i1ncias" :%o Paulo, n" ?4, set" ?VUB" V" :O/OMON:, T" L" =", Qumica rg(nica" Ta e!i$%o, Rio !e >aneiro: E!itora /ivros Tcnicos e 0ient&ficos, @JJ?" ?J" MORRI:ON, R" ] WOR9, R", Qumica rg(nica" ?Aa e!i$%o, /is#oa: E!itora Gun!a$%o 0aloustre =ul#eOian, ?VVD" ??" CO/HAR9T, P" 0" ] NEI/, E", Qumica rg(nica" 4a e!i$%o, Porto Alegre: E!itora WooOman, @JJ4"