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Universidad Francisco Marroqun Facultad de Medicina Fisiologa Humana I Primera Unidad Dra.

Dora Beatriz Molina

Prctica de Laboratorio No. 1 Fenmenos Osmticos en las Clulas

Jose Carlos Alburez Carlos Arroyave Madelaine Castellanos Mara Alejandra Kuan Paola Martinez Santiago Prieto Tien Chen Tu Seccin B

No. 20120037 No. 20120065 No. 20120312 No. 20120037 No. 20120105 No. 20100139 No. 20120044

Fecha de Realizacin y Fecha de Entrega: 2014 Ene 22 / 2014 Ene 29

Cuestionario 1. Defina el trmino movimiento browniano El movimiento Browniano es el movimiento irregular, errtico y espontneo de partculas pequeas suspendidas en liquido o gas, es causado por un bombardeo de las partculas por molculas del medio. Observado por primera vez por Robert Brown en 1827.

2. Cmo influye la temperatura en la velocidad de difusin? La difusin es un proceso aleatorio impulsado por el movimiento trmico de las molculas. Se utiliza la primera ley de Fick para calcularlo, donde se toma en cuenta la energa termal de una molcula. Las velocidades de difusin son altas en altas temperaturas. A mayor temperatura, ms choque habr entre las molculas, disminuyendo as su viscosidad y aumentando la taza de difusin.

3. Qu efecto tiene la concentracin en la velocidad de difusin? La velocidad de difusin es directamente proporcional al gradiente de concentracin. Entre ms diferencia haya de concentraciones entre dos reas, mayor ser el movimiento; ya que difusin es el movimiento aleatorio de un rea de mayor concentracin a menor concentracin. 4. Qu significa dilisis? Haga una breve revisin de los usos de este procedimiento en medicina. Dilisis es un mtodo de filtracin de la sangre para deshacer del cuerpo de agentes nocivos, sal excesiva y agua. Es usado para tratar dao renal crnico donde los riones han perdido la mayora o totalmente la habilidad de filtracin. La dilisis mantiene la homeostasis corporal por medio de eliminacin de desechos tal como sal y agua extra para prevenir que se acumule en el cuerpo, causando as edema; tambin se utiliza para mantener un nivel normal qumico en la sangre tal como potasio, sodio y bicarbonato, por ultimo controla la presin arterial. Existen dos tipos de dilisis: hemodilisis y dilisis peritoneal. La hemodilisis consiste en remover desechos, qumicos txicos y fluidos de la sangre. La dilisis peritoneal consiste en limpiar la sangre dentro del cuerpo, el peritoneo se llena con dialisato por medio de un catter. Los agentes nocivos se eliminan por medio del dialisato.

5. Describa brevemente la tcnica correcta para extraer una muestra de sangre venosa Para realizar una venopuncin el paciente se tiene que preparar de cierta manera dependiendo del examen que se realizar, tal como indicaciones de ayuno o que evite algunos alimentos para que los exmenes no salgan alterados. Generalmente se realiza en la vena medial en la parte interior del codo, pero tambin se puede realiza en el dorso de la mano. Se desinfecta el sitio con alcohol. El examinador envuelve una banda elstica alrededor de la parte superior del brazo para

