Biotecnologa en el Sector Agropecuario y Agroindustrial Vol 10 No.

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CUANTIFICACIN DE ARSNICO POR ABSORCIN ATMICA EN TERMOFORMADOS Y PELCULAS FLEXIBLES BIODEGRADABLES QUANTIFICATION OF ARSENIC BY ATOMIC ABSORPTION SPECTROMETRY IN FLEXIBLE THERMOFORMED AND BIODEGRADABLE FILMS QUANTIFICAO DE ARSNIO POR ABSORO ATMICA EM TERMOFORMADOS E PELCULAS FLEXVEIS BIODEGRADVEIS
LEIDY FERNANDA ALVIRA M.1, MAITE DEL PILAR RADA-MENDOZA2, OLGA LUCA HOYOS S.3, HECTOR SAMUEL VILLADA C.4

RESUMEN
Se determin la concentracin de arsnico en siete muestras de termoformados y seis muestras de pelculas flexibles biodegradables, por espectrometra de absorcin atmica con generador de hidruros; el mtodo de cuantificacin fue curva de calibracin a 193,7 nm. Previamente a sta cuantificacin, se optimiz el proceso de digestin cida mediante reflujo (HNO3:HClO4, relacin 3:1, 70C, 3 horas para termoformados y 45 minutos para pelculas flexibles) y se implementaron y estandarizaron los parmetros de calidad estadstica (Lmite de deteccin y cuantificacin, intervalo lineal, sensibilidad de calibracin, precisin y exactitud). Los resultados obtenidos fueron analizados empleando el paquete estadstico SPSS.

Recibido para evaluacin: 15/10/2011. Aprobado para publicacin: 16/03/2012 1 2 3 4 Estudiante de Qumica, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la Educacin, Universidad del Cauca. Qumica, Magster en Qumica, Dr. en Ciencias Qumicas. Universidad del Cauca, Docente Titular Departamento de Qumica. Grupo BICAMSA. Lic. en Qumica, Magster en Qumica, Dr. en Ciencias Qumicas. Universidad del Cauca, Docente Titular Departamento de Qumica. Grupo QPN. Ingeniero, Dr. en Ingeniera con nfasis en alimentos. Universidad del Cauca, Docente Titular Departamento de Ing. Agroindustrial. Grupo CYTBIA.

Correspondencia: mrada@unicauca.edu.co.

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Las concentraciones de arsnico en termoformados fueron detectables en el rango de las partes por billn mientras que las pelculas flexibles fueron no detectables. Hoy en da, no existe una normativa vigente que establezca los valores permitidos de Arsnico para los biopolmeros analizados.

ABSTRACT
The arsenic concentration of seven thermoformed and six biodegradable flexible films samples were evaluated by atomic absorption spectrometry with generator hydride; the calibration curve at 193,7 nm was the quantification method. Before the experiments, the acid digestion with reflux was optimized (HNO3: HClO4, ratio 3:1, 70C, 3 hours for thermoformed and 45 minutes for flexible films) and the statistical quality parameters were implemented and standardized (detection and quantification limit, linear range, calibration sensitivity, precision and accuracy). The results were analyzed using SPSS. Arsenic concentrations in thermoformed were detectable in the order of parts per billion whereas flexible films were not detectable. Today, there is no current legislation to establish the permissible values of arsenic for the biopolymers analyzed.

PALABRAS CLAVES: Materiales biodegradables, Yuca, Espectrometra de absorcin atmica. KEYWORDS: Biodegradable materials, Cassava, Atomic absorption spectrometry PALAVRAS CHAVE: Biodegradveis, Mandioca, Espectrometria de absoro atmica.

RESUMO
Determinou-se a concentrao de arsnio em sete amostras de termoformados e seis amostras de pelculas flexveis biodegradveis, por espectrometria de absoro atmica com gerador de hidretos. O mtodo de quantificao foi por Curva de Calibrao a 193,7nm. Previamente a esta quantificao, otimizou-se o processo de digesto cida mediante refluxo (HNO3:HClO4, relao 3:1, 70C, 3 horas para termoformados e 45 minutos para pelculas flexveis) implementando e padronizando os parmetros de qualidade estatstica (Limite de deteco e quantificao, intervalo linear, sensibilidade de calibrao, preciso e exatido). Os resultados obtidos foram analisados empregando o pacote estatstico SPSS. As concentraes de arsnio em termoformados foram detectveis no intervalo das partes por milho enquanto as pelculas flexveis no foram detectveis. Hoje em dia, no existe uma normativa vigente que estabelea os valores permitidos de Arsnio para os biopolmeros analisados.

