Disciplina: Fundamentos de Microbiologia e Parasitologia Carga horria: 40 h Ementa: Conceitos e bsicos e mtodos de estudos dos vrus. Defesa do hospedeiro.

o. Diagnstico Laboratorial. Viroses, drogas antivirais e vacinas virais. Estudos das caractersticas morfolgicas e fisiolgicas da clula bacteriana. Controle de microrganismos por agentes fsicos e qumicos. Agentes antimicrobianos e mecanismos de resistncia bacteriana. Microbiota normal do homem e mecanismos regulatrios. Controle e crescimento microbiano.

FUNDAMENTOS DE MICROBIOLOGIA E PARASITOLOGIA Microbiologia o estudo dos organismos microscpicos e de suas atividades. Preocupa-se com a forma, a estrutura, a reproduo, a fisiologia, o metabolismo e a identificao dos seres microscpicos. Inclui o estudo da sua distribuio natural, suas relaes recprocas e com outros seres vivos, seus efeitos benficos e prejudiciais sobre os homens e as alteraes fsicas e qumicas que provocam em seu meio ambiente. Parasitologia uma cincia que se baseia no estudo dos parasitas e suas relaes com o hospedeiro, englobando os filos Protozoa (protozorios), Nematoda e Platyhelminthes (platelmintos) e Arthropoda (artrpodes), do reino Animal.

MRCIA FERNANDA CONCEIO SETBAL

BIOLGA E MESTRE EM SUSTENTABILIDADE DE ECOSSISTEMAS

Seres vivos ou no?

No apresentam estruturas celulares : ribossomos, complexo de Golgi, Retculo endoplasmtico rugoso, lisossomos, mitocndrias etc. No tm atividade metablica.

Conceito: Os vrus constituem um grupo grande e heterogneo de agentes infecciosos. Vrus so parasitas obrigatrios intracelulares. Os vrus so "pedaos" de DNA ou RNA protegidos por uma capa proteica; eles no tm capacidade de movimentao nem de metabolismo autnomo. Reproduzem-se por replicao numa clula hospedeira (animal, vegetal ou de um microrganismo), podendo sofrer mutaes.
DNA

G C A T

RNA

G C A U

Virides: formados por uma nica fita de RNA circular que pode infectar uma clula vegetal. Prons: pequenas protenas que causam doenas no sistema nervoso dos animais e do homem.

Nota:
Pesquisadores da Universidade de Princeton, descobriram que uma caracterstica em um tipo de vrus, o HCMV (citomegalovrus humano), quem mudou a maneira como os vrus eram classificados. Esse vrus apresenta os dois cidos nuclicos: RNA e DNA. O HCMV pertence ao mesmo grupo dos agentes causadores do herpes. Apesar de no causar sintomas nos indivduos saudveis, esse vrus pode ser fatal em pessoas com o sistema imune comprometido, como portadores de HIV ou pacientes que tenham sofrido um transplante.

Estrutura do vrus Vrus da aftosa 10 nm Vrus da poliomielite 28 nm Vrus da varola 300 nm

1 nm = 1 x 10 9 mm

Cada partcula viral pode ter as seguintes estruturas: Capsdeo: uma capa protica que circunda o cido nucleico, e composto de subunidades de protena, os capsmeros, que so responsveis pela especificidade viral. cidos nuclicos Envelope: consiste principalmente em duas camadas de lipdios derivadas da membrana plasmtica da clula hospedeira e em molculas de protenas virais, especficas para cada tipo de vrus, imersas nas camadas de lipdios.

Figura 1. Forma e estrutura do vrus.

