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tous les groupes : CM mercredi 16h45-18h15 Groupe D : TD mercredi 9h45-11h15 TP - lundi 15h-18h15 (MI) TD mardi 13h15-14h45 (FV) TP mercredi

edi 8h00-11h15 (MI) TD lundi 11h30-13h00 (FV) TP mardi 8h00-11h15 (FV) TD lundi 13h15-14h45 (SG) TP vendredri 15h45-18h15 (MI) la semaine prochaine dans deux semaines

Groupe G :

Groupe E :

Groupe F : Dbut des TD : Dbut des TP :

Biotechnologies Vgtales
Les Techniques in vitro

CLONAGE VEGETALE

PLAN
Introduction : Rappels sur la multiplication des plantes Rappels sur les pratiques horticoles Pourquoi a-t-on besoin de la culture in vitro ? La culture in vitro pour le clonage vgtale : Etapes de culture Techniques de multiplication (exemples) Rendements Qualits de la plante produite Avantages et Inconvnients Aspect Economiques Autres applications de la culture in vitro : Conservation des ressources gntiques (cryoconservation) Assainissement Haplodiplomthodes Leve de dormances Sauvetages d embryons Production de diffrentes substances Aide la transgense

Introduction / Rappel sur la multiplication des plantes

1 ) Multiplication sexue 2 ) Multiplication vgtative Multiplication vgtative par voie mristmatique -Bulbes (a) , -Rhizomes (b), -Stolons (c). Multiplication par voie non mristmatique - Tissus sans bourgeons (d), -Graine (e).

Introduction / Rappel sur la multiplication des plantes


La vie sexuelle des vgtaux est trs complique,...
Type de fleurs Mode de reproduction
Autofcondation

Types de varits

Lignes

Hermaphrodisme

Allofcondation Monocie Diocie Autre

Populations, Clones, hybrides

Introduction / Rappel sur la multiplication des plantes

** *

Multiplication a)

Introduction / Rappel sur la multiplication des plantes

Bulbes ariens, ex :ail

Bulbe arien d' Ornithogalum longibracteatum,

Bulbilles souterraines cailleux (tulipe)

Multiplication b)

Introduction / Rappel sur la multiplication des plantes


Propagules des hpatiques. Marchandia polymorpha

Stolons - tiges

Fraisier

Chlorophytum

Tubercules , ex : pomme de terre

Multiplication c)

Introduction / Rappel sur la multiplication des plantes


Par Rhizomes

Iris
Canne sucre

Multiplication d)

Introduction / Rappel sur la multiplication des Kalanchoe daigremontiana plantes

Diffrentes Crassulaces

Saint-Paulia

Bgonia

Multiplication e)

Introduction / Rappel sur la multiplication des plantes


Apomixie au sens strict = formation dune graine sans fcondation Phnomme assez rare : moins de 0,1% des plantes

Graine supplmentaire

Orange

Pissenlit

Introduction / Rappel sur les pratiques horticoles


1 ) Optimiser la multiplication sexue (a) 2 ) Optimiser la multiplication vgtative Bouturage (b) Marcottage (c) Division de touffe (d) Greffage (e)

sexu (a)

Introduction / Rappel sur les Pratiques Horticoles


Cas de la reproduction sexue : La gamtogense, la pollinisation, la nouaison sont les priodes les plus cruciales pour ltablissement dun rendement agricole. (Anne fruit,) Produire dans des conditions dfavorables : plus tt, plantes dorigine tropicales Exemple la culture sous serre. Suret du rendement - Moins dalas climatiques Augmentation du rendement conditions optimales

Chauffage des serres

Eclairage des serres

Utilisation dinsectes

Slection Pollen ++

Slection parthnocarpie

Bouturage (b)

Introduction / Rappel sur les Pratiques Horticoles

Applicable de nombreuses espces

Bouturage (b)

Introduction / Rappel sur les Pratiques Horticoles


Exemple de lutilisation des rejets :cas du bananier Rejet

Bulbe

illetons (rejet dormant)

racine
Un quartier de bulbe

Toilettage du bulbe dsinfection

"clat de souche".
La multiplication vgtative du bananier exploite le fait que la tige souterraine produit des bulbes aux centres desquels s'initie la feuillaison d'abord puis la floraison de rejets. Le pourtour du bulbe continue durant ce temps sa propre croissance de tige en se ramifiant partir d'une grande quantit d'oeilletons issus de bourgeons se dveloppant l'aisselle d'cailles ou "feuilles" souterraines et prenant racines.