INTRODUCCIN
La elaboracin de termoformados y pelculas flexibles biodegradables a partir de compuestos naturales, ha venido desarrollndose como una novedosa y amigable alternativa industrial, cuyo objeto principal es el de sustituir los plsticos sintticos de origen petroqumico que actualmente usamos, ya que estos una vez desechados al medio ambiente, no se degradan y pueden pasar

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muchos aos sin que sean afectados por el entorno, causando as un gran problema ambiental [1, 2, 3], al cual se suma tambin la tendiente disminucin de los recursos del petrleo; lo anterior, ha incrementado la conciencia hacia la eco-amistad, cuyo inters consiste en maximizar el uso de materiales renovables a partir de los compuestos naturales [3, 4] que se emplearn para la elaboracin de productos biodegradables y que se caracterizan porque presentan una rpida y fcil degradacin, y no producen residuos, causando un impacto favorable para los diferentes ecosistemas ambientales [3, 5]. Las materias primas (harina y almidn de yuca, fibra de fique, cido polilctico, glicerol, entre otros) utilizadas para la fabricacin de estos polmeros biodegradables deben ser no txicas, con adecuadas propiedades fsicas, qumicas, organolpticas y de degradabilidad, ya que el producto final, empleado para contener y envolver productos alimenticios, debe ser ambientalmente asimilable y amigable. Sin embargo, durante la obtencin de la materia prima y/o en los procesos de manufactura de estos polmeros (figura 1), pueden adquirir una posible contaminacin [4, 6, 7, 8] con metales pesados txicos, como el arsnico. En el caso de la materia prima (harina y almidn de yuca, fibra de fique), el arsnico puede proceder de forma natural del suelo de las actividades agrcolas (provenientes de las lluvias radiactivas atmosfricas, la contaminacin por fertilizantes qumicos y el riego con agua de mala calidad) [9, 10, 11, 12], mientras que durante la manufactura de los biopolmeros, se puede producir una contaminacin cruzada debido al desgaste de la maquinaria (tornillo sin fin, mezclador, extrusor, entre otros), lo que puede provocar la migracin de posibles trazas del metal que est presente en dichos equipos (debido a las aleaciones empleadas en la industria metalrgica con el fin de mejorar las propiedades mecnicas) a los biopolmeros (termoformados y pelculas flexibles) [7, 8]. El arsnico es un metal pesado txico y peligroso, que puede causar graves daos en los organismos vivos como son las modificaciones en los mecanismos moleculares y en la conformacin activa de biomolculas [13, 14]; adicionalmente, no es biodegradable y permanece durante mucho tiempo en el entorno, bioacumulndose en los seres vivos al no ser metabolizado [9, 10]. La

Figura 1. Elaboracin de Termoformados (Moldeo por compresin) y pelculas flexibles (Extrusin).

presencia de elevadas cantidades de este metal (del orden de los mg/Kg, aunque no hay norma vigente que estipule el nivel mximo permitido) en los biopolmeros, afectara la calidad de los mismos, ya que adems causara efectos nocivos en los ecosistemas, siendo esto un factor a tener en cuenta como riesgo en la salud pblica, ya que por los usos futuros del polmero biodegradable, este puede entrar en las cadenas alimenticias, debido a la migracin que se pueda presentar [15]. Teniendo en cuenta el problema que puede surgir con la presencia de As en los nuevos polmeros biodegradables, el presente estudio tuvo como finalidad cuantificar el arsnico en las muestras de termoformados y pelculas flexibles biodegradables, llevando a cabo la estandarizacin del mtodo de absorcin atmica con generador de hidruros, con la optimizacin de la digestin cida con reflujo. Adems, con el fin de determinar la procedencia del As presente en los biopolmeros, con el fin de mejorar la calidad de dichos productos, tambin se cuantific este metal en las materias primas (harina de yuca y fibra de fique).

MTODO Muestra.Los termoformados (MBRA-383, MPER-183, CM 523-7, CM 7951-5, CM 4574-7, NATAIMA 31, HMC 1) y las pelculas flexibles (SM 707-17 nativo e hidrolizado, SM 1498-4 nativo e Hidrolizado, CM 7138-7 nativo e hidrolizado) biodegradables analizados, fueron elaboradas en el laboratorio de Reologa por el grupo CYTBIA de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad del Cauca.

