SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE CENTRO NACIONAL DE HOTELERIA, TURISMO Y ALIMENTOS LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS RECUENTRO DE COLIFORMES TOTALES Y E.

COLI
JUAN GUILLERMO CUBILLOS HINOJOSA Microbi o!o A!roi"#$%&ri' (c) MSc.

*. INTRODUCCION Co i+or,-%. Grupo de bacterias que presentan ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos. Se encuentran comnmente en las plantas, el suelo y los animales, incluyendo a los humanos. El grupo coliforme est conformado por los siguientes g neros tales como Escherichia, Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter. Escherichia coli: !acilo corto gram negativo que forma parte de la flora normal del intestino de animales de sangre caliente. Es aerobio facultativo, de metabolismo fermentativo, "#$itrofenli#%#&# galactopiransido positivo y su crecimiento ptimo es a '( )*. +lgunas cepas pueden producir entero to,inas y tiene otros factores de virulencia de coloni-acin e invasin por lo cual pueden causar enfermedades diarreicas, as como infecciones urinarias y nosocomiales. !acterias *oliformes frente a un medio *romog nico. *uando se utili-a la t cnica en-imtica, el grupo coliforme se define como toda bacteria que posea la en-ima %#& galactosidasa/ la cual tiene la propiedad de actuar sobre el substrato cromog nico, formado en la liberacin del cromgeno. /. OBJETIVOS +dquirir destre-a en la determinacin de de *oliformes totales y E. *oli 0eali-ar informe de los resultados obtenidos por la muestra anali-ada

0. MATERIALES Eosina +-ul de 1etileno 2E1!3 *a4as petri Erlenmeyer 5ubos de ensayo 1orteros +gua peptonada 6untas est riles 1icropipetas

1. METODOLOGIA 7. 5omar 78g de muestra y macerarla. En caso que la muestra sea liquida tome 78m9 en una probeta est ril. :. +gregar la muestra al Erlenmeyer que contiene ;8m9 de agua peptonada. '. 0ealice diluciones seriadas hasta 78#'. <. Siembre por duplicado todas las diluciones. =. >ncubar a '=)* ?@# 7 durante :< horas.

1uestra de 78g
;8m9 B:" 6eptonada ;m9 B:" 6eptonada

Sembrar en profundidad

+gar E1!

78#7

78#:

78#'

Fi!$r' *. E%2$-,' #- 3roc-#i,i-"&o #- r-c$-"&o #- co i+or,-% &o&' -% E.co i -" ' i,-"&o%

4. LECTURA DE RESULTADOS a3 &espu s del perodo especificado de incubacin, se cuentan las colonias coliformes caractersticas en cada ca4a que contenga no ms de 7=8 colonias, ya sean caractersticas o no, usando el equipo para el recuento de colonias. b3 Se recomienda e,aminar con atencin los elementos dudosos, empleando una lupa cuando sea necesario, con el ob4eto de diferenciar las colonias de partculas e,traAas. c) 9as colonias invasoras deben ser consideradas como una sola colonia. Si menos de un cuarto de la placa est invadida por dichas colonias, se cuentan las colonias de la parte no afectada de la placa y se calcula el nmero correspondiente a la placa entera. Si est invadido ms de un cuarto de la placa, se desecha el recuento.

5. E6PRESION DE RESULTADOS E. coli es fcilmente distinguible por el color a-ul#verdoso color de las colonias de color a-ul. El crecimiento de la voluntad de Enterobacterias como colonias 1agentas.2*olor morado o Cioleta.3 6ara coliformes totales fcilmente se distingue por el color purpura y rosados. El recuento de coliformes totales y E.coli se deben e,presar por separado. Se calcula el nmero de $ de colonias por mililitro o por gramo de producto, dependiendo del caso, usando la siguiente ecuacin.

E7-,3 o. Dn recuento de coliformes totales dio el siguiente resultado 2se incubaron dos ca4as de 6etri por dilucin3. &ilucin 78#:. E' y ;( colonias &ilucin 78#'. 7' y E colonias

El nmero estimado de coliformes totales es por lo tanto. 7,7 , 78< e,presados @g o @ml. 8. BIBILOGRAFIA >*"$5E*. 7;;(. $orma 5 cnica *olombiana $5* <<=E 1icrobiologa. Gua general para el recuento de E. Coli. 5 cnica de recuento de colonias a '= ) *. >*"$5E*. :88;$orma 5 cnica *olombiana $5* <8;:. 1icrobiologa de alimentos y productos para alimentacin animal. 0equisitos generales y directrices para anlisis microbiolgicos. >$C>1+. 7;;E. 1anual de t cnicas de anlisis para control de calidad microbiolgico de alimentos para consumo humano.