aplicar presin y hacer que la vena se llene de sangre. Se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un tubo, luego se retira la banda elstica del brazo. Al terminar le venopuncin se aplica presin con un algodn para evitar sangrado posterior. 6. Defina los siguientes trminos: - Isotnico: Solucin que no cambia el volumen de la clula. - Isoosmtico: Cuando las soluciones que estn siendo comparadas tienen igual concentracin de solutos. Tienen misma osmolalidad. - Hipotnico: Solucin que causa que la clula se hinche - Hipoosmtico: Cuando una solucin tiene menor concentracin de soluto que la solucin a la cual es comparada, as como menor presin osmtica - Hipertnico: Solucin que causa que la clula se encoja. - Hiperosmtico: Cuando una solucin tiene mayor concentracin de soluto que la solucin con la cual es comparada. Presenta presin osmtica mayor que la fisiolgica. - Osmolaridad: Se refiere a la presin osmtica generada por las molculas de soluto disueltas en 1 L de solvente. - Osmolalidad: Es el nmero de molculas disueltas en 1 kg de solvente. 7. Haga una breve revisin acerca de las situaciones en las que encontramos alterada la concentracin de solutos en plasma Alteraciones del equilibrio de Sodio: El sodio es el principal responsable de la osmolaridad de los lquidos extracelulares y del mantenimiento del volumen extracelular. Su valor normal es de 135145 mEq/L. Entre las alteraciones de sodio encontramos - Hiponatremia que indica que la relacin sodio/agua est disminuida (<135 mEq/L). Y se divide en hiponatremia isoosmolar por infusin de soluciones isotnicas sin sodio que producen hiponatremia por dilucin. Hiponatremia hiperosmolar presencia en el plasma de sustancias con actividad osmtica libre de sodio. Hay un aumento de osmolaridad extracelular que atrae agua del espacio intracelular al mismo tiempo que se diluye el sodio plasmtico. Hiponatremia hipoosmolar Se deben a retencin excesiva de agua, o a prdida de sodio y agua con reposicin de agua o lquidos hipotnicos. - Hipernatremia supone una relacin sodio/agua plasmtica mayor de la normal. Se habla cuando superan 150 mEq/L. Hay un aumento de osmolaridad y de la tonicidad plasmtica. Se da por disminucin del agua corporal total (deshidratacin) o exceso de solucin salina o de bicarbonato. O exceso de consumo de sodio en la dieta. Alteraciones del equilibrio de Potasio: El potasio se elimina en la orina en concentraciones de 35 mEq/L, lo que supone que en un da se orina 50 mEq/L. Es el in ms importante del espacio intracelular. La concentracin normal en plasma es 3.4- 4.5 mEq/L Entre las alteraciones encontramos: - Hipopotasemia se produce por un aporte deficiente por errores en terapia parenteral. Se origina por un incremento en la prdida de K+ y esto puede ser de dos formar: por paso al compartimento intracelular como en alcalosis produciendo hipocalemia y por incremento de eliminacin por vmito, diarrea, laxantes, poliuria, etc.

Hiperpotasemia se da cuando la concentracin de potasio es superior a 5.5 mEq/L. Puede ser por error en la fluidoterpia, destruccin celular por quemadura, hemlisis, falla de excrecin renal (insuficiencia renal)

8. Escriba ejemplos de soluciones iso, hipo e hipertnicas que se utilicen en medicina, e indique en qu situaciones se utilizan - Isotnicas: 0.3gr de cido brico + 16.7 ml de agua destilada, se usa como gota lagrimal para irritacin del ojo. Y solucin salina normal a 0.9% normaliza la volemia reponiendo lquidos corporales, Lactato de Ringer que contiene 51 mEq/L de cloro, se utiliza en estados de deshidratacin y en casos de acidosis por la presencia de lactacto. - Hipotnicas: Solucin salina 0.45%, Solucin salina 0.33% y dextrosa de agua destilada 2.5% y 5.0% sirve para re-hidratacin y es portador de energa proporcionando un aporte calrico. Se usan para corregir hipernatremia por prdida de agua como en pacientes diabticos o con deshidratacin - Hipertnicas: Solucin salina nebulizada en pacientes con bronquiolitis aguda en infantes. Solucin salina hipertnica expande el volumen intravascular se usa en pacientes quemados porque disminuyen el edema y suplen los requerimientos hdricos. Dextrosa en Agua destilada al 10%, 20% y 50% proveen energa y potasio, se usa en casos de colapso circulatorio y edema cerebral y pulmonar, ayuda a proteger la clula heptica pues ofrece reserva de glucgeno al hgado. 9. Qu es la saponina y para qu se usa? Son glicsidos insolubles en solventes apolares. Son detergentes que se encuentran en una variedad de plantas o surfactantes no inicos que forma emulsiones aceite-en-agua. Consiste en un aglycone poli cclico unido a uno o ms cadenas laterales de azcares. La parte aglycona, tambin llamada sapogenina es esteroideo (C27) o triterpenoide (C30). La habilidad de la saponina de crear espuma es causada por una combinacin de sapogenina no polar (hidrofbico) y cadenas laterales solubles en agua (hidroflicas). Es usado directamente para determinacin de metales en la leche por absorcin atmica espectrofotomtrica. Tambin usado en permeabilizacin de las membranas celulares y separacin de contaminantes de bajo peso molecular. Tienen la propiedad de hemolizar los glbulos rojos.