Bouturage (b)

Introduction / Rappel sur les Pratiques Horticoles


Exemple de lutilisation des rejets :cas du bananier propagateur Angle vers le haut

Ici 3 plantules issues mme clat

Marcottage (c)

Introduction / Rappel sur les Pratiques Horticoles

Marcottage arien

Marcottage souterrain

Division de touffe (d)

Introduction / Rappel sur les Pratiques Horticoles

Verveine de Madagascar

Greffage (e)

Introduction / Rappel sur les Pratiques Horticoles

Greffon= clone de la bonne varit Qualits gustatives et esthtiques du fruit Rsistances aux maladies foliaires Point de greffe. Le porte greffe doit tre compatible mais pas trop Effet nanisant. Toutes les espces ne sont pas compatibles Porte-greffe (plante +/- sauvage) Gnralement issus de semis (bon systme racinaire / bouture). Htrogne. Rsistant aux pathognes du sol Rsistant aux lments dfavorables du sols (calcaires, hydromorphes,)

Greffage (e)

Introduction / Rappel sur les Pratiques Horticoles

Greffage de lavocatier

Greffage (e)

Introduction / Rappel sur les Pratiques Horticoles

Greffage du manguier en couronne

Greffage (e)

Introduction / Rappel sur les Pratiques Horticoles

Greffage du citrus en cusson

Introduction / pourquoi aa-t-on besoin de la multiplication in vitro ?


Dans leur globalit les plantes ont : 1. Des capacits de reproduction sexue trs importantes / 1 plantes peut produire des milliers de graines. 2. Des capacits de multiplications vgtatives importantes. Pratiques horticoles permettent de : 1. Maintenir une reproduction sexue dans des conditions difficiles. 2. Augmenter le potentiel de reproduction vgtative des plantes. Prof est fou

NON CAR LAGRICULTURE MODERNE A UN ENORME BESOIN DE CLONES !!!

Introduction / pourquoi aa-t-on besoin de la multiplication in vitro ?


Lagriculture moderne est mcanise. Il faut que : La tailles des semences et la leve des graines soient identiques. semoirs, contrainte du calendrier une semaine prs (crales dhiver) Le dveloppement des plantes se fasse la mme vitesse. certains traitements (phytosanitaire, engrais, hormones) doivent se faire des stades prcis du dveloppement de la plante Les fruits/graines soient maturit en mme temps. pour faciliter les rcoltes Les produits rcolts soient homognes. pour respecter les cahiers des charges et les rgles du march. Il faut donc que tous les individus dans un champs (une varit un cultivar) soient identiques

Introduction / pourquoi aa-t-on besoin de la multiplication in vitro ?


Varits homognes
Ligne Pure A b A b Hybride F1 A b A b a a B B CIV Varit clonale A B a b

parent

parent

autofcondation Varit 100% A b A b

croisement Varit 100% a B A b

CIV Multiplication vgtative Varit 100% A b A b

Varit homogne formes dindividus homozygotes Cas des plantes autogames multiplies par graines

Varit homogne formes dindividus htrozygotes Cas des plantes allogames multiplies par graines

Varit homogne formes dindividus homozygotes Cas des plantes autogames multiplies par graines

Intrt de la CIV : une multiplication vgtative supersuper-efficace

La culture in vitro pour le clonage vgtal / Les diffrentes tapes


Stade 0 : slection est prparation de la plante mre Quelle plante ?, Quel explant (avec ou sans bourgeon) ? Stade 1 : tablissement de la culture aseptique Strilisation des explants, milieu de culture autoclav, travail sous hotte flux laminaire Stade 2 : amplification de la propagules Possibilits techniques, Efficacit, Cot, Qualit (limitation des erreurs), Stade 3 : Etablissement de la plante in vitro pour son transfert en sol Possibilits denracinement, qualit, Stade 4 : Acclimatation en sol Sevrage des plantules

La culture in vitro pour le clonage vgtal / Les diffrentes tapes

La culture in vitro pour le clonage vgtal / Les Techniques de multiplication

Utilisation de bourgeons existants : Single node culture, Axillary bud branching, Cas particulier. Utilisation de tissu sans bourgeons : Noformation de bourgeon, embryogense somatique, (voir TD)

La culture in vitro pour le clonage vgtal / Les Techniques de multiplication

Coefficient de multiplication faible : si 3 entrenoeud/ explant , coefficient de multiplication : 3n avec n = nombre de cycles) Multiplication fiable

Single node culture Utilisation de bourgeons existants