Funes do capsdeo Proteo Suscetibilidade Antigenicidade

Quanto forma os vrus podem ser classificados em : Icosadricos: poliedro regular com 20 faces triangulares e 12 ngulos; esta forma determinada pelo capsdio. O poliovrus e os adenovrus so alguns exemplos. Helicoidais: lembrando longos bastonetes, seus capsdios so cilindros ocos, com estrutura helicoidal . O vrus do mosaico do tabaco um exemplo. Vrus envelopados: o nucleocapsdio interno desse vrus, que pode ser icosadrico ou helicoidal, circundado por uma membrana envoltria. Tais vrions so pleomrficos (tm formas variadas), j que os envoltrios no so rgidos. O vrus do herpes um vrion icosadrico envelopado. Vrus complexos: alguns vrions tm uma estrutura muito complicada; o vrus da vacnia (grupo poxvirus), por exemplo, no possui capsdio claramente identificado, mas apresenta vrias camadas em torno do cido nucleico.

Figura. Morfologia de alguns vrus bem conhecidos. Simetria icosadrica: [A] plio, verruga, adeno, rota; [B] herpes. Simetria helicoidal: [C] mosaico do tabaco; [D] influenza; [E] sarampo, caxumba, parainfluenza; [F] raiva. Simetria incerta ou complexa: [G] poxvrus; [H] fagos T-pares (fonte: Pelczar et al., 1996).

Figura: Herpesviridae, Virgaviridae (Vrus do mosaico do tabaco -TMV ), Rhabdoviridae (Vrus do estomatite vesicular -VSV).

Vrus (glicoprotena) Muitos vrus podem ter um envelope rico em lipdeo envolvendo o capsdeo. Do envelope de muitos vrus projetam-se "pontas" que podem conter glicoprotenas e lipdeos. As propriedades das molculas que constituem o envelope esto relacionadas com a adeso do vrus vrios substratos. Se o envelope no est presente, as propriedades do capsdeo determinam as caractersticas adesivas do vrus.

Replicao do vrus receptor especfico na membrana celular

A multiplicao dos vrus se faz por replicao. Este processo pode ser dividido em etapas, que so comuns a todas as infeces virais:
Adsoro Penetrao e desnudamento Replicao Acoplamento ou maturao Liberao Replicao bioqumica

Acoplamento ou maturao

Adsoro: envolve a participao de receptores especficos na superfcie da clula hospedeira e das macromolculas do vrion. 2. Penetrao e desnudamento: os vrus com envelope unem-se s clulas hospedeiras, levando fuso do envoltrio lipoproteico dos vrus com a membrana citoplasmtica da clula, que resulta na liberao do material nucleocapsdico no citoplasma celular. Os vrus sem envelope parecem penetrar pelo mecanismo de fagocitose.

3. Replicao bioqumica: a replicao ativa do cido nucleico e a sntese de protenas virais comeam aps a dissociao do capsdeo e do genoma. Alm do ATP celular, os vrus requerem o uso dos ribossomos da clula, do RNA de transferncia, de enzimas e de certos processos biossintticos para sua replicao.

4. Acoplamento ou maturao: os vrus so capazes de dirigir a sntese dos componentes essenciais para sua prognie e de acoplar estes materiais sob a forma de vrions maduros, no ncleo e/ou no citoplasma da clula infectada. 5. Liberao: este processo varia com o agente viral. Em alguns casos, a lise celular resulta na liberao concomitante das partculas virais. Em outros, a maturao e a liberao so relativamente lentas e os vrions so liberados sem a destruio da clula hospedeira.

Figura: Viso geral de um ciclo de replicao viral hipottico: 1. Adsoro; 2. Entrada; 3. Desnudamento; 4. Transcrio e traduo; 5. Replicao do genoma; 6. Montagem; e 7. Liberao.

Figura: Esquema da reproduo dos vrus de RNA, como o do sarampo, raiva ou poliomielite.

Figura: Reproduo do vrus da Aids (HIV) , um retrovrus.

SISTEMA IMUNOLGICO- DEFESA DO HOSPEDEIRO

IMUNOLOGIA

IMUNIS

Isento de carga

Imunidade - resistncia especfica a uma determinada doena. Sistema imunolgico - sistema que defende o animal contra o ataque constante de microorganismos.
sistemas imune inato sistema imune adaptativo

Sistema imunolgico

sistemas imune inato

granulcitos

macrfagos

sistema imune adaptativo

linfcitos

Figura 1: (A) Neutrfilo, (B) eosinfilo e (C) linfcito.