Fenmenos Osmticos en Rodajas de Papas

Presentacin y anlisis de resultados 1. Fenmenos osmticos en rodajas de patatas A. Influencia de soluciones no electrolticas: No electrolticas Agua destilada Hipotnica Peso inicial Peso luego de 30 min de sumergido 19g 20.6 g 20g 21.5 g 12g 13.5g 13.5g 14.5 g

Medida inicial 6.5 cm 6.5 cm 6.4 cm 6.3 cm

Peso luego de 1h de sumergido 21.4g 21.7g 13.7g 14.7g

Medida inicial 4.5cm 5.0 cm 5.5 cm 5.6 cm

Sacarosa 0.2M Peso inicial Peso luego de 30 min de sumergido 7.5 g 7.7 g 10.5 g 10.5 g 9.5 g 9.7 g 7.6 g 7.6 g Sacarosa 0.25M Hipertnica Peso inicial Peso luego de 30 min de sumergido 13.8 g 13.8 g 16.3 g 16.2 g 14.0 g 13.5 g 12.5 g 10.2 g Sacarosa 0.3M Peso inicial Peso luego de 30 min de sumergido 10.5 g 10.0 g 12.0 g 11.5 g 9.2 g 9.6 g 12 g 11.9 g Sacarosa 0.4M Peso inicial Peso luego de 30 min de sumergido 10.5 g 8.6 g 10.5 g 7.1 g

Peso luego de 1h de sumergido 7.2 g 10.1 g 9.8 g 7.4 g

Medida inicial 5.5 cm 5.8 cm 5.9 cm 5.5 cm

Peso luego de 1h de sumergido 13.0 g 15.8 g 13.3 g 11.8 g

Medida inicial 6.2 cm 5.7 cm 6.0 cm 5.9 cm

Peso luego de 1h de sumergido 10.4 g 11.3 g 9.1 g 11.9 g

Medida inicial 6.5 cm 6.5 cm

Peso luego de 1h de sumergido 8.5 g 6.8 g

6.5 cm 7.7 g 9.9 g 6.7 cm 9.2 g 10 g Grficas de los resultados Las graficas representan porcentaje de cambio en peso vs. Tiempo. Agua destilada Tiempo 30 min 60 min
15 10 5 0 30 min 60 min

