Enzimas da replicao DNA Polimerase I DNA Polimerase II DNA Polimerase III Taq Polimerase polimerase da bactria Thermus aquaticus,

, utilizada na PCR por apresentar alta resistncia a temperaturas elevadas (fazendo-a suportar a temperatura de desnaturao do DNA) Transcriptase Reversa sintetiza uma fita de cDNA a partir de uma fita de RNAm. Com isso permite a clonagem e expresso dos genes isolados Fosfatase Alkalina remove o fosfato da extrmidade 5. Isto permite que as extremidades do plasmideo fiquem separadas, facilitando a adio do gene Terminal Transferase adiciona nucleotdeos na extremidade 3OH. Atua preferencialmente em extremidades protuberantes mas pode agir em extremidade cega. Serve para marcao dessas extremidades. Adio de homopolmeros em extremidades de DNA na contruo de recombinantes (clonagem de cDNA) DNA Ligase liga fragmentos de DNA, serve para ligar uma fita de DNA no plasmideo... mais eficiente com fitas cohesivas ( extremidade no cega e complementar)

DNA Polimerase replicao sentido 5->3 e revisora no sentido 3->5 Interfase dividida em : G1 sintese protica S sntese de de DNA e centrolos G2 sntese do fuso Procarioto 1 replicon Eucarioto vrios replicons

1. 2. 3. 4. 5.

duvidas quanto hereditariedade produo de muitas cpias de macromolculas complexas? DNA 1940 molcula da hereditariedade 1953 Watson e Crick DNA dupla hlice mecanismos das enzimas de replicao e transcrio do DNA so universais

REPLICAO 1. semi-conservativa (experimento de Meselson-Stahl em 1957) [mostrar imagem do experimento] 2. duvidas, o DNA se desenrola totalmente para a replicao ocorrer? Inicia em pontos aleatrios ou tem um ponto especfico? A replicao ocorre num sentido especfico ou em ambos? 3. inicia na origem e ocorre bidirecionalmente (experimento de John Cairns em 1963) cultivo de clulas em meio com timidina marcada com trtio em emulso fotogrfica que deixou trilhas de gros de prata. Isto revelou que o DNA da Ecoli um crculo com 1,7mm de comprimento e durante a replicao apresenta uma ala extra. O experimento permitiu concluir que ambas as fitas-filhas eram sintetizadas simultaneamente e uma variao no experimento mostrou que a replicao bidirecional 4. sabia-se que a DNA Pol atuava no sentido 5 ->3, mas, olhando a grosso modo, poderia se pensar que ambas as fitas de DNA eram sintetizadas continuamente. Em 1968 Okazaki descobriu que uma das novas fitas era sintetizada em fragmentos, que foram denominados fragmentos de Okazaki , sendo a sntese contnua no sentido da forquilha de replicao e os fragmentos no sentido oposto experimento de okazaki incubou Ecoli em um meio com timina radioativa (trtio) e logo depois centrifugou as clulas em meio bsico e observou fragmentos pequenos de DNA, repetindo o experimento verificou que o tamanho do fragmento dependia do tempo de encubao. Concluiu que estes fragmentos eram a sntese na fita de sentido contrario e os denominou fragmentos de okazaki. 5. Adicionalmente foi observado que a replicao muito precisa (da ordem de 1010) o que significaria que em 1 ano de replicao constante, uma nica clula de Ecoli, alocaria apenas 1-15 nucleotideos incorretos nas 17.500 cpias que ela geraria. A DNA polimerase erra na ordem de 104, o incremento de preciso se d por mecanismos enzimticos paralelos 6. Enzimas (Replissomo): A. Nucleases (DNAses): degradam cidos nuclicos; Exonucleases agem nas extremidades da molcula e Endonucleases agem nos presentes no interior da sequencia. B. DNA polimerases: adiciona nucleotdeos na extremidade 3 da cadeia nascente de DNA.

C.