 Os macrfagos e neutrfilos possuem a capacidade de ingerir e digerir vrios microorganismos. Os granulcitos, ou leuccitos constituem um grupo de clulas com ncleos multilobados contendo grnulos citoplasmticos preenchidos com elementos qumicos (enzimas). Os eosinfilos so importantes principalmente na defesa contra infeces por parasitas, e a funo dos basfilos ainda no bem conhecida. Os anticorpos so produzidos pelos linfcitos B em resposta a infeces, e sua presena em um indivduo reflete as infeces s quais o mesmo j foi exposto.

 Linfcitos x memria imunolgica

Figura 1: Estrutura multicamada do sistema imunolgico.

infeco

doena

Colonizao, multiplicao ou persistncia dos microrganismos no hospedeiro, quer o hospedeiro seja prejudicado ou no.

Quando a interao entre o microrganismo e o hospedeiro leva a um processo patolgico caracterizado por dano ao hospedeiro.

DEFESA DO HOSPEDEIRO X VRUS As defesas do hospedeiro, buscam: Reduzir a replicao viral; Erradicar a infeco.

 Vrus citopticos: interferem na sntese e funo das protenas celulares morte celular (infeco ltica). Vrus no citopticos: estado em que no h replicao viral, vrus no so eliminados. Podem ser reativados.

Produo de Interferons (IFN) Protenas antivirais que interferem na replicao viral; Estimulam a expresso de molculas de MHC de classe I; Ativam clulas NK que iro destruir a clula infectada; Interferon = linfocinas secretadas por macrfagos.

Figura 2: Induo do estado antiviral.

Clulas NK Defesa imediata contra vrus; Clulas T CD8+ so mais eficazes que as T CD4+ na resposta viral;

Clulas NK Defesa imediata contra vrus; Essas clulas tm capacidade de matar clulas tumorais e na defesa contra patgenos intracelulares, especialmente o Herpes vrus.
Clulas T CD8+ so mais eficazes que as T CD4+ na resposta viral; Principal mecanismos de defesa contra o vrus: anticorpos e fagocitose; vrus intracelulares: clulas natural killer(NK), linfcitos T citotxicos;

 Ambos os linfcitos T CD4+ e CD8+ esto em nmero elevado durante os primeiros anos de vida e, gradualmente, esse nmero declina na idade adulta e velhice.

Figura 3: Esquema de ao do sistema imunolgico.

imunidade inata

Produo de IFNs; Ao de NKs;

imunidade adaptativa Respostas patgeno especficas; Clulas T CD8+ (citotxicas): matam clula infectada.

DIAGNSTICO LABORATORIAL
Isolamento e identificao do vrus

Diagnstico sorolgico das infeces virais

Por qu fazer ??? Comprovao laboratorial da presena do vrus no paciente 1- Detectar o patgeno. 2- Detectar um produto do patgeno 3- Detectar uma resposta imune Identificao do patgeno tratamento

O diagnstico de infeces virais baseado em dois parmetros: Isolamento e identificao do vrus: Atravs de sistemas vivos (culturas de clulas) nos quais os vrus so propagados. Deteco direta do vrus, antgenos e genomas virais.. Sorologia So utilizados mtodos para deteco de anticorpos especficos, produzidos pelo hospedeiro em resposta infeco viral.