9.3 g 9.2 g

Patata 1 8.42 3.88

Patata 2 7.5 .93

Patata 3 12.5 1.48

Patata 4 7.4 1.38

Patata 1 Patata 2 Patata 3 Patata 4

0.2 Sacarosa Tiempo 30 min 60 min Patata 1 2.67 -6.49 Patata 2 0 -3.8 Patata 3 2.1 1.03 Patata 4 0 -2.63

5 0 -5 -10 30 min 60 min Patata 1 Patata 2 Patata 3 Patata 4

Tiempo 30 min 60 min

Patata 1 0 -5.79710145

0.25 Sacarosa Patata 2 -0.61349693 -3.06748466

Patata 3 -3.57142857 -5

Patata 4 -18.4 -5.6

0 -5 -10 -15 -20 30 min 60 min Patata 1 Patata 2 Patata 3 Patata 4

Tiempo 30 min 60 min


6 4 2 0 -2 -4 -6 30 min

Patata 1 -4.76 4

0.3 Sacarosa Patata 2 -4.167 -1.739

Patata 3 4.34 -5.20

Patata 4 -.83 0

Patata 1 Patata 2 Patata 3 Patata 4 60 min

Tiempo 30 min 60 min


40 30 20 10 0 -10 -20 -30 -40 30 min

Patata 1 -18.0952381 -1.1627907

0.4 Sacarosa Patata 2 -32.3809524 -4.22535211

Patata 3 28.5714286 -6.06060606

Patata 4 8.69565217 .8

Patata 1 Patata 2 Patata 3 Patata 4 60 min

Discusin de resultados Patata en agua destilada: La concentracin del agua destilada en comparacin del interior de la patata es hipotnica por lo que el flujo de agua tendra que ingresar a las clulas de la patata, debido a que las concentraciones deberan igualarse mediante osmosis. Sin embargo como se puede observar en nuestros resultados la primera medicin tiene concordancia con lo que deba pasar con la papa.

Sin embargo a la segunda medicin la papa bajo su peso de acuerdo con la primera medicin. Esto se puede deber gracias a que la patata pudo haber tenido el paso de ciertas sustancias hacia afuera de la patata lo que causo una devolucin del lquido absorbido.

Patata en 0.2 sacarosa: Al tener una concentracin de 0.2 de sacarosa, el agua debera salir de la patata para regular las concentraciones de sacarosa entre la patata y el medio externo. Sin embargo se encontr que la patata a la primera medicin del peso de la papa se encontr que este haba aumentado, sin embargo no se tiene una explicacin. Sin embargo a la segunda medicin el peso perdido en relacin al peso inicial fue significativo debido a la salida de agua hacia el espacio extracelular para compensar las concentraciones de sacarosa. Patata en 0.25 sacarosa: Al tener una concentracin mayor de sacarosa, 0.25, el agua de igual manera que la concentracin anterior debera salir lo cual llevara a un equilibrio osmtico. Este experimento sali de acuerdo a lo que deba pasar debido a que los cambios en el peso de acuerdo a su comparacin con el peso inicial fueron significativo. Sin embargo se encontr que en la patata numero 4 el peso que haba perdido en la medicin inicial a los 30 minutos, lo gano nueva mente por absorcin de agua en la medicin a los 60 minutos. Esto se puede deber debido a la salida de almidn y un intercambio con iones que puedan dar una solucin hipertnica en el exterior lo que causa el ingreso abrupto de agua hacia el interior de la clula. Patata en 0.3 sacarosa: Las concentraciones de la solucin en la que se puso la patata deban inducir a la salida de agua de la clula de la patata. Sin embargo la primera medicin a los 30 minutos causo esto en la mayora de patatas en el grupo, a pesar de esta primera medicin exitosa, la segunda medicin a los 60 minutos aumento su peso porcentajes muy significativos de acuerdo a la primera reduccin de su masa. Esto se puede deber a varias razones de manejo de la patata, ya que la medicin pudo haber estado incorrecta al no limpiar el agua de la balanza antes de pesar a la nueva patata. Patata en 0.4 sacarosa: Las concentraciones de este experimento con una concentracin de 0.4 de sacarosa tuvieron resultados muy extraos debidos que primero salto agua como poda ser esperado, sin embargo en la primera medicin dos de estas cuatro papas aumentaron su tamao en lugar de disminuirlo. Lo cual no tiene explicacin lgica debido a que la concentracin de las papas deba ser iguales en todas las rebanadas de dicha papa. En la segunda medicin podemos observar que las papas recobraron un poco la mayora de su peso. Excepto en la tercera papa la cual aumento su peso en la primera medicin y redujo su peso incluso a partir de su peso inicial antes de ser sometida a una concentracin de sacarosa. Curva de relacin entre el cambio porcentual de peso y molaridad Se realiz haciendo un promedio entre la proporcin ultima de cambio que es la toma de medidas pasados los 60 min en su respectiva solucin para tener la relacin entre cambio porcentual de peso entre grupo de patatas y la osmolalidad a la que fueron sujetas. Solucin NaCl 0M Porcentaje Promedio de Cambio de Peso 26.8020613