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Preparacin de la muestra.Todas las unidades de

cada muestra se llevaron a un tamao ms pequeo mediante el empleo de mtodos mecnicos de macerado (termoformados) y ruptura manual (pelculas flexibles), como se muestra en la figura 2; se conform una muestra compuesta con el fin de obtener una mayor eficiencia en el proceso de digestin [16].

de recuperacin, adicionando cantidades conocidas de un estndar de arsnico (1000 g/L) a la muestra (CM 4574-7) antes del proceso de digestin [21]. Adicionalmente, se evalu la estabilidad de un estndar de 8,0 g/L de arsnico y de una muestra de termoformado (CM 4574-7), durante siete das.

Digestin cida con reflujo, Previamente a la

realizacin del proceso de digestin, se optimiz el peso de la muestra (0,5, 1,0 y 2,0 g de termoformados y pelculas flexibles en 20 mL de cido); posteriormente, la proporcin (0:1, 1:0, 1:1, 1:3 y 3:1) en la mezcla de cidos (HNO3:HClO4), la temperatura (35, 50 y 70C) y el tiempo (30 y 45 minutos y 1, 2 y 3 horas) de digestin. Una vez digestadas las muestras, se filtraron a travs de un crisol de filtracin (vidrio Schott Duran porosidad 2), y se almacenaron en recipientes de polietileno a 4C para su anlisis posterior por absorcin atmica (Thermo AA S4) [9, 17, 18].

Cuantificacin de Arsnico.Para la determinacin

de arsnico, se emple un espectrmetro de absorcin atmica (Thermo AA S4) con generador de hidruros (VP100). La atomizacin se realiz en una celda T de cuarzo y con llama de aire-acetileno a una longitud de onda de 193,7 nm, velocidad de flujo del gas Nitrgeno de 200 mL/min, ranura de 0,5 nm y altura de mechero de 15,0 mm. 300 L de cido sulfmico al 10% (p/v) fueron adicionados para disminuir el grado de interferencia en las muestras y patrones; la reduccin fue realizada con borohidruro de sodio al 0,5% (m/v) en hidrxido de sodio al 0,5% (m/v) y cido clorhdrico al 10% v/v fue la matriz. La cuantificacin de arsnico se realiz por el mtodo de curva de calibracin, usando un estndar puro comercial de arsnico (Merck), a partir del cual se prepararon 8 patrones en el rango de 2,0 a 20,0 g/L en una solucin de HCl al 1,0%. Todos los anlisis fueron realizados por triplicado y los valores corresponden a las concentraciones promedio en partes por billn.

Estandarizacin del mtodo analtico. Para

calcular el lmite de deteccin (LD) y el lmite de cuantificacin (LC), se prepararon tres curvas de calibracin, obtenindose la desviacin estndar del intercepto (Sb) y el promedio de las pendientes [19, 20]. Para evaluar el intervalo lineal, se prepar una curva de calibracin en el intervalo de concentraciones de 2,0 a 50,0 g/L, partiendo de un estndar de arsnico comercial de 1000 g/L (Merck). La sensibilidad de calibracin se determin por la pendiente de la curva de calibracin. La precisin se evalu a dos niveles: la precisin intermedia, que se analiz con ocho curvas de calibracin durante ocho das consecutivos y la repetibilidad, que se analiz con la preparacin de cinco curvas de calibracin ledas el mismo da. La exactitud del mtodo de extraccin se evalu como el porcentaje
Figura 2. Preparacin de las muestras de termoformados y pelculas flexibles.

Estadstica. Los datos de estandarizacin e

implementacin se analizaron con el programa estadstico SPSS (versin 11,5) para Windows. Se aplicaron las pruebas de Shapiro-Wilk y Levene, ANOVA de un factor, la correlacin de Pearson, el coeficiente de determinacin y el anlisis de relacin para cada una de las curvas de calibracin preparadas [22].

RESULTADOS Digestin cida. Los nuevos biopolmeros

(termoformados y pelculas flexibles) que se elaboraron en el grupo de investigacin CYTBIA y que son analizados en este trabajo, estn compuestos principalmente por materia orgnica (harinas y almidones de yuca, fibra de fique, etc), la cual interfiere en la determinacin de As, debido a que el metal puede estar incrustado en el polmero interactuando con l [11], lo que dificulta su

