FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO INFORME BIOQUMICA

Abstract: Este informe recoge diferentes procesos utilizados y datos obtenidos, con el fin de estudiar los factores que afectan la actividad enzimtica y conocer la condiciones adecuadas para la ptima activacin de la enzima e inactivacin ,se expuso a la enzima amilasa termfila a diferentes condiciones extremas de temperatura y pH, , en el ptimo desarrollo de este laboratorio, se obtuvieron resultados esperados, a una temperatura de 0C con lugol (positivo, logra activacin desde el inicio) fehling (negativo), a 50C con lugol(activacin mas demorada), fehling(negativo), a 90C lugol(activo por unos minutos, luego inactivacin), fehling(positiva por poco tiempo, hasta inactivacin), a pH 6.5 lugol(positivo), fehling(negativo), a pH 8 lugol(positivo despus de cierto tiempo), fehling(positivo por cierto tiempo), a pH 10 lugol(mas demorada la activacin), fehling(resultado positivo ms duradero ), concluyendo que es una enzima termfila al trabajar a altas temperaturas an, por el contrario el pH la afecta ms.

INTRODUCCIN

En la prctica de laboratorio realizada de factores que afectan la actividad enzimtica, se buscaba conocer las condiciones adecuadas de activacin de la enzima e inactivacin, esto se hizo por medio de prcticas experimentales en las cules se expona a la enzima -amilasa termfila(figura 1), a diferentes condiciones extremas de temperatura y pH, alterando la estructura de esta enzima, obteniendo resultados especficos y confirmando la mayora de las hiptesis, comprobando la poca afectacin de la temperatura y la mayor afectacin del pH sobre la enzima.

Las amilasas son enzimas dependientes de cloruro, completamente funcionales en ausencia de iones de cloruro. Actan a lo largo de cualquier punto de la cadena de los carbohidratos, descomponindolos en dextrina desde la amilopectina. Dado que puede actuar en cualquier punto de la cadena es ms rpida que la -amilasa. En los animales es una enzima digestiva mayor y su pH ptimo est entre 6.7 y 7.2. Es sensible a una acidez elevada y se vuelve inactiva a pH 3,3 o a pH menor, a 0C por 15 min. El pH

ptimo de accin est dentro del rango 5-7, siendo de 6,5 para la alfa-amilasa bacteriana y pancretica el ms ptimo. La

enzima es resistente al calor, pues a 70C conserva un 70% de su actividad. Acta sobre almidones crudos y gelatinizados.

Fig.(1) MATERIALES Y METODOS Efecto de la temperatura en la reaccin, pH constante 6,5. Efecto de la temperatura en la reaccin a 0C Para este ensayo de afectacin trmica a la enzima -amilasa a 0C, se utilizaron diez(10) tubos de ensayo, un vaso de precipitados, y un gotero. En los tubos de ensayo se agregaron aproximadamente diez(10) mL de almidn, dos(2) mL de solucin de buffer pH 6,5 y se incubaron durante cinco(5) minutos, posteriormente adicionando tres(3) gotas de solucin amilasa en CaCl2 , al estar en incubacin se iba sacando de acuerdo a los tiempos un(1) mL de la solucin amilasa, para las pruebas de lugol y fehling, cada uno fue distribuido 0,5 mL, y fueron distribuidos segn los tiempos (0,1,2,5,10) minutos, para fehling se deba hacer el procedimiento de siempre, por 7 minutos en ebullicin, posteriormente se procedi a anotar las coloraciones, deduciendo a lugol(positivo) y fehling(negativo).

Efecto de la temperatura en la reaccin a 50C Para este ensayo de afectacin trmica a la enzima -amilasa a 50C, se utilizaron diez(10) tubos de ensayo, un vaso de precipitados, y un gotero. En los tubos de ensayo se agregaron aproximadamente diez(10) mL de almidn, dos(2) mL de solucin de buffer pH 6,5(ptimo) y se incubaron durante cinco(5) minutos, posteriormente adicionando tres(3) gotas de solucin amilasa en CaCl2 , al estar en incubacin se iba sacando de acuerdo a los tiempos un(1) mL de la solucin amilasa, para las pruebas de lugol y fehling, cada uno fue distribuido 0,5 mL, y fueron distribuidos segn los tiempos (0,1,2,5,10) minutos, para fehling se deba hacer el procedimiento de siempre, por 7 minutos en ebullicin, posteriormente se procedi a anotar las coloraciones, deduciendo a lugol(positivo) y fehling(negativo).

Efecto de la temperatura en la reaccin a 90C Para este ensayo de afectacin trmica a la enzima -amilasa a 90C, se utilizaron diez(10) tubos de ensayo, un vaso de precipitados, y un gotero. En los tubos de ensayo se agregaron aproximadamente diez(10) mL de almidn, dos(2) mL de solucin de buffer pH 6,5(ptimo) y se incubaron durante cinco(5) minutos, posteriormente adicionando tres(3) gotas de solucin amilasa en CaCl2 , al estar en incubacin se iba sacando de acuerdo a los tiempos un(1) mL de la solucin amilasa, para las pruebas de lugol y fehling, cada uno fue distribuido 0,5 mL, y fueron distribuidos segn los tiempos (0,1,2,5,10) minutos, para fehling se deba hacer el procedimiento de siempre, por 7 minutos en ebullicin, posteriormente se procedi a anotar las coloraciones, deduciendo a lugol(positivo) durante un tiempo hasta que la enzima se inactiv y fehling(positivo) hasta inactivacin al minuto dos(2). Efecto del pH en la reaccin, temperatura constante a 50C Efecto del pH en la reaccin buffer pH 8 Para este ensayo de afectacin del pH a la enzima -amilasa a 50C, se utilizaron diez(10) tubos de ensayo, un vaso de precipitados, y un gotero. En los tubos de ensayo se agregaron aproximadamente diez(10) mL de almidn, dos(2) mL de solucin de buffer pH 8 y se incubaron durante cinco(5) minutos, posteriormente adicionando tres(3) gotas de solucin amilasa en CaCl2 , al estar en

incubacin se iba sacando de acuerdo a los tiempos un(1) mL de la solucin amilasa, para las pruebas de lugol y fehling, cada uno fue distribuido 0,5 mL, y fueron distribuidos segn los tiempos (0,1,2,5,10) minutos, para fehling se deba hacer el procedimiento de siempre, por 7 minutos en ebullicin, posteriormente se procedi a anotar las coloraciones, deduciendo a lugol(positivo), un poco demorada la reaccin y fehling(positivo), de igual forma que lugol retardada la reaccin.

Efecto del pH en la reaccin buffer pH 10

Para este ensayo de afectacin del pH a la enzima -amilasa a 50C, se utilizaron diez(10) tubos de ensayo, un vaso de precipitados, y un gotero. En los tubos de ensayo se agregaron aproximadamente diez(10) mL de almidn, dos(2) mL de solucin de buffer pH 10 y se incubaron durante cinco(5) minutos, posteriormente adicionando tres(3) gotas de solucin amilasa en CaCl2 , al estar en incubacin se iba sacando de acuerdo a los tiempos un(1) mL de la solucin amilasa, para las pruebas de lugol y fehling, cada uno fue distribuido 0,5 mL, y fueron distribuidos segn los tiempos (0,1,2,5,10) minutos, para fehling se deba hacer el procedimiento de siempre, por 7 minutos en ebullicin, posteriormente se procedi a anotar las coloraciones, deduciendo a lugol(positivo), con mucha ms demora en la reaccin y fehling(positivo), de igual forma que lugol retardada la reaccin.