.08 M .13 M .15 M .17 M

7.47856823 5.81040131 2.23778736 1.04915882

Porcentaje Promedio de Cambio de Peso


30 20 10 0 0 M .08 M .13 M .15 M .17 M Porcentaje Promedio de Cambio de Peso

Al realizar una grfica que compare la molaridad de la solucin con el cambio porcentual del peso de una patata se pueden ver los diferentes cambios que hubo en dicha patata. Al poder tener una idea de si la patata aumento de peso o disminuyo de peso segn la molaridad de la solucin en la que fue introducida se puede tener una idea si la solucin era isotnica, hipotnica o hipertnica dependiendo del cambio porcentual del peso de la patata. Dicho esto se puede decir que si la patata estaba sumergida en una solucin isotnica el cambio porcentual de peso debera estar cercano a 0%. Por otro lado si la solucin era hipotnica el cambio porcentual del peso deba ser positivo debido a la absorcin de agua del medio externo. Por ultimo si la solucin en la que fue sumergida la patata fuese hipertnica el cambio porcentual del peso debe ser negativo, en otras palabras, deba de perder peso en forma de agua. Con esto dicho se puede inferir que haciendo una grfica comparando el cambio porcentual del peso y la molaridad de la solucin en la que fue sumergida puede ayudar a tener una idea si la solucin era isotnica, hipotnica o hipertnica. B. Influencia de soluciones electrolticas Soluciones electrolticas Agua destilada Hipotnica Peso inicial Peso luego de 30 min de sumergido 10.6 g 17.3 g 7.0 g 8.2 g 14.5 g 15.1 g 11.4 g 12.7 g NaCl 0.08M Hipotnica Peso inicial Peso luego de 30 min de sumergido 24.5 g 25.6 g

Medida inicial 7 cm 6.6 cm 6.7 cm 6.0 cm

Peso luego de 1h de sumergido 17.5g 8.0 g 16.5 g 13.0 g

Medida inicial 7.6 cm

Peso luego de 1h de sumergido 25.8 g

7.6 cm 7.4 cm 7.7 cm

11.0 g 14.5 g 11.0 g

12.0 g 15.5 g 12.0 g

12.3 g 15.3 g 11.8 g

Medida inicial 5.4 cm 5.4 cm 5.7 cm 5.8 cm

NaCl 0.13 Hipotnica Peso inicial Peso luego de 30 min de sumergido 13.2 g 13.8 g 7.5 g 8.0 g 7.4 g 7.9 g 11.0 g 11.7 g NaCl 0.15M Hipotnica Peso inicial Peso luego de 30 min de sumergido 28.0 g 28.5 g 8.7 g 9.0 g 9.6 g 10.0 g 14.5 g 14.8 g NaCl 0.17M Peso inicial Peso luego de 30 min de sumergido 24.5 g 24.8 g 3.1 g 3.3 g 5.5g 2.8 g 9.5 g 6.4 g

Peso luego de 1h de sumergido 13.6 g 8.1 g 7.9 g 11.6 g

Medida inicial 7.6 cm 6.7 cm 7.0 cm 7.9 cm

Peso luego de 1h de sumergido 28.7 g 8.9 g 9.8 g 14.8 g

Medida inicial 6.4 cm 5.9 cm 6.0 cm 6.3 cm

Peso luego de 1h de sumergido 24.5 g 3.15 g 5.7 g 9.4 g

Grficas de los resultados Las graficas representan porcentaje de cambio en peso vs. Tiempo.