Situaes em que importante uma definio: manejo do paciente (rubola/gestante) interveno quimioterpica possvel (herpesvrus, HIV, HBV, HCV) medida de Sade Pblica: controle do vetor (dengue e febre amarela); vacinao (raiva, plio, sarampo, rubola). diferenciar doenas que apresentam quadros clnicos semelhantes: mononucleose, citomegalovirose e rubola.

 busca de um agente etiolgico para determinada doena: descoberta da maioria dos vrus. Isolamento e identificao de vrus A colheita do material deve ser feita na fase aguda da doena. O material deve ser transportado imediatamente para o laboratrio, mantido em temperaturas baixa (gelo). No entanto, sem congelar. As partculas virais apresentam instabilidade a fatores ambientais. Quando o material for remetido para locais distantes deve ser acondicionado em gelo seco.

Isolamento e identificao de vrus Inoculao experimental de vrus em sistemas hospedeiros Propagao de vrus em animais de laboratrio. Propagao de vrus em ovos embrionados. Propagao de vrus em culturas de clulas.

HEMAGLUTINAO Os vrus ligam se diretamente s hemcias formando agrupamentos visveis.

Vrus da influenza, adenovrus, parainfluenza, parvovrus.

Teste de imunoflorescncia direta Um conjugado de especificidade conhecida adicionado as clulas infectadas por vrus que esto fixados numa lmina de microscpio, ocorrendo formao de complexo Ag-Ac que visualizado pela imunoflorescncia.

Reao de hemadsoro Uma suspenso de hemcias adicionada cultura e estas iro se ligar s protenas virais expressas na superfcie das clulas infectadas.

ELISA Anticorpos imobilizados em placas de poliestireno detectam o vrus presente na amostra Rpida, sensvel, especfica, automatizvel, disponvel em kits, Desvantagens: kits comerciais so caros e podem apresentar falhas na deteco (falsos-negativos).

Teste imunoenzimtico (ELISA) Ac conjugados com enzimas. O resultado dado pela mudana de cor da reao.

Diagnstico sorolgico das infeces virais Diagnosticar uma enfermidade causada por vrus. Identificar novos tipos de vrus isolados. Estudar epidemiologicamente o comportamento de uma virose numa dada comunidade. Teste de neutralizao. Teste de inibio da hemaglutinizao. Teste de imunoflorescncia indireta ELISA indireto

Teste de neutralizao Os vrus infecciosos quando interagem com o anticorpo so neutralizados e por conseguinte perdem a capacidade de infectar clulas permissivas.

Teste de inibio da hemaglutinao A capacidade de hemaglutinao de um vrus bloqueada quando esse vrus reage como o anticorpo especfico.

Vantagens: alta sensibilidade e especificidade Rapidez, baixo custo e facilidade de execuo Kits comerciais ampliaram e popularizaram o uso

Teste de imunoflorescncia indireta 1a fase- Ac no marcado so adicionados a clulas infectadas fixadas a uma lmina de microscpio. Aps incubao, as lminas so lavadas. 2 fase- Um Ac imunoglobulina+ fluorescena conjugado e visto a microscopia de fluorescncia.

ELISA INDIRETO= deteco do anticorpo Antgeno fica aderido aos poos da microplaca Adiciona-se o soro Em seguida um anticorpo marcado com uma enzima que reage com o substrato fazendo com que o cromgeno mude de cor

Quinta, 30 Janeiro 2014 09:29 Oferecimento

MinistrodaSadelanacampanhadevacinaocontraHPV
O ministro da Sade, Alexandre Padilha, anunciou hoje a incorporao da vacina contra o vrus HPV no calendrio de vacinao de de mais de 4 milhes meninas de 11 a 13 anos. Em 2015, a vacina ser ofertada tambm para meninas de 9 e 10 anos.

Em seu pronunciamento, o ministro falou sobre o incio da vacinao nas escolas e a importncia da imunizao para a preveno do cncer de colo de tero. A partir de 10 de maro, a vacinapassa a integrar o calendrio de vacinao. "Ns pretendemos vacinar 80% das meninas de 11 a 13 do Brasil com a campanha contra o Cncer de Colo do tero, o terceiro que mais atinge as mulheres. Para isso a vacina estar disponvel nos 36 mil postos de sade e escolas da rede pblica durante todo o ano", afirmou Padilha.