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liberacin y posterior determinacin. Por tal razn, fue necesario realizar una digestin hmeda optimizada en presencia de HNO3 y HClO4 a diferentes condiciones. Se encontraron diferencias significativas (p<0,05) en la cantidad de arsnico con la variacin en la relacin de la mezcla de los cidos a la misma temperatura, siendo mayor la concentracin con la relacin 3:1 a 70C. El proceso de digestar 0,5 g de muestra a 35 y 50C, durante 1 y 2 horas de calentamiento, no fue suficiente para conseguir la destruccin completa de la materia orgnica; igual sucedi para todas las temperaturas con 2,0 g de muestra de termoformado, mientras que muy bajas cantidades de arsnico fueron encontradas cuando se emple 0,5 g de muestra a 70C. No se encontraron diferencias significativas en la cantidad de arsnico, cuando se emple 1,0 y 2,0 g de muestra de pelculas flexibles. Por tanto, el reflujo fue realizado con HNO3:HClO4 en una relacin 3:1, a 70C durante 3 horas para los termoformados y 45 minutos para las pelculas flexibles.

Figura 3. Curva de calibracin obtenida para el intervalo lineal.

Figura 4. Curva de calibracin obtenida para: (a) Precisin Intermedia, (b) Repetibilidad

a)

Estandarizacin del mtodo analtico. Se

determinaron los parmetros de calidad estadstica (lmite de deteccin y de cuantificacin, intervalo lineal, sensibilidad de calibracin, precisin y exactitud), que establecen el rendimiento del mtodo para poder cuantificar el arsnico en cada una de las muestras de termoformados y pelculas flexibles. El lmite de deteccin del arsnico fue de 0,65 g/L, calculado como la cantidad necesaria para obtener un valor de 3 en la relacin seal/ruido. El lmite de cuantificacin, calculado como la cantidad necesaria para obtener un valor de 10 en la relacin seal/ruido fue de 1,96 g/L. Como se observa en la figura 3, la curva de calibracin del arsnico fue lineal en el rango de concentraciones de 2,0 a 50,0 g/L. La ecuacin de la recta promedio se muestra en la ecuacin 1, donde y es la absorbancia y x la concentracin, con un valor de r de 0,999. y = 0,00262x 0,00043 (Ec. 1) La precisin intermedia (Figura 4.a), fue evaluada por la inyeccin de los estndares de las ocho curvas de calibracin obtenidas durante ocho das consecutivos, que al evaluarse estadsticamente aplicando las pruebas de Shapiro Wilk, Levene y el ANOVA de un factor, muestran que no hay diferencias significativas entre b)

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Figura 5. Estabilidad durante 7 das de tres rplicas de: (a) Estndar de 8,0 g/L de As, (b) Termoformado (CM 4574-7)

En todos los casos, las desviaciones estndar relativas, fueron inferiores a 0,00154 g As/L La sensibilidad analtica del mtodo est dada por la pendiente de calibracin, que en este caso son 0,00429 y 0,00361 para la repetibilidad y la precisin intermedia, respectivamente; lo anterior indica que para el mtodo se obtiene mayor sensibilidad cuando se trabaja el mismo da. En la figura 5, se representa la estabilidad del estndar de 8,0 g/L de arsnico y del termoformado CM 45747, demostrando estadsticamente que hay estabilidad en el estndar analizado durante siete das, con una concentracin promedio de 8,2240,171 g/L, mientras que el termoformado CM 4574-7 no present estabilidad, lo que se atribuye a que la concentracin de arsnico presente en la misma est por debajo del lmite de cuantificacin. Como se muestra en la el cuadro 1, la exactitud del mtodo, incluyendo la digestin, preparacin de la muestra y anlisis por absorcin atmica, evaluada como el porcentaje de recuperacin de arsnico, fue realizado mediante la adicin de cantidades conocidas de un estndar de arsnico (1000 g/L) a la muestra digestada de termoformado (CM 4574-7). El rango fue 96,67 a 100,77% (con una desviacin estndar relativa inferior a 4,81).

a)

b)

Cuadro 1. Porcentaje de Recuperacin de Arsnico (g/L) en el anlisis de termoforma Cantidad en la muestra (g)

Cantidad adicionada (L)

Cantidad detectada (g/L)

Recuperacin (%)

Implementacin y cuantificacin de arsnico

CV (%)

1,0007 1,0013 1,0015

80 160 240

4,189 5,393 8,242

100,77 96,67 97,17

4,77 4,55 0,94

ellas, obteniendo as, la ecuacin de la recta promedio (Ecuacin 2) con un valor de r de 0,999. y = 0,00361x 0,00003 (Ec. 2)

Una vez estandarizada la tcnica analtica por absorcin atmica para la determinacin de arsnico en los biopolmeros, se realiz la implementacin; en el cuadro 2 se presentan las concentraciones estimadas de arsnico en g/L determinadas en los termoformados biodegradables analizados, determinndose que sta cantidad de arsnico es inferior al lmite de cuantificacin, es decir, que su concentracin al nivel de trazas es detectable ms no cuantificable. En las pelculas flexibles no se detect la presencia de arsnico, como se muestra en el cuadro 3. Para conocer la procedencia de esta concentracin de arsnico, se realiz la determinacin de este elemento en las materias primas (harinas y fibra de fique) de cada uno de los termoformados. En el cuadro 4, se muestran

La repetibilidad del mtodo completo (Figura 4.b), incluyendo la digestin, preparacin de la muestra y anlisis por absorcin atmica, fue determinado analizando cinco curvas de calibracin obtenidas en el mismo da. No se obtuvieron diferencias significativas entre los estndares.

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Cuadro 2. Concentracin promedio ( s) de As (N=3) en muestras de termoformados biodegradables.

Termoformado
MBRA-383 MPER-183 CM 523-7 CM 7951-5 CM 4574-7 NATAIMA 31 HMC 1

Concentracin (g/L)
1,528 0,082 1,430 0,117 1,625 0,117 1,029 0,045 1,677 0,112 1,107 0,081 1,884 0,184

CV (%) 5,40 8,15 7,17 4,36 6,69 7,31 9,75

el arsnico puede llegar a stas materias primas por las formulaciones de plaguicidas, la contaminacin por fertilizantes qumicos, el riego con agua de mala calidad, y por la contaminacin cruzada del aire [7, 9, 10, 11]; sin embargo, aunque no hay reporte de anlisis de metales pesados en este tipo de muestras o en muestras similares, los valores encontrados indican que estos materiales no sern txicos y podrn ser empleados como envolventes y contenedores de alimentos sin riesgos para el consumidor.

Cuadro 3. Concentracin promedio ( s) de As (N=3) en muestras de pelculas flexibles biodegradables.

CONCLUSIONES
El mtodo descrito en este ar tculo es adecuado para la determinacin de arsnico en muestras de termoformados y pelculas flexibles biodegradables. Los parmetros de calidad estadstica determinados como el lmite de deteccin y de cuantificacin, sensibilidad de calibracin, precisin y exactitud, permitieron obtener un mtodo analtico estandarizado, sensible y preciso, el cual nos da un criterio de confianza para su implementacin en la determinacin de arsnico en polmeros biodegradables. Las trazas de arsnico cuantificadas en los termoformados y materias primas son muy bajas, del orden de g/L, y por tanto, no habr incidencia del metal en el material elaborado; sin embargo, se debe tener un especial cuidado con la obtencin y manipulacin de la materia prima, ya que la presencia de trazas de arsnico en los termoformados, es atribuida principalmente a la harina de yuca.

Pelculas Flexibles
SM 707-17 Nativo SM 707-17 Hidrolizado SM 1498-4 Nativo SM 1498-4 Hidrolizado CM 7138-7 Nativo CM 7138-7 Hidrolizado

Concentracin (g/L)
No detectable No detectable No detectable No detectable No detectable No detectable

CV (%) -------------

Cuadro 4. Concentracin promedio ( s) de As (N=3) en las muestras de materia prima.

Muestra (harinas)
MBRA 383 MPER 183 CM 523-7 CM 7951-5 CM 4574-7 NATAIMA 31 HMC 1 Fibra de Fique

Concentracin (g/L) 1,055 0,045 No detectable No detectable 1,016 0,147 No detectable 0,835 0,059 1,068 0,022 No detectable

CV (%)
4,25 14,5 7,11 2,10 -

AGRADECIMIENTOS
las concentraciones estimadas de arsnico en MBRA 383, CM 7951-5, NATAIMA 31 y HMC 1. Los resultados mostrados en los cuadros 2 y 4, reportan una concentracin estimada de arsnico para los termoformados, al igual que con el arsnico no cuantificable presente en las harinas MBRA 383, CM 7951-5, NATAIMA 31 y HMC 1. En este caso, se podra inferir que el arsnico encontrado en los termoformados (trazas menores a 1,96 g/L), proviene de las materias primas, principalmente de las harinas de yuca con las que se han fabricado estos biopolmeros; se cree que A la Universidad del Cauca (Laboratorios de BICAMSA, QPN, Reologa), al Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural y al CREPIC, por la financiacin de los proyectos que enmarcan este trabajo.

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