Tiempo 30 min 60 min


80 60 40 20 0 30 min

Patata 1 63.2075472 65.0943396

Agua destilada Patata 2 17.1428571 14.2857143

Patata 3 4.13793103 13.7931034

Patata 4 11.4035088 14.0350877

Patata 1 Patata 2 Patata 3 60 min Patata 4

Tiempo 30 min 60 min


15 10 5 0 30 min

Patata 1 4.48979592 5.30612245

NaCl 0.8 Patata 2 9.09090909 11.8181818


Patata 1 Patata 2 Patata 3 Patata 4

Patata 3 6.89655172 5.51724138

Patata 4 9.09090909 7.27272727

60 min

Tiempo 30 min 60 min


10 8 6 4 2 0 30 min

Patata 1 4.54545455 3.03030303

NaCl 0.13 Patata 2 6.66666667 8

Patata 3 6.75675676 6.75675676

Patata 4 6.36363636 5.45454545

Patata 1 Patata 2 Patata 3 Patata 4 60 min

Tiempo 30 min 60 min


5 4 3 2 1 0 30 min

Patata 1 1.78571429 2.5

NaCl 0.15 Patata 2 3.44827586 2.29885057

Patata 3 4.16666667 2.08333333

Patata 4 2.06896552 2.06896552

Patata 1 Patata 2 Patata 3 Patata 4 60 min

Tiempo

Patata 1

NaCl 0.17 Patata 2

Patata 3

Patata 4

30 min 60 min
20 0 30 min -20 -40 -60

1.2244898 0

6.4516129 1.61290323

-49.0909091 3.63636364

-32.6315789 -1.05263158

Patata 1 60 min Patata 2 Patata 3 Patata 4

Discusion de resultados Patata en Agua destilada Las papas sumergidas en agua destilada mostraron aumento de la masa debido a la difusin de agua hacia el interior de la papa, donde se concentran los solutos que ejercen presin osmtica. Patata en NaCl 0.8 Algunas de las papas aumentaron peso y otras disminuyeron de peso, esto puede ser debido a que la distribucin de sal no era la misma en todos los cortes de papa que se sumergieron y por lo tanto la osmosis no fue uniforme. Tambin se puede deber a algunos de los mecanismos regulatorios de las clulas vegetales, se conoce que en las clulas humanas los mecanismos de regulacin tienden al equilibrio; este puede ser el caso en las clulas vegetales. Patata en NaCl 0.13 Esta distribucin fue bastante irregular ya que algunas patatas aumentaron de peso y a la segunda medida disminuyeron y en una papa no se presentaron cambios significativos de masa, el hecho de que una papa permaneciera inalterada nos da una idea de por dnde rodea la concentracin de sal en una papa normal (0.13 ). Adems, como se mencion anteriormente, las clulas al alcanzar cierta osmolalidad, activan mecanismos regulatorios para llegar a cierto punto de homeostasis. Patata en NaCl 0.15 Los cambios fueron similares a la distribucin anterior (subidas, bajadas, sin cambios); lo que corrobora la hiptesis del posible valor de la concentracin de sal promedio en las papas utilizadas. Se debe de tomar en cuenta que muchas de las patatas utilizadas en este experimento no tenan un grosor parecido y que las papas no fueron cortadas con algn instrumento de precisin para que todas las papas fueran del mismo dimetro y grosor, lo que influye en el movimiento de solutos. Patatas en NaCl 0.17 Todas las papas mostraron un decremento significativo de su masa lo cual indica que la concentracin de sal de la solucin es mucho ms elevada a la que contiene la papa promedio y por lo tanto al haber mayor concentracin de solutos afuera de las clulas el agua saldr de la clula, drenando las clulas.

Por ltimo es necesario recalcar que los resultados pueden haber sido alterados por errores de laboratorio que trataron de ser minimizados en lo mximo posible. Los errores humanos al momento de la medicin, haber dejado las papas mucho tiempo afuera en lo que iban a ser pesadas puede haber variado el pesaje ya que al no estar sumergidas las papas en la solucin puede haber liberado fluidos. Curva de relacin entre el cambio porcentual de peso y molaridad Se realiz haciendo un promedio entre la proporcin ultima de cambio que es la toma de medidas pasados los 60 min en su respectiva solucin para tener la relacin entre cambio porcentual de peso entre grupo de patatas y la osmolalidad a la que fueron sujetas. Solucin Sacarosa 0M .2 M .25 M .3 M .4 M Porcentaje Promedio de Cambio de Peso 11.0467836 -1.82080201 -1.82080201 -2.17650104 -8.37662338

Porcentaje Promedio de Cambio de Peso


20 10 0 0M -10 .2 M .25 M .3 M .4 M Porcentaje Promedio de Cambio de Peso

Explique la diferencia entre esta y la fuerza osmtica de la sacarosa. NaCl 0.8: hipotnica NaCl 0.13: hipo/isotnica NaCl 0.15: hper/isotnica NaCl 0.17: hipertnica La fuerza osmtica que ejerce la sacarosa es considerablemente ms grande que la que realiza la sal, lo cual se hace evidente por las pendientes prominentemente inclinadas en las grficas de peso vs. Tiempo de las papas en solucin de sacarosa en comparacin con las de solucin salina. Esto es debido a que la papa es ms permeable a las molculas de sal que a las de sacarosa por lo que estas ltimas son osmoles ms efectivos (ejercen ms presin osmtica) porque no atraviesan la membrana de la papa.

Fenmenos Osmticos en Eritrocitos

Discusin de Resultados Al comparar el efecto sobre la sangre de una solucin de NaCl a 0.15M, que es isotnica respecto a al citoplasma del eritrocito, y agua destilada, que es hipotnica, se observa el aclaramiento de la segunda solucin. Esta transparencia observada se debe a la lisis de los eritrocitos tras la entrada profusa de agua por la alta osmolaridad en el interior de la clula; la energa qumica del agua dentro del eritrocito es menor a la de afuera por la presencia de diversas protenas y osmoles efectivos que no logran cruzar la membrana plasmtica, al contrario de la energa qumica del agua que se encuentra fuera del glbulo rojo. En la solucin de NaCl a 0.15, es evidente que no ha habido la destruccin celular observada en la otra solucin. Por ser una solucin isotnica, el intercambio neto de agua entre el eritrocito y su ambiente es nulo, por lo que la clula no cambia ni de tamao ni de forma. Por lo tanto, la solucin se mantiene opaco y es imposible ver a travs de l. Es de importancia notar que la solucin de NaCl a 0.15M aparenta ser hipotnica, sin embargo, debe tomarse en cuenta que esta molcula se disocia, por lo que lo hace isotnico al interior del glbulo rojo (que tiene una osmolaridad de aproximadamente 0.29M o 290 mOsm/L). Cuando se comparan los resultados de la mezcla de sangre con NaCl a 0.15M, con glicerina a 0.3M, con sacarosa a 0.3M, NH4Cl a 0.15M y urea a 0.3M, se observa lo siguiente:

Como se ve en la ilustracin, la mezcla con glicerina a 0.3M y la mezcla con urea a 0.3M mostraron evidencia de muerte celular por medio del aclaramiento de la solucin y su transparencia. El NH4Cl, al igual que el NaCl, se disocian en el agua por ser electrolitos y las soluciones a 0.15 son isotnicas respecto al interior del glbulo rojo, por lo que es normal que no se observen cambios en las muestras de sangre. Al igual que el NH4Cl y el NaCl a 0.15M, la solucin de sacarosa a 0.3M es isotnica aunque la sacarosa sea un osmol efectivo; el intercambio neto de agua se mantiene y no hay cambios fsicos observables. Sin embargo, la glicerina y la urea tambin aparentan ser isoosmticos en relacin al interior del eritrocito, pero aun as han causado lisis celular. Esto se debe a que la membrana plasmtica del glbulo rojo es permeable a ambos, por lo general por difusin facilitada (por canales proteicos). Por lo tanto, tanto la solucin de glicerina como la de urea a 0.3M son iso-osmticos pero no isotnicos. Cuando las molculas de ambas sustancias entran a la clula siguiendo su gradiente qumico, el agua tambin entra para balancear los cambios en osmolaridad en el interior de la clula y por ende, causan el abombamiento y la posterior lisis del eritrocito. Como resultado, las soluciones se vuelven transparentes como evidencia de la muerte celular que ha ocurrido. Al agregar la saponina a la solucin, se esperaba una hemolisis por lo menos parcial. Sin embargo, no se observ tal cambio morfolgico en la muestra de sangre por lo que se le agreg ms de la sustancia hasta lograr la hemlisis que propone la teora. Por la naturaleza de la saponina, la teora dice que causara una hemlisis debido a su carcter detergente. Sin embargo, se logr dicho efecto hasta una cantidad de 2mL de la solucin de saponina 1:1000 para que se viera el cambio. ste hecho podra ser relacionado a la baja concentracin a la que est la solucin de saponina, haciendo la deteccin de hemlisis demasiado insignificante para la observacin sin equipo microscpico. Tras los dos mililitros de solucin de saponina 1:1000, s se vio un aclaramiento de la mezcla de sangre, significando la presencia de una hemlisis parcial o completa. En cuanto a las diluciones realizadas en 9 tubos de ensayo con una concentracin decreciente de solucin de NaCl a 0.15M y un incremento en la proporcin de agua destilada, se observ una hemlisis de severidad progresiva con un aclaramiento gradual observable con en cada tubo mientras se cambiaba la proporcin de solucin de NaCl y agua destilada. El porcentaje de solucin de NaCl en cada tubo disminua 10% respecto al pasado (90% en el primero, 80% en el segundo, 70% en el tercer, etc.), por lo que se vea mayor lisis en cada tubo. Los resultados se pueden observar en la imagen a la derecha. Se podra decir que la hemlisis completa se observ alrededor del tubo de ensayo nmero 4, que representa una solucin que contiene 40% de solucin NaCl a 0.15M. En ese tubo, se ve una transparencia completa con restos celulares en el fondo del tubo de ensayo. Se podra argumentar

que hasta el tubo 3 se ve la hemlisis completa pero en el tubo 4 ya se ve la hemlisis bastante avanzada. Como ya se han mencionado anteriormente, los factores que se involucran en la hemlisis de los glbulos rojos (y su reaccin a la osmolaridad de su ambiente en general) son permeabilidad de los sustratos en el exterior del glbulo rojo, la capacidad de disociarse de dicho soluto y su concentracin. Alteraciones en estos aspectos se manifiestan en desbalances en osmolaridad y puede llegar a causar consecuencias en la integridad y funcionamiento del eritrocito. En las lminas preparadas con sangre tres diferentes sustancias (solucin salina isotnica, glicerol y agua destilada), se ven los efectos de una solucin isotnica, una hipertnica y una hipotnica respectivamente. En la imagen A, se observan los eritrocitos en glicerol, una solucin hipertnica. Por lo tanto, hay una salida profusa de agua de los eritrocitos, causando la crenacin de dichas clulas, dndoles una forma estrellada y arrugada. En la imagen B, se observa a los eritrocitos en solucin salina, vindose como no hay cambios en lo absoluto; todos los eritrocitos mantienen su forma natural y funcional. Imagen A

Imagen B

En la imagen C (vase la prxima pgina), se encuentran los eritrocitos en una solucin supuestamente hipotnica, lo que causara que entre el agua a las clulas causando que se lisen. Sin embargo, es difcil determinar si de hecho existe un abombamiento de los glbulos rojos. Si as fuera el caso, no estara de acuerdo con la teora y podra ser por contaminacin del agua con sustancia salina o que no se le dio suficiente tiempo para que el agua entre (aunque usualmente es un proceso que no requiere de mucho tiempo). Los glbulos rojos en la imagen se ven ligeramente hinchados pero el abombamiento no es evidente.

Imagen C

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