X

IS

AX = 27.01 AIS = 17.80

(Am/Ast )= (Cm/Cst)

Y = mx + b (para cada analito)

Preparacin de estndares y obtencin de los cromatogramas

Cuando se quiere cuantificar un compuesto presente en una muestra por el mtodo del estndar interno, los pasos son los siguientes: 1. Preparar una serie de disoluciones de concentraciones crecientes, del estndar correspondiente al compuesto a cuantificar. El intervalo de concentraciones ha de ser similar a la concentracin del analito en la muestra problema. 2. Aadir a cada uno de los estndares y a la muestra una misma cantidad o concentracin de estndar interno. El estndar interno ha de ser un compuesto de naturaleza similar al analito a determinar, pero que no est presente en la muestra. Por ejemplo, en un anlisis de azcares en fresas un estndar interno podra ser lactosa, ya que se trata de un azcar, pero no est presente en las fresas. 3. Inyectar el mismo volumen en el cromatgrafo de cada una de las disoluciones estndar que contienen el estndar interno, as como del extracto de la muestra que tambin contiene el estndar interno. De esta forma tendremos los distintos cromatogramas de los patrones (un cromatograma para cada disolucin patrn) y el cromatograma de la muestra.

Recomendaciones: En este tipo de curvas de calibracin la concentracin de estndar interno debe ser constante. Usualmente el estndar interno es adicionado entre un medio o un tercio de la concentracin mxima esperada del analito de interes.

concentraciones: Patrn 1: 300 mg/L analito + 350 mg/L st.i. Patrn 2: 400 mg/L analito + 350 mg/L st.i. Patrn 3: 500 mg/L analito + 350 mg/L st.i. Patrn 4: 600 mg/L analito + 350 mg/L st.i.

A la muestra se le adicionara estndar interno, de forma que la concentracin de estndar interno en el extracto de la muestra fuera la misma que en las disoluciones estndar y se inyectara en el cromatgrafo. As, la muestra tendra una concentracin desconocida de analito y 350 mg/L de estndar interno: Muestra: ? mg/L analito + 350 mg/L st.i.

Estndares

FRI= (Asti/Aa)*(Ca/Csti)

Muestra

Ca= (Csti * Aa * FRI)/ Asti

mg/mL

EJEMPLO EN HPLC
concentraciones: Patrn 1: 300 mg/L analito + 350 mg/L p.i. Patrn 2: 400 mg/L analito + 350 mg/L p.i. Patrn 3: 500 mg/L analito + 350 mg/L p.i. Patrn 4: 600 mg/L analito + 350 mg/L p.i.

Y = mX + b
Y= Area de analito/Area de p.i. obtenida en el
cromatograma de la muestra

Y = (1268,4/903,6 = 1,40) 1.40 = 1,2611X - 0.5593 X

= C de analito muestra/C de p.i. en la muestra

X= (1.40 + 0.5593)/1,2611 X= 1.56 1.56 mg /L =

C de analito muestra/C de p.i. en la muestra

1.56 = C de analito muestra/350 mg/L 1.56 * 350 mg/L = C de analito muestra 544.8 mg/L = C de analito muestra

EJEMPLO EN CG
GC Calibration Curve for Cocaine with Internal Standard Cocaine mg/mL 2.50 5.00 10.00 25.00 Int. Std. mg/mL 5.00 5.00 5.00 5.00

Standard 1 2 3 4

cx/cis 0.500 1.000 2.000 5.000

Ax 120 241 480 1198

Aix 600 601 600 600

Ax/Ais 0.200 0.401 0.800 1.997

Cocaine with Interal Standard 1.0 microliter injections

2.500 y = 0.3991x + 0.0013 2.000 1.500 1.000 0.500 0.000 0.000

Ax/Ais

1.000

2.000

3.000 cx/cis

4.000

5